RS65307B1 - Hijaluronski filer sa velikim kapacitetom liftinga i malom silom ubrizgavanja - Google Patents

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

Reference vezane za srodne prijave

[0001] Predmetna prijava uživa pravo prvenstva na osnovu korejske prijave patenta br. 10-2018-0080210, podnete 10. jula, 2018.

[0002] Predmetna prijava se odnosi na hijaluronske filere, a specifičnije, odnosi se na hijaluronski filer koji ima osobine filera sa monofaznom hijaluronskom kiselinom (HA) i filera sa bifaznom hijaluronskom kiselinom simultano, i prema tome je injektabilan uz malu silu ubrizgavanja sa odličnom sposobnošću liftinga, i na metod za njihovo dobijanje.

STANJE TEHNIKE

[0003] Tkivo ljudske kože održava svoju strukturu pomoću vanćelijskog matriksa koji ukllučuje proteine kao što su kolagen, elastin i slični i glikozaminoglikane, ali kad se pojave defekti mekog tkiva zbog spoljnih šokova, bolesti ili starenja i tako dalje, pojačavanje tkiva kao što je pojačavanje mekog tkiva se radi u medicinske i kozmetičke svrhe. Ovo pojačavanje se radilo hirurški, kroz plastičnu hirurgiju, ili se obnavljalo i popravljalo oblik na nehirurški način ubrizgavanjem biološkog tkiva ili sintetičkih polimernih hemikalija u površinu da se poveća i raširi zapremina mekog tkiva. Zatim se supstanca, koja je komponenta slična tkivu kože, ubacuje u specifično mesto da raširi meko tkivo, i time kozmetički povećava zapreminu obraza, usana, grudi, kukova, itd. i koja se koristi protiv bora ili za korekciju kontura smanjenjem finih bora i dubokih bora kože i naziva se materijal za povećanje mekog tkiva i uopšteno se naziva dermalni filer. Prva generacija dermalnih filera prvenstveno razvijenih u vezi sa ovim filerom uključuje proizvode kao što su Zyderm i Zyplast, dobijene ekstrahovanjem životinjskih proteina izvedenih iz životinja, odnosno, krava ili svinja, itd., i Cosmoderm ili Cosmoplast koji koriste ljudski kolagen i slično, ali oni se od nedavno retko koriste zbog kratkog trajanja efekta i nepogodnosti izvođenja testa senzitizacije kože mesec dana pre procedure.

[0004] Filer druge generacije je filer sa hijaluronskom kiselinom (odavde nadalje i pod nazivom 'HA') koji ima duže trajanje efekta nego kolagenski filer i sastoji se od polisaharida sličnih ljudskim komponentama, N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline, i prema tome ima manje sporednih efekata i lak je za korišćenje i uklanjanje, i omogućava održavanje vlažnosti, volumena i elastičnosti kože privlačenjem vode, te stoga ima pogodna preimućstva kao filer za kožu.

[0005] Međutim, sama hijaluronska kiselina ima kratak poluživot od svega nekoliko sati u ljudskom telu, i na taj način postoji ograničenje u primeni i zato se sprovode istraživanja za povećanje poluživota (unutrašnja postojanost) putem unakrsnog vezivanja. Na primer, U.S. Patent No. 4,582,865 opisuje derivat hijaluronske kiseline umrežen divinilsulfonom (DVS) kao sredstvom za unakrsno vezivanje, i njegov oblik hidrogela je na tržištu pod trgovačkim imenom Hyalfrom<®>, a U.S. Patent No. 5,827,937 opisuje metod za dobijanje derivata hijaluronske kiseline umreženog pomoću multifunkcionalnog epoksi jedinjenja kao agensa za unakrsno vezivanje, i među njima, Restylane<®>, hidrogelni oblik umreženog proizvoda hijaluronske kiseline dobijenog pomoću 1,4-butandiol diglicidil etra (BDDE) kao agensa za unakrsno vezivanje, koji je odobren od U.S. FDA i dostupan je u celom svetu kao filer za pojačavanje tkiva.

[0006] Takav umrežen hijaluronski filer uključuje filer napravljen od jedne faze (monofazni HA filer) i filer napravljen od dve faze (bifazni HA filer). Monofazni hijaluronski filer je dobijen upotrebom prilično tečnog homogenog hidrogela koji sadrži umreženu hijaluronsku kiselinu i tako ima generalno malu elastičnost i visoku kohezivnost. U skladu s tim, kad se monofazni hijaluronski filer ubrizga u kožu, nije verovatno da će se on pomeriti sa mesta ubrizgavanja, ali problem je u tome što se ubrizgana forma neće održati dugo i period zadržavanja oblika je samo oko 2 meseca posle procedure.

[0007] Bifazni hijaluronski filer se dobija mešanjem umreženih čestica same hijaluronske kiseline ili sa hijaluronskom kiselinom koja nije umrežena blizu tečnosti (hijaluronska kiselina koja nije umrežena (linearna HA)), i tako ima generalno visoku elastičnost i nisku kohezivnost. U skladu s tim, kad se ubrizga bifazni HA filer, on može dugo da održava svoj oblik, ali je problem u tome što postoji velika mogućnost da se pomeri sa mesta ubrizgavanja. Reprezentativan primer bifaznog HA filera je ranije pomenuti Restylane<®>(Galderma proizvod).

[0008] Kao takvi, monofazni HA filer i bifazni HA filer imaju prednosti i nedostatke, respektivno, i konvencionalno, postoji primer u kom se gornji fileri mešaju da bi imali sve osobine monofaznog hijaluronskog filera i bifaznog hijaluronskog filera, ali u ovom slučaju, prednosti monofaznog hijaluronskog filera i bifaznog hijaluronskog filera su nešto smanjene kad su zajedno, tako da to nije pogodno kao filer. Prema tome, postoji potreba za filerom koji može da održi svoj oblik dugo, dok je istovremeno mala mogućnost da se pomeri sa mesta ubrizgavanja.

