RU2063040C1 - Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности - Google Patents
Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2063040C1 RU2063040C1 SU5042682A RU2063040C1 RU 2063040 C1 RU2063040 C1 RU 2063040C1 SU 5042682 A SU5042682 A SU 5042682A RU 2063040 C1 RU2063040 C1 RU 2063040C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- ldl
- peg
- light transmission
- analysis
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Использование: медицина, для регистрации присутствия модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови человека. Цель - выявление риск-фактора развития ряда заболеваний, в частности атеросклероза. Сущность изобретения: определяют содержание липопротеинов в цельной сыворотке крови в присутствии 4-6% раствора полиэтиленгликоля, для чего смесь инкубируют 3-6 мин, регистрируют светопропускание и при его значении менее 73,6 <$E+-> 1,05 определяют наличие окисленных липопротеинов в сыворотке. 5 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к способам, позволяющим регистрировать присутствие модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности (ЛНП) в сыворотке крови человека, например, с целью выявления риск-фактора развития атеросклероза.
Известно, что ЛНП, модифицированные в результате активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), т.е. окисленные ЛНП (ок-ЛНП), могут играть ключевую роль в развитии ряда патологических состояний, в частности, атеросклероза [1] а их присутствие в крови является важнейшим риск-фактором развития этого заболевания.
В настоящее время в крови человека обнаружено присутствие фракции ок-ЛНП (до 20% от общей фракции ЛНП). У больных атеросклерозом количество ок-ЛНП увеличено по сравнению со здоровыми донорами [2] Однако, используемый в цитируемой работе хроматографический метод выявления ок-ЛНП чрезвычайно трудоемок и сопряжен с большими временными затратами (несколько часов на анализ). Более того он требует предварительного выделения общей фракции ЛНП из сыворотки, и не может быть использован с целью быстрого анализа крови на присутствие в ней ок-ЛНП.
Наиболее близким к предлагаемому является способ, описанный в работе [3] (прототип). Суть его заключается в следующем: к 100 мкл ЛНП, предварительно выделенных из сыворотки методом ультрацентрифугирования и отдиализованных в течении 15-20 час. добавляют 1 мл реагента (представляющего собой смесь 6-и компонентов: 0,2 М фосфат калия, 0,12 М йодистого калия, 0,15 мм азида натрия, 2 г/л полиэтиленгликоля, 0,1 г/л алкилбензилдиметиламмонийхлорида, 10 мкМ молибдата аммония), 24 мкМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 20 мкМ бутилированного гидрокситолуола. Далее смесь инкубируют 30 мин в темноте и измеряют на спектрофотометре светопропускание при 365 нм (6 манипуляций не считая выделения ЛНП из сыворотки). Данный метод имеет ряд недостатков:
1. ЛНП необходимо изолировать из сыворотки методом центрифугирования. Эта операция трудоемка и занимает в общей сложности около 2 суток.
1. ЛНП необходимо изолировать из сыворотки методом центрифугирования. Эта операция трудоемка и занимает в общей сложности около 2 суток.
2. Изолированные ЛНП необходимо диализовать от избытка NaBr, добавленного в период выделения, в течение нескольких часов.
3. В период такого длительного выделения ЛНП могут претерпевать окислительную модификацию, что искажает суть получаемых результатов.
4. Определение продуктов окисления липидов осуществляется по реакции:
ROOH + 2I- + 2Н+---> I2 + RОН + Н2О
т. е. определяется только гидроперекиси липидов (ROOH). Однако в ходе окисления ЛНП образуются много других молекулярных (альдегиды, кетоны) и радикальных (ОН., липидные радикалы и т.п.) продуктов, участие которых в окислотельной модификации ЛНП остается неучтенным.
ROOH + 2I- + 2Н+---> I2 + RОН + Н2О
т. е. определяется только гидроперекиси липидов (ROOH). Однако в ходе окисления ЛНП образуются много других молекулярных (альдегиды, кетоны) и радикальных (ОН., липидные радикалы и т.п.) продуктов, участие которых в окислотельной модификации ЛНП остается неучтенным.
5. Указанная выше реакция не является специфической, поскольку I- может взаимодействовать с другими окислителями, присутствующими в системе (например, с ионами металлов переменной валентности).
