RU2146148C1 - Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (фрк) - Google Patents
Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (фрк) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2146148C1 RU2146148C1 RU95117959A RU95117959A RU2146148C1 RU 2146148 C1 RU2146148 C1 RU 2146148C1 RU 95117959 A RU95117959 A RU 95117959A RU 95117959 A RU95117959 A RU 95117959A RU 2146148 C1 RU2146148 C1 RU 2146148C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- prk
- cells
- liver
- growth factor
- epithelial
- Prior art date
Links
- 108090000385 Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 102000003972 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 title claims abstract description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 210000004378 sebocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 14
- 210000002588 alveolar type II cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 12
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 9
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims description 6
- 206010063655 Erosive oesophagitis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 5
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 4
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 206010017865 Gastritis erosive Diseases 0.000 claims description 3
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 claims description 3
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 2
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims description 2
- 206010014989 Epidermolysis bullosa Diseases 0.000 claims 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 claims 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 claims 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 claims 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 claims 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 claims 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 claims 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 25
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 18
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 10
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 8
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 210000004043 pneumocyte Anatomy 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002969 morbid Effects 0.000 abstract 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 44
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 23
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 23
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 18
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 18
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 11
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 9
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 9
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 9
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 9
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 9
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 7
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 6
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 5
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 5
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 101150074035 prk gene Proteins 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003550 mucous cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012753 partial hepatectomy Methods 0.000 description 3
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 3
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 description 2
- 206010000804 Acute hepatic failure Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 240000007711 Peperomia pellucida Species 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 231100000836 acute liver failure Toxicity 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 210000001100 crypt cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 2
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 238000012756 BrdU staining Methods 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 206010053177 Epidermolysis Diseases 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 229940122957 Histamine H2 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000219492 Quercus Species 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 241000425571 Trepanes Species 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000002318 cardia Anatomy 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- -1 halotane Chemical compound 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000007562 laser obscuration time method Methods 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 1
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011253 protective coating Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000037309 reepithelialization Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002151 serous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000010246 ultrastructural analysis Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины. На основе многочисленных экспериментов на животных in vivo было показано, что ФРК стимулирует пролиферацию, рост и дифференцировку различных клеток эпителиальной ткани, отличных от кератиноцитов. Лучшее понимание биологического действия ФРК in vivo позволяет использовать этот полипептид в качестве терапевтического агента, входящего в состав различных фармацевтических композиций, предназначенных для специфического лечения заболеваний и болезненных состояний, затрагивающих такие ткани и органы, как печень, легкие, пищеварительный тракт и экстраэмбриональные структуры кожи. Сущность изобретения состоит в том, что разработан способ стимулирования образования некератиноцитных эпителиальных клеток путем контактирования этих клеток с эффективным количеством ФРК. Некератиноцитные клетки выбраны из группы: себоциты, клетки волосяных фолликулов, гепатоциты, пневмоциты типа II, муцинпродуцирующие бокаловидные клетки и другие эпителиальные клетки и их предшественники, обнаруживаемые в коже, легких, печени и желудочно-кишечном тракте. Техническим результатом изобретения является расширение арсенала способов регенерации поврежденных или больных клеток и тканей. 2 с. и 6 з.п.ф-лы, 24 ил.
Description
Изобретение относится к применению фактора роста кератиноцитов (ФРК) для стимулирования пролиферации, роста и дифференцировки клеток, отличных от кератиноцитов, а также предусматривает введение ФРК пациентам, для которых указанные биологические эффекты могут быть полезны при регенерации поврежденных или больных клеток и тканей.
Достижения биотехнологии в последние годы привели к разработке и терапевтическому применению новых рекомбинантных полипептидов, включая эритропоэтин и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, что принесло реальную пользу многим больным. Был открыт ряд и других полипептидов, обладающих биологическими эффектами in vitro. Однако для выяснения потенциальных терапевтических применений таких факторов необходимо установить, какие клетки являются мишенями их действия и определить биологические эффекты данных факторов in vivo.
ФРК - известный митоген, первоначально идентифицированный как специфический ростовой фактор эпителиальных клеток, в частности кератиноцитов. Rubin et al. , Proc. Natl.Acad.Sci.USA 86:802-806 (1989); Finch et al., Science, 245: 752-755 (1989); Marchese et al., J.Cell. Phys. 144:326-332 (1990). Экспрессия мРНК ФРК была обнаружена в нескольких линиях стромальных фибробластов, полученных из эмбриональных, неонатальных и тканей взрослого человека. Эта РНК была выделена из нормальной взрослой почки и желудочно-кишечного тракта. Подобная РНК не была обнаружена в глиальных клетках, легких, мозге или же различных клеточных линиях эпителиальной природы, таких как чешуеклеточные карциномы, эпителиальные клетки молочной железы, иммортализованные клетки эпителия бронхов, иммортализованные кератиноциты, а также в культурах первичных кератиноцитов (Finch et al. Science, см. выше). Однако ФРК митогенно активен в отношении клеток перевиваемой мышиной линии BALB/MK. Weismaim and Aaronson, Cell, 32:599 (1983), см. также PNAS и Science выше.
Это наблюдение свидетельствует в пользу паракринного действия ФРК в коже с образованием ФРК в дермисе (но не в эпидермисе) и влияния ФРК на кератиноциты.
Кроме того, экспрессией генов филагрина и кератинов было показано влияние ФРК на дифференцировку и созревание кератиноцитов. Cм. J.Cell.Phys. выше.
Большинство упомянутых работ по исследованию биологической активности ФРК было выполнено с использованием рекомбинантного ФРК, доступность которого позволила значительно расширить изучение данного фактора. В опубликованной заявке PCT (WO) 90/08711 описана очистка ФРК из кондиционированной среды линии клеток эмбриональных фибробластов человека, частичная аминокислотная последовательность выделенного полипептида, клонирование гена и его экспрессия в бактериальных клетках (E.coli) для получения рекомбинантного, биологически активного ФРК.
Поскольку роль ФРК как стимулирующего агента для кератиноцитов in vitro была точно установлена, предстояло изучить, на какие другие типы клеток ФРК может воздействовать как ростовой фактор и охарактеризовать эти возможные воздействия in vivo.
Для понимания возможной роли ФРК как терапевтического препарата подобная информация была особенно необходима.
Вкратце, настоящее изобретение основано на обнаружении стимулирующего воздействия ФРК на эпителиальные клетки, отличные от кератиноцитов. В частности, в настоящее время установлено, что in vivo ФРК индуцирует пролиферацию и дифференцировку в таких нормальных экстраэмбриональных структурах, как себоциты (клетки сальных желез) и клетки волосяного фолликула, гепатоциты и клетки слизистого дыхательного эпителия (пневмоциты типа II). Имеются также серьезные указания на то, что ФРК стимулирует пролиферацию и рост клеток слизистой оболочки пищеварительного тракта, таких как муцинобразующие бокаловидные клетки железистой части желудка и тонкого кишечника, клетки крипт прямой кишки и другие эпителиальные клетки пищеварительного тракта.
Данные наблюдения, послужившие основой настоящего изобретения, могут иметь существенное значение для коррекции нарушений, связанных с повреждением или недостаточностью указанных типов клеток. Далее описаны заболевания и медицинские показания, по которым может быть применен ФРК согласно настоящему изобретению.
Стимуляция пролиферации и дифференцировки таких экстраэмбриональных структур, как волосяные фолликулы, потовые железы и сальные железы, являются чрезвычайно важными для регенерации эпидермиса и дермы у пациентов с ожогами и другими повреждениями кожи различной глубины. В настоящее время поверхностные повреждения заживляются путем образования шрамов с выходом на поверхность кератиноцитов; полная регенерация кожи все еще невозможна. Репопуляции волосяных фолликулов, потовых желез и сальных желез на всю толщину дефектов кожи, включая ожоги, все еще не происходит. Использование ФРК делает возможной эту репопуляцию.
Буллозный эпидермолиз (болезнь Гольдшейдера) представляет собой нарушение прикрепления эпидермиса к подлежащей дерме, что проявляется в образовании открытых болезненных волдырей. Ускоренная реэпителизация таких повреждений, достигаемая применением ФРК, привела бы к снижению риска инфицирования, снижению болезненности и меньшей частоте перевязок.
В ходе химиотерапии неоплазий у большого числа больных наблюдается облысение как результат такой терапии. В настоящее время нет терапевтических средств, которые предотвращали бы гибель клеток волосяных фолликулов, приводящую к временной потере волос. ФРК может служить таким терапевтическим средством.
Облысение у мужчин широко распространено и практически не поддается лечению. Прогрессирующая утрата волос у мужчин и женщин является серьезной косметологической проблемой. Это нарушение могло бы излечиваться системным или же местным применением ФРК при абсорбции препарата кожей головы или путем распыляющих инъекций в кожу головы при помощи воздушного пистолета или других подобных методов введения.
Язвы желудка, хотя и поддающиеся лечению H2-антагонистами, широко распространены и часто возобновляются снова и снова. Их заживление происходит через образование рубца на слизистой оболочке. Возможность ускоренной регенерации железистой слизистой оболочки благодаря применению ФРК стала бы значительным усовершенствованием терапии язв желудка.
Как и язвы желудка, язвы двенадцатиперстной кишки поддаются лечению, однако разработка терапевтического агента для более полной и более быстрой регенерации слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки явилась бы значительным достижением. Безусловно, терапевтический агент для регенеративного заживления таких язв и снижения частоты их рецидивов был бы весьма полезен. ФРК обладает таким потенциалом.
Воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона (затрагивающая в основном тонкий кишечник) и язвенный колит (поражающий в основном толстый кишечник), а также эрозия желудка и пищевода, эрозивный гастрит, эзофагит или эзофагитный рефлюкс - это хронические заболевания невыясненной этиологии, приводящие к разрушению слизистой оболочки, воспалению, образованию рубцов и спаек при заживлении. Частота этих заболеваний довольно высока. Существующая на сегодня терапия в основном направлена на сдерживание воспаления. Такие терапевтические средства как ФРК, стимулирующие восстановление слизистой оболочки и приводящие к более быстрому заживлению, могут оказаться чрезвычайно полезными при лечении подобных заболеваний.
Основным ограничением для различных схем химио- и радиотерапии является токсичность соответствующих терапевтических факторов для клеток пищеварительного тракта. Предварительное введение ФРК может иметь протективный эффект в отношении слизистой оболочки тонкого кишечника, что позволит увеличить дозы химио- и радиотерапии с уменьшением нежелательных побочных эффектов.
Воздействие ФРК приводит к значительному увеличению образования слизи в пищеварительном тракте. Эта особенность может иметь существенное значение для защиты слизистой оболочки от повреждающих веществ, попадающих в пищеварительный тракт, или же препятствовать распространению повреждений в случае воспалительных процессов в кишечнике.
Поражения гиалиновых мембран у недоношенных младенцев приводят к отсутствию поверхностного образования пневмоцитов типа II в легких, что в свою очередь ведет к разрушению альвеол. Хотя кортикостероиды могут в значительной степени ускорять созревание пневмоцитов у плода, начиная с двадцативосьминедельного возраста, подобной терапии для эмбрионов более раннего возраста не разработано, что приводит к значительной смертности. Такой терапевтический агент как ФРК, индуцирующий пролиферацию и дифференцировку пневмоцитов типа II, значительно облегчил бы лечение подобных заболеваний.
Отравление дымом через дыхательные пути является серьезной причиной смертности в первую неделю ведения послеожоговых больных, что обусловлено некрозом бронхиолярного эпителия и альвеол. Такой ростовой фактор как ФРК, способный индуцировать пролиферацию и дифференцировку указанных структур, может внести существенный прогресс в лечение отравлений такого рода.
При эмфиземе легких наблюдается прогрессирующая утрата альвеол. ФРК может стимулировать рост новых альвеол и защищать оставшиеся, что безусловно имеет терапевтическое значение. В настоящее время эффективная терапия эмфизем не разработана.
Цирроз печени, развившийся как следствие вирусного гепатита или хронического употребления алкоголя, имеет высокую частоту и является серьезной причиной смертности. Пролиферация и дифференцировка гепатоцитов, индуцированная ФРК, может улучшить работу печени и затормозить или предотвратить развитие цирроза.
Острая печеночная недостаточность, развивающаяся на конечной стадии цирроза, представляет угрозу для жизни. Препарат, который подобно ФРК способен индуцировать пролиферацию оставшихся гепатоцитов, будет оказывать терапевтический эффект в случае острой печеночной недостаточности, единственным методом лечения которой на сегодня является пересадка печени.
Острый вирусный гепатит часто имеет субклиническое и непродолжительное течение. Однако у небольшой части больных острое поражение печени может наблюдаться в течение нескольких недель. Цитопротективный агент, подобный ФРК, способен предотвратить гепатоцеллюлярную дегерацию.
Печеночные отравления, вызванные ацетаминофеном, галотаном, четыреххлористым углеродом и другими ядами, могут быть облегчены применением ростового фактора (ФРК), цитопротективного по отношению к гепатоцитам.
Таким образом, настоящее изобретение посвящено терапевтическому (а в отдельных случаях и профилактическому) применению ФРК при указанных болезненных состояниях, а также фармакологическим препаратам, содержащим ФРК в терапевтических дозах.
На фиг.1 представлена нуклеотидная последовательность синтетического олигонуклеотида, использованного для получения рекомбинантного ФРК, который в свою очередь был использован в описанных ниже экспериментах in vivo.
На фиг.2 представлено модельное повреждение уха кролика на неполную толщину дермы, затрагивающее хрящ и которое позволяет количественно оценить рост новой ткани.
На фиг. 3 отражена реэпителизация обработанных ФРК и контрольных модельных повреждений, описанных на фиг.2. Слева показана общая площадь регенерирующего эпителия после обработки ФРК, а справа - процент реэпителизации ран.
На фиг.4 показана пролиферация базальных и супрабазальных кератиноцитов на краях раны на пятый день после обработки ФРК с использованием той же модельной системы.
На фиг. 5 приведен гистологический анализ обработанных бромдезоксиуридином (BrdU) волосяных фолликулов в контрольных и обработанных ФРК ранах. Видна пролиферация клеток.
На фиг.6 представлена окраска красным масляным красителем сальных желез в контрольных и обработанных ФРК ранах.
На фиг. 7 и 8 показано микрососочковое разрастание эпителиальных клеток перегородок альвеол в легких здоровых крыс, интратрахеально обработанных ФРК.
На фиг.9 и 10 показан кубоидальный рост эпителиальных клеток в альвеолах больших сегментов легких после интратрахеального введения ФРК тем же здоровым крысам.
На фиг. 11 и 12 видно, что гиперпластические эпителиальные клетки, выстилающие перегородки альвеол, у крыс, обработанных ФРК, содержат пластинчатые включения различного размера и формы.
На фиг. 13A показано гиперпластическое воздействие ФРК на бронхиальный эпителий после интратрахеального введения здоровым крысам.
На фиг.13B показан бронхиальный эпителий крыс контрольной (по отношению к представленным на фиг.13A) группы.
На фиг. 14 представлены результаты теста защиты от РНКазы РНК рецептора ФРК в легких взрослой крысы.
На фиг.15 показано увеличение веса органов пищеварительного тракта и печени в зависимости от дозы применяемого в течение четырех дней ФРК.
На фиг.16 показано увеличение синтеза белка в печени крыс, обработанных ФРК в течение четырех дней.
Фиг. 17 демонстрирует увеличение пролиферации гепатоцитов в печени животных, получавших ФРК от одного до семи дней. Уровень пролиферации определяли путем мечения BrdU (A) или подсчетом митозов (B).
На фиг.18 и 19 показано восстановление массы печени после обработки ФРК у крыс, перенесших частичную гепатоэктомию.
На фиг. 20 показано увеличение уровня сывороточной глутаматоксалоацетат трансаминазы (СГОТ) в сыворотке отравленных четыреххлористым углеродом крыс. Увеличение наступило в результате обработки ФРК.
На фиг.21 показано увеличение длины желудочных желез и количества слизи, образуемой в железистом желудке крыс, получавших ФРК от одного до семи дней.
На фиг.22 показано увеличение длины дуоденальных крипт и количества слизи, образуемой в тонком кишечнике крыс, получавших ФРК от одного до семи дней.
На фиг. 23 показано увеличение доли гиперпластических крипт в толстом кишечнике крыс, получавших ФРК от одного до семи дней.
На фиг. 24 показано увеличение глубины крипт в толстом кишечнике крыс, получавших ФРК от одного до семи дней.
Для определения специфических типов эпителиальных клеток, на которые ФРК оказывает значительный биологический эффект, обусловливающий возможное терапевтическое применение, были предприняты широкие исследования на животных с введением ФРК in vivo и тщательным анализом полученных результатов. Рекомбинантный ФРК, использованный в каждом из приведенных ниже примеров, получали следующим образом:
Рекомбинантный ген ФРК был синтезирован полимеразной цепной реакцией на основе РНК фибробластов крайней плоти человека (AG1523) и полученная ДНК был встроена в вектор экспрессии pCFM1156 между сайтами рестрикции NdeI и BamHI. Плазмида pCFM1156 может быть получена из плазмиды pCFM836, описанной в патенте США N 4,710,473, путем удаления двух эндогенных сайтов рестрикции NdeI с заполнением концов при помощи T4-полимеразы, последующим лигированием по тупым концам и замещением небольшого фрагмента ДНК между уникальными сайтами рестрикции ClaI и KpnI следующим олигонуклеотидным дуплексом, состоящим из последовательности N 1 и последовательности N 2:
Плазмида pCFM1156KGF была затем введена в клетки FM5 при помощи стандартной процедуры электротрансформации (прибор BioRad Gene Pulser). Для снижения внутренней инициации трансляции последовательность ДНК в гене ФРК между сайтами рестрикции KpnI и EcoRI была заменена синтетическим олигонуклеотидом, сконструированным таким образом, чтобы снизить возможность использования внутреннего сайта связывания рибосом (фиг.1). После лигирования и трансформации клеток FM5 был отобран клон, содержащий плазмиду pCFM1156KGF-dsd. Правильность последовательности нуклеотидов гена ФРК в данной плазмиде была подтверждена секвенированием. Клетки затем культивировали при 30oC в 10-литровых ферментерах в стандартной ростовой среде, что позволяло клеткам достичь экспоненциальной фазы роста в условиях дефицита глюкозы, предотвращающего накопление токсичных побочных продуктов. При средне-экспоненциальной плотности клеток температуру кратковременно поднимали до 42oC, чтобы индуцировать транскрипцию гена ФРК, а затем поддерживали на уровне 37oC на протяжении всего оставшегося времени ферментации. Клеточную массу собирали и хранили в замороженном состоянии. Биологически активный ФРК очищали из механически лизированных бактерий стандартными хроматографическими методами, используя тот факт, что белок имеет очень высокую изоэлектрическую точку (колонки с S-сефарозой Fast Flow фирмы Pharmacia) и размер (Superdex 75 Pharmacia). Очищенный рекомбинантный ФРК проверяли на наличие эндотоксинов и на биологическую активность в митогенном тесте, как описано Rubin с coaвт (см. PNAS, выше).
