RU1834639C

RU1834639C - Способ получени гербицида корнексистин или соответствующей с разомкнутым кольцом кислоты, или ее соли

Info

Publication number: RU1834639C
Application number: SU4355637A
Authority: RU
Inventors: Ханеиси Татсуо; Накаяма Мутсуо; Кои Киеси; Фуруя Кохеи; Ивадо Сенго; Сато Садао
Original assignee: Санкио Компани Лимитед
Priority date: 1987-04-27
Filing date: 1988-04-26
Publication date: 1993-08-15
Also published as: DE3875792T2; ATE82327T1; GR3006793T3; US4897104A; ZA882931B; EP0290193B1; KR960012212B1; CA1328632C; KR880012580A; CN88102530A; US4990178A; HUT48307A; ES2052714T3; DE3875792D1; CN1028712C; HU200798B; EP0290193A1

Description

Корнексистин плохо растворим в воде. Однако, при обработке водой, предпочтительно водой с величиной рН более 4,1, и еще предпочтительнее более 7, он может легко превращатьс в кислотное соединение , представленное формулой (II), приведенной выше, которое растворимо в воде и которое может образовывать одно- или двухосновные соли, в зависимости от величины рН. Образуемое кислотное соединение . может быть экстрагировано несмешиваемым с водой органическим растворителем , таким как этилацетат, при кислотном значении рН, например, при значении рН от 3 до 4. В этом случае оно превращаетс в корнексистин, представленный первоначальной структурной формулой (I).

Корнексистин имеет физико-химические свойства, приведенные ниже:

(1)Внешний вид: жирорастворимые бесцветные иглы;

(2)Точка плавлени : 100-103°С;

(3)Удельное вращение: а о23 +168,3° (С 1,0. );

(4)Молекул рна формула: CigHaoOe;

(5)Молекул рный вес: 308;

(6)Спектр ультрафиолетового поглощени Амакс НМ (EicM1);

Спектр ультрафиолетового поглощени , определ емый в метаноле, показывает максимальное поглощение при 238 нм (131);

(7)Спектр инфракрасного поглощени , vM3Kc (KB) см 1: 3400, 3300, 2900, 1850, 1820, 1760. 1710, 1640, 1440, 1300, 1260, 1220, 1160,1060,1000,920,800,760;

(8)Спектр аротонного дерного магнитного резонанса ( н ЯМР) vMaKc:

Спектр 1Н-ЯМР (270 МГц), определ емый в т желом хлороформе с использовани- ем тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта, приведен ниже:

0,93 (ЗН, триплет);

1,29 (2Н, мультиплет);

1,70 (ЗН, дублет);

1,90-2,1 (2Н, мультиплет);

2,57 (1Н, дублет дублетов);

3.1-5(1 Н. дублет);

3,4 (1 Н, мультиплет);

4,07 (1Н, дублет);

5,12 (1Н, дублет дублетов);

5,85 (1 Н, дублет дублетов),

(9)Растворимость: Растворим в этаноле, ацетоне, этилацетате, хлороформе; почти нерастворим в воде; и нерастворим а гексане;

(10)Цветные реакции: положительны к серной кислоте и перманганату кали ;

(11)Тонкослойна хроматографи : Rf 0.43;

0

Адсорбент: силикагелева пластина №

5715 (продукт фирмы Мерк энд Ко., Инкорп .); про вл ющий растворитель: бензол:метанол:уксусна кислота (8:1:1 по

объему);

(12) Биологическа активность:

Корнексистин обладает ингибирующим прорастание действием на семена высших растений, гербицидной активностью и регулирующим рост растений эффектом.

Корнексистин получают путем культивировани выделенного штамма Paecflomyces variotii Bainier SANK (21086 PERM BP-1351), который также охватываетс насто щим изобретением.

Новый вы вленный микроорганизм Paecilomyces variotii Bainier SANK 21086 FERN BP-1351 представл ет собой несовершенный гриб, который был выделен из экскрементов олен . Он имеет следующие микологические свойства.

Он очень хорошо растет на агаровой среде мальтового экстракта и колони его достигает диаметра от 35 до 43 мм после выдержки культуры при 24°С в течение семи дней. Поверхность колонии сначала окрашиваетс в соломенно-желтый цвет 3 В4 и вл етс бархатистой. Центр этой поверхности выступает. По мере развити культуры она становитс зеленовато-желтого цвета 3 С4, и поверхность становитс слегка порошкообразной. Обратна сторона колонии окрашиваетс в серовато-оранжевый цвет 5 ВЗ. (Название цвета, приведенное

0

5

0

5

0

5

выше, соответствует названи м из справочника The Methuen Handbook of Colour A. Kornerup и J.H. Wanscher, 1978, опубликованного Eyre Methuen, Лондон, Англи ). На агаровой среде Czapek культура растет медленнее , чем на агаровой среде мальтового экстракта, и колони достигает диаметра 18-22 мм после выдержки культуры при 24°С в течение семи дней. В этот момент форма и цвет колонии аналогичны форме и цвету колонии, выращенной на агаровой среде мальтового экстракта. Хот она растет очень слабо при температуре 37°С, можно пронаблюдать образование конидий.