[0009] Pored toga, kad su fizičke osobine filera jake, javlja se problem da sposobnost povećanja mekog tkiva time postaje bolja, ali zbog jakih fizičkih osobina filera, tokom procedure sila ubrizgavanja se povećava i zbog toga kad doktor radi na pacijentu, ubrizgavanje je teško, a i sila ubrizgavanja je neujednačena, tako da postaje teško da se ubrizga tačna količina.

[0010] WO 2016/074794 opisuje dugotrajan injektabilan dermalni filer u vidu gela, koji sadrži umreženu hijaluronsku kiselinu i karboksimetil celulozu. Hijaluronska kiselina je umrežena sa BDDE uz stepen modifikovanja, izražen kao odnos sume mono- i duplo vezanih BDDE-kroslinkera (agens za unakrsno vezivanje) i sume disaharidnih jedinica hijaluronske kiseline, od 0,5% to 25%. Filer ispoljava malu silu istiskivanja i visoki modul elastičnosti i visoku dinamičku viskoznost ako mu je kapacitet volumiziranja visok.

OPIS

TEHNIČKI PROBLEM

[0011] Predmetni pronalazak se predlaže kao rešenje gornjih problema, i cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi filer koji ima visoku viskoelastičnost i adheziju, kao prednosti i monofaznih hijaluronskih filera i bifaznih hijaluronskih filera i time ima dobru sposobnost liftinga na mestu ubrizgavanja i tako ima malu mogućnost pomeranja sa mesta ubrizgavanja i može da održi svoj oblik dugo i ima malu silu ubrizgavanja, tako da je stabilno injektabilan.

[0012] Drugi cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi metod za dobijanje takvog filera.

TEHNIČKO REŠENJE

[0013] Predmetni pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Bilo koje "rešenje" ili "primer" koji je prikazan u opisu, ali nije obuhvaćen zahtevima, treba smatrati da je prikazan samo u ilustrativne svrhe. Predmetna prijava je osmišljena radi rešavanja gore navedenih problema u stanju tehnike i otkrila je da, kad se ispune uslovi da hijaluronska kiselina ima određenu molekulsku težinu i stepen unakrsnog vezivanja, ona ima reološke osobine visoke kohezivnosti monofaznih filera i visoku viskoelastičnost bifaznih filera simultano i, u skladu s tim, ispoljava visoku sposobnost liftinga i time je laka za pravljenje u željenom obliku i održava se u željenom periodu kad se ubrizga u kožu itd., a komponente filera se retko pomeraju na druga mesta u telu, a i sila ubrizgavanja je jako smanjena, što može da minimizuje bol kod pacijenata tokom ubrizgavanja, čime se upotpunjuje ovaj pronalazak.

[0014] Dakle, kao jedan aspekt, predmetni pronalazak se odnosi na filer sa hijaluronskom kiselinom koji ispoljava osobine i monofaznih filera i bifaznih filera, čime ima visoku sposobnost liftinga i mala sila ubrizgavanja, špric prethodno napunjen filerom, biomaterijal za uvećanje mekog tkiva koje sadrži filer i metod protiv bora koji obuhvata ubrizgavanje filera u biološko tkivo.

[0015] Hijaluronska kiselina (u daljem tekstu takođe nazivana i 'HA') koja je sadržana u fileru predmetnog pronalaska je biopolimer čije se ponovljene jedinice sastoje od N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline i linearno su vezane, i koji je prisutan u velikoj meri u staklastom telu oka, sinovijalnoj tečnosti zgloba, petlovoj kresti i slično i naširoko se koristi za medicinske uređaje kao što su oftalmička hirurška pomagala, sredstva za poboljšanje funkcije zglobova, materijali za dostavljanje lekova, kapi za oči, sredstva protiv bora, ili u kozmetici, jer ima odličnu biokompatibilnost. Specifično, hijaluronska kiselina sadržana u fileru predmetnog pronalaska može da znači da se i njena so dodaje hijaluronskoj kiselini. So hijaluronske kiseline uključuje na primer, neorganske soli kao što su natrijum hijaluronska kiselina, kalijum hijaluronska kiselina, kalcijum hijaluronska kiselina, magnezijum hijaluronska kiselina, cink hijaluronska kiselina, kobalt hijaluronska kiselina i slično i organske soli kao što su tetrabutil amonijum hijaluronska kiselina, i tako dalje, ali nije ograničena na njih.

[0016] Prema zahtevanom pronalasku, hijaluronska kiselina ili njena so je umrežena odgovarajućim sredstvom za unakrsno vezivanje.

[0017] Unakrsno vezan derivat hijaluronske kiseline se dobija unakrsnim vezivanjem same gornje hijaluronske kiseline ili njene soli upotrebom sredstva za unakrsno vezivanje. Za unakrsno vezivanje, korišćen je metod uz upotrebu sredstva za unakrsno vezivanje u alkalnom vodenom rastvoru. Alkalni vodeni rastvor uključuje NaOH, KOH, poželjno, vodeni rastvor NaOH, ali nije ograničen na njih. Zatim, u slučaju vodenog rastvora NaOH, on se može koristiti u koncentraciji od 0,1N do 0,5N. Unakrsno vezana hijaluronska kiselina sadržana u fileru predmetnog pronalaska ispoljava dobre reološke osobine (viskoelastičnost, kohezivnost) i sposobnost liftinga i ima malu silu ubrizgavanja, čak i kad se koristi sredstvo za unakrsno vezivanje u niskoj koncentraciji i kad se koristi mala količina.

[0018] Sredstvo za unakrsno vezivanje je jedinjenje koje sadrži dve ili više epoksi funkcionalnih grupa i može da varira, a kao poželjan primer, ono uključuje butandiol diglicidil etar (1,4-butandiol diglicidil etar: BDDE), etilen glikol diglicidil etar (EGDGE), heksandiol diglicidil etar (1,6-heksandiol diglicidil etar), propilen glikol diglicidil etar, polipropilen glikol diglicidil etar, politetrametilen glikol diglicidil etar, neopentil glikol diglicidil etar, poliglicerol poliglicidil etar, diglicerol poliglicidil etar, glicerol poliglicidil etar, tri-metilpropan poliglicidil etar, bisepoksipropoksi etilen (1,2-(bis(2,3-epoksipropoksi)etilen), pentaeritritol poliglicidil etar i sorbitol poliglicidil etar i slično, a među njima, biepoksidebaziran 1,4-butandiol glicidil etar je naročito poželjan u aspektu niske toksičnosti.