Рекомбинантный ген ФРК был синтезирован полимеразной цепной реакцией на основе РНК фибробластов крайней плоти человека (AG1523) и полученная ДНК был встроена в вектор экспрессии pCFM1156 между сайтами рестрикции NdeI и BamHI. Плазмида pCFM1156 может быть получена из плазмиды pCFM836, описанной в патенте США N 4,710,473, путем удаления двух эндогенных сайтов рестрикции NdeI с заполнением концов при помощи T4-полимеразы, последующим лигированием по тупым концам и замещением небольшого фрагмента ДНК между уникальными сайтами рестрикции ClaI и KpnI следующим олигонуклеотидным дуплексом, состоящим из последовательности N 1 и последовательности N 2:
Плазмида pCFM1156KGF была затем введена в клетки FM5 при помощи стандартной процедуры электротрансформации (прибор BioRad Gene Pulser). Для снижения внутренней инициации трансляции последовательность ДНК в гене ФРК между сайтами рестрикции KpnI и EcoRI была заменена синтетическим олигонуклеотидом, сконструированным таким образом, чтобы снизить возможность использования внутреннего сайта связывания рибосом (фиг.1). После лигирования и трансформации клеток FM5 был отобран клон, содержащий плазмиду pCFM1156KGF-dsd. Правильность последовательности нуклеотидов гена ФРК в данной плазмиде была подтверждена секвенированием. Клетки затем культивировали при 30oC в 10-литровых ферментерах в стандартной ростовой среде, что позволяло клеткам достичь экспоненциальной фазы роста в условиях дефицита глюкозы, предотвращающего накопление токсичных побочных продуктов. При средне-экспоненциальной плотности клеток температуру кратковременно поднимали до 42oC, чтобы индуцировать транскрипцию гена ФРК, а затем поддерживали на уровне 37oC на протяжении всего оставшегося времени ферментации. Клеточную массу собирали и хранили в замороженном состоянии. Биологически активный ФРК очищали из механически лизированных бактерий стандартными хроматографическими методами, используя тот факт, что белок имеет очень высокую изоэлектрическую точку (колонки с S-сефарозой Fast Flow фирмы Pharmacia) и размер (Superdex 75 Pharmacia). Очищенный рекомбинантный ФРК проверяли на наличие эндотоксинов и на биологическую активность в митогенном тесте, как описано Rubin с coaвт (см. PNAS, выше).
Пример 1.
ФРК-СТИМУЛИРУЕМЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭКСТРАЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТРУКТУР НА МОДЕЛИ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН IN VIVO
В настоящем Примере была использована раневая модель с повреждением уха кролика на неполную толщину дермы. Модель кожной язвы на ухе кролика, описанная Mustoe et al., (J.Clin. Invest., 87:694-703, 1991), была модифицирована с образованием раны через хрящ до дермиса с обратной стороны уха с помощью 6 мм трепана. В результате заживление раны происходило распространением эпителиальных элементов под хрящом, сжатие раны в процессе заживления было невелико, что давало возможность точно оценить размеры вновь образуемых тканей (см. фиг.2). В качестве терапевтического агента для заживления ран был использован рекомбинантный ФРК, полученный описанным выше способом.
В настоящем Примере была использована раневая модель с повреждением уха кролика на неполную толщину дермы. Модель кожной язвы на ухе кролика, описанная Mustoe et al., (J.Clin. Invest., 87:694-703, 1991), была модифицирована с образованием раны через хрящ до дермиса с обратной стороны уха с помощью 6 мм трепана. В результате заживление раны происходило распространением эпителиальных элементов под хрящом, сжатие раны в процессе заживления было невелико, что давало возможность точно оценить размеры вновь образуемых тканей (см. фиг.2). В качестве терапевтического агента для заживления ран был использован рекомбинантный ФРК, полученный описанным выше способом.
Материалы и методы
ФРК или, в контроле, растворитель (фосфатный буферный раствор) наносились однократно в день операции и раны (площадью 0.25 см кв.) закрывали специальным защитным покрытием Tegaderm (3М Company, St.Paul, MN). Перед забоем каждому животному внутривенно вводили BrdU (Aldrich Chemical Company, Milwaukee, WI) в количестве 50 мг на килограмм веса тела. Введение BrdU давало возможность количественно оценить степень пролиферации базальных кератиноцитов и кинетику миграции базальных клеток по направлению к сосочковому слою и роговому слою.
ФРК или, в контроле, растворитель (фосфатный буферный раствор) наносились однократно в день операции и раны (площадью 0.25 см кв.) закрывали специальным защитным покрытием Tegaderm (3М Company, St.Paul, MN). Перед забоем каждому животному внутривенно вводили BrdU (Aldrich Chemical Company, Milwaukee, WI) в количестве 50 мг на килограмм веса тела. Введение BrdU давало возможность количественно оценить степень пролиферации базальных кератиноцитов и кинетику миграции базальных клеток по направлению к сосочковому слою и роговому слою.
После забоя из каждой раны было приготовлено два образца, один образец замораживали в "среде оптимального охлаждения" (COO, Miles Inc., Elkhardt, IN), второй образце фиксировали в среде Omnifix (AI-Con, Genetics Inc., Melville, NY), а затем подвергали обработке согласно стандартным гистологическим методам.
Срезы толщиной 3 мкм, приготовленные из каждой раны, окрашивали Masson Trichrome, масляным красным, а также иммуногистохимически.
Измерение реэпителизации
Измерения полного просвета раны и эпителиального просвета для каждой раны производили с помощью калиброванного стационарного микрометра. Процент реэпителизации для каждой раны рассчитывали, деля разницу в площади между полным просветом и эпителиальным просветом на площадь полного просвета. Данные для двух срезов каждой раны усредняли. Отклонения в измерениях эпителиального просвета и в проценте реэпителизации анализировали по распределению Стьюдента.
Измерения полного просвета раны и эпителиального просвета для каждой раны производили с помощью калиброванного стационарного микрометра. Процент реэпителизации для каждой раны рассчитывали, деля разницу в площади между полным просветом и эпителиальным просветом на площадь полного просвета. Данные для двух срезов каждой раны усредняли. Отклонения в измерениях эпителиального просвета и в проценте реэпителизации анализировали по распределению Стьюдента.
Для каждой использованной дозы ФРК рассчитывали площадь вновь образованного эпителия в опыте и в контроле. Результаты этих экспериментов были обработаны по методам Даннетта и ANOVA (вероятностные тесты).
Измерение пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток
Парафиновые срезы тканей толщиной 3 мкм окрашивали антителами против BrdU (Dako Corp. Carpinteria.CA), авидинбиотиновым комплексом (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA) и диаминобензидином (ДАБ, Sigma Chemical Co., St. Louis, МО). Срезы обрабатывали 0,1% раствором протеазы, а затем 2н. HCl. Эндогенную пероксидазу подавляли обработкой 3%-ной перекисью водорода.
Парафиновые срезы тканей толщиной 3 мкм окрашивали антителами против BrdU (Dako Corp. Carpinteria.CA), авидинбиотиновым комплексом (Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA) и диаминобензидином (ДАБ, Sigma Chemical Co., St. Louis, МО). Срезы обрабатывали 0,1% раствором протеазы, а затем 2н. HCl. Эндогенную пероксидазу подавляли обработкой 3%-ной перекисью водорода.
Срезы обрабатывали 10%-ным раствором нормальной лошадиной сыворотки в фосфатном буферном растворе, а затем инкубировали с анти-BrdU антителами в разведении 1: 400 в 1%-ном бычьем сывороточном альбумине. После отмывания срезы инкубировали 20 минут в конъюгированном с пероксидазой авидинбиотиновом комплексе в разведении 1:100 в 1%-ном бычьем сывороточном альбумине. Затем срезы обрабатывали ДАБ (10 мг ДАБ, 20 мл фосфатного буферного раствора, 20 мкл 30% перекиси водорода) в течение 10 минут.
Фоновую окраску срезов проводили гематоксилином.
Гистологический анализ волосяных фолликулов, обработанных BrdU
После включения BrdU и IHC-окрашивания определяли общее число фолликулов в раневом ложе и данные обрабатывали по компаративному тесту Kruskall-Wallis. Дальнейший анализ включал определение для каждой группы животных количества ран (в процентах), в которых были фолликулы с десятью или более пролиферирующими клетками (Chi-square тест). Кроме того, для всех фолликулов, имеющих более пяти пролиферирующих клеток, определяли число клеток, положительных по окраске на BrdU.
После включения BrdU и IHC-окрашивания определяли общее число фолликулов в раневом ложе и данные обрабатывали по компаративному тесту Kruskall-Wallis. Дальнейший анализ включал определение для каждой группы животных количества ран (в процентах), в которых были фолликулы с десятью или более пролиферирующими клетками (Chi-square тест). Кроме того, для всех фолликулов, имеющих более пяти пролиферирующих клеток, определяли число клеток, положительных по окраске на BrdU.
Окрашивание сальных желез масляным красным
Для идентификации себоцитов и сальных желез была применена окраска масляным красным, нейтральным красителем, специфичным для нейтральных липидов. Окрашивание проводили на замороженных срезах по методу, описанному F.L.Carson: Histotechnology: A Self- Instuctional Text; ASCP Press, Chicago (1990). Вкратце, замороженные срезы толщиной 7 мкм высушивали на воздухе и фиксировали в цинк-формалине в течение 10 минут. Затем препараты погружали в 0,3% (вес/объем) раствор масляного красного (Sigma Chemical Co., St. Louis.MO), затем в 60%-ный изопропанол на 30 минут при комнатной температуре, обесцвечивали в 60%-ном изопропаноле и окрашивали гематоксилином Лернера. Определяли размер сальных желез и число клеток в железе.
