RU2062110C1 - Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного - Google Patents
Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного Download PDFInfo
- Publication number
- RU2062110C1 RU2062110C1 RU93039399A RU93039399A RU2062110C1 RU 2062110 C1 RU2062110 C1 RU 2062110C1 RU 93039399 A RU93039399 A RU 93039399A RU 93039399 A RU93039399 A RU 93039399A RU 2062110 C1 RU2062110 C1 RU 2062110C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rickettsia
- centrifuging
- diagnosticum
- corpuscular
- prowacek
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: производство диагностических препаратов. Задача: увеличение выхода целевого продукта - единых корпускулярных риккетсиозных антигенов. Сущность изобретения: диагностикум получают путем инактивации желточной культуры риккетсий Провачека, их гомогенизации, двух высокоскоростных и одного низкоскоростного центрифугирований с фильтрацией и стандартизацией. Новым в способе являются две дополнительные гомогенизации осадков: одна после первого высокоскоростного, другая после низкоскоростного центрифугирований, а также дополнительное низкоскоростное центрифугирование с последующей фильтрацией надосадочной жидкости и объединением фильтратов.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при производстве диагностических препаратов.
Известен производственный способ приготовления корпускулярных риккетсиозных антигенов для реакции агглютинации из желточных оболочек куриных эмбрионов, инфицированных риккетсиями Провачека методом эфирной обработки и дифференциального центрифугирования (П.Ф.Здродовский, Е.М.Голиневич. Учение о риккетсиях и риккетсиозах. М. Медицина, 1972 г. с.111).
Однако получаемые по этому способу антигены имеют узкую направленность и могут быть использованы только в реакции агглютинации, но не в методе флоуресцирующих антител (МФА) из-за наличия в них тканевых компонентов и спонтанных агглютинатов. Кроме того, из-за низкой активности данный диагностикум непригоден для использования в реакции нейтрализации антигена (PHAг) и в реакции связывания комплемента (РСК). Выход целевого продукта мал.
Известен способ-прототип получения в условиях полупроизводства из желточной культуры риккетсий Провачека единого диагностикума риккетсиозного для РСК, РНАг, МФА (ЭПР N 401-92. Диагностикум риккетсиозный Провачека корпускулярный сухой для РСК, РНАг, МФА). Способ заключается в гомогенизации предварительно инактивированной формалином желточной культуры риккетсий Провачека, осаждении из суспензии риккетсий центрифугированием при 10000 мин-1 в течение 30 минут, суспендировании осадка в 1 M растворе хлорида калия, центрифугирования при 1000 мин1- в течение 10 минут. Надосадочную жидкость отбирают в фильтрационную ячейку, фильтруют через мембрану Миллипор с размером пор 1,2 мкм в атмосфере азота под давлением 19,6 Па. Затем из фильтра риккетсии осаждают центрифугированием при 10000 мин-1 в течение 30 минут, осадок ресуспендируют в фосфатно-буферном растворе (ФБР) pH 7,2 ед. pH, стандартизируют и используют в РСК, РНАг и МФА.
Однако выход целевого продукта по способу-прототипу остается небольшим, несмотря на то, что он в 1,5 раза выше, чем в базовом способе.
Изобретение направлено на решение задачи: увеличение выхода целевого продукта единых корпускулярных риккетсиозных антигенов.
Решение данной задачи достигается путем дополнительных к способу-прототипу приемов: двух дополнительных гомогенизаций и дополнительного низкоскоростного центрифугирования с последующей фильтрацией надосадочной жидкости и объединением фильтратов.
Существенные признаки заявляемого способа: ограничительные инактивация желточной культуры риккетсий Провачека, их гомогенизация, два высокоскоростных и одно низкоскоростное центрифугирования, фильтрация и стандартизация; отличительные две дополнительные гомогенизации осадков: одна после первого высокоскоростного, а другая после низкоскоростного центрифугирований, а также дополнительное низкоскоростное центрифугирование с последующей фильтрацией надосадочной жидкости и объединением фильтратов.
