RU2133958C1 - Способ индикации бактериальных антигенов - Google Patents

Способ индикации бактериальных антигенов Download PDF

Info

Publication number
RU2133958C1
RU2133958C1 RU97119151A RU97119151A RU2133958C1 RU 2133958 C1 RU2133958 C1 RU 2133958C1 RU 97119151 A RU97119151 A RU 97119151A RU 97119151 A RU97119151 A RU 97119151A RU 2133958 C1 RU2133958 C1 RU 2133958C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
reaction
indication
electrolyte
specific
diluting liquid
Prior art date
Application number
RU97119151A
Other languages
English (en)
Inventor
С.М. Кальной
А.И. Бондаренко
О.И. Таран
И.Ю. Борздова
Original Assignee
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт filed Critical Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority to RU97119151A priority Critical patent/RU2133958C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2133958C1 publication Critical patent/RU2133958C1/ru

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано в экспрессной индикации бактериальных средств в реакции агломерации в очаге бактериологического заражения. Для упрощения способа, обеспечения экспрессности и высокой точности бактериологических исследований в чрезвычайных ситуациях способ включает смешивание исследуемого материала с иммуносуспензионным диагностикумом в разводящей жидкости, в качестве которой используется электролит с последующим учетом результатов реакции по удельному сопротивлению реакционной смеси и при соотношении значений сопротивлений контрольной и исследуемой смесей, равном 0,5 - 0,7, индикацию оценивают специфической. 1 ил.