Для идентификации себоцитов и сальных желез была применена окраска масляным красным, нейтральным красителем, специфичным для нейтральных липидов. Окрашивание проводили на замороженных срезах по методу, описанному F.L.Carson: Histotechnology: A Self- Instuctional Text; ASCP Press, Chicago (1990). Вкратце, замороженные срезы толщиной 7 мкм высушивали на воздухе и фиксировали в цинк-формалине в течение 10 минут. Затем препараты погружали в 0,3% (вес/объем) раствор масляного красного (Sigma Chemical Co., St. Louis.MO), затем в 60%-ный изопропанол на 30 минут при комнатной температуре, обесцвечивали в 60%-ном изопропаноле и окрашивали гематоксилином Лернера. Определяли размер сальных желез и число клеток в железе.
При обработке ран ФРК в дозах 4-40 мкг/см.кв. наблюдалась ускоренная реэпителизация и увеличение толщины эпителия. На пятый день после обработки в ранах отмечена усиленная в сравнении с контролем реэпителизация (76,7% против 52,5%, 1 мкг ФРК). К пятому и седьмому дню после обработки плотность эпителия увеличивалась в зависимости от дозы ФРК и при дозе 10 мкг на рану площадь эпителия в два раза превышала таковую в контроле (фиг.3). Гистологический анализ дает основания считать, что регенерация эпителия происходит в основном за счет распространения в дерме экстраэмбриональных элементов, а именно сальных желез, потовых желез и волосяных фолликулов.
Анализ пролиферации базальных кератиноцитов и миграции базальных клеток показал увеличение числа пролиферирующих базальных кератиноцитов по краям раны уже на первый день после обработки ФРК (фиг.4). Ко второму дню после обработки ФРК возросшее число пролиферирующих кератиноцитов в супрабазальном слое указывает на сокращение времени перехода пролиферирующих клеток в сторону сосочкового слоя. К пятому дню после обработки пролиферация клеток в базальном слое уменьшается, что указывает на самоограничивающееся ускорение восстановления эпителия и дифференцировки (фиг.4).
Кератиноциты претерпевают нормальное созревание по мере их миграции вверх и образования рогового слоя. Неожиданно была обнаружена усиленная пролиферация себоцитов и волосяных фолликулов. В ранах, обработанных ФРК, по сравнению с контрольными и волосяные фолликулы, и сальные железы были многочисленней и крупнее (фиг.3 и 6 соответственно).
Анализ гистологических препаратов, окрашенных масляным красным для дифференциального выявления сальных желез, показал значительно возросшее число таких желез и увеличение их размеров, что указывает на усиленную пролиферацию и дифференцировку себоцитов в зрелые салопродуцирующие клетки. В обработанных ФРК ранах отмечено также дозозависимое увеличение числа пролиферирующих клеток в волосяных фолликулах. Ранее на раневой модели уха кролика были проверены эпидермальный фактор роста (EGF) и основной фактор роста фибробластов (FGF) (J.Clin.Invest.,87:694-704,1991 и Pierce et al. Amer.J.Pathol. 140: 1375-1388, 1992). Хотя известно, что оба эти фактора стимулируют реэпителизацию, ни EGF, ни основной FGF не влияют на пролиферацию и дифференцировку таких экстраэмбриональных структур, как сальные железы и волосяные фолликулы. Способность ФРК стимулировать пролиферацию и последующую дифференцировку в коже эпителиальных клеток различных типов вместе с тем фактом, что он был первоначально выделен из фибробластов, дают основания считать ФРК мощным паракринным стимулятором регенеративных процессов в коже.
Пример 2
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ПНЕВМОЦИТОВ ТИПА II IN VIVO
Настоящие эксперименты были проведены с целью оценки воздействия ФРК на эпителиальные клетки респираторного тракта здоровых крыс.
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ПНЕВМОЦИТОВ ТИПА II IN VIVO
Настоящие эксперименты были проведены с целью оценки воздействия ФРК на эпителиальные клетки респираторного тракта здоровых крыс.
Материалы и методы
Самцам крыс Lewis весом 200-250 г однократно интратрахеально вводили различные дозы ФРК, разведенного в физиологическом растворе или фосфатном буферном растворе согласно протоколу, описанному Ulich et al., Amer.J.Pathol. , 138: 1485-1496, 1991. ФРК вводили в дозах 0,1, 1,0, 5,0 и 10,0 мг/кг веса. Контрольные крысы получали интратрахеальные инъекции растворителя. Через шесть часов, один, два, три, четыре, пять и шесть дней после введения ФРК животных забивали, через интратрахеальный катетер легкие заполняли фиксатором Буэна, саггитальные срезы легких заключали в парафин и гистологические препараты окрашивали гематоксилинэозином.
Самцам крыс Lewis весом 200-250 г однократно интратрахеально вводили различные дозы ФРК, разведенного в физиологическом растворе или фосфатном буферном растворе согласно протоколу, описанному Ulich et al., Amer.J.Pathol. , 138: 1485-1496, 1991. ФРК вводили в дозах 0,1, 1,0, 5,0 и 10,0 мг/кг веса. Контрольные крысы получали интратрахеальные инъекции растворителя. Через шесть часов, один, два, три, четыре, пять и шесть дней после введения ФРК животных забивали, через интратрахеальный катетер легкие заполняли фиксатором Буэна, саггитальные срезы легких заключали в парафин и гистологические препараты окрашивали гематоксилинэозином.
ФРК в дозе 0,1 мг/кг не вызывает гистологически различимой гиперплазии эпителиальных клеток альвеол. ФРК в дозе 1,0 мг/кг вызывает незначительное, но различимое увеличение числа альвеолярных эпителиальных клеток. Значительная гиперплазия этих клеток отмечена при дозах ФРК, равных 5,0 и 10,0 мг/кг. ФРК не вызывал гистологически различимой гиперплазии эпителиальных клеток на сроках 6 и 24 часа после интратрахеального введения. На второй день после введения ФРК в легких крыс отмечены островковые микрососочковые разрастания эпителиальных клеток перегородок альвеол (фиг.7,8). На третий день в больших сегментах легких в выстилке целых альвеол отмечен низко-кубический и кубический рост альвеолярных эпителиальных клеток. При этом некоторые области легких сохраняют нормальную гистологическую картину. Гистологическая картина гиперпластического альвеолярного эпителия у крысы на третий день после введения ФРК практически совпадает с картиной реактивной гиперплазии пневмоцитов типа II в легких человека. На четвертый и пятый день после интратрахеального введения ФРК количество гиперпластического альвеолярного эпителия в легких крыс заметно снижается. На шестой день легкие контрольных и ФРК-обработанных крыс были неразличимы.
Легкие ФРК-обработанных крыс подвергли ультраструктурному анализу на третий день после интратрахеального введения ФРК. Гиперпластические альвеолярные эпителиальные клетки, выстилающие перегородки альвеол, неизменно содержали одно или более пластинчатое включение различных форм и размеров (фиг.11, 12). На третий день после введения ФРК бронхиальный эпителий у крыс был также гиперпластичен, но эта гиперплазия была не столь явной, как в случае альвеолярных эпителиальных клеток. Проявлениями бронхиальной гиперплазии считают псевдорасслоение (псевдостратификацию) эпителиальной выстилки малых дистальных бронхов, которые в норме выстланы однослойным эпителием, пучковый или сосочковый рост бронхиального эпителия, а также увеличение числа митозов в бронхиальном эпителии (фиг.13A, 13B).
Введенный интратрахеально ФРК вызывает резкую гиперплазию альвеолярных эпителиальных клеток. Наличие пластинчатых цитоплазматических включений в этих клетках подтверждает предположение о том, что эти клетки являются пневмоцитами типа II. Эти пластинчатые включения немногочисленны и не окрашиваются осмием, в отличие от подобных включений, описанных в некоторых случаях экспериментальной гиперплазии пневмоцитов типа II у крыс. Они гораздо больше напоминают пластинчатые включения, встречающиеся в клетках легких нормальных крыс. Кроме гиперплазии альвеолярного эпителия ФРК вызывает гиперплазию бронхиального эпителия. Возможно, что гиперпластический альвеолярный эпителий представляет собой прорастание бронхиального эпителия из терминальных бронхиол в альвеолярную паренхиму. Однако более вероятно, что ФРК действует прямо на пневмоциты типа II, о чем свидетельствует многофокусный микрососочковый характер роста пневмоцитов в перегородках альвеол на второй день после введения ФРК. Такой рост предшествует образованию непрерывной выстилки альвеол кубическими клетками на третий день после введения ФРК. Кроме того, пневмоциты типа II считают митотически активными клетками эпителия альвеол и именно эти клетки должны отвечать пролиферацией на такой эндогенный медиатор роста альвеолярных клеток, каким является ФРК. Наконец, идентификация пластинчатых включений в гиперпластических клетках дает основания считать что эти клетки не только дифференцируются в пневмоциты типа II, но и происходят из этих пневмоцитов. Стимулирующий эффект ФРК на пневмоциты типа II подтверждается еще и данными о том, что количество мРНК рецептора ФРК на эквивалентное количество общей РНК в легких в два-три раза выше по сравнению с другими органами молодых взрослых крыс. В этих опытах количество мРНК рецептора ФРК определяли модифицированным методом защиты от РНКазы Ambion (RPA II, N 1410).
"Антисмысловая"-РНК, использованная в этих экспериментах, имела следующую последовательность (SEQ. ID N. :3):
5' GAAUACGAAUUCCUUGCUGUUUGGGCAGGACAGUGA-
GCCAGGCAGACUGGUUGGCCUGCCCUAUAUAAUUGG-
AGACCUUACAUAUAUAUUCCCCAGCAUCCAUCUCCG-
UCACAUUGAACAGAGCCAGCACUUCUGCAUUGGAGC-
UAUUUAUCCCCGAGUGGAUC 3'
"Антисмысловая" проба была приготовлена с помощью набора Riboprobe Gemini II фирмы Promega (#2020) на матрице линеаризованной ДНК, кодирующей соответствующую последовательность, описанную выше. Проба РНК была выделена из содержащего мочевину полиакриламидного геля путем вырезания полосы соответствующего размера и элюции РНК в растворе Ambion F.
