KR20180094926A - 프로바이오틱 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

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로셀라 말란킨
크리스티아나 피안지올리노
마르코 보카루소
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로엘미 에이치피씨 에스.알.엘.
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Abstract

본 발명은 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus), 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 (Bifidobacterium animalis subsp. lactis)를 함유하는 프로바이오틱 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 경구 투여로 여성의 비뇨생식기성 감염을 예방 및/또는 치료하는데 유용하다.

Description

프로바이오틱 조성물 및 이의 용도
본 발명은 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus), 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 (Bifidobacterium animalis subsp. lactis)를 포함하는 프로바이오틱 조성물에 관한 것이다. 그러한 조성물은 경구 투여로 여성의 비뇨생식기성 감염을 예방 및/또는 치료하는데 유용하다.
많은 공생 미생물총(symbiont microbiota)이 인체를 정착화(colonize) 하여 모두 함께 인간의 미생물총을 형성한다. 질 내 (vaginal) 미생물총은, 질 내 점막에 존재하고 폐경 전 및 폐경 기의 여성에서 현저하게 다를 수 있는 종으로 구성되어 있다. 건강한 폐경 전 여성의 미생물총은 예를 들어, 락토바실러스 아시도필러스 spp. (Lactobacillus acidophilus spp.)에 속하거나 또한 예를 들어 L.페르멘툼, L. 바지날리스, L. 플란타룸, L. 델브루엑키이, L.브레비스, L.레우테리, L.카세이, L.람노서스와 같은 다른 종의 락토바실러스에 주로 속하는 되데르라인 락토바실리(Dφderlein's lactobacilli)와 같은 락토바실리로 일반적으로 구성되어 있다.
질 내 미생물총은 호르몬 변화 (주로 임신 중 또는 폐경기 중 에스트로겐 수치), 약물 소비, 질 내 pH (항생제의 영향을 받는) 등에 의해 영향을 받는다.
비뇨생식기성 감염은 하기와 같을 수 있다:
- 가르드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis), 아토포비움 바지나에 (Atopobium vaginae), 박테로이데스 (Bacteroides) (프레보텔라(Prevotella)와 같은) 및 다른 병원성 제제와 주로 관련된, 박테리아성 질증. 이는 모든 연령층의 여성에게 영향을 미치고, 종종 무증상이고, 높은 질 내 pH 값 (>4.5) 및 락토바실러스 소실이 특징이다.
- 칸디다 알비칸스 (Candida albicans) (칸디다증) 뿐 아니라 칸디다의 다른 종 또는 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis)에 의해서 주로 유발되는 진균성 질염은, 백색 분비물, 국소 소양증 및 자극이 특징이다.
- 대장균 (Escherichia coli) 및 엔테로코커스 파에칼리스 (Enterococcus faecalis)에 의해 주로 유발되는 방광염은, 장에 존재하는 병원성 세균이 항문을 통해 요도로 들어가 방광 내에서 복제를 시작할 때 유발된다. 급성 방광염은 잦은 통증의 배뇨를 유발하고 많은 경우 재발한다.
이러한 비뇨생식기성 감염의 세 가지 예는 만성적인 사례를 초래할 수 있는 급성 염증성 상태가 특징이다.
세계적으로, 십 억 건 이상의 비뇨생식기성 감염 사례가 매년 보고되고, 이들 중 27 내지 48%가 재발한다. 표준적인 치료법은 경구적 또는 국소적 투여로 특정 항생제 또는 항진균제의 사용을 요구한다. 그러나, 이러한 치료는 질 내 공간의 면역계를 약화시키고, 이들은 잦거나 재발하는 치료법에 대해 권고(indicate)되지 않으며, 무엇보다도 이들은 약물 내성 세균의 확산 때문에 덜 효과적이다.
상기와 같은 견지에서, 여전히 여성에서, 특히 재발 사례에서도 비뇨생식기성 감염을 예방 및/또는 치료하기 위해 효과적인 대안적 해결책을 찾아야 필요가 있다.