6. Предлагаемый в прототипе коммерческий препарат является смесью 6-и реактивов и выпускается только фирмой Merck (ФРГ), катал. N 14106.
Целью данного изобретения является ускорение и упрощение способа, а также повышение его специфичности.
Указанная цель достигается тем, что в присутствии 4-6 раствора полиэтиленгликоля (ПЭГ) ЛНП агрегируют непосредственно в сыворотке (объемное соотношение сыворотка:ПЭГ от 1:10,8 до 1:5,4). Причем ок-ЛНП агрегируют эффективнее. Это дает возможность, анализируя светопропускание сыворотки выявлять присутствие ок-ЛНП в ней. Важно, что в этом случае нет необходимости осуществлять трудоемкие и длительные (>2 суток) процедуры по выделению фракции ЛНП из крови. Измерения ведутся непосредственно в сыворотке. Способ осуществляется следующим образом:
1. К 150 мкл: сыворотки крови человека (кровь берется натощак) добавляется 1,35 мл 5% ного раствора ПЭГ в 145 мМ NaСl, 10 мм трис-HCI, рН 7.4.
1. К 150 мкл: сыворотки крови человека (кровь берется натощак) добавляется 1,35 мл 5% ного раствора ПЭГ в 145 мМ NaСl, 10 мм трис-HCI, рН 7.4.
2. Смесь перемешивается и через 3-5 мин измеряется светопропускание при 600 нм. В кювете сравнения: 150 мкл сыворотки + 1,35 мл 145 мм NaCI, 10 мм трис-HCI, рН 7.4.
Для сыворотки, содержащей нативные ЛНП, светопропускание составляет 73,6+1,0 Если светопропускание имеет меньшие значения, то регистрируется присутствие ок-ЛНП в сыворотке.
Предлагаемый способ поясняется следующими примерами:
Пример 1. Данный пример поясняет оптимальную продолжительность предварительной инкубации смеси сыворотки с ПЭГ. В кювету спектрофотометра вносится 150 мкл сыворотки крови человека, добавляется 1,35 мл 5% раствора ПЭГ в 145 мМ NaCI, 10 мМ трис-HCI, рН 7,4. Смесь быстро перемешивается и регистрируется кинетика светопропускания при: 600 нм. В кювете сравнения все компоненты, за исключением ПЭГ. Кинетическая кривая представлена на фиг.1. Процесс агрегации завершается за 3 мин, и в дальнейшем значение светопропускакия не изменяется по крайней мере в течение 20 мин. т.е. этого времени инкубации (3-5 мин) вполне достаточно для измерения установившегося значения светопропускания.
Пример 1. Данный пример поясняет оптимальную продолжительность предварительной инкубации смеси сыворотки с ПЭГ. В кювету спектрофотометра вносится 150 мкл сыворотки крови человека, добавляется 1,35 мл 5% раствора ПЭГ в 145 мМ NaCI, 10 мМ трис-HCI, рН 7,4. Смесь быстро перемешивается и регистрируется кинетика светопропускания при: 600 нм. В кювете сравнения все компоненты, за исключением ПЭГ. Кинетическая кривая представлена на фиг.1. Процесс агрегации завершается за 3 мин, и в дальнейшем значение светопропускакия не изменяется по крайней мере в течение 20 мин. т.е. этого времени инкубации (3-5 мин) вполне достаточно для измерения установившегося значения светопропускания.
