RU1807080C

RU1807080C - Способ выделени амилазы из препарата амилоризин

Info

Publication number: RU1807080C
Authority: RU
Inventors: Шохиста Сабировна Ташмухамедова; Хасан Турсунович Хасанов; Мирзаатхам Мирзахакимович Рахимов
Original assignee: Ташкентский Государственный Университет Им.В.И.Ленина
Priority date: 1990-10-03
Filing date: 1990-10-03
Publication date: 1993-04-07

Abstract

Использование: медицина и фармацевтическа промышленность дл получени чистых препаратов. Сущность изобретени : змилоризин раствор ют в 0,05 М универсальном буфере с рН 3,5. Из раствора удал ют протеазы биоспецифической очисткой. Дл этого внос т 30-40 мг/мл сорсилена, импрегнированного бычьим сывороточным альбумином, инкубируют смесь 15-20 мин при 4-6&deg;С. Затем провод т осаждение амилазы сульфатом аммони и ее очистку ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе. Удельна амилолитиче- ска активность препарата 3615 едУмг белка выход по активности 92%.

Description

Изобретение относитс к технической биохимии и биотехнологии, а именно к способам очистки ферментов, и может быть использовано в медицине и фармацевтической промышленности дл получени чистых препаратов.

Цель изобретени - ускорение и упрощение способа и повышение активности целевого продукта.

Изобретение заключаетс в том, что амилазу перед осаждением сульфатом аммони центрифугируют, а затем подвергают б. иоспецифической очистке н сорбенте с инкубацией в буферном растворе.

Дл биоспецифической очистки используют сорсилен импрегнированный сыворо- точнымбычьим альбумином, биоспецифическую очистку провод т с использованием 0,05 М раствора универсального буфера с рН 3,5, инкубацию провод т.в течение 20-30 мин при 4-6°С.

Новым в предлагаемом изобретении вл етс применение биоспецифического разделени в качестве первой стадии очистки, позвол ющей полностью избавитьс от примесей протеаз.

Существенные отличи способа заключаютс в четырехстадийном получении амилазы (вместо п ти стадий).

Пример 1. Готов т 15%-ный раствор ферментного препарата амилазы Aspergillus oryzae из амилоризина ПОх в 0,1 Мв универсальном буфере рН 3,5. Нерастворившиес частицы удал ют центрифугированием в течение 20 мин при 6000 об/мин и к супернатанту добавл ют сорсилен, импрегнированный бычьим сывороточным альбумином (БСА) до конечной концентрации 30-40 мг/мл. После 20 мин инкубации при 4-6°С смесь центрифугируют и отдел ют су- пернатант. Затем ферментный раствор подвергают высаливанию 80% сульфатом аммони от насыщени и подвергают ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлю- лозе. Сорсилен. импрегнируе ый альбумином, получают по известной метоcs

ё

00

о

4

О СО

О

дик.е. Степень очистки составл ет 120 раз. Удельна амилазна активность 289220 ед./г.

Пример 2. Все операции провод т, как в примере 1, но конечна концентраци сорсилена БСА составл ет 10 мг/мл. Степень очистки составл ет 40 раз. Удельна амилазна активность 96120 ед./г.

Пример 3. Все операции провод т, как в примере 1, но конечна концентраци сорсилена, импрегнированного БСА, составл ет 20 мг/мл. Степень очистки составл ет 80 раз. Удельна активность 192210 ед./г.

П р и м е р 4. Все операции провод т, как в примере 1, но конечна концентраци сорсилена в импрегнированном БС А составл ет 50 мг/мл. Степень очистки состав- л ет 110 раз. Удельна амилазна активность 264330 ед./г,

Пример 5. Все операции провод т, как в примере 1. с использованием 0,03 М универсального буфера. Степень очистки составл ет 100 раз. Удельна амилазна активность 240300 ед./г.

Пример 6. Все операции провод т, как в примере 1, но с использованием 0,1 М универсального буфера. Степень очистки составл ет 110 раз. Удельна амилазна активность 264330 ед./г,

Пример 7. Все операции провод т, как в примере 1, инкубацию в универсальном буфере провод т в течение 10 мин. Степень очистки составл ет 100 раз. Удельна активность 240300 ед./г.

Из представленных выше примеров видно, что оптимальными услови ми дл удалени протеиназ вл ютс : инкубаци с биосорбентом при концентрации последнего 30-40 мг/мл в буфере ионной силой 0,05 М в течение 15-20 мин.

В таблице представлены сравнительные характеристики полученной амилазы.

Таким образом, предлагаемый способ обладает следующими преимуществами: сокращаетс число операций, повышаетс степень очистки, снижаетс протеазна активность .

Claims

Формула изобретени

Способ выделени амилазы из препарата амилоризин, предусматривающий растворение сырь , удаление протеолитиче- ских ферментов из раствора, осаждение целевого продукта сульфатом аммони и его очистку, отличающийс тем, что, с целью ускорени и упрощени способа и повышени активности целевого продукта, раство- 5 рение сырь ведут в 0,05 М универсальном буфере с рН 3,5, удаление протеолитических ферментов из раствора осуществл ют добавлением сорсилена, импрегнированного бычьим сывороточным альбумином, до концентрации 30-40 мг/мл с последующим ин- кубированием смеси в течение 15-20 мин при температуре 4-6°С, а очистку целевого продукта провод т ионообменной хрома- тографией на ДЭАЭ-целлюлозе. 5

0

5

0

0

Показатель

Предлагаемый способ

1. Длительность процесса

2. Число стадий
3. Температура проведени процесса, °С
4. Содержание белка в целевом продукте, %
5. Активность по ГОСТ
20264.4-74, едУг По Бернфельду, ед/мг 6, Остаточна протеолитическа активность

ГОСТ 20264, 2-74, едУг

по Ансону, ед/г

7. Выход: по активности, % по белку, %

Способ по авт. св. №1214755

21,5 час 10

-15-20 85

2400

300

30,0

195,0

82

3,2