본 발명은 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스, 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스를 포함하는 프로바이오틱 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 여성의 비뇨생식기성 감염 및 이의 재발의 예방 및/또는 치료에 있어 그러한 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 세 가지 상이한 프로바이오틱 종: 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스, 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스를 포함하는 프로바이오틱 조성물에 관한 것이다.
놀랍게도, 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스, 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스를 포함하는 조성물이 여성의 비뇨생식기성 감염을 예방 및/또는 치료하는데 상승적 효과를 보여줌이 발견되었다.
본 발명의 프로바이오틱 조성물은 하나 이상의 scFOS인, 단쇄 프럭토-올리고사카리드(short-chain fructo-oligosaccharide)를 포함하는 프리바이오틱(prebiotic) 성분을 포함하지 않는다.
본 발명의 바람직한 양상에 따르면, 상기 조성물은 세 가지 상이한 프로바이오틱 각각의 바람직한 균주를 함유하고, 구체적으로 상기 조성물은 락토바실러스 플란타룸 PBS067, 락토바실러스 람노서스 PBS070 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075를 함유할 수 있다.
"PBS067"라 불리는 락토바실러스 플란타룸 균주는 부다페스트 조약에 따라, 2011년 6월 17일에 라이프니츠-기관 DSMZ-독일 미생물 및 세포 배양물 협회 GmbH (Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)에 수탁번호 "DSM 24937"로 기탁되었다.
"PBS070" 또는 "LRH020"으로 불리는 락토바실러스 람노서스 균주는 부다페스트 조약에 따라, 2012년 1월 17일에 라이프니츠-기관 DSMZ-독일 미생물 및 세포 배양물 협회 GmbH에 수탁번호 "DSM 25568"로 기탁되었다.
"PBS075" 또는 "BL050"으로 불리는 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 균주는 부다페스트 조약에 따라, 2012년 1월 17일에 라이프니츠-기관 DSMZ-독일 미생물 및 세포 배양물 협회 GmbH에 수탁번호 "DSM 25566"으로 기탁되었다.
본 발명은 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스, 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸 PBS067, 락토바실러스 람노서스 PBS070 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075를, 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 부형제 또는 담체와의 혼합물로 함유하는 조성물에 관한 것으로, 바람직한 조성물은 마이크로-캡슐화되지 않는다.
조성물은 종래의 방법을 통해 제형화될 수 있다. 바람직한 투여의 형태는, 경질 캡슐, 사세 (sachet), 정제, 분말, 소프트겔과 같은 고형 제제 또는 점적 (drop), 도쉬 (douch), 바이알과 같은 액체 제제이다.
락토바실러스 플란타룸 (LP), 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸 PBS067 균주는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 더욱 보다 바람직하게는 33 mg의 상이한 양으로 상기 조성물에 존재할 수 있다.
락토바실러스 람노서스 (LRh), 바람직하게는 락토바실러스 람노서스 PBS070 균주는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 더욱 보다 바람직하게는 33 mg의 상이한 양으로 상기 조성물에 존재할 수 있다.
비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 (BL), 바람직하게는 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075 균주는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 더욱 보다 바람직하게는 33 mg의 상이한 양으로 상기 조성물에 존재할 수 있다.
상기 세 가지의 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 종은 1:1:1의 중량비로, 바람직하게는 100 mg의 조성물 중에 각 균주가 각 100B CFU/g의 농도로 존재할 수 있다.
바람직하게는 본 발명의 프로바이오틱 조성물은 경구로 투여된다.
본 발명의 추가적인 목적은 락토바실러스 플란타룸, 락토바실러스 람노서스 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스를, 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸 PBS067, 락토바실러스 람노서스 PBS070 및 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075를 포함하는 프로바이오틱 조성물의, 여성의 비뇨생식기성 감염 및 이의 재발을 예방 및/또는 치료하기 위한 용도이다.
본 발명의 바람직한 양상에 따르면, 본 발명의 프로바이오틱 조성물로 예방 및/또는 치료되는 여성의 비뇨생식기성 감염은 예를 들어 가르드네렐라 바지날리스, 또는 아토포비움 바디나에, 또는 박테로이데스 (프레보텔라와 같은) 또는 다른 병원균과 관련된 박테리아성 질증; 진균성 질증, 또는 주로 칸디다 또는 트리모나스 바지날리스에 의해 유발되는 칸디다증; 주로 대장균에 의해 유발되는 방광염일 수 있다.