Пример 2. Данный пример поясняет оптимальное соотношение сыворотка: ПЭГ. В пробирку помещается 125 мкл сыворотки, добавляются раствор ПЭГ, содержащий 145 мм NaCI, 10 мм трис-HСl, рН 7,4. Конечный объем образца 1,5 мл, концентрация ПЭГ 6% соотношение сыворотка: ПЭГ равно 1:10,8. Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют 3-5 мин при комнатной температуре. Далее регистрируют светопропускание образцов при 600 нм. Светопропускание равно 49%
Пример 3. Данный пример осуществляется аналогично примеру 2 с той лишь разницей, что в пробирку берут 250 мкл сыворотки соотношение сыворотка: ПЭГ равно 1:5,4. Значение светопропускания равно 45%
На фиг. 2 приведена зависимость светопропускания образцов от количества сыворотки, добавленной в кювету. Видно, что при малых объемах сыворотки (0-125 мкл, т.е. вплоть до соотношения сыворотка:ПЭГ, равного 1:10,8) наблюдается закономерное снижение светопропускания по мере увеличения объема сыворотки (т. е. увеличения отношения сыворотка:ПЭГ), внесенной в кювету. Начиная с 125 мкл (т.е. с соотношения сыворотка: ПЭГ, равного 1:10,8) дальнейшее увеличение количества сыворотки в образце не приводит к снижению светопропускания т. е. в этом диапазоне объема сыворотки (125-250 мкл, что соответствует соотношению сыворотка: ПЭГ от 1:10,8 до 1:5,4) светопропускание практически не зависит от количества сыворотки в кювете. Т.о. работа с объемами сыворотки 125-250 мкл позволяет избежать ошибку в определении светопропускания, связанную с разницей в концентрации компонентов сыворотки для различных доноров. Однако, различия, связанные с качественными особенностями агрегирующих компонентов сыворотки в этом случае должны проявиться. Следующие примеры демонстрируют специфичность метода.
Пример 3. Данный пример осуществляется аналогично примеру 2 с той лишь разницей, что в пробирку берут 250 мкл сыворотки соотношение сыворотка: ПЭГ равно 1:5,4. Значение светопропускания равно 45%
На фиг. 2 приведена зависимость светопропускания образцов от количества сыворотки, добавленной в кювету. Видно, что при малых объемах сыворотки (0-125 мкл, т.е. вплоть до соотношения сыворотка:ПЭГ, равного 1:10,8) наблюдается закономерное снижение светопропускания по мере увеличения объема сыворотки (т. е. увеличения отношения сыворотка:ПЭГ), внесенной в кювету. Начиная с 125 мкл (т.е. с соотношения сыворотка: ПЭГ, равного 1:10,8) дальнейшее увеличение количества сыворотки в образце не приводит к снижению светопропускания т. е. в этом диапазоне объема сыворотки (125-250 мкл, что соответствует соотношению сыворотка: ПЭГ от 1:10,8 до 1:5,4) светопропускание практически не зависит от количества сыворотки в кювете. Т.о. работа с объемами сыворотки 125-250 мкл позволяет избежать ошибку в определении светопропускания, связанную с разницей в концентрации компонентов сыворотки для различных доноров. Однако, различия, связанные с качественными особенностями агрегирующих компонентов сыворотки в этом случае должны проявиться. Следующие примеры демонстрируют специфичность метода.
Пример 4. Предварительно методом препаративного ультрацентрифугирования из сыворотки крови изолируются липопротеины низкой плотности (ЛНП). В пробирку помещают 150 мкл ЛНП, добавляют 1,35 мл 4,44%-наго раствора ПЭГ, содержащего 145 мм NaCI, 10 мм трис-HCI, рН 7,4, так что конечная концентрация ПЭГ равна 4,0% Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание образцов при 600 нм. В кювете сравнения все компоненты, кроме ПЭГ. Полученное значение светопропускания составило 99%
Пример 5. Данный пример осуществляется аналогично примеру 4 с той лишь разницей, что в пробирку добавляют 1,35 мл 6,67%-ного раствора ПЭГ содержащего 145 мМ NaCl, 10 мм трис-HCI, рН 7,4, так что конечная концентрация ПЭГ равна 6,0% Полученное значение светопропускания составило 39%
На фиг.3 приведены результаты, полученные с использованием ЛНП, ЛП очень низкой плотности (ЛОНП), высокой плотности (ЛВП) и сыворотки. Видно, что изолированные ЛОНП практически не агрегируют в диапазоне концентраций 2-8% ПЭГ. ЛВП начинают агрегировать с концентрации ПЭГ > 6% ЛНП начинают агрегировать при меньших концентрациях ПЭГ (около 5%). Причем процесс при незначительном увеличении концентрации ПЭГ (с 5 до 7%) сильно выражен и характеризуется резким снижением светопропускания (со 100 до 2%). Т.о. в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6% в сыворотке из всех классов ЛП агрегируют только ЛНП.
