RU2006110264A

RU2006110264A - Способ получения живой культуральной вакцины против вируса гриппа

Info

Publication number: RU2006110264A
Application number: RU2006110264/13A
Authority: RU
Inventors: Лев Степанович Сандахчиев (RU); Лев Степанович Сандахчиев; Елена Августовна Нечаева (RU); Елена Августовна Нечаева; Николай Анатольевич Вараксин (RU); Николай Анатольевич Вараксин; бичева Тать на Геннадьевна Р (RU); Татьяна Геннадьевна Рябичева; Наталь Алексеевна Мазуркова (RU); Наталья Алексеевна Мазуркова; Станислав Георгиевич Маркушин (RU); Станислав Георгиевич Маркушин; Юрий Захарович Гендон (RU); Юрий Захарович Гендон; ева Ирина Борисовна Копт (RU); Ирина Борисовна Коптяева; Ирина Ивановна Акопова (RU); Ирина Ивановна Акопова
Priority date: 2003-06-18
Filing date: 2003-06-18
Publication date: 2007-10-10
Also published as: RU2330885C2

Claims

1. Способ получения живой культуральной гриппозной вакцины, включающий культивирование перевиваемых клеток MDCK в питательной среде, получение вируссодержащей субстанции путем культивирования вакцинных штаммов вируса гриппа в культуре клеток MDCK на этой же питательной среде, очистку вирусной субстанции от балластных примесей, введение в очищенную субстанцию стабилизирующих добавок и сушку готовой формы вакцины, отличающийся тем, что в качестве вирусных штаммов используют вакцинные холодоадаптированные реассортанты штаммов вирусов гриппа, в качестве питательной среды при культивировании клеток MDCK и штаммов вирусов гриппа на указанных клетках используют бессывороточную питательную среду с добавлением гидролизата сои в концентрации 0,01-10% и протеолитического фермента в количестве 0,25-50,0 мкг/мл до введения посевной дозы штаммов вирусов гриппа, а культивирование культур клеток MDCK и холодоадаптированных штаммов вируса гриппа в указанной культуре клеток осуществляют в суспензии на микроносителях, вносимых в бессывороточную питательную среду в концентрации 1-6 г/л.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве культуры клеток MDCK используют культуру, заложенную на хранение при температуре жидкого азота в виде посевного и рабочего банков и аттестованную на отсутствие посторонних вирусов, онкогенную потенцию и видовую идентичность.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве вакцинных холодоадаптированных реассортантов вируса гриппа используют вакцинные штаммы типа A/H3N2; A/H1N1 и типа В этого вируса.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что посевная доза перевиваемых клеток MDCK составляет 100-600 тыс. клеток на 1 мл среды.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что посевная доза вакцинных штаммов вируса гриппа имеет множественность заражения 0,01-0,0001 ЭИД₅₀/кл.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве протеолитического фермента используют протеолитический фермент растительного происхождения папаин.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве микроносителя используют Цитодекс 1.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что сбор вируссодержащей жидкости осуществляют после достижения специфической активности вируса гриппа не менее 8,0 lg ЭИД₅₀/мл.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что удаление балластных примесей из вирусной субстанции осуществляют фильтрованием.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве стабилизирующих добавок используют сахарозу и пептон из сои в конечной концентрации (5-10) и (3-8) мас.% соответственно.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что сушку вакцины осуществляют путем ее замораживания в течение 18 ч при температуре не выше минус 40°С с последующей лиофилизацией в течение 48 ч, причем, перед запайкой ампулы с вирусной вакциной заполняют инертным газом, в частности аргоном.