RS67670B1

RS67670B1 - Probiotske kompozicije i njihova upotreba

Info

Publication number: RS67670B1
Application number: RS20260007A
Authority: RS
Inventors: Rosella Malanchin; Cristiana Piangiolino; Marco Boccarusso
Original assignee: Synbalance Srl
Priority date: 2015-12-22
Filing date: 2016-12-21
Publication date: 2026-02-27
Also published as: EP3393485B1; US11376288B2; US20190000894A1; ITUB20159330A1; AU2016377166B2; EP3393485A1; KR102737674B1; WO2017108955A1; US20210046129A1; CN109069551A; JP2019501176A; AU2016377166A1; PL3393485T3; CN109069551B; JP6976253B2; KR20180094926A; PT3393485T

Description

[0001] Opis pronalaska

[0002] Oblast pronalaska

[0003] Predmetni pronalazak se odnosi na probiotske kompozicije za oralnu primenu koje sadrže Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium animalis subsp. lactis. Takve kompozicije su korisne za sprečavanje i/ili lečenje urogenitalnih infekcija i njihovih recidiva kod žena putem oralne primene.

[0004] Pozadina pronalaska

[0005] Veliki broj simbiontskih mikroorganizama kolonizuje ljudsko telo, koji svi zajedno čine ljudsku mikrobiotu. Vaginalna mikrobiota se sastoji od vrsta koje su prisutne u vaginalnoj sluzokoži i mogu značajno da variraju kod žena u pre i postmenopauzi. Mikrobiota zdravih žena u premenopauzi se generalno sastoji od laktobacila, kao što su na primer Doderlajnovi laktobacili, koji uglavnom pripadaju Lactobacillus acidophilus spp., ali i drugim vrstama Lactobacillus: na primer L. fermentum, L. vaginalis, L. plantarum, L. delbrueckii, L. brevis, L. reuteri, L. casei, L. rhamnosus.

[0006] Na vaginalnu mikrobiotu utiču hormonske promene (uglavnom nivoi estrogena u trudnoć i ili u menopauzi), upotrebom lekova, vaginalnim pH (na koji utiču antibiotici) itd.

[0007] Urogenitalne infekcije mogu biti:

[0008] - Bakterijska vaginoza, uglavnom povezana sa Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Bacteroides (kao što je Prevotella) i drugim patogenim agensima. Pogađa žene svih uzrasta, često je asimptomatska i karakteriše se visokom pH vrednošć u vagine (>4,5) i smanjenjem broja laktobacila.

[0009] - Gljivični vaginitis, uglavnom uzrokovan Candida albicans (kandidijaza), ali i drugim vrstama Candida ili Trichomonas vaginalis, karakteriše se belim sekretom, lokalnim svrabom i iritacijom.

[0010] - Cistitis, uglavnom uzrokovan Escherichia coli i Enterococcus faecalis, nastaje kada patogene bakterije prisutne u crevima uđu u uretru kroz anus i počnu da se razmnožavaju unutar bešike. Akutni cistitis izaziva česta bolna mokrenja i u mnogim slučajevima postaje rekurentna.

[0011] Ova tri primera urogenitalnih infekcija karakterišu akutna inflamatorna stanja koja mogu dovesti do hroničnih slučajeva.

[0012] Globalno se svake godine prijavljuje više od milijardu slučajeva urogenitalnih infekcija, od kojih 27-48% ponavljajuće. Standardne terapije zahtevaju upotrebu specifičnih antibiotika ili antifungalnih lekova, oralno ili lokalno primenjenih. Međutim, ovi tretmani oslabljuju imuni sistem vaginalnog područja, nisu indikovani za česte ili rekurentne terapije i, pre svega, manje su efikasni zbog širenja bakterija otpornih na lekove.

[0013] U svetlu navedenog, i dalje postoji potreba za pronalaženjem efikasnih alternativnih rešenja kako bi se sprečile i/ili lečile urogenitalne infekcije kod žena, takođe i u rekurentnim slučajevima.