5' GAAUACGAAUUCCUUGCUGUUUGGGCAGGACAGUGA-
GCCAGGCAGACUGGUUGGCCUGCCCUAUAUAAUUGG-
AGACCUUACAUAUAUAUUCCCCAGCAUCCAUCUCCG-
UCACAUUGAACAGAGCCAGCACUUCUGCAUUGGAGC-
UAUUUAUCCCCGAGUGGAUC 3'
"Антисмысловая" проба была приготовлена с помощью набора Riboprobe Gemini II фирмы Promega (#2020) на матрице линеаризованной ДНК, кодирующей соответствующую последовательность, описанную выше. Проба РНК была выделена из содержащего мочевину полиакриламидного геля путем вырезания полосы соответствующего размера и элюции РНК в растворе Ambion F.
"Смысловая" РНК, кодирующая последовательность, комплементарную "антисмысловой" пробе, имеет следующую структуру (SEQ. ID N.:4):
5' GGGAGACAAGCUUGCAUGCCUGCAGGUCGACUCUAG-
AGGAUCCACUCGGGGAUAAAUAGCUCCAAUGCAGAA-
GUGCUGGCUCUGUUCAAUGUGACGGAGAUGGAUGCU-
GGGGAAUAUAUAUGUAAGGUCUCCAAUUAUAUAGGG-
CAGGCCAACCAGUCUGCCUGGCUCACUGUCCUGCCCA-
AACAGCAAGG 3'
"Смысловой" стандарт РНК приготавливали немеченым (без радиоактивной метки) с использованием набора Riboprobe Gemini II, Promega (#2020) и очищали на колонке G50 Sephadex Quick spin.
5' GGGAGACAAGCUUGCAUGCCUGCAGGUCGACUCUAG-
AGGAUCCACUCGGGGAUAAAUAGCUCCAAUGCAGAA-
GUGCUGGCUCUGUUCAAUGUGACGGAGAUGGAUGCU-
GGGGAAUAUAUAUGUAAGGUCUCCAAUUAUAUAGGG-
CAGGCCAACCAGUCUGCCUGGCUCACUGUCCUGCCCA-
AACAGCAAGG 3'
"Смысловой" стандарт РНК приготавливали немеченым (без радиоактивной метки) с использованием набора Riboprobe Gemini II, Promega (#2020) и очищали на колонке G50 Sephadex Quick spin.
Согласно стандартному протоколу Ambion (RPA II #1410), 50 мкг тотальной РНК инкубировали с 100 000 cpm пробы сначала при 95oC четыре минуты, затем от двенадцати до восемнадцати часов при 45oC. РНКаза (в разведении 1:500 в растворе Ambion R) была добавлена к гибридизационной смеси на сорок минут при 37oC, а затем был добавлен инактивирующий и осаждающий агент (раствор Dx).
Фрагменты РНК, защищенные от РНКазы, разделяли по размеру электрофорезом в полиакриламидном геле с мочевиной, а затем весь гель экспонировали с пленкой Phosphorimager. Количественную оценку содержания РНК в полосах проводили при помощи прибора Phosphorimager фирмы Molecular Dynamics. Результаты представлен на фиг.14.
Идентификация ФРК как ростового фактора пневмоцитов типа II открывает возможности терапевтического применения ФРК, который подобно кортикостероидам может быть использован для стимулирования созревания легких эмбриона. Другое возможное клиническое применение ФРК состоит в стимулировании бронхоальвеолярной регенерации после повреждения легких у взрослых. Пролиферативное действие ФРК на пневмоциты типа II дает основания предполагать его важную роль в регуляции синтеза и секреции слизи.
Пример 3
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ГЕПАТОЦИТОВ
Оценивали эффекты систематического введения ФРК на эпителиальные ткани печени взрослых крыс.
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ГЕПАТОЦИТОВ
Оценивали эффекты систематического введения ФРК на эпителиальные ткани печени взрослых крыс.
Материалы и методы
Самцы крыс получали воду и пищу ad libitum. Всем животным ежедневно интраперитонеально вводили ФРК или фосфатный буферный раствор в течение одного, четырех или семи дней. Во всех экспериментах из каждой группы анализировали по крайней мере пять животных.
Самцы крыс получали воду и пищу ad libitum. Всем животным ежедневно интраперитонеально вводили ФРК или фосфатный буферный раствор в течение одного, четырех или семи дней. Во всех экспериментах из каждой группы анализировали по крайней мере пять животных.
Всех животных умерщвляли с помощью CO2, сразу же после гибели забирали кровь путем сердечной пункции для получения сыворотки, которую хранили замороженной до использования. Сыворотку анализировали обычным методом на содержание химических веществ и электролитов. Печень взвешивали слепым способом и вес выражали в граммах по отношению к 100 граммам веса тела (процент к весу тела). Образцы тканей помещали в 10%-ный забуференный формалин для последующего гистологического исследования.
Срезы печени окрашивали гематоксилином и эозином (Г и Э). За час до умерщвления крысам интраперитонеально вводили 50 мг/кг BrdU. Для визуального выявления BrdU, включившегося в ДНК реплицирующихся клеток, использовали иммуногистохимический метод, основанный на использовании антител к BrdU.
Индекс мечения (ИМ) печени определяли с помощью калиброванной окулярной сетки. Для каждого животного подсчитывали и усредняли десять полей зрения. Определяли общее число ядер и число меченых ядер на единицу площади. Для стандартизации подсчета все поля зрения на препаратах выбирали таким образом, чтобы они прилегали к портальной триаде.
Все данные анализировали по распределению Стьюдента или тесту ANOVA для множественных групп сравнения.
Для определения эффективной дозы ФРК использовали методику дозозависимого ответа. ФРК инъецировали ежедневно в течение четырех дней и забирали органы. Вес печени, выраженный в процентах к весу тела, значительно отличался от контрольного только при самой высокой ежедневной дозе ФРК (5 мг/кг) при сравнении методом ANOVA (фиг.15). Примечательно, что содержание сывороточных белков, холестерина и триглицеридов, синтезируемых печенью, было значительно выше по сравнению с контрольным при дозах ФРК 1,0 и 5,0 мг/кг (фиг.16).
Исследовали животных, которым ежедневно в течение одного, четырех или семи дней вводили ФРК в дозе 5 мг/кг. Как показали исследования органов, печень была значительно увеличена в размерах по состоянию на седьмой день эксперимента. Вес печени у получавших ФРК крыс был существенно увеличен во всех исследуемых временных точках (седьмой день, ФРК: 4,08 ± 0,08%; контроль: 3,49 ± 0,06%, p=0,0003). Подсчет BrdU-положительных ядер показал трех- четырехкратное превышение их числа у ФРК-обработанных крыс по сравнению с контрольными через день после введения ФРК (фиг.17). Митотический индекс, выраженный как число митозов в поле зрения при большом увеличении микроскопа, был существенно выше по сравнению с контролем на первый день после введения ФРК, что согласуется с подсчетом BrdU-положительных ядер.
Приведенные результаты указывают на сильное митогенное и дифференцировочное воздействие ФРК на печень. Быстрое увеличение веса печени на первый день после введения ФРК в сочетании с увеличенным митотическим индексом и доли BrdU-положительных клеток указывают на быстрое и мощное воздействие ФРК на эту преимущественно эпителиальную ткань. Хотя митотическое воздействие ФРК быстро спадает, вес печени, выраженный в процентах к весу тела, продолжает возрастать в ходе экспериментов. Возрастание веса первоначально обусловлено увеличением числа клеток, гистологически различимым уже через день после введения ФРК. Это же увеличение веса сохраняется на четвертый и седьмой дни эксперимента. Поскольку при регенерации масса печени может увеличиваться более чем в два раза менее чем за две недели, не удивительно, что столь существенные различия обнаруживаются уже через день после введения ФРК.
Повышенный уровень альбумина не связан с каким-либо болезненным состоянием за исключением дегидратации. По-видимому, ФРК индуцирует повышение уровня альбумина (и других белков) в сыворотке за счет увеличения числа функционирующих гепатоцитов. Индуцируемое ФРК усиление синтеза белков может иметь исключительное значение для пациентов с терминальными стадиями заболеваний печени, в частности циррозом.
Пример 4
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЕ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ IN VIVO ПОСЛЕ ЧАСТИЧНОЙ ГЕПАТЭКТОМИИ
В настоящих экспериментах в качестве подопытных животных были использованы самцы крыс Spraque-Dawley весом 300-340 г.
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЕ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ IN VIVO ПОСЛЕ ЧАСТИЧНОЙ ГЕПАТЭКТОМИИ
В настоящих экспериментах в качестве подопытных животных были использованы самцы крыс Spraque-Dawley весом 300-340 г.
Материалы и методы
Каждой из крыс удаляли до двух третей печени по методике Higgins и Anderson, Archives of Pathology, Volume 12, page 186 (1931). Начиная с восьми часов после операции и затем ежедневно крысам подкожно вводили фосфатный буферный раствор (контроль) или ФРК в дозе 1 мг/кг. Контрольных и ФРК-обработанных крыс взвешивали и забивали на четвертый, седьмой, десятый и четырнадцатый день после операции. Удаляли и взвешивали остатки печени.
Каждой из крыс удаляли до двух третей печени по методике Higgins и Anderson, Archives of Pathology, Volume 12, page 186 (1931). Начиная с восьми часов после операции и затем ежедневно крысам подкожно вводили фосфатный буферный раствор (контроль) или ФРК в дозе 1 мг/кг. Контрольных и ФРК-обработанных крыс взвешивали и забивали на четвертый, седьмой, десятый и четырнадцатый день после операции. Удаляли и взвешивали остатки печени.
