RU1836381C - Способ получени производных дипептидов или их фармакологически приемлемых солей - Google Patents

Abstract

Использование: в медицинской химии при получении соединений, обладающих способностью ингибировать ренин. Сущность изобретени : способ получени  производных дипептидов общей формулы R 1-C(0)-A-B-NH-CH(R2)CH(OH)CH2CH2 СН2рн-сн-рн С- где RI гетеро-(С1-С2)-алкил, гетеро- (С1-С2)алкоксигруппа, гетеро-меркап- то-(С.1-С2)-алкил, причем гетеро означает 5-6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу: R2 циклоалкил-()алкил-(Сг-С4); А и В независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты, св занный R или А с концевым атомом азота и с. В или- NH(R2)CH-CH(OH) (СН2)з с концевым атомом углерода, выбранный из группы: фенилаланин, гистидин. метионин, норва- лин, или их фармакологически приемлемых солей. Реагент 1: фрагмент, содержащий концевую арбоксильную группу или его реакционно-способное производное. Реагент 2: фрагмент, содержащий свободную аминогруппу . Полученный продукт, в случае необходимости , деблокируют. с/

Description

- Изобретение относитс  к получению биологически активных органических соединений и касаетс  способа получени  производных дипептидов, оказывающих тормоз щее действие на природный фермент ренин и виральные аспартилпротеазы.

Согласно изобретению получают производные дипептидов общей формулы i ОR2 ОН

R f С-А-В- N Н - СН- СИ-СН2СН2СН 2 где RI - гетеро-(С1-С2)-алкил, гетеро-(С1 C2J алкоксигруппу, гетеро-меркапто-(С1- С)-алкил, причем гетеро означает 5-7-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично

или полностью гидрированным, которое в качестве гетероатомов содержит атом азота и дополнительно гетероатом из группы азот, кислород, сера;

R2 (С4-С7)-Циклоалкил-(С1-С4)-алкил;

А и В независимо друг от друга означают св занный с RI или А - с концевым атомом азота и с В или NH-CHR2 CHOH-(CH2)3 - с концевым атомом углерода остаток аминокислоты из следующего р да: фенилаланин , гистидин, метионин, норвалин или норлейцин,

а также их физиологически приемлемые соли .

Согласно изобретению указанные соединени  получают взаимодействием фрагоо со о

СлЭ 00

W

мента с концевыми карбоксильными группами или его реакционноспособного производного с соответствующим фрагментом со свободной аминогруппой, при желании отщепл ют введенную временно дл  защиты других функциональных групп защитную группу (или группы) и полученное таким образом соединение при желании перевод т в его физиологически приемлемую соль,

Фрагменты соединени  формулы I с концевой карбоксильной группой имеют формулы Ilia, Ills и lite:

ff-соон VC-MHDH,

ОО

1ИаШьШс

Фрагменты соединени  формулы I с концевой аминогруппой имеют формулы IVa, IVenlVc: К2 ОН R3j

нгы-А-в-ын-сн-сн-сн-( щ

2 ОН R H2N-BHMH-CH-CH-CH-R4 уь

нгы-сн-сн-сн-РЦWcj

2 ОН R3

Предпочтительно дл  получени  амид- ной св зи используютс  следующие способы: Способ активного эфира с использованием N-оксисукцинимида или 1-оксибензотриа- зола в качестве эфирного компонента, сочетание с карбодиимидом, например дициклогексилкарбодиимидом, или ангидридом пропанфосфоновой кислоты и смешанный ангидридный метод с использованием пивалоилхлорида.

Дл  получени  использующихс  в качестве исходных соединений оптически активных аминов формулы IVc

$2 9Н -: HjN-ChbCH-CHsi

где R2 имеет указанные значени , в каче- стбе исходного материала берут оптически активные а-аминокислоты с центром асимметрии . Дл  получени  такой аминокислоты , котора  сохран ла бы центр симметрии, получают известным способом ее N-защи- щенный альдегид, который затем с помощью аналогичного альдольному присоединению способа сочетают с соответствующим гете- роалкильным структурным элементом. В результате , после отщеплени  М-эащитной группы, образуютс  аминоспирты формулы IVc.

Получают смесь диастереоизомеров относительно центра, св занного с ОН-груп- пой, которую затем раздел ют известным

способом, например путем фракционной кристаллизации или хроматографии, на отдельные изомеры. Контроль чистоты диастереоизомеров осуществл ют с помощью

высокопроизводительной жидкостной хроматографии , Чистоту энантиомеров можно контролировать известным способом путем перевода в Mosher-производные.

