RU2006114756A - Способ расщепления полипептидов с использованием варианта протеазы омрт - Google Patents
Способ расщепления полипептидов с использованием варианта протеазы омрт Download PDFInfo
- Publication number
- RU2006114756A RU2006114756A RU2006114756/13A RU2006114756A RU2006114756A RU 2006114756 A RU2006114756 A RU 2006114756A RU 2006114756/13 A RU2006114756/13 A RU 2006114756/13A RU 2006114756 A RU2006114756 A RU 2006114756A RU 2006114756 A RU2006114756 A RU 2006114756A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acid
- polypeptide
- site
- fusion protein
- target peptide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/585—Calcitonins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/63—Motilins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Claims (31)
1. Способ расщепления полипептида, отличающийся тем, что в положении Р1 нужного сайта расщепления в полипептиде находится аргинин или лизин, в положении Р1' находится аминокислота, иная, чем аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота или пролин, одна основная аминокислота, или две, или три последовательно расположенные основные аминокислоты находятся в любом месте аминокислотной последовательности от положения Р10 до положения Р3 или от положения Р3' до положения Р5' (при условии, что одна основная аминокислота не располагается в положении Р6 или Р4), и для расщепления в нужном сайте указанного полипептида используют протеазу OmpT.
2. Способ получения целевого пептида, отличающийся тем, что целевой пептид получают из слитого белка, причем местом расщепления слитого белка является нужный сайт, как определено в п.1, включающий защитный пептид, С-конец которого представляет собой аргинин или лизин, слитый через нужный сайт расщепления с целевым пептидом, N-конец которого представляет собой иную аминокислоту, чем аспарагиновая кислота, глютаминовая кислота или пролин, где клетки-хозяева трансформируют экспрессионной плазмидой, имеющей ген, кодирующий слитый белок, и указанный ген экспрессируют в названных клетках, а расщепление осуществляют названной протеазой в указанном сайте расщепления.
3. Способ по п.1 или 2, в котором в случае наличия в полипептиде или слитом белке сайта, который не желательно расщеплять протеазой OmpT, расщепление в указанном сайте ингибируют, располагая в положения Р3 указанного сайта кислую аминокислоту.
4. Способ расщепления полипептида, где протеазу OmpT применяют для расщепления по желаемому сайту расщепления полипептида, или способ получения целевого пептида, который включает расщепление в желаемом сайте расщепления слитого белка, причем способ характеризуется тем, что если сайт, который не желательно расщеплять протеазой OmpT, представлен в названном полипептиде или названном слитом белке, то расщепление в указанном сайте ингибируют, располагая кислую аминокислоту в Р3 положении указанного сайта.
5. Способ расщепления полипептида по п.4, в котором протеаза OmpT является вариантом протеазы OmpT по 97-й аминокислоте.
6. Способ расщепления полипептида, характеризующийся тем, что расщепление по желаемому сайту расщепления полипептида осуществляют вариантом протеазы OmpT по 97-й аминокислоте, где 97-й аминокислотой от N-конца протеазы OmpT является аланин, лейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глютамин, глютаминовая кислота или гистидин.
7. Способ расщепления полипептида по п.6, в котором в положении Р1 желаемого сайта расщепления в полипептиде представлен аргинин или лизин, а в положении Р1' представлена аминокислота иная, чем аргинин или лизин.
8. Способ расщепления полипептида по п.7, в котором одна основная аминокислота или две или три последовательные основные аминокислоты расположены в любом сайте аминокислотной последовательности от положения Р10 до положения Р3 или от положения Р3' до положения Р5'.
9. Способ получения целевого пептида, характеризующийся тем, что трансформируют клетки-хозяева экспрессионной плазмидой, имеющей ген, кодирующий слитый белок, включающий целевой пептид, слитый с защитным пептидом через желаемый сайт расщепления, по которому может осуществляться расщепление вариантом протеазы OmpT по 97-й аминокислоте, как определено в п.6, экспрессируют названный ген в указанных клетках и получают целевой пептидй из слитого белка путем расщепления названной протеазой в указанном сайте расщепления.
