RU1814559C

RU1814559C - Способ получени композиции инсулина дл орального введени

Info

Publication number: RU1814559C
Application number: SU884356578A
Authority: RU
Inventors: В.Чо Янг
Original assignee: Юрейшм Лабораториз, Инк
Priority date: 1986-03-21
Filing date: 1988-09-20
Publication date: 1993-05-07
Also published as: HK88696A; IE870696L; EP0302065B1; CA1281645C; KR870008587A; ATE109659T1; DE3750369T2; KR900001074B1; FI95538C; CN87103560A; FI884291A0; AU7207387A; WO1987005505A1; HUT48821A; EP0302065A1; HU207452B; IE65667B1; FI95538B; FI884291A; DE3750369D1

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к способам получени композиций дл лечени диабета. Цель - повышение биодоступности инсулина. В способе получают частицы из твердого эмульгатора и поверхностно-активного вещества диаметром от 1 мкм до 0,5 мм, св зывают их с инсулином, покрывают частицы липидным слоем толщиной 0,05-1 мкм, затем кишечно- растворимым слоем, возможно нанесение водорастворимого сло . 36 табл.

Description

Изобретение относитс к способам получени композиции дл перорального введени белковых материалов в биологически активной форме, а именно к композици м дл лечени диабета путем перорального введени инсулина.

Насто щее изобретение касаетс способа получени композиции из частиц, состо щих по существу из твердых эмульгаторов и поверхностно-активных веществ , при этом инсулин св зываетс с поверхностью частиц при помощи св зующего вещества. Затем на частицы и белковое вещество нанос т липидное покрытие. Частицы могут иметь средний диаметр приблизительно от 1 мкм до 1 /2 мм, однако предпочтительно, чтобы частицы имели средний диаметр, приблизительно, от 1 до 100 мкм. Липидное покрытие предпочтительно нанос т на частицы и белковое вещество с толщиной, приблизительно, от 0,05 до 1,0 мкм. Лилидный слой может быть покрыт энтеросолюбильной оболочкой.

В другом варианте осуществлени насто щего изобретени белковое вещество св зано с липопротеиновыми частицами.

Частицы могут иметь средний диаметр от 1 мкм до 1 /2 мм, однако предпочтительно, чтобы частицы имели средний диаметр от 1 до 100 мкм. Частицы затем покрывают водорастворимым веществом и полученный продукт покрывают липидным слоем. Липидный слой предпочтительно имеет толщину приблизительно от 0,1 до 0,3 мкм. Полученный продукт может быть помещен в гель-капсулу и затем покрыт энтеросолюбильной оболочкой до толщины приблизительно - от 0,1 до 0,3 мкм.

В другом варианте осуществлени насто щего изобретени белковое вещество покрывают гранулами. Гранулы образуют покрытием бикарбоната натри и, если желательно , небольшого количества крахмала, частицами лимонной кислоты (предпочтительно , размером 100-150 г). Состав, включающий белковое вещество, затем покрывают гранулой. Полученный продукт покрывают энтеросолюбильной оболочкой. Полученные гранулы имеют размер менее 2 мм. Физиологически размер гранул менее 2 мм может способствовать быстрому прохождению лекарства в двенадцатиперстную

00

Ј ел ел ю

CJ

кишку. Благодар инкапсулированию гранул в небольшие твердые гель-капсулы в противоположность большим гк ель-капсулам также повышаетс кишечна абсорбци . Использование бикарбоната натри и лимонной кислоты или при получении гранул , или при применении с составом в виде порошка промотирует быстрый разрыв и открывание капсул или гранул и таким образом высвобождает белковый материал в двенадцатиперстную кишку. Конечно, и другие соединени могут быть использованы дл промотировани этого эффекта, например лимоннокислый натрий и другие бикарбонаты , такие как бикарбонат кали .

Энтеросолюбильное покрытие обеспечивает прохождение композиции в кишечный тракт без разрушени в желудке. В кишечном тракте покрытие раствор етс . Липидное покрытие обеспечивает прохождение композиции в лимфатическую систему пользовател . Дл этой цели липидное покрытие создает дл композиции сродство с виллами-(концевыми отверсти ми лимфатической системы в кишечной мембране). Если фармацевтическое вещество св зано с липопротеиновыми частицами, то эти частицы повышают абсорбцию фармацевтического вещества в ткан х. Липопротеин легко проникает через клеточную мембрану и таким образом обеспечивает создание носител дл продвижени вещества в ткань пользовател .

Предпочтительные компоненты дл получени композиции приведены ниже.

Липидные материалы покрыти .

Липидные материалы покрыти , пригодные в насто щем изобретении, включают те хикломикронподобные материалы, которые прит гиваютс к виллам тонкой кишки. Такие материалы включают (однако не ограничиваютс ) сложные полиэтиленг- ликолиевые эфиры жирных кислот, глицеро- фосфатиды, фосфатидилфосфаты, лецитин ичного желтка, олеиновую кислоту, стеариновую кислоту, пальмитат, холестерин, мо- но- и ди- и триглицериды, сложный холестериновый эфир, лицитин ичного желтка, содержащий от 5 до 20% фосфатид- ной кислоты, линолевую кислоту, линолено- вую кислоту, лауриновую кислоту, фосфатидилфосфат, глицерин, соевое масло , сезаиовое масло и трометан. Эти липид- ные материалы покрыти после нанесени на поверхность фармацевтического вещества не только герметизируют фармацевтическое вещество, но также увеличивают сродство и абсорбцию частиц такого фармацевтического вещества к виллам, т.е. к концевым отверсти м лимфатических сосудов у кишечных мембран, так, что вещество абсорбирует в лимфатическую систему.

Липидна композици покрыти , функционирующа удовлетворительно, представл ет собой следующее: от 80 до 90% липида в форме моно-, ди- и триглицеридов, от 6 до 9% фосфолипидов, 2% сложного холестеринового эфира и 1 % свободного холестерина , а также менее 1% свободных

жирных кислот (NEFA), Также можно добавл ть около 2% низкомолекул рной протеин/аминокислоты .

Сложные холестериновые эфиры представл ют собой:

5 30% в виде сложного эфира холестерин- линолевой кислоты;

20% в виде сложного эфира холестери- . нолеиновой кислоты;

22 % в виде сложного эфира холестерин0 пальмитиновой кислоты.

Энтеросолюбильные материалы покрыти .

Энтеросолюбильные материалы покрыти , пригодные в насто щем изобретении,

5 включают те материалы покрыти , которые устройчивы к разрушению в желудке, но которые разлагаютс в окружающей среде ки- шечного тракта с экспонированием покрытого вещества. Такие энтеросолю0 бильные материалы покрыти включают(од- нако не ограничиваютс ) следующие компоненты, вз тые либо в отдельности, либо в комбинации: гидроксипропилметил- целлюлозафталат, полиэтиленгликоль-6000

5 и шеллак, и они могут раствор тьс в таких растворител х, как дихлорметан, этанол и вода, целлюлозафталат или поливинилаце- татфталат,

Предпочтительный энтеросолюбиль0 ный материал покрыти дл нанесени на инсулин содержэит 4,5 мае.ч. гидроксиме- тилцеллюлозы к 0,5 мае.ч. шеллака, к 0,5 мас.ч. полиэтиленгликол -6000. Этот материал раствор ют в 47,3 мас.ч. дихлорметана

5 и 37,8 мас.ч. этанола. Энтеросолюбильную оболочку затем раствор ют водой до оптимальной концентрации и нанос т на композицию насто щего изобретени . Липопротеиновые материалы.

0 Липопротеиновые материалы, пригодны в насто щем изобретении, содержат те липи- ды и протеины, которые могут соедин тьс с образованием липопротеинов малой плотности . Предпочтительно, липопротеины с малой

5 плотностью имитируют показатели липопротеинов малой плотности у человека.

Липидный компонент включает (однако не ограничиваетс ) холестерин, олеиновую кислоту, стеариновую кислоту, лаурилсуль- фат натри , лецитины, лаурилсульфат натри с лецитинами, фосфатиды, пальмитиновую кислоту и фосфатидфосфатхолин.

Белковый компонент включает (однако не ограничиваетс ) любую из аминокислот или низкомолекул рный белок. Наиболее предпочтительные аминокислоты включают аргинин, лизин, гистидин и аспарагиновую кислоту и наиболее предпочтительные протеины включают альбумин и глобулин.

Предпочтительно липиды соединить с низкомолекул рным белком или аминокислотой при соотношении от 1:1 до 3:1 на молекул рной основе. В предпочтительном варианте липиды и белки объедин ют при соотношении 1:1.

Липидна композици , содержаща 46% сложного холестеринового эфира, 14% свободного холестерина, 14% жира, 25% фосфолипидов иоколо 1 % NEFA (свободных жирных кислот), функционирует удовлетворительно , когда объединена с 20-25% по массе аминокислот.

Водорастворимые материалы покры- ти .

Водорастворимые материалы покрыти , пригодные в насто щем изобретении, включают те соединени , которые обеспечивают создание гидрофильного покрыти , включающие, но не ограничивающиес гидроксипропилметилцел- люлозафталатом, полиэтиленгликолем-6000, гидроксипропилметилцеллюлозой, гидроксип- ропилцеллюлозой, кристаллической целлюлозой и шеллаком, растворенным в дихлорметане, этаноле и воде, целлюлозойфталатом и полней- нилацетатфталатом. Если белковые материалы св заны с липопротеинами и покрыты водорастворимой оболочкой, они предпочтительно покрываютс слоем толщиной приблизительно от 0,05 до 0,5 мкм.

Св зующие материалы.

Св зующие материалы, пригодные в насто щем изобретении, это те соединени , котоыре св зывают пептид Q липидом или липопротеином. Эти материалы включают (однако не ограничены) микрокристаллическую целлюлозу, метилцеллюлозу, этилцел- люлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилгидрок- сипропилцеллюлоза-желатин, повидон и группы сложного полиэтиленгликолевого эфира жирной кислоты.

Липолитические ферменты.

Липолитические ферменты, пригодные в насто щем изобретении, представл ют собой те ферменты, которые промотируют абсорбцию липидов в виллы. Эти ферменты включают липазу, включа панкреатическую липазу, амилазу, протеазу и соли желчных кислот. Кишечна абсорбци жирных кислот и липидов повышаетс и промотируетс панкреатической липазой в присутствии соли желчной кислоты. Следовательно, когда белковое вещество покрыто липопротеином , панкреатическа липаза в присутствии соли желчной кислоты будет повышать абсорбцию белкового вещества. При желании Липолитические ферменты могут быть объединены с композицией насто щего изобретени или введены в отдельной таблетке или капсуле. Смесь липолитических ферментов, котора функционирует удовлетворительно , когда фармацевтическим веществом вл етс инсулин, включает панкреатическую липазу, амилазу, протеазу и соли желчных кислот.

Наполнитель.

Если белковое вещество св зано с .липопротеином , может быть использован наполнитель . Наполнитель может или не может быть использован в качестве физического св зующего вещества. Наполнитель может включать (однако не ограничиваетс ) аравийскую камедь, кристаллическую целлюлозу , гидроксипропилцеллюлозу и гидро- ксип роп ил метил целл юлозу.

Поверхностно-активные вещества.

Поверхностно-активные вещества, пригодные в насто щем изобретении, включают те соединени , которые промотируют более лучшую абсорбцию и виллы, и эти вещества включают (однако не ограничиваютс ) катионогенные, аниогенные и неионо- генные поверхностно-активные вещества, такие как лаурилсульфат натри , стеарила- мин, сложные полиглицериновые эфиры жирных кислот, полиэтиленалкиловые эфиры , полиоксиэтиленалкилфениловые эфиры , моноглицериды жирных кислот, сложные сорбитан-жирнокислотные эфиры, полиоксиэтиленовые жирнокислотные амины и сложные полиэтиленгликолевые жирнокислотные эфиры.

Эмульгаторы.

Эмульгаторы, пригодные в насто щем изобретении, включают те соединени , которые создают эмульсию In vivo, и включают (однако не ограничиваютс ) вещества и комбинации веществ, такие как холестерин, стеаринова кислота, стеарат натри , пальмитинова кислота, пальмитат натри , олеинова кислота, глицерилмоностеарат олеата натри , полиэти- лен-50-стеарат, полиокси-40-стеарат, полисор- бат 20, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 80, пропиленгликоль-диацетат и пропиленгликоль-моностеарат. Эмульгатор может также включать те химические вещества и компоненты, которые делают его подобным липопротеину с малой плотностью, обнаруживаемому в плазме человека, такие как аргинин-НС ), аравийска камедь, холестерин,

сложный холестериновый эфир, фосфоли- пиды и жирные кислоты.