Аналогичную альдольному реакцию

0 присоединени  к N-защищенным альдегидам аминокислот (предпочтительно с N-трет-бутоксикарбонильными и бензилок- сикарбонильными защитными группами) провод т в среде инертного по отношению

5 к основани м растворител , например эфира , тетрагидрофурана, толуола, диметил- сульфоксида; диметилформамида или диметоксиэтана.

В качестве оснований дл  депротониро0 вани  гетероалкильных компонентов можно использовать ал кого  ты щелочных металлов , такие как 0-трет-бутилат кали , метилат натри , гидриды щелочных металлов, такие как гидрид натри  или кали , металлоорга5 нические основани , такие как н-бутилли- тий, втор-бутиллитий, метиллитий или фениллитий, амид натри , а также соли щелочных металлов органических азотистых оснований, например диизопропиламида

0 лити .

Необходимые дл  получени  соединений формулы I предварительные и окончательные операции, такие как введение и отщепление защитных групп,  вл ютс  из5 вестными, Соли соединений формулы 1 с солеобразующими группами получают изве- стными способами, например путем взаимодействи  соединени  формулы I с основной группой со стехиометрическим

0 количеством подход щей кислоты. Смеси стереоизомеров, в частности смеси диастереоизомеров , образующиес  при использовании в качестве исходного материала рацемических аминокислот А или В, могут

5 быь разделены на отдельные изомеры известным образом, путем фракционной кристаллизации или хроматографии.

Под физиологически приемлемыми сол ми соединений формулы I понимают соли

0 как органических, так и неорганических кислот .

Соли соединений формулы I получают взаимодействием эквимол рных количеств соединений формулы (I) и пригодной кисло5 ты (сол ной, серной, уксусной, малеиновой, винной и т.д.) или пригодного основани  (гидроокиси натри , кали , аммони , триэ- тиламин, морфолин и т.д) в инертном растворителе (ацетон, CHaClz, ЕЕ и т.д). Если соль не кристаллизуетс , ее получают в

аморфном виде путем вымораживани  водного раствора.

Предлагаемые в соответствии с насто щим изобретением соединени  формулы I обладают способностью тормозить действие ферментов. В частности, они тормоз т действие природного фермента ренина. Ренин представл ет собой протеолитический фермент класса аспартилпротеаз, который в результате воздействи  различных раздражителей (истощение объема, дефицит натри , / -рецепторна  стимул ци ) выдел етс  в кровь юкстагломерул рными клетками почек. Там он отщепл ет от выдел ющегос  из печени ангиотензиногена де- капептид ангиотензин I. Последний под действием Angiotensin converting ensyme (АСЕ) переводитс  в ангиотензии II. Ангиотензин II играет важную роль при регулировании кров ного давлени , так как непосредственно повышает его за счет ан- гиоспазма. Кроме того, он стимулирует выделение альдостерона из надпочечников и увеличивает благодар  этому через торможение выделени  натри  внеклеточный объем жидкости, что, в свою очередь, способствует повышению кров ного давлени . Ингибиторы ферментной активности ренина способствуют снижению количества образующегос  ангиотензина I, что приводит и к уменьшению количества образующегос  ангиотензина II. Уменьшение концентрации этого активного пептидного гормона  вл етс  непосредственной причиной снижени  кров ного давлени , вызываемого действием ингибиторов ренина.

Активность ингибиторов ренина может быть определена в опытах in vitro. Дл  этого определ ют уменьшение количества образующегос  ангиотензина в различных системах (человеческа  плазма, очищенный человеческий ренин)..

1.Принцип испытаний.

К примеру, человеческую плазму, содержащую как ренин, так и ангиотензино- ген, выдерживают при 37°С с испытуемым соединением. При этом под действием ренина из ангиотензиногена выдел етс  в свободном виде ангиотензин I, количество которого может быть затем определено с помощью обычного радиоиммунного анализа . Выделение ангиотензина тормозитс  ингибиторами ренина.

2.Получение плазмы.

Берут кровь у добровольных пробандов (около 0,5 л у человека; прибор дл  вз ти  крови фирмы ASID Вопз and Sohn, UmeirschHibheim) и охлаждают ее льдом в частично вакуумированных скл нках. Дл  предотвращени  свертывани  к крови добавл ют ЭДТА (конечна  концентраци  10 ммоль). После центрифугировани  (Rotor HS4 (Sorvall). 3500 об/мин, 0-4°С; 15 мин; повторение в случае необходимости) плазму 5 осторожно отбирают пипеткой и замораживают подход щими порци ми при -30°С. В опытах используют тольку плазму с достаточно высокой активностью ренина. Плазму с низкой активностью ренина активируют 0 путем обработки при низких температурах (-4°С, 3 дн ) (прорёнин при этом переходит в ренин).