도 1은 배양액 미량희석법 (broth microdilution method)으로 평가된, 실시예 1의 프로바이오틱 조성물로부터 분비된 대사산물에 의해 매개된 무세포 상등액(cell-free supernatant)에서의 대장균 (ATCC 25922)에 대한 항미생물적 활성을 단일 균주와 비교하여 보여준다.
도 2는 한천 오버레이법 (agar overlay method)으로 평가된, 실시예 1의 프로바이오틱 조성물의 대장균 (ATCC 25922)에 대한 항미생물적 활성을 보여준다.
도 3은 한천 오버레이법으로 평가된, 실시예 1의 프로바이오틱 조성물의 칸디다 알비칸스 (ATCC 10231)에 대한 항미생물적 활성을 보여준다.
도 4는 실시예 1의 프로바이오틱 조성물 및 단일 균주에 의해 매개된 항-염증성 활성을 평가하기 위해 ELISA에 의해 결정된 향(pro)-염증성 시토킨인 TNF-α의 정량값 (quantification)을, 음성 및 양성 대조군과 비교하여 보여준다. 섬유아세포 세포주 BALB/3T3, 클론 A31에 대한 염증성 스트레스를 양성 대조군 및 시험 시료에서 소듐 도데실 설페이트로 유도하였다. 각 처리로부터 24 시간 및 5일 후에 평가를 수행하였다.
도 5는 실시예 1의 프로바이오틱 조성물 및 단일 균주의 항염증성 활성을 평가하기 위해 ELISA에 의해 결정된 항염증성 시토킨인 IL-4 의 정량값을, 음성 및 양성 대조군과 비교하여 보여준다. 섬유아세포 세포주 BALB/3T3, 클론 A31에 대한 염증성 스트레스를 양성 대조군 및 시험 시료에서 소듐 도데실 설페이트로 유도하였다. 각 처리로부터 24 시간 및 5일 후에 평가를 수행하였다.
도 6은 섬유아세포 세포주 BALB/3T3, 클론 A31에 대한 실시예 1의 프로바이오틱 조성물 및 단일 균주의 철 환원 항산화 파라미터 (Ferric Reducing Antioxidant Parameter; FRAP)에 의해 결정된 항산화력을, 음성 대준과 비교하여 보여준다. 각 처리로부터 24 시간 및 5일 후에 섬유아세포 세포주 BALB/3T에 대해에 평가를 수행하였다.
도 7은, 실시예 2의 프로바이오틱 조성물 또는 위약으로 14일 동안 처리하여 무작위, 이중 맹검, 위약대조 시험적 연구로 결정된, 질 내 pH에 대한 본 발명의 상기 조성물의 효과를 위약과 비교하여 보여준다. 21일째는 상기 치료가 끝난 후 7일 후를 나타낸다.
도 8은 무작위, 이중 맹검, 위약대조 시험적 연구로, 실시예 2의 프로바이오틱 조성물로 치료된 여성의 가려움증 감소, 작열감 감소, 감소된 분비물, 건조감 감소의 고려된 증상에 대한 주관적인 지각과 관련된 자가-평가 설문지를 통해 수득된 평균적 결과를, 위약 군과 비교하여 보여준다.
도 9는 무작위, 이중 맹검, 위약대조 시험 연구로, 실시예 2의 프로바이오틱 조성물의 균주의 질내 상피 세포 (Vaginal Epithelium Cells; VEC)에 정착화하는 능력에 관한 결과를, 위약과 비교하여 보여준다. 프로바이오틱 균주의 정량값을 T0, T7, T14, T21 일에 수집된 질 내 스왑 (swab)으로부터의 총 DNA 추출물에 대한 qPCR 분석으로서 만들었다. 차트는 치료 중 (T7, T14 및 T21)의 정량값 및 치료 전 (T0)의 정량값 사이의 델타 값을 보여준다.
하기의 실시예가 본 발명을 추가적으로 설명한다.