[0014] Rezime pronalaska

[0015] Predmetni pronalazak se odnosi na probiotske kompozicije za oralnu primenu koje sadrže, kao jedine aktivne sastojke, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium animalis subsp. Lactis, pod uslovom da probiotska kompozicija ne sadrži probiotsku komponentu koja sadrži najmanje jedan scFOS, fruktooligosaharid kratkog lanca.

[0016] Predmetni pronalazak se odnosi na probiotske kompozicije za oralnu primenu koje sadrže sledeć e sojeve:

[0017] - Lactobacillus plantarum PBS067,

[0018] - Lactobacillus rhamnosus LRH020 i

[0019] - Bifidobacterium animalis subsp. lactis BL050.

[0020] Pored toga, pronalazak se odnosi na upotrebu probiotskih kompozicija koje sadrže:

[0021] - Lactobacillus plantarum,

[0022] - Lactobacillus rhamnosus i

[0023] - Bifidobacterium animalis subsp. lactis,

[0024] za upotrebu putem oralne primene u prevenciji i/ili lečenju ženskih urogenitalnih infekcija i njihovih recidiva.

[0026] Kratak opis slika

[0028]

[0030] Slika 1 prikazuje antimikrobnu aktivnost protiv Escherichia coli (ATCC 25922) u supernatantima bez ćelija, posredovanu metabolitima koje luči probiotička kompozicija iz Primera 1 u poređenju sa pojedinačnim sojevima, procenjenu metodom mikrorazblaživanja bujona.

[0031] Slika 2 prikazuje antimikrobnu aktivnost probiotskog sastava iz Primera 1 protiv Escherichia coli (ATCC 25922), procenjenu metodom preklapanja agara.

[0032] Slika 3 prikazuje antimikrobnu aktivnost probiotičke kompozicije iz Primera 1 protiv Candida albicans (ATCC 10231), procenjenu metodom prekrivanja agara.

[0033] Slika 4 prikazuje kvantifikaciju proinflamatornog citokina TNF-α određenog ELISA metodom radi procene antiinflamatorne aktivnosti posredovane probiotičkom kompozicijom iz Primera 1 i pojedinačnim sojevima, u poređenju sa negativnim i pozitivnim kontrolama. Inflamatorni stres na fibroblastnoj ćelijskoj liniji BALB/3T3, klon A31, indukovan je natrijum-dodecil-sulfatom u pozitivnoj kontroli i test uzorcima. Evaluacija je sprovedena nakon 24 h i 5 dana od svakog tretmana.

[0034] Slika 5 prikazuje kvantifikaciju antiinflamatornog citokina IL-4 određenog ELISA metodom radi procene antiinflamatorne aktivnosti probiotičke kompozicije iz Primera 1 i pojedinačnih sojeva, u poređenju sa negativnim i pozitivnim kontrolama. Inflamatorni stres je indukovan natrijum-dodecil-sulfatom u pozitivnoj kontroli i test uzorcima. Evaluacija je sprovedena nakon 24 h i 5 dana od tretmana.

[0035] Slika 6 prikazuje antioksidativnu snagu određenu kao Ferric Reducing Antioxidant Parameter (FRAP) za probiotičku kompoziciju iz Primera 1 i za pojedinačne sojeve, u poređenju sa negativnom kontrolom, na fibroblastnoj ćelijskoj liniji BALB/3T3, klon A31. Evaluacija je sprovedena nakon 24 h i 5 dana od tretmana. Slika 7 prikazuje efekte kompozicije prema pronalasku u poređenju sa placebom na vaginalni pH, meren u nasumičnoj, dvostruko slepoj, placebom kontrolisanoj pilot studiji tokom 14 dana tretmana probiotičkom kompozicijom iz Primera 2 ili placebom. Dan 21 predstavlja sedam dana nakon završetka tretmana.

[0036] Slika 8 prikazuje prosečne rezultate dobijene putem upitnika za samoprocenu, u vezi sa subjektivnim opažanjem sledećih simptoma: smanjenje svraba, smanjenje osećaja pečenja, smanjenje iscedka, smanjenje suvoće; u nasumičnoj, dvostruko slepoj, placebom kontrolisanoj pilot studiji žena tretiranih probiotičkom kompozicijom iz Primera 2 u poređenju sa placebo grupom.

