RU2017134578A - Эукариотические экспрессионные векторы, содержащие регуляторные элементы кластеров гена глобина - Google Patents
Эукариотические экспрессионные векторы, содержащие регуляторные элементы кластеров гена глобина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2017134578A RU2017134578A RU2017134578A RU2017134578A RU2017134578A RU 2017134578 A RU2017134578 A RU 2017134578A RU 2017134578 A RU2017134578 A RU 2017134578A RU 2017134578 A RU2017134578 A RU 2017134578A RU 2017134578 A RU2017134578 A RU 2017134578A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- paragraphs
- cluster
- human
- nucleic acid
- region
- Prior art date
Links
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title claims 16
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 title claims 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 title 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 20
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 claims 12
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims 12
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims 12
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 claims 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 11
- 108091005886 Hemoglobin subunit gamma Proteins 0.000 claims 9
- 102100038617 Hemoglobin subunit gamma-2 Human genes 0.000 claims 9
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 7
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 claims 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 6
- 101001009007 Homo sapiens Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 claims 4
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 claims 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 4
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 claims 3
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 claims 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 3
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims 2
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 claims 2
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 claims 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims 2
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 claims 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims 2
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 claims 2
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 2
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 claims 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 claims 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 claims 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 claims 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 claims 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 claims 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 claims 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 claims 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/473—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used alpha-Glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Claims (64)
1. Способ рекомбинантного продуцирования представляющего интерес полипептида, где указанный способ включает стадии
(a) получения клетки-хозяина, содержащей экспрессионный кластер, включающий, функционально присоединенные друг к другу:
(i) регуляторную область локуса, содержащую по меньшей мере функциональную часть регуляторной области локуса кластера человеческого гена β-глобина или кластера человеческого гена α-глобина;
(ii) промоторную область, содержащую по меньшей мере функциональную часть промотора человеческого гена
A
γ-глобина или его гомолога; и
(iii) кодирующую область, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую представляющий интерес полипептид;
(b) культивирования клетки-хозяина в условиях, при которых клетка-хозяин экспрессирует представляющий интерес полипептид; и
(c) выделения представляющего интерес полипептида.
2. Способ по п. 1, где кодирующая область экспрессионного кластера также включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальный пептид для секреторной экспрессии, и где в стадии (b), представляющий интерес полипептид секретируется клеткой-хозяином.
3. Способ по п. 1 или 2, также включающий, после проведения стадии (c), стадию
(d) приготовления представляющего интерес полипептида в виде фармацевтической композиции.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где регуляторная область локуса экспрессионного кластера включает коровый элемент сайта гиперчувствительности к ДНКазе I 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 906-939 SEQ ID NO: 1.
5. Способ по п. 4, где регуляторная область локуса экспрессионного кластера включает элемент M1-кор-M2 сайта гиперчувствительности к ДНКазе I 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 742-995 SEQ ID NO: 1.
6. Способ по п. 5, где регуляторная область локуса экспрессионного кластера включает по меньшей мере часть сайта гиперчувствительности 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 741-1109 SEQ ID NO: 1.
7. Способ по любому из пп. 4-6, где регуляторная область локуса экспрессионного кластера также включает сайт гиперчувствительности 3 (HS3) или его часть в кластере человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 310-735 SEQ ID NO: 1, и/или сайт гиперчувствительности 4 (HS4) или его часть в кластере человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 13-294 SEQ ID NO: 1.
8. Способ по любому из пп. 1-3, где регуляторная область локуса экспрессионного кластера включает сайт гиперчувствительности 40 (HS40) или его часть в кластере человеческого гена α-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 24-278 SEQ ID NO: 5.
9. Способ по любому из пп. 1-8, где промоторная область экспрессионного кластера содержит сайт инициации транскрипции и, необязательно, по меньшей мере часть 5'-нетранслируемой области человеческого гена
A
γ-глобина.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где промоторная область экспрессионного кластера содержит нуклеотиды (-384)-(+36) сайта инициации транскрипции, человеческого гена
A
γ-глобина и/или последовательности нуклеиновой кислоты в положениях 1123-1542 SEQ ID NO: 1.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где экспрессионный кластер также включает область терминации транскрипции.