Способ осуществляют следующим образом.
Желточные оболочки куриных эмбрионов, инфицированные риккетсиями Провачека, инактивируют формалином в течение 5-7 суток. Затем их гомогенизируют на размельчителе тканей РТ-2. Риккетсии и тканевые компоненты из гомогената осаждают высокоскоростным центрифугированием. Осадок ресуспендируют в ФБР и вновь гомогенизируют на РТ-2. Затем гомогенат центрифугируют при 1000 мин-1 в течение 10 мин два раза. Надосадочную жидкость отбирают в фильтрационную ячейку и фильтруют через мембрану, например, МФАС-ОС фирмы "Владипор". Фильтрацию проводят в атмосфере азота под давлением 19,6 Па. С целью увеличения выхода риккетсий осадки после низкоскоростного центрифугирования, содержащие риккетсии в тканевых частицах, ресуспендируют в ФБР, объединяют и гомогенизируют. Гомогенат фильтруют на ячейке. Фильтраты объединяют и риккетсии осаждают высокоскоростным центрифугированием. Осадок риккетсий суспендируют в ФБР, определяют концентрацию риккетсий и стандартизуют. Проводят контроль диагностикума в РСК, РНАг, МФА. При соответствии показателей регламентированным данным в диагностикум добавляют стабилизатор сахарозу, разливают в ампулы по 0,5 мл и лиофильно высушивают.
Пример. К 50 мл желточных оболочек риккетсий Провачека добавили 150 мл 0,4% -ного формалина на 1 М растворе хлорида калия, инактивировали в течение 5 суток. Затем желточные оболочки гомогенизировали на размельчителе тканей РТ-2 при 5000 мин-1 в течение 5 мин. Из гомогената риккетсии и тканевые частицы осаждали центрифугированием при 10000 мин-1 в течение 30 минут. Осадок ресуспендировали в 150 мл ФРБ и вновь гомогенизировали на РТ-2. Затем гомогенную взвесь центрифугировали при 1000 мин-1 в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отобрали в микрофильтрационную ячейку, а осадок ресуспендировали в ФБР и гомогенизировали на РТ-2. Гомогенат вновь центрифугировали при 1000 мин-1 в течение 10 минут, надосадочную жидкость отобрали в микрофильтрационную ячейку. Фильтрацию проводили через мембрану марки МФАС-ОС "Владипор". Фильтраты, содержащие риккетсии, объединили, центрифугировали при 10000 мин-1 в течение 30 мин. Для получения взвеси с концентрацией риккетсий в 2 млрд в 1 мл осадок ресуспендировали в 150 мл ФБР. Выход диагностикума 150 мл, т. е. в 2 раза выше, чем по способу-прототипу. После положительной оценки активности препарата в РСК, РНАг, МФА диагностикум стабилизировали добавлением сахарозы до конечной концентрации 10% разлили по 0,5 мл в ампулы и лиофильно высушили.
Выход целевого продукта диагностикума по предлагаемому способу в 2 раза выше, чем по способу-прототипу и в 3 раза выше, чем по общепринятому базовому способу.
