RU2015105274A

RU2015105274A - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВ СЕМЕЙСТВА ЦИСТЕИНОВЫХ ПРОТЕАЗ ПШЕНИЦЫ (Triticum aestivum) И ПРЕПАРАТ БЕЛКА ТРИТИКАИН-АЛЬФА, ПОЛУЧЕННЫЙ ЭТИМ СПОСОБОМ

Info

Publication number: RU2015105274A
Application number: RU2015105274A
Authority: RU
Inventors: Андрей Александрович ЗАМЯТНИН; Людмила Владимировна Савватеева; Неонила Васильевна Гороховец; Владимир Алексеевич Макаров; Евгений Юрьевич Зерний; Андрей Геннадьевич Соловьев; Сергей Юрьевич Морозов
Priority date: 2015-02-17
Filing date: 2015-02-17
Publication date: 2016-09-20
Also published as: RU2603054C2

Abstract

1. Способ получения очищенного биологически активного белка тритикаина-альфа - протеазы пшеницы, рекомбинантно экспрессирующегося в бактериальной, дрожжевой или растительной системе, характеризующийся получением вышеназванного белка.2. Способ по п. 1, в котором белок определяется SEQ ID №1, SEQ ID №2 SEQ ID №3 или SEQ ID №4.3. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из E.coli.4. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из P.pastoris.5. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из Nicotiana sp.6. Способ получения очищенного биологически активного белка, рекомбинантно экспрессирующегося в клетке-хозяине, включающий:стадию культивирования клеток-хозяев, трансформированных вектором (в случае экспрессии в Nicotiana sp. - агроинфильтрацией или векторов на основе вирусов растений), содержащим последовательность ДНК, кодирующей белок, определяющийся последовательностью SEQ ID №1, SEQ ID №2, SEQ ID №3 или SEQ ID №4 в условиях, подходящих для экспрессии белка; стадию выделения экспрессирующегося белка, включающую отделение указанного белка от клеток-хозяев с получением препарата выделенного белка;стадию очистки препарата белка, осуществляемую методами хроматографии.7. Способ по пп. 1-6, отличающийся тем, что встроенная кДНК белка тритикаина-альфа может быть модифицирована последовательностью лидерного пептида и гранулин-подобного домена.8. Очищенный биологически активный белковый препарат - рекомбинантный усеченный тритикаин-альфа, полученный способом по пп. 1, 2 и 6, чистота которого составляет не менее 85% и с выходом не менее 55 мг с литра бактериальной культуры.9. Белковый препарат - рекомбинантный усеченный тритикаин-альфа - цистеиновая протеаза

Claims

1. Способ получения очищенного биологически активного белка тритикаина-альфа - протеазы пшеницы, рекомбинантно экспрессирующегося в бактериальной, дрожжевой или растительной системе, характеризующийся получением вышеназванного белка.

2. Способ по п. 1, в котором белок определяется SEQ ID №1, SEQ ID №2 SEQ ID №3 или SEQ ID №4.

3. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из E.coli.

4. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из P.pastoris.

5. Способ по п. 1, в котором клетку-хозяин экспрессирующей системы выбирают из Nicotiana sp.

6. Способ получения очищенного биологически активного белка, рекомбинантно экспрессирующегося в клетке-хозяине, включающий:

стадию культивирования клеток-хозяев, трансформированных вектором (в случае экспрессии в Nicotiana sp. - агроинфильтрацией или векторов на основе вирусов растений), содержащим последовательность ДНК, кодирующей белок, определяющийся последовательностью SEQ ID №1, SEQ ID №2, SEQ ID №3 или SEQ ID №4 в условиях, подходящих для экспрессии белка; стадию выделения экспрессирующегося белка, включающую отделение указанного белка от клеток-хозяев с получением препарата выделенного белка;

стадию очистки препарата белка, осуществляемую методами хроматографии.

7. Способ по пп. 1-6, отличающийся тем, что встроенная кДНК белка тритикаина-альфа может быть модифицирована последовательностью лидерного пептида и гранулин-подобного домена.

8. Очищенный биологически активный белковый препарат - рекомбинантный усеченный тритикаин-альфа, полученный способом по пп. 1, 2 и 6, чистота которого составляет не менее 85% и с выходом не менее 55 мг с литра бактериальной культуры.

9. Белковый препарат - рекомбинантный усеченный тритикаин-альфа - цистеиновая протеаза пшеницы, характеризующийся тем, что он обладает высокой специфической ферментативной активностью и имеет аминокислотную последовательность SEQ ID №2.