실시예
실시예 1의 제제
분말 형태인 상기 조성물은 하기를 함유한다:
Figure pct00001
실시예 2의 제제
캡슐 중의 분말 형태인 상기 조성물은 하기를 함유한다:
Figure pct00002
실시예 3의 제제
캡슐 중의 분말 형태인 상기 조성물은 하기를 함유한다:
Figure pct00003
실시예 4의 제제
사세 중의 분말 형태인 상기 조성물은 하기를 함유한다:
Figure pct00004
실시예 5의 제제
사세 중의 분말 형태인 상기 조성물은 하기를 함유한다:
Figure pct00005
하기의 실험적 실시예는 비뇨생식기성 병원균에 대한 본 발명의 조성물의 항미생물적 활성 및 향상된 항염증성 활성, 및 상기 실시예 1의 프로바이오틱 조성물의 항산화력을 개별적으로 투여된 단일 균주와 비교하여 보여준다.
항미생물적 활성
본 발명의 프로바이오틱 조성물로부터 분비된 발효 대사산물의 항미생물적 활성을 조사하였고, 배양액 미량희석법으로 25% (v/v)의 무세포 배양물 상등액의 존재하에 액체 배양물 중에 대장균 ATCC 25922 및 칸디다 알비칸스 ATCC 10231의 성장 억제를 측정함으로써 정량하였다.
대장균 ATCC 25922 및 칸디다 알비칸스 ATCC 10231의 직접적인 억제를, Presti 등의 2015년, 4 쪽, 살아있는 세포를 이용한 락토바실리 및 비피도박테리아 균주의 항미생물적 활성(Antimicrobial activity of lactobacilli and bifidobacteria strains by using living cell) 문단에 기재된 바에 따라, 오버레이법으로 평가하였다. 이 인 비트로 분석은, 질 내 상피의 정착화에 대해 인 비보로 일어나는 바와 같은, 프로바이오틱 및 병원성 세균 사이의 경쟁에 대한 대표적인 상황을 제공한다.
실시예 6 - 배양액 발효 대사산물의 항 대장균 활성
표 1은, 24 시간 동안, 25% (v/v)의 무세포 배양물 상등액의 존재하에서 배양액 미량희석법에 의한 대장균의 성장 억제의 결과를 보여준다. 단일 균주는 CFS 없는 대조군과 비교할 경우 효과적이나 실시예 1의 프로바이오틱 조성물로부터의 CFS 중 대사산물은 3 시간 내 모든 대장균의 억제를 얻었다. 상기 결과는 도 1에 또한 나타내었다.
무세포 상등액 대장균 로그 ( CFU /ml)
T0 T3 T6 T24
없음 5.0 8.0 8.7 9.4
LP PBS067 5.0 4.0 2.0 2.0
LRh PBS070 5.0 5.0 4.3 4.3
BL PBS075 5.0 6.0 6.0 4.0
실시예1의 조성물 5.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0
실시예 7 및 실시예 8 - 대장균 및 C. 알비칸스 각각의 직접적 억제
표 2는 도 2 및 도 3에서 각각 알 수 있는 바와 같이, 대장균 및 C.알비칸스에 대한 변형된 한천 오버레이법에 의해 측정된 억제테 (inhibition halo)의 밀리미터를 보여준다. 병원균을 오버레이된 한천 표면 전체에 시딩하였으나, 이들은 프로바이오틱 주변에서 성장하지 못했고, 수평 줄무늬 상에만 시딩되었다. 억제테의 크기는 항미생물적 강도를 의미한다: 더 큰 테는 더 큰 항미생물적 활성과 상응한다.
시료 대장균 칸디다 알비칸스
억제테 (mm)
LP PBS067 8 5
LRh PBS070 7 8
BL PBS075 6 1
실시예1의 조성물 11 15
비뇨생식기성 병원균인, 대장균 ATCC 25922 및 칸디다 알비칸스 ATCC 10231에 대한 항미생물적 활성에 특이적인 실시예 6, 7, 8에서 명확히 알 수 있는 바와 같이, 상기 세 가지 균주를 조합한 본 발명의 조성물은 각 균주에 의해 개별적으로 보여지는 활성과 비교하여 증가된 항미생물적 활성을 달성할 수 있도록 한다.