Description

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано в экспрессной индикации бактериальных средств в реакции агломерации при возникновении очага бактериологического заражения.
Известны способы постановки реакций пассивной гемагглютинации /РПГА/, непрямой суспензионной агломерации /РНСА/, включающие титрование исследуемого материала в разводящей жидкости, внесение иммуносуспензионных диагностикумов на основе физических носителей эритроцитов или латексных /полиакролеиновых/ частиц и наблюдение за формированием типичной картины окончания реакции /Инструкция по применению серологических методов диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы. Саратов, 1974, с. 38-39; Современные аспекты природной очаговости, эпидемиологии и профилактики особо опасных инфекционных болезней. Тезисы докладов научной конференции. Омск, октябрь, 1993, Ставрополь, 1993, с. 214-215/.
Недостатком этих способов является длительность реакций /1,5-4 ч/ и недостаточная точность учета результатов, что обусловлено визуальным определением наличия феноменов образования "пуговок" или "зонтиков".
Известен ряд способов индикации бактериальных антигенов, которые с целью обеспечения экспрессной диагностики предусматривают ускорение процесса образования агглютинатов.
Например, при центрифугировании реакционной смеси при 7-9g агглютинат образовывается уже через 20-30 мин /Заявка N 94043032/13, G 01 N 33/569 от 20.02.97, Бюл. N 5/.
Известен способ, предусматривающий приготовление реакционной смеси, в которой в качестве разводящей жидкости используют электролит, проведение реакции в электрическом поле при напряженности 1000-1200 В/м и плотности тока 0,2-0,4 А/мм2, при этом агглютинат образуется в течение 2-5 мин /Заявка N 95102335/13, C 01 N 33/569, от 10.02.97, Бюл. N 4/.
Однако при экспрессности образования агглютинатов учет результатов проводится визуально, что снижает точность диагностики. Кроме того, способы требуют использования специального оборудования, что затрудняет проведение экспрессных бактериологических исследований в очагах заражения.
В настоящее время в различных областях микробиологии для характеристики процессов взаимодействия антигенов микробных клеток и специфических антител, представляющих собой биомакромолекулы, широко используют различные физические единицы измерений /Ройт А. Основы иммунологии//М., Мир. - 1991. - С. 73/. В области молекулярной биофизики основу для понимания механизмов функционирования макромолекул составляют современные представления об электронно-конформационных взаимодействиях /ЭКВ/. Трансформация энергии и появление продуктов реакции в комплексах достигаются в результате внутримолекулярных взаимодействий отдельных частей макромолекулы. Макромолекулы можно рассматривать как своего рода молекулярные "машины" для преобразования одного вида энергии в другую /Рубин А.Б. Биофизика//М., Высшая школа, 1987. - С. 9/. Взаимодействие специфических антител и антигенов может быть определено как разница энергии компонентов и продуктов реакции /Ройт А. Основы иммунологии//М., Мир. - 1987. - С. 75; Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах // М., Мир. - 1984. - С. 75/.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ индикация антигенов, основанный на определении параметров энергии иммуносуспензионной реакции, проявляющихся при седиментации физических носителей в стандартных условиях /Заявка N 95105505/13, C 12 Q 1/04 от 20.02.97, Бюл. N 5/.
Способ осуществляется следующим образом. Исследуемый материал смешивают с иммуносуспензионным диагностикумом, например, на основе латексных частиц или эритроцитов в разводящей жидкости и через слой реакционной смеси высотой 1,0-2,0 мм пропускают лазерный луч денситометра, результаты реакции учитывают через 1-2 мин по увеличению пиков оптической плотности относительно базовой линии в 2-4 раза.
Способ обеспечивает экспрессность и повышает точность индикации.
Недостатком способа является необходимость использования специального оборудования, что затрудняет организацию экстренной индикации в чрезвычайных ситуациях.
Целью изобретения является упрощение способа индикации бактериальных антигенов, обеспечение экспрессности и высокой точности бактериологических исследований в чрезвычайных ситуациях.
Поставленная цель достигается тем, что исследуемый материал смешивают с иммуносуспензионным диагностикумом в разводящей жидкости, в качестве которой используют электролит, с последующим учетом результатов реакции по удельному сопротивлению реакционной смеси и при соотношении значений сопротивлений контрольной и исследуемой смесей, равному 0,5-0,7, индикацию оценивают специфической.
По отношению к прототипу заявляемый способ имеет следующие отличительные признаки.
Использование в качестве разводящей жидкости для приготовления реакционной взвеси электролита обеспечивает возможность учета специфических взаимодействий биомакромолекул, один из типов которых фиксирован на физических носителях, посредством измерения изменений наиболее чувствительного параметра - удельного сопротивления раствора.
Соотношение значений сопротивлений контрольной и исследуемой смесей, равное 0,5-0,7, является необходимым и достаточным условием для фиксации начала процесса специфического взаимодействия биомакромолекул, что коррелирует с результатами реакций, получаемыми вследствие седиментации физических носителей, при выполнении анализов по обычной методике.
Кроме того, за счет регистрации значимых изменений сопротивления реакционной взвеси в лунках с эквимолярными соотношениями ингредиентов, показывающих отрицательный результат при седиментации, чувствительность заявляемого способа при выявлении биомакромолекул и антигенов возрастает в 2-4 раза.
Изменение величины удельного сопротивления реакционной взвеси происходит при нормальных условиях без приложения поля электрического воздействия - напряженности и тока при конститутивных концентрациях диагностикумов /30 мкл 2,5% эритроцитарного диагностикума на 500 мкл электролита/ и стандартных условиях.
Возникновение процесса изменения удельного сопротивления реакционной взвеси с начала реакции агломерации и возможность его измерения в емкостях различных объемов /50-5000 мкл/ доступными средствами, например, тестером обеспечивают экспрессность, точность, повышение чувствительности и простоту индикации бактериальных антигенов и биоматериалов, содержащих определенные иммуноглобулины, в чрезвычайных ситуациях.
Возможность применения заявляемого способа в практических эпидемиологических исследованиях подтверждается примерами его конкретного выполнения с использованием полной совокупности заявляемых признаков изобретения.
Пример 1. Исследуемый материал - смыв с поверхности /в дальнейшем смыв/ заразили клетками чумного вакционного штамма Y. pestis EV в концентрации 0.2•107 мк/мл и обеззаразили формалином. Смыв с поверхности в объеме 0,5 мл вносили в начальную лунку полистироловой пластины, содержащей 0,5 мл разводящей жидкости, в качестве которой использовали электролит - трис-ацетатный буферный раствор с pH 8,0 /в дальнейшем электролит/ и титровали в шести - восьми лунках с удалением 0,5 мл из последней. В одну контрольную лунку вносили только 0,5 мл электролита. В лунки с раститрованным смывом и в контрольную вносили 0,05 мл 2,5% взвеси чумного эритроцитарного диагностикума /в дальнейшем диагностикум/ в растворе электролита, который путем легкого встряхивания пластины равномерно суспендировали в реакционной смеси.
Контрольную реакцию в электролите ставили в соответствии с вышеописанной методикой с использованием в качестве исследуемого материала гетерологичного штамма E.coli C600 в такой же концентрации.
Затем зафиксированными в определенном положении электродами тестера замеряли сопротивление электролита, сопротивление реакционной взвеси в контрольных и во всех 8 опытных лунках и определяли их соотношение.
В течение первых 5-10 секунд результаты соотношений сопротивлений контрольного и опытного ряда лунок с эквимолярной концентрацией составили 0,5-0,7.
Для подтверждения достоверности заявляемого способа ставили реакцию пассивной гемагглютинации с использованием тех же исследуемых материалов, но в качестве разводящего материала физраствора.
Отмечена корреляция результатов индикации бактериальных антигенов, полученных с помощью заявляемого способа с картинок седиментации агломератов в РПГА по обычной методике через 4 часа. При этом достоверные для специфической индикации значения соотношений сопротивлений отмечались и в двух лунках, содержащих антиген в количествах, недостаточных для образования "зонтика" с площадью в 2/3 днища лунки.
На чертеже графически показаны значения сопротивлений реакционных взвесей в лунках опытного /кривая 1/ и контрольного рядов /кривая 2/ при различных концентрациях антигенов, анализ соотношений которых показывает, что достоверная индикация специфичности реакции обеспечивается до 62-31 тыс. м.к. /мл.
Таким образом, сопоставление результатов решения поставленной задачи по заявляемому и известным способам показывает, что при его использовании чувствительность индикации повышается по сравнению с традиционным с 250-120 тыс. м. к. /мл до 62-31 тыс.м.к./мл, что соответствует аналогам с ускоренной агломерацией, наблюдаемой визуально и прототипу, время индикации сокращается с 4 ч по традиционной методике и 30-60 сек по прототипу до 5-10 сек, при этом способ значительно проще известного, что обеспечивает возможность его использования в экстремальных условиях.