[0019] U ovoj prijavi, izraz "stepen modifikovanja (MOD)" označava stepen modifikovanja hijaluronske kiseline izračunat kao numerička vrednost (n) koja prikazuje broj molova sredstva za unakrsno vezivanje (na primer, BDDE) vezanih za ceo molekul hijaluronske kiseline u odnosu na broj molova N-acetil-D-glukozamina u jedinici hijaluronske kiseline (N-acetil-D-glukozamin (GlcNAc) D-glukuronska kiselina) i predstavljen je sledećom Jednačinom 1.

[Jednačina 1 ]

Stepen modifikovanja = ukupan broj molova sredstva za unakrsno vezivanje / ukupan broj molova N-acetil-D-glukozamina

[0020] U predmetnom pronalasku, filer se odlikuje time što takav stepen modifikovanja ima opseg od 0,01 do 0,07 (1% - 7%), poželjno, opseg od 0,03 do 0,05 (3% ~ 5%), kroz unakrsno vezivanje gornjim sredstvom za unakrsno vezivanje.

[0021] Pored toga, ovde izraz "odnos unakrsnog vezivanja (CrR)" označava odnos broja molova umreženog sredstva za unakrsno vezivanje i ukupnog broja molova sredstva za unakrsno vezivanje predstavljen je sledećom Jednačinom 2.

[Jednačina 2 ]

Odnos unakrsnog vezivanja = broj molova umreženog sredstva za unakrsno vezivanje / ukupan broj molova sredstva za unakrsno vezivanje

[0022] U predmetnom pronalasku, filer se odlikuje time što ima opseg od 0,1 do 0,2, poželjno 0,14 do 0,17 kroz unakrsno vezivanje. Hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku ima karakteristiku sinergijskog ispoljavanja osobina monofaznih i bifaznih filera u isto vreme tako što ima gore navedene MOD i CrR opsege.

[0023] Ovde, molekulska težina umrežene hijaluronske kiseline može biti 2.500.000 Da ili više, poželjno 2.500.000 do 3.500.000 Da.

[0024] Termin "elastičnost" koji se ovde koristi označava osobinu čvrstoće kad se na objekat primeni sila, odnosno, osobinu promene oblika kad se primeni sila, ali i vraćanje u originalan oblik kad se sila ukloni. Ova elastičnost je predstavljena modulom skladištenja (G': modul elastičnosti) i njegova jedinica je paskal (Pa). Pored toga, termin viskoznost koji se ovde koristi označava osobinu tečnog stanja, odnosno, veličinu koja opisuje otpor tečnosti prilikom tečenja. Ova viskoznost se može predstaviti modulom gubitka (G": modul viskoznosti) i njegova jedinica je paskal (Pa).

[0025] Termin kohezivnost koji se ovde koristi je privlačenje (adhezija) koje deluje između čestica filera i ona može da uzrokuje čestice filera da prave aglomerate. Što je veća ova kohezivnost, veća je sila koja može da podrži tkivo u koje je filer ubrizgan. Obično se kohezivnost može indirektno meriti testom kompresije i meri se kao otpor prilikom komprimovanja određenog stepena kad se stavi na reometar i njegova jedinica je gf (gram sila).

[0026] Pored toga, termin sposobnost liftinga koji se ovde koristi je sposobnost da se raširi ili obnovi mesto ubrizgavanja, koji se može predstaviti kao proizvod modula skladištenja / elastičnosti i otpora tokom kompresije i velika sposobnost liftinga označava odličnu sposobnost tkiva da se obnovi i manju migraciju filera posle ubrizgavanja. Generalno, kad je sposobnost liftinga velika, fizičke osobine filera su jake i time ispoljava osobinu velike sile ubrizgavanja.

[0027] Termin sila ubrizgavanja koji se ovde koristi predstavlja silu potrebnu za vreme ubrizgavanja filera.

[0028] Generalno, hijaluronski filer u monofaznom obliku je oblik gela sa kohezivnošću (kohezivan gel) i, prema tome, ima nisku elastičnost, ali visoku kohezivnosti i time ispoljava veliku silu ubrizgavanja. Primeri uključuju Merz-ov Belotero<®>i Vivavy-in Stylage<®>. Pored toga, hijaluronski filer u bifaznoj formi pokazuje čestičnu formu i tako ima karakteristiku visoke elastičnosti i niske kohezivnosti, a da bi ispoljavao takvu visoku elastičnost, napravljene su čestice sa velikim prečnikom. Primer uključuje Garderma-in Resyrane<®>. Međutim, takav bifazni hijaluronski filer zahteva veliku silu kad prolazi kroz iglu zbog velikog prečnika čestica, što dovodi do velike sile ubrizgavanja.

[0029] Međutim, hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku se odlikuje time što ima malu silu ubrizgavanja sa velikom sposobnošću liftinga, time što ima visoke elastičnost i kohezivnost i u skladu s tim, ima osobine monofaznih filera i osobine bifaznih filera simultano. Hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku pokazuje sposobnost liftinga od 12000 do 44000 Pa*gf, kad se meri reometrom i pokazuje silu ubrizgavanja od 15 do 25 N, kad se meri tako što se sipa u stakleni špric od 1ml kompanije Schott Company i kad se koristi igla 29G od 1/2" od Terumo Company.

[0030] Pored toga, čestica hijaluronske kiseline, poželjno, umrežena čestica hijaluronske kiseline, u hijaluronskom fileru prema predmetnom pronalasku, može da ima razne oblike, ali poželjno, može biti sfernog oblika. Štaviše, prosečan prečnik ove čestice može biti 300 do 400 µm. Kad se ima takav specifičan opseg prečnika ovih čestica, filer može imati veliku sposobnost liftinga zbog odličnih reoloških osobina, ali i pokazivati malu silu ubrizgavanja.