[0037] Slika 9 prikazuje rezultate u vezi sa sposobnošću sojeva probiotičke kompozicije iz Primera 2 da kolonizuju ćelije vaginalnog epitela (VEC) u poređenju sa placebom, u nasumičnoj, dvostruko slepoj, placebom kontrolisanoj pilot studiji. Kvantifikacija probiotičkih sojeva izvršena je qPCR analizom ukupne DNK ekstrahovane iz vaginalnih briseva prikupljenih u danima T0, T7, T14 i T21. Grafici prikazuju razliku (delta) između kvantifikacije tokom tretmana (T7, T14 i T21) i kvantifikacije pre tretmana (T0).

[0039] Detaljan opis pronalaska

[0041] Predmetni pronalazak se odnosi na kompozicije za oralnu primenu koje sadrže, kao jedine aktivne sastojke, tri različite probiotske vrste: Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus i Bifidobacterium animalis subsp. Lactis. Iznenađuju ć e, utvrđeno je da kompozicije koje sadrže Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus i Bifidobacterium animalis subsp. lactis pokazuju sinergistički efekat u sprečavanju i/ili lečenju ženskih urogenitalnih infekcija. Probiotska kompozicija pronalaska ne sadrži prebiotsku komponentu koja sadrži najmanje jedan scFOS, kratkolančani frukto-oligosaharid.

[0042] Prema drugom aspektu pronalaska, kompozicije za oralnu primenu sadrže preferirani soj svake od tri različite probiotske vrste, posebno kompozicije sadrže Lactobacillus plantarum PBS067, Lactobacillus rhamnosus PBS070 i Bifidobacterium animalis subsp. lactis PBS075.

[0043] Soj Lactobacillus plantarum pod nazivom "PBS067" deponovan je u Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, prema Budimpeštanskom ugovoru, 17.6.2011, dobijaju ć i pristupni broj "DSM 249".

[0044] Soj Lactobacillus rhamnosus nazvan "PBS070" ili "LRH020" deponovan je u Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH, u skladu sa Budimpeštanskim ugovorom, dana 17/01/2014, dobijajuć i pristupni broj "DSM 25568"

[0045] Soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis pod nazivom "PBS075" ili "BL050" deponovan je u LeibnizInstitut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, u skladu sa Budimpeštanskim ugovorom, 17.01.2012, dobijajuć i pristupni broj "DSM 25566".

[0046] [0016] Predmetni pronalazak se odnosi na kompozicije za oralnu primenu koje sadrže Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus i Bifidobacterium animalis subsp. lactis, kao jedine aktivne sastojke; poželjno je da kompozicije sadrže Lactobacillus plantarum PBS067, Lactobacillus rhamnosus PBS070 I Bifidobacterium animalis subsp. lactis PBS075, u smeši sa najmanje jednim fiziološki prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem; poželjne kompozicije nisu mikrokapsulirane.

[0047] Kompozicije se mogu formulisati konvencionalnim metodama. Poželjni oblici primene su čvrste formulacije, kao što su tvrde kapsule, kesice, tablete, prah, meke kapsule, ili tečne formulacije, kao što su kapi, ispiranje, bočice.

[0048] Lactobacillus plantarum (LP), poželjno soj Lactobacillus plantarum PBS067, može biti prisutan u kompoziciji u različitim količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije od 10 mg do 90 mg, poželjno od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

[0049] Lactobacillus rhamnosus (LRh), poželjno soj Lactobacillus rhamnosus PBS070, može biti prisutan u sastavu u različitim količinama u odnosu na ukupnu težinu sastava od 10 mg do 90 mg, poželjno od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

[0050] Bifidobacterium animalis subsp. lactis (BL), poželjno soj Bifidobacterium animalis subsp. lactis PBS075, može biti prisutan u sastavu u različitim količinama u odnosu na ukupnu težinu sastava od 10 mg do 90 mg, poželjno od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

[0051] Tri vrste Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus i Bifidobacterium animalis subsp. lactis može biti prisutan u masenom odnosu 1:1:1, poželjno u sastavu od 100 mg u kome je svaki soj prisutan u koncentraciji od 100B CFU/g.