따라서, 본 발명에 따른 조성물을 투여함으로써 달성가능한 효과는 단일 균주를 단독적으로 투여함으로써 얻을 수 있는 개별적 효과의 합보다 더 크다 (시험에서 사용된 본 발명의 조성물의 총량이 개별적으로 투여된 각 균주의 총량과 동일함을 고려하면, 본 발명의 시험된 조성물에서의 각 균주의 양은 각 개별적으로 시험된 균주의 양의 3분의 1과 동일하다).
즉, 개별적인 균의 상호작용이 비뇨생식기성 병원균에 대해 명백한 상승적 효과를 생산한다.
즉, 본 발명의 상기 조성물 중 개별적인 균주 간에 상호작용은 분명한 상승적 효과를 가져온다.
항염증성 활성 및 항산화력
박테리아성 비뇨생식기성 감염은 만연한 염증성 질환이다. 숙주에서 시토킨은 초기 및 장기 면역 반응 및 염증 과정 모두에서 중요한 역할을 한다.
염증은 병원균 감염의 결과일뿐 아니라, 순차적으로 그러한 감염의 원인도 될 수 있다.
염증과 면역계 사이의 항상성 불균형은 덜 효과적인 면역 반응을 일으켜 변원성 감염으로 가는 길을 열어준다.
숙주의 첫 번째 보호 메커니즘은 선천성 면역이다. 선천성 면역 세포는 톨-유사 수용체 (Toll-like receptors; TLR)라 불리는, 유전적으로 인코딩된 수용체를 발현시킨다. 인간의 비뇨생식기 세포는, IL-1a, IL-1b, IL-6 및 TNF-α와 같은 향-염증성 시토킨의 전사를 유발하는, 톨-유사 수용체-2, 4, 및 6을 갖는 미생물 표면 분자에 반응한다.
반면, 후천적(adaptive) 면역 반응은 시토킨에 의해 조절된 림프구 활성화와 연결된다. 이는 B 세포 또는 T 세포의 증식 및 특수화된 효과자 림프구로 분화를 유발한다. 인터루킨 4 (IL-4)는 순수 헬퍼 T 세포의 분화(Th0 세포에서 Th2 세포로)를 유도하는 시토킨이다. IL-4는 Th2 세포 분화에 대한 양성 피드백 시토킨이다. 게다가, IL-4는 B 세포가 항체를 생산하도록 자극한다.
TNF-α 및 IL-4는 염증 상태를 조절하는데 있어 프로바이오틱의 효능을 입증하기 위한, 각각 향-염증성 및 항-염증성 시토킨에 대한 대표적인 바이오마커로 선택되어 왔다.
동결-건조된 프로바이오틱 균주 (LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075)의 혼합물을 실시예 1에 기재된 바와 같이, 총량 100 mg (3*109cfu*g-1)으로 제조하였다. 상기 혼합물을 100 ml의 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle 배지) 중에 108cfu*ml-1 의 농도로 현탁시키고, 사용될 때까지 4 ℃에서 보존하였다.
섬유아세포 Balb 3T3 CLONE 31 (ATCC-CCL-163)에 대한 인 비트로 실험적 연구를 수행하였다. 섬유아세포 Balb 3T3 CLONE 31은 의료적 장치의 안전성 시험에 사용된 전신 세포주를 대표하고 이들은 또한 질 내 점막에 대해 예측된다.
염증을 0.01 %의 SDS (소듐 도데실 설페이트)를 첨가함으로써 유도시켰다.
세포를 총 농도 107cfu*ml-1의 1 ml의 혼합물 및 각 107cfu*ml-1의 농도를 갖는 1 ml의 각 균주로 처리하였다.
양성 대조군 CTR+는 SDS로만 처리된 세포로 구성되는 반면, 음성 대조군은 처리되지 않은 세포를 대표한다.
24 시간 (급성 염증) 및 5 일 후 (만성 염증)에 시토킨의 생산 및 억제에 대한 영향, 구체적으로 세포적 시스템에 의한 및 TNF-α의 억제 및 인터루킨 4 (IL-4)의 생산에 미치는 영향 및 포함된(embed) 항산화력의 관점에서 그의 변화를 평가하였다.