[0031] U jednom poželjnom aspektu, hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku može da sadrži hijaluronsku kiselinu od 1 do 3 težinska % od ukupne težine filera. Pored toga, hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku može još da sadrži vodu, anestetik ili njihovu kombinaciju, pored hijaluronske kiseline.

[0032] Anestetik sadrži jednu ili više vrsta anestetika, poželjno, lokalne anestetike, poznate u struci, a koncentracija jednog ili više anestetika je efektivna količina za ublažavanje simptoma koji će se pojaviti kad se sastav ubrizgava. Primer anestetika može biti izabran iz grupe koju čine ambukain, amolanon, amilokain, benoksinat, benzokain, betoksikain, bifenamin, bupivakain, butakain, butamben, butanilikain, butetamin, butoksikain, kartikain, hloroprokain, kokaetilen, kokain, ciklometikain, dibukain, dimetizokin, dimetokain, diperodon, diciklonin, ekgonidin, ekgonin, etil hlorid, etidokain, beta-eukain, euprocin, fenalkomin, formokain, heksilkain, hidroksitetrakain, izobutil p-aminobenzoat, leucinokain mezilat, levoksadrol, lidokain, mepivakain, meprilkain, metabutoksikain, metil hlorid, mirtekain, naepain, oktakain, ortokain, oksetazain, paretoksikain, fenakain, fenol, piperokain, piridokain, polidokanol, pramoksin, prilokain, prokain, propanokain, proparakain, propipokain, propoksikain, psuedokokain, pirokain, ropivakain, salicil alkohol, tetrakain, tolikain, trimekain, zolamin i njihove soli. U jednom rešenju, anestetik može biti lidokain, na primer, u obliku lidokain hidrohlorida.

[0033] Za hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku, koncentracija anestetika sadržanog u fileru može biti oko 0,1 težinski % do oko 1,0 težinski % od ukupne težine filera, na primer, oko 0,2 težinska % do oko 0,5 % težine sastava. Poželjno, može biti 0,3 težinska %.

[0034] Koncentracija anestetika u fileru opisanom ovde može biti terapijski efektivna, a to znači koncentracija koja je bezopasna za pacijenta i pogodna za obezbeđivanje prednosti u aspektu pogodnosti procedura i saglasnosti pacijenata.

[0035] Pored toga, filer prema predmetnom pronalasku može dalje da sadrži rastvor pufera i puferski rastvor može da koristi bez ograničenja bilo šta što se koristi za dobijanje hidrogela hijaluronske kiseline. Poželjan primer puferskog rastvora može biti puferski rastvor koji sadrži jednu ili više vrsta izabranih iz grupe koju čine limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina), bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina), Tris (tris(hidroksimetil)amino metan), tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin), HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina), TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina) i PIPES (piperazin-N,N' -bis(2-etansulfonska kiselina), ali nije ograničen na njih. Sadržaj gornjih komponenata koji se sadrže u puferskom rastvoru može odgovarajuće da se podesi, ali poželjno, one mogu biti sadržane u koncentraciji od 0,3 do 2,0 g/L puferskog rastvora.

[0036] Štaviše, filer prema predmetnom pronalasku može dalje da sadrži izotonično sredstvo i ovo izotonično sredstvo može da se koristi bez ograničenja, dok god se koristi za pripremu hidrogela hijaluronske kiseline. Kao poželjno izotonično sredstvo, može se koristiti natrijum hlorid, ali nije ograničeno na njega. Sadržaj izotoničnog sredstva se može odgovarajuće podesiti ako je potrebno i, na primer, može biti sadržan u količini od 7,0 do 9,0 g/L puferskog rastvora, ali nije ograničen na to.

[0037] U jednom primeru prema predmetnom pronalasku, koristi se puferski rastvor koji sadrži natrijum hlorid, natrijum monohidrogen fosfat i natrijum dihidrogen fosfat u vodi za injekciju.

[0038] Kao dodatan aspekt, sastav prema predmetnom pronalasku može dalje da sadrži prihvatljive komponente koje mogu biti sadržane u pripremi filera, pored gornjih komponenata.

[0039] Dalje, odlikuje se time što retko sadrži preostalo sredstvo za unakrsno vezivanje u hijaluronskom fileru koji ima visoku viskoelastičnost i kohezivnost prema predmetnom pronalasku i preostalo sredstvo za unakrsno vezivanje je poželjno 0,5 ppm ili manje, što je granica detekcije.

[0040] Ovaj hijaluronski filer koji ima visoku viskoelastičnost i kohezivnost prema predmetnom pronalasku može vrlo korisno da se upotrebi u kozmetičke ili terapijske svrhe, zahvaljujući karakterističnoj elastičnosti i kohezivnosti. Kao specifičan primer, ovaj hijaluronski filer se može koristiti za popunjavanje biološkog tkiva, protiv bora putem popunjavanja bora, za remodeliranje lica ili obnavljanje ili povećanje zapremine mekog tkiva kao što su usne, nos, kukovi, obrazi, grudi i slično, kao biomaterijal za uvećanje mekog tkiva. Hijaluronski filer se može administrirati u formi administracije koja odgovara takvoj upotrebi, a poželjno, može biti injekcija.

[0041] Kao drugi aspekt, predmetni pronalazak se odnosi na metod dobijanja gornjeg hijaluronskog filera koji ima visoku viskoelastičnost i kohezivnost, koji obuhvata sledeće korake:

(a) dobijanje hidrogelova umrežene hijaluronske kiseline dodavanjem hijaluronske kiseline ili njene soli, sredstva za unakrsno vezivanje u alkalni vodeni rastvor i mešanjem, a zatim reagovanjem;

(b) sečenje hidrogelova hijaluronske kiseline dobijenih u koraku (a);

(c) dobijanje puferskog rastvora;

(d) pranje i bubrenje hidrogelova hijaluronske kiseline isečenih u koraku (b) korišćenjem puferskog rastvora dobijenog u koraku (c);

(e) mlevenje opranih i nabubrelih hidrogelova hijaluronske kiseline u koraku (d) i

(f) punjenje šprica hidrogelovima dobijenim u koraku (e), a zatim sterilizacija.