[0052] Probiotske kompozicije pronalaska se primenjuju oralno.

[0053] Dodatni predmet ovog pronalaska su probiotske kompozicije koje sadrže Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus i Bifidobacterium animalis subsp. lactis, poželjno Lactobacillus plantarum PBS067, Lactobacillus rhamnosus PBS070 i Bifidobacterium animalis subsp. lactis PBS075, za upotrebu putem oralne primene radi sprečavanja i/ili lečenja urogenitalnih infekcija kod žena i njihovih recidiva.

[0054] Prema jednom poželjnom aspektu pronalaska, ženske urogenitalne infekcije koje se sprečavaju i/ili leče probiotskim kompozicijama izuma mogu biti bakterijska vaginoza, na primer povezana sa Gardnerella vaginalis, ili sa Atopobium vaginae, ili sa Bacteroides (kao što je Prevotella) ili sa drugim patogenima; gljivična vaginoza ili kandidijaza, uglavnom uzrokovana Candida ili Trichomonas vaginalis; cistitis, uglavnom uzrokovan Escherichia coli.

[0055] Sledeć i primeri dodatno ilustruju pronalazak.

[0057] Primeri

[0059] Primer 1 formulacije

[0061] Kompozicija u obliku praha sadrži:

[0064]

[0067] Primer 2 formulacije

[0069] Kompozicija u obliku praha u kapsulama sadrži:

[0072]

[0073] Primer 3 formulacije

[0074] Kompozicija u obliku praha u kapsulama sadrži:

[0077]

[0080] Primer 4 formulacije

[0081] Kompozicija u obliku praha u kesicama sadrži:

[0084]

[0087] Primer 5 formulacije

[0088] Kompozicija u obliku praha u kesicama sadrži:

[0091]

[0092] Sledeć i eksperimentalni primeri pokazuju antimikrobnu aktivnost kompozicije pronalaska protiv urogenitalnih patogena i poboljšanu antiinflamatornu aktivnost i antioksidativnu moć probiotske kompozicije iz Primera 1 u poređenju sa pojedinačnim sojevima primenjenim zasebno.

[0094] Antimikrobna aktivnost

[0096] Antimikrobna aktivnost fermentacionih metabolita izlučenih iz probiotskog sastava pronalaska ispitana je i kvantifikovana merenjem inhibicije rasta Escherichia coli ATCC 25922 i Candida albicans ATCC 10231 u tečnim kulturama u prisustvu 25% (v/v) supernatanata kulture bez ć elija metodom mikrorazblaživanja bujona.

[0097] Direktna inhibicija Escherichia coli ATCC 25922 i Candida albicans ATCC 10231 testirana je metodom preklapanja, kako je opisano od strane Presti et al., 2015, strana 4, pasus Antimikrobna aktivnost sojeva laktobacila i bifidobakterija korišć enjem živih ć elija. Ovaj in vitro test pruža reprezentativnu situaciju za konkurenciju između probiotskih i patogenih bakterija kao što se dešava in vivo za kolonizaciju vaginalnog epitela.

[0099] Primer 6 – Anti E. coli aktivnost metabolita fermentacije u bujonu

[0101] Tabela 1 prikazuje rezultate inhibicije rasta E. coli metodom mikrorazređivanja bujona tokom 24 sata, u prisustvu 25% (v/v) ć elijskog supernatanta. Pojedinačni sojevi su bili efikasni u poređenju sa kontrolom bez CFS-a, ali su metaboliti u CFS-u iz probiotskog sastava Primera 1 postigli potpunu inhibiciju E. coli u roku od 3 sata. Rezultati su takođe prikazani na Slici 1.

[0103] Tabela 1

[0106]

[0109] Primer 7 i primer 8 - Direktna inhibicija E. coli i C. albicans, redom

[0111] Tabela 2 prikazuje milimetre inhibicionog oreola izmerenog modifikovanom metodom preklapanja agara u odnosu na E. coli i C. albicans, kao što je prikazano na slici 2 i slici 3, redom. Patogeni su posejani po celoj prekrivenoj površini agara, ali nisu mogli da rastu blizu probiotika, posejani su samo na horizontalnoj traci. Veličina inhibicionog oreola je indikativna za antimikrobnu jačinu: već i oreol odgovara jačem antimikrobnom dejstvu.

