RU2034554C1 - Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) - Google Patents
Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2034554C1 RU2034554C1 RU93020155/14A RU93020155A RU2034554C1 RU 2034554 C1 RU2034554 C1 RU 2034554C1 RU 93020155/14 A RU93020155/14 A RU 93020155/14A RU 93020155 A RU93020155 A RU 93020155A RU 2034554 C1 RU2034554 C1 RU 2034554C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- alcohol
- dna
- citrate
- filtered
- Prior art date
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для промышленного получения натриевой соли ДНК для фармакологии. Сущность изобретения состоит в том, что молоки осетровых рыб гомогенизируют, депротеинизацию ДНК осуществляют непосредственно в гомогенате, смесь обрабатывают раствором хлористого натрия при 55-60°С, затем обрабатывают кизельгуром, концентрируют на электродиализной установке либо в мембранном аппарате и озвучивают. ДНК из раствора осаждают спиртом и высушивают в сушильном шкафу при температуре 40°С. 1 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для промышленного получения натриевой соли ДНК для фармакологии.
Известен способ получения ДНК из молок осетровых рыб путем гомогенизации молок, промывания их физраствором, депротеинизации комплекса ДНК-белок протосубтилином; выделенным из Bacillus subdilis (авт.св. СССР N 780444, С 07 Н 21/04).
Известен также способ получения ДНК из молок осетровых рыб, заключающийся в том, что гомогенизацию молок проводят в стандартном цитратно-солевом буфере (ССЦ): 0,87% хлорида натрия, 0,54% цитрата натрия, центрифугируют, депротеинизацию проводят путем прогревания натрия (конечная концентрация 0,61% ). Затем к суспензии добавляют NaCl и цитрат натрия до конечных концентраций 14,6% и 24% соответственно, и прогревают в течение 1-5 ч при 60оС. Для отделения белков раствор после охлаждения пропускают через колонку с кизельгуром, получая на выходе колонки раствор ДНК (Хим.фарм. журнал, 1982, N 7, стр. 835-838).
Известен также способ получения ДНК из молок осетровых рыб, заключающийся в том, что молоки гомогенизируют в стандартном цитратно-солевом буфере клеточные ядра собирают центрифугированием, гомогенизируют и проводят депротеинизацию раствором додецилсульфата натрия при температуре около 55оС. Охлажденную смесь интенсивно перемешивают с кизельгуром (15,5%) и отфильтровывают. Целевую ДНК высаживают спиртом в соотношении 1:1. Высокополимерную ДНК растворяют и озвучивают на магнитострикторе, фильтруют и стерильно разливают по флаконам, получая субстанцию 0,6% в 1/10 растворе ССЦ (авт.св. СССР N 1410494, C 07 H 21/04, 1986).
Предлагаемый способ заключается в том, что молоки осетровых рыб гомогенизируют в стандартном растворе цитратно-солевого буфера (ССЦ), имеющего состав: хлорид натрия 0,87% натрия цитрат 0,54% Гомогенат прогревают при температуре 55-60оС в присутствии додецилсульфата натрия (конечная концентрация 0,6% ) в течение 1,5 ч. К смеси затем добавляют раствор хлористого натрия до конечной концентрации 14,6% и прогревают 1,5 ч при 55-60оС. Полученную смесь обрабатывают кизельгуром и фильтруют. Полученный раствор ДНК пропускают через камеры электродиализной и/или ультрафильтрационной установок.
