RU2018109375A - Варианты химозина с улучшенными свойствами - Google Patents

Варианты химозина с улучшенными свойствами Download PDF

Info

Publication number
RU2018109375A
RU2018109375A RU2018109375A RU2018109375A RU2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A RU 2018109375 A RU2018109375 A RU 2018109375A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
chymosin
polypeptide
variant
seq
polypeptide according
Prior art date
Application number
RU2018109375A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018109375A3 (ru
RU2764544C2 (ru
RU2764544C9 (ru
Inventor
Кристиан ЯЭКЕЛЬ
Мартин ЛУНД
Энико Фодор ХАНСЕН
Лоне РИИСБЕРГ
Ибен ЙЕППЕСЕН
ДЕН БРИНК Йоханнес Мортен ВАН
Original Assignee
Кхр. Хансен А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кхр. Хансен А/С filed Critical Кхр. Хансен А/С
Publication of RU2018109375A publication Critical patent/RU2018109375A/ru
Publication of RU2018109375A3 publication Critical patent/RU2018109375A3/ru
Publication of RU2764544C2 publication Critical patent/RU2764544C2/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2764544C9 publication Critical patent/RU2764544C9/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • C12N9/6483—Chymosin (3.4.23.4), i.e. rennin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
    • A23C19/0326—Rennet produced by fermentation, e.g. microbial rennet; Rennet produced by genetic engineering
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/04—Making cheese curd characterised by the use of specific enzymes of vegetable or animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
    • A23C19/02—Making cheese curd
    • A23C19/045—Coagulation of milk without rennet or rennet substitutes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/23—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • C12Y304/23004—Chymosin (3.4.23.4), i.e. rennin

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Claims (219)

