RU2015119768A

RU2015119768A - Оптимизированная нуклеотидная последовательность и фармацевтическая композиция на ее основе с пролонгированной экспрессией трансгена vegf

Info

Publication number: RU2015119768A
Application number: RU2015119768A
Authority: RU
Inventors: Сергей Львович Киселев
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "НекстГен"
Priority date: 2015-05-26
Filing date: 2015-05-26
Publication date: 2016-12-20
Also published as: EP3305901A1; EA201700456A1; CN107614687B; CA2985608A1; CN107614687A; CA2985608C; EP3305901B1; US20180086800A1; MX2017013206A; BR112017023058A2; RU2612497C2; US20160347803A1; US10040837B2; EP3305901A4; EA039395B1; AU2015396177B2; AU2015396177A1; US9896493B2; WO2016190774A1; BR112017023058B1

Abstract

1. Способ продления времени жизни мРНК трансгена в клетке млекопитающего, трансфицированной генной конструкцией, предусматривающий проведение точечных делеций в 3′некодирующей области гена фактора роста эндотелия сосудов (vegf), при котором делетированный нуклеотид не заменяется, либо заменяется на цитозин в точках замещения гуанина или аденина, затем определяется время жизни мРНК при каждой делении, сведения анализируются и конструируется генная конструкция, содержащая 3′некодирующую область с совокупностью одиночных делеций и/или замен на цитозин, показавших наилучший результат по продлению жизни мРНК.2. Способ по п. 1, где трансфицированная генная конструкция позволяет увеличить количество кодируемого трансгеном белка.3. Способ по п. 1, где 3′-некодирующая область мРНК является некодирующей областью гена, выбранного из: vegf121, vegf145, vegf165, vegf185, и других возможных изоформ гена фактора роста эндотелия сосудов.4. Плазмидная ДНК с оптимизированной последовательностью 3′-некодирующей области гена фактора роста эндотелия сосудов, выбранного из изоформ: 121, 145, 165, 185 или других, содержащая в 3′-некодирующей области одну или несколько делеций и/или замен одиночных нуклеотидов, сконструированная для осуществления способа по п. 1.5. Плазмидная ДНК гена фактора роста эндотелия сосудов vegf165, представленная на Seq#11, пригодная для осуществления способа по п. 1, отличающаяся тем, что содержит следующие делеций и замещения: в положении 1079 - C-делеция, 1111 - T-делеция, 1144 - А/С-замена, 1148 - A-делеция, 1155 - C-делеция, 1173 - А-деления, 1185 - A-делеция, 1536 - G/C-замена.6. мРНК плазмидной ДНК по п. 4 или 5, содержащая 3′-некодирующую область, соответствующую одной или нескольким делециям и/или заменам одиночных нуклеотидов плазмидной ДНК по пп. 4

Claims

1. Способ продления времени жизни мРНК трансгена в клетке млекопитающего, трансфицированной генной конструкцией, предусматривающий проведение точечных делеций в 3′некодирующей области гена фактора роста эндотелия сосудов (vegf), при котором делетированный нуклеотид не заменяется, либо заменяется на цитозин в точках замещения гуанина или аденина, затем определяется время жизни мРНК при каждой делении, сведения анализируются и конструируется генная конструкция, содержащая 3′некодирующую область с совокупностью одиночных делеций и/или замен на цитозин, показавших наилучший результат по продлению жизни мРНК.

2. Способ по п. 1, где трансфицированная генная конструкция позволяет увеличить количество кодируемого трансгеном белка.

3. Способ по п. 1, где 3′-некодирующая область мРНК является некодирующей областью гена, выбранного из: vegf121, vegf145, vegf165, vegf185, и других возможных изоформ гена фактора роста эндотелия сосудов.

4. Плазмидная ДНК с оптимизированной последовательностью 3′-некодирующей области гена фактора роста эндотелия сосудов, выбранного из изоформ: 121, 145, 165, 185 или других, содержащая в 3′-некодирующей области одну или несколько делеций и/или замен одиночных нуклеотидов, сконструированная для осуществления способа по п. 1.

5. Плазмидная ДНК гена фактора роста эндотелия сосудов vegf165, представленная на Seq#11, пригодная для осуществления способа по п. 1, отличающаяся тем, что содержит следующие делеций и замещения: в положении 1079 - C-делеция, 1111 - T-делеция, 1144 - А/С-замена, 1148 - A-делеция, 1155 - C-делеция, 1173 - А-деления, 1185 - A-делеция, 1536 - G/C-замена.

6. мРНК плазмидной ДНК по п. 4 или 5, содержащая 3′-некодирующую область, соответствующую одной или нескольким делециям и/или заменам одиночных нуклеотидов плазмидной ДНК по пп. 4 или 5.

7. Фармацевтическая композиция для регенерации соединительной, мышечной, нервной тканей, включающая плазмидную ДНК по п. 4 или 5 и, по меньшей мере, один криопротектант и стабилизатор рН.

8. Применение плазмидной ДНК по п. 5 в регенерации соединительной, нервной, мышечной, костной тканей, тканей сердечно-сосудистой системы.