При исследовании с помощью микроскопов видно, что разделенные перегородками мицелии почти бесцветны и .имеют выровненные поверхности диаметром кажда от 2 до 5 мкм. Конидиофоры образуютс непосредственно из надземных мицелий или из основных мицелий, и кажда имеет размер от 20 до 210 мкм х 2,5 до 4,0 мкм. Конидии образуютс либо из стеригм на ко- нидиогенной структуре, в которой диверген- тные, с большим расхождением ветви расход тс от вершины конидиофор или от

стеригм, образуемых почти на каждой неразветвленной гифе. Стеригмы имеют гладкую поверхность и имеют размер от 10 до 40 мкм х 2,5 до 4 мм кажда , и концы их имеют форму линейных трубок, Конидии имеют светло-коричневый цвет, имеют форму длинных цепей и имеют от почти шаровидной до йцевидной формы размерами кажда от 3 до 5,5 мкм х 2 до 4 мкм.

Таким образом. SANK 21086 был идентифицирован как штамм Paecilomyces variotil Bainler. Штамм SANK 21086 был сдан на хранение 24 апрел 1987 года в научно- исследовательский институт ферментации. Агентство промышленных исследований и технологии, Министерство Международной торговли и промышленности, Япони , согласно услови м Будапештского договора, под номером PERM BP-1351.

Было установлено, что штамм SANK 21086 продуцирует корнексистин. Однако, как уже хорошо известно, свойства микроорганизмов данного типа могут измен тьс в широких пределах, и такие микроорганизмы могут легко претерпевать мутацию, как по естественным причинам, так и по причинам , вызванным искусственно.

Культивирование штаммов осуществл ют в обычных услови х, прин тых дл культивировани несовершенных грибковых организмов, предпочтительно в жидкой культуре, и желательно с взбалтыванием или с перемешиванием и с аэрацией. Питательна среда, используема дл культивировани , вл етс совершенно обычной средой и она содержит такие составл ющие компоненты, которые обычно используют дл культивировани несовершенных грибов . В частности, данна среда должна содержать предпочтительно ассимилируемый источник углерода, и примерами такого источника углерода могут быть глюкоза, мальтоза , сахароза, маннит, меласса, глицерин, декстрин, крахмал (особенно полезным крахмальным источником дл данного микроорганизма , как и дл большинства несовершенных грибов, вл етс свежий картофель), соевое масло и хлопковое масло; ассимилируемый источник азота, примерами которого могут быть соева мука, арахисова мука, мука из жмыха сем н хлопчатника, ферманин, рыбна мука, экстракт замоченного хлебного злака, дрожжи (например, прессованные дрожжи), дрожжевой экстракт, нитрат натри , нитрат аммони или сульфат аммони : одну или несколько неорганических солей, таких как хлорид натри , фосфаты, карбонаты кальци и при желании соли металлов в следовых количествах.

В случае, когда культивирование осуществл ют в жидкой среде, как правило желательно вводить в среду культивировани противовспенивающее средство (напри- мер, силиконовое масло, растительное маслоилисоответствующее поверхностно-активное вещество).

Культивирование желательно осуществл ть в среде, величина рН которой может

0 измен тьс от слабо кислотной до нейтральной , и температура которой составл ет от 20 до 30°С, еще более предпочтительно примерно 24°С.

Продуцирование корнексистина по ме5 ре осуществлени культивировани можно регулировать различными приемами, общеприн тыми дл регулировани продуцировани биологически активных веществ посредством микробной культуры, где тре0 буютс очень незначительные специальные разработки или вообще они не требуютс . Наиболее прин тым прииемом вл етс определение гербицидной активности культивированного питательного бульона по

5 отношению к чувствительным растительным видам, например, к куриному просу (Echlnochloa cruss galli (L.) P. Beaut).

Количество продуцируемого корнексистина обычно достигает максимального зна0 чени после культивировани в течение от 150 до 200 ч, и желательно отдел ть корнексистин от среды не позже, чем в тот момент времени, когда достигнут этот максимум. Однако, этот период времени может быть

5 различным в зависимости от условий и приемов культивировани , и этот период может быть более коротким или более длинным в зависимости от обсто тельств. Правильное врем культивировани может быть легко

0 определено дл каждого случа путем обычного эксперимента с использованием подход щего приема регулировани процесса, как, например, описано выше.

