RU2011138275A

RU2011138275A - Способ криоконсервации клеток, искусственные клеточные конструкции или трехмерные сложные комплексы тканей

Info

Publication number: RU2011138275A
Application number: RU2011138275/10A
Authority: RU
Inventors: Тимо ШМИТТ; Лотар ЮСТ; Франц МАЗЕР; Хольгер БЕККЕР
Original assignee: НАТУРИН ГМБХ унд КО.
Priority date: 2009-02-19
Filing date: 2010-02-18
Publication date: 2013-03-27
Also published as: CA2751985A1; CA2751985C; IL214486A; BRPI1008297B1; EP2398898B1; PT2398898E; EP2221362A1; KR101679889B1; AU2010215506A1; ES2527786T3; MX2011008373A; SG173740A1; HK1166100A1; PL2398898T3; JP2012517823A; EP2398898A1; WO2010094747A1; IL214486A0; BRPI1008297A2; KR20110127185A

Abstract

1. Способ криоконсервации и длительного хранения одного или нескольких типов клеток, клеточных конструкций или трехмерных сложных комплексов тканей, включающий:a) посев одного или нескольких типов клеток, или различных типов клеток, соответствующих клеточным конструкциям или трехмерным комплексам тканей, на стабильный коллагеновый клеточный носитель, имеющий толщину менее 150 мкм, массу на единицу площади 10-170 г/ми следующий состав:i) коллаген [вес.%]: 30-80,ii) амидный азот [вес.%]: 0,06-0,7,iii) полиол [вес.%]: 0-50,iv) липиды [вес.%]: 0-20,v) вода [вес.%]: 5-40,b) культивирование клеток до их адгезии к коллагеновому клеточному носителю,c) удаление неадгерентных клеток с помощью промывки,d) замораживание коллагенового клеточного носителя с адгерентными клетками в среде для замораживания.2. Способ по п.1, где один тип или несколько типов клеток, формирующих желаемую клеточную конструкцию или трехмерный комплекс тканей, сеют на обе стороны коллагенового клеточного носителя.3. Способ по п.1 или 2, где коллаген в коллагеновом клеточном носителе является сшитым.4. Способ по п.1 или 2, где толщина коллагенового клеточного носителя меньше 80 мкм или меньше 40 мкм.5. Способ по п.1 или 2, где коллаген является коллагеном I типа или смесью коллагена I и коллагена III, или смесью коллагена I и/или III с эластином.6. Способ по п.1 или 2, где полиолы выбраны из глицерина, этиленгликоля, бутелендиолов, пропилендиолов, сорбита или других гекситолов, ксилита или других пентитолов, а также их смесей.7. Способ по п.1 или 2, где липиды являются растительными маслами.8. Способ по п.1 или 2, где коллагеновый клеточный носитель может быть покрыт структурными белками внеклеточного матрикса

Claims

1. Способ криоконсервации и длительного хранения одного или нескольких типов клеток, клеточных конструкций или трехмерных сложных комплексов тканей, включающий:

a) посев одного или нескольких типов клеток, или различных типов клеток, соответствующих клеточным конструкциям или трехмерным комплексам тканей, на стабильный коллагеновый клеточный носитель, имеющий толщину менее 150 мкм, массу на единицу площади 10-170 г/м² и следующий состав:

i) коллаген [вес.%]: 30-80,

ii) амидный азот [вес.%]: 0,06-0,7,

iii) полиол [вес.%]: 0-50,

iv) липиды [вес.%]: 0-20,

v) вода [вес.%]: 5-40,

b) культивирование клеток до их адгезии к коллагеновому клеточному носителю,

c) удаление неадгерентных клеток с помощью промывки,

d) замораживание коллагенового клеточного носителя с адгерентными клетками в среде для замораживания.

2. Способ по п.1, где один тип или несколько типов клеток, формирующих желаемую клеточную конструкцию или трехмерный комплекс тканей, сеют на обе стороны коллагенового клеточного носителя.

3. Способ по п.1 или 2, где коллаген в коллагеновом клеточном носителе является сшитым.

4. Способ по п.1 или 2, где толщина коллагенового клеточного носителя меньше 80 мкм или меньше 40 мкм.

5. Способ по п.1 или 2, где коллаген является коллагеном I типа или смесью коллагена I и коллагена III, или смесью коллагена I и/или III с эластином.

6. Способ по п.1 или 2, где полиолы выбраны из глицерина, этиленгликоля, бутелендиолов, пропилендиолов, сорбита или других гекситолов, ксилита или других пентитолов, а также их смесей.