12. Способ по п. 11, где область терминации транскрипции включает сигнал полиаденилирования, предпочтительно, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 1725-1730 SEQ ID NO: 1 и сайт терминации транскрипции.
13. Способ по любому из пп. 1-12, где экспрессионный кластер также включает энхансерную область, содержащую по меньшей мере функциональную часть 3'-энхансера человеческого гена
A
γ-глобина, функционально присоединенную к другим элементам экспрессионного кластера.
14. Способ по п. 13, где энхансерная область экспрессионного кластера содержит последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 2136-2881 SEQ ID NO: 1.
15. Способ по любому из пп. 1-14, где представляющим интерес полипептидом является гликопротеин или его часть.
16. Способ по любому из пп. 1-15, где представляющий интерес полипептид выбран из группы, состоящей из антител или их производных или частей, включающих тяжелую цепь или легкую цепь антитела; гонадотропинов, таких как FSH (фолликуло-стимулирующий гормон), CG (хорионический гонадотропин), LH (лютеинизирующий гормон) и TSH (тиреотропный гормон); эритропоэтина; и факторов свертывания крови, таких как фактор VII, VIII, IX или фактор фон Виллебранда.
17. Способ по любому из пп. 1-16, где экспрессионный кластер стабильно трансфецирован в клетку-хозяина.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где клетка-хозяин была трансфецирована вектором, содержащим экспрессионный кластер и селективный маркерный ген, а предпочтительно, амплифицируемый селективный маркерный ген, и где условия культивирования в стадии (b) включают присутствие соответствующего селективного агента в клеточной культуральной среде.
19. Способ по п. 18, где селективный маркерный ген кодирует дигидрофолат-редуктазу (DHFR), предпочтительно, антифолат-резистентный вариант DHFR, а соответствующим селективным агентом является антифолат, предпочтительно, метотрексат.
20. Способ по любому из пп. 1-19, где клеткой-хозяином является эукариотическая клетка, предпочтительно, клетка млекопитающего, а более предпочтительно, человеческая клетка или происходящая от нее клетка.
21. Способ по любому из пп. 1-20, где клеткой-хозяином является клетка крови, предпочтительно, лейкоцит, предшественник клетки крови или клетка лейкоза или происходящая от них клетка.
22. Экспрессионный кластер, содержащий функционально присоединенные друг к другу:
(i) регуляторную область локуса, содержащую по меньшей мере функциональную часть регуляторной области локуса кластера человеческого гена β-глобина или кластера человеческого гена α-глобина;
(ii) промоторную область, содержащую по меньшей мере функциональную часть промотора человеческого гена
A
γ-глобина;
(iii) необязательно, кодирующую область;
(iv) область терминации транскрипции; и
(v) энхансерную область, содержащую по меньшей мере функциональную часть 3'-энхансера человеческого гена
A
γ-глобина;
где экспрессионный кластер не содержит последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полноразмерный человеческий
A
γ-глобин.
23. Экспрессионный кластер по п. 22, где регуляторная область локуса включает коровый элемент сайта гиперчувствительности к ДНКазе I 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 906-939 SEQ ID NO: 1.
24. Экспрессионный кластер по п. 23, где регуляторная область локуса включает элемент M1-кор-M2 сайта гиперчувствительности к ДНКазе I 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 742-995 SEQ ID NO: 1.
25. Экспрессионный кластер по п. 24, где регуляторная область локуса включает по меньшей мере часть сайта гиперчувствительности 2 (HS2) кластера человеческого гена β-глобина, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 741-1109 SEQ ID NO: 1.
26. Экспрессионный кластер по любому из пп. 23-25, где регуляторная область локуса также включает сайт гиперчувствительности 3 (HS3) или его часть в кластере человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 310-735 SEQ ID NO: 1, и/или сайт гиперчувствительности 4 (HS4) или его часть в кластере человеческого гена β-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 13-294 SEQ ID NO: 1.