10. Способ получения целевого пептида по п.9, в котором С-конец защитного пептида является аргинином или лизином, а N-конец целевого пептида является аминокислотой иной, чем аргинин или лизин.
11. Способ получения целевого пептида по п.10, где одна основная аминокислота, или две, или три последовательные основные аминокислоты располагаются в любом сайте аминокислотной последовательности от положения Р10 до положения Р3, или от положения Р3' до положения Р5' желаемого сайта расщепления слитого белка.
12. Способ по любому из пп.6-11, в котором в случае наличия в полипептиде или слитом белке сайта, по которому нежелательно проводить расщепление вариантом протеазы OmpT по 97-й аминокислоте, расщепление в указанном сайте ингибируют, располагая кислую аминокислоту в положении Р3 указанного сайта.
13. Способ по любому из пп.1, 8, 11, который включает расположение двух или трех последовательных основных аминокислот между положениями Р10 и Р3 желаемого сайта расщепления в полипептиде или слитом белке.
14. Способ по п.13, который включает расположение трех последовательных основных аминокислот между положениями Р5 и Р3 желаемого сайта расщепления в полипептиде или слитом белке.
15. Способ по любому из пп.1, 8, 11, в котором основными аминокислотами являются аргинин и/или лизин.
16. Способ по п.15, где основной аминокислотой является аргинин.
17. Способ по п.3, где кислой аминокислотой является аспарагиновая кислота.
18. Способ по п.4, где кислой аминокислотой является аспарагиновая кислота.
19. Способ по п.5, где кислой аминокислотой является аспарагиновая кислота.
20. Способ по п.12, где кислой аминокислотой является аспарагиновая кислота.
21. Способ по любому из пп.1, 8, 11, где аминокислотная последовательность от положения Р5 до положения Р1 желаемого сайта расщепления в полипептиде или слитом белке является Arg-Arg-Arg-Ala-Arg.
22. Способ по любому из пп.1, 8, 11, где аминокислотная последовательность от положения Р7 до положения Р1 желаемого сайта расщепления в полипептиде или слитом белке является Asp-Ala-Arg-Arg-Arg-Ala-Arg.
23. Способ по любому из пп.5-11, где 97-й аминокислотой от N-конца протеазы OmpT являются лейцин, метионин или гистидин.
24. Способ по любому из пп.5-11, где положение Р1' желаемого сайта расщепления полипептида или слитого белка или N-конец целевого пептида представлены серином или аланином, и 97-я аминокислота применяемого варианта протеазы OmpT по 97-й аминокислоте является лейцином.
25. Способ по любому из пп.5-11, где положение Р1' желаемого сайта расщепления полипептида или слитого белка или N-конец целевого пептида представлены фенилаланином, аланином, серином, цистеином или тирозином, и 97-я аминокислота применяемого варианта протеазы OmpT по 97-й аминокислоте является метионином.
26. Способ по любому из пп.5-11, где положение Р1' желаемого сайта расщепления полипептида или слитого белка или N-конец целевого пептида представлены аланином, валином, изолейцином, метионином, серином, треонином, цистеином или аспарагином, и 97-я аминокислота применяемого варианта протеазы OmpT по 97-й аминокислоте является гистидином.
27. Способ по любому из пп.2, 4, 9, где целевой пептид является пептидом, состоящим из 22-45 аминокислотных остатков.
28. Способ по п.27, где целевой пептид является адренокортикотропным гормоном (1-24), мотилином или предшественником кальцитонина.
29. Способ по любому из пп.2, 4, 9, где клетки-хозяева являются клетками Е.coli.
30. Способ по любому из пп.2, 4, 9, который включает применение в качестве расщепляющей протеазы бактериальных клеток, экспрессирующих ген, кодирующий протеазу OmpT или вариант протеазы OmpT по 97-й аминокислоте, где 97-й аминокислотой от N-конца протеазы OmpT является аланин, лейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глютамин, глютаминовая кислота или гистидин.
