RU2102762C1 - Способ индикации бактериальных антигенов - Google Patents
Способ индикации бактериальных антигенов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2102762C1 RU2102762C1 RU95102335A RU95102335A RU2102762C1 RU 2102762 C1 RU2102762 C1 RU 2102762C1 RU 95102335 A RU95102335 A RU 95102335A RU 95102335 A RU95102335 A RU 95102335A RU 2102762 C1 RU2102762 C1 RU 2102762C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reaction
- diagnosticum
- electric field
- results
- current density
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: иммунология, экспрессная индикация бактериальных средств в чрезвычайных ситуациях. Сущность изобретения: реакцию агглютинации смеси исследуемого материала и иммуноглобулинового полиакролеинового диагностикума проводят в электролите, используемом и в качестве разводящей жидкости под воздействием электрического поля при напряженности 1000-1200 В/см и плотности тока 0,2-0,4 А/мм2 в течение 2-5 мин. Для этого смесь исследуемого материала и диагностикума помещают в микрокамеру, изолированную от электролита токопроводящим материалом и расположенную изолирующими проводниками перпендикулярно направленности электрического поля. Учет результатов ведут под микроскопом. 1 ил.
Description
Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении очага бактериального заражения.
Известен способ постановки реакции пассивной гемагглютинации при индикации бактериальных средств, который включает титрование исследуемого материала в разводящей жидкости, внесение эритроцитарных диагностикумов и наблюдение за формированием эритроцитами диагностикумов на днищах емкостей типичной картины окончания реакции (Инструкция по применению серологических методов диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы. Саратов, 1974 г. с. 38-39).
Недостатком этого способа является длительность реакции (2-4 ч), что не позволяет его использование для экспрессной индикации.
Кроме того, эритроцитарные диагностикумы обладают недостаточностью при длительном хранении, собственной антигенностью, нестандартностью физико-химических свойств, что снижает точность индикации бактериальных средств.
В последнее время в стране и за рубежом активно применяют полимерные микрочастицы с заданными физико-химическими свойствами, на основе которых получают диагностические препараты.
Например, испытания лиофилизированного полимерного иммуноглобулинового диагностикума при обнаружении и идентификации возбудителя туляремии и объемных реакциях агломерации (РАС) по типу реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) показали соответствующие медикобиологическим требованиям результаты по активности, специфичности и чувствительности препарата.
Реакция демонстративна, стабильна, легко учитывается за счет яркой окраски препарата (современные аспекты природной очаговости, эпидемиологии и профилактики особо опасных инфекционных болезней. Тезисы докладов научной конференции, Омск, октябрь, 1993 г. Ставрополь, 1993 г. с.214-215).
Однако учет результатов реакции осуществляется через 1,5-2,0 ч, что не обеспечивает экспрессность метода.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является выбранный в качестве прототипа способ диагностики возбудителя чумы по обнаружению капсульного антигена в реакции агглютинации латексного антительного диагностикума (Рудник М.П. Груднева Л.Г. Экспресс-диагностика возбудителя сумы с использованием реакции агглютинации латекса. Проблемы природно-очаговых и зоонозных инфекций в Сибири и на Дальнем Востоке. Тезисы докладов к региональной научно-практической конференции 16-17 сентября 1993 г. Чита, 1993 г. с.134-135).
Этот способ включает постановку двух отдельных серологических реакций, проводимых объемным и капельным методами и осуществляется следующим образом.
Серодиагностику капсульного антигена проводили путем постановки реакции агглютинации латекса по типу РНГА объемным методом в лунках планшета для иммунологических реакций с микробными взвесями возбудителя чумы или с раствором антигена, с использованием диагностикума чумного иммуноглобулинового полиакролеинового. Учет результатов реакции проводили через 1,5-2,0 ч по формированию типичной картины скончания реакции ("зонтики", "пуговки").
Экспресс-диагностику проводили путем постановки реакции агглютинации капельным методом на стекле, осуществляя учет результатов реакции через 4-15 мин по видимым хорошо сформированным агглютинатам с полным просветлением жидкости.
У прототипа и заявляемого способа имеются следующие сходные существенные признаки.
Проведение реакции агглютинации внесением иммуноглобулинового полиакролеинового диагностикума с последующим учетом результатов реакции.
Недостатком прототипа является неудовлетворительная точность экспресс-диагностики. Учет результатов реакции, выполняемый капельным методом на стекле, возможен в течение 4-15 мин с момента ее постановки, поскольку через 30 мин появляются спонтанные агглютинаты с отрицательных контролях. Кроме того, постановка серологической реакции капельным методом сопряжена с необходимостью отдельного проведения раститровки исследуемого материала, с возможностью растекания капель на поверхности стекла и смешиванию с соседними, что приводит к нестандартным условиям образования и учета комплексов.