3. Проведение испытаний. Ангиотензин I определ ют с помощью 5 набора Penin-Mala. Инкубацию плазмы провод т по приведенной в наборе инструкции . Смесь, подвергаема  инкубации:

1000 мкл плазмы (после оттаивани  при 0-4°С)

0100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4) с

добавкой 10 М Ramlprilat 10 мкл раствора PMSF 10 мкл 0,1 % Genapol PFIC 12 мкл ДМСО или испытуемого препа- 5 рэтэ

Испытуемые препараты раствор ют в 100%-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) и разбавл ют ДМСО таким образом, чтобы конечна  концентраци  их равн лась . 0 Смесь дл  инкубировани  должна содер- . жать не более 1% ДМСО. Приготовленные дл  инкубировани  смеси смешивают со льдом и помещают на 1 ч дл  инкубации в вод ную баню (37°С). Из дополнительной 5 смеси, не содержащей ингибитора, не провод  инкубацию, отбирают 6 проб по 100 мкл дл  определени  исходного содержани  аногиотензина f в используемой плазме.

Концентрации испытуемых препаратов 0 выбирают таким образом, чтобы перекрыть область примерно 10-90%-ного торможени  фермента (как минимум 5 концентраций ). В конце инкубировани  из каждой смеси отбирают по три пробы по 100 мкл, 5 замораживают их в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа на сухом льду и сохран ют до определени  ангиотензина I при температуре около -25°С (берут среднее значение из трех определений) 0 Радиоимунный анализ (RIA) ангиотензина I.

Анализ провод т точно по инструкций, . содержащейс  в наборе RIA.

Калибровочна  крива  охватывает 5 интервал концентраций энгиотензина I 02- 25,0 нг/мл. Исходное содержание ангиотензина I в плазме вычитают из всех измеренных значений. Активность ренина в плазме (PRA) выражают в нг Anq 1/мл.ч. Значени  PRA в присутствии испытуемых

соединений соотнос т со смесью, не содержащей ингибитора (100%), и выражают в % остаточной активности. Из графика зависимости % остаточной активности от концентрации (М) испытуемого препарата (логарифмическа  шкала) определ ют значени  ICso.

Описанные в насто щем изобретении соединени  общей формулы I оказывают тормоз щее действие в опытах in vitro при концентраци х примерно - мол/л.

Ингибиторы ренина способствуют снижению кров ного давлени  у животных с пониженным содержанием солей. Поскольку человеческий ренин отличаетс  от ренина других видов, то дл  опытов с ингибиторами ренина in vivo использовали приматов (игрунков , макак резус). Ренин приматов и человеческий ренин  вл ютс  гомологами. Путем внутривенной инъекции фуросемида вызывают эндогенное выбрасывание ренина . Затем животных ввод т испытуемые соединени  и определ ют их действие на кров ное давление и частоту сердечных сокращений . В результате опытов установлено , что соединени  в соответствии с насто щим изобретением про вл ют активность при внутривенном введении при дозе пор дка 0,1-5 мг/кг, з при интрадуоденаль- ном введении через гастроскоп - при дозе около 1-50 мг/кг.

Описанные в насто щем изобретении соединени  общей формулы могут использоватьс  в качестве средств, снижающих артериальное давление, а также дл  лечени  сердечной недостаточности.

HlV-протеаза автокэталитически выдел етс  из GAG-POI -полипептида и расцепл ет затем пептид-предшественник р55 на Согетантигены р17, р24 и р14. Она, таким образом,  вл етс  важным ферментом, торможение которого прерывает жизненный цикл указанного вируса и преп тствует его размножению.

В ходе биологических опытов установлено , что соединени  в соответствии с насто щим изобретением оказывают тормоз щее действие на ферменты, а также ингибируют вирусные ферменты, такие как HIV-протеа- зу. Особенно важное значение имеет их ингибирующее действие на HIV-протеазу, что позвол ет использовать соединени  в соответствии с насто щим изобретением дл  лечени  и профилактики болезней, вызываемых инфекцией HIV. В опытах установлено , что предлагаемые в соответствии с насто щим изобретением соединени  общей формупы I оказывают тормоз щее действие при концентраци х пор дка 10 - моль/л.

Соединение формулы I примен ют дл  получени  лекарственных препаратов дл  лечени  высокого кров ного давлени , застойной сердечной недостаточности, а также дл  лечени  и профилактики вирусных заболеваний, в частности болезней, вызываемых HIV.

П р и м е р 1. М-(2-Аминотиазол-4-ил-аце- тил)-1 -Рпе Ц-1Чуа-(1-5-циклогексил-метил0 25-окси-5-{2-пиридил))-н-пентиламид.