1. Выделенный вариант полипептида химозина, отличающийся тем, что:
(а) этот выделенный вариант полипептида химозина имеет значение С/Р (удельная активность свертывания/протеолитическая активность), составляющее по меньшей мере 200% от значения С/Р выделенного верблюжьего химозина, характеризующегося зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2; и
(б) этот выделенный вариант полипептида химозина расщепляет αS1-казеин с частотой менее 80% от частоты расщепления αS1-казеина выделенным верблюжьим химозином, характеризующимся зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2, где расщепление αS1-казеина определяют посредством количественного определения пептидов αS1-казеина, полученных путем инкубации обезжиренного молока с вариантом химозина или с верблюжьим химозином, где количественное определение проводят с помощью RP-HPLC (обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография) в сочетании с масс-спектрометром ESI-Q-TOF (времяпролетная масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением).
2. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1, где родительский полипептид имеет по меньшей мере 80%, такую как, например, по меньшей мере 80%, 85%, 95%, 97%, 98%, 99% идентичность последовательности со зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2 (верблюжий химозин).
3. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 1 или 2, который содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: Y11I, Y11V, L12M, K19T, V51L, R61S, H76Q, E83S, I96L, L105E, D144Q, Q162S, S164G, M165E, L166V, L180I, V203A, L221I, S226T, T239S, R242E, G251D, G251W, L253I, V260T, I263L, R266V, S273Y, Q288E, G289S, E294Q, Y307F, V309I, R316L и/или V317L.
4. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-3, который содержит одну или более комбинаций следующих замен, и где каждая замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2:
Y21S+H76Q+Y307F+V317L,
R61S+L166V+T239S,
V32L+E294Q+R316L+V317L,
S226T+G244D+I263L+G289S,
V203A+V248I+G251W+L253I+Y268F,
D59N+L222I+G251D+E83S+Q162S,
D59N+L222I+G251D+Y21S+L215V+L105E,
D59N+L222I+G251D+H76Q+L105E+V260T,
D59N+L222I+G251D+V203A+R266V+F223A,
L12M+D59N+H76Q+S154A+M165E+V203A+L222I+G251D+V309I,
L12M+V51L+H76Q+M165E+G251D,
L12M+V51L+D59N+H76Q+L166V+L222I+G251D,
L12M+D59N+H76Q+D144Q+M165E+V203A+L222I,
L12M+K19T+D59N+H76Q+S154A+M165E+V198I+L222I+G251D,
L12M+V51L+D59N+F66Y+H76Q+M165E+V203A+L222I+G251W,
V51L+D59N+H76Q+M165E+L180I+L222I+G251D+E262T,
L12M+D59N+H76Q+M165E+G251D+Q288E+V309I+K321P,
D59N+H76Q+I96L+L130I+S164G+L222I+R242E+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+I96L+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y,
H76Q+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D+S273Y,
Y21S+H76Q+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+S132A+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+S132A+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+S164G+L222I+N249D+S273Y,
H76Q+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y+V309I,
H76Q+I96L+S164G+G251D+S273Y+V309I,
K19T+D59N+H76Q+S164G+R242E+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y+V309I
D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+S226T+N249D+G251D+S273Y,
H76Q+S164G+L166V+L222I+S226T+S273Y,
D59N+H76Q+L130I+S164G+L166V+L222I+G251D+S273Y+V309I,
D59N+H76Q+S164G+L222I+S226T+R242E,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D,
D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y+V309I,
D59N+H76Q+L130I+S164G+G251D+V309I,
D59N+H76Q+L130I+L166V+L222I+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+I96L+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y,
K19T+D59N+S164G+L166V+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+L130I+S132A+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+Y21S+H76Q+S164G+L222I+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+S164G+L222I+R242E+S273Y+V309I,
K19T+Y21S+D59N+H76Q+S132A+S164G+L222I+G251D+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+L130I+S164G+L222I+S226T+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+S164G+L166V+L222I+N249D+G251D+S273Y+V309I,
K19T+Y21S+D59N+H76Q+L130I+S164G+L222I+S273Y,
Y21S+D59N+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y+V309I,
K19T+D59N+H76Q+L166V+L222I+R242E+G251D+S273Y,
D59N+S132A+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+S273Y,
D59N+H76Q+I96L+L130I+S164G+L222I+N249D+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+S164G+L166V+N249D+G251D+S273Y,
H76Q+S132A+S164G+L222I+N249D+G251D,
D59N+H76Q+S132A+S164G+L166V+S273Y,
K19T+D59N+H76Q+S132A+L222I+G251D+S273Y+V309I,
H76Q+L130I+L222I+S226T+G251D+S273Y,
Y21S+D59N+H76Q+I96L+L222I+S273Y,
Y11I+K19T+D59N+E83S+I96L+S164G+L222I+N249D,
Y11I+K19T+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E,
Y11V+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+L253I+I263L,
Y11V+I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+L253I+I263L,
K19S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+I263L,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164N+L166I+L222I+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
Y11V+K19T+E83S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D,
Y11V+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+L253I+I263L,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+G251D+L253I,
K19T+D59N+I96V+S164G+L166V+L222I+R242E+I263L,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D+L253V,
I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+I263L,
K19S+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
H76Q+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+S164G+L222I+G251D+I263V,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+G251D+1263V,
K19T+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+L253I,
I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242D+G251D+L253I,
D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+L253I+I263L,
K19T+I96L+S164G+L166V+L222I+N249D+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242D+G251D+I263V,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249D+L253I,
K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+N249D,
K19T+E83S+I96L+S164G+L222I+R242E+N249D+G251D+L253I,
I96L+S164G+L222I+R242E+G251D+S273Y,
K19T+E83T+I96L+S164G+L222I+R242E+L253V,
K19T+I96L+S164G+R242E+L253I,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+N249E+G251D+L253V+I263L,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+N249E+G251D+1263V,
I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
K19T+I96L+S164N+L222I+R242E+I263L,
K19T+E83S+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249D+G251D+L253I,
K19T+D59N+E83T+S164G+L166V+L222I+R242D+G251D,
K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+G251D,
D59N+I96L+L166V+L222I+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96V+L222I+R242D+G251D,
K19T+I96V+S164G+L222I+N249D+G251D+L253I,
H76Q+N100Q+N291Q,
R67Q+L130I+M157L+D158S+R242E+N291Q,
V32L+R67Q+L130I+M157L+K231N+M256L,
R67Q+V136I+M157L+L222I+V248I,