Учет более точных результатов объемной реакции непрямой суспензионной агглютинации РНСА возможен через 304,0 ч, что не обеспечивает экспрессность способа.
Целью изобретения является обеспечение экспрессной индикации бактериальных средств с требуемой точностью результатов реакции за счет ускорения процесса формирования типичной картины окончания реакции.
Поставленная цель достигается тем, что реакция агглютинации смеси исследуемого материала и иммуноглобулинового полиакролеинового диагностикума проводится в электролите, который используется и в качестве разводящей жидкости, под воздействием электрического поля при напряженности 1000-1200 В/м и плотности тока 0,2-0,4 а/мм2 в течение 2-5 мин, при этом смесь исследуемого материала и диагностикума помещается в микрокамеру, изолированную от электролита токопроводящим материалом и расположенную изолирующими проводниками перпендикулярно направленности электрического поля, учет результатов реакции осуществляется визуально под микроскопом.
При оптимально подобранных значениях напряженности электрического поля и плотности тока происходит нарастание значений поверхностных зарядов, за счет электродвижущих сил диагностикуму и бактериальному антигену, находящимся в электролите, сообщаются кинетические свойства, что и приводит к ускорению и усилению взаимодействия последних. Сокращение сроков индикации антигенов происходит за счет ускоренного формирования видоспецифических комплексов иммуноглобулиновых полиакролеиновых диагностикумов с антигенами в электрическом поле. Оптимальные значения режимов реакции смеси исследуемого материала и диагностикума в электролите под воздействием электрического поля установлены по зависимости скорости формирования типичной картины агглютинации в объеме опытной микрокамеры от напряженности электрического поля в В/м (кривая 1) и плотности тока в А/мм2 (кривая 2), представленным на фиг,1, где по оси ординат представлена значения напряженности электрического поля и плотности тока, по оси абцисс время агглютинации в мин. Точки пересечения кривых 1 и 2 и их протяженность в рамках интервалов времени (2-5 мин), достаточных для осуществления экспрессной индикации, очерчивают геометрическую фигуру (заштрихованный сегмент) определенной площади, включающий совокупность оптимальных параметров напряженности поля (1000-1200 В/м) и плотности тока (0,2-0,4 А/мм2). Крайняя правая тоска пересечения кривых 1 и 2 ограничивает максимальные параметры напряженности и плотности тока, превышение которых ведет к разрешению агглютинирующих комплексов.
Возможность осуществления способа с использованием полной совокупности заявляемых признаков подтверждается примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Исследуемый материал смыв с поверхности (дальнейшем смыв) заразили клетками чумного вакцинного штамма Y.pestis EV в концентрации 0,2•107 мк/мл и обеззаразили формалином. Смыв с поверхности в объеме 0,4 мл вносили в начальную лунку полистироловой пластины, содержащей 0,4 мл разводящей жидкости, в качестве которой использовали электролит - трис-ацетатный буферный раствор pH 8,0 (в дальнейшем электролит), и титровали в шести лунках с удалением 0,4 мл из последней. В одну контрольную лунку вносили только 0,4 мл электролита. В лунки с раститрованным смывом и в контрольную вносили по 0,05 мл 0,15% взвеси чумного полиакролеинового иммуноглобулинового диагностикума (в дальнейшем диагностикума), который путем легких сотрясений равномерно суспендировали в жидкости. Диагностикум предварительно разводили электролитом. Стеклянные капиллярные трубки длиной 10-15 мм поочередно заполняли содержимым каждой лунки и укладывали на горизонтальной столик электрофоретической камеры с ориентацией торцевых отверстий микрокамер, т.е. капилляров, в направлении к электродам. Торцевые отверстия капилляров закрывали 1,0% раствором агарозы в электролите при температуре 47oC. Горизонтальную электрофоретическую камеру заполняли электролитом, устанавливали на предметный столик микроскопа, находили в поле зрения исследуемых объектов (капилляров) частицы диагностикума под малым увеличением. При этом электролит покрывал капилляры слоем толщиной около 1 мм. Напряженность между электродами устанавливали 1000 В/м, плотность тока 0,2 А/мм2. Учет реакции проводили через 5 мин под микроскопом. При этом в поле зрения каждого из шести капилляров, заполнявшихся реакционной известью, отмечали образование агломератов по 20-25 частиц диагностикума в виде "хлопьев" с просветлением фона. В капиллярах, заполненных содержимым из лунок с концентрацией бактерий 62 и 31 тыс. мк/мл отмечали отдельные зоны с четко выраженным образованием агломератов. Дальнейшее увеличение времени наблюдения до 30 мин не сопровождалось изменениями в картине распределения частиц диагностикума. В капилляре заполнением из контрольной лунки отметили равномерное распределение частиц диагностикума в течение всего времени наблюдения.