Стабилизаторы и ферментные ингибиторы .

Стабилизаторы и ферментные ингибиторы , пригодные в насто щем изобретении, представл ют собой те соединени , которые способны инактивировать или ингибировать воздействие разрушени млекопитающих ферментов, таких как пептидазы, протеазы, фосфорилазы, глутатион-инсулин-трансгид- рогеназа, а также инсулинразрушающий фермент , т.е. инсулиназа. Стабилизирующие соединени включают (однако не ограничиваютс ) стеариламин, стеариловый спирт, лимонную кислоту, молочную кислоту, триэтиламин-НС -пирофосфат, триэтанола- мин, овомуксид, тетраацетат этилендиамина, йодоацетамид, фенилгидразин, гидроксида- мин и 8-гмдрохинолин.

Противомикробные средства.

Противомикробные средства, пригодные в насто щем изобретении, представл ют собой те соединени , которые способны преп тствовать микробному загр знению и разрушению фармацевтического соединени и св занным с ним присадкам и св зующим покрыти м. При выборе противомикробного средства микробна активность средства должна быть сравнена с его совместимостью с другими компонентами фармацевтической композиции, а также с его токсичностью в отношении организма, подлежащего лечению таким средством. Противомикробные соединени , в основном отвечающие этим требовани м, включают (однако не ограничиваютс ) метилпарабен, этилпарабен, про- пилпарабен, бутмлпарабен, фенол; дегидроацетовую кислоту, фенилэтиловый спирт, бензоат натри , сорбиновую кислоту, тимол, тимерозал, дегидроацетат натри , бензоловый спирт, крезол, р-хлоро-т-кре- зол, хлорбутанрл, фенилртуть, ацетат, фе- нилртуть борат, фенилртуть нитрат и бензидалконий хлорид.

Устройство дл получени композиции содержит сосуд, имеющий камеру. На дне камеры расположены перфорированный вращающийс диск, средства дл создани воздушного потока и вибратор. Над дном камеры расположены сопла. Дл получени композиции частицы помещают на дне камер и вибрируют вибратором. Средства создани воздушного потока заставл ют частицы субсидироватьс внутри камеры. Фармацевтическое вещество распыл ют через сопла так, что данное вещество св зываетс с частицами. После того как фармацевтическое вещество св залось с частицами , последние покрывают липидным

слоем, распыленным через сопла. После нанесени липидного сло можно наносить энтеросолюбильное покрытие.

На фиг.1 изображена в разрезе струйна мельница; на фиг,2 - то же, поперечный разрез; на фиг.З - схематический вид в разрезе Splr-A-Flow; на фиг.4 - хроматограмма композиции примера 1; на фиг.5 - микрофотографи композиции примера 1; на фиг.6

0 - микрофотографи композиции примера 1; на фиг.7 - сравнение уровней венозного сывороточного сахара двух свиней, одна из которых получила композицию примера 1, а друга - Актрапид. Уровень венозного сыво5 ротрчного сахара свиньи, получившей композицию примера 1, обозначен о, а уровень венозного сывороточного сахара свиньи, .получившей Актрапид, обозначен х. Ось х выражена в минутах и ось у выражена в

0 миллимол х сывороточной глюкозы; на фиг.З - сравнение инсулина Tong-Shin, пе- рорального инсулина примера 1 и инсулина Novo согласно испытани 1-1; на фиг.9 - сравнение перорального инсулина примера

5 1 и регул рно инъекцируемого инсулина согласно испытани 1-Е; на фиг.10 - сравнение перорального инсулина примера 1 и перорального инсулина примера 2 согласно испытани 2-В; на фиг. 11 -сравнение перо0 рального имнсулина примера 1 и перорального инсулина примера 2 согласно испытани 2-В; на фиг.12 - вли ние примера 6 на уровни кров ной глюкозы; на фиг.13 - сравнение инъекцируемого инсулина в со5 поставлении с примером 6; на фиг. 14-сравнение инъекцируемого инсулина в сопоставлении с примером 6; на фиг. 15 - сравнение инъекцируемого инсулина в сопоставлении с примером 6; на фиг.16 - вли0 ние примера 6 на уровни кров ной глюкозы; на фиг.17 - вли ние примера б на уровни кров ной глюкозы; на фиг.18 - вли ние примера 6 на уровни кров ной глюкозы; на фиг, 19 - сравнение инъекцируемого ин5 сулима с примером 6; на фиг.20 - сравнение инъекцируемого инсулина в противопоставлении примеру 6; на фиг.21 - сравнение инъекцируемого инсулина в сопоставлении с примером 6; на фиг.22 - сравнение перораль0 ного инсулина примера 7 с регул рно инъек- цируемым инсулином; на фиг.23 - поперечный разрез гранул тора CF; на фиг. 24 - схематическа иллюстраци инсулино- вой гранулы дл перорального введени при5 мера 12; на фиг.25 - уровни содержани инсулина в крови собак, получивших инсули- новый состав примера 12; на фиг.26 - вли ние гранул инсулина дл перорального введени по примеру 12 на уровни сахара, содержащегос в крови собак; на фиг.27 вли ние перорального инсулина примера 12 на уровни глюкозы в плазме собак; на фиг,28 - вли ние перорального инсулина примера 11 в сопоставлении с пероральным инсулином примера 13 на сахар в крови; на фиг.29 - вли ние формулы перорального инсулина примера 13 на сахар в крови.

Изобретение иллюстрируетс следующими примерами.

Примеров насто щем примере композицию, предназначенную дл перорального введени инсулина, получают в соответствии с насто щим изобретением. Частицы, имеющие средний диаметр приблизительно 50 мкм, получают из смеси холестерина , лаурилсульфата натри и метила и пропилпарабенов (рН 6) в качестве противо- микробных консервантов. Частицы получают с использованием струйной мельницы, поставл емой Фреунд Интэрнэйшнл Лимитед, Токио, Япони .

Фиг.1 и 2 схематически иллюстрируют струйную мельницу 10. Частицы дл получени подают во входную камеру 11 вибрационным питателем. Частицы во входной камере перенос тс в камеру измельчени 12 воздушным потоком через воздушное сопло 13. Воздушный противоток подаетс через воздушное сопло 14 противоположно потоку воздуха, несущему частицы в суспензии . Воздушные потоки указаны стрелками. Они привод т к действию размола частиц в пределах кольцевой камеры размола 12. Воздушный поток через сопла управл етс с тем, чтобы отрегулиовать действие размола в пределах камеры. Частицы размалываютс до желаемого размера диаметра и затем подаютс в канал 15 дл выпуска воздуха в центре камеры размола. Сепаратор

16 направл ет размолотые частицы так, чтобы они располагались в коллекторной колбе

17 в то врем , когда воздух выходит через отверстие трубки 18 дл выпуска воздуха.

Кристаллический однокомпонентный свиной инсулин (получен из Novo, Bagarvaerd, Дани ) затем св зывают с частицами , использу раствор, содержащий 8 мас.% гидроксипропилцеллюлозы и 0,005 М лаурилсульфата натри , 0,005 М триэтила- мин-HCI и 0,005 М лимонной кислоты. Частицы с инсулином, св занным с их поверхност ми, затем покрывают раствором , содержащим б мас.% моностеарата по- лиэтиленгликол (EMANON-3199, получен из КАО, Токио, Япони ), с образованием липидногосло , приблизительно, толщиной 0,1 мкм. Затем получают раствор дл энтеро- солюбильного покрыти путем растворени 4,5 мас.% гидроксиметилцеллюлозафталата (НРС-55), 0,5 мас.% шеллака (Шин-Этсу- Кемикал , Япони ) и 0,5 мас.% полиэтиленгли- кол -6000 (Шин-Ува Якухин, Япони ) в растворе , содержащем 47,3 об.ч. дихлорметана и 37,8 об.ч. этанола. Раствор затем разбав- л ют водой до оптимальной концентрации так, чтобы частицы с липидным слоем затем покрыть энтеросолюбильной оболочкой с толщиной приблизительно 0,1 мкм. 250 мг частиц с энтеросолюбильным покрытием за- 0 тем упаковывают вручную в твердые желатиновые капсулы.

Композицию получают с использованием модифицированного Фреунд Spir-A- Flow модель 5РС-Мини-5 220 с, 60 Гц, 3 П 5 (поставл етс Фреунд Интернэшнл, Токио, Япони ). Стандартный Splr-A-Flow модифицирован следующим образом. Отверсти в роторе были найдены слишком большими. Поэтому добавл ют два дополнительных си- 0 товых кольца. Ситовые кольца также ориентируют с тем, чтобы частицы не могли бы сквозь них падать.

Spir-A-Flow также модифицировать так, чтобы накачиваемый воздух был сухим и не 5 имел бы никаких масл ных микрочастиц, Воздух сушат до 20% абсолютной влажности . Давление воздушного потока также повышают до 920 л в минуту и воздушный поток ориентируют так, чтобы он продувал- 0 с через основание. Кроме того, вместо одного отверсти дл входа воздуха в основании используютс четыре отверсти . Отверсти ориентированы в основании под углом 0, 90, 180 и 270°.

5 Рукавные фильтры и пульсирующие фильтры разрезают по половине их длины. Кроме того, вместо одного сопла, расположенного на дне сосуда, используют три сопла, ориентированные на дне сосуда. Чет- 0 вертое сопло дл покрыти также располагают вверху сосуда. Нижние сопла используют дл св зывани и верхнее сопло -дл нанесени покрыти .

Фиг.З иллюстрирует устройство Splr-A- 5 Flow, обозначенное позицией 20. Устройство 20 функционирует следующим образом. Частицы помещают на вращающийс диск 22. Вращающийс диск 22 содержит ситовые отверсти 31. Вибратор 29 и смеситель 0 21 взаимодействуют с диском 22, образу частицы данного размера. Затем подают воздух и частицы суспендируютс в сосуде 26. Вырабатываютс два типа воздушного потока; щелевой воздух и флюидный воздух. 5 Щелевой воздушный поток проходит сквозь апертуру 33, тогда как флюидный воздушный поток сквозь апертуру 32. Суспендиро- ванные частицы затем могут быть покрыты св зующим раствором, распыл емым из нижних сопел 27. Хот только одно нижнее

сопло 27 иллюстрировано в модифицированном устройстве Sp r-A-F ow, обозначенном позицией 20, используют три нижних распылительных сопла 27. После того как частицы покрыты, они падают вновь на диск 22. После того как все частицы покрыты св зующим , воздушный поток возрастает и покрытые частицы можно покрывать вновь и т.д. Как описано выше, частицы также можно покрывать раствором, распыл емым из верхнего сопла 28.

Благодар повтор ющимс перемещени м при св зывании и покрытии порошкообразных частиц, последние хорошо смешиваютс , смачиваютс , пластицируют- с и галтуютс и превращаютс очень быстро в гранулы высокого качества. Поток гор чего воздуха через перфорированную площадь диска сушит гранулы весьма эффективно . Если вырабатываютс пыльные вещества и поднимаютс вверх, эта пыль собираетс рукавными фильтрами 24. Сопла дл очистки воздушной струей 25 используютс дл Дуть пыльных веществ, собираемых фильтрами обратно к диску 22 в основании, как необходимо.

Вращающийс диск 22 и вибратор 29 объединены с тем, чтобы образовывать частицы , имеющие сферические и ровные поверхности , высокую механическую прочность, высокую объемную плотность и узкий гранулометрический состав. Дл создани композиции данного примера твердые эмульси солюбилизирующие вещества, поверхностно-активные вещества , противомикробные консерванты помещают в сосуд через входное отверстие. Как только порошковидное сырье поместилось в сосуде, потоки воздуха вдувают по направлению вверх через перфорированные части вращающегос диска и круговой промежуток между вращающимс диском и внутренней стенкой камеры (сосуда). Поток воздуха предохран ет вещества от падени вниз через промежуток и перфорированные части.

Вращающийс диск 22, смеситель 21 и вибратор 29 запускаютс после внесени сыр ь . Дл создани композиции примера 1 ротор, а следовательно, и перфорированный диск вращают ее скоростью 300 об/мин, вибратор - 2000 об/мин и смеситель вращаетс со скоростью 500 об/мин. Воздушные потоки при 32-35°С проход т через отверсти в роторе (флюидный воздух) со скоростью потока 8-10 л/мин, а также через щель между ротором и стенкой (щелевой воздух) с расходом от 7 до 8 л/мин. Объединенные частицы сушат в течение 30 мин. Кристаллический инсулин (Novo - однокомпонентный свиной кристаллический инсулин , Группа N 833115, Парти № 69195-01) тщательно раствор ют в растворе, содержащем гидроксипропилцеллюлозу, лаурил- сульфат натри , лимонную кислоту и триэтиламин-HCI, рН 2.