[0042] Korak (a) je korak dobijanja hidrogelova umrežene hijaluronske kiseline reakcijom unakrsnog vezivanja hijaluronske kiseline ili njene soli u alkalnom vodenom rastvoru pomoću sredstva za unakrsno vezivanje, i ono što se odnosi na hijaluronsku kiselinu ili njenu so, sredstvo za unakrsno vezivanje i hidrogel umrežene hijaluronske kiseline, odnosi se i na navedeno u hijaluronskom fileru. Alkalni vodeni rastvor može da koristi bilo šta poznato kao alkalni vodeni rastvor pogodan za dobijanje hidrogelova hijaluronske kiseline, bez ograničenja i na primer, to može biti NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH ili njihova kombinacija i poželjno, to može biti NaOH. Koncentracija ovog alkalnog vodenog rastvora može biti 0,1 do 0,5 N, ali nije ograničena na njih. Pored toga, koncentracija hijaluronske kiseline ili njene soli je težinski udeo hijaluronske kiseline ili njene soli u ukupnoj težini smese hijaluronske kiseline ili njene soli i alkalnog vodenog rastvora i ona može biti 10 do 25 težinskih %, a koncentracija sredstva za unakrsno vezivanje je 1 do 10 mol% na osnovu jedinice dodate hijaluronske kiseline ili njene soli 1 mola. Kad je korišćena koncentracija sredstva za unakrsno vezivanje iznad gornjeg opsega, dobija se filer suviše visoke elastičnosti, a kad je koncentracija manja od gornjeg opsega, elastičnost je suviše mala i zato nije moguće da ispolji odgovarajuću viskoelastičnost. Konkretno, korak (a) se može vršiti mešanjem i mućenjem hijaluronske kiseline ili njene soli, sredstva za unakrsno vezivanje i alkalnog vodenog rastvora da bi se pomešali homogeno. On se može vršiti na temperaturi tokom unakrsnog vezivanja koja je sobna temperatura ili viša, poželjno u temperaturnom opsegu od 25 do 40 °C, tokom 15 do 22 sata.

[0043] Proces sečenja može koristiti razne poznate procese sečenja hidrogelova hijaluronske kiseline. U jednom primeru, umrežen gel dobijen posle reakcije je u obliku kolača i može da bude podeljen u oblike polumeseca primenom sekača kao što je sekač slame i slično i, na primer, može biti podeljen na šest delova. Zatim, proces sečenja se može vršiti prolaženjem kroz (poželjno 2 puta ili više) gel podeljen kao gore, upotrebom grubog sekača koji ima sečiva u konstantnim intervalima.

[0044] Korak (c) je korak dobijanja puferskog rastvora koji se koristi za pranje i bubrenje umreženih hidrogelova hijaluronske kiseline isečenih u koraku (b) a puferski rastvor se može dobijati poznatim metodima dobijanja puferskog rastvora. Pored toga, puferski rastvor može još dodatno da sadrži anestetik. U jednom specifičnom izvođenju predmetnog pronalaska, puferski rastvor je dobijen rastvaranjem natrijum monohidrogen fosfat hidrata, natrijum dihidrogen fosfat hidrata, natrijum hlorida i lidokain hidrohlorida u puferskom rezervoaru napunjenom vodom za injekcije. Puferski rastvor se može koristiti bez ograničenja dokle god se koristi za dobijanje hidrogelova hijaluronske kiseline. Primer ovog poželjnog puferskog rastvora može biti puferski rastvor koji sadrži jednu ili više vrsta izabranih iz grupe koju čine limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina), bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina), tris (tris(hidroksimetil)amino metan), tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin), HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina), TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina) i PIPES (piperazin-N,N' -bis(2-etansulfonska kiselina), ali nije ograničen na njih.

[0045] Korak (d) je korak pranja i bubrenja umreženih hidrogelova hijaluronske kiseline isečenih u koraku (b) puferskim rastvorom dobijenim u koraku (c) i ovaj korak (d) se može ponoviti još jedanput ili dvaput. Kad se završi pranje i bubrenje, rastvor za pranje se može ukloniti.

[0046] Korak (e) je korak mlevenja opranih i nabubrenih hidrogelova i ovo mlevenje se može vršiti različitim metodima mlevenja, ali je poželjno da to bude mlevenje sa ekstruzijom.

[0047] Kao dodatan aspekt, nakon koraka (e), dobijeni hidrogel se može podvrgnuti postupku kao što je sterilizovanje i/ili degaziranje i slično i njime može biti napunjen, zaptiven i sterilisan pogodan kontejner, na primer, špric.

POVOLJNI EFEKTI

[0048] Filer prema predmetnom pronalasku ne samo što ima malu mogućnost da se pomeri sa mesta ubrizgavanja i može dugo održati oblik, zbog toga što ispoljava veliku sposobnost liftinga, nego može i minimizirati probleme koji mogu nastati kad se filer ubrizga, na primer, teškoću tokom intervencije doktora zbog velike sile ubrizgavanja ili bola pacijenata, ispoljavanjem male sile ubrizgavanja, čime se razlikuju od konvencionalnih filera koji imaju veliku sposobnost liftinga, i stoga može biti koristan kao filer za obnavljanje mekih tkiva kao što su obrazi, usne, grudi, kukovi i slično, ili za povećanje volumena, protiv bora, smanjenjem finih bora i dubokih bora kože, ili za korekciju kontura.

DETALJAN OPIS REŠENJA

[0049] U nastavku, predmetni pronalazak će biti opisan detaljnije kroz primere. Međutim, ovi primeri su namenjeni da ilustruju predmetni pronalazak, te opseg predmetnog pronalaska nije ograničen ovim primerima.

Primer 1: Dobijanje hijaluronskog filera prema predmetnom pronalasku

[0050] Za dobijanje hijaluronskog filera prema predmetnom pronalasku, sproveden je sledeći postupak.