Пример 5. Данный пример осуществляется аналогично примеру 4 с той лишь разницей, что в пробирку добавляют 1,35 мл 6,67%-ного раствора ПЭГ содержащего 145 мМ NaCl, 10 мм трис-HCI, рН 7,4, так что конечная концентрация ПЭГ равна 6,0% Полученное значение светопропускания составило 39%
На фиг.3 приведены результаты, полученные с использованием ЛНП, ЛП очень низкой плотности (ЛОНП), высокой плотности (ЛВП) и сыворотки. Видно, что изолированные ЛОНП практически не агрегируют в диапазоне концентраций 2-8% ПЭГ. ЛВП начинают агрегировать с концентрации ПЭГ > 6% ЛНП начинают агрегировать при меньших концентрациях ПЭГ (около 5%). Причем процесс при незначительном увеличении концентрации ПЭГ (с 5 до 7%) сильно выражен и характеризуется резким снижением светопропускания (со 100 до 2%). Т.о. в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6% в сыворотке из всех классов ЛП агрегируют только ЛНП.
Пример 6. В пробирку помещают 150 мкл ЛНП (предварительно выделенные из сыворотки методом препаративного ультрацентрифугирования), содержащих 0,68 мкмоль МДА на грамм белка, добавляют 1,35 мл 5%-ного раствора ПЭГ, содержащего 145 мМ NaCI, 10 мМ трис-HCI, рН 7,4. Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание при 600 нм против контрольной пробы, не содержащей ПЭГ. Концентрация ПЭГ в пробе 4,5% Светопропускание составило 88%
Результаты аналогичных опытов приведены на фиг.4. Видно, что чем больше окислены ЛНП (чем больше они содержат одного из продуктов ПОЛ МДА), тем лучше они агрегируют при одних и тех же концентрациях ПЭГ. Наибольшая разница по сравнению с неокисленными ЛНП наблюдается в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6%
Пример 7. В пробирку помещают 150 мкл ЛНП, содержащих 0,24 мкмоль МДА на грамм белка, и 300 мкл аутологичной сыворотки, из которой предварительно методом препаративного ультрацентрифугирования удалены ЛНП. Таким образом моделируется сыворотка, содержащая ЛНП, окисленные до определенной степени. В пробирку добавляется 1,35 мл 5%-ного раствора ПЭГ, содержащего 145 мм NaCl, 10 мм трис-HCI, рН 7,4. Конечная концентрация ПЭГ в пробе 4,5% Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание против контрольной пробы, не содержащей ПЭГ. Светопропускание равно 91%
Результаты аналогичных опытов приведены на фиг.5. Видно, что и в составе смоделированной сыворотки более окисленные ЛНП агрегируют эффективнее. Наибольшая разница достигается в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6%
Пример 8. 150 мкл сыворотки смешивают с 1,35 мкл 5%-ного раствора ПЭГ, содержащего 145 мм NaCl, 10 мМ трис-HCI, рН 7,4. Конечная концентрация ПЭГ 4,5% Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание при 600 нм против пробы, не содержащей ПЭГ. Значение светопропускания 74,5%
Анализ сывороток 100 доноров показал следующие результаты (см. табл.). Для 38 доноров, уровень МДА у которых в ЛНП составил 0,042 ±0,004 мкмоль/г белка (что соответствует норме), светопропускание имело следующее значение 73,6 ± 1,0% Для 26 доноров с повышенным уровня МДА в ЛП светопропускание составило 60,9 ± 2,1% Для 36 доноров с еще более высоким уровнем МДА в ЛП (0,102 ± 0,024) светопропускание имело значение 57,3 ± 2,2%
Таким образом, из приведенных выше примеров следует, что:
1) 3-5 мин инкубации смеси сыворотки с ПЭГ достаточно для измерения установившегося значения светопропускания;
2) использование сыворотки в объеме 125-250 мкл (соотношение сыворотка: ПЭГ от 1:10,8 до 1:5,4) позволяет измерять различие в светопропускании, связанное с изменением физико-химических свойств ЛП, а не с их количественным составом;
3) в присутствии 4-6% ПЭГ из сыворотки агрегируют ЛНП, причем более окисленные ЛНП агрегируют эффективнее;
4) обнаруженное значение светопропускания менее 73,6 ± 1,0% свидетельствует о наличии в сыворотке окисленных ЛНП.