100 мг М-(М-трифенилметил-2-аминоти- азол-4-ил-ацетил)-ЬРНе-1 -Муа-(1 -S-цикло- гексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пен- тиламида перемешивали в течение 5 ч при

5 R.T. в смеси муравьиной кислоты и воды в соотношении 5:1. После этого отсасывали выпадающий осадок трифенилметанола, промывали его холодной водой и упаривали водный раствор в вакууме. Остаток раство0 р ли в уксусноэтиловом эфире и дважды промывали разбавленным раствором NaHCOs до нейтральной реакции, после чего промывали насыщенным раствором NaCI, высушивали на MgSO/i, отфильт5 ровывали от осушител  и упаривали. Выход 57 мг. Температура плавлени : 87°С. MS(FAB): 664 (М++1).

П р и м е р 2. М-(Ы-трифенилметил-2-ами- но-тиазол-4-ил-ацетил)-1 -Рг1е-1 -Муа-(1-30 циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил)) -н-пентиламид.

262 мг №-(М-трифенилметил-2-аминоти- азол-4-ил-ацетил)-1-фенилаланина раствор ли с 81 MrHOBt, 109мг ОССи67мкл NEM

5 в 5 мл DMF и перемешивали раствор в течение часа при R.T. После этого добавл ли к реакционной смеси 180 мг М-норвалин-(1-5- циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пиридил)) -н-пентиламида, растворенного в 2 мл DMF.

0 Смесь перемешивали в течение 48 ч при R.T. Затем ее разбавл ли водой, отфильтровывали выпадающий осадок дициклогексилмоче- вины, а раствор упаривали в вакууме. Остаток раствор ли в уксусноэтиловом эфи5 ре и трижды промывали насыщенным раствором МаНСОз, дважды насыщенным раствором NaCI, затем высушивали над MgS04 и упаривали. После хроматрграфи- ческой очистки на силикагеле (CHaCla/Me0 ОН 20:1) получали 210мг целевого продукта. Температура плавлени : 75°С. MF(FAB): 906 (М++1). .

П. р и м е р 3. М-(М-Трифенилметил-2- аминотиазол-4-ил-ацетил)-1-фенила ланин

5 а). 3,2 г М-трифенилметил-2-аминотиазол-4- ил-уксусной кислоты. 1,34 г HOBt, 1,81 г DCC, 1,48 г L-Phe-Оме и 1 мл М-этилморфо- лина раствор ли в указанной последовательности в 30 мл абсолютного DMF и перемешивали раствор в течение ночи. Ч ере: .ч 2Л ч реакционную смесь разбавл ли небольшим количеством воды, отфильтровывали выпадающий осадок дициклогек- с и л мочевины и полученный раствор упаривали в вакууме. Остаток раствор ли в уксусноэтиловом эфире и трижды промывали разбавленным раствором NaHCOa, дважды 10%-ным раствором лимонной кислоты и дважды насыщенным раствором NaCI. Органическую фазу высушивали над MgS04, после чего упаривали. После очистки с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси циклогексана и ЕЕ получали 3.6 г метилового эфира в виде мае- л нистой жидкости.

в) 3,4 г полученного по пункту (а) метилового эфира в 30 мл смеси диоксана и воды в соотношении 1:1 перемешивали в течение 3 ч при R.T. с эквимол рным количеством 1-нормального раствора едкого натра. После этого из реакционного раствора удал ли в вакууме диоксан, подвергали его экстракции диэтиловым эфиром, водную фазу подкисл ли до рН 3 и трижды подвергали экстракции уксусноэтиловым эфиром. Органическую фазу высушивали над MgS04, осу- шитель отфильтровывали, а раствор упаривали в вакууме. Выход бесцветного твердого вещества 2.7 г. Температура плав- лени  205-208°С.

Примера. N-трет-Бутоксикарбо.нил- норвалил-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси- -5-(2-пиридил))-н-пентиламид:

2,1 г М-трет-бутоксикарбонил-норвали- на, 1,6гНОВг, 2,1 гОССи 1,4 мл N-этилмор- фолина раствор ли в 50 мл абсолютного DMF. К приготовленному раствору добавл ли при 0°С 2,6 г 2-3-амино-1-циклогексил-3- 5-окси-6-(2-пири дил)-гексана, растворенного в 5 мл DMF. Раствор перемешивали в течение 48 ч при R.T. После этого к реакционной смеси добавл ли 5 мл воды, отфильтровывали ее от выпадающего осадка дициклогексилмочевины и разбавл ли 150 мл уксусноэтилового эфира. Эту фазу трижды экстрагировали насыщенным раствором МаНСОз, дважды насыщенным раствором NaCI и дважды водой. Органическую фазу высушивали над MgSO/q и упаривали в вакууме, после чего подвергали хроматографии на силикагеле, использу  в качестве подвижной фазы смесь CHaCte и МеОН. В результате получали 3,56 г продукта в виде в зкой масл нистой жидкости. Угол оптиче- ского вращени : -47.4° (с 1.135. метанол ), MS (FAB): 476 (М+ +1).