[0051] Natrijum hijaluronska kiselina, natrijum hidroksid i BDDE (1,4-butandiol diglicidil etar), molekulske težine od 2,5 MDa do 3,5 MDa, su odmereni. Koncentracija natrijum hijaluronske kiseline tokom reakcije je bila 15 težinskih %, a mol% BDDE je bio 4 mol% na osnovu dodate jedinice natrijum hijaluronske kiseline (naime, N-acetil -D-glukozamin i D-glukuronska kiselina) 1 mola. Odvojeno, dobijen je i profiltriran vodeni rastvor natrijum hidroksida u koncentraciji od 0,25N. Odmerena natrijum hijaluronska kiselina, 0,25N vodeni rastvor natrijum hidroksida i BDDE (1,4-butandiol diglicidil etar) su dodati u kontejner sa mešalicom i homogeno su mešani a ovaj kontejner sa mešalicom je stavljen u vodeno kupatilo na konstantnoj temperaturi i reakcija unakrsnog vezivanja je obavljena na temperaturi od 30°C preko noći. Zatim, umreženi hidrogelovi hijaluronske kiseline u kojima je reakcija obavljena su prethodno samleveni. S druge strane, puferski rastvor je dobijen rastvaranjem soli i anestetika u puferskom rezervoaru napunjenom vodom za injekcije u koncentracijama natrijum monohidrogen fosfat hidrata (12 hidrata) 1,26 g/L, natrijum dihidrogen fosfat hidrata (monohidrata) 0,46 g/L, natrijum hlorida 7 g/L i lidokain hidrohlorida 3 g/L.

[0052] Deo puferskog rastvora je uzet za primaran puferski rastvor i prebačen je u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a prethodno isečen gel hijaluronske kiseline, dobijen ranije, je prebačen u rezervoar za pranje napunjen primarnim puferskim rastvorom, a zatim je mešan da bi se početno oprao i nabubreo gel hijaluronske kiseline, a zatim, kad je bubrenje završeno, rastvor za pranje je uklonjen. Zatim, sekundaran puferski rastvor je prebačen u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a zatim je mešan da bi se sekundarno oprao i nabubrio gel hijaluronske kiseline. Kad je pranje i bubrenje završeno, rastvor za pranje je uklonjen. Zatim, 40L tercijarnog puferskog rastvora je prebačeno u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a zatim je mešano da bi se treći put oprao i nabubrio gel hijaluronske kiseline. Rastvor za pranje je uklonjen čim je pranje i bubrenje završeno.

[0053] Posle obavljanja tercijarnog pranja i bubrenja, provereno je da li je pH rastvora za pranje u neutralnom opsegu i posle melevenja gela hijaluronske kiseline u kom je završeno pranje i bubrenje, on je prebačen u rezervoar za ekstruziju i izmeren i da bi se postigla željena težina gela, puferski rastvor je dodat da popravi primarni sadržaj. Kad je urađena je korekcija primarnog sadržaja, gel hijaluronske kiseline je ekstrudovan i samleven u rezervoaru za ekstruziju. Zatim je samleveni gel hijaluronske kiseline prebačen u sterilan rezervoar i homogenizovan, a zatim je sadržaj izmeren i puferski rastvor je dodat da bi se sprovela sekundarna korekcija sadržaja. Gel hijaluronske kiseline u kome je završena korekcija sadržaja, je tretiran zagrevanjem na temperaturi od 121°C ili višoj, 1 minut ili više i pre punjenja, gel hijaluronske kiseline je dekomprimovan uz mešanje da bi se sprovela desaturacija. Zatim je gel hijaluronske kiseline u fiksiranoj količini punjenja vakumiran/sipan u svaki špric i istovremeno je zatvoren gumenim zapušačem. Napunjeni špricevi su sterilisani parom u konačnom sterilizatoru na temperaturi od 121°C ili višoj, 8 ili više minuta.

Primer 2: Dobijanje hijaluronskog filera prema predmetnom pronalasku

[0054] Za dobijanje hijaluronskog filera prema predmetnom pronalasku, sproveden je sledeći postupak.

[0055] Natrijum hijaluronska kiselina, natrijum hidroksid i BDDE (1,4-butandiol diglicidil etar), molekulske težine od 2,5 MDa do 3,5 MDa, su odmereni. Koncentracija natrijum

1

hijaluronske kiseline tokom reakcije je bila 16 težinskih %, a mol% BDDE je bio 4 mol% na osnovu dodate jedinice natrijum hijaluronske kiseline (naime, N-acetil -D-glukozamin i D-glukuronska kiselina) 1 mola. Odvojeno, dobijen je i profiltriran vodeni rastvor natrijum hidroksida u koncentraciji od 0,25N. Odmerena natrijum hijaluronska kiselina, 0,25N vodeni rastvor natrijum hidroksida i BDDE (1,4-butandiol diglicidil etar) su dodati u kontejner sa mešalicom i homogeno su mešani i ovaj kontejner sa mešalicom je stavljen u voden kupatilo na konstantnoj temperaturi i reakcija unakrsnog vezivanja je obavljena na temperaturi od 30°C preko noći. Zatim su umreženi hidrogelovi hijaluronske kiseline u kojima je reakcija obavljena prethodno isečeni. S druge strane, puferski rastvor je dobijen rastvaranjem soli i anestetika u puferskom rezervoaru napunjenom vodom za injekcije u koncentracijama natrijum monohidrogen fosfat hidrata (12 hidrata) 1,26 g/L, natrijum dihidrogen fosfat hidrata (monohidrata) 0,46 g/L, natrijum hlorida 7 g/L i lidokain hidrohlorida 3 g/L.