Когда частицы подаютс воздухом вверх внутри оборудовани дл устройства покрыти и св зывани , причем используют 0 как щелевой воздух, так и флюидный воздух , св зывающий раствор распыл ют в виде мелкого тумана через двойное распылительное сопло при давлении распылительного воздуха 3 кг/м и скорости воз- 5 душного потока 10 л/мин.

Инсулинсв занные твердые эмульгиру- ющие частицы затем покрывают липидным .слоем, содержащим раствор сложных поли- этиленгликолевых эфиров жирных кислот 0 (КАО 5ЁККЕП, Япони : EMANON 3199, Парти Мз 12744V) со скоростью распылительного воздушного потока 10 л/мин и давлении распылительного воздуха 3 кг/м2.

Вышеприведенные покрытые инсулинс- 5 в занные твердые эмульгирующие частицы затем помещают в твердые гель-капсулы, после чего капсулы покрывают энтеросолю- бильной оболочкой.

Кажда полученна 350 мг капсула со- 0 держит:

Холестерин (Фулука, А.Г.; Швейцари ; Парти № 24657-784) 6,76x10 4 М;

Лаурисульфат натри {Якури, Кагаку, Япони : S316-06) 1-377х10 4М; 5 Триэтиламин-HCi (узко Сеи-Яку, Япони ) 4,089x10 6 М;

Лимонна кислота (Якури Кагаку, Япони : КА9105) 5,965хЮ 6 М

Гидроксипропилецеллюлоза (Шин-Уа 0 Якухин, Япони : 191184) 1,234х10 2 Г

Сложные полиэтиленгликолевые жир- нокислотные эфиры (КАО Sekken, Япони ; EMANON 3199, 12744Y) 1,543хЮ 2 Г

Инсулин (NOVO) 8 единиц. 5 Лимонную кислоту используют как ингибитор инсулин-инактивирующих ферментов , а также в качестве стабилизатора инсулина и регул тора рН.

Триэтиламин-HCI используют в качест- 0 ве стабилизатора инсулина и в качестве про- тивовспенивающего вещества.

Испытание 1-А. В данном испытании композицию дл перорального введени инсулина примера 1 сравнивают химиче- 5 ским с образом раствора дл внутривенного вливани инсулина Actrlpld (Novo). Одну капсулу с композицией дл перорального введени инсулина, содержащей 8 международных единиц (1.V.) однокомпонентного свиного кристаллического инсулина фирмы

По, полученного в соответствии с примером 1, раствор ют разрушением ультразвуком с использованием ультрасонификатора в течение 5 мин вводе. Половину(1/2)раствора, содержащего 4 1.V. композиции дл перо- рального введени инсулина, анализируют с использованием хроматографии с обращенной фазой. 4 1.V. инсулина actrapid NoVo также анализируют с исопльзованием хроматографии с обращенной фазой. Результаты показывают, что оба образца содержат одинаковое количество химически эквивалентного инсулина (см.фиг.4).

Испытание 1-В. в данном испытании снимают микрофотографии композиции дл перорального введени инсулина пример 1, использу дл этого сканирующий электронный микроскоп, Энтеросолюбильное и липидное покрыти частиц удал ют при помощи растворител , содержащего 47,3 об.ч. дихлорметана и 37,8 об.ч. этанола в воде. Микрофотографии частиц при 500-кратном увеличении показывают наличие относительно малых частиц (около 5-10 мкм в среднем диаметре) инсулина и гидроксипропилцеллю- лозных св зующих материалов, присоединенных к относительно большим частицам (около 50 мкм в среднем диаметре) холестерина и лаурилсульфата натри (см.фиг.5). При увеличении в 3000 раз видны стержнеобраз- ные инсулиновые кристаллы, пропитанные частицами гидроксипропилцеллюлозы (см.фиг.6).

Испытание С-1. В данном испытании композицию дл перорального введени инсулина примера 1 сравнивают с раствором дл внутривенного вливани инсулина Actrapid (NoVo) в количественном определении биологической активности. Две свиньи породы Yorkshire выдерживают голодом в течение ночи и одной свинье дают 8 1.V. инсулина Actrapid внутривенно. Другой свинье ввод т внутривенно в течение периода в 15 мин 8 1. V инсулина дл перорального введени по примеру 1, который растворен в 50 мл воды, Пробы крови берут от пары свиней и измер ют уровни сывороточного сахара. Уровни венозного сывороточного сахара двух свиней понижаютс почти в равной степени, хот продолжительность гипокгликемического действи дл композиции примера 1 вл етс более длительной , чем продолжительность действи инсулина Actrapid (см.фиг.7).

Испытание 1-D. В данном испытании композицию дл перорального введени инсулина по примеру 1 сравнивают с одно- компонентным свиным кристаллическим инсулином NoVo и регул рно вводимым ин- сулином-40 (Гонг-Шин фармасьютикал Компани ) при количественном определении биологической активности в отношении кроликов при внутривенном введении лекарственного средства. Трех белых кроликов, каждый весом 1,8 кг, выдерживают голодом в течение ночи и обрабатывают внутривенным вливанием в течение 10 мин 4 1.V. либо инсулина NoVo.ToHr-шин инсулина 40, либо эмульсией, содержащей композицию дл перорального

0 введени инсулина по примеру 1. Пробу венозной крови собирают из ушной вены каждого кролика за 30 мин до инсулинового введени и 0, 15, 30, 45, 60, 75, 90 и 105 мин после завершени вливаний.

5

Кажда из трех форм инсулина про вл ет приблизительно одинаковые гипогликемиче- ские эффекты с началом гипогликемического действи через 30 мин после проведени вли0 вани . Врем пика гипогликемического действи инсулина NoVo продолжаетс в течение 30 мин после завершени вливани , - тогда как дл Тонг-Шин инсулина-40 оно составл ет 60 мин. Эмульси композиции

5 дл перорального введени инсулина по примеру 1 про вл ет пик гипогликемиче- ской активности в промежутке между инсулином NoVo и Тонг-Шин (см.фиг.8).

Испытание 1-Е. В данном испытании

0 композицию дл перорального введени инсулина по примеру 1 примен ют дл двух здоровых людей из числа мужчин-добровольцев . Введение перорального инсулина вызывает гипогликемические эффекты,

5 сравнимые с теми, которые вызывает подкожное введение эквивалентного количества инъекцируемого инсулина (Тонг-Шин).

В испытании участвуют двое мужчин- добровольцев возрастом 37 и 38 лет, весом

0 52 и 54 кг. Каждый получают 16 1.V. композиции дл перорального введени инсулина по примеру 1 во врем испытани . Вместе с композицией дл перорального введени инсулина по примеру 1 каждый испытуемый

5 получает две капсулы липолитических ферментов , кажда капсула содержит: Панкреатическую

липазу1000 единиц Амилазу 7500 единиц

0 Протеазу7500 единиц Соли желчных кислот 40 кг на капсулу емкостью 350 мг с использованием кукурузного крахмала в качестве наполнител .

5 Капсулы с ферментами получают следующим образом.

Панкреатическую липазу покрывают слоем гидроксипропил целлюлозы толщи- ной 0,1-0,3 мкм и энтеросолюбильной оболочкой по примеру 1. Затем прибавл ют

амилазу и протеазу. Полученную композицию покрывают слоем гидроксипропилцеллю/io- зы1 толщиной 0,1 мкм. Затем прибавл ют соли желчных кислот, покрытые гидроксипропил- целлюлозой (0,1 мкм), получа панкреатмче- скую липазу в твердых гель-капсулах,

В 7 ч 30 мин утра каждый участник испытани получает стандартный завтрак, состо щий из двух жареных иц, двух кусочков бекона, двух ломтиков обжаренно- со черного хлеба, столовой ложки масла и чашки черного кофе. Композицию инсулина примера 1 ввод т перорально в 10 ч обоим участникам. Инсулин ввод т в капсулах, содержащих 16 1.V, кристаллического моно- компонентного свиного инсулина Novo, В 12 ч оба участника получают стандартный ленч, состо щий из 180 г бифштекса, зеленого салата с маслом и уксусом, кусочка черного хлеба и чашки черного кофе.

Пробы крови собирают в 10:00, 13:00 и 16:00 и анализируют на уровне содержани глюкозы в крови. Пробы показывают, что композици дл перорального введени инсулина про вл ет сильное гипоглйкемиче- ское действие а отношении обоих субъектов через 3 ч, однако через 6 ч уровни кров ной глюкозы возвращаютс до их начальных уровней.

Уровни содержани глюкозы быстро спадают у обоих пациентов через 3 ч после введени инсулина. Приблизительное 10:45 первый субьект начинает жаловатьс на помутненное зрение, неспособность к концентрации и тошноту. В 11:20 тот же субъект начинает жаловатьс на судороги и тремор в руках и ногах и холодное потение. Второй субъект также жалуетс на аналогичные симптомы, однако меньшей интенсивности. В 11:30 оба пациента получают 250 мл чис- того апельсинового сока и первый пациент дополнительно получает 250 мл легкого алкогол .

Через одну неделю оба добровольца получают стандартный завтрак, т.е. завтрак, подаваемый в первый день испытани , в то же самое врем . В 10:00 оба субъекта получают подкожное вливание 16 I.V. регул рно инъецируемого инсулина -40 Тонг-Шин. Приблизительно в 10:30 оба пациента начи- нают про вл ть гипогликемические реакции , продолжающиес примерно 2 ч. Оба субъекта получают в 11:20 чистый апельсиновый сок и стандартный ленч в 12:00. Уровни содержани глюкозы в крови измер ют в 10:00, 13:00 и 16:00 и они показывают, что инъецируемый инсулин продуцирует пиковый гипогликемический эффект примерно через 3 ч после введени инсулина и что как и дл композиции дл перорального введени инсулина по примеру 1 эффект исчезает через 6 ч после введени (см.фиг.9).

Испытание 1-F. В данном испытании композицию дл перорального введени инсулина по примеру 1 примен ют дл п ти человек, страдающих инсулиннезависимым сахарным диабетом (IDDM,) и п ти человек, страдающих инсулиннезависимым сахарным диабетом (NIIDDM). Пациенты IDDM наблюдаютс в госпитальных услови х как минимум три дн перед испытанием, их уровни содержани сахара в крови регулируют должной больничной диетой и р дом подкожных вливаний регул рно инъецируемого инсулина Тонг-Шин. Пациенты NIDDM подвергаютс наблюдению за их уровнем содержани сахара в крови путем регулировани больничной диеты и перорального введени гипогликемических средств, таких как хлоропропамид (Диабмназэ, изготовленна Пфайзер Лабораториз Дивижн, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк).

Утром первого дн испытани каждый пациент получает стандартный завтрак, однако пациенты воздерживаютс от получени пероральных гипогликемических средств и подкожных вливаний инсулина. Вместо этого пациенты получают перорально соответствующую дозу композиции дл перорального введени инсулина по примеру 1 и две капсулы композиции липолитиче- ских ферментов, приведенной в испытании 1-Е. Пробы крови берут от пациентов непосредственно перед введением пероральной инсулиновой композиции и через 2 и 4 ч после введени . Эти пробы измер ют затем на уровни содержани глюкозы в крови. Каждый пациент получает стандартизированный больничный ленч через 2 ч после введени пероральной композиции.

Результаты испытани приведены в табл.1 и 2.

Как показано в табл.1 и 2 уровни содержани глюкозы в крови всех пациентов падают значительно между введением композиции дл перорального вливани инсулина и 2 ч позже. Однако уровни глюкозы пациентов, страдающих IDDM, возрастают вновь быстро между 2 и 4 ч и у трех из п ти пациентов приблизительно равны или превосход т начальные уровни. С другой стороны , уровни содержани глюкозы в крови тех пациентов, которые страдают NIDDM, продолжают понижатьс между 2 и 4 ч у четырех из п ти пациентов. У п того пациента уровень содержани глюкозы в крови поднимаетс между 2 и 4, однако не приближаетс к первоначальному уровню.

Приме р 2. В данном примере компо- зицию дл перорального введени инсулина пролонгированного действи получают в соответствии с основным методом примера 1. Частицы, содержащие холестерин, лау- рилсульфат натри и метил, а также пропил- парэбены, покрывают частицами, содержащими монокомпонентный свиной инсулин Novo, св занный с гидроксипро- пилцеллюлозой (40 г гидроксипропилцел- люлозы в 600 мл воды; 6,07%-й раствор), лаурилсульфат натри , триэтидамин-HCI и лимонную кислоту. Эти частицы с инсулином , св занным с их поверхност ми, затем покрывают моностеаратом полиэтиленгли- кол с образованием липидного покрыти вокруг частиц толщиной приблизительно 0,3 мкм в противоположность толщине приблизительно 0,1 мкм покрыти композиции примера 1. Частицы затем покрывают энте- росолюбильной оболочкой, содержащей те же вещества, которые используютс дл композиции примера 1, с толщиной покрыти приблизительно 0,1 мкм.