Полученный раствор обрабатывают ультразвуком, фильтруют, при необходимости концентрируют, осаждают спиртом, осадок промывают 96% спиртом, высушивают в сушильном шкафу при температуре 40оС. Заявленный способ позволяет получить сухой порошок ДНК. При этом выделенная ДНК имеет следующую характеристику:
Молекуляр- (3,0-5,0)˙105 Дальтон
ная масса
Гипорхромный не менее 37%
эффект
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Молекуляр- (3,0-5,0)˙105 Дальтон
ная масса
Гипорхромный не менее 37%
эффект
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
П р и м е р 1. 1,2 кг свежезамороженных молок осетра измельчают и гомогенизируют в 2 л цитратно-солевого раствора, состоящего из 0,15 М хлористого натрия и 0,0021 М цитрата натрия, при комнатной температуре. Полученный гомогенат заливают в реактор, где находится 34 л цитратно-солевого раствора. Затем добавляют 4 л 6%-ного раствора додецилсульфата натрия в 45%-ном растворе ректификата этилового спирта (240 г в 4 л 45% спирта). Полученную реакционную массу нагревают в течение 1-1,5 ч до 60-62оС и выдерживают при этой температуре 1,5 ч при перемешивании якорной мешалкой. После чего, в раствор добавляют 40 л 5 м раствора хлористого натрия и перемешивают в течение 1,5 ч. Затем полученную реакционную массу охлаждают до 12-16оС, перемешивают с кизельгуром в соотношении 10: 1 высокооборотной мешалкой и фильтруют на нутч-фильтре.
Полученный фильтрат высокополимерной ДНК порциями в количестве 2,5 л подвергают электродиализному концентрированию в многокамерном аппарате-электродиализаторе, фильтр-прессного типа, состоящего из чередующихся мембран типа МА-40 и МК-40 с промежуточными рамками из паронита и сепараторами-турбулизаторами. Катодом служит пластина из нержавеющей стали марки Х18Н10Т с рабочей поверхностью 4 дм2, анодом платинированный титан с той же поверхностью. Электродиализатор состоял из 7 камер "обессоливания" и 8 камер "концентрирования", а также двух электродных камер. Рабочая поверхность каждой мембраны 4 дм2.
Реакционную массу высокополимерной ДНК насосом прокачивают через камеры "обессоливания" электродиализатора с линейной скоростью 2,3 см/с, одновременно через камеры "концентрирования" насосом прокачивают 0,5%-ный раствор хлористого натрия, а через электродные камеры водопроводную воду. При температуре 15-20оС через электродиализатор пропускают постоянный ток, сила которого соответствует плотности тока 1,5 А/дм2. В ходе электродиализа поддерживают рН раствора в интервале 6,5-7,5 добавлением разбавленной соляной кислоты (1:3). Поддержание температуры в процессе электродиализа осуществляют подачей захоложенной воды в змеевики промежуточных емкостей. В процессе электродиализного концентрирования получают 1,2 л высокополимерной ДНК. Продолжительность процесса составляет 4,0 часа, удельная производительность аппарата 1,0 л/м2 ˙ч, а энергоемкость процесса 216,0 Вт ˙ч/л. При этом выход по току составляет 70,0% Сконцентрированный раствор высокополимерной ДНК заливают в модуль магнитостриктора и подвергают ультразвуковой обработке в течение 45 мин. после чего фильтруют через миллипоровый фильтр и концентрируют в 3 раза на установке "БИОКОН". Концентрат высаживают спиртом в соотношении 1:2. Осадок собирают центрифугированием, промывают 96% спиртом и высушивают в сушильном шкафу при температуре 40оС. Получают сухой порошок натриевой соли ДНК.
П р и м е р 2. 1,2 кг свежезамороженных молок осетра измельчают и гомогенизируют в 2 л цитратно-солевого раствора, состоящего из 0,15 М натрия хлорида и 0,0021 М натрия цитрата при комнатной температуре. Полученный гомогенат заливают в реактор, где уже находится 34 л цитратно-солевого раствора. Затем добавляют 4 л 6%-ного раствора натрия додецилсульфата в 45% растворе ректификата этилового спирта (240 г в 4 л 45% спирта). Полученную массу нагревают за 1-1,5 ч до 60-65оС и перемешивают якорной мешалкой в течение 1,5 ч. Затем добавляют 40 л 5 М раствора NaCl и перемешивают в течение 1,5 ч. Затем полученную массу охлаждают до 12-16оС, перемешивают с кизельгуром в соотношении 10:1, на высокооборотной мешалке (миксер) и фильтруют на нутч-фильтре фильтрующий материал: бельтинг, фильтровальная бумага, бязь.