Наибольша часть корнексистина оста5 етс в, жидкой порции культивированного питательного бульона и таким образом он может быть извлечен путем удалени твердой фазы, включающей мицелий, путем, например , фильтрации, желательно с

0 использованием фильтрующего средства, такого, как диатомова земл , или путем центрифугировани . Затем он может извлекатьс из отделенной жидкой порции общеприн тыми приемами, основыва сь на его

5 специфических физико-химических свойствах , и при жепэнии он подвергаетс последующей очистке.

Корнексистин предпочтительно отдел етс от других продуктов в жидкой порции посредством адсорбента, либо путем адсорбции примесей, либо путем адсорбции кор- нексистина, либо путем адсорбции как раздельно , так и совместно и последующего элюировани корнексйстина. Могут использоватьс различные типы адсорбентов; при- мерами наиболее подход щих дл данной цели адсорбентов вл ютс : активированный уголь, и смолистые адсорбенты, такие, как Амберлит (зарегистрированна торгова марка) ХАД-2. ХАД-4 или ХАД-7 (про- дукты фирмы Ром и Хаэс), и Диаион (зарегистрированна торгова марка) НР10, НР20, СНР20Р или НР50 (продукты фирмы Мицубиши Кемикэл Индастриз Ко., Лтд.). Примеси, присутствующие в жидкой пор- ции, могут быть удалены путем пропускани раствора, содержащего корнексистин, через слой или колонку одного или нескольких указанных выше адсорбентов или путем адсорбции корнексйстина одним или несколь- кими адсорбентами и последующего элюировани корнексйстина подход щим элюентом.

Подход щие дл данной цели элюенты включают смеси метанола, ацетона или бу- танола с водой,

Корнексистин может быть экстрагирован непосредственно из фильтрата культивированного питательного бульона или его водного раствора в услови х от нейтраль- ных до кислотных посредством несмешиваемого с водой органического растворител , такого как хлороформ, этилацетат или бута- нол в отдельности или в смеси двух или нескольких из них, и затем он подвергаетс очистке.

Полученный таким путем корнексистин можетбыть подвергнут дальнейшей очистке различными способами. Наиболее подход щими способами вл ютс хроматографи в адсорбционной колонке с использованием такого носител адсорбента, как силикагель или флоразил, хроматографи в разделительной колонке (распределительна хроматографи ) с использованием целлюлозного продукта, такого, как Авицел (зарегистрированна торгова марка продукта фирмы Асахи Кемикэл Индастриз Ко., Лтд) или Сефадекс LH-20 (зарегистрированна торгова марка продукта Фармаци , Швеци ), или жидкостна хроматографи с использованием обычной колонки с обращенной фазой. Примеси, присутствующие в жидкой порции, содержащей корнексистин, могут быть также удалёны путем адсорбции их на различных типах катионробменных смол (сильных или слабых), таких, как Дау- экс 50 W (зарегистрированна торгова марка продукта фирмы Дау Кемикэл Ко.. Лтд) или Амберлит IRC-50 (зарегистрированна торгова марка продукта фирмы Ром и Хаас). или на катионообменных смолах (таких, как Дауэкс 1 и Диаион WA10). Эти способы очистки могут осуществл тьс либо индивидуально, либо в любой комбинаций друг с другом, с целью получени чистого корнексйстина, имеющего описанные выше физико-химические свойства.

В применении к растени м соединени , отвечающие насто щему изобретению, способны ингибировать прорастание сем н и регулировать рост растений/и они обладают гербицидным действием. Следовательно , данные соединени можно использовать дл регулировани роста растений и дл уничтожени сорн ков путем обработки почвы или листвы широколистных или узколистных сорн ков и деревьев в предвсходовый период роста.

Корнексистин, как сно продемонстрировано в примерах 1,2 и 3, обладает прекрасным гербицидным действием на различные типы сорн ков как при обработке в предвсходовый период роста, так и при обработке в послевсходовый период роста. В частности, оно имеет полезный эффект при использовании в качестве гербицида дл обработки листвы.

Соединение формулы (II) и его соли (в которых кольцо молекулы корнексйстина вл етс открытым) также про вл ют герби- цидное действие и наход т полезное использование в качестве гербицидов.

Данна композици может быть приготовлена в любой прин той в агрохимии форме , например, она может быть приготовлена в виде дуста, грубого пылевидного препарата , гранул, микрогранул, смачиваемого порошка , водорастворимого порошка или жидкого препарата. Безусловно, нет необходимости использовать абсолютно чистую форму корнексйстина и, конечно, очистка может быть осуществлена на любой стадии, . и полученное в результате сырое вещество может быть использовано как активный ингредиент .