27. Экспрессионный кластер по п. 22, где регуляторная область локуса включает сайт гиперчувствительности 40 (HS40) или его часть в кластере человеческого гена α-глобина, предпочтительно, имеющие последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 24-278 SEQ ID NO: 5.
28. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-27, где промоторная область содержит сайт инициации транскрипции и, необязательно, по меньшей мере часть 5'-нетранслируемой области человеческого гена
A
γ-глобина.
29. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-28, где промоторная область содержит нуклеотиды (-384)-(+36) сайта инициации транскрипции, человеческого гена
A
γ-глобина и/или последовательности нуклеиновой кислоты в положениях 1123-1542 SEQ ID NO: 1.
30. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-29, где область терминации транскрипции включает сигнал полиаденилирования, предпочтительно, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 1725-1730 SEQ ID NO: 1 и сайт терминации транскрипции.
31. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-30, где энхансерная область включает последовательность нуклеиновой кислоты в положениях 2136-2881 SEQ ID NO: 1.
32. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-31, также включающий сайт клонирования, который содержит по меньшей мере одну последовательность распознавания рестриктирующего фермента.
33. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-32, где кодирующая область включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую представляющий интерес полипептид.
34. Экспрессионный кластер по п. 33, где представляющим интерес полипептидом является гликопротеин или его часть.
35. Экспрессионный кластер по любому из пп. 33-34, где представляющим интерес полипептидом является антитело, тяжелая цепь или легкая цепь антитела или его часть.
36. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-35, где кодирующая область включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальный пептид для секреторной экспрессии.
37. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-36, содержащий в направлении транскрипции функционально присоединенные друг к другу
(i) регуляторную область локуса,
(ii) промоторную область,
(iii) кодирующую область и/или сайт клонирования,
(iv) область терминации транскрипции,
(v) энхансерную область.
38. Экспрессионный кластер по любому из пп. 22-37, который адаптирован для экспрессии в эукариотических клетках, предпочтительно, в клетках млекопитающх, а более предпочтительно, в человеческих клетках.
39. Вектор, содержащий экспрессионный кластер по любому из пп. 22-38.
40. Вектор по п. 39, также содержащий один или более селективных маркерных генов.
41. Вектор по п. 39 или 40, адаптированный для стабильной трансфекции эукариотической клетки.
42. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионный кластер по любому из п.п. 22-38 или вектор по любому из пп. 39-41.
43. Клетка-хозяин по п. 42, представляющая собой эукариотическую клетку, предпочтительно, клетку млекопитающего, а более предпочтительно, человеческую клетку или происходящую от них клетку.
44. Клетка-хозяин по п. 42 или 43, представляющая собой клетку крови, предпочтительно, лейкоцит, предшественник клетки крови или клетку лейкоза или происходящую от них клетку.
45. Применение экспрессионного кластера по любому из пп. 22-38 или клетки-хозяина по любому из пп. 42-44 в способе по любому из пп. 1-21.