Испытание 2-А. В данном испытании инсулинова композици пролонгированного действи по примеру 1 вводитс трем субъектам, страдающиим IDDM и рем субъектам , страдающим NIDDM (субъекты A, D, Е, G, I И J из испытани 1-F). Утром в день испытани каждый пациент получает обычный завтрак, однако им не полагаетс принимать пероральные гипогликемические средства и подкожные вливани инсулина, что составл ет часть их нормального лечени . Вместо этого, они обрабатываютс пе- рорально вводимыми дозами композиции примера 2 и двум капсулами, содержащими композицию липолитических ферментов , приведенную в испытании 1-Е. Пробы крови берут во врем введени перораль- ной инсулиновой композиции и в различные периоды после введени . Стандартный больничный ленч получают все пациенты через 4 ч после введени инсулиновой Композиции .

Анализ уровней содержани глюкозы в крови различных проб показывает, что композиции примера 2 про вл ют более продолжительное гипогликемическое действие, чем композиции примера 1. Композиции с более толстыми липидной и энте- росолюбильной оболочками про вл ют пиковые гипогликемические эффекты через 4-6 ч и они продолжаютс до 7 ч, что составл ет полную продолжительность испытани (см.табл.З и 4).

Испытание 2-В. В данном испытании осуществл ют сравнительные тесты в отношении композиции дл перорального введени инсулина по примеру 1 и композиции дл перорального введени инсулина пролонгированного действи по примеру 2, Трем пациентам, страдающим IDDM, и трем пациентам, страдающим NIDDM, ввод т либо композицию примера 1, либо компози- цию примера 2 вместе с двум капсулами, содержащими липолитические ферменты, приведенные в испытании 1-Е. Дл каждой пероральной дозы инсулина дают две капсулы . Каждого субъекта заставл ют голо0 дать в течение ночи и не дают завтрак, а также его обычные противодиабетические терапевтические средства. Уровни содержани глюкозы в крови каждого объекта анализируют во врем введени перораль5 ной композиции и в разные временные интервалы после введени лекарственного средства.

Результаты введени субъектам IDDM композиций примеров 1 и 2 показывают, что

0 композици примера 1 про вл ет сильное

гипогликемическое действие в пределах 2 ч

введени , однако уровни содержани глю козы в крови возвращаютс к своим первоначальным значени м через 4 ч.

5 Композиции примера 2 показывают более плавное действие и не продуцируют их пиковый гипогликемический эффект вплоть до значени от 4 до 6 ч после введени лекарства . Даже через 7 ч они про вл ют вырэ0 женный гипогликемический эффект,

Результаты введени композиций пациентам , страдающим NIDDM, показывают, что различи между двум композици ми менее выражены. Пиковое гипогликемиче5 ское действе обеих композиций, по-видимому , происходит примерно через 4 ч, хот композици примера 2 может иметь более продолжительное действие нежели композици примера 1. Обе композиции про вл 0 ют более пролонгированный период нормогликемического режима у пациентов NIDDM, чем у пациентов IDDM.

Предполагают, что более короткий период гипогликемического воздействи ком5 позиции примера 1 у пациента IDDM вызван тем, что инсулин в композиции высвобождаетс с более высокой скоростью, чем инсулин композиции примера 2, но он инзктивируетс с более высокой скоростью

0 у пациентов IDDM, поскольку присутствуют антиинсулиновые антитела, которые часто обнаруживаютс у страдающих IDDM (инсу- линсв занным сахарным диабетом) см.фиг.10 и 11.

5 Примерз. В данном примере альтернативную композицию дл перорального введени инсулина пролонгированного действи получают в соответствии с основной методикой примера 1. Частицы, имеющие средний диаметр около 50 мкм, получают из

смеси холестерина, лаурилсульфата натри и метила, а также пропилпарабенов. Кристаллический монокомпонентмый инсулин фирмы Novo затем св зывают с частицами, использу св зующие, содержащие гидро- ксипропилцеллюлозу, лаурилсульфат натри , триэтиламин-HCI и лимонную кислоту. Частицы с инсулином, св занным с их поверхност ми , затем покрывают дважды мо- ностеаратом полиэтиленгликол , каждое покрытие имеет толщину 0,15 мкм. Частицы с двойными липидными покрыти ми затем покрывают энтеросолюбильной оболочкой в соответствии с композицией примера 1, имеющей толщину 0,1 мкм.

Испытание 3-А. В данном испытании композицию инсулина пролонгированного действи примера 3 ввод т трем пациентам, страдающим IDDM. Лечение провод т в соответствии с основной методикой, которой придерживаютс в клиническом испытании 1, когда субъективно подвергают голоданию в течение ночи и не провод т нормальной терапии тпогликемическими средствами. Пациентам дают стандартный больничный завтрак и ввод т пероральную дозу инсули- новой композиции примерз 3, а также две капсулы композиции липолитических ферментов , приведенной в испытании 1-Е. Пациентам дают стандартный больничный ленч через 3 ч после введени пероральной инсулиновой композиции примера 3.

Уровни содержани глюкозы в крови пациентов измер ют из проб венозной крови, собранных у пациентов в различные пермо- ды времени вслед за введением перораль- ного инсулина. Данные, представленные в табл.5 и б, показывают на пролонгированное гипогликемическое действие с пиком гипогликемического эффекта, происход - щим через 4-6 ч, но при гипогликемической активности, продолжающейс целых 9 ч.

Один пациент, страдающий NIDDM, также получает композицию примера 3, и липолитические ферменты, приведенные в испытании 1-Е, Этот пациент голодает в течение ночи перед испытанием, а также в течение последующего испытани . Пациента , страдающего NIDDM, обрабатывают лекарственным средством в 10ч утра, уровень содержани глюкозы в его крови продолжает падать в течение 5.5 ч проведени испытани .

Пример 4. В данном примере инсулин дл перорального введени , имеющий со- став, аналогичный составу перорального инсулина примера 1, получают путем изменени липидного покрыти композиции примера 1. Липйдное покрытие измен ют так, что кроме моностеарата полиэтиленгликол добавл ют фосфотидилфосфат (количество , достаточное дл получени конечной концентрации 0,046x10 2 г), фосфолипиды (количество, достаточное дл получени конечной концентрации 0,046x10 2 г) и холестерин (количество, достаточное дл получени конечной концентрации 2,628x10 4 моль). Это липидное покрытие нанос т на инсулин с толщиной 0,3 мкм. 240 мг продукта инсулина дл перорального введени затем упаковывают вручную в твердые гель-капсулы. Гель-капсулы покрывают энтеросолюбильной оболочкой по примеру 1.

Пример 5. В данном примере перо- ральный инсулин, аналогичный композиции перорального инсулина примера 3, получают следующим образом. Перорэльный инсулин модифи цируют так, что холестерин примера 3 замещают комбинацией холестерин-аргинин HCI. Холестерин-аргинин НО приводит к получению композиции, котора имитирует композицию липопротемна малой плотности In vivo. Кроме того, измен ют липидные материалы дл покрыти . После покрыти композиции лмпидным слоем, аналогичным тому, который использовали в примере 4 с толщиной покрыти 0,15 мкм, нанос т второй липидный слой. Второй ли- пидный слой включает олеиновую кислоту (количество, достаточное дл получени конечной концентрации 8,776x10 моль) и трометан (количество, достаточное дл получени конечной концентрации 8,764х10 6 моль) в качестве вулканизатора или пластификатора жидких мембран дл покрыти .

Пероральный инсулин данного примера состоит из ниэкоплотного липопротеинпо- добного твердого эмульгатора в качестве основы. Монокомпонентный кристаллический свиной инсулин ПО О св зывают с эмульгатором и полученный продукт покрывают водорастворимым слоем гидроксипро- пилметилцеллюлозы с толщиной 0,1 мкм, который затем покрывают дважды липидными материалами покрыти до конечной толщины мембраны, равной 0,3 мкм (0,15 мкм на слой липидного покрыти ), после чего добавл ют стабилизирующий трометан и продукт упаковывают вручную в твердую гель-капсулу так, что кажда капсула содержит 240 мг композиции. Капсулу затем покрывают слоем энтеросолюбильного вещества примера 1. Водорастворимое покрытие позвол ет покрывать инсулин-холестерин-аргинин HCI липидной оболочкой.

Испытание 5-А. Биологическа доступность инсулина композиции примера 4 приблизительно в 3 раза выше, чем биодоступность обычно вводимого инсулина, однако путем регулировки дозировки инсулина она почти одинакова (см.табл.7 и 8).

Испытани также показывают, что инсу- линова композици примера 5 композици примера 5 приводит к началу гипогликемии, а также к полной ее продолжительности, котора чрезвычайно напоминает то, наблюдаетс после подкожного введени обычно инъецируемого инсулина. Биологическа доступность инсулина выше дл пе- рорального введени композиции по примеру 5, чем по примеру 4.

П р и м е р 6. Композици , рассмотренна в примере 5, была получена путем св зывани инсулина (монокомпонент Novo) с частицами холестеринлаурилсульфата натри , как описано в примере 1. Затем инсу- линсв занные твердые эмульгирующие частицы покрывались раствором, содержащим сложные эфиры полиэтиленгликовых жирных кислот и лецитин ичного желтка с 5%-ой фосфатидной кислотой (в количестве, достаточном дл того, чтобы конечный продукт в виде 350 мг капсулы содержал 0,309x10 г). Используют желтковый лецитин , содержащий 5% фосфатидной кислоты, растворенный в этаноле (SICMACHEMICAI, St.Louis, Mo).

Результаты исследований показали (см.фиг.12-21), что композици , рассмотренна в примере 6, вл етс перорально активным инсулином дл больных IDDM и больных MIDDM. Кроме того, эти анализы показали, что результаты обоих исследований совпадают.

На фиг.12-21 сплошные линии иллюстрируют результаты испытаний, проведенных корейскими исследовател ми, а пунктирные линии означают результаты испытаний , проведенных американскими исследовател ми . Ось х обозначает врем (часы), а ось у - содержание глюкозы в крови (мг/дл). Фиг,9 иллюстрирует результаты4 наблюдени над пациенткой в возрасте 46 лет, получившей 6 капсул, содержащих композицию , описанную в примере 6. Фиг. 10 - результаты дл пациента (мужчина, 38 лет, больной NJDDM), получившего 10 единиц обычного инъецируемого инсулина, обозначенного х, а затем 6 капсул (24 ед.) композиции , описанной в примере 6.

На фиг.11 привод тс данные дл пациента 47 лет, получившего 10 ед. инъецируемого инсулина (обозначенного П). и через дн два после этого б капсул (24 ед.) композиции , описанной в примере 6 (х). На фиг,11 привод тс данные дл пациента IDDM, 45 лет, получившего 10 ед. инъецируемого инсулина (Ц), и через два дн 8 капсул (32 ед.). рассмотренного в примере 6 препарата (х).

На фиг.12 привод тс данные дл пациентки NIDDM, 47 лет получившей 6 капсул (24 ед.) рассматриваемого в примере 6 препарата . На фиг. 13 привод тс данные дл

пациента IDDM, получившего 14 капсул (56 ед.) указанного препарата. На фиг.14 представлены результаты дл больного IDDM, получившего 12 капсул (48 ед.) данного препарата . На фиг.15 привод тс данные дл

пациента IDDM 38 лет, получившего 10 ед. инъецируемого инсулина (Q). и через 2 дн 10 капсул (40 ед.) препарата примера б (х). На фиг. 16 привод тс результаты дл пациента 10ОМ,47лет, получившего Юед.обычного инъецируемого инсулина (П) и через два дн 8 капсул (32 ед.) препарата, рассматриваемого в примере 6 (х). На фиг. 17 привод тс данные дл пациента 1DDM, 49 лет, получившего 10 ед. обычного инъецируемого инсулина (П) и через два дн 6 капсул (24

ед.) препарата примера 6(х). Все пациенты

вместе с дозой препарата, рассмотренного

в примере 6, получили по две капсулы липолитических ферментов испытани 1-Е.

П р и м е р 7. Дл получени композиции примера 7 холестерин (F ка, A.G., Швейцари ) и 1-аргинин HCI (Wako Jun-Yaku, Япони , KWJ 3778) тщательно размешивались в сосуде в отношении два к одному. В качестве наполнител использовалась Gum Acacia (Yakurl-Kagaku, Япони . А001-03).

