RU1801213C - Способ диагностики функциональных заболеваний толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, в частности к клинической иммунологии и проктологии. Целью изобретени   вл етс  повышение точности дифференциальной диагностики, сокращение времени инкубировани . Поставленна  цель достигаетс  тем, что в известном способе дифференциальной диагностики функциональных заболеваний с нарушением вегетативной нервной системы и воспалительных заболеваний толстой кишки, включающем двух- этапное инкубирование лимфоцитов с адренергическим препаратом и добавление эритроцитов барана, с последующей оценкой розеткообразующей способности используют адреналин при концентрации 10 М-10 М, который инкубируют с лимфоцитами в течение 10-15 мин и при снижении розеткообразующей способности Т-лимфо- цитов более чем на 20% диагностируют функциональное заболевание толстой кишки с вегетативными нарушени ми нервной системы . ел С

Description

Изобретение относитс  к медицине, в частности, к клинической иммунологии в проктологии.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности дифференциальной диагностики , сокращение времени инкубировани .

Способ осуществл етс  следующим образом .

В пробирку с соответствующим разведением гепарина берут 2,5-3 мл крови из локтевой вены, развод т средой 199, наслаивают на раствор фиколл-верографин или фиколл-урографии и центрифугируют при режиме 400 д в течение 40 минут в горизонтальном роторе. Выдел ют лимфоциты, подсчитывают и довод т до оптимальной концентрации взвеси клеток - 2 106 в 0,1 мл среды 199. В центрифужную пробирку помещают 0,1 мл суспензии клеток и 0,1 мл раствора адреналина вереде 199. Инкубируют при 37°С в течение 10 мин. Параллельно став т контрольный опыт, где вместо раствора адреналина к клеткам добавл ют 0,1 мл среды 199. Затем став т реакцию Е-розеткообразовани : к 0,1 мл суспензии клеток приливают 0,1 мл 0,5%-ой взвеси эритроцитов барана в среде 199. Перемешивают встр хиванием, инкубируют 10 минут в термостате при 37°С, центрифугируют при 200 д в течение 5 мин, после чего инкубируют при +10°С в течение 60 мин. По истечении инкубации клетки фиксируют глутаральдегидбм и после отмывани  готов т мазки. Мазки фиксируют в метаноле и крас т по Романовскому-Гимза. Число Е- РОК вычисл ют подсчетом 200-300 лимфоцитов в препарате. Эффект препарата

1/ П

определ ют по формуле: 100%, где

00

о ю

GJ

00

К - число Е-РОК в контрольной пробе, П - число Е-РОК в опыте.

П р и м е р 1. В пробирки с гепарином вз ли 2,5-3 мл крови из локтевой вены 61 здоровых и больных лиц. Вз тую кровь развели средой 199 в соотношении 1:1 и наслаивали на 2,5-3 мл смеси фиколуротраст - плотность раствора 1,077 г/мл. Центрифугировали 40 минут при 400 д в центрифуге с горизонтальным ротором. Сн ли белое кольцо (выделенную взвесь лимфоцитов) в чистую пробирку, отмыли средой 199 два раза в течение 15 минут при 400 д и произвели подсчет лимфоцитов в 1 мл. К 0,1 мл взвеси лимфоцитов прибавили ЮМ адреналина в 0,1 мл среды 199. Инкубировали при 37°С в течение 12 мин, центрифугировали 15 мин при 400 д и с осадком поставили реакцию Е-розеткообразовани . Параллельно поставили контрольный опыт, где вместо раствора адреналина к клеткам добавили 0,1 мл среды 199. Реакци  Е-розеткообразовани : к 0,1 мл суспензии лимфоцитов прибавили 0,1 мл 0,5%-ой взвеси эритроцитов барана. Смесь выдержали в термостате при 37°С 10 мин, центрифугировали в течение 5 мин при 200 д и инкубировали при +Ю°С в течение 60 мин, Затем фиксировали клетки глутаральдегидом и после отмывани  готовили мазки. Мазки фиксировали в метаноле и красили по Романовскому-Гимза. Число Е-РОК вычисл ли подсчетом 200-300 лимфоцитов в препарате . Эффект препарата определ ли по К-П

формуле:

v3

П

100%. При дозе адреналина ЮМ наблюдалось достоверное уменьшение числа Е-РОК у 28 больных синдромом раздраженной толстой кишки 45%- 33%, не измен лось 24 больных неспецифическим  звенным колитом 46%- 46%, иу9 практически здоровых лиц-53%- 53%.

П р и м е р 2. Повторно провели вышеописанный опыт при концентрации адреналина . Полученные результаты идентичны примеру 1..

Примерз. Повторно провели вышеописанный опыт, но при дозе адреналина . При этой дозе адреналин не вли л на число Е-РОК ни у больных синдромом раздраженной толстой кишки 45%-47%, ни у больных неспецифическим  звенным колитом 46%-44%, ни у практически здоровых лиц53%-57%.

П р и м е р 4. Повторно провели вышеописанный опыт, но при концентрации адреналина . Число Е-РОК у больных синдромом раздраженной толстой кишки уменьшалось статистически недостоверно 45%-38%, у больных неспецифическим  звенным колитом не измен лось 46%-41%,

не измен лось и у здоровых лиц 53%-49%. П р и м е р 5. Опыт произведен также, как и в примере 2 с той лишь разницей, что инкубирование проводили в течение 5 минут . При этом времени инкубировани  препарат не оказывал действи  ни у больных неспецифическим  звенным колитом, ни у больных синдромом раздраженной толстой кишки, ни у здоровых лиц.

П р и м е р 6. Опыт произведен также,

как и в примере 1, с той лишь разницей, что инкубирование проводили в течение 25-30 минут. Имели результат, подобный опыту № 1, что свидетельствует о нецелесообразности проведени  инкубировани  более 15

мин.

Использование насто щего предложени  в сравнении с базовым объектом позволит повысить точность дифференциальной диагностики за счет нового критери  иммунологического характера и сократить врем  диагностировани  за счет сокращени  срока инкубировани .

35

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ диагностики функциональных заболеваний толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы, включающий инкубирование лимфоцитов с адренергическим препаратом и добавление эритроцитов барана с последующей оценкой розеткообразующей способности клеток , отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности и сокращени  времени

   диагностики, в качестве адренергического препарата используют адреналин в концентрации 10 3М-10 4М, инкубирование осуществл ют в течение 10-15 мин и при снижении розеткообразующей способности

   Т-лимфоцитов более чем на 20% диагностируют функциональное заболевание толстой кишки с нарушением вегетативной нервной системы.