46. Способ по любому из пп. 1-21, где экспрессионным кластером является экспрессионный кластер по любому из пп. 22-38 и/или клеткой-хозяином является клетка-хозяин по любому из пп. 42-44.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15161922.8 | 2015-03-31 | ||
| EP15161922 | 2015-03-31 | ||
| LU92686 | 2015-03-31 | ||
| LU92686 | 2015-03-31 | ||
| PCT/EP2016/056926 WO2016156404A1 (en) | 2015-03-31 | 2016-03-30 | Eukaryotic expression vectors comprising regulatory elements of the globin gene clusters |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017134578A true RU2017134578A (ru) | 2019-04-04 |
| RU2017134578A3 RU2017134578A3 (ru) | 2019-08-29 |
| RU2716974C2 RU2716974C2 (ru) | 2020-03-17 |
Family
ID=55699621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017134578A RU2716974C2 (ru) | 2015-03-31 | 2016-03-30 | Эукариотические экспрессионные векторы, содержащие регуляторные элементы кластеров гена глобина |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10184135B2 (ru) |
| EP (1) | EP3277807B1 (ru) |
| JP (1) | JP6861637B2 (ru) |
| KR (1) | KR102598130B1 (ru) |
| CN (1) | CN108012545B (ru) |
| AU (1) | AU2016239324B2 (ru) |
| CA (1) | CA2978659C (ru) |
| DK (1) | DK3277807T3 (ru) |
| ES (1) | ES2764457T3 (ru) |
| LT (1) | LT3277807T (ru) |
| RU (1) | RU2716974C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016156404A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023239267A1 (en) * | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Joint Stock Company "Biocad" | Nucleic acid having promoter activity and use thereof |
| RU2818112C2 (ru) * | 2022-06-10 | 2024-04-24 | Акционерное общество "БИОКАД" | Нуклеиновая кислота, имеющая промоторную активность, и ее применение |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201839136A (zh) | 2017-02-06 | 2018-11-01 | 瑞士商諾華公司 | 治療血色素異常症之組合物及方法 |
| CA3057862A1 (en) * | 2017-03-29 | 2018-10-04 | Bluebird Bio, Inc. | Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies |
| WO2019113321A1 (en) * | 2017-12-06 | 2019-06-13 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Globin gene therapy for treating hemoglobinopathies |
| CN115125270A (zh) * | 2021-03-22 | 2022-09-30 | 华东师范大学 | 一种α-珠蛋白过表达载体及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8718779D0 (en) * | 1987-08-07 | 1987-09-16 | Grosveld F G | Dna sequence & expression vector |
| AU6505690A (en) * | 1989-09-26 | 1991-04-28 | Richard R Behringer | Erythroid-specific gene expression system |
| US20040133934A1 (en) | 1996-03-06 | 2004-07-08 | Townes Tim M. | Transgenic animals that produce human hemoglobin |
| CA2246005A1 (en) | 1998-10-01 | 2000-04-01 | Hsc Research And Development Limited Partnership | Hybrid genes for gene therapy in erythroid cells |
| US7541179B2 (en) * | 2001-06-29 | 2009-06-02 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Vector encoding human globin gene and use thereof in treatment of hemoglobinopathies |
| WO2008028686A2 (en) | 2006-09-10 | 2008-03-13 | Glycotope Gmbh | Use of human cells of myeloid leukaemia origin for expression of antibodies |
| US20110294873A1 (en) * | 2008-10-23 | 2011-12-01 | Université de Lausanne | Gene Transfer Vectors Comprising At Least One Isolated DNA Molecule Having Insulator Or Boundary Properties And Methods To Identify The Same |
-
2016
- 2016-03-30 CN CN201680016315.2A patent/CN108012545B/zh active Active
- 2016-03-30 AU AU2016239324A patent/AU2016239324B2/en active Active
- 2016-03-30 CA CA2978659A patent/CA2978659C/en active Active