Липид (холестерин) и аминокислота (L- агринин HCI) были св заны гидроксипро- пилцеллюлозой, содержащей инсулин

(монокомпонент Novo). Лимонна кислота была использовано как ингибитор инсулин- неактивных ферментов, а также в качестве рН-регул тора.Триэтиламин использовалс в качестве инсулинстабилизатора, а также

как противовспенивающий агент.

Метод соединени инсулина с частицами использовалс аналогично описанному в примере 1, т.е. путем распылени потоком воздуха с расходом 12 л/мин и путем распылени сжатым воздухом под давлением 2,5 кг/м2.

Липидные и аминокислотные частицы, св занные с кристаллическим инсулином,

покрывались водорастворимой пленкой, содержащей гидроксипропи метилцеллюлозу (Shin-Etsu-Kagaku, Япони . Упом нутые св занные с инсулином липидные аминокислотные частицы покрывались липидным

слоем, содержащим сложные эфиры поли- этиленгликолевых жирных кислот, желтковый лецитин, содержащий5% фосфатидную кислоту, и олеиновую кислоту (Slgma Chem StLouis). Трометамин использовалс в качестве вулканизатора

-2,011x10 М

-7.982Х1045 М

v4

м

-2,575x10

-2,060x10 6 М

-6,563х10 3М

-1,901хЮ 2М

v2

М

Полученна в результате композици омещалась в твердую гельную капсулу и окрывалась энтеросолюбильным слоем, ак это было описано в примере 1.

Полученные описанным методом капсуы содержат:

Холестерин

Лаурилсульфат

натри

Агринин

НС

Триэтиламин

НС)

Лимонную

кислоту

Олеиновую

кислоту

Трометамин

(Fuluka: Швейцари ) -1,902x10

bum Acacia (Yakari Kagaku,

Япони )

Гидроксипропилцеллюлозу-1

Гидроксипропилметилцеллюлозу

Желтковый лецитин

(5% фосфатидна

кислота)

Инсулин (Novo)

Метилпарабен

Пропилпарабен

Силикагель

Полученна композици примера 7 имет действие, сходное с действием подкожой инъекции инсулина, введенного еловеку.

Ниже рекомендуютс пределы содерани использующихс веществ дл компоиции в соответствии с примером 7. Кажда 40 мг капсула может содержать:

Холестерин

Лаурилсульфат

натри

Агринин

С

Триэтиламин

на

Лимонную

кислоту

Олеиновую

кислоту

Троэтимин

Gum Acaccla

Ч4,266-8,860)х10 3 М

Ч1,426-2,376) (1,331-2,56Q)x10 M

10

15

20

-2,147x10 2 г

-0,733x10 2

-0,458х10 2г 25

-0,299x10 2 г

-8 единиц vSJSOxlO M 30

-1,245xW5M

-0,458хЮ 2 г

35

40

-(1,609-2,413)хЮ чМ

- (5,587-9,978) M

-(1,931-3.219)хНГ4М 45 Ч1.545-2,575)

Ч1,825-2,576)х10 ГГ Гидроксипропиленцеллюлозу-1 (0.115-0,298) Гидроксипропил- метилцеллюлозу (0,275-0,641)хЮ 2 Г Желтковый лецитин (5% фосфатидной

50

55

v2

10

15

20

кислотой)(0.115-0,298)

Инсулин (Novo) или инсулин (other) добавл етс в каждую капсулу в составе между 4 и 40 ед. на капсулу.

Метилпарабен (3,179-7,8031x10 5 М, пропилкарабен (0,809-0,681)х 10 М и сили- кагель (0,275-0,641)х10 г могут быть добавлены к частицам, порошкообразно покрытых инсулином дл перорального ввода .

Наконец, покрытые порошком инсулина частицы помещаютс в твердую гель-капсулу, м гкую гель-капсулу или прессуютс в таблетки . Затем эти формы могут быть покрыты энтеросолюбильным слоем.

П р и м е р 8. Композици , приготовленна в соответствии с технологией, описанной в примере 7, может быть модифицирована следующим образом:

Кажда 240 мг капсула может содержать:

5

0

5

0

5

0

5

-2.413x10 4 М

-8,081хЮ 5М

-2,592x10 4 М

-2,073x10 6 М

-3,024x10 3 М

Холестерин Лаурилсульфат- натри Агринин

на

Триэтиламин

HCI

Лимонную

кислоту

Олеиновую

кислоту

Троэтамин

Gum Acaccla .Гидроксипропилцеллюлозу-1

Гидроксипропил

метил цел л юлозу

Желтковый лецитин

(5% фосфатид, кис-той)

Инсулин (Novo)

Метилпарабен

Пропилпарбен

Силикагель

Испытание 8. Семь пациентов (6 мужчин и одна женщина) в возрасте от 24 до 47 лет (средний возраст 34,4), весом от 48 до 68 кг (средний вес 58,6 кг), больных инсулинзави- симым диабетом (1DDM) получили от 32 до 48 (в среднем 42,6) ед. введенного перораль- но, полученного по технологии, описанной в примере 7, инсулина при режиме голодани накануне и в течение проводимого испытани .

П ти пациентам (мужчинам), больным IDDM было введено подкожно 0,172 ед./кг обычного инъецируемого инсулина при режиме голодани накануне и в течение проводимого испытани .

-2,376x10 М

-8,764x10 6 М

-2,119хЮ 2Г

- 0,737хЮ 2 Г -0,461хЮ 2Г

-0,115х10 2Г -8 единиц

-5,815х10 5М

-1,153хЮ 5М

- 0,461x10 2 М

Общий эффект снижени уровн глюкозы в сыворотке после перорально введенного инсулина , приготовленного по технологии примера 7, аналогичен действию обычного инъецируемого инсулина (см. фиг.22) и табл.9.

У двух пациентов, больных IDDM, после перорального введени орального инсулина , изготовленного по технологии, описанной в примере 7 (0,63 ед/кг), была измерена инсулинова доступность (уровень инсулина в сыворотке).

Сравнение этих данных с данными, полученными дл 5 пациентов 1DDM, которым было введено подкожно 0,172 ед/кг обычного инъецируемого инсулина, показало следующую фармакокинетику и биологическую доступность инсулина (см.табл. 10).

Клиническое исследование показало, что препарат инсулина, изготовленного по методике, описанной в примере 7, и вводимого перорально при разовой дозе 0,63 ед/кг, оказывает гипогликемическое действие (снижение уровн глюкозы в сыворотке крови) у больных диабетом (аналогичное действие обычного вводимого подкожно инъецируемого инсулина (Tong-Shin) в количестве 0,172 ед/кг в другой группе больных инсу- линзависимы диабетом). Четверо из семи исследуемых больных IDDM были подвергнуты инсулиновому шоку, спровоцированному путем введени перорально сладкой воды и свежего апельсинового сока.

Однако сравнение данных по фармако- кинетике и биодоступности, полученных после введени 0,630 ед/кг пероралъного инсулина, изготовленного по методике примера 7, и данных, полученных после подкожного введени 0,172 ед/кг обычного инъецируемого инсулина (long-Shin), показало , что скорость всасывани инсулина в 2 раза выше после введени перорального инсулина, чем после введени инъекцЧюн- ного инсулина. Инсулинова доступность (AUC) после введени перорального инсулина 30,630 ед/кг почти в 4,7 раза больше чем после подкожного введени инъецируемого инсулина (0,172 ед/кг). AUC после адекватной дозировки введени инсулина составл ет 2264,8 ЕД после введени перорального инсулина и 1775,0/ЕД после введени обычного инсулина. Биодоступность орального инсулина, изготовленного по методу, описанному в примере 7, равна или превышает биодоступность обычного инсулина при данной дозировке.

Введение перорального инсулина, изготовленного по методу описанному в примере 7, дает отличный эффект в понижении уровн глюкозы в сыворотке диабетических

больных и в повышении биодоступности инсулина , аналогичный эффекту подкожного введени обычного инъецируемого инсулина больным инсулинзависимым диабетом. Пример 9. В этом примере липоли- тические ферменты вл ютс липидным и энтеросолюбильным покрыти ми и могут быть св заны с композицией перорального инсулина в разовых консулах или таблетках.

0

А. Панкреатическа липаза. Частицы панкреатической липазы могут быть приготовлены следующим способом. Нижеприведенные компоненты помеща5 лись в модифицированный ранее описанный распылитель (см.табл. 11).

Компоненты помещаютс на диск аппарата Spir-A-Flow и высушиваютс при 30- 32°С, при этом ротор вращаетс со

0 скоростью 300 об/мин, смеситель со скоростью 500 об/мин. А вибратор 2000 об/мин. Тщательное высушивание частиц компонентов осуществл етс путем их выдувани со дна аппарата гор чим воздухом, нагретым

5 до температуры около 30-32°С. Гор чий воздух выдуваетс через щель между ротором и стенкой сосуда (щелевой воздух) и через сетку с мелкими отверсти ми на вращающемс диске (флюидный воздух). Щеле0 вой воздух и флюидный воздух наход тс под давлением в пределах 100-450 мм НаО. Очищенные частицы суспендируютс в сосуде аппарата Spir-A-Flow при помощи щелевого воздуха и флюидного воздуха. Затем

5 частицы компонентов покрываютс следующим пленкообразующим раствором (см.табл. 12).

Чтобы покрыть частицы раствором дл покрыти , этот раствор наноситс рас пыл е0 нием на частицы компонентов, которые наход тс в субсидированном состо нии в сосуде, при этом скорость равна 10 мл/мин, а давление в пределах 1-5 кг/м2. Распыление проводитс в течение 120 мин (сопло

5 распылител включено в течение 20-40 с и выключено в течение 60-90 с попеременно ).

В результате частицы панкреатической липазы покрываютс и при этом защищают0 с тонким слоем пленки НРМС-1, который вл етс водным раствором. Эти покрытые НРМС-1 - пленкой частицы панкреатической липазы затем покрываютс энтеросолюбильным слоем при использовании

5 следующего раствора дл энтеросолюбиль- ного покрыти (см.табл. 13).

Данный раствор дл энтеросолюбиль- ного покрыти имеет рН около 5,2-5,6.

С другой стороны, техническа чистота полиакрилата марки EUD RAGITRR-L-100-55

(или 1-100) или EUD RAGTRR-L 30-D-55 позвол ет использовать его дл покрыти частиц (см.фиг. 14).

Частицы покрывались энтеросолюбиль- ным слоем при использовании первого из описанных растворов дл энтеросол(обильного покрыти методом распылени раствора дл энтеросолюбильного покрыти на покрытые НРМС-1 - пленкой частицы панкреатической липазы, наход щиес в суспендированном состо нии в сосуде распылител , при скорости распылени 10 мл/мин и давлении 2,5 кг/м в течение 3-4 ч. Сопло распылител работало в течение 20-40 с и выключалось в течение 60-120 с попеременно.

Полученный в результате продукт раствор етс в желудочном растворе и в дуоденальном растворе в течение необходимого промежутка времени.

В. Соль желчной кислоты.

Частицы соли желчной кислоты формируютс при помощи аппарата Sptr-A-Flow дл нанесени покрыти путем распылени с использованием раствора дл энтеросолюбильного покрыти и первого из упом нутых растворов, примен вшихс дл покрыти панкреатической липазы. Соль желчных кислот и avlcel покрывались методом , предложенным в разделе А. Были использованы компоненты соли желчной кислоты и avlcel в следующем составе (см.табл.15).

С. Технологи приготовлени перораль- ного инсулина.

Пероральный инсулин изготавливаетс следующим образом. Нижеприведенные компоненты (см.табл.16) смешиваютс в устройстве .

Splr - А - Flow.

Компоненты тщательно перемешиваютс и высушиваютс в сосуде устройства Splr-A-Flow. Были использованы следующие параметры работы устройства: скорость вращени ротора 350 об/мин, скорость смесител 500 об/мин, вибратора 2000 об/мин, давление щелевого воздуха в пределах 100- 300 мм НаО, давление флюидного воздуха 100-350 мм НаО, температура воздуха в пределах 24-31°С; при указанных параметрах компоненты смешиваютс и высушиваютс в аппарате Splr-a-Flow в течение приблизительно 30 мин. Затем тщательно перемешанные и высушенные компоненты суспендируютс в атмосфере сосуда и св зываютс при помощи следующего св зывающего раствора (см.табл. 17.