Полученный таким образом фильтрат высокополимерной ДНК порциями в количестве 2,0 л подвергают ультрафильтрационному концентрированию в мембранном аппарате плоскорамного типа. Рабочая поверхность мембран составляет 12 дм2. Концентрирование раствора ДНК осуществляют при температуре 20-24оС, линейной скорости раствора 2 см/с и давлении 3,0 кг/см2. Поддержание температуры в процессе ультрафильтрации осуществляют подачей захоложенной воды в змеевик промежуточной емкости. В процессе концентрирования получают 0,4 л раствора высоко- полимерной ДНК. Продолжительность процесса составляет 24 мин, а удельная производительность аппарата 40 л/м2˙ч. Сконцентрированный раствор высокополимерной ДНК заливают в модуль магнитостриктора и озвучивают в течение 45 мин, после чего фильтруют через миллипоровый фильтр. Фильтрат обрабатывают спиртом, а выпавший осадок собирают центрифугированием, промывают 96%-ным спиртом и высушивают в сушильном шкафу при температуре 40оС.
Сухой порошок ДНК растворяют и анализируют. Молекулярную массу ДНК определяли с помощью гельэлектрофореза в 1%-ной агарозе. Концентрацию ДНК определяли спектрофотометрически. Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить препарат ДНК, пригодный для целевой фармакологии и медицины.
Claims (2)
1. Способ выделения ДНК из молок осетровых рыб путем гомогенизации замороженных молок в цитратно-солевом растворе, разбавления гомогената цитратно-солевым раствором, перемешивания гомогената с раствором 6%-ного додецилсульфата, инкубации при 60oС в течение 1,5 ч с последующим добавлением к реакционной смеси 5М раствора хлористого натрия, инкубации и перемешивания смеси в течение 1,5 ч, охлаждения, сорбции белка на кизельгуре, фильтрации и обработки фильтрата, содержащего целевой продукт, 98%-ным этиловым спиртом, отличающийся тем, что реакционную смесь перемешивают с кизельгуром в соотношении 10 1, фильтруют, подвергают электродиализу при 15-20oС, плотности тока 1,5 А/дм2, затем обрабатывают ультразвуком, фильтруют через миллипоровый фильтр, фильтрат осаждают спиртом в соотношении 1:2, а осадок, содержащий целевой продукт, собирают центрифугированием и после обработки спиртом сушат при 40oС.
2. Способ выделения ДНК из молок осетровых рыб путем гомогенизации замороженных молок в цитратно-солевом растворе, разбавления гомогената цитратно-солевым раствором, перемешивания гомогената с раствором 6%-ного додецилсульфата в течение 1,5 ч с последующим добавлением к реакционной смеси 5 М раствора хлористого натрия, инкубации и перемешивания смеси в течение 1,5 ч, охлаждения, сорбции на кизельгуре, фильтрации и обработки фильтрата, содержащего целевой продукт, 98%-ным этиловым спиртом, отличающийся тем, что реакционную смесь перемешивают с кизельгуром в соотношении 10:1, фильтруют, а фильтрат подвергают ультрафильтрационному концентрированию в мембранном аппарате плоскорамного типа при 20-24oС, давлении 3 кг/см2, диализат обрабатывают ультразвуком, фильтруют через миллипоровый фильтр, фильтрат обрабатывают спиртом, а осадок, содержащий целевой продукт, собирают центрифугированием и после обработки спиртом сушат при 40oС.