Y11V+R67Q+L130I+M157L+L222I+R242E,
R67Q+I96L+N100Q+L130I+M157L+N292H.
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D+L253I,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+L253I,
Y11V+K19T+D59N+I96L+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222I+R242E+N249E,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+I96L+S164G+L166V+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E,
Y11I+K19T+I96L+S164G+L166V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+I96L+S164G+L222I+R242E,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D+L253I,
Y11I+K19T+D59N+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L1661+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11I+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+S164G+L166I+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+S164G+L166 V+L222I+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166V+R242E,
Y11I+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D,
Y11I+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11I+K19T+D59N+S164G+L166I+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+S164G+L222V+R242E+N249E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+I96L+L222V+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+S164G+L166I+L222I+R242E+G251D,
Y11V+K19T+D59N+L166V+L222I+R242E+N249E+G251D+L253I,
Y11V+K19T+I96L+L222V+R242E+N249E+G251D или
Y11I+K19T+L222V+R242E+N249E+G251D.
5. Выделенный вариант полипептида химозина, отличающийся тем, что
(а) этот выделенный вариант полипептида химозина имеет значение С/Р, составляющее по меньшей мере 200% от значения С/Р выделенного верблюжьего химозина, характеризующегося зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2; и
(б) этот выделенный вариант полипептида химозина расщепляет αS1-казеин с частотой более 115% от частоты расщепления αS1-казеина выделенным верблюжьим полипептидом химозином, характеризующимся зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2, где расщепление αS1-казеина определяют посредством количественного определения пептидов αS1-казеина, полученных путем инкубации обезжиренного молока с вариантом химозина или с верблюжьим химозином, где количественное определение проводят с помощью RP-HPLC в сочетании с масс-спектрометром ESI-Q-TOF.
6. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 5, где родительский полипептид имеет по меньшей мере 80%, такую как, например, по меньшей мере 80%, 85%, 95%), 97%, 98%, 99% идентичность последовательности со зрелым полипептидом SEQ ID NO: 2 (верблюжий химозин).
7. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 5 или 6, который содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: V32L, I45V, N50K, G70D, G70N, D98V, N100Q, V136I, M142I, H146R, S154A, V155F, M157L, D158S, V198I, I200V, F223V, K231N, G244D, V248I, R254S, M256L, V259I, Е262Т, D267Q, D279E, T284S, N291Q N292H, L295K и/или K321P.
8. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 5-7, который содержит одну или более комбинаций следующих замен, и где каждая замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2:
G70D+S74F+D158S+R254S+S277N,
L130I+M142I+I200V+V259I+E294Q,
Y21S+R61S+H146R,
R61S+G163E+M256L+S277N,
D59N+S271P+T284S,
V248I+S226T+E294Q,
S74F+G244D+S271P,
V221K+V248I+S255Y,
V183I+G251W+M256L,
R61Q+V136I+Y268F+T284S+Y307F,
N50K+D158S+V203A+E294Q,
D98V+G251D+M256L+V259I,
V183I+V248I+G244D+T284S,
N50K+R61S+Y127F+G244D+G251D,
I96L+F223V+G244D+R254S+M256L,
H146R+D158S+S273Y,
S74F+V259I+Y268F,
G70N+D98V+V136I,
I96L+M142I+R145Q+H146R,
V32L+G163E+T186S+Q188E+L295K,
R61Q+V136I+Y268F+T284S+Y307F,
S132A+Q188E+F223V,
I200V+G251D+G289S,
N50K+D158S+V203A+E294Q,
F223V+G251W+S273Y+D279E,
D59N+L222I+G251D+V32L+L12M+T284S,
D59N+L222I+G251D+V155F+Е262Т+V32L,
D59N+L222I+G251W+S154A+V203A,
D59N+L222I+G251D+V32L+K321P+V260T,
D59N+L222I+G251D+V198I+V203A+K321P,
D59N+L222I+G251D+S273Y+T284S+D267Q
V32L+N100Q+N291Q,
N292H+N100Q+N291Q,
V221K+N100Q+N291Q,
I297A+N100Q+N291Q,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+L222I+K231N,
R67Q+L130I+V248I+M256L+N292H,
V32L+R67Q+L130I+K231N+N292H,
L130I+M157L+V248I+M256L+N291Q,
V32L+R67Q+V136I+M157L+N291Q,
R67Q+L130I+K231N+V248I+N291Q,
V32L+R67Q+G70D+N100Q+M157L,
R67Q+N100Q+L130I+D158S+V248I,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+K231N+N291Q,
R67Q+N100Q+L130I+M157L+V248I+N291Q и/или
N100Q+L130I+S132A+M157L+K231.
9. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-4, включающий следующие стадии:
(а) осуществление модификации в одном или более положениях в последовательности ДНК, кодирующей зрелый полипептид SEQ ID NO: 2, где изменение включает замену, удаление или вставку по меньшей мере в одном аминокислотном положении;
(б) получение и выделение модифицированного полипептида со стадии (а).
10. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 9, где: (а) этот вариант содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: Y11I, Y11V, L12M, K19T, V51L, R61S, H76Q, E83S, I96L, L105E, D144Q, Q162S, S164G, M165E, L166V, L180I, V203A, L222I, S226T, R242E, G251W, L253I, V260T, I263L, R266V, S273Y, T239S, G251D, Q288E, G289S, E294Q, Y307F, V309I, R316L, V317L.
11. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 5-8, включающий следующие стадии:
(а) осуществление модификации в одном или более положениях в последовательности ДНК, кодирующей зрелый полипептид SEQ ID NO: 2, где изменение включает замену, удаление или вставку по меньшей мере в одном аминокислотном положении;
(б) получение и выделение модифицированного полипептида со стадии (а).
12. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 11, где вариант содержит одну или более следующих замен, где замена указана по отношению к аминокислотной последовательности зрелого полипептида SEQ ID NO: 2: V32L, I45V, N50K, G70D, G70N, D98V, N100Q, V136I, M142I, H146R, S154A, V155F, M157L, D158S, V198I,I200V, F223V, K231N, G244D, V248I, R254S, M256L, V259I, Е262Т, D267Q, D279E, T284S, N291Q N292H, L295K, K321P.
13. Способ получения пищевого или кормового продукта, включающий добавление эффективного количества выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 к пищевому(ым) или кормовому(ым) ингредиенту(ам) и осуществление дальнейших стадий производства с получением пищевого или кормового продукта.
14. Способ по п. 13, где пищевой или кормовой продукт представляет собой продукт на основе молока.
15. Пищевой или кормовой продукт, содержащий вариант полипептида химозина по любому из пп. 1-8.
16. Применение варианта полипептида химозина по любому из пп. 1-8 в способе получения сыра.
17. Применение варианта полипептида химозина по п. 16 в способе получения вытяжного сыра, чеддера, сыров континентального типа, мягкого сыра или белого рассольного сыра.
RU2018109375A 2015-08-31 2016-08-31 Варианты химозина с улучшенными свойствами RU2764544C9 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15183205 2015-08-31
EP15183205.2 2015-08-31
PCT/EP2016/070468 WO2017037092A1 (en) 2015-08-31 2016-08-31 Variants of chymosin with improved properties