Носители, используемые в такой композиции , могут быть синтетическими или иметь природное происхождение, могут быть органическими или неорганическими веществами, и они смешиваютс с соединением , дл того, чтобы «облегчить хранение, транспортировку, и рабочие операции с активным ингредиентом или дл того, чтобы способствовать транслокации активного ингредиента в растени . Носители могут быть твердыми или жидкими. Примерами твердых носителей вл ютс : неорганические вещества, такие, как глина, тальк, диатомит, каолин, бентонит, карбонат кальци , гипс,

синтетические осажденные кремнеземы, аттапульгит, цеолит или пемза; синтетические и естественные смолы, такие, как кума- ронова смола, алкидные смолы, поливинилхлорид, эфир канифоли или эфир ксантогеновой кислоты; воски, такие, как карнаубский воск или парафин; и другие органические материалы, такие, как скорлупа ореха (например, грецкого или какого-либо другого ореха), или соевый порошок.Примерами жидких носителей вл ютс : вода, спирты, такие, как метанол, этанол, изопропанол или этиленгликоль, и такие углеводороды, как ксилол, метилнаф- талин и лигроиновый растворитель.

В случае, когда композици должна включать поверхностно-активное вещество, это поверхностно-активное вещество может быть ионным или неионным и служит дл того, чтобы облегчить диспергирование, смачивание или распределение композиции . Примерами анионных поверхностно- активных веществ вл ютс : соли или высшие жирные кислоты, например, мыла, такие, как олеат натри , соли, например, натриевые и кальщ/е вые соли сульфокислот и сами кислоты как таковые, например, лиг- нинсульфокислота, додецилбензолсульфо- нат натри или диалкилсульфосукцинзт натри ; такие соли, как натриевые, аммони- евые или аминовые соли полиоксиэтиленал- киларилэфирсульфатовили

полиоксиэтиленалкилэфирсульфатов или свободных кислот; или соли полиоксиэтиле- налкиларилэфирфосфатов, или полиоксиэ- тиленалкилфосфатов. Примерами катионных поверхностно-активных веществ вл ютс высшие алифатические амины и продукты конденсации окиси этилена с такими аминами, четвертичные аммониевые соли, например, хлориды, М-алкиламинаце- таты и N-алкйламиноксиды.

Амфотерные поверхностно-активные вещества включают бетаины и поверхностно-активные вещества аминокислотного ти- па.Примерынеионных

поверхностно-активных веществ включают: глицериды и сложные эфиры сахарозы и жирных кислот, продукты конденсации окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, продукты конденсации окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафто- лами, амиды или этоксилированные амиды высших жирных кислот, сложные эфиры высшей жирной кислоты и сорбита или этокси- лированного сорбита, сложные эфиры высшей жирной кислоты и глицеринборатов или этоксилированных глицеринборатов и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена .

Агрохимические композиции, отвечающие насто щему изобретению, при желании могут содержать и другие компоненты, например, защитные коллоиды, такие, как желатин, аравийскую камедь, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцел- люлозу, диспергирующие вещества, такие, как полифосфат натри , неорганические диспергирующие вещества, такие, как бентонит или вигум, стабилизаторы, св зующие вещества и присадки, понижающие температуру замерзани . Дл более широкого использовани и экономии рабочей силы композици , отвечающа насто щему изобретению , при желании может быть смешана с одним или несколькими агрохимическими средствами, например, с фунгицидами, инсектицидами, гербицидами , регул торами роста растений и удобрени ми .

Приготовление корнексистина. а также соответствующей кислоты и ее солей, далее будет иллюстрироватьс на примерах, которые не вл ютс ограничением насто щего изобретени . Приготовление препаратов, содержащих корнексистин, будет иллюстрироватьс в описании препаратов, и активность действи корнексистина иллюстрируетс в описании экспериментов.

Пример 1. Бактериальную культуру Paecilomyces varlotH SANK 21086 инокули- руют в 500-миллилитровой колбе с разделительной перегородкой, содержащей 80 мл среды, имеющей указанный ниже состав, и культивируют при 26°С в течение 168 ч при скорости вращени 200 об./мин с использованием вращающегос встр хивател .

Составл ющие компоненты среды: Глицерин50 г

Свежий картофель50 г

Дрожжевой экстракт5 г

Мальтовый экстракт5 г

Деионизированна вода(рН 6.0) 1 л 0,5 мл полученной культуры сем н ино- кулируют в каждую из двадцати п ти 500- миллилитровых колб с разделительными перегородками, кажда из которых содержала 80 мл той же культуры, что указана выше, и данный микроорганизм культивируют при температуре 26°С в течение 192 ч при скорости вращени 200 об./мин с использованием вращающегос встр хивател .

