RU2017107682A - Способ и микроорганизм для ферментативного продуцирования метионина с улучшенным выходом метионина - Google Patents

Claims (22)

1. Рекомбинантный микроорганизм для ферментативной продукции метионина и/или его производных, где в указанном рекомбинантном штамме сверхэкспрессируются гены ygaZH, гомологичные генам ygaZ и ygaH из Escherichia coli, при условии что она не объединяется ни со сверхэкспрессией генов metH и, возможно, fldA и fpr из Е. coli или гомологичных им генов из С. glutamicum, ни с ослаблением экспрессии по меньшей мере одного гена среди metN, metI или metQ, причем указанные гены, гомологичные ygaZH, выбирают среди группы генов видов Citrobacter, видов Shigella, видов Raoultella, видов Enterobacter, видов Yersinia и видов Photorhabdus.

2. Рекомбинантный микроорганизм по п. 1, в котором гомологичные гены ygaZH происходят из Citrobacter koseri, Shigella flexneri, Raoultella ornithinolytica, Enterobacter sp., Yersinia enterocolitica, Photorhabdus luminescens, Citrobacter youngae или Citrobacter freundii.

3. Рекомбинантный микроорганизм по п. 1 или 2, в котором гомологичные гены ygaZH экспрессируются под контролем индуцибельного промотора.

4. Рекомбинантный микроорганизм по любому из пп. 1-3, в котором также увеличивается экспрессия по меньшей мере одного из следующих генов: ptsG, рус, pntAB, cysP, cysU, cysW, cysA, cysM, cysJ, cysI, cysH, gcvT, gcvH, gcvP, Ipd, serA, serB, serC, cysE, metF, metA, аллеля metA*, кодирующего фермент с пониженной чувствительностью к S-аденозилметионину и/или метионину по механизму обратной связи, thrA и аллеля thrA*, кодирующего фермент с ослабленным ингибированием треонином по механизму обратной связи.

5. Рекомбинантный микроорганизм по п. 4, в котором по меньшей мере один из указанных генов находится под контролем индуцибельного промотора.

6. Рекомбинантный микроорганизм по любому из пп. 1-5, в котором также ослабляется экспрессия по меньшей мере одного из следующих генов: metJ, pykA, pykF, purU, ybdL, yncA, metE, dgsA или udhA.

7. Рекомбинантный микроорганизм по любому из пп. 1-6, в котором:

а. сверхэкспрессируются гены, гомологичные ygaZ и ygaH,

б. экспрессия генов metA*, cysPUWAM, cysJIH, gcvTHP, metF, serA, serB, serC, cysE, thrA*, ptsG и рус усиливается; и

в. экспрессия генов metJ, pykA, pykF, purU, dgsA, metE и yncA ослабляется.

8. Способ оптимизации ферментативного производства метионина или его производных, включающий следующие этапы:

а. культивирование рекомбинантного микроорганизма, где в указанном микроорганизме сверхэкспрессируются гены ygaZH, гомологичные генам ygaZ и ygaH из Escherichia coli; при условии, что данная сверхэкспрессия не объединяется ни со сверхэкспрессией metH и, возможно, fldA и fpr из Е. coli или гомологичных им генов из С. glutamicum, ни с ослаблением экспрессии по меньшей мере одного гена среди metN, metI или metQ, причем указанные гомологичные гены ygaZH выбраны среди группы генов видов Citrobacter, видов Shigella, видов Raoultella, видов Enterobacter, видов Yersinia и видов Photorhabdus, в подходящей культуральной среде, содержащей ферментируемый источник углерода и источник серы, и

б. выделение метионина и/или его производных из культуральной среды.

9. Способ по п. 8, в котором указанные гомологичные гены ygaZH происходят из Citrobacter koseri, Shigella flexneri, Raoultella ornithinolytica, Enterobacter sp., Yersinia enterocolitica, Photorhabdus luminescens, Citrobacter youngae или Citrobacter freundii.

10. Способ по п. 9, в котором рост рекомбинантного микроорганизма подвергается ограничению или недостаточности в отношении одного или нескольких неорганических субстратов, в частности фосфата и/или калия, в культуральной среде.

11. Способ по любому из пп. 8-10, в котором стадия выделения метионина и/или его производных включает стадию концентрирования метионина и/или его производных в ферментационном бульоне.

12. Рекомбинантный микроорганизм для ферментативного производства метионина и/или его производных, где в указанном рекомбинантном штамме сверхэкспрессируются гены ygaZH, гомологичные генам ygaZ и ygaH из Escherichia coli, причем указанные гомологичные гены ygaZH выбраны среди группы генов видов Citrobacter, видов Shigella, видов Raoultella, видов Enterobacter, видов Yersinia и видов Photorhabdus.

13. Рекомбинантный микроорганизм по п. 12, в котором гомологичные гены ygaZH происходят из Citrobacter koseri, Shigella flexneri, Raoultella ornithinolytica, Enterobacter sp., Yersinia enterocolitica, Photorhabdus luminescens, Citrobacter youngae или Citrobacter freundii.

14. Способ оптимизации ферментативного производства метионина или его производных, включающий следующие этапы:

а. культивирование рекомбинантного микроорганизма, где в указанном микроорганизме сверхэкспрессируются гены ygaZH, гомологичные генам ygaZ и ygaH из Escherichia coli, в подходящей культуральной среде, содержащей ферментируемый источник углерода и источник серы, причем указанные гомологичные гены ygaZH выбраны среди группы генов видов Citrobacter, видов Shigella, видов Raoultella, видов Enterobacter, видов Yersinia и видов Photorhabdus, и

б. выделение метионина и/или его производных из культуральной среды.

15. Способ по п. 14, в котором указанные гомологичные гены ygaZH происходят из Citrobacter koseri, Shigella flexneri, Raoultella ornithinolytica, Enterobacter sp., Yersinia enterocolitica, Photorhabdus luminescens, Citrobacter youngae или Citrobacter freundii.