Установлено, что обработка ФРК крыс, перенесших частичную гепатэктомию, приводит к значительному ускорению восстановления массы печени как в абсолютных, так и в относительных величинах, как показано соответственно на фиг.18 и 19. У обработанных ФРК крыс масса печени возвращалась к исходному значению в течение семи дней. Напротив, в контрольной группе ни абсолютная, ни относительная масса печени не восстанавливались полностью даже к четырнадцатому дню после гепатэктомии.
Пример 5
ПОЛОЖИТЕЛЬНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ ФРК ПРИ ХИМИЧЕСКОМ ОТРАВЛЕНИИ ПЕЧЕНИ
Самцы крыс Spraque-Dawley весом 300-340 г были использованы для оценки терапевтического воздействия ФРК на печень при введении химического токсина.
ПОЛОЖИТЕЛЬНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ ФРК ПРИ ХИМИЧЕСКОМ ОТРАВЛЕНИИ ПЕЧЕНИ
Самцы крыс Spraque-Dawley весом 300-340 г были использованы для оценки терапевтического воздействия ФРК на печень при введении химического токсина.
Группам из двенадцати самцов крыс Spraque-Dawley перорально вводили четырех-хлористый углерод (CCl4) в растительном масле в дозах 1 мг/кг и 2 мг/кг. Каждая группа была разделена на две подгруппы по шесть крыс в каждой. Через три часа после введения CCl4 и затем ежедневно крысам соответствующей подгруппы вводили фосфатный буферный раствор или ФРК в дозе 1 мг/кг/день. Через 24, 72 и 144 часа после введения CCl4 у каждой крысы брали пробу крови и определяли уровень сывороточной глутамат-оксалоацетат трансаминазы (СГОТ).
Как видно из фиг.20, подкожное введение ФРК после перорального введения CCl4 значительно увеличивает в сыворотке содержание фермента СГОТ, являющегося индикатором повреждения печени. Эффект особенно выражен при дозе 2 мг/кг на первый день после введения ФРК.
Пример 6
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА
В данном примере оценивается биологическое воздействие ФРК на эпителиальные клетки слизистой оболочки кишечника здоровых крыс.
ФРК-СТИМУЛИРОВАННЫЕ ПРОЛИФЕРАЦИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА
В данном примере оценивается биологическое воздействие ФРК на эпителиальные клетки слизистой оболочки кишечника здоровых крыс.
Материалы и методы
Самцы крыс получали воду и пищу ad libitum. Животным вводили ФРК или фосфатный буферный раствор (контроль) интраперитонеально в течение одного, четырех или семи дней. Анализировали не менее пяти животных в каждой группе. Всех крыс умерщвляли при помощи CO2. Главные органы взвешивали слепым методом и их вес выражали в граммах на 100 граммов веса тела (процент к весу тела). Пищеварительный тракт разделяли на нежелезистый желудок, железистый желудок, тонкий кишечник и толстый кишечник. Образцы тканей помещали в 10%-ный забуференный формалин для последующего стандартного гистологического исследования.
Самцы крыс получали воду и пищу ad libitum. Животным вводили ФРК или фосфатный буферный раствор (контроль) интраперитонеально в течение одного, четырех или семи дней. Анализировали не менее пяти животных в каждой группе. Всех крыс умерщвляли при помощи CO2. Главные органы взвешивали слепым методом и их вес выражали в граммах на 100 граммов веса тела (процент к весу тела). Пищеварительный тракт разделяли на нежелезистый желудок, железистый желудок, тонкий кишечник и толстый кишечник. Образцы тканей помещали в 10%-ный забуференный формалин для последующего стандартного гистологического исследования.
Срезы всех отобранных органов окрашивали гематоксилином и эозином (Г и Э). За час до забоя крысам интраперитонеально вводили 50 мг/кг BrdU. Для визуализации включения BrdU в ДНК реплицирующихся клеток был использован иммуногистохимический метод с антителами к BrdU. Отдельные ткани были окрашены перийодат-Шиффом (PAS), альциановым голубым при pH 2,5 и Мессон-трихромом.
Для измерения толщины слизистой желудка и глубины ее прокрашивания PAS использовали калиброванный окуляр. Аналогично определяли длину ворсинок и глубину кишечных крипт в двенадцатиперстной кишке и глубину крипт ободочной кишки. Чтобы оценить количественные изменения в образовании бокаловидных клеток подсчитывали PAS-положительные бокаловидные клетки на 100 мкм длины дуоденальной ворсинки, начиная с основания. Для всех отделов пищеварительного тракта измерения проводили только на тех железах или ворсинках, которые были перпендикулярны подстилающим мышцам. Результаты выражали в микронах или, в случае бокаловидных клеток тонкого кишечника, средним числом на единицу площади. Кроме того, для ободочной кишки определяли число обычных и гиперпластических (бифурцированных и трифурцированных) крипт на единицу длины кишки.
Для каждого животного проводили от пяти до десяти повторных измерений и результаты усредняли. Все данные обрабатывали по распределению Стьюдента или тесту ANOVA для множественных групп сравнения (Statview II, Abacus Concepts, Berkeley, CA).
Для определения эффективной дозы ФРК первоначально были поставлены эксперименты по типу "доза-ответ". ФРК вводили ежедневно в течение четырех дней, и органы опытных животных забирали для обследования. Выраженный ответ на введение ФРК наблюдался в отношении железистого желудка, тонкого кишечника и ободочной кишки (фиг.15).
Животных обследовали после одного, четырех и семи дней ежедневных введений ФРК в дозе 5 мг/кг. Согласно данным патологоанатомического обследования, на четвертый и седьмой дни введения ФРК нежелезистый желудок был значительно утолщен с образованием складок слизистой оболочки.
На четвертый и седьмой дни обработки ФРК, но не на первый день, нежелезистый желудок, железистый желудок, двенадцатиперстная кишка и ободочная кишка имели значительное увеличение по весу по сравнению с контролем. На седьмой день железистый желудок весил 0.65±0,01 г у животных, обработанных ФРК, и 0,48±0,02 г у контрольных (p=0,0001).
На четвертый и седьмой дни обработки ФРК нежелезистый желудок значительно превышал по весу контрольный. Гистологически у ФРК-обработанных животных чешуйчатый эпителий нежелезистого желудка был слегка (на четвертый день) или значительно (на седьмой день) гиперпластирован. В кардии характер эпителия резко менялся от чешуйчатого эпителия пищевода до пролиферирующего эпителия обработанного ФРК нежелезистого желудка. После одного дня обработки ФРК слизистая оболочка железистого желудка выглядела гистологически нормальной. На четвертый и седьмой дни гистологически выявлялось возросшее число бокаловидных клеток, различимых по обширной прозрачной цитоплазме. У животных, получавших ФРК в течение четырех и семи дней, отмечено умеренное увеличение толщины слизистой оболочки (фиг.21). На седьмой день слой слизистых клеток оказывается расширенным и смещенным к поверхности серозной оболочки. Окраска PAS на четвертый и седьмой дни выявляет значительное возрастание числа PAS-положительных (муцинпродуцирующих) бокаловидных клеток. Окрашивание срезов BrdU также подтверждает, что указанные клетки образуют пролиферирующий клеточный слой в железистом желудке. Кроме того, число делящихся клеток возрастает при обработке ФРК. Толщина PAS-положительного слоя на люминальной поверхности слизистой оболочки желудка на четвертый и седьмой дни обработки ФРК также значительно увеличивается (фиг.21).
Во все временные точки тонкий кишечник оставался в основном нормальным. Окраска PAS выявляла возросшее число бокаловидных клеток, продуцирующих слизь. Эти было особенно заметно на четвертый и седьмой дни (фиг.22). Длина ворсинок оставалась одинаковой, а глубина крипт была значительно больше на первый и седьмой дни (фиг.22).
К седьмому дню обработки слизистая оболочка ободочной кишки образовывала морщинистые складки, которые значительно увеличивали общую площадь поверхности. Признаки гиперплазии (бифурцированные и трифурцированные крипты ободочной кишки) имели место во всех группах животных, включая контрольных, но они были более выраженными и многочисленными в тех группах, которые получали ФРК в течение коротких временных интервалов (один и четыре дня), причем число гиперпластических крипт уменьшалось с увеличением сроков обработки (фиг. 23). Соответственно глубина крипт ободочной кишки возрастала с увеличением сроков обработки (фиг.24).
Окраска препаратов PAS и альциановым голубым показала возрастание числа продуцирующих слизь бокаловидных клеток в ободочной кишке после обработки ФРК. Кроме того, у всех обработанных ФРК животных к седьмому дню отмечали возрастание числа окрашиваемых альциановым голубым бокаловидных клеток на люминальной поверхности кишки. Обработка животных ФРК уже к четвертому дню приводила к заметному увеличению числа PAS-положительных клеток в верхних трех четвертях крипт ободочной кишки.
Приведенные результаты показывают, что ФРК обладает сильным митогенным и дифференцировочным действием на эпителиальные ткани желудочно-кишечного тракта. Из опытов по включению BrdU очевидно, что ФРК инициирует пролиферацию слизистых клеток в слизистой оболочке желудка. В железистом желудке эти клетки являются клетками-предшественниками. По мере деления они мигрируют наверх, по направлению к просвету желудка, и образуют поверхностные клетки или же перемещаются вниз и образуют клетки, формирующие железы желудка (Toner et al. , 1989, in Gastrointestinal and Esophageal Pathology, Churchill Livingstone, New York, NY, at pages 13-28). Кроме того, ФРК ускоряет селективную дифференцировку слизистых клеток желудка в клетки, которые мигрируют наверх и становятся бокаловидными клетками. На четвертый и седьмой дни обработки общая толщина слизистой оболочки желудка значительно увеличивается. Аналогичные эффекты отмечаются также для тонкого и толстого кишечника.