Результаты аналогичных опытов приведены на фиг.4. Видно, что чем больше окислены ЛНП (чем больше они содержат одного из продуктов ПОЛ МДА), тем лучше они агрегируют при одних и тех же концентрациях ПЭГ. Наибольшая разница по сравнению с неокисленными ЛНП наблюдается в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6%
Пример 7. В пробирку помещают 150 мкл ЛНП, содержащих 0,24 мкмоль МДА на грамм белка, и 300 мкл аутологичной сыворотки, из которой предварительно методом препаративного ультрацентрифугирования удалены ЛНП. Таким образом моделируется сыворотка, содержащая ЛНП, окисленные до определенной степени. В пробирку добавляется 1,35 мл 5%-ного раствора ПЭГ, содержащего 145 мм NaCl, 10 мм трис-HCI, рН 7,4. Конечная концентрация ПЭГ в пробе 4,5% Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание против контрольной пробы, не содержащей ПЭГ. Светопропускание равно 91%
Результаты аналогичных опытов приведены на фиг.5. Видно, что и в составе смоделированной сыворотки более окисленные ЛНП агрегируют эффективнее. Наибольшая разница достигается в диапазоне концентраций ПЭГ 4-6%
Пример 8. 150 мкл сыворотки смешивают с 1,35 мкл 5%-ного раствора ПЭГ, содержащего 145 мм NaCl, 10 мМ трис-HCI, рН 7,4. Конечная концентрация ПЭГ 4,5% Содержимое пробирки перемешивают и через 3-5 мин регистрируют светопропускание при 600 нм против пробы, не содержащей ПЭГ. Значение светопропускания 74,5%
Анализ сывороток 100 доноров показал следующие результаты (см. табл.). Для 38 доноров, уровень МДА у которых в ЛНП составил 0,042 ±0,004 мкмоль/г белка (что соответствует норме), светопропускание имело следующее значение 73,6 ± 1,0% Для 26 доноров с повышенным уровня МДА в ЛП светопропускание составило 60,9 ± 2,1% Для 36 доноров с еще более высоким уровнем МДА в ЛП (0,102 ± 0,024) светопропускание имело значение 57,3 ± 2,2%
Таким образом, из приведенных выше примеров следует, что:
1) 3-5 мин инкубации смеси сыворотки с ПЭГ достаточно для измерения установившегося значения светопропускания;
2) использование сыворотки в объеме 125-250 мкл (соотношение сыворотка: ПЭГ от 1:10,8 до 1:5,4) позволяет измерять различие в светопропускании, связанное с изменением физико-химических свойств ЛП, а не с их количественным составом;
3) в присутствии 4-6% ПЭГ из сыворотки агрегируют ЛНП, причем более окисленные ЛНП агрегируют эффективнее;
4) обнаруженное значение светопропускания менее 73,6 ± 1,0% свидетельствует о наличии в сыворотке окисленных ЛНП.
Предлагаемый способ отличается простотой. Включает в себя всего 2 операции: смешивание сыворотки с раствором ПЭГ и регистрация светопропускания (в прототипе 6 операций). Для его осуществления необходимы широко распространенные реактивы: ПЭГ, NaСl и трис-HCL.
Способ позволяет регистрировать наличие окисленных ЛНП непосредственно в сыворотке без предварительного ее фракционирования. Способ быстр (не более 5 мин на 1 анализ) и уже сейчас может послужить основой для разработки методов диагностики, контроля за лечением и прогнозирования развития сердечно-сосудистых заболеваний.
Литература.
1. Steinbrecher U.P. Zhang Н. Lougheed М. Role of oxidatively modified LDL in atherosclerobis. Free Rad.Biol.Med. 1990, v.9, p.155-168.
2. Avogaro P. Ben Bittolo G. Cazzolato (3. Presence of a modified low density lipoprotein in humans. Arteriosclerosis, 1988, v.8, p.79-87.