Достоверность учета положительных результатов РНСА в электрическом поле в капиллярах под микроскопом проверяли путем проведения контрольного исследования аналогичного вышеизложенному с единственным отличием в том, что материал смыв с поверхности, приготовленный при тех же условиях, не заражали клетками чумного вакцинного штамма Y.pestis EV. При этом в течение 30 мин наблюдения в капиллярах, в том числе и в контрольном, не было обнаружено образования агломератов из частиц диагностикума.
Для контроля предлагаемого способа индикации бактериальных антигенов, с указанием выше параметрами электрического поля: напряженности 1000 В/м и плотности тока 0,2 А/мм2, смыв, зараженный клетками Y.pestis EV в концентрации 0,2•107 мг/мл, предварительно обеззараживали формалином и исследовали с помощью реакции суспензионной агломерации (РНСА). Смыв с поверхности в объеме 0,4 мл вносили в начальную лунку полистироловой пластины, содержащую 0,4 мл рабочего раствора белкового стабилизатора - разводящей жидкости (в дальнейшем разводящей жидкости) и титровали в 6 лунках с удалением 0,4 мл из последней. В одну контрольную лунку вносили только 0,4 мл разводящей жидкости. В лунки с раститрованным смывом и в контрольную лунку вносим по 0,05 мл 0,15% взвеси чумного полиакролеинового иммуноглобулинового диагностикума, который путем легких сотрясений пластины равномерно суспендировали в жидкости, после чего пластину оставляли на горизонтальной поверхности. Через 3-5 ч производили учет результатов реакции. В первых трех лунках отмечали образование феноменов "зонтиков", что свидетельствовало о наличии Y.pestis EV в концентрации 250 тыс. мк/мл в третьей лунке с оценкой интенсивности реакции (++++). В последующих трех лунках и в контрольной лунке отмечали образование феноменов "пуговок" с четкими краями, что свидетельствовало об отрицательном результате с оценкой (+).
Выводы: данный пример демонстрирует сокращение сроков учета РНСА в электрическом поле в капиллярах под микроскопом до 5 мин при напряженности 1000 в/м и плотности тока 0,2 А/мм2 с одновременным повышением чувствительности до 31 тыс. мк/мл. При проведении аналогичного исследования смыва, не зараженного клетками Y.pestis EV, получены отрицательные результаты. В РНСА, поставленной по обычной методике, результаты получены через 4 ч и чувствительность составила 250 тыс. мк/мл.
Пример 2. Выполнение данного примера не отличалось от вышеописанного примера 1, за исключением увеличения прикладываемых параметров электрического поля: напряженности 1100 В/см, плотности тока 0,3 А/мм2, что позволило получить новые результаты.
Выводы: данный пример демонстрирует сокращение сроков учета РНСА в электрическом поле в капиллярах под микроскопом до 3,5 мин при напряженности 1100 В/м и плотности тока 0,3 А/мм2 с одновременным повышением чувствительности до 31 тыс. мк/мл. При проведении аналогичного исследования смыва, не зараженного клетками Y.pestis EV, получены отрицательные результаты. В РНСА, поставленной по обычной методике, результаты получены через 3,5 ч и чувствительность составила 250 тыс. мк/мл.
Пример 3. Выполнение данного примера не отличается от вышеописанного примера 1, за исключением увеличения прикладываемых параметров электрического поля: напряженности составила 1200 В/см и плотность тока 0,4 А/мм2, что позволило получить новые результаты.
Выводы: данный пример демонстрирует сокращение сроков учета РНСА в электрическом поле в капиллярах под микроскопом до 2 мин при напряженности 1200 В/м и плотности тока 0,4 А/мм2 с одновременным повышением чувствительности до 31 тыс. мк/мл. При проведении аналогичного исследования смыва, не зараженного клетками Y.pestis EV, получены отрицательные результаты.
В РНСА, поставленной по обычной методике, результаты получены через 4 ч и чувствительность составила 250 тыс. мк/мл.
Выполнение примеров, отличающихся от вышеописанных тем, что в одном случае напряженность составила 900 В/м, плотность тока 0,1 А/мм2, а в другом, напряженность 1300 В/м, плотность тока 0,5 А/мм2, соответственно привело к увеличению сроков образования агломератов более 5 мин или же к разрушению типичной картины агломерации частиц диагностикума в течение 1 мин.