[0113] Tabela 2

[0116]

[0119] Kao što je jasno prikazano u primerima 6, 7, 8, specifične antimikrobne aktivnosti protiv urogenitalnih patogena, Escherichia coli ATCC 25922 i Candida albicans ATCC 10231, kompozicija pronalaska koji kombinuje tri soja omoguć ava postizanje pove ć anja antimikrobne aktivnosti u poređenju sa aktivnoš ć u koju je svaki soj pokazao pojedinačno.

[0120] Dakle, efekat koji se može dobiti primenom kompozicije prema pronalasku je već i od zbira pojedinačnih efekata koji se mogu dobiti primenom pojedinačnih sojeva odvojeno (uzimajuć i u obzir da je ukupna količina kompozicije pronalaska korišć enog u testovima jednaka ukupnoj količini svakog pojedinačno primenjenog soja, tako da je količina svakog soja u testiranoj kompoziciji pronalaska jednaka 1/3 količine svakog pojedinačno testiranog soja).

[0121] Drugim rečima, interakcija pojedinačnih sojeva proizvodi očigledan sinergistički efekat protiv urogenitalnih patogena.

[0122] Drugim rečima, interakcija između pojedinačnih sojeva u sastavu pronalaska dovodi do jasnog sinergističkog efekta.

[0124] Anti-inflamatorna aktivnost i antioksidativna moć

[0126] Bakterijske urogenitalne infekcije su široko rasprostranjene inflamatorne bolesti. Citokini u organizmu domaćina igraju ključnu ulogu i u inicijalnom i u dugotrajnom imunološkom odgovoru i procesu inflamacije.

[0127] Inflamacija nije samo posledica infekcija izazvanih patogenima, već može biti i njihov uzrok.

[0128] Neravnoteža homeostaze između inflamacije i imunog sistema dovodi do manje efikasnog imunog odgovora, čime se otvara put patogenim infekcijama.

[0129] Prvi mehanizam zaštite domaćina jeste urođeni imunitet. Ćelije urođenog imuniteta izražavaju genetski kodirane receptore, tzv. Toll-like receptore (TLR). Humane genitourinarne ćelije reaguju na mikrobne površinske molekule putem Toll-like receptora 2, 4 i 6, koji pokreću transkripciju proinflamatornih citokina kao što su IL-1α, IL-1β, IL-6 i TNF-α.

[0130] Sa druge strane, adaptivni imuni odgovor je povezan sa aktivacijom limfocita koju regulišu citokini. Ovo dovodi do proliferacije B-ćelija ili T-ćelija i njihove diferencijacije u specijalizovane efektorske limfocite. Interleukin 4 (IL-4) je citokin koji indukuje diferencijaciju naivnih pomoć nih T-ćelija (Th0 u Th2 ćelije). IL-4 predstavlja citokin pozitivne povratne sprege za diferencijaciju Th2 ćelija. Pored toga, IL-4 stimuliše B-ćelije da proizvode antitela.

[0131] TNF-α i IL-4 su izabrani kao reprezentativni biomarkeri za proinflamatorne i antiinflamatorne citokine, redom, kako bi se demonstrirala efikasnost probiotika u modulaciji inflamatornog statusa.

[0132] Mešavina liofilizovanih probiotskih sojeva (LP PBS067, LRh PBS070 i BL PBS075) pripremljena je kako je opisano u Primeru 1, u ukupnoj količini od 100 mg (3×10⁹ CFU·g ⁻ ¹). Mešavina je suspendovana u 100 ml DMEM medijuma (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) u koncentraciji 10⁸ CFU·ml ⁻ ¹ i čuvana na 4 °C do upotrebe.

[0133] Sprovedena je in vitro eksperimentalna studija na fibroblastima Balb 3T3 CLONE 31 (ATCC-CCL-163). Fibroblasti Balb 3T3 CLONE 31 predstavljaju sistemsku ćelijsku liniju koja se koristi za testove bezbednosti medicinskih sredstava, a takođe je prediktivna za vaginalnu sluznicu.