7. Способ по п.1 или 2, где липиды являются растительными маслами.

8. Способ по п.1 или 2, где коллагеновый клеточный носитель может быть покрыт структурными белками внеклеточного матрикса, предпочтительно ламининами, фибронектином, эластином или гиалуроновой кислотой, или апатитом, или функциональными молекулами, выбранными из факторов роста, цитокинов, направляющих молекул или антител.

9. Способ по п.1 или 2, где среда для замораживания включает диметилсульфоксид (ДМСО), трегалозу, глицерин или гидроксиэтилкрахмал (ГЭК).

10. Способ по п.1 или 2, где адгерентные клетки являются эукариотическими или прокариотическими клетками, или генетически модифицированными эукариотическими или прокариотическими клетками.

11. Способ по п.10, где эукариотические клетки являются клетками растений, животных или грибов.

12. Способ по п.11, где клетки животных являются клетками млекопитающих, первичными или иммортализованными клетками, предпочтительно клетками человека.

13. Способ по п.10, где клетки выбраны из стволовых клеток, таких как линии не относящихся к человеку эмбриональных стволовых клеток, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, сперматогональные стволовые клетки, зародышевые стволовые клетки, мезенхимальные стволовые клетки, эндотелиальная стволовая клетка, гематопоэтические стволовые клетки, нервные стволовые клетки, стволовые клетки нервного гребня или желудочно-кишечные стволовые клетки; соматических клеток, таких как эндотелиальные клетки, эпителиоциты из желудка и кишечника, эпителиоциты молочной железы, меланоциты, эпителиоциты легкого, почечные эпителиоциты, кератиноциты, уротелиальные клетки, гепатоциты, клетки роговицы, клетки хрусталика, остеобласты, остеоциты, одонтобласты, хондроциты, клетки связок, клетки сухожилий, клетки гипофиза, клетки слюнной железы, клетки надпочечников, экзокринные и эндокринные панкреатические клетки, клетки Лейдига, липоциты, фибробласты, клетки сетчатки, допаминергические нейроны, ГАМКенергические нейроны, глутаминергические нейроны, холинергические нейроны, адренергические нейроны, астроциты, олигодендроциты, шванновские клетки, гладкомышечные клетки, клетки скелетных мышц, кардиомиоциты, B-лимфоциты, T-лимфоциты, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, тучные клетки, эозинофилы, базофилы, NK-клетки, M-клетки или микроглия; генетически модифицированных клеток; линий раковых клеток, таких как HeLa, CCF-STTG1, Hep G2, SK-MEL-5, Saos-2 или WERI-Rb-1; иммортализованных клеточных линий, таких как NuLi, CuFi, CHON-001, BJ-5ta, hTERT-HME1 (ME16C), hTERT-HPNE, hTERT RPE-1, NeHepLxHT или HESCs; растительных клеток, таких как клетки из Brownanthus corallinus, Carpanthea pomeridiana, Conophytum meyerae, Delosperma ecklonis, Sesuvium portulacastrum, Sphalmanthus trichomotus, Amaranthus retroflexus, Pleuropetalum darwinii, Amaryllidaceae, Crinum x powellii hort., Catharanthus longifolius, Dictyophleba leonensis или Ervatamia coronaria; клеток грибов, таких как Dacrymyces deliquescens, Fennellomyces linderi, Cunninghamella blakesleeana, Tolypocladium inflatum, Radiomyces spectabilis, Wallemia sebi, Lophodermium seditiosum, Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Debaromyces japonicus, Fellomyces polyborus, Brettanomyces abstinens, Hyphopichia burtonii или Kloeckera brevis; клеток бактерий, таких как Acidobacterium capsulatum, Escherichia coli, Saccharococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, Bacillus thuringiensis, Pseudomonas aeruginosa или Enterococcus faecalis.

14. Замороженный комплекс коллагенового клеточного носителя-клеток, или замороженная искусственная клеточная конструкция, или трехмерный сложный комплекс тканей, получаемый с применением способа по п.1 или 2.

15. Размороженный комплекс коллагенового носителя-клеток, искусственная клеточная конструкция или трехмерный сложный комплекс тканей по п.14 для применения в регенеративной медицине.

16. Применение размороженного комплекса коллагенового носителя-клеток, размороженной искусственной клеточной конструкции или трехмерного сложного комплекса тканей по п.14 для фундаментальных исследований или для in vitro тест-систем, таких как тест-системы для фармакологических веществ, химических соединений или косметических средств.