[0056] Deo puferskog rastvora je smatran za primaran puferski rastvor i prebačen je u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a prethodno isečen gel hijaluronske kiseline, dobijen ranije, je prebačen u rezervoar za pranje napunjen primarnim puferskim rastvorom, a zatim je mešan da bi se početno oprao i nabubreo gel hijaluronske kiseline, a zatim, kad je bubrenje završeno, za pranje je uklonjen. Zatim je sekundaran puferski rastvor prebačen u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a zatim je mešan da bi se sekundarno oprao i nabubrio gel hijaluronske kiseline. Kad je pranje i bubrenje završeno, rastvor za pranje je uklonjen. Zatim je tercijarni puferski rastvor prebačen u rezervoar za pranje kroz 0,22 µm-ski filter, a zatim je mešan da bi se treći put oprao i nabubrio gel hijaluronske kiseline. Rastvor za pranje je uklonjen čim je pranje i bubrenje završeno.

[0057] Posle obavljanja tercijarnog pranja i bubrenja, provereno je da li je pH rastvora za pranje u neutralnom opsegu i posle sečenja gela hijaluronske kiseline u kom je završeno pranje i bubrenje, on je prebačen u rezervoar za ekstruziju i izmeren i da bi se postigla željena težina gela, puferski rastvor je dodat da popravi primarni sadržaj. Kad je urađena je korekcija primarnog sadržaja, gel hijaluronske kiseline je ekstrudovan i samleven u rezervoaru za ekstruziju. Zatim je samleveni gel hijaluronske kiseline prebačen u sterilan rezervoar i homogenizovan, a zatim je sadržaj izmeren i dodat je puferski rastvor da bi se sprovela sekundarna korekcija sadržaja. Gel hijaluronske kiseline u kome je završena korekcija sadržaja, je tretiran zagrevanjem na temperaturi od 121°C ili višoj, 1 minut ili više i pre punjenja, gel hijaluronske kiseline je dekomprimovan uz mešanje da bi se sprovelo degaziranje. Zatim je gel hijaluronske kiseline u fiksiranoj količini punjenja sipan u svaki špric i istovremeno je zatvoren gumenim zapušačem. Napunjeni špricevi su sterilisani parom u konačnom sterilizatoru na temperaturi od 121°C ili višoj, 10 ili više minuta.

Eksperimentalni primer 1: Ispitivanje osobina viskoelastičnosti hijaluronskog filera dobijenog u predmetnom pronalasku

[0058] Za ispitivanje reoloških osobina dobijenih Primera 1 i 2, sprovedena je analiza pomoću reometra. Za poređenje sa filerom iz predmetnog pronalaska, svojstva viskoelastičnosti komercijalno dostupnih filerskih preparata su takođe analizirani i upoređeni. Komercijalno dostupni filerski preparati kao komparativni primeri i uslovi analize su sledeći.

<Komparativni primeri>

[0059]

- Komparativan primer 1: Belotero intenzivan lidokain

- Komparativan primer 2: Teosyal PureSense ultradubok lidokain

- Komparativan primer 3: Teosyal PureSense maksimalan lidokain

- Komparativan primer 4: Stylage L lidokain

- Komparativan primer 5: Stylage XL lidokain

- Komparativan primer 6: Juvederm Volift sa lidokainom

- Komparativan primer 7: Juvederm Voluma sa lidokainom.

<Uslovi analize >

Uslovi analize oscilatornog i rotacionog reometra

[0060] U slučaju elastičnog modula skladištenja (G') i testa kompleksne viskoznosti (η*)

(1) Oprema za testiranje: reometar (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Frekvenca: 1 Hz

(3) Temperatura: 25 °C

(4) Naprezanje: 4 %

(5) Merna geometrija: 25 mm ploča/ ploča

(9) Razmak merenja: 1,0 mm

[0061] U slučaju otpornosti prilikom kompresije (sila kompresije)

(1) Oprema za testiranje: reometar (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Razmak: početna pozicija: 2,5 mm, završna pozicija: 0,9 mm

(3) Brzina: 0,8 mm/min

(4) Temperatura: 25 °C

(5) Merna geometrija: 25 mm ploča/ploča

(9) Pozicija razmaka merenja normalne sile: 1,5 mm

[0062] U slučaju merenja sile ubrizgavanja

(1) Oprema za testiranje: Tester zatezanja (Stand: Mecmesin., MultiTest 2,5-xt, Load cell: ILC 100N)

(2) Brzina: 10 mm/min

(3) Pomeranje: 0-17 mm

(4) Temperatura: 25 ° C

(5) Špric: 1mL dug OVS špric (Schott Ltd.)

(6) Igla: 29G, 1/2", tanak zid (Terumo Ltd.)

[0063] U uslovima analize, vrednosti rezultata elastičnog modula skladištenja (G'), kompleksne viskoznosti (η*), sile kompresije, sile ubrizgavanja, izračunata sposobnost liftinga (= elastični modul skladištenja * sila kompresije) i izračunata brojna vrednost sposobnosti liftinga po sili ubrizgavanja (sposobnost liftinga/sila ubrizgavanja) su prikazani u Tabeli 1.

[0064] Kao što se može videti u Tabeli 1, može se potvrditi da filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema predmetnom pronalasku pokazuje veću sposobnost liftinga od drugih komercijalno dostupnih filera. U slučaju komparativnih primera 2 i 3 među komparativnim primerima, može se primetiti da oni pokazuju malo veću sposobnost liftinga, ali je utvrđeno da su problemi tokom rada takvi da se ne može konstantno ubrizgavati tokom rada ili to zahteva veliku snagu zbog relativno velike sile ubrizgavanja i slično koja je relativno veća u odnosu na predmetni pronalazak. U skladu s tim, može se potvrditi da primeri 1 i 2 prema predmetnom pronalasku, koji imaju i superiorno visok odnos sposobnosti liftinga i sile ubrizgavanja koji je parametar koji pokazuje fizičke osobine, može da pokaže najbolje radne efekte.

Eksperimentalni primer 2: Analiza veličine čestica hidrogelova hijaluronske kiseline prema predmetnom pronalasku

[0065] Da bi se potvrdila veličina čestica hidrogelova hijaluronske kiseline iz primera 1 i 2 i komparativnih primera 1 do 7 i njihova raspodela, sproveden je sledeći test. Odgovarajući rezultat ovog testa je prikazan u Tabeli 2.