Полученные в результате культивированные питательные бульоны общим объемом 2 л соедин ют и ввод т 200 г фильтровального средства - Целита 545 (торгова марка продукта фирмы Джонс

Манвиль Продактс Корпорейшн США). Полученную смесь затем фильтровали и получали в результате 1,7 л фильтрата (рН 6,0). Этот фильтрат пропускали через колонку , содержащую 300 мл Диаиона НР20 (про- дукт фирмы Мицубиши Кемикэл Индастриз Ко.), где адсорбировалось активное вещество . Это активное вещество затем промывали одним литром деионизированной воды, после чего осуществл лось элюирова- ние одним литром водного раствора ацетона концентрацией 80% (об/об), и получалс 1 л элюента. Этот один литр элюента конденсируют путем испарени при пониженном давлении и затем высушивают при температуре ниже 0°С, и получают 3 г сырого порошка, содержащего активное соединение , 2.7 г этого сырого порошка раствор ют в 400 мл деионизированной воды , и величину рН раствора довод т до зна- чени 2.5. Затем осуществл ют двухкратную экстракцию, каждый раз 400 мл этилацетата, и получают 800 мл этилаце- татного раствора, содержащего корнексистин . Этот этилацетатный раствор двухкратно промывают, каждый раз 300мл 0,1 мол рного водного раствора двухосновного фосфора натри , и затем снова двухкратно промывают, каждый раз 300 мл насыщенного водного раствора хлорида на- три .

Затем этот раствор высушивают над безводным сульфатом натри , после чего его конденсируют путем испарени при пониженном давлении, и получают 650 мг мае- л нистого вещества, содержащего корнексистин.

Это масл нистое вещество раствор ют в смеси этилацетата с хлороформом (с соотношением компонентов смеси 1:1 по объе- му) и раствор подвергают хроматографическому разделению в колонке , наполненной 150 мл Сефадекс LH-20 (который предварительно был насыщен до состо ни равновеси смесью (в обьемном отношении 1:1) этилацетата с хлороформом ), где осуществл лась адсорбци . Затем осуществл ют элюирование тем же смешанным растворителем. Элюат фракционируют на 10-миллилитровые фракции, и фракции. содержащие корнексистин, фракции № 22- 28, собирают и конденсируют путем испарени при пониженном давлении, ив результате получалось 100 мг корнексисти- на со степенью чистоты примерно 70%.

П р им е р 2. Процедуру культивировани осуществл ют таким же образом, как описано в примере 1, и в результате получают 1,8 л фильтрата культуры. Величину рН этого фильтрата довод т до 2,5 и затем осуществл ют двухкратную экстракцию, каждый раз 1,5 л этилацетата, и в результате получают Зл этилацетатного раствора, содержащего санкиоцидйн. Этот раствор двухкратно промывают, каждый раз 1 л 0,1 мол рного водного раствора двухосновного фосфата натри , и далее снова двухкратно промывают, каждый раз одним литром насыщенного водного раствора хлорида натри . Раствор высушивают над безводным сульфатом натри , и затем его конденсируют путем испарени в вакууме, и в результате получают 700 мг масл нистого вещества. Это масл нистое вещество пропускают через колонку, наполненную 80 мл Сефадекс LH-20 (Фармаци , Ко.) (этот препарат предварительно насыщают до состо ни равновеси смесью в объемном отношении 1:1 этилацетата с хлороформом) и осуществл ют адсорбцию и про вление. Затем осуществл ют элюирование тем же смешанным растворителем. Элюат раздел ют ла дес ть фракций, и фракции, содержащие корнексистин, фракции 13-18, собирают и конденсируют путем испарени при пониженном давлении.

Продукт конденсации снова подвергают хроматографическому разделению в такой же колонке, наполненной Сефадекс Ш-20. После элюировани и фракционировани получают 290 мг масл нистого вещества .

Всю порцию этого частично очищенного масл нистого вещества затем дополнительно очищают посредством жидкостной хроматографии высокой степени разделени с использованием колонки с обратимой фазой . Более конкретно, пробу ввод т в колонку с обратимой фазой (УМС; S-343 C1-15-ODS). Ямамура Кемикэл Индастриз Ко., Лтд), предварительно насыщенной до состо ни равновеси 40%-ным (об/об) водным раствором ацетонитрила. При регулирований спектра ультрафиолетового поглощени до 240 нм, пробу про вл ют и элюируют тем же смешанным растворителем при скорости потока 5 мл/мин. и фракции , элюированные в период между 30 и 39 мин. собирают. Данную процедуру повтор ют три раза, и в результате получают 185 мг корнексистина, со степенью чистоты примерно 90%.