Чтобы описанные частицы покрыть св - эывакнцим раствором, этот раствор распыл ют при помощи сопла распылител , помещенного в верхней части устройства

Splr-A-Flow, дл этого раствор помещают в цилиндр, а затем охлаждают, погружа его в охладитель со льдом перед и во врем процесса распылени . Св зывающий раствор покрывают суспендированные очищенным воздухом частицы при скорости от 10 до 14 мл/мин, давлении 1,0-2,0 кг/м2 и объеме воздуха от 15 до 25 л/мин в течение приблизительно 2 ч до тех пор, пока не будет

0 использован весь раствор. Сопло распылител включено в течение 20-40 с выключено в течение 30-90 с попеременно. На прот жении всего процесса температура воздуха, используемого дл суспендирова5 ни частиц, поддерживаетс в пределах 25- 32°С. Полученные в результате частицы, содержащие кристаллический инсулин, тут же раствор ютс е воде, имеющей температуру около 24°С, образу таким образом

0 эмульсию, содержащую очищенные мелкие частицы св занного инсулина. Эмульси имеет рН в пределах приблизительно 4,2- 5,4.

Немедленно вслед за этим инсулинсв 5 занные частицы, содержащиес в эмульсии, покрываютс липидным слоем из раствора, приготовленного из компонентов, указанных в табл.18, путем распылени этого раствора на частицы.

0 Полученный раствор имеет рН приблизительно в пределах 5,5-6,5. Раствор дл липидного покрыти также распыл етс при помощи сопла распылител , расположенного в верхней части сосуда аппарата. Исполь5 зуютс следующие параметры устройства Splr-A-Flow: скорость ротора 250-300 об/мин, скорость смесител 500 об/мин и вибратора 2500-3000 об/мин. Скорость распылени сопла 12 мл/мин при давлении

0 воздуха от 1,2 до 1,5 кг/м2 и объёме воздуха от 15 до 20 мл/мин, температура продукта поддерживаетс в пределах около 30-34°С. Как и прежде температура продукта поддерживаетс при помощи установленного в

5 Splr-A-Flow терморегул тора, который обеспечивает желаемую температуру потоков воздуха в сосуде устройства. Сопло распылител включено в течение 20 с и выключено в течение 60-90 с попеременно.

0 Полученные в результате покрытые липидным слоем частицы затем вновь покрываютс липидным раствором. Раствор, предназначенный дл повторного липидного покрыти , содержит следующие компо5 ненты(см.табл.19).

Раствор дл повторного липидного покрыти распыл етс из боковой стенки сосуда Splr-A-Flow при скорости распылени 12 мл/мин, давлении воздуха от 1,0 до 1,5 кг/м и объеме воздуха от 15 до 20

л/мин. Ротор вращаетс со скоростью 300- 350 об/мин, смеситель 500обмин, вибратор 3000-3500 об/мин, температура продукта поддерживаетс равной приблизительно от 31 до 35°С. Сопло распылител включено в течение 20-40 мин и выключено в течение 60-90 с попеременно.

По желанию трометамол может быть исключен из раствора дл повторного покрыти . Если трометамол исключаетс из списка компонентов, то необходимо увеличить врем сушки и предприн ть меры по устранению излишней сальности, влажности частиц. Трометамол (трометамин) входит в рецептуру европейской фармакологии и фармакологии США.

После стадии повторного покрыти ли- пидным раствором покрытые и высушенные частицы помещаютс кажда в твердогель- ную капсулу или прессуютс в таблетки. Пе- роральный инсулин, св занный покрытыми частицами, может быть помещен в капсулы или таблетки отдельно или смешанным с частицами липазы, покрытыми энтеросолю- бильным слоем и частицами солей желчных кислот, описанных выше. Полученные в результате капсулы или таблетки могут быть покрыты энтеросолюбильным слоем.

С другой стороны, покрытые липидным слоем св занные частицы орального инсулина могут сами быть покрыты энтеросолюбильным слоем, Раствор энтеросолюбильного сло дл покрыти липидного сло , покрывающего частицы орального инсулина, содержит следующие компоненты (см.табл.20).

Полученный раствор имеет рН прибли- зительно от 5,5 до 6,5.

Дл покрыти энтеросолюбильным слоем покрытых липидным слоем частиц орального инсулина раствор энтеросолюбильного покрыти распыл ют при помощи сопла распылител , расположенного в верхней части сосуда устройства Splr-A-AFlow, рости распылени одного грамма на кг/мин дл приблизительного 500 г покрытых липидным слоем частиц св занного орального инсулина. Распыление продолжалось в течение 5 с, затем частицы высушивались в течение 5 с попеременно до тех пор, пока не была достигнута желаема толщина покры- ти

Дл расчета количества сухого лака, примен емого дл знтеросолюбильного покрыти в % (Q), необходимо площадь поверхности частиц дл покрыти (SA) в мм2 умножить на величину желаемой толщины покрыти (L) в мг/см2 и все это разделить на величину веса частицы св занного орального инсулина (W) в мг. В соответствии с этим

5

0 5

5

0 45 50

0

процент сухого лакирующего вещества будет равен:

CHSA x L)/(W).

Предпочтительно, если покрытие энтеросолюбильным раствором частицы перо- рального инсулина имеют диаметр приблизительно между 0,1 и 0,8 мм (площади поверхностно частиц колеблютс в пределах от 0,314 до 2,0 мм2). Было найдено, что частицы орального инсулина весом 450 г, полученные в результате распылени на них энтеросолюбильного раствора приблизительно от 120 до 150 г, не будут раствор тьс , если поместить их в раствор, имеющий рН около 1,2 (желудочный раствор) по меньшей мере в течение 10 мин, однако будучи помещенным в раствор, имеющий рН около 6,8 (дуоденальный раствор), они раствор ютс и диспергируютс в течение 30 с. В соответствии с изложенным идеальное эн- теросолюбильное покрытие получено.

D. Капсулы частиц орального инсулина (липазы) солей желчных кислот.

Получение капсул, содержащих частицы , покрытые оральным инулином, липазой и раствором .солей желчных кислот. С этой целью дл каждой # 1-размерной твердотельной капсулы частицы орального инсулина , покрытые энтеросолюбильным слоем, приготовленными, как описано в С, частицы липазы, покрытые энтеросолюбильным слоем , приготовленными, как описано в А, и частицы солей желчных кислот, покрытые энтеросолюбильным слоем, приготовленными , как показано в В, смешиваютс вместе и повышаютс в твердую гель-капсулу в следующем соотношении:

200 мг (12 НД) орального инсулина: 28 мг(1000 ЕД) панкреатической

липазы; 25 мг соли желчной кислоты; 50 мг бикарбоната натри (высушенного в сушильной печи);

50 мг лимонной кислоты в качестве наполнител .

Бикарбонат натри и лимонна кислота обладают взрывным действием, позвол ющим твердой гель-капсуле открытьс в желудке . Размеры гель-капсулы, представл ющей собой частицы орального инсулина, липазы и солей желчных кислот, покрытые энтеросолюбильным слоем, составл ют менее 1 мм. Вследствие своих размеров и состава эти частицы быстро проход т через привратник в двенадцатиперстную кишку. Бикарбонат натри и лимонна кислота выполн ют также функцию регулировани внутрикишечного водородного показател (рН) в направлении увеличени щелочности, увеличивает активность панкреатической липазы в присутствии соли желчной кислоты.

Е. Сравнительное клиническое исследование перорзльного инсулина, приготовленного по методике С, и перорального инсулина, приготовленного по методике D.

Шесть больных диабетом (3 инсулинза- висимым диабетом и 3 инсулиннезависи- мым диабетом, п ть мужчин и одна женщина) принимали участие в сравнительном эксперименте по испытанию перорального инсулина, приготовленного по методике С, который давалс вместе с четырьм капсулами липолитического фермента , кажда из которых содержит 1000 ед. липазы и 25 мг соли желчных кислот, и перорального инсулина, приготовленного по методике 1, т.е. перорального инсулина по методике С, комбинированного с покрытой липазой (методика А), покрытой солью желчной кислоты (методике В), бикарбонатом натри и лимонной кислотой, и заключенного в твердую гель-капсулу.

Каждый пациент получал каждый препарат , но в разные дни. С этой целью каждый пациент получал перорально 48 ед. орального инсулина с четырьм капсулами, содержащими 4000 ед. липазы и 100 мг соли желчной кислоты а первый день, и 4 капсулы , содержащие 48 ед. пврорв ьмого инсулина и 4000ед. нпазы и 100 мг соли желчной кислоты на другой лень испытани . На третий и четвертый дни режим повтор лс .

Если капсулы лилолитичёского фермента даютс отдельно, но в сочетании е капсулами орального инсулина (48 ед.) или липолитические ферменты вход т в сосав капсулы орального инсулина и даютс в качестве комбинированных капсул, суммарное действие орального инсулина на содержание сахара в крови и гипогликемн- ческое действие/эффект в обоих случа х идентичен.

F. Таблетки орального инсулина (липазы ) соли желчных кислот.

Частицы, которые не были покрыты эн- теросолюбильным слоем и которые описаны в главах А, 8 и С, могут быть скомбинированы и сделаны в виде твердых спрессованных таблеток. С этой целью были смешаны следующие компоненты, г:

Частицы инсулина (липазы)

соли желчных кислот (в пропорци х,

рекомендованных

в пункте 1)126,35

Бикарбонат

натри 50,0

Бикарбонат

кали 32,0

Лимонна

кислота

Тальк

Avlcel

Лактоза

Кукурузный

крахмал

17,65

500

45,0

28,0 300 Описанна смесь формируетс в твер0 дые спрессованные таблетки размером приблизительно 220 мг (по желанию размер таблетки может быть больше или меньше). Если кристаллический инсулин замещаетс в препарате С, кажда таблетка может со5 держать 6 ед. инсулина, по желанию доза инсулина может быть увеличена до 40 ед.

Полученные таким образом таблетки

.покрываютс EVO КАбГР-Е-ЮО пленкой

толщиной приблизительно от 0,1 до 0,15 мм.

0 Установлено, что таблетки с этим покрытием раствор ютс в растворе желудочного сока, имеющего рН до 5, в течение 30 с или меньше. Частицы, покрытые энтеросолю- билъиым слоем, например частицы орально5 го инсулина, липазы и соли желчной кислоты, быстро раствор ютс в растворе, имеющем рН только равным 6 или более. Более того, частицы обычно имеют размеры меньше 1 мм м повтому они быстро проход т

0 через привратник и раствор ютс & двенадцатиперстной кишке, в двенадцатиперстни- ке частицы эмульгаруютс и суспвндируют мйкролипосфермческие частицы, содержащие при этом св занный инсулин (размер ме5 нее. 1 мкм) и/или покрытого лмпидным слоем ммкролипоефврического св занного инсулина (размер менее 50 микрон). В соответствии с этим частицы могут быть суспендированы в эмульсии, образованной в полости двенадца0 типерстной кишки. Эти частицы в основном абсорбируютс волосками внутрикишечкой слизистой оболочки, мину печень.

Дл таблетных форм орального инсулина (липазы) соли желчной кислоты были про5 ведены испытани с трем больными инсулинзависимым диабетом и получены следующие результаты (см.табл.21).

Использование раствора дл энтеросо- любильного покрыти , такого как EVD

0 RAGIT-I 100 или 1-30, частиц орального инсулина, липазы и соли желчных кислот позвол ет указанным частицам приобрести следующие свойства:

1. Резистентность к желудочному соку;

5 2, Защита выстилки желудка от коррози- рующих агентов;

3. Отделение несовместимых лекарственных веществ;

4. Увеличение срока годности препаратов;

5. Изол ци гигроскопических кусочков некротизироеанной ткани;

6. Защита частиц от атмосферного вли ни .

Как указывалось выше, EVD RAGITR защищает стенки желудка от коррозирующего действи желчных солей и улучшает состав препарата орального инсулина, имеющего небольшой срок годности и вл ющегос слишком лабильным и гигроскопичным.

ПримерЮ. В этом примере рассматриваетс приготовление композиции перо- рального инсулина. В сосуд устройства Sp)r-A-Flow помещаютс следующие компо- .ненты (см.табл.22).

Эти компоненты измельчались в порошок при помощи описанной ранее струйной мельницы (см.фиг.1 и 2), так чтобы, размеры частиц были менее 50 мкм, затем тщательно перемешивались, высушивались в сосуде аппарата Splr-A-Flow при следующих параметрах: скорость вращени ротора 250-300 об/мин, давление флюидного потока 40-50 мм Н20, скорость вращени смесител 500- 700 об/мин, давление щелевого потока 25- 35 мм НаО, скорость вибратора 4000-500 об/мин, давление подачи воздуха 900-1000 мм Н20.