<Uslovi analize >

[0066] Uslovi analize analizatora veličine čestica laserskom difrakcijom

(1) Oprema za testiranje: analizator veličine čestica laserskom difrakcijom (Malvern Ltd., Mastersizer 3000)

(2) Disperziono sredstvo: 0,9% rastvor NaCl

(3) Mešalica obr/min: 1000

(4) Zatamnjenje lasera: 5-25 %

[0067] Kao što se može videti u Tabeli 2, može se potvrditi da hijaluronski filer prema predmetnom pronalasku ima prečnik čestica (Dv50) od 300 do 400 µm, dok komparativni primeri 1 i 3 i komparativni primeri 6 i 7 imaju relativno veći prečnik čestica.

Eksperimentalan primer 3: Analiza stepena modifikacije hidrogelova hijaluronske kiseline prema predmetnom pronalasku

[0068] Da bi se potvrdio stepen modifikacije hidrogelova hijaluronske kiseline iz primera 1 i 2 i komparativnih primera 1 do 6, sproveden je test pod sledećim uslovima. Rezultat ovog testa je prikazan u Tabeli 3.

< Uslovi analize>

[0069] Uslovi analize nuklearne magnetne rezonance

(1) Oprema za test: FT-NMR System (Jeol Ltd., ECA500/ECZ400S),

(2) Puls: 30 °

(3) Skeniranja: 512

(4) Vreme relaksacije (kašnjenje): 5 s

(5) Temperatura: 25 ° C

1

3]

elaa [

[0070] Kao što se može primetiti u Tabeli 3, može se videti da hijaluronski fileri iz primera 1 i 2 prema predmetnom pronalasku ispoljavaju nizak stepen modifikacije uprkos tome što imaju izvrsne fizičke osobine, kao što je ranije potvrđeno, a to znači da su vrlo biokompatibilni kao fileri koji pokazuju izvrsne fizičke osobine što se može obezbediti čak i kad se koristi mala količina sredstva za unakrsno vezivanje tokom pravljenja filera.

1

Claims (12)

PATENTNI ZAHTEVI

1. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline, koji sadrži hijaluronsku kiselinu ili njenu so, i ispoljava sposobnost liftinga od 12000 do 44000 Pa*gf merenu reometrom i silu ubrizgavanja od 15 do 25 N kad se meri testerom zatezanja, u kom je hijaluronska kiselina ili njena so umrežena,

gde

filer ima osobine i monofaznih i bifaznih filera sa hijaluronskom kiselinom, stepen modifikacije (MOD) hijaluronske kiseline kao što je predstavljen sledećom jednačinom 1 je u opsegu od 0,01 do 0,07 (1 to 7%):

[Jednačina 1 ]

Stepen modifikovanja = ukupan broj molova sredstva za unakrsno vezivanje / ukupan broj molova N-acetil-D-glukozamina

i

odnos unakrsnog vezivanja (CrR) kao što je predstavljen sledećom jednačinom 2 je u opsegu od 0,1 do 0,2:

[Jednačina 2 ]

Odnos unakrsnog vezivanja = broj molova umreženog sredstva za unakrsno vezivanje / ukupan broj molova sredstva za unakrsno vezivanje

2. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, gde je molekulska težina umrežene hijaluronske kiseline 2.500.000 Da ili veća.

3. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, gde je hijaluronska kiselina umrežena sredstvom za unakrsno vezivanje izabranim iz grupe koju čine butandiol diglicidil etar (1,4-butandiol diglicidil etar: BDDE), etilen glikol diglicidil etar (EGDGE), heksandiol diglicidil etar (1,6-heksandiol diglicidil etar), propilen glikol diglicidil etar, polipropilen glikol diglicidil etar, politetrametilen glikol diglicidil etar, neopentil glikol diglicidil etar, poliglicerol poliglicidil etar, digliicerol poliglicidil etar, glicerol poliglicidil etar, trimetilpropan poliglicidil etar, bisepoksipropoksi etilen (1,2-(bis(2,3-epoksipropoksi)etilen), pentaeritritol poliglicidil etar i sorbitol poliglicidil etar.

4. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, koji još sadrži anestetik, poželjno lidokain ili njegovu so.

5. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, gde je filer za ubrizgavanje u kožu, uvećanje mekog tkiva, protiv bora, obnavljanje ili povećanje zapremine mekog tkiva ili za korekciju kontura.

6. Filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, koji sadrži sredstvo za unakrsno vezivanje u koncentraciji od 1 do 10 mol%, poželjno 1 do 5 mol%, na bazi 1 mola N-acetil-D-glukozamina u hijaluronskoj kiselini ili njenoj soli.

7. Metod za dobijanje filera sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 6, koji obuhvata sledeće korake:

(a) dobijanje hidrogela umrežene hijaluronske kiseline dodavanjem hijaluronske kiseline ili njene soli i sredstva za unakrsno vezivanje, poželjno 1,4-butanediol diglicidil etra, u bazni vodeni rastvor, poželjno vodeni rastvor NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH ili njihove kombinacije i mešanjem;

(b) sečenje hidrogelova hijaluronske kiseline dobijenih u koraku (a);

(c) dobijanje puferisanog rastvora;

(d) pranje i bubrenje hidrogelova hijaluronske kiseline isečenih u koraku (b) korišćenjem puferskog rastvora dobijenog u koraku (c);

(e) mlevenje opranih i nabubrelih hidrogelova hijaluronske kiseline u koraku (d) i (f) punjenje špriceva hidrogelovima dobijenim u koraku (e), a zatim sterilisanje, gde je hijaluronska kiselina ili njena so umrežena,

gde filer ima osobine i monofaznih i bifaznih filera,

gde je odnos unakrsnog vezivanja filera hidrogela hijaluronske kiseline 0,1 do 0,2, koncentracija sredstva za unakrsno vezivanje u koraku (a) je 1 do 10 mol% na osnovu 1 mola dodate hijaluronske kiseline ili njene soli i

koncentracija hijaluronske kiseline ili njene soli je 10 do 25 