П р и м е р 5.L-Nva-O-S-Циклогексилме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-н-пентиламид.

200 мг описанного в примере 1 соединени  раствор ли при 0°С в 3 мл трифгорукСуСНОЙ КИСЛОТЫ И ПРОВОДИЛИ paCTROpCHHf О

течение 30 мин. После нагревани  до R.T. избыток трифторуксусной кислоты отгон ли в вакууме, остаток раствор ли в уксусноэтиловом эфире и трижды подвергали полученный раствор экстракции разбавленным раствором МаНСО,э, Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCI и водой, высушивали над , отфильтровывали осушитель и упаривали. В результз те получали масл нистую жидкость. Полученное таким образом производное аминокислоты с защищенным концевым атомом азота очень быстро использовали дл  последующего синтеза. MS (FAB) : 376 (М++1).

П р и м е р 6. М-(5-4-Пиридил)-меркапто- ацетил)-1 -фенилаланин.

Целевое соединение получали из (4-пи- ридил)-меркаптоуксусной кислоты и метилового эфира L-фенилаланина описанным в примере 3 способом. Температура плавлени  199-201°С. 1Н-ЯМР (60 МГц, dfi-DMSO): (,05 (2Н. СН2); 3.8 (2Н. СН2СО)4,5(м. 1Н. С-Н), 7,30 (с, 5Н, фенил); 8,0-8,7 (м. 4Н, пиридил) MS (DCI): 317 (М + 1).

П р и м е р 7. М-(3-(4-Пиридил)-меркэп- тоацетил)-1 -Рг е- --Муа-(1-5-циклогексилме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 6 производного фенила- ланина и описанного в примере 5 производного норвалина по примеру 2. MS (FAB): 674 (М+ +1).

Пример8. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-L-Phe-L-N va-0 H.

Целевое соединение получали из N-(2- пиридил)-этоксикарбонил-1 -фенилаланина и L-Mva-OMe по примеру За с последующим омылением сложного эфира в соответствии с примером Зв. MS (FAB) : 414 (М4 +1).

П р и м е р 9, №-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-Ь-Рг1е-1 -Муа-(1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 8 дипептида и 2-S- амино-1-5-циклогексил-3-5-окси-6-(2-пири дил)-гексэна по примеру 4. MS (FAB): 672 (М + 1).

П р и м е р 10. М-(3-Пиридил)-этоксикар- бокил-Ь-РЬе-Ь-Ыуа-(1-5-циклогексилметил- 2 -5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-(3- пиридил)-это)ссикарбонил-и-РКе и описанного в примере 5 соединени  по примеру 2. Температура плавлени  46--50nC. MS (i:AB): 672 (М+ + 1).

ПримерИ. 1 Н4-Пиридил)-этоксикар- бонил-1-Рг1е-1.-Муа-(1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-{2-пиридил)))н-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-(4- пиридил)-этоксикарбонил-1 -Рг1е и описан- ного в примере 5 соединени  по примеру 2. MS (FAB): 672(М+ +1).

П р и м е р 12. Fmoc-His (Тгт)-(1-5-цикло- гексилметил-2-8-окси-5-(2-пиридил))-н-пен- тиламид.

1,2 г Fmoc-Hls (Trt)-OH, 340 мг HOBt, 445 г DCC и 0,3 мл NEM раствор ли в 11 мл DMF и перемешивали полученный раствор в течение часа при R.T. Смесь затем смешивали с 580 мг 2-5-амино-1-5-циклогексил-3- 5-окси-6-(2-пиридил)-гексанэ, растворенного в 4 мл DMF, и перемешивали в течение ночи. После добавлени  5 мл воды отфильтровывали выпадающий осадок мочевины , а фильтрат раствор ли в 100 мл уксусноэтилового эфира. Органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором МаНСОз и два раза расыщенным раствором NaCI, после чего высушивали над и после фильтрации упаривали в ва- кууме. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле (CH2Cl2/MeOH). Выход целевого соединени  1,06 г. Температура плавлени  85°С.

П р и м е р 13. H-His (Тгт)-(1-5-циклогек- силметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентил- амид.

500 мг описанного в примере 12 соединени  раствор ли в 5 мл абсолютного DMF вместе с 0,6 мл диэтиламина и перемешива- лм раствор в течение 20 мин при R.T. После этого растворитель отгон ли в глубоком вакууме , а остаток подвергали хроматографии на силикагеле, использу  в качестве подвижной фазы смесь CHzCte и МеОН. В результате получали 320 мг целевого соединени .