31. Способ по любому из пп.2, 4, 9, который включает совместную экспрессию гена, кодирующего протеазу OmpT или вариант протеазы OmpT по 97-й аминокислоте, где 97-й аминокислотой от N-конца протеазы OmpT является аланин, лейцин, фенилаланин, метионин, серии, треонин, цистеин, аспарагин, глютамин, глютаминовая кислота или гистидин, и гена, кодирующего полипептид или слитый белок, для которых желательно расщепление указанной протеазой.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003-342183 | 2003-09-30 | ||
| JP2003342183 | 2003-09-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006114756A true RU2006114756A (ru) | 2007-12-20 |
| RU2395582C2 RU2395582C2 (ru) | 2010-07-27 |
Family
ID=34386241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006114756/13A RU2395582C2 (ru) | 2003-09-30 | 2004-09-29 | СПОСОБ РАСЩЕПЛЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВАРИАНТА ПРОТЕАЗЫ ОmpТ |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9657323B2 (ru) |
| EP (1) | EP1674567B1 (ru) |
| JP (1) | JP4663524B2 (ru) |
| KR (1) | KR101099398B1 (ru) |
| CN (1) | CN1860226B (ru) |
| AU (1) | AU2004276687B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0414611A (ru) |
| CA (1) | CA2540446A1 (ru) |
| ES (1) | ES2398463T3 (ru) |
| IL (1) | IL174588A (ru) |
| RU (1) | RU2395582C2 (ru) |
| WO (1) | WO2005030956A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008038296A2 (en) * | 2006-06-21 | 2008-04-03 | Reliance Life Sciences Pvt Ltd | Recombinant calcitonin fused to interleukin-2 |
| DK2906592T3 (en) | 2012-10-12 | 2018-12-10 | Sutro Biopharma Inc | Proteolytic inactivation of selected proteins in bacterial extracts for enhanced expression |
| US20220181034A1 (en) * | 2018-09-19 | 2022-06-09 | Georgia Tech Research Corporation | Self-titrating bacterial protease-activated prodrug |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GR79124B (ru) | 1982-12-22 | 1984-10-02 | Genentech Inc | |
| US4784949A (en) * | 1984-04-19 | 1988-11-15 | Cetus Corporation | Universal dominant selectable marker cassette |
| US5801038A (en) * | 1984-05-29 | 1998-09-01 | Genencor International Inc. | Modified subtilisins having amino acid alterations |
| US5077204A (en) * | 1984-06-21 | 1991-12-31 | Chiron Corporation | Yeast endopeptidase for basic amino-acid site cleavage, preparation and use |
| US5013653A (en) * | 1987-03-20 | 1991-05-07 | Creative Biomolecules, Inc. | Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage |
| JPH07108232B2 (ja) * | 1990-10-09 | 1995-11-22 | エム・ディ・リサーチ株式会社 | ペプチド又は蛋白質の製造方法 |
| ATE253639T1 (de) | 1991-08-19 | 2003-11-15 | Daiichi Suntory Pharma Co Ltd | Verfahren zur herstellung von peptiden |
| CA2327524C (en) | 1999-03-04 | 2010-02-02 | Suntory Limited | Method of controlling cleavage by ompt protease |
-
2004
- 2004-09-29 CA CA002540446A patent/CA2540446A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 JP JP2005514321A patent/JP4663524B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-29 CN CN2004800285250A patent/CN1860226B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-29 US US10/573,821 patent/US9657323B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-29 EP EP04773628A patent/EP1674567B1/en not_active Not-in-force
- 2004-09-29 AU AU2004276687A patent/AU2004276687B2/en not_active Ceased