Тщательно перемешанные и высушенные компоненты (частицы) затем были сус- пендированы в сосуде при увеличении давлени щелевого воздуха и давлении флюидного воздуха приблизительно до 50-100 мм Н20, Суспендированные, очищенные, высушенные частицы затем покрывались следующим раствором (см.табл.23).

Этот св зывающий раствор распыл лс при помощи сопла растворител , расположенного в верхней части сосуда, и таким образом покрывал частицы. Св зывающий раствор, содержащий кристаллический инсулин , распыл лс при следующих параметрах: вращение ротора 200-300 об/мин, расход насоса распылител 12,0-15,0 мл/мин, вращение смесител 500-700 об/мин, давление распыл емого воздуха 1,2-1,5 кг/см2, скорость вибратора 2800- 3500 об/мин, обьем распыл емого воздуха 20-40 л/мин, давление флюидного воздуха 50-80 мм Н20, давление щелевого воздуха 50-90 мм Н20, давление основной подачи воздуха 800-1500 мм Нд, температура продукта 26,7-28,5°С.

Частицы распыл ютс с перерывами в течение приблизительно 90-120 мин до тех пор, пока не будет использована вс масса раствора. Частицы распыл ютс в течение приблизительно 5 с и высушиваютс в течение приблизительно 22 с поочередно.

Частицы, св занные с раствором кристаллического инсулина (св занные частицы), затем покрывают первым покрывающим раствором . Первый раствор дл покрыти содержит следующие компоненты (см,табл.24).

Упом нутые св занные частицы затем суспендируютс в устройстве Splr-A-FIow и покрываютс первым раствором дл покрыти в следующих услови х: вращение рото0 ра 220-300 об/мин, расход насоса распылител 12,0-15,0 мл/мин, вращение смесител 500-800 об/мин, давление распыл емого воздуха 1,2-2,0 кг/см2, скорость вибратора 2800-4000 об/мин, объем распы5 л емого воздуха 20-40 л/мин, давление флюидного воздуха 50-100 мм НаО, давление щелевого воздуха 50-100 мм Н2О, давление основной подачи воздуха 500-1000 мм Нд, температура продукта 32,0-33,8°С.

0 Св занные частицы распыл ютс в течение приблизительно 5-10 с и высушиваютс в течение 20-22 с.

Затем св занные частицы покрывают вторым раствором дл покрыти . Второй

5 раствор дл покрыти содержит следующие компоненты

Олеинова кислота 10-15,0 г, Tunsel Chemical, Япони (914034);

Полисорбат-80 4-6,0 г Hayashl Pure

0 Chemical Япони , (1ГМ09818).

Этанол до конечного объема 500 мл, температура 28-30°С, рН 6,0-7,2.

Второй раствор дл покрыти распыл етс на Суспендированные покрытые св 5 занные частицы при помощи сопла распылител , расположенного на боковой стенке сосуда. Покрытие осуществл етс при следующих параметрах: скорость вращени ротора 250-300 об/мин, скорость

0 вращени смесител 500-700 об/мин, скорость вибратора 3000-4500 об/мин, расход насоса распылител 12,0-15,0 мл/мин, давление распыл емого воздуха 1,2-15 кг/см2, обьем распыл емого воздуха 20-40 л/мин,

5 давление флюидного воздуха 60-110 мм

НаО, давление щелевого воздуха 60-110 мм

НаО, давление подачи воздуха 900-1000 мм

Ад, температура продукта 30,0-32,5°С.

Получен н ые покрытые св зан н ые части0 цы, содержащие инсулин и покрытые липи- дами, могут быть также приготовлены в виде мелких гранул, имеющих размеры диаметра менее 2 мм (использу отношение 11 и НСОз: лимонна кислота 3:1. Эти компо5 ненты, используемые в качестве затравочных кристаллов и покрытые крахмалом, покрываютс покровным слоем, затем слоем инсулинсв занных частиц, описанных выше, а затем слоем знтеросолюбильного покрыти или смешиваютс с бикарбонатом

натри 20-30 мае. %, липидной кислотой 10- 20 мас.% и силикагелем 3-6 г на 500-650 г конечного веса композиции и помещаютс в размерные твердые гель-капсулы № 4. Полученные капсулы затем покрываютс раствором дл энтеросолюбильного покрыти следующего состава (см.табл.25).

С другой стороны, может быть использован раствор дл энтеросолюбильного покрыти также следующего состава:

EVD RAGITR-1 30-55, 30% раств. 1000 ч (Rohn Pharam, ФРГ)

Полиэтиленгликоль-6000 30 вес, ч. (Као Sekken, Япони )

Силиконова

эмульси 2 ч.

Тальк70 ч.

Вода898 ч.

Первый из описанных растворов дл энтеросолюбильного покрыти используетс дл покрыти капсул № 4, наполненных частицами св занного инсулина. Частицы св - занного инсулина, содержащиес в капсулах № 4, покрыты так, что они раствор ютс в желудочном растворе, имеющем рН 1,2, только после нахождени там в течение 2 или более часов. Однако эти капсулы раствор ютс в дуоденальном растворе, имеющем рН около 6,8, в течение 15 мин или менее (как определено фармакопеей США). Очевидно, что капсулы, покрытые одним или другим из вышеописанных растворов, обнаруживают идентичные свойства.

Пример 11. Дл приготовлени композиции орального инсулина, представл емой в этом примере, в сосуд устройства Spir-A-Flow помещаютс следующие компоненты (см.табл.26).

Затем компоненты перемешиваютс и высушиваютс в сосуде устройства Splr-A- Flow. При использовании параметров, описанных в примере 10, эти частицы св зываютс св зывающим раствором, содержащим инсулин. Этот раствор содержит следующие компоненты (см.табл.27).

Смешанные и высушенные компоненты суспендируютс в сосуде и св зывающий раствор, содержащий инсулин, распыл етс из сопла 28, расположенного в верхней части сосуда. Св зывающий раствор распыл етс при услови х, предлагавшихс в примере 10.

Инсулинсв зэнные частицы затем покрываютс первым раствором. Первый раствор дл покрыти содержит следующие компоненты (см.табл.28).

Покрытые инсулинсв занные частицы покрываютс первым раствором с использованием параметров процесса распылени по технологии, описанной в примере 10.

Полученные в результате покрытые частицы затем покрываютс вторым раствором дл покрыти . Второй раствор дл покрыти имеет следующий состав (см.табл.29).

Второй раствор дл покрыти распыл ют при помощи сопла 27 распылител , расположенного на боковой стенке сосуда с использованием параметров, аналогичных описанным в примере 10.

0 Полученные в результате покрытые частицы могут быть сформированы в гранулы размером менее двух 2 мм в диаметре, включающие бикарбонат натри и лимонную кислоту в смеси в отношении 3:1, как

5 затравка и крахмал как наполнитель, покрытые покровным слоем, инсулинсв занные частицы в качестве внешнего сло и энтеро- -солюбильного сло или эти частицы могут быть смешаны с приблизительно 20-30

0 мас.% бикарбоната натри , около 10-20 мас.% лимонной кислоты и около 0,5-2,0 мас.% силикагел . Полученна в результате смесь может быть упакована в твердую гель- капсулу № 4 и покрыта энтеросолюбильным

5 слоем.

П р и м е р 12. В этом примере описываетс технологи покрыти композиции пе- рорального инсулина, приготовленного по методу, описанному в примерах 10 и 11,

0 содержащих гранулы диаметром менее 2 мм. С этой целью используетс CF-гранул - тор (см.фиг.23) и композици орального инсулина , приготовленного по методу примеров 10 или 11, комбинируетс с бикар5 бонатом натри , лимонной кислотой в отношении 3:1, имеющим размеры менее 0,5 мм и используемые в качестве наполнител . Полученные таким образом гранулы покрываютс энтеросолюбильным покрытием 0 одним из описанных растворов дл энтеросолюбильного покрыти . Установлено, что полученные в результате гранулы не могут быть растворены по крайней мере в течение 2 ч в желудочном растворе, имеющем рН

5 приблизительно 1,2, но быстро раствор ютс (в течение 15 и менее) в дуоденальном растворе, имеющим рН приблизительно 6,8. CF-гранул тор (в техническом отношении пригодным вл етс прибора Freund

0 Industries, Inc., Токио, Япони ) предназначен дл аггломерировани , гранулировани и покрыти при использовании системы центрифуги и его устройство показано на фиг,23. CF-гранул тор 40 содержит источ5 ник питани 42, ротор 44, подачу воздуха 46 и сопло распылител 48.

Дл получени продукта в CF-гранул - торе температура подачи воздуха устанавливаетс между приблизительно 28-34°С, скорость ротора приблизительно 130-200

об/мин, скорость подачи воздуха между 30- 50л/мин, скорость распылени сопла20-50 мл/мин при давлении распылени 10-30 л/мин.

Дл получени композиции бикарбоната натри /лимонной кислоты берутс лимонна кислота в количестве от 110 до 150 г как затравка, порошок бикарбоната натри в количестве около 400-450 г, а также небольшое количество крахмального порошка в количестве 10-50 г, который используетс в качестве защитного покрыти поверх лимонной кислоты, и высушиваютс в течение 30 мин в Splr-A-Flow.

Лимонна кислота здесь используетс в качестве затравки, а бикарбонат натри и крахмал - в качестве защитного покрыти (оба в качестве наполнител ). Приготовленный пероральный инсулин (в соответствии с методикой, описанной в примерах 10 и 11) в виде порошка предварительно смешиваетс с 30 мас.% крахмала и наноситс на гранулы наполнител при использовании около 6-20% (предпочтительно около 10%) гидроксипропилцеллюлозы-1 (НРС-1) в спирте при параметрах: скорость ротора около 100-200 об/мин, скорость распылени сопла 15-40 мл/мин при давлении от 10-30 л/мин в течение 20-40 мин (температура около . Полученные таким образом гранулы высушиваютс в Spir-A-F ow в течение 30 мин при температуре около 30-35°С.

Полученна композици , содержаща гранулы размером диаметра около 0,490- 1,450 мм, покрываетс энтеросолюбильным слоем из НРС-метилфталата и полиэтиленг- ликол -6000 (0,5%), растворенных в этано- ле. Покрытие проводитс с использованием параметров: скорость вращени ротора около 150-250 об/мин, подача воздуха при 30- 50 л/мин, расход воздуха при распылении 20 мл/мин при давлении 15-30 л/мин итем- пературе около 25-30°С. Полученные в результате гранулы имеют структуру, в основном, сходную с той, что показана на фиг.24. Гранулы 50 включают дро или затравочный кристалл 52, наполнитель 54, НРС-1 покрытие 56, слой инсулина 58 и эн- теросолюбильное покрытие 59. Гранулы не раствор ютс по меньшей мере в течение 2 ч в желудочном растворе, имеющем рН 1,2, но раствор тюс в течение 15 мин или менее в дуоденальном растворе, имеющем рН 6,8.

Испытание 12а.

Полученный препарат около 0,9 (0,69- 1,07) ед, на кг веса раствор лс In vitro a 10-20 мл солевого раствора и вводилс в двенадцатиперстную кишку при помощи

двухпросветной интубационной трубки Уол- ласа-Диамонда трем собакам. Были вз ты пробы венозной крови из бедра через 0, 60, 80, 100, 180, 240 и 300 мин после введени

препарата трем собакам. Три собаки, один самец и две самки, имели средний вес 4 (приблизительно от 3 до 5,6) кг кажда . Были измерены уровни глюкозы и инсулина в плазме крови при помощи методов радиоиммуноана0 лиза и энзимоиммуноанализа Wako.

Заметна и значительна степень гипо- кликемии наблюдалась через 80 мин после введени , стабильна стади наступала через 300 мин после введени , в то врем как

5 максимальное содержание инсулина в плазме крови наблюдалось приблизительно через 100 мин после внутридуоденального введени препара та (см. фиг.25 и 26). Испытание 12в.

0 Препарат, изготовленный по методике, описанной в примере 11, и модифицированный , как предложено в примере 12, в количест- ве приблизительно 1 ёд. на кг веса вводилс внутридуоденально собаке (самке) весом 6

5 кг. Затем было проведено сравнение гипо- гликемического действи указанного препарата с гипогликемическим действием обычного инъецируемого инсулина (быстродействующий инсулин Novo) вводимого в количестве 1

0 ед. на кг веса внутридуоденально и этого же инсулина в количестве 0,5 ед. на кг веса, вводимого внутривенно. После введени 1,26 ед. инъецируемого инсулина внутривенно уровень глюкозы в крови упал до 102-23 мг/мл в

5 течение 20 мин и восстановилс до 100 мг/мл в течение 3 ч. Затем было введено 6 ед. инъецируемого инсулина внутридуоденально . В течение 4ч проводившихс наблюдений никаких изменений в уровне

0 глюкозы в крози не отмечалось. После вве- деки 6 ед. препарата, рассматриваемого в насто щем изобретении, внутридуоденально отмечалось заметное снижение уровн сахара в крови. У испытуемого животного

5 после введени данного препарата наблюдалась стойка гипогликеми в течение 2 ч (см.фиг.27).