MF(FAB); 656(M++1). П р и м е р 14. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1-РЬе-1-Н 8(Тп)-(1-5-циклогекси ме- тил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

157 мг 2-Pyoc-L-Phe 85 мг HOBt, 113 мг DCC и 70 мкл NEM раствор ли в 5 мл DMF и полученный раствор смешивали с раствором 310 мг соединени , полученного в при- мере 13. в 3 мл DMF. Смесь перемешивали в течение 58 ч и далее процесс проводили так же, как в примере 12. В результате получали 265 мг целевого соединени . MS (FAB) :953(М4 + 1).

П р и м е р 15. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1 -Рг1е-1-Н15-{1-5-циклогексилметил- 2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

115 мг соединени , полученного в соответствии с примером 14. перемешивали в

течение 1.5 ч с 2.5 мл трифторуксусной кислоты . После этого избыток кислоты удал ли в вакууме, а остаток раствор ли в уксусноэ- тиловом эфире и нейтрализовывали разбавленным раствором ЫаНСОз. Эфирный раствор высушивали над MgSO, фильтровали и упаривали в вакууме. После хроматографии остатка на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси CH2CI2 и МеОН получали 57 мг целевого продукта. Температура плавлени  68°С. MS(FAB):710(M++1).

П р и м е р 16. 2-Руос-1-метионин.

6 г 2-(2-пиридил)-этил-п-нитрофенил- карбоната и 2,5 г L-Met-OMe раствор ли в 60 мл ацетонитрила, смешивали полученный раствор с 1-нормальным раствором NaOH до достижени  рН 8,5 - 9,0 и перемешивали смесь до окончани  реакции (контроль с помощью тонкослойной хроматографии ). Затем ацетонитрил отгон ли в вакууме и водный раствор реакционной смеси экстрагировали диэтиловым эфиром при рН 9, затем при рН 6 и после дальнейшего подкислени  1 н.НС при рН 3. В результате последней экстракции получали целевой продукт, который подвергали очистке с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, использу  в качестве элюен- та смесь CH2CI2 и ЕЕ. Выход 2,43 г. 2,2 г полученной таким образом масл нистой жидкости раствор ли в 30 мл смеси этанола и воды с соотношением 2:1 и смешивали с 585 мг твердого NaOH. Через 2 ч этанол отгон ли в вакууме, рН водного раствора устанавливали равным 3 и упаривали его в вакууме. Остаток смешивали с ацетоном и органический раствор отдел ли от нерастворимых компонентов. После высушивани  и упаривани  раствора получали 1,89 г целевого соединени . Угол вращени  щу -9,4° (, этанол).

Пример17. М-(2-Пиридил)-этоксикар- бонил-1 -Ме1-1 -Муз-(1-5-циклогексилметил- 2-3-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Проводили реакцию между 167 мг 2-Ру- oc-Met-OH и 190 мг соединени , полученного в соответствии с примером 5, по примеру 2. После описанной в этом примере переработки и хроматографии получали 64 мг целевого соединени . Температура плавлени  104 - 105°С. MS (FAB) : 657 (М4 4-1).

П р и м е р 18. 4-Пиридилметил-4-нитро- фенилкарбонат.

20,3 г п-нитрофекилового эфира хлор- муравьиной кислоты раствор ли в 150 мл абсолютного ChteCte и охлаждали раствор в атмосфере N2 до 0°С. К приготовленному раствору добавл ли 520 мг 4-диметилэми- нопиридин  (D MAP) и з тем по капл м раствор tO г 4-оксиметилпиридина в 50 мл абсолютного CHaCla. Смесь перемешивали в течение ночи при R.T. и отфильтровывали выпадающие кристаллы, которые перекри- сталлизовывали из свежего CH2CI2 при вы- сокой температуре и после охлаждени  снова отфильтровывали. Выход 17,5 г. Температура плавлени  150-154°С.

П р и м е р 19. N-4-Пиридилметоксикар- бонил-Ьфенилаланин.

8 г 4-пиридилметил-4-нитрофенилкар- боната и 4,82 г L-фенилаланина раствор ли в 350 мл смеси ацетонитрила и воды, вз тых в соотношении 1:1, и смешивали раствор примерно с 45 мл 2 H.NaOH до достижени  рН 10. Смесь перемешивали в течение ночи, после чего отгон ли ацетонитрил в вакууме. рН водного раствора устанавливали равным 6, трижды промывали раствор диэтиловым эфиром, после чего его рН устанавливали равным 1 и упаривали до получени  твердого остатка. Этот остаток раствор ли в воде, экстрагировали уксусноэтиловым эфиром, устанавливали рН равным 2 и отсасывали выпадающий осадок. Масса осадка после высушивани  7,3 г. Температура плавлени  195-197°С.

Таким же образом, как в случае соединени , описанного в примере 19, получали следующие соединени .

Пример 20. М-(2-(К1-Фталимидил)-эток- сикарбонил)-1 -фенилаланин.