Стимулируя клетки-предшественники, ФРК ускоряет клеточное деление и приводит к удлинению крипт. Кроме того, ФРК индуцирует дифференцировку делящихся клеток крипт, что приводит к увеличению образования слизи и возрастанию числа бокаловидных клеток в ворсинках и криптах.
При том, что указаны отдельные применения данного изобретения и оно раскрыто в конкретных примерах, следует понимать, что приведенное описание не является исчерпывающим. Так, например, любая из форм ФРК, обладающая усиленными биологическими свойствами природного ФРК, может быть использована для решения перечисленных в данной заявке задач. Эти формы могут включать очищенный природный ФРК, синтезированный химическим путем ФРК, рекомбинантный ФРК, полученный в системах экспрессии, отличных от описанной в данной заявке, а также аналоги, варианты, химеры и т.п., основанные на природной аминокислотной последовательности. Все эти формы должны применяться на практике с учетом настоящего изобретения.
Опытному исследователю очевидно, что различные системы "вектор-хозяин" могут быть использованы для экспрессии белоккодирующей последовательности ФРК. Эти системы могут не ограничиваться клетками млекопитающих, инфицированными вирусами (например, вирусом осповакцины, аденовирусами и т.д.); клетками насекомых, инфицированными вирусами, в частности бакуловирусами; дрожжами, содержащими дрожжевые векторы, а также бактериями, отличными от E. coli, трансформированными фаговыми, плазмидными или космидными ДНК. Элементы, контролирующие экспрессию, в этих векторах могут отличаться по силе и специфичности. В зависимости от использованной системы "хозяин-вектор" могут быть применены те или иные транскрипционные и трансляционные элементы.
Будучи выделен, очищен и проверен на активность с использованием описанных в данной заявке или других методов, белковый продукт экспрессии кДНК ФРК может быть включен в состав различных фармакологических композиций. Как правило, такие композиции включают удобный, обычно химически определенный носитель или растворитель для терапевтического агента (ФРК) и, в зависимости от способа применения, другие компоненты. Композиции могут включать водный растворитель или же могут быть твердофазными, в которых ФРК включен в состав неводных носителей, таких как коллагены, гиалуроновая кислота и различные полимеры. Состав такой композиции может быть подобран в соответствии с методом введения, включая инъекции, пероральное введение, наружное и назальное введение, а также введение в легкие.
Как понятно опытному специалисту, дозировка ФРК будет меняться в зависимости от заболевания и метода введения, но эффективными могут оказаться дозы в интервале от 0,01 мг до 500 мг на килограмм веса тела. В зависимости от заболевания и состояния пациента ФРК может применяться однократно или многократно. ФРК может быть использован в сочетании с другими препаратами, например цитокинами и ростовыми факторами, и с другими фармакологическими препаратами, применяемыми для лечения заболеваний кожи, легких, печени и пищеварительного тракта.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
(1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ:
(i) ЗАЯВИТЕЛЬ: Amgen Inc.
(1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ:
(i) ЗАЯВИТЕЛЬ: Amgen Inc.
(ii) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: Терапевтические применения фактора роста кератиноцитов
(iii) ЧИСЛО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 4
(iv) АДРЕС ДЛЯ ПЕРЕПИСКИ:
(A) АДРЕСАТ: Amgen Inc.
(iii) ЧИСЛО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 4
(iv) АДРЕС ДЛЯ ПЕРЕПИСКИ:
(A) АДРЕСАТ: Amgen Inc.
(B) УЛИЦА: Amgen Center, 1840 Dehavilland Drive
(C) ГОРОД: Thousand Oaks
(D) ШТАТ: California
(E) СТРАНА: USA
(F) ПОЧТОВЫЙ КОД: 91320-1789
(v) ФОРМА ДЛЯ РАБОТЫ С КОМПЬЮТЕРОМ:
(A) НОСИТЕЛЬ ИНФОРМАЦИИ: Дискета, 3,5 дюйма, DS, 2,0 Mb
(B) КОМПЬЮТЕР: IBM-совместимый
(C) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: MS-DOS
(D) ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ: Microsoft Word Version 5.1 a
(vi) ТЕКУЩИЕ ДАННЫЕ ПО ЗАЯВКЕ:
(A) НОМЕР ЗАЯВКИ:
(B) ДАТА ПОДАЧИ: 26-03-1993
(C) КЛАССИФИКАЦИЯ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 1:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 55 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: SEQ ID NO: 1:
CGATTTGATT CTAGAAGGAG GAATAACATA TGGTTAACGC GTTGGAATTC GGTAC
(3) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N0:2:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 49 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 2:
CGAATTCCAA CGCGTTAACC ATATGTTATT CCTCCTTCTA GAATCAAAT
(4) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 3:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 164 пары оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 3:
GAAUACGAAU UCCUUGCUGU UUGGGCAGGA CAGUGAGCCA
GGCAGACUGG
UUGGCCUGCC CUAUAUAAUU GGAGACCUUA CAUAUAUAUU
CCCCAGCAUC
CAUCUCCGUC ACAUUGAACA GAGCCAGCAC UUCUGCAUUG
GAGCUAUUUA
UCCCCGAGUG GAUC
(5) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N0:4:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 191 пара оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N: 4:
GGGAGACAAG CUUGCAUGCC UGCAGGUCGA CUCUAGAGGA
UCCACUCGGG
GAUAAAUAGC UCCAAUGCAG AAGUGCUGGC UCUGUUCAAU
GUGACGGAGA
UGGAUGCUGG GGAAUAUAUA UGUAAGGUCU CCAAUUAUAU
AGGGCAGGCC
AACCAGUCUG CCUGGCUCAC UGUCCUGCCC AAACAGCAAG Gю
(C) ГОРОД: Thousand Oaks
(D) ШТАТ: California
(E) СТРАНА: USA
(F) ПОЧТОВЫЙ КОД: 91320-1789
(v) ФОРМА ДЛЯ РАБОТЫ С КОМПЬЮТЕРОМ:
(A) НОСИТЕЛЬ ИНФОРМАЦИИ: Дискета, 3,5 дюйма, DS, 2,0 Mb
(B) КОМПЬЮТЕР: IBM-совместимый
(C) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: MS-DOS
(D) ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ: Microsoft Word Version 5.1 a
(vi) ТЕКУЩИЕ ДАННЫЕ ПО ЗАЯВКЕ:
(A) НОМЕР ЗАЯВКИ:
(B) ДАТА ПОДАЧИ: 26-03-1993
(C) КЛАССИФИКАЦИЯ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 1:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 55 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: SEQ ID NO: 1:
CGATTTGATT CTAGAAGGAG GAATAACATA TGGTTAACGC GTTGGAATTC GGTAC
(3) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N0:2:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 49 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 2:
CGAATTCCAA CGCGTTAACC ATATGTTATT CCTCCTTCTA GAATCAAAT
(4) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 3:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 164 пары оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID NO: 3:
GAAUACGAAU UCCUUGCUGU UUGGGCAGGA CAGUGAGCCA
GGCAGACUGG
UUGGCCUGCC CUAUAUAAUU GGAGACCUUA CAUAUAUAUU
CCCCAGCAUC
CAUCUCCGUC ACAUUGAACA GAGCCAGCAC UUCUGCAUUG
GAGCUAUUUA
UCCCCGAGUG GAUC
(5) ИНФОРМАЦИЯ О ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N0:4:
(i) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 191 пара оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) КОЛИЧЕСТВО ЦЕПЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(xi) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ SEQ ID N: 4:
GGGAGACAAG CUUGCAUGCC UGCAGGUCGA CUCUAGAGGA
UCCACUCGGG
GAUAAAUAGC UCCAAUGCAG AAGUGCUGGC UCUGUUCAAU
GUGACGGAGA
UGGAUGCUGG GGAAUAUAUA UGUAAGGUCU CCAAUUAUAU
AGGGCAGGCC
AACCAGUCUG CCUGGCUCAC UGUCCUGCCC AAACAGCAAG Gю
Claims (8)
1. Способ стимулирования образования некератиноцитных эпителиальных клеток, заключающийся в контактировании указанных клеток с эффективным количеством фактора роста кератиноцитов (ФРК).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что некератиноцитные эпителиальные клетки выбирают из группы, содержащей себоциты, клетки волосяных фолликулов, гепатоциты, пневмациты типа II, муцинпродуцирующие бокаловидные клетки и другие эпителиальные клетки и их предшественники, обнаруживаемые в коже, легких, печени и желудочно-кишечном тракте.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что осуществляют in vivo.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ФРК представляет собой рекомбинатный ФРК.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что рекомбинатный ФРК продуцируется бактериальными клетками.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что бактериальные клетки представляют собой E. coli.