[0134] Inflamacija je indukovana dodavanjem 0,01 % SDS-a (natrijum-dodecil-sulfata).

[0135] Ćelije su tretirane sa 1 ml mešavine u ukupnoj koncentraciji 10⁷ CFU·ml ⁻ ¹, kao i sa 1 ml svakog pojedinačnog soja, pri koncentraciji 10⁷ CFU·ml ⁻ ¹.

[0136] Pozitivna kontrola (CTR+) sastoji se od ćelija tretiranih samo SDS-om, dok negativnu kontrolu čine netretirane ćelije.

[0137] Procenjivan je efekat na produkciju i inhibiciju citokina, posebno na inhibiciju TNF-α i na produkciju interleukina 4 (IL-4), kao i promena u smislu ugrađene antioksidativne moći posle 24 h (akutna inflamacija) i nakon 5 dana (hronična inflamacija).

[0138] Količine citokina određene su korišćenjem ELISA kompleta, dok je antioksidativna moć procenjena FRAP testom.

[0140] Primer 9 – Procena efekata na inhibiciju TNF-α, proinflamatornog citokina (pro-I) sa ranom ekspresijom

[0141] Tabela 3 prikazuje rezultate inhibicije TNF-α dobijene pojedinačnim sojevima LP PBS067, LRh PBS070 i BL PBS075, kao i mešavinom sva tri soja (probiotska kompozicija iz Primera 1), u poređenju sa negativnom i pozitivnom kontrolom. Rezultati su prikazani i na Slici 4.

[0142] Tabela 3

[0145]

[0148] Primer 10 – Procena efekata na produkciju IL-4, antiinflamatornog citokina (anti-I) sa kasnom ekspresijom [0054] Tabela 4 prikazuje rezultate sekrecije IL-4 dobijene pojedinačnim sojevima LP PBS067, LRh PBS070 i BL PBS075, kao i mešavinom sva tri soja (probiotska kompozicija iz Primera 1), u poređenju sa negativnom i pozitivnom kontrolom. Rezultati su prikazani i na Slici 5.

[0149] Tabela 4

[0152]

[0154] Primer 11 – Procena efekata na ćelijsku antioksidativnu moć

[0155] Tabela 5 prikazuje rezultate antioksidativne moći određene FRAP testom za pojedinačne sojeve LP PBS067, LRh PBS070 i BL PBS075, kao i za mešavinu sva tri soja (probiotska kompozicija iz Primera 1), u poređenju sa negativnom kontrolom. Rezultati su prikazani i na Slici 6.

[0157] Tabela 5

[0160]

[0161] Sledeći eksperimentalni primeri pružaju procenu prediktivne efikasnosti sastava iz Primera 2 na vaginalni pH, na simptome infekcije i na kolonizaciju vaginalnog epitela sojem primenjenim oralno, što je procenjeno u recenziranoj studiji.

[0162] Ova studija se sastojala od nasumične, dvostruko slepe i placebo kontrolisane pilot studije. U njoj je učestvovalo četrdeset žena u premenopauzi starosti između 18 i 50 godina. Četrdeset dobrovoljaca je podeljeno u dve grupe lečenja na slučajnoj osnovi; svaka grupa je lečena, tokom 14 dana, formulacijom iz Primera 2 ili placebom, redom. Ispitanici su imale ginekološki pregled i prikupljeni su vaginalni brisevi kako bi se uzeo uzorak vaginalnog sekreta, u četiri eksperimentalna vremena: dan pre prvog unosa formulacije/placeba, nakon 7, 14 i 21 dan od prvog unosa (21. dan predstavlja sedam dana nakon završetka lečenja). Kvantifikacija probiotskih sojeva je sprovedena qPCR analizom na ekstraktu ukupne DNK iz vaginalnih briseva. Pored toga, upitnik za samoprocenu je primenjen u T0 i T21 da bi se procenili efekti lečenja.