Испытание 12с.

Три пациента, больных инсулинзависи0 мым диабетом, и два пациента, больных ин- сулинзависимым диабетом, которые были подвергнуты режиму голодани за ночь до начала испытани и которым за 24 ч до испытани не вводилс инсулин и оральные

5 гипогликемические средства, принимали около 0,64-0,73 ед. на кг веса препарата инсулина, изготовленного по технологии, описанной в примере 10 и модифицированного в соответствии с рекомендаци ми, данными в примере 12. Уровень сахара в крови

измер лс в течение 5 ч. Однако один больной IDDM и один больной NIDDM вследствие низкого уровн сахара в крови, наблюдавшегос у них при голодании до испытани , получили обычный завтрак и исследовались после приема пищи. У этих пациентов была отмечена клинически значительна степень гипогликемии (см.табл.32).

6 других пациентов, 4 больных IDDM и 2 больных NIDDM принимали перорально 0,49-0,63 ед. на кг веса препарата, изготовленного по методике, описанной в примере 11, и модифицированного по методу, описанному в примере 12. Один пациент вследствие низкого уровн сахара в крови, наблюдавшегос у него при голодании, получал стандартный завтрак и исследовалс после приема пищи. После перорального введени испытуемого препарата наблюдалась значительна степень гипогликемии (см.табл.ЗО).

12Ь.Клинические испытани гранул ционных препаратов.

Испытани препарата, изготовленного по технологии, описанной в примерах 10 и 11, проводились в группе диабетических больных дважды в течение двух недель. В течение первой недели каждый больной получал перорально препарат орального инсулина в № 4 капсуле, покрытого энтеро- солюбильным слоем, либо приготовленного по технологии примера 10, либо по технологии примера 11. И неделей позже тот же больной в качестве другого варианта получал перорально этот препарат в гранулах, приготовленный либо по технологии примера 10, либо по технологии примера 11. Препарат в гранулах, приготовленный по методике примера 11 и вводимый перорально при средней дозе инсулина 0,145 ед. на кг веса тела (от 0,11 до 0,18 ед. на кг веса тела), вызывал более быстрое снижение уровн сахара в крови, измер вшегос в течение 2 ч по сравнению с препаратом в № 4 капсулах, приготовленным по методике примера 11, и вводимого перорально при средней дозе инсулина 0,583 ед. на кг веса {от 0,49 до 0,63 ед. на кг веса), что почти в 4 раза превышает дозу препарата в гранулах. Однако препарат в №4-капсулах, изготовленный по примеру 11, показал более длительное сохранение гипогликемического эффекта, а также его предложени более 2 ч после прин ти дозы. Степень гипогликемии , вызванной в течение часа после приема препарата, приготовленного по методике, описанной в примере 10, незначительно больше при приеме препарата орального инсулина в форме гранул, чем

при приеме этого инсулина в форме № 4 твердых гель-капсул. Однако препарат орального инсулина, приготовленный по методу , изложенному в примере 10, в виде №

4 капсул дольше сохран ет гипогликемиче- ское действие, чем этот же препарат, но приготовленный в виде гранул.

Таким образом, комбинаци препаратов, изготовленных по методу примера 10, в фор0 ме гранул и в форме № 4 твердых гель-капсул и в качестве другого варианта, комбинаци препаратов, изготовленных по методу примера 11, в форме гранул и в форме № 4 твердых гель-капсул позвол ет вызвать быстрый и

5 стойкий гипогликемический эффект у больных диабетом. Действительно, при введении препарата инсулина, приготовленного по ме- .тодике примера 11, в форме гранул (в среднем 0,164 ед/кг веса тела) и в форме № 4 - капсул

0 (в среднем 0,566 ед/кг) у исследуемых больных наблюдалс быстро наступавший и долго сохран ющийс гипогликемический эффект (см.фиг.28).

С другой стороны, CF-гранулированные

5 и негранулированные формы препаратов перорального инсулина, приготовленного по методам, описанным в примерах 10 или 11, могут быть пропорционально скомбинированы и спрессованы в твердые таблетки

0 так, чтобы они могли вызвать у больных диабетом быстрый и стойкий гипогликемический эффект.

П р и м е р 13. Препарат перорального инсулина, вызывающий у больных диабетом

5 хороший гипогликемический эффект, приготавливаетс следующим образом.

Основна масса (дипосферического) химического вещества, рассматривавшегос в примере 11, добавл етс в свежий сонный

0 порошок (дл ингибировани трЧшзина, который инактивирует инсулин). Затем приготовленный из свежего ичного белка овомукоид (в соответствии E.Fredrleg и H.F.Deutsln. T.Bfd, Chem 181, 499, 1949) со5 един етс с кристаллическим инсулином и раствор етс в смеси воды со спиртом (в отношении 50:50) при рН 7,2. Хлорид кальци (2 мг) добавл етс дл повышени физической прочности нейтрального раствора

0 инсулина. Овомукоид из ичного белка вл етс сильнодействующим ингибитором трипсина. И с другой стороны, ичный белок может быть использован дл растворени в спирте.

5 Следующие компоненты помещаютс в сосуд устройства Sptr-A-Flow (см.табл.34).

Эти порошкообразные компоненты измельчаютс при помощи струйной мельницы до образовани частиц размером менее 50 мкм. Затем частицы тщательно перемешиваютс и высушиваютс в сосуде устройства Spir-A-Flow при параметрах процесса, описанных в примере 10. Высушенный порошок , включающий данные компоненты, суспендируетс в сосуде и св зываетс св - зывающим раствором, содержащим инсулин , овомукоид (или белок йца) и лимонную кислоту в качестве суфрактанта. Св зывающий раствор содержит следующие компоненты (см.табл.35).

Эти вещества могут быть растворимы в этаноле (100-200 мл).

Аминоуксусна

кислота0,2 М

Полисорбат-801,0-2,5 г

Гидроксипропилцеллюлоза-15%

Эти вещества раствор ютс в приблизительно 100-200 мл фосфатного буферного , имеющего рН 8; раствор этанола и фосфатный буферный раствор с растворенными в нем веществами смешиваютс , после чего туда добавл етс инсулин, рН раствора корректируетс до значени 7,2.

Полученный таким образом св зываю- щий раствор наноситс путем распылени на высушенные, суспендированные в воздушном пространстве мелкие липосфериче- ские пылинки, содержащие холестерин, суфрактант, соевый порошок и защитные антимикробные вещества, как описано в примере 10.

После тщательной просушки инсулинс- в занных липосферических пылинок эти пылинки покрываютс следующим покровным раствором (см.табл.36).

Эти вещества раствор ютс в приблизительно 150-400 мл этанола количестве,

достаточном дл растворени химических веществ. Этотлипидный раствор наноситс путем распылени на инсулинсв занные ли- посферические пылинки так, как это описано в примере 12.

Испытание 13. Клиническое исследование гипогликемического эффекта препарата перорального инсулина.

4 больных диабетом, 2 мужчины и 2 женщины (средний возраст 46 лет: от 36 до 56 лет, средний вес 60,3 кг: от 50 до 74 кг, средний рост 164,3 см: от 158 до 168 см) после режима голодани получили среднюю дозу 0,573 (0,46-0,68) ед/кг препарата перорального инсулина, приготовленного по ме- тодике, описанной в примере 13. В результате клинического анализа было отмечено значительное снижение уровн сахара в крови пациентов (см.фиг.29).

Claims

1. Способ получени композиции инсулина дл орального введени с использованием поверхностно-активных веществ и липидов, отличающийс тем, что, с целью повышени биологической доступности инсулина, получают частицы диаметром от 1 мк до 0;5 мм из твердого эмульгатора и поверхностно-активного вещества, св зывают их с помощью св зующего агента с активным веществом, покрывают полученные частицы липидным слоем толщиной 0,05-1,0 мк с последующим покрытием ки- шечно-растворимым слоем,

2. Способ по п. 1,отличающийс тем, что перед нанесением лилидного сло , частицы покрывают водорастворимым слоем .

Таблица 1

Средние суточные требовани

43

Средние суточные требовани

1814559

44

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Среднесуточные требовани

Таблица 7

Биологическа доступность инсулина и гипогликемические эффекты после перорально- го введени инсулина примеров 4 и 5 в сравнении с обычным подкожным введением инсулина

Таблица б

Таблица 8

47

Примечание.Со - исходное значение сывороточной .глюкозы ; Смин - минимальное значение глюкозы ;Тс-мин - врем наблюдени минимального уровн глюкозы; Тюо- врем достижени 100 мг/ дл сывороточна глюкоза ; dC / dT - скорость снижени уровней сывороточной глюкозы; 1о- исходное значение сывороточного инсулина; 1макс - максимальное значение инсулина ; Ti-макс - врем достижени максимального уровн сывороточного инсулина ; Тмо - врем достижени исходного значени уровн сывороточного инсулина ; dl / dT - скорость повышени уровн сывороточного инсулина; ДОС площадь под кривой

уровн сывороточного инсулина в течение Периода испытани .Л двойные лики в уровн х сывороточного инсулина.

Таблиц а 9,.

Примечание.

00 - основное значение содержани глюкозы ; Cmin -минимальное значение содержани глюкозы,

Тс-мин - врем , в течение которого наблюдалс минимальное значение содержани глюкозы;..,.

Тюо- врем , за которое уровень глюкозы достигает 100 мг / дл ; dC / dT - скорость гипогликемической реакции.

1814559

48 Продолжение табл. 8

Примечание.

lo - основное значение инсулина ; Imax - максимальное значение сывороточного инсулина;

Л- щах - врем наблюдающегос максимального значени сывороточного инсулина ; TI - о - врем достижени основного значени сывороточного инсулина ; d I / dt - скорость нарастани сывороточного инсулина (скорость всасывани ) ; AVC - площадь под кривой уровн сывороточного инсулина на прот жений исследуемого периода времени.

Материалы

Панкреатическа липаза Кукурузный крахмал

Метилпарабен Пропилпарабен

Табл ица 10

Таблица 11

Количество

Изготовитель / № партии

Slgm a, St. Louis : No- 1 3126 (парти # 74Г - 0470)

Shlnwa iakuhln, Япони

(S 8285)

Slgma (32F-0511)

Tune - Sel Япони

(91 1202)

Таблица 12

Таблица 13

Компонент

Холестерин

Агринин - HCI Gum Acaccia

Глицин

Лаурилсульфат натри Лропилпарабен

Таблица 14

Таблица 15

Таблица 16

Количество

Изготовитель / парти №

Kaksan, Kagaku, Япони

(18.50134) Furuka, Швейцари

Tune - Sel, Япони (91 1202 )

Таблица 17

Компоненты

Холестерин

Агринин - HCf

Аминоуксуснз кислота

Лаурилсульфат натри

Пропилпарабен

Таблица 18

Таблица 19

Таблица 20

Таблица 21

Таблица 22

Изготовитель / парти №

Koksan Kagakn, Япони

(1 850134) Funsel Cheln Co., Япони

(I А 1527) Yakkurl Kagakti. Япони

(171092) Yakkuri Kagakn, Япони

(316-05)

Tunsel Chem CO, Япони , ( 91 1202 )

Таблица 23

Таблица 24

Компонент

Холестерин

Лаурилсульфат натри Пропилпарабен Метилпарабен

Таблица 25

Та б л и ц з 26

Количество

Изготовитель / № партии

50 - 500 г 30 50 г 5-Юг 5-10г

Kok a Kagaku, Япони

(850134) lakuri Kagaku, Японии

(316-05) Tunesei Chem,Япони

(911202)

Tunesei Chem, Япони (ОС 1495)

Таблица 27

Таблица 28

Таблица 29

Таблица 32 Уровни содержани сахара в крови после введени орального инсулина перорально

Таблица 30

Таблица 31

Таблица 33

Таблица 34

Таблица 36

г15 ,000

w

ЩО 20,0 30,0 Щи 50,0 Щ0 70,0 Фие.4

«п

«-

ч-

IT

i «О(М (М

Я

«о

о о

го го эо 4.о so ел

Фиг. (б

эоо

250

гоо

ISO 100

so

ш го эо 4.о 5.о

Фиг. t

(mg/ЮОтП

100 V

Фиг. 2 8