Таким образом, предлагаемый в качестве изобретения способ индикации бактериальных антигенов реально осуществим, полученные с его помощью результаты полностью коррелируют с таковыми, полученными с использованием обычных методов, однако отличаются скоростью получения результатов 2-5 мин и повышением чувствительности, что обеспечивает возможность организации экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении очагов бактериального заражения.
Claims (1)
- Способ индикации бактериальных антигенов в реакции агглютинации, включающий смешивание исследуемого материала и иммуноглобулинового полиакролеинового диагностикума в разводящей жидкости и визуальный учет результатов реакции, отличающийся тем, что реакцию проводят в электролите, используемом в качестве разводящей жидкости, под воздействием электрического поля при напряженности 1000 1200 В/м и плотности тока 0,2 0,4 А/мм2 в течение 2 5 мин, при этом смесь исследуемого материала и диагностикума помещают в микрокамеру, изолированную от электролита токопроводящим материалом и расположенную изолирующими проводниками перпендикулярно направленности электрического поля, а учет результатов ведут под микроскопом.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95102335A RU2102762C1 (ru) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | Способ индикации бактериальных антигенов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95102335A RU2102762C1 (ru) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | Способ индикации бактериальных антигенов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95102335A RU95102335A (ru) | 1997-02-10 |
RU2102762C1 true RU2102762C1 (ru) | 1998-01-20 |
Family
ID=20164908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95102335A RU2102762C1 (ru) | 1995-02-20 | 1995-02-20 | Способ индикации бактериальных антигенов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2102762C1 (ru) |
-
1995
- 1995-02-20 RU RU95102335A patent/RU2102762C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Рудник М.П., Груднева Л.Г. Экспресс-диагностика возбудителя чумы с использованием реакции агглютинации латекса. Проблемы природно-очаговых и зоонозных инфекций в Сибири и на Дальнем Востоке. Тезисы докладов к региональной научно-практической конференции 16 - 17 сентября 1993, г.Чита. - 1993, с. 134 и 135. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95102335A (ru) | 1997-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4847199A (en) | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution | |
EP0462644B1 (en) | Biologically active reagents prepared from carboxy-containing polymer, analytical element and methods of use | |
Brown et al. | Safranin O-stained antigen microagglutination test for detection of Brucella antibodies | |
US20080223732A1 (en) | Electrochemical detection method | |
EP0280559B1 (en) | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution | |
Brown et al. | Evaluation of a safranin-O-stained antigen microagglutination test for Francisella tularensis antibodies | |
EP0305337A1 (de) | Verfahren zum Nachweis von Antigenen und/oder Antikörpern sowie Testausrüstung zur Durchführung des Verfahrens | |
JP7170254B2 (ja) | 特定細胞捕捉方法 | |
Cowell et al. | Rapid, multiplexed detection of biomolecules using electrically distinct hydrogel beads | |
DE69711749T2 (de) | Verfahren zur Vorbereitung eines diagnostischen Reagenz für Hepatitis C Virusinfektion | |
US4329151A (en) | Stable diagnostic reagent and method for qualitative determinations of streptococci infections | |
RU2102762C1 (ru) | Способ индикации бактериальных антигенов | |
JPH05223820A (ja) | 抽出組成物として界面活性剤混合物を使用する歯周病に随伴する微生物検出用キットおよびその検出方法 | |
EP0372413A2 (de) | Mittel für immunchemische Tests, carboxylgruppenhaltige Polymere enthaltend | |
US4783419A (en) | Examining cells by electrophoresis | |
CN115825436A (zh) | 布鲁氏菌抗体凝胶检测试剂及布鲁氏菌抗体凝胶检测方法 | |
RU2035187C1 (ru) | Способ индикации бактериальных антигенов | |
JPH01148A (ja) | 着色ラテックス及び診断試薬用ラテックス | |
EP2309268A1 (en) | Method for immunoassay using latex particles | |
JP2001272374A (ja) | 免疫分析方法ならびに装置 | |
RU2101356C1 (ru) | Способ индикации бактериальных антигенов | |
RU2133958C1 (ru) | Способ индикации бактериальных антигенов | |
RU2102761C1 (ru) | Способ индикации бактериальных антигенов | |
US4403040A (en) | Diagnostic test for the detection of a specific tumor antigen with CoA-SPC | |
CN107677716A (zh) | 一种基于AuPdCu/N‑GQDs@PS的免疫传感器的制备方法及应用 |