- 2004-09-29 KR KR1020067005984A patent/KR101099398B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2004-09-29 ES ES04773628T patent/ES2398463T3/es active Active
- 2004-09-29 BR BRPI0414611-5A patent/BRPI0414611A/pt not_active Application Discontinuation
- 2004-09-29 RU RU2006114756/13A patent/RU2395582C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-09-29 WO PCT/JP2004/014704 patent/WO2005030956A1/ja active Application Filing
-
2006
- 2006-03-27 IL IL174588A patent/IL174588A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2540446A1 (en) | 2005-04-07 |
| KR101099398B1 (ko) | 2011-12-27 |
| JPWO2005030956A1 (ja) | 2006-12-07 |
| BRPI0414611A (pt) | 2006-11-07 |
| JP4663524B2 (ja) | 2011-04-06 |
| AU2004276687B2 (en) | 2011-07-14 |
| RU2395582C2 (ru) | 2010-07-27 |
| KR20060089724A (ko) | 2006-08-09 |
| CN1860226B (zh) | 2013-09-11 |
| IL174588A0 (en) | 2006-08-20 |
| AU2004276687A1 (en) | 2005-04-07 |
| WO2005030956A1 (ja) | 2005-04-07 |
| EP1674567A4 (en) | 2008-01-09 |
| US20070077617A1 (en) | 2007-04-05 |
| EP1674567B1 (en) | 2013-01-16 |
| CN1860226A (zh) | 2006-11-08 |
| ES2398463T3 (es) | 2013-03-19 |
| EP1674567A1 (en) | 2006-06-28 |
| IL174588A (en) | 2011-07-31 |
| US9657323B2 (en) | 2017-05-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SI2907521T1 (en) | New proNGF mutants and their uses in the production of beta-NGF | |
| CA2443365A1 (en) | Methods for the recombinant production of antifusogenic peptides | |
| NZ596787A (en) | Growth hormone polypeptides and methods of making and using same | |
| RU2017123283A (ru) | Партнеры по слиянию для получения пептидов | |
| DK1844150T3 (da) | Rekombinant ekspression af proteiner i en to-kædet form med disulfidbroer | |
| US8119369B2 (en) | Human SUMO-3 for enhancing protein expression | |
| JP2017536835A5 (ru) | ||
| NZ597685A (en) | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli | |
| KR890010199A (ko) | 활성화된 사람의 단백질 c의 직접 발현용 벡터 및 화합물 | |
| RU2002123286A (ru) | Слитый белок с увеличенной эритропоэтиновой активностью, нуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок, и способ получения слитого белка | |
| EP1392717A4 (en) | FAST CLEAVABLE SUMOFUSION PROTEIN EXPRESSION SYSTEM FOR HEAVY-TO-EXPRESS PROTEINS | |
| ATE400647T1 (de) | C-terminale modifikation von polypeptiden | |
| PE20212075A1 (es) | PROTEINAS DE FUSION Fc IL-22 Y METODOS DE USO | |
| PE20020857A1 (es) | Proteinas de fusion cuya parte del n-terminal es un derivado de hirudina para la produccion de proteinas recombinantes a traves de la secresion por levaduras | |
| Lan et al. | An improved nonchromatographic method for the purification of recombinant proteins using elastin-like polypeptide-tagged proteases | |
| JP2020529221A5 (ru) | ||
| CN110257347B (zh) | 硫氧还蛋白突变体、其制备方法及其在重组融合蛋白生产中的应用 | |
| GB0608368D0 (en) | Process for making Oligopeptides | |
| KR940019726A (ko) | 종양괴사인자- 알파 뮤테인 | |
| RU2006114756A (ru) | Способ расщепления полипептидов с использованием варианта протеазы омрт | |
| CA2324513A1 (en) | Chimeric protein containing an intramolecular chaperone-like sequence and its application to insulin production | |
| WO2007058267A8 (ja) | 新規タンパク質及びそれをコードする遺伝子 | |
| JP2003511014A5 (ru) | ||
| DK1597369T3 (da) | Anvendelse af caspaseenzymer til modning af manipulerede rekombinante polypeptidfusioner | |
| CA2327524A1 (en) | Method of controlling cleavage by ompt protease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140930 |