RU1835516C

RU1835516C - Способ определени нарушени иммунологического состо ни при ожогах глаз

Info

Publication number: RU1835516C
Application number: SU904892368A
Authority: RU
Inventors: Елена Степановна Белобородова; Алексей Александрович Коростелев; Ирина Викторовна Южалина; Николай Юрьевич Хатминский
Original assignee: Кемеровский государственный медицинский институт
Priority date: 1990-12-20
Filing date: 1990-12-20
Publication date: 1993-08-23

Abstract

Изобретение относитс к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано дл определени нарушений иммунологического состо ни при ожогах глаз. Целью изобретени вл етс повышение чувствительности упрощени способа. Способ заключаетс в том, что в опытной пробе определ ют вли ние биологической среды, в качестве которой используют слезу больного, на функциональную активность лимфоцитов здоровых доноров. Одновременно в контрольной пробе определ ют вли ние биологической среды, в качестве которой используют слезу здорового человека , на функциональную активность лимфоцитов здороЬого донора. О наличии нарушени иммунологического состо ни суд т по индексу .подавлени (стимул ции), величина которого может выходить за пределы ±25% относительно нулевого уровн , что зависит от включени 3Н-тимидина в пробах со слезой больных с ожогами глаз и здоровых лиц.

Description

Изобретение относитс к медицине в частности к офтальмологии, и может быть использовано дл определени нарушени иммунологического состо ни при ожогах глаз.

Целью изобретени вл етс повышение чувствительности способа и исключение необходимости забора крови у больного за счет исследовани среды непосредственно из зоны ожога.

Поставленна цель достигаетс тем, что в способе, включающем определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бластной трансформации лимфоцитов в биологической среде с ФГА с включением Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, одновременно провод т опытную и контрольную прЪбы, причем в обеих пробах

используют лимфоциты здорового донора,.а в качестве биологической среды используют соответственно слезу больных с ожогами глаз и здоровых лиц.

Способ осуществл етс следующим образом .

Формируют две пробы - опытную и контрольную . Обе пробы содержат одинаковую культура ьную среду, которую готов т следующим образом: из гепаринизированной крови Донора в градиенте плотности фикол- лверографина (плотностью 1077) получают чистую суспензию лимфоцитов, которую трижды отмывают в растворе Хенкса по 5 мин при 75 д, довод т до концентрации 2x106 клеток в 1 мл. Готов т взвесь из 150 мкл лимфоцитов в среде 199 с 25 мкл 10% сывороткой крови тел т и ФГА (рабоча кон00

со ел ел

GK

центраци 20 мкг/мл) и помещают в планшет дл иммунологических реакций, В опытную пробу (в опытную лунку планшета) к культуральной среде добавл ют 30 мкл слезы больного, в контрольную пробу (в контрольную лунку)- слезу здорового человека. Пробы культивируют 48 ч при Т 37°С в атмосфере с 5% содержанием углекислого газа. Через 48 ч в каждую лунку (опытную и контрольную) добавл ют Н-тимидин по 25 мкл (доза 1 мкКИ), оставл ют на 24 ч при тех же услови х. Затем пробы пропускают через миллипоровый фильтр Владипор и фиксируют по общеприн той методике (5% ТХУ, спирт, эфир). Пробы просчитывают на стинцилл ционном счетчике Бета-2. Все пробы став тс в дублированном варианте. Рассчитывают индекс подавлени (стимул ции ) по формуле:

ИП(С) (1---|)х100%,где ИП(С) - индекс подавлени (стимул ции );

А - включение Н-тимидина в пробах со слезой обожженных;

В - включение 3Н-тимидина в пробах со слезой здоровых людей.

П р и м е р 1. Больной С. Диагноз - легкий химический ожог роговицы и конъюнктивы правого глаза. В 1, 3,7 сутки после ожога вз та слеза на иммунологическое исследование . Величина ИП(С) составила: в. 1 сутки - (-)303%, на 3 сутки - (-)183%, на 7 сутки-(-)29%.

Таким образом, у больного наблюдалась стимулирующа активность слезы, что характеризовалось отрицательным значени ми индекса, величина которого значительно отклон лась от нормы (больше (-)25%)(фиг.1).

При обследовании группы больных с легкими ожогами глаз ИП(С) в 1 сутки после ожога составил (-)348,7 ±58,6%, на 3 сутки - (-)188,7 ± 33,4%, на 7 сутки - (-)34,0 ± ±14,1%;

П р и м е р 2. Больна М. Диагноз - химический ожог роговицы и конъюнктивы средней т жести правого глаза. В 1,3,7,14 сутки после ожога вз та слеза дл иммунологического Исследовани . Величина ИП(С) Составила: в 1 сутки - (+)18%, на 3 сутки - (+)87%, на 7 сутки - (-)50%, на 14 сутки - (+)29%..

Таким образом, на 3 сутки после ожога наблюдалс максимальный подъем подавл ющейс активности слезы, характеризующейс положительными значени ми

индекса, величина которого значительно от клон лась от нормы (больше (+)25%), К Т суткам после ожога она смен лась стимулирующей активностью, величина которой также отклон лась от нормы (больше (-)25%), с

последующим ее приближением к 14 суткам

после ожога к уровню иммуномодулирующей активности слезы здоровых лиц (фиг.2).

При обследовании группы больных с

ожогами глаз средней т жести ИП(С) в 1

сутки после ожога составил (+)15,3 ± 2,2%,

на 3 сутки - (+)65,0 ±8,4%, на 7 сутки (-)42,8± 4,5%, на 14 сутки-(+)25,2 ±4,2%.

П р и м е р 3. Больной Г. Диагноз т желый химический ожог роговицы и конъюнктивы правого глаза. На 3, 7, 14, 28 сутки после ожога вз та слеза дл иммунологического исследовани . Величина ИП(С) составила: на 3 сутки-(+)18%, на7сутки-(+)61.%,

на 14 сутки-(+)41%, на 28 сутки - (+)29%.

Таким образом, наблюдалась подавл юща активность слезы во все сроки наблюдени с максимальным ее подъемом и значительным отклонением от нормы (больше (+)25%) на 7 сутки после ожога (фиг.З).

По сравнению с прототипом за влен- ный способ определени нарушени иммунологического состо ни при ожогах глаз обладает следующими преимуществами:

повышаетс чувствительность, так как он может быть использован дл определени нарушени иммунологического состо ни при легких, средней т жести, т желых и особо т желых ожогах, в то врем как по известному способу лишь при т желых .и особо т желых ожогах глаз; исключаетс необхо- димость забора крови из вены больного, что устран ет возможность ВИЧ-инфицировани .

Фор мула изобретени Способ определени нарушени иммунологического состо ни при ожогах глаз, включающий определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бласттрансформации лимфоцитов в биологической среде, содержащей фитогемагг- лютинин (ФГА) с включением 3Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, о т л йчающийс тем, что, с целью повышени чувствительности и упрощени способа, используют лимфоциты здорового донора, причем в отдельные пробы добавл ют слезу больных и здоровых лиц, далее высчитыва

ют индекс подавлени или стимул ции по формуле

ИП(С) (1 -g-)x100%.

где ИП(С)-индекс подавлени или стимул ции;и при величине индекса, выход щей за

А - включение 3Н-тимидина в пробах сопределы ±25% относительно нулевого

слезой больных;,уровн , определ ют наличие нарушени имВ - включение Н-тимидина в пробах со мунологического состо ни при ожогах

слезой здоровых лиц,5глаз.