Claims (1)
- Способ получения диагностикума риккетсиозного Провачека, корпускулярного путем инактивации желточной культуры риккетсий Провачека, их гомогенизации, двух высокоскоростных и одного низкоскоростного центрифугирований с фильтрацией и стандартизацией, отличающийся тем, что проводят две дополнительные гомогенизации осадков: одну после первого высокоскоростного и другую после низкоскоростного центрифугирования, а также дополнительное низкоскоростное центрифугирование с последующей фильтрацией надосадочной жидкости и объединением фильтратов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93039399A RU2062110C1 (ru) | 1993-08-03 | 1993-08-03 | Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93039399A RU2062110C1 (ru) | 1993-08-03 | 1993-08-03 | Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2062110C1 true RU2062110C1 (ru) | 1996-06-20 |
RU93039399A RU93039399A (ru) | 1996-10-10 |
Family
ID=20146047
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93039399A RU2062110C1 (ru) | 1993-08-03 | 1993-08-03 | Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2062110C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2557951C1 (ru) * | 2014-05-27 | 2015-07-27 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) | Способ получения мультиплексного риккетсиального диагностикума |
RU2728340C1 (ru) * | 2019-12-20 | 2020-07-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения набора флуоресцирующих риккетсиальных и коксиеллезного диагностикумов и их применение для серологической диагностики риккетсиозов и коксиеллеза, способ серологической диагностики |
-
1993
- 1993-08-03 RU RU93039399A patent/RU2062110C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЭПР 401-92 "Диагностикум риккетсионный Провачека корпускулярный для РСК, РНАг, 1992. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2557951C1 (ru) * | 2014-05-27 | 2015-07-27 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) | Способ получения мультиплексного риккетсиального диагностикума |
RU2728340C1 (ru) * | 2019-12-20 | 2020-07-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения набора флуоресцирующих риккетсиальных и коксиеллезного диагностикумов и их применение для серологической диагностики риккетсиозов и коксиеллеза, способ серологической диагностики |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Laidlaw | Virus diseases and viruses | |
RU2518341C2 (ru) | Иммунные модуляторы, препараты и композиции, содержащие иммунные модуляторы, тесты для оценки активности иммунных модуляторов и препаратов, и композиций, содержащих их, и способы | |
US3984539A (en) | Bovine immunoglobulin isolation process | |
SE448062B (sv) | Sett att framstella ett proteinkoncentrat innehallande immunologiska faktorer herrorande fran mjolk | |
ISEKI et al. | Transformation of blood group substance by bacterial enzyme | |
RU2062110C1 (ru) | Способ получения диагностикума риккетсиозного провачека, корпускулярного | |
Rosenthal et al. | Reversible agglutination of trypsin treated erythrocytes by normal human sera. | |
Elford et al. | Filtration of the virus of Borna disease through graded collodion membranes | |
EP0954325B1 (en) | Method for the specific immunoadsorption of selected pathogenic factors in the treatment of aids | |
WO2013043032A2 (es) | Extracto dializado de leucocitos de origen bazo de tiburón para la obtención de factor de transferencia potencializado, específicamente diseñado para su uso como inmunomodulador y método de extracción, comprobación y conteo del mismo | |
SANTOS et al. | Trypanosoma cruzi: binding of parasite antigens to mammalian cell membranes | |
WO2020058936A1 (pt) | Processo para purificar um anticorpo a partir da gema de ovo, seus produtos e usos | |
Miller et al. | Thymic dysplasia (“Swiss agammaglobulinemia”): II. Morphologic and functional observations | |
Sambamurthy | Pharmaceutical biotechnology | |
Bailey et al. | The tissue specificity of brain and medullated nerves as shown by passive anaphylaxis in guinea pigs | |
Conway | The production of erythrophagocytosis in peripheral blood: studies in auto-immune haemolytic disease and canine transfusion reactions with some experimental observations | |
US4558011A (en) | Method for preparation of pure hepatitis B surface antigen from human plasma | |
US5480642A (en) | Synthetic immunoreglators, and methods of use and preparation | |
JPS6260106B2 (ru) | ||
CN107098966B (zh) | 一种免疫球蛋白及其制备方法 | |
US3259547A (en) | Process for preparing interfering virus | |
SU1692580A1 (ru) | Способ получени тул ремийного антигена | |
SU1698782A1 (ru) | Способ изготовлени сибире звенного эритроцитарного диагностикума | |
RU2236867C1 (ru) | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку | |
SU1072863A1 (ru) | Способ получени эритроцитарного диагностикума дл вы влени антител к @ @ типа " @ |