Пример 3. Бактериальную культуру Paecllomyces variotll SANK 21086 инокули- руют в 500-миллилитровой колбе с разделительной перегородкой, содержащей 80 мл той же среды, что описана в примере 1, и культивируют при 26°С в течение 144 ч при скорости вращени 200 об/мин с использованием вращающегос встр хивател . Затем 75 мл полученной культуры инокулиру- ют в каждом из двух 30-литровых бродильных чанов, содержащих каждый по 15 л той же среды, что описана выше, и микроорганизм культивируют при 26°С в течение 192 ч, с одновременной аэрацией со скоростью 15 л/мин и с перемешиванием со скоростью 150-180 об/мин..

25 л полученной в результате жидкой культуры смешивают с 1 кг Целита (торгова марка) 545 в качестве фильтровального средства и осуществл ют фильтрацию. Величину рН полученных в результате 19 л фильтрата довод т до 2,5 и осуществл ют экстракцию 19л этилацетата, и затем дополнительно 9,5 л этилацетата и получают эти- лацетатный экстракт, составл ющий суммарно 28 л. Этот экстракт трехкратно промывают каждый раз 5 л 0,1 мол рного водного раствора двухосновного фосф та натри , а затем снова двухкратно промывают , каждый раз 5 л насыщенного водного раствора хлорида натри . Промытый экстракт высушивают над безводным сульфатом натри и затем конденсируют путем испарени при пониженном давлении, и получают 2,02 г масл нистого вещества. Весь полученный объем этого масл нистого вещества раствор ют в смеси этилацетата с хлороформом, вз тыми в объемном соотношении -.1:1, и затем подвергают хроматогра- фическому разделению путем пропускани его через колонку, наполненную 500 мл Се- фадекс LH-20 (который предварительно насыщалс до состо ни равновеси тем же смешанным растворителем), где он адсорбируетс , про вл етс и элюируетс тем же смешанным растворителем. Элюат раздел ют на 20-миллилитровые фракции и фракции , содержащие корнексистин, т.е. фракции.№35-52, собирают, В результате конденсации путем испарени при пониженном давлении получают 7,56 г масл нистого вещества.

Всю порцию этого масл нистого вещества раствор ют в 10 мл хлористого метиле- на и выстаивают при комнатной температуре и в результате получают 3,7 г корнексистина в виде бесцветных игл.

П р и м ар 4. Кор нексистин раствор ют в 10%-ном (об/об) растворе этанола и титруют 1 -нормальным водным раствором гидрата окиси натри . Были найдены два значени рКа равные 4,1 и 5,95, что говорит о том, что ангидридна форма корнексистина (формула (I) превращалась в свободную кислоту с открытым кольцом формулы (II).

Пример 5. Получение моно- и ди-на- триевых солей корнексистина

Корнексистин, полученный, как описано в примерах 1-3, суспендируют в воде, и величину рН довод т до 6,1 (дл мононзтрие- вой соли) или до 7,95 (дл динатриевой соли) путем добавлени 1-нормального водного раствора гидрата окиси натри . Корнекси стин раствор ют и затем образуемый раствор частично испар ют с целью удалени большей части воды. Затем осуществл ют 0 лиофилизацию с целью удалени остальной части воды, и в результате получают либо мононатриевую соль, либо двухнатриевую соль корнексистина.

Мононатриева соль: 5 + 63.13°С(С 1,15, вода)

ФАБ Масс-спектр: 349 (М + Н)+

(ФАБ - Быстра атомна бомбардировка )

Спектр ультрафиолетового поглощени

0 (Н20) Дике 235 (плечо).

Спектр инфракрасного поглощени (КВг) 3400,2960, 1705. 1564, 1450. 1440, 1050. 1010.

Спектр протонного дерно-магнитного 5. резонанса НЯМР)(270 МГц, ОзО) 5 ч/млн:

0,68 (ЗН, триплет);

1,05-1,21 (ЗН, мультиплет);

1,49 (ЗН. дублет);

1,59 (1Н, мультиплет);

2,62 (1Н. дублет дублетов);

2.75 (1 Н, триплет дублетов);

2,85 (2Н, дублет дублетов);

3,22 (1Н, дублет дублетов);

4.00 (1Н, дублет):

4,90 (1 Н, дублет дублетов);

5,46 (1Н, дублет дублетов).

Двухнатриева соль

+ 61,15° (С 1,22, вода).

ФАБ масс-спектр: 371 (М + Н)+.

Спектр ультрафиолетового поглощени

(ВДАЙакс : 235 (плечо).

