RU2012130019A

RU2012130019A - МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ИНСЕКТИЦИДНЫЕ Cry-БЕЛКИ Cry1Ca

Info

Publication number: RU2012130019A
Application number: RU2012130019/10A
Authority: RU
Inventors: Томас МИД; Кеннет НАРВА; Тимоти ХЕЙ; Игнасио ЛАРРИНУА; Аарон Т. ВУСЛИ; Стефани Л. БЕРТОН
Original assignee: ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи
Priority date: 2009-12-16
Filing date: 2010-12-16
Publication date: 2014-01-27
Also published as: AU2010339916B2; MX345224B; UA112286C2; JP2013514772A; ZA201204918B; EP2512224A4; WO2011084627A2; AR079502A1; CL2012001631A1; KR20120101546A; CO6592053A2; WO2011084627A3; NZ601094A; CN102762096A; BR112012015005A2; CA2782554A1; MX2012007124A; US9284573B2; IL220335A; US20130025006A1

Abstract

1. Вариант белка Cry1Ca, который обладает инсектицидной активностью, в котором все или части из N-концевых альфа-спиралей 1, 2A и/или 2B соответствующего Cry1Ca дикого типа удалены.2. Вариант белка по п. 1, где делеции удаляют всю α-спираль 1 и всю или часть α-спирали 2 в домене I, причем указанный белок содержит α-спирали с 3 по 7.3. Вариант белка по п. 1, где указанные делеции увеличивают инсектицидную активность инсектицидного белка DIG-109, где указанные делеции начинаются перед началом α-спирали 2A и завершаются после конца α-спирали 2B, но не продолжаются на α-спираль 3.4. Вариант белка по п. 1, где указанные делеции увеличивают инсектицидную активность инсектицидного белка DIG-152, где указанные делеции начинаются перед началом α-спирали 2A и завершаются после конца α-спирали 2B, но не продолжаются на α-спираль 3.5. Вариант белка по п. 1, где N-концевые делеции начинаются по меньшей мере с одной дестабилизирующей аминокислоты, и указанный белок содержит добавленный кодон, который определяет аминокислоту глицин между инициирующим трансляцию метионином и дестабилизирующей аминокислотой.6. Вариант белка по п. 1, где указанный белок лишен C-концевой последовательности протоксина.7. Модифицированный белок Cry1Ca, содержащий встроенный участок расщепления протеазой в спейсерную область между α-спиралью 2B и α-спиралью 3.8. Модифицированный белок по п. 7, где указанный участок расщепления протеазой встроен в пределах аминокислот с 85 по 90 белка центрального токсина Cry1Ca SEQ ID NO: 1.9. Белок по п. 1 или п. 7, где указанный белок обладает увеличенной активностью против насекомых.10. Белок по п. 9, где указанное насекомое выбрано из группы, состоящей из совки травяной и �

Claims

1. Вариант белка Cry1Ca, который обладает инсектицидной активностью, в котором все или части из N-концевых альфа-спиралей 1, 2A и/или 2B соответствующего Cry1Ca дикого типа удалены.

2. Вариант белка по п. 1, где делеции удаляют всю α-спираль 1 и всю или часть α-спирали 2 в домене I, причем указанный белок содержит α-спирали с 3 по 7.

3. Вариант белка по п. 1, где указанные делеции увеличивают инсектицидную активность инсектицидного белка DIG-109, где указанные делеции начинаются перед началом α-спирали 2A и завершаются после конца α-спирали 2B, но не продолжаются на α-спираль 3.

4. Вариант белка по п. 1, где указанные делеции увеличивают инсектицидную активность инсектицидного белка DIG-152, где указанные делеции начинаются перед началом α-спирали 2A и завершаются после конца α-спирали 2B, но не продолжаются на α-спираль 3.

5. Вариант белка по п. 1, где N-концевые делеции начинаются по меньшей мере с одной дестабилизирующей аминокислоты, и указанный белок содержит добавленный кодон, который определяет аминокислоту глицин между инициирующим трансляцию метионином и дестабилизирующей аминокислотой.

6. Вариант белка по п. 1, где указанный белок лишен C-концевой последовательности протоксина.

7. Модифицированный белок Cry1Ca, содержащий встроенный участок расщепления протеазой в спейсерную область между α-спиралью 2B и α-спиралью 3.

8. Модифицированный белок по п. 7, где указанный участок расщепления протеазой встроен в пределах аминокислот с 85 по 90 белка центрального токсина Cry1Ca SEQ ID NO: 1.

9. Белок по п. 1 или п. 7, где указанный белок обладает увеличенной активностью против насекомых.

10. Белок по п. 9, где указанное насекомое выбрано из группы, состоящей из совки травяной и тростниковой огневки.

11. Модифицированный белок Cry1Ca, содержащий подвергнутый обмену или шаффлингу домен, выбранный из группы, состоящей из домена II и домена III.

12. Белок по п. 1, содержащий сегмент центрального токсина, содержащий аминокислоты 1-619 SEQ ID NO: 1, в который внесено вплоть до 10, вплоть до 15 или вплоть до 20 аминокислотных вставок, делеций или замен.

13. Слитый инсектицидный белок, содержащий N-концевой сегмент центрального токсина, происходящий из инсектицидного белка Cry1Ca, слитый с гетерологичным сегментом протоксина дельта-эндотоксина в точке после сегмента центрального токсина.

14. Белок по п. 12, причем указанный белок содержит аминокислотную последовательность из остатков 28-619 SEQ ID NO: 1 с вплоть до 20 заменами, делециями или модификациями аминокислот.

15. Белок по п. 12, причем указанный белок содержит остатки 1-619 SEQ ID NO: 1, с вплоть до 20 заменами, делециями или модификациями аминокислот.

16. Выделенный белок, который по меньшей мере на 90% идентичен последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 1.

17. Белок по п. 16, где указанный белок содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 1.

18. Выделенный полинуклеотид, который кодирует белок по п. 16.

19. Полинуклеотид по п. 18, где указанный полинуклеотид по меньшей мере на 90% идентичен последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 2.

20. Способ борьбы с насекомым lepidopteran, причем указанный способ включает контактирование указанного насекомого с белком по п. 16.

21. Клетка растения, которая продуцирует белок по п. 16.

22. Микробная клетка, содержащая полинуклеотид по п. 18.

23. Растение, содержащее множество клеток по п. 21.