[0164] Primer 12 - Evaluacija efekata na vaginalni pH

[0166] Tokom tretmana formulacijom iz Primera 2 primeć ena je varijacija vaginalnog pH u poređenju sa placebom, počevši od istih početnih vrednosti na T0. Ovaj trend je posledica kolonizacije probiotskim sojevima koji proizvode organske kiseline koje su odgovorne za zakiseljavanje vaginalne sredine. Rezultati su prikazani na Slici 7.

[0168] Primer 13 - Evaluacija efekata na simptome

[0170] Subjektivna percepcija žena uključenih u tretman procenjena je korišć enjem upitnika za samoprocenu: primeć eno je skoro potpuno zadovoljstvo u grupi tretiranoj kompozicijom pronalaska u poređenju sa placebom. Otkriveno je poboljšanje normalnih simptoma, koji nisu povezani sa bolešć u, kao što su svrab, peckanje, vaginalni iscedak i suvo ć a. Rezultati su prikazani na Slici 8.

[0172] Primer 14 - Evaluacija efikasnosti probiotika u vaginalnoj kolonizaciji

[0174] Efikasnost sojeva kompozicije izuma u kolonizaciji vaginalnog epitela obezbeđena je pomoć u kvantitativne PCR tehnike u realnom vremenu na vaginalnim brisevima. Ovaj instrumentalni test je identifikovao poveć anje samo primenjenih sojeva i kvantifikovao njihovo prisustvo u poređenju sa placebom. Rezultati su prikazani na slici 9.

Claims

1. Patentni zahtevi:

1. Probiotska kompozicija za oralnu primenu koja sadrži, kao jedine aktivne sastojke:

- Lactobacillus plantarum,

- Lactobacillus rhamnosus, i

- Bifidobacterium animalis subsp. lactis;

pod uslovom da probiotska kompozicija ne sadrži probiotsku komponentu koja uključuje najmanje jedan scFOS, kratkolančani frukto-oligosaharid.

2. Probiotska kompozicija za oralnu primenu koja sadrži sledeće sojeve:

- Lactobacillus plantarum PBS067,

- Lactobacillus rhamnosus LRH020, i

- Bifidobacterium animalis subsp. Lactis BL050.

3. Probiotska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu Lactobacillus plantarum prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije, u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjnije od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

4. Probiotska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu je Lactobacillus rhamnosus prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije, u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjnije od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

5. Probiotska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu je Bifidobacterium animalis subsp. lactis prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjnije od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

6. Probiotska kompozicija prema patentnim zahtevima od 1 do 5, pri čemu su Lactobacillus plantarum:Lactobacillus rhamnosus:Bifidobacterium animalis subsp. lactis prisutni u odnosu 1:1:1.

7. Probiotska kompozicija koja sadrži:

- Lactobacillus plantarum,

- Lactobacillus rhamnosus, i

- Bifidobacterium animalis subsp. lactis,

za oralnu primenu u prevenciji i/ili lečenju infekcija i njihovih recidiva, ženskog urogenitalnog trakta.

8. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, koja sadrži sledeće sojeve:

- Lactobacillus plantarum PBS067,

- Lactobacillus rhamnosus LRH020, i

- Bifidobacterium animalis subsp. lactis BL050.

9. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7 ili 8, pri čemu je Lactobacillus plantarum prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije, u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjnije od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

10. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7 ili 8, pri čemu je Lactobacillus rhamnosus prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije, u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjnije od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

11. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7 ili 8, pri čemu je Bifidobacterium animalis subsp. lactis prisutan u količinama u odnosu na ukupnu težinu kompozicije, u rasponu od 10 mg do 90 mg, poželjno od 25 mg do 50 mg, još poželjnije 33 mg.

12. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima od 7 do 11, pri čemu su Lactobacillus plantarum:Lactobacillus rhamnosus:Bifidobacterium animalis subsp. lactis prisutni u odnosu 1:1:1.

13. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima od 7 do 12, pri čemu je ženska urogenitalna infekcija bakterijska vaginoza.

14. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima od 7 do 12, pri čemu je ženska urogenitalna infekcija gljivični vaginitis.

15. Probiotska kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima od 7 do 12, pri čemu je ženska urogenitalna infekcija cistitis.