시토킨 용량 (dosage)을 ELISA 키트를 이용하여 측정한 반면, 항산화력은 FRAP 시험을 통해 평가하였다.
실시예 9 - 초기 방출로 인한 TNF -α 억제, 향-염증성 시토킨 (pro-I)에 대한 효과의 평가
표 3은 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 단일 균주로, 및 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 (실시예 1의 프로바이오틱 조성물) 세 균주의 혼합물로 수득된 TNF-α 억제의 결과를, 음성 및 양성 대조군과 비교하여 보여준다. 상기 결과를 도 4에 또한 나타내었다.
균주 TNF -α ( pg /mL) SD SD
24h 후 5dd 후 24h 5gg
CTR - 139.70 932.27 11.82 101.75
CTR + 406.23 2706.90 21.40 172.79
LP PBS067 151.03 992.87 3.11 8.48
LRh PBS070 158.37 857.10 56.24 48.04
BL PBS075 355.07 2375.20 11.66 45.28
실시예 1의 조성물 151.70 867.00 10.00 67.90
실시예 10 - 후기 방출로 인한 IL-4, 항염증성 시토킨 (anti-I)의 생산에 대한 효과의 평가
표 4는 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 단일 균주로, 및 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 세 균주의 혼합물 (실시예 1의 프로바이오틱 조성물)로 수득된 IL-4 분비의 결과를, 음성 및 양성 대조군과 비교하여 보여준다. 상기 결과를 도 5에 또한 나타내었다.
균주 IL-4 ( pg /mL) SD SD
24h 후 5dd 후 24h 5gg
CTR - 516.53 273.93 4.82 34.87
CTR + 584.20 335.03 13.40 45.60
LP PBS067 641.83 461.53 16.07 60.82
LRh PBS070 752.57 444.67 19.45 24.59
BL PBS075 628.13 398.80 5.00 19.40
실시예 1의 조성물 744.30 654.50 5.70 6.83
실시예 11 - 세포적 항산화력에 대한 효과의 평가
표 5는 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 단일 균주의, 및 LP PBS067, LRh PBS070 및 BL PBS075 세 균주의 혼합물 (실시예 1의 프로바이오틱 조성물)의 FRAP 시험으로 평가된 항산화력에 대한 결과를, 음성 대조군과 비교하여 보여준다. 상기 결과를 도 6에 또한 나타내었다.
균주 FRAP - Fe(II) μM SD SD
24h 후 5dd 후 24h 5gg
CTR - 2238.78 3842.30 160.24 346.19
LP PBS067 3678.03 4321.23 1051.52 41.91
LRh PBS070 4519.40 4684.50 1517.88 39.81
BL PBS075 2881.80 4198.53 116.44 312.676
실시예 1의 조성물 4565.00 6273.30 163.90 104.10
하기의 실험적 실시예는, 피어-리뷰(peer-review) 연구에서 평가된, 경구 투여된 균주에 의한 실시예 2의 조성물의 질 내 pH, 감염 증상 및 질 내 상피의 정착화에 대한 예방적 효능의 평가를 제공한다.
이 연구는, 무작위, 이중 맹검 및 위약 대조 시험적 실험으로 구성되었다. 이는 18 세에서 50세 사이의 40 명의 폐경 전 여성을 포함하였다. 상기 40 명의 지원자는 무작위로 2 개의 치료군으로 나뉘었다; 각 그룹을, 각각 실시예 2 또는 위약으로 14일 동안 치료하였다. 등록된 대상자는 부인과학적 검사를 받았고, 4 회의 실험기: 제제/위약의 첫 번째 섭취 전날, 첫 번째 섭취로부터 7, 14 및 21일 (21일은 치료 종료 후 7일을 나타냄)에, 질 분비물의 시료를 채취하기 위해 질 내 스왑을 수집하였다. 프로바이오틱 균주의 정량값을 질 내 스왑으로부터의 총 DNA 추출물에 대한 qPCR 분석에 의해 수행하였다. 또한, 치료 효과를 평가하기 위해 T0 및 T21에 자가 평가 설문지가 주어졌다.