Спектр инфракрасного поглощени (KBr)v макс. 3400, 2960, 1705, 1562, 1450, 5 1400. 1050, 1010.

Спектр протонного дерного магнитного резонанса (1Н ЯМР) (270 МГц, DaO) дч/мин

0 . 0,68 (ЗН, триплет);

1,05-1,22 (ЗН, мультиплет);

1.49 (ЗН, дублет);

1,58 (1 Н, мультиплет);

2,62 (1Н, дублет дублетов); 5 2,72 (1Н, триплет дублетов);

2.85 (2Н, дублет дублетов);

3,22 (1 Н, дублет дублетов);

4.01{1Н, дублет):

4,89 (1Н, дублет дублетов);

5,44 (1 Н, дублет дублетов).

0

5

Приготовление агрохимических препаратов иллюстрируют нижеследующими при- мерами приготовлени препаратов. Указанные в этих примерах количества, выраженные в част х, вл ютс массовыми част ми ..

Пример 1 приготовлени препаратов

Гранулы.

Одну часть корнексистина раствор ют в 10ч. метанола, и раствор адсорбируют на 99 ч. зерен пемзы, которую предварительно просеивают через сито (стандартное сито Тэйлора) 10-48 меш. (1,65-0,295 мм). Смесь высушивают путем испарени метанола и в результате получают гранулы с содержанием 1% (вес./вес.) корнексистина.

Пример 2 приготовлени препарата

Смачиваемый порошок.

10 ч. корнексистина, 3 ч. додецилбен- золсульфоната натри , 2 ч. поливинилового спирта 20 ч. диатомита и 65 ч. глины смешивают и распыл ют, в результате чего получают смачиваемый порошок.

Пример 3 приготовлени препарата.

Смачиваемый порошок

П тьдес т частей корнексистина, 2 ч. полиоксиэтиленнонилфенилового простого эфира, 10 ч. синтетического кремнезема и 38 ч. сульфата аммони смешивают и распыл ют , в результате получают смачиваемый порошок.

П р и м е р 4 приготовлени препарата.

Жидка рецептура.

Дес ть частей корнексистина и 2 ч. лау- рилсульфата натри смешивают и раствор ют в 88 ч. метанола, и в результате получают жидкий препарат.

Пример 5 приготовлени препарата. Эмульсионный концентрат.

Дес ть частей корнексистина раствор ют в 75 ч. ксилола, и затем в раствор ввод т 15ч. ПараколаКРЗ (продукт фирмы Ниппон Ниуказаи Ко., Лтд) и весь объем этой смеси перемешивают, и в результате получают эмульсионный концентрат.

Активность действи гербицидн х соединений , отвечающих насто щему изобретению , иллюстрируетс в нижеследующих описани х экспериментов.

Эксперимент t.

Гербицидное действие на молодое куриное просо

Дно испытательной пробирки (10 х 100 мм) покрывают хлопковым адсорбентом на высоту примерно 5 мм. Затем хлопковый слой насыщают 1 мл воды. Примерно 10 зерен семени проса куриного (Echlnocrtloa crus-galll (L.) P. Beaut) помещают на хлопковый слой, и осуществл ют выращивание в теплице до достижени высоты растени

примерно 80 мм. Приготавливают водные растворы корнексистина различных концентраций путем разбавлени 10%-ного (вес/об) этанольного раствора корнексистина . Каждый из приготовленных таким образом водных растворов смешивают с распределителем New Gramln (фирмы Сан- кио Ко., Лтд) в количестве 0,01 мас.% и полученную композицию распыл ют на листву.

Подвергнутые обработке сорн ки выдерживают в течение примерно дес ти дней в теплице , и затем определ ют гербицидное действие данных соединений, вз тых в различных концентраци х. Было установлено,

что минимальна гербицидна концентраци , оказывающа действие против проса петушьего, составл ет 50 мкг/мл. Эксперимент 2 Испытание на гербицидное действие

путем обработки листвы

Пластмассовые горшки каждый длиной 7,5 см, шириной 20 см и высотой 7 см заполн ют почвой, в которую высевают восемь типов растений, включающих 4 типа злаковых сорн ков и 4 типа широколистных сорн ков , и каждый из них покрывают почвой на глубину примерно 1 см. Горшок закапывают в вермикулит в щике, который помещают на стеллаж в теплице. Осуществл ют

подвод воды непосредственно через вермикулит , сорн ки выращивались в течение примерно двух недель. В конце этого периода времени листву сорн ков обрабатывают непосредственно растворами корнексистина или его натриевой соли различных концентраций (предварительно приготовленных в форме смачиваемых порошков , как описано в примере 2 приготовлени препарата), дозой 5 см3 на горшок с

образцом. Наблюдают все изменени , происход щие после нанесени гербицида, и по прошествии 14 дней осуществл ют исследование растений и определ ют эффекты повреждени . Результаты представлены в

табл.1 (корнексистин) и 2 (мононатриева соль корнексистина). Гербицидное действие определ ют в соответствии с нижеследующими критери ми:

Процент омертвленной площади поверхности листвы в подвергнутых обработке сорн ках от площади поверхности необработанных сорн ков:

0-10%

11-30%

31-50%

51-70%

71-90%

91-100%

Шкала оценки О 1 2 3 4 5

При обработке в тех же услови х активность действи Рубратроксина В против злачных сорн ков и против широколистных сорн ков составл ла соответственно 0 и 1,5.