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93020155/14A RU2034554C1 (ru) | 1993-05-24 | 1993-05-24 | Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) |
ES94913856T ES2171450T3 (es) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Adn de bajo peso molecular procedente de lecha de esturion, procedimiento para obtener el adn y preparacion farmaceutica basada en el mismo. |
EP94913856A EP0712936B1 (en) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Low-molecular dna from sturgeon milt, a method of obtaining the dna and a pharmaceutical preparation based on it |
AT94913856T ATE212848T1 (de) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Niedermolekulare dna aus störmilch, methode zur gewinnung der dna und ein pharmazeutisches präparat darauf basierend |
AU65849/94A AU6584994A (en) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Low-molecular dna from sturgeon milt, a method of obtaining the dna and a pharmaceutical preparation based on it |
PCT/RU1994/000084 WO1994028153A2 (fr) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Adn de faible masse moleculaire tiree de laitance d'esturgeon, procede d'obtention de l'adn et preparation pharmaceutique a base de celui-ci |
DE69429812T DE69429812T2 (de) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Niedermolekulare dna aus störmilch, methode zur gewinnung der dna und ein pharmazeutisches präparat darauf basierend |
SG1996002706A SG47539A1 (en) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | Low molecular deoxribonucleic acid dna of sturgeon milt method for dna extraction and pharmaceutic preparation on the base of dna sturgeon milt |
JP7500517A JP2772140B2 (ja) | 1993-05-24 | 1994-04-14 | チョウザメの魚精の低分子デオキシリボ核酸(dna)、そのdnaの抽出方法及びそのdnaに基づく医薬製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93020155/14A RU2034554C1 (ru) | 1993-05-24 | 1993-05-24 | Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2034554C1 true RU2034554C1 (ru) | 1995-05-10 |
RU93020155A RU93020155A (ru) | 1996-09-10 |
Family
ID=20140598
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93020155/14A RU2034554C1 (ru) | 1993-05-24 | 1993-05-24 | Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2034554C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2488634C1 (ru) * | 2012-01-20 | 2013-07-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН | Способ получения днк из молок лососевых рыб |
-
1993
- 1993-05-24 RU RU93020155/14A patent/RU2034554C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 487897, кл. C 07D 7/026, 1975. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2488634C1 (ru) * | 2012-01-20 | 2013-07-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН | Способ получения днк из молок лососевых рыб |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101619308B (zh) | 从鸡蛋清中提取溶菌酶的制备方法 | |
JP2622686B2 (ja) | k−カゼイングリコマクロペプチドの製造法 | |
DE3787913T2 (de) | Mittel und Verfahren zur Entfernung von Nukleinsäuren und/oder Endotoxin. | |
JPS60214738A (ja) | 生物活性を有する抽出液の調製方法 | |
RU2034554C1 (ru) | Способ выделения днк из молок осетровых рыб (его варианты) | |
JPH0265747A (ja) | ゼラチンの製法 | |
RU1809765C (ru) | Способ получени противовирусного средства | |
RU1838406C (ru) | Способ получени биологически активных компонентов | |
CN106518700A (zh) | 一种谷氨酸膜法生产工艺 | |
JP4205227B2 (ja) | ペプチド含有液の精製方法 | |
RU2305548C1 (ru) | Способ комплексной переработки плоских морских ежей | |
RU2005724C1 (ru) | Способ производства натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из животного сырья и установка для его осуществления | |
RU2041885C1 (ru) | Способ получения порошка натриевой соли дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок рыб | |
RU2488634C1 (ru) | Способ получения днк из молок лососевых рыб | |
JPH08256788A (ja) | ムチンの製造法 | |
RU2055482C1 (ru) | Способ получения белково-нуклеинового гидролизата | |
RU2108796C1 (ru) | Способ получения гибрида днк-рнк, обладающего иммунотропной противовирусной активностью | |
RU2204262C2 (ru) | Способ получения биологически активного белкового концентрата, обогащенного панкреатической рибонуклеазой а, ангиогенином и лизоцимом, из молочного ультрафильтрата | |
RU2017496C1 (ru) | Способ выделения натриевой соли днк | |
DE1966428B2 (de) | Verfahren zur herstellung von wasserunloeslicher penicillinacylase | |
RU1417244C (ru) | Способ получения вещества, восстанавливающего функцию предстательной железы | |
RU2295251C1 (ru) | Способ выделения белковых веществ из молочного сырья | |
RU2031656C1 (ru) | Способ получения туберкулина | |
CA1301683C (en) | Bacterial process for the production of biodispersants | |
RU2093576C1 (ru) | Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20060621 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070525 |