Publications (4)

Publication Number Publication Date
RU2018109375A true RU2018109375A (ru) 2019-10-03
RU2018109375A3 RU2018109375A3 (ru) 2020-03-02
RU2764544C2 RU2764544C2 (ru) 2022-01-18
RU2764544C9 RU2764544C9 (ru) 2022-05-20

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016315269A1 (en) 2018-03-08
RU2018109375A3 (ru) 2020-03-02
AU2016315269B2 (en) 2021-09-23
KR102699499B1 (ko) 2024-08-30
WO2017037092A1 (en) 2017-03-09
AR105867A1 (es) 2017-11-15
ZA201801030B (en) 2018-12-19
BR112018003493A2 (pt) 2018-09-18
MX2018002366A (es) 2018-04-11
CN108135193A (zh) 2018-06-08
US10941389B2 (en) 2021-03-09
RU2764544C2 (ru) 2022-01-18
US20180251747A1 (en) 2018-09-06
JP2018525996A (ja) 2018-09-13
KR20180038569A (ko) 2018-04-16
CA2995755A1 (en) 2017-03-09
EP3344049A1 (en) 2018-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017144572A (ru) Варианты химозина с улучшенными свойствами
RU2016132974A (ru) Варианты химозина с улучшенными молокосвертывающими свойствами
AR105867A1 (es) VARIANTES DE QUIMOSINA CON PROPIEDADES MEJORADAS DE a-S1-CASEÍNA
RU2019108268A (ru) Варианты химозина с улучшенными молокосвертывающими свойствами
EA201791588A1 (ru) Свежий йогуртный сыр плотной консистенции с живой бактериальной флорой и изготовленные из него глазированные шоколадом йогуртные десерты, а также способ их изготовления
MX2021005254A (es) Produccion recombinante de una preparacion de peptido de colageno y uso de la misma.
MX2020005376A (es) Sustituto de crema que comprende proteina de leguminosas.
EA033333B1 (ru) Высокобелковый ароматизированный фруктами напиток, высокобелковый фруктовый и овощной препарат, а также связанные с ними способы и пищевые продукты
AR108526A1 (es) Variantes de quimosina con propiedades mejoradas de coagulación de la leche
RU2017129334A (ru) Смеси химозинов с улучшенными молокосвертывающими свойствами
PH12019500262A1 (en) Process for producing infant formula products and acidic dairy products from milk
MX2020000288A (es) Cromatografia.
MX2022005119A (es) Metodos de reduccion de olor.
RU2017125923A (ru) Концентрат белка молочной сыворотки, кисломолочный продукт, содержащий концентрат, и способы
MX2023001595A (es) Proteinas de fusion que comprenden proteinas de leche y composiciones de las mismas.
AR108527A1 (es) Variantes de quimosina con propiedades mejoradas de coagulación de leche
PH12019500263A1 (en) Process for producing infant formula products and dairy products
MY182519A (en) Method for producing lipid using acyl-acp thioesterase
WO2015185592A3 (en) Proline-specific endoprotease and use thereof
MX2022006987A (es) Metodos para la inactivacion viral mediante detergentes compatibles con el medioambiente.
MX2019006122A (es) Metodo de hornear.
GR20130100422A (el) Συστημα για την παραγωγη στραγγιστου γιαουρτιου πολλαπλης στραγγισης
EA201501120A3 (ru) Способ производства сыра типа швейцарского
MX2023013152A (es) Analogos lacteos que comprenden beta-lactoglobulina.
WO2019160416A8 (en) Native whey protein for reducing allergy