Эксперимент 3.. .

Испытание с обработкой почвы в пред- восходовый период роста.

Пластмассовые горшки длиной 7,5 см, шириной 20 см и высотой 7 см заполн ют почвой, в которой высевают восемь типов растений, включающих четыре типа злачных сорн ков и четыре типа широколистных сорн ков, и покрывают их почвой, каждый на глубину 1 см. Затем горшки помещают в вермикулит в щике, который помещают на стеллаже в теплицу. Поверхность почвы в каждом горшке обрабатывают одним из растворов корнексистина различных концентраций , приготовленных как описано в примере 2, дозой 15 см на горшок, через один день после высевани . По прошествии 20 дней проводили исследовани растений и определ ли эффекты обработки. Полученные результаты представлены в табл.3. Гер- бицидное действие определ ли согласно следующим критери м:

Процент ингибировани роста обработанных сорн ков относительно необработанных сорн ков:

Шкала оценки

0-10%0 .

11-30%1

31-50%2

51-70%3

71-90%4

91-100%5

Нижепредставленные данные сравнени корнексистина и продукта 51262 как селективных гербицидов.

Способ тестировани

Пластмассовые горшки длиной 13,5 см, шириной 9,5 см, высотой 8 см заполн ют землей, сн той с верхнего сло почвы, и затем сеют семена нижеперечисленных сорн ков и семена пшеницы и затем прикрывают сверху такой же землей слоем примерно глубиной 1 см.

Узколистные сорн ки: просо куриное, ползучий сорн к, гигантский лисохвост и просо италь нское.

Широколистные сорн ки: черный паслен , куколь посевной, красна марь и полева горчица.

Горшки оставл ют на 14 дней в теплице, т.е. до момента по влени у проса куриного 3,5 листьев.

Каждое тестируемое соединение выпущено в форме 50% увлажн емого порошка,

0

5

0

его разбавл ют водой до концентрации (по активному ингредиенту) 250 м.д. или 125 м.д.

Тестируемым раствором опрыскивают листву растений (5 мл тестируемого раствора на каждый горшок). Затем горшки оставл ют еще на 14 дней в теплице, после чего определ ют гербицидное действие согласно следующему подсчету.

Как видно из полученных результатов, корнексистин обладает более широким спектром гербицидного действи в отношении широколистных сорн ков в сравнении с соединением 51262, и кроме того, оно не оказывает никакого вредного воздействи на пшеницу, что говорит о том, что его можно будет использовать в качестве селективного гербицида дл пшеницы.

Claims

Формула изобретен и Способ получени гербицида корнексистин формулы Л,,

или соответствующей с разомкнутым коль- цом кислоты, или ее соли, заключающийс в том, что осуществл ют культивирование продуцирующего микроорганизма PaecHomyces variotii Bainier SANK PERM BP-1351 на питательной среде при 20- 30°С, выделение его и обработку полученного корнексистина водным раствором щелочи дл получени соответствующей с разомкнутым кольцом кислоты или ее соли.
2.Способ по п. 1,отличающийс тем, что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижени величины рН по крайней мере 4,1.
3.Способ по п. 1,отличающийс тем, что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижени величины рН 6,1 с последующим выделением одноосновной соли из водной среды,
4.Способ по п.1,отличающийс тем. что выделенный корнексистин обрабатывают водным раствором щелочи до достижени величины рН 7,95 с последующим выделением двухосновной соли.
5.Способ по п.З. о тличающийс тем. что используют водный раствор едкого

натра дл получени мононатриевой соли.
6.Способ по п.4, отличающийс тем, что используют водный раствор едкого натра дл получени двунатриевой соли .
7. Способ по п.1, отличающийс тем, что культивирование осуществл ют при 24°С.

Т а б л и ц а 1

Действие корнексистина при обработке листвы

Эффект мононатриевой соли корнексистина при обработке листвы

Таблица 2

Эффект корнексистина при обработке почвы в предвсходовый период

Таблица 3

Таблица4

ТаблицаБ