Claims (1)

  1. Способ индикации бактериальных антигенов в реакции агглютинации, включающий смешивание исследуемого материала с иммуносуспензионным диагностикумом в разводящей жидкости с последующим учетом результатов реакции по физическому показателю реакционной смеси, отличающийся тем, что в качестве разводящей жидкости используют электролит, а физического показателя реакционной смеси - ее удельное сопротивление и при соотношении значений сопротивлений контрольной и исследуемой смесей, равном 0,5 - 0,7, индикацию оценивают специфической.
RU97119151A 1997-11-20 1997-11-20 Способ индикации бактериальных антигенов RU2133958C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97119151A RU2133958C1 (ru) 1997-11-20 1997-11-20 Способ индикации бактериальных антигенов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97119151A RU2133958C1 (ru) 1997-11-20 1997-11-20 Способ индикации бактериальных антигенов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2133958C1 true RU2133958C1 (ru) 1999-07-27

Family

ID=20199136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97119151A RU2133958C1 (ru) 1997-11-20 1997-11-20 Способ индикации бактериальных антигенов

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2133958C1 (ru)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3138442B2 (ja) ポリジアセチレン膜を用いる発色センサー
CN111351945B (zh) 维生素d结合蛋白作为标志物在精神疾病抑郁症诊断中的应用
US20210116448A1 (en) Method for measuring fibrinogen concentration in blood sample and nanoparticles for same
JPH0370787B2 (ru)
US3694161A (en) Method for measuring platelet aggregation
US4605686A (en) Latex for immunoserological tests and a method for the production of the same
WO2024120133A1 (zh) 疏水性干扰物及其制备方法和应用
Parry et al. Detection of rubella antibody using an optical immunosensor
JP2824794B2 (ja) 固相法により赤血球抗体を探索し、同定する方法
CN110824157B (zh) 一种用于免疫层析检测试剂盒的快速分离红细胞的方法
CN113156143A (zh) 血型不规则抗体特异性鉴定方法及其试剂
RU2133958C1 (ru) Способ индикации бактериальных антигенов
JPS6360862B2 (ru)
CN106771145A (zh) 一种检测d‑二聚体斑点金渗滤试剂盒及定量检测方法
RU2061953C1 (ru) Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов
CN1871519A (zh) 用于诊断阿尔茨海默氏病的快速检测方法
SU1367838A3 (ru) Способ определени антистрептолизин- @ -овых антител в крови (его варианты)
JP3786543B2 (ja) 免疫学的測定試薬
JPS6243501B2 (ru)
JP3618797B2 (ja) 免疫測定法
US4403040A (en) Diagnostic test for the detection of a specific tumor antigen with CoA-SPC
CN111077324B (zh) 一种补体介导下的abo血型鉴定方法
RU2063040C1 (ru) Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности
RU2157532C1 (ru) Способ определения перекисного окисления липидов крови
RU2091794C1 (ru) Имунно-кондуктометрическая система и сенсорный комплекс