7. Способ лечения заболеваний и болезненных состояний, таких, как кожные повреждения, буллезный эпидермолиз, облысение, вызванное химиотерапией, облысение по мужскому типу, язва желудка, язва двенадцатиперстной кишки, эрозия желудка и пищевода, воспалительные заболевания кишечника, интоксикация кишечника, вызванная облучением или химиотерапией, эрозивный гастрит, эзофагит или эзофагитный рефлюкс, геалиново-мембранная болезнь, некроз эпителия дыхательных путей, вызванных вдыханием дыма, эмфизема, воспаление и фиброз легких, цирроз печени, быстро развивающаяся печеночная недостаточность, острый вирусный гепатит, заключающийся в том, что больному вводят терапевтически эффективное количество ФРК.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что кожное повреждение является ожогом.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US4074293A | 1993-03-26 | 1993-03-26 | |
US040,742 | 1993-03-26 | ||
PCT/US1994/003208 WO1994023032A1 (en) | 1993-03-26 | 1994-03-24 | Therapeutic uses of keratinocyte growth factor |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95117959A RU95117959A (ru) | 1999-02-10 |
RU2146148C1 true RU2146148C1 (ru) | 2000-03-10 |
Family
ID=21912689
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95117959A RU2146148C1 (ru) | 1993-03-26 | 1994-03-24 | Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (фрк) |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0619370B1 (ru) |
JP (1) | JP3578761B2 (ru) |
KR (1) | KR100390340B1 (ru) |
CN (1) | CN1064710C (ru) |
AT (1) | ATE183233T1 (ru) |
AU (1) | AU707340B2 (ru) |
CA (1) | CA2159109C (ru) |
CZ (1) | CZ285996B6 (ru) |
DE (1) | DE69419958T2 (ru) |
DK (1) | DK0619370T3 (ru) |
ES (1) | ES2136673T3 (ru) |
FI (1) | FI954541A (ru) |
GR (1) | GR3031509T3 (ru) |
HU (1) | HU220641B1 (ru) |
IL (4) | IL109122A (ru) |
NO (1) | NO953781L (ru) |
NZ (1) | NZ263967A (ru) |
RU (1) | RU2146148C1 (ru) |
SG (1) | SG49841A1 (ru) |
SI (1) | SI0619370T1 (ru) |
SK (1) | SK281674B6 (ru) |
UA (1) | UA46706C2 (ru) |
WO (1) | WO1994023032A1 (ru) |
Families Citing this family (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AUPN271295A0 (en) * | 1995-05-02 | 1995-05-25 | Gropep Pty Ltd | Method of treatment |
EE03975B1 (et) * | 1994-10-13 | 2003-02-17 | Amgen Inc. | Keratinotsüüdi kasvufaktori analoogid |
AU708868B2 (en) * | 1995-02-14 | 1999-08-12 | Human Genome Sciences, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 |
US6693077B1 (en) | 1995-02-14 | 2004-02-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 |
US6077692A (en) | 1995-02-14 | 2000-06-20 | Human Genome Sciences, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 |
US7232667B2 (en) | 1995-02-14 | 2007-06-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 polynucleotides |
JPH11513405A (ja) * | 1995-10-11 | 1999-11-16 | カイロン コーポレイション | 創傷治癒のためのpdgf、kgf、igf、およびigfbpの配合物 |
GB9619660D0 (en) * | 1996-09-20 | 1996-11-06 | Scient Hospital Suppl Int Ltd | Prevention of gastrointestinal damage |
SI0941110T1 (en) * | 1996-10-15 | 2004-06-30 | Amgen Inc. | Uses of keratinocyte growth factor-2 |
US6743422B1 (en) | 1996-10-15 | 2004-06-01 | Amgen, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 products |
PT941110E (pt) * | 1996-10-15 | 2004-07-30 | Amgen Inc | Utilizacao do factor 2 de crescimento dos ceratinocitos |
US20010006939A1 (en) * | 1997-10-03 | 2001-07-05 | Ralph W. Niven | Secretory leukocyte protease inhibitor dry powder pharmaceutical compositions |
US6228839B1 (en) * | 1997-12-19 | 2001-05-08 | Emory University | Use of keratinocyte growth factor to improve oxidative status |
US6869927B1 (en) | 1997-12-22 | 2005-03-22 | Human Genome Sciences, Inc. | Keratinocyte growth factor-2 formulations |
NZ505324A (en) | 1997-12-22 | 2002-11-26 | Human Genome Sciences Inc | Liquid and lyophilised KGF-2 polypeptide formulations used to accelerate soft tissue growth or regeneration |
EP1054900A4 (en) | 1998-02-13 | 2004-12-22 | Human Genome Sciences Inc | THERAPEUTIC USE OF THE KERATINOCTENT GROWTH FACTOR-2 |
US6335317B1 (en) | 1998-04-10 | 2002-01-01 | Emory University | Use of gut-trophic growth factors to improve oxidative status |
AU2001243657A1 (en) | 2000-03-20 | 2001-10-03 | Osi Pharmaceuticals, Inc | Combined treatment with keratinocyte growth factor and epidermal growth factor inhibitor |
CA2437270A1 (en) * | 2001-02-06 | 2002-08-15 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Modified keratinocyte growth factor (kgf) with reduced immunogenicity |
US7202066B2 (en) | 2002-01-29 | 2007-04-10 | Carrington Laboratories, Inc. | Combination of a growth factor and a protease enzyme |
EP1789138A2 (en) * | 2004-09-13 | 2007-05-30 | University Of Southampton | Growth factor treatment for asthma |
CN101822821B (zh) * | 2010-04-27 | 2013-01-23 | 复旦大学附属中山医院 | 角质细胞生长因子-2在制备防治肺损伤的药物中的应用 |
CN104707164B (zh) * | 2015-03-31 | 2017-01-18 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 一种复合壳聚糖水凝胶敷料及其制备方法和应用 |
CN106226511B (zh) * | 2016-07-28 | 2018-04-06 | 苏州金盟生物技术有限公司 | 一种重组人角质细胞生长因子生物学活性检测方法 |
CN107753932A (zh) * | 2016-08-22 | 2018-03-06 | 中国辐射防护研究院 | Kgf在制备治疗或预防放射性肠炎药物中的用途 |
EP3888625A4 (en) | 2018-11-27 | 2022-10-05 | Jellyfish Research Laboratories, Inc. | COMPOSITION FOR SCALP AND HAIR |
KR20210114646A (ko) * | 2020-03-11 | 2021-09-24 | (주)메디코스바이오텍 | 성장인자를 함유하는 탈모 치료 또는 모발 성장 촉진용 조성물 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GEP20022681B (en) * | 1989-01-31 | 2002-04-25 | Aaronson Us Stuart A | Protein KFG, Antibodies, Pharmaceutical Composition, Their Use, recombinant DNA, Cell, Method for Discoveries and Production of Proteins, Method for Stimulation of Epithelial Cells Growth |
JPH04224522A (ja) * | 1990-04-27 | 1992-08-13 | Merck & Co Inc | 繊維芽細胞増殖因子含有組成物による禿頭症の治療又は予防方法 |
AU1462392A (en) * | 1991-02-22 | 1992-09-15 | Amgen, Inc. | Use of gm-csf and g-csf to promote accelerated wound healing |
-
1994
- 1994-03-24 CN CN94192037A patent/CN1064710C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-24 IL IL10912294A patent/IL109122A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-24 WO PCT/US1994/003208 patent/WO1994023032A1/en active IP Right Grant
- 1994-03-24 SK SK1185-95A patent/SK281674B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-03-24 IL IL137581A patent/IL137581A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-24 CA CA002159109A patent/CA2159109C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-24 HU HU9502800A patent/HU220641B1/hu unknown
- 1994-03-24 JP JP52218894A patent/JP3578761B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-24 CZ CZ952482A patent/CZ285996B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-03-24 RU RU95117959A patent/RU2146148C1/ru active
- 1994-03-24 AU AU65243/94A patent/AU707340B2/en not_active Expired
- 1994-03-24 UA UA95104698A patent/UA46706C2/uk unknown
- 1994-03-24 KR KR1019950704154A patent/KR100390340B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-03-24 NZ NZ263967A patent/NZ263967A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-25 DK DK94104804T patent/DK0619370T3/da active
- 1994-03-25 EP EP94104804A patent/EP0619370B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-25 ES ES94104804T patent/ES2136673T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-25 DE DE69419958T patent/DE69419958T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-03-25 SI SI9430265T patent/SI0619370T1/xx unknown
- 1994-03-25 SG SG1996007376A patent/SG49841A1/en unknown
- 1994-03-25 AT AT94104804T patent/ATE183233T1/de active
-
1995
- 1995-09-25 NO NO953781A patent/NO953781L/no not_active Application Discontinuation
- 1995-09-25 FI FI954541A patent/FI954541A/fi unknown
-
1999
- 1999-10-13 GR GR990402604T patent/GR3031509T3/el unknown
-
2000
- 2000-07-30 IL IL13758100A patent/IL137581A0/xx unknown
-
2004
- 2004-04-22 IL IL16156804A patent/IL161568A0/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2146148C1 (ru) | Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (фрк) | |
US5814605A (en) | Therapeutic uses of keratinocyte growth factor | |
US7981426B2 (en) | Method for stimulating wound healing | |
JPS63502985A (ja) | 角膜基質創傷の治療のための組成物 | |
WO2019196420A1 (zh) | 一种多肽及其皮肤修复功能的应用 | |
US11622964B2 (en) | Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof | |
KR20070008519A (ko) | 패혈증 및 유착 형성의 치료 및 예방용 조직 보호성사이토카인 | |
Kaneko et al. | Changes in serum human hepatocyte growth factor levels after transcatheter arterial embolization and partial hepatectomy. | |
Cook et al. | Expression and regulation of mRNA coding for acidic and basic fibroblast growth factor and transforming growth factorα in cells derived from human skin | |
CN108210886B (zh) | Metrnl在防治溃疡性结肠炎中的应用 | |
WO2021093376A1 (zh) | 磷酸二酯酶5抑制剂在制备抗纤维化疾病药物中的应用 | |
AU6093794A (en) | Wound healing composition | |
Hamilton et al. | Adenoviral-mediated gene transfer to murine small intestine is more efficient in neonates than adults | |
US20230220026A1 (en) | Nucleic acid carrier for producing the single-chain vegf fusion protein with high physiological stability and dimeric efficiency, preparation method thereof, and use thereof | |
US20090022802A1 (en) | Cardiomyopathy therapeutic agent | |
WO2023196754A2 (en) | Treatment for reducing or preventing tissue fibrosis | |
WO1996016669A1 (en) | Use of human recombinant epidermal growth factor in the manufacture of a medicament for treating acne | |
UA56166C2 (ru) | Применение компонента в в качестве рубцующего агента |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20100507 |