Температура плавлени  65-72°С,

П р и м е р 21. Гидрохлорид М-(3-пири- дилэтоксикарбонил)-1 -фенилаланина.

Температура плавлени  105°С,

П р и м е р 22. Гидрохлорид Ы-(2-пири- дил.этоксикарбонил)-1 -метионин-сульфона.

Температура плавлени  48°С.

П р и м е р 23, М-(4-Пиридилэтоксикар- бонил)-1 -фенилаланин.

Температура плавлени  196 - 204°С (с разложением).

П р и м е р 24. Ы-(М-трет-Бутоксикарбо- нил-4-пиперидил)-этоксикарбонил-1 -фенил- аланин,

MS(DCI):421 (М++1).

П р и м е р 25. М-(Н-трет-Бутоксикарбо- нил-2-пиперидил)-этоксикарбонил-1 -фенил- аланин.

Температура плавлени  52°С.

П р и м е р 26. М-)2-4-Морфолино)-это- ксикарбонил)-1 -фенилаланин.

MS (DCI) : 323 (М+ + 1), температура плавлени  66°С (сублимаци ).

П р и м е р 27. М-(2-(М-Метилпирроли- дин-2-ил)-эт.оксикар6онил)1--фенилаланин.

MS(DCI):321 (М 1).

П р и м е р 28. М-(2-{4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил) фенилаланин.

MS (DCI): 421 (М + 1). температура плавлени  85°С.

Таким же образом, как и в случае соединени , описанного в примере 17, получали следующие соединени :

П р и м е р 29.1Ч-(2-(М-Фталимидил}-эток- си карбон nn)-L-Phe-L- Nva-(i-S-циклоге ксил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентила- мид,

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 20 и 5 по примеру 2.

Температура плавлени  57-62°С; MS (FAB):740( 1).

П р и м е р 30. М-(3-Пиридилэтоксикар- бонил)-1 -РЬе-1 -Н 5-(1-5-циклогексилметил- -2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.MS (FAB): 709 (М + 1).

П ри мер31. К1-(2-Морфолин-4-ил)-эток- сикарбонил-и-РЬе-Ь-Муэ-(1-5-циклогексил метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентила- мид.

MS(FAB):(M++1).

Пример 32. М-(2-(М-Метилпирроли- дин-2-ил))-этоксикарбонил)-1 -РЬе-1-Ы а-(1 -5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пири- дил))-н-пентиламид.

Температура плавлени  115- 125°С; MS (FAB): 678 (М++ 1); Pg 0,52 (СН2С 2/СНзОН/ /Н20/СНзСООН 100/50/10/5).

П р и м е р 33. М-(2-(4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил)-Ь- РЬе-1 -Муэ-(1-3-циклогексилмешл-2-3-окси -5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

MS (FAB): 779 (М+ + 1).

Пример 34. М-(2-(2-Пиридил)-этокси- карбонил)-Ь-метионинсульфон-1-норвалин- (1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2-пири- дил))-н-пентиламид.

Температура плавлени  79 - 81 °С: MS (FAB): 689 (М4 + 1).

П. р и м е р 35. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-2-пиперидин)-этоксикарбонил) -1 -Муа-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5- (2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 5 и 24 по примеру 2.

MS (FAB) : -778 ( +1); температуре плaвлeни   59 - 61°С.

П р и м е р 36. М-(2-(2-Пиперидил)-эток- сикарбонил)-ЬРЬе-1-Ыуа-(1-5-циклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 34 соединени  по примеру 5 с последующей хроматограФической очисткой на силикагеле.

MS (FAB) : 678 (M+ + 1); Rg 0,30 (CH2Ci2/MeOH, 9:1).

ft p и м е р 37. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-4-пиперидил)-этоксикарбонил) е- -Муа-( -5-циклогексилметил-2-5-окси-5- (2-пиридил)-пентиламид,

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 23 и 5 по примеру 2.

MS (FAB) : 778 (М+ + 1); температура плавлени  65-72°С.

П р и м е р 38, М-(2-(4-Пиперидил)-эток- сикарбонил)-1 -Рпе-1 - Муа-(1-5-циклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил)-пентиламйд.

Целевое соединение получали из описанного в примере 36 соединени  по примеру 5 с последующей хроматографической очисткой на силикагеле.

MS (FAB) : 678 (М+ +1); Rg 0,22 (СН2С 2/метанол, 9 :1).

П р и м е р 39. М-(2-(М-трет-Бутоксикар- бонил-2-пиперидил)-этоксикарбонил) L- РНе-ЬН18-(1-3-циклогексилметил -2-S- -окси-5-(2-пиридил)-пентиламид.

Температура плавлени  98°С (с разложением ); MS (FAB) : 817 (М + 1); Rg 0,33 (СН2С12/СНзОН,9:1).