- 2016-03-30 RU RU2017134578A patent/RU2716974C2/ru active
- 2016-03-30 LT LTEP16715272.7T patent/LT3277807T/lt unknown
- 2016-03-30 WO PCT/EP2016/056926 patent/WO2016156404A1/en active Application Filing
- 2016-03-30 KR KR1020177029139A patent/KR102598130B1/ko active IP Right Grant
- 2016-03-30 ES ES16715272T patent/ES2764457T3/es active Active
- 2016-03-30 EP EP16715272.7A patent/EP3277807B1/en active Active
- 2016-03-30 JP JP2017548439A patent/JP6861637B2/ja active Active
- 2016-03-30 DK DK16715272.7T patent/DK3277807T3/da active
- 2016-03-30 US US15/559,272 patent/US10184135B2/en active Active
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023239267A1 (en) * | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Joint Stock Company "Biocad" | Nucleic acid having promoter activity and use thereof |
| RU2818112C2 (ru) * | 2022-06-10 | 2024-04-24 | Акционерное общество "БИОКАД" | Нуклеиновая кислота, имеющая промоторную активность, и ее применение |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2764457T3 (es) | 2020-06-03 |
| AU2016239324A1 (en) | 2017-09-21 |
| CN108012545A (zh) | 2018-05-08 |
| KR20170132784A (ko) | 2017-12-04 |
| DK3277807T3 (da) | 2020-01-20 |
| RU2017134578A3 (ru) | 2019-08-29 |
| JP2018510633A (ja) | 2018-04-19 |
| AU2016239324B2 (en) | 2022-04-21 |
| CA2978659A1 (en) | 2016-10-06 |
| CN108012545B (zh) | 2022-08-30 |
| LT3277807T (lt) | 2020-01-10 |
| RU2716974C2 (ru) | 2020-03-17 |
| KR102598130B1 (ko) | 2023-11-02 |
| CA2978659C (en) | 2023-05-16 |
| WO2016156404A1 (en) | 2016-10-06 |
| EP3277807A1 (en) | 2018-02-07 |
| JP6861637B2 (ja) | 2021-04-21 |
| BR112017018538A2 (pt) | 2018-04-17 |
| US20180094279A1 (en) | 2018-04-05 |
| US10184135B2 (en) | 2019-01-22 |
| EP3277807B1 (en) | 2019-12-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2017134578A (ru) | Эукариотические экспрессионные векторы, содержащие регуляторные элементы кластеров гена глобина | |
| CN106191116B (zh) | 基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用 | |
| US20230049767A1 (en) | Expression vector production and high-throughput cell screening | |
| CN102648288B (zh) | 基于抑制的对细胞克隆的高通量筛选方法 | |
| JPH0832244B2 (ja) | ヘテロポリマ−系蛋白質 | |
| JP2021501611A5 (ru) | ||
| GB2582100A (en) | CAS12C Compositions and methods of use | |
| CN108368505A (zh) | 改善的flare(流式细胞术减弱报道蛋白表达)技术用于快速批量分选 | |
| RU2004107694A (ru) | Способ интеграции генов в специфических сайтах в клетках млекопитающих посредством гомологичной рекомбинации и векторы для осуществления этого способа | |
| CN106636210B (zh) | 转录因子组合诱导成纤维细胞转分化为类睾丸间质细胞的方法 | |
| CN105331635A (zh) | 一种诱导型慢病毒表达体系及其构建方法和应用 | |
| JP2020509763A5 (ru) | ||
| EP0263908A1 (en) | Method for the production of proteins by means of inducible expression systems in genetically modified eukaryotic host-cells multiplicated in-vivo | |
| CN107012168A (zh) | 人工染色体载体 | |
| CN104870646A (zh) | 一种新颖的细胞系筛选方法 | |
| US20220243193A1 (en) | Cell lines for high level production of protein | |
| CN109504708A (zh) | 一种筛选标记自我删除的基因打靶载体及方法 | |
| KR20140046599A (ko) | 모기 비텔로제닌 프로모터 및 전사활성 단백질을 이용한 곤충세포 외래단백질 발현 시스템 | |
| JP2022033728A (ja) | 改変細胞、調製方法、及び構築物 | |
| CN1150331C (zh) | 一组生产用哺乳类细胞人源抗体高效表达载体 | |
| KR102576635B1 (ko) | Lamp2c 유전자가 녹아웃 된 형질전환 인간 세포주 및 이를 이용한 목적 유전자의 생산 방법 | |
| US11802297B2 (en) | Method for cell line development | |
| KR102648479B1 (ko) | 단백질 기반 의약들 (protein-based pharmaceuticals) 의 고 수준 생산을 위한 세포주들 (cell lines) | |
| KR101628701B1 (ko) | 소 넉-인용 벡터 및 그의 용도 | |
| KR20110090604A (ko) | 인간 난포자극 호르몬의 대량 생산 방법 |