실시예 12 - 질 내 pH에 대한 효과의 평가
실시예 2 제제로 치료하는 동안, T0에서 동일한 기저값으로부터 시작하여, 위약과 비교하여 질 내 pH의 변화가 관찰되었다. 이러한 경향은 질 내 환경의 산성화에 중요한 유기 산을 생산하는 프로바이오틱 균주에 의한 정착화 때문이다. 결과를 도 7에 나타내었다.
실시예 13 - 증상에 대한 효과의 평가
치료에 수반된 여성들의 주관적인 인식을 자가 평가 설문지를 이용하여 평가하였다: 위약과 비교하여 본 발명의 조성물로 치료된 그룹에서 거의 전체적인 만족이 관찰되었다. 가려움, 작열감, 질 분비물 및 건조감과 같은 질병과 관계 없는 일반적인 증상에서의 개선이 발견되었다. 결과를 도 8에 나타내었다.
실시예 14 - 질 내 정착화에서 프로바이오틱의 효과의 평가
질 내 상피를 정착화하는데 본 발명의 조성물의 균주의 영향이 질 내 스왑에 대한 실시간 정량적 PCR 기술을 이용하여 제공된다. 이 기구적 시험은 투여된 균주의 증가만을 확인하였고, 위약과 비교하여 이들의 존재를 정량화하였다. 결과를 도 9에 나타내었다.
DSMZ Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSM25566 20120117 DSMZ Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSM24937 20110617 DSMZ Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH DSM25568 20120117
Figure pct00006
Figure pct00007

Claims (15)

  1. - 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum),
    - 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus), 및
    - 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 (Bifidobacterium animalis subsp. lactis)를 포함하는 경구 투여용 프로바이오틱 조성물로서, 단, 상기 프로바이오틱 조성물이, 하나 이상의 scFOS인, 단쇄 프럭토-올리고사카리드를 포함하는 프리바이오틱(prebiotic) 성분을 포함하지 않는 것인 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 하기의 균주를 포함하는 것인 프로바이오틱 조성물:
    - 락토바실러스 플란타룸 PBS067,
    - 락토바실러스 람노서스 PBS070, 및
    - 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타룸은 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 락토바실러스 람노서스는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  5. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  6. 청구항 1 내지 5에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타룸:락토바실러스 람노서스:비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스는 1:1:1 비율로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  7. - 락토바실러스 플란타룸,
    - 락토바실러스 람노서스, 및
    - 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스를 포함하는 프로바이오틱 조성물로서, 여성의 비뇨생식기성 감염 및 이의 재발의 예방 및/또는 치료용 프로바이오틱 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 하기의 균주를 포함하는 것인 프로바이오틱 조성물:
    - 락토바실러스 플란타룸 PBS067,
    - 락토바실러스 람노서스 PBS070, 및
    - 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스 PBS075.
  9. 청구항 7 또는 8에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타룸은 상기 조성물의 총중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  10. 청구항 7 또는 8에 있어서, 상기 락토바실러스 람노서스는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  11. 청구항 7 또는 8에 있어서, 상기 비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스는 상기 조성물의 총 중량에 대해 10 mg 내지 90 mg, 바람직하게는 25 mg 내지 50 mg의 범위, 보다 바람직하게는 33 mg의 양으로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  12. 청구항 7 내지 11에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타룸:락토바실러스 람노서스:비피도박테리움 아니말리스 아종 락티스는 1:1:1 비율로 존재하는 것인 프로바이오틱 조성물.
  13. 청구항 7 내지 12에 있어서, 상기 여성의 비뇨생식기성 감염은 박테리아성 질증(vaginosis)인 것인 프로바이오틱 조성물.
  14. 청구항 7 내지 12에 있어서, 상기 여성의 비뇨생식기성 감염은 진균성 질염인 것인 프로바이오틱 조성물.
  15. 청구항 7 내지 12에 있어서, 상기 여성의 비뇨생식기성 감염은 방광염인 것인 프로바이오틱 조성물.
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