П р и м е р 40. М-(2-(2-Пиперидил)-эток- сикарбонил-Ь-Рпе-1 -Н1з-(1-5-циклогексйл метил-2-8-окси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

MS(FAB):717(M++1).

Пример41. М-(2-Морфолин-4-ил)-эток- сикарбонил-1 -Рпе-1.-Н18-(1-5-цйклогексил- метил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

Температура плавлени  70-81°С; MS (FAB): 718 ( 1); Rg 0,72 (СН2С12/СНзОН, 9:1).

П р и м е р 42. М-(2,2,5,5-Тетраметил-1,3- тиазолидин-4-ил-карбонил)-1 -фенилаланин- 1 -норвалил-(1-5-циклогексилметил-2-5-ок- си-5-{2-пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединени , описанного в примере 5, и N-(2,2,5,5,- тетраметил-1,3-тиазолидин-4-ил-карбонил) -L-фенилаланина по примеру 2.

MS FAB (: 695 (М4 + 1); Rg 0,51 (СНааа/СНзОН).

П р и м е р 43. М-(2-(4-трет-Бутоксикар- бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил -L- РЬе-и-Н1з-(1-5-циклогексилметил-2-5-окси- 5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 13 и 28 по примеру 2.

MS (FAB) : 817 (М+ + 1): температура плавлени  82-89°С.

П р и м ё р 44. М-(2-Пиперазин-1-ил)- этоксикарбонил)-ЬРНе-ЬН18{1-5-циклогек- силметил-2-5-окси-5-(2-пиридил))-н-пентил- амид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примером 43 по примеру 5.

MS(FAB):717(M++1).

П р и м е р 45. М-Никотиноил-L-Phe-LН1з- (1-5-циклогексилметил-2-5-окси-5-(2- пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из М-ми- котиноил-и-фенилаланина и описанного в примере 5 соединени  по примеру 14. Полученный таким образом продукт обрабатывали СРзСООН по способу в соответствии с примером 15. После хроматографической очистки получали 412 мг целевого соедине- ни .

MS(FAB): 666(М + 1); температура плавлени  103-110°С; Rg 0,18 (CHaCla/CHaOH, 9:1).

Ниже представлены значени  ICso дл  соединений согласно изобретению.

Пример 12,6

2160

71,4

90,7

100,22

11.0,24

152,0

1716

290,21

321,5

34520

350,16 (диастереомеры)

360,42 37 0,24

381,5

390,14

413,1

4222 43 1,9

441,6 . :451 ,7

По известному уровню техники описаны только соединени , структура которых зна- чительно отличаетс  от структуры соединений по изобретению.

Известны пептиды, например, следующего типа:

Эти соединени  содержат ВОС-защит- ные группы на С-конце молекулы и нециклическую группу на С-конце молекулы.

Вышеуказанное соединение имеет величину индекса 1Сбо)1.0 . Вследствие наличи  ВОС-защишенной Фенилаланингруппы это соединение не ресорбируетс  орально.

Соединени  из примере 35 данной за вки (ICso 0,16) в различных дозировках испытывали на Phesusaffen,

При дозе 24 кг/кг кров ное давление понижалось на 25% за 90 мин, что подтверждает активность соединений In vivo,

Соединени  согласно изобретению содержат на N-концах молекулы менее липо- фильных -групп (гетероциклы), чем соединени  по известному уровню техники.

Несмотр  на наличие этих пол рных остатков производные аминокислот, раскрытые в данной за вке, ресорбуруютс  орально.

Соединени  по изобретению оцениваютс  как нетоксичные.

20

Формул а изобретен и  

Способ получени  производных дипеп- тидов общей формулы I

ОR, ОН

.-

RfC-A-BiNH-CH-CH-CH2CHzCM2-f325

0

5

0

5

где RI -гетероЧС1-Са)-алкйл, гетеро-{С1-С2)- алкоксигруппа, гетеро-меркапто-{С1-С2)-ал- кил, причем гетеро означает 5-6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу;

R2 - циклоалкил-(С4-Ст}-алкил-(С1-С7);

А и В - независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты, св занной с RI или А с концевым атомом азота и с В или -NH(R2)CH-CH(OHXCH2)3 с- концевым атомом углерода, выбранный из группы: фени- лалаййн, гистидин, метионин, норвалин, или их фармакологически приемлемых солей , отличающийс  теМ| что осуществл ют взаимодействие соответствующих фрагментов, один из которых содержит концевую карбоксильную группу или его реакционно-способное производное, а другой фрагмент имеет свободную аминогруппу и, в случае необходимости, защитные группы удал ют и целевой продукт выдел ют в свободном виде или в виде фармакологически приемлемой соли,