3. EI-Saadani M. Esterbauer H. EI-Bayed M. Goher M. Nassar A.Y. Jutgens G. A spectophotometric assay for lipid peroxides in serum lipoproteins using a commercially available reagent. J.Lipid Res. 1989, v.30. p.627-630. ТТТ1 ЫЫЫ2 ЫЫЫ4
Claims (1)
- Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов в сыворотке крови человека путем обработки липопротеинов химическим реагентом с последующей регистрацией светопропускания полученной смеси, отличающийся тем, что обработку ведут в цельной сыворотке крови 4-6%-ным раствором полиэтиленгликоля, при объемном соотношении сыворотка:полиэтиленгликоль от 1:10,8 до 1: 5,4, полученный образец инкубируют 3-5 мин, определяют светопропускание и при его значении менее 73,6+1,0% регистрируют наличие окисленных липопротеинов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5042682 RU2063040C1 (ru) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5042682 RU2063040C1 (ru) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2063040C1 true RU2063040C1 (ru) | 1996-06-27 |
Family
ID=21604492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5042682 RU2063040C1 (ru) | 1992-05-20 | 1992-05-20 | Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2063040C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2549467C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2015-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИНФ им. П.К. Анохина" РАМН) | Способ определения атерогенности иммунных комплексов |
| CN117192134A (zh) * | 2023-09-14 | 2023-12-08 | 宁波美康盛德生物科技有限公司 | 一种氧化型低密度脂蛋白的检测试剂盒、检测方法 |
-
1992
- 1992-05-20 RU SU5042682 patent/RU2063040C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| L. Lipid Res. 1989, v. 30, p. 627-630. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2549467C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2015-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИНФ им. П.К. Анохина" РАМН) | Способ определения атерогенности иммунных комплексов |
| CN117192134A (zh) * | 2023-09-14 | 2023-12-08 | 宁波美康盛德生物科技有限公司 | 一种氧化型低密度脂蛋白的检测试剂盒、检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Steele et al. | Enzymatic determinations of cholesterol in high-density-lipoprotein fractions prepared by a precipitation technique. | |
| Glick et al. | Graphical comparisons of interferences in clinical chemistry instrumentation. | |
| Richard et al. | Malondialdehyde kit evaluated for determining plasma and lipoprotein fractions that react with thiobarbituric acid | |
| Martínez-Subiela et al. | Effects of hemolysis, lipemia, hyperbilirrubinemia, and anticoagulants in canine C-reactive protein, serum amyloid A, and ceruloplasmin assays | |
| Nauck et al. | Homogeneous assay for direct determination of high-density lipoprotein cholesterol evaluated | |
| Levinson et al. | Measuring hemoglobin in plasma by reaction with tetramethylbenzidine. | |
| Smith et al. | Time-insensitive fluorescent sensor for human serum albumin and its unusual red shift | |
| Zaider et al. | Clinical laboratory methods for diagnosis of the porphyrias | |
| US5989916A (en) | Direct cholesterol assay reagent | |
| US3894844A (en) | Simultaneous determination of triglycerides, cholesterol and phospholipids | |
| Hallbach et al. | Overestimation of albumin in heparinized plasma | |
| Vatassery et al. | A sensitive assay of transthyretin (prealbumin) in human cerebrospinal fluid in nanogram amounts by ELISA | |
| Solow et al. | A fluorometric ferric chloride method for determining cholesterol in cerebrospinal fluid and serum | |
| RU2063040C1 (ru) | Способ анализа модифицированных окислением липопротеинов низкой плотности | |
| JPH0630633B2 (ja) | アレルギーの検出法並びに該方法に好適な試薬及び装置、及びアレルギー用薬及び抗炎症剤の測定法 | |
| JP2002510397A (ja) | 標的およびインディケーターイオノフォアをその中に分布させて有する粒子からなるイオンディテクター | |
| Delanghe et al. | Quantitative turbidimetric assay for determining myoglobin evaluated | |
| Buzanovskii | Determination of calcium in blood | |
| Dasgupta et al. | Monitoring free digoxin instead of total digoxin in patients with congestive heart failure and high concentrations of digoxin-like immunoreactive substances | |
| US4211531A (en) | Colorimetric cholesterol assay | |
| Orfanos et al. | A simple fluorometric assay of protoporphyrin in erythrocytes (EPP) as a screening test for lead poisoning | |
| WO1998054578A1 (en) | Chemiluminescent hemoglobin assay | |
| Tomoda et al. | The determination of cyanide in water and biological tissues by methemoglobin | |
| CA2166725A1 (en) | Direct cholesterol assay | |
| CN106124768A (zh) | 一种一步均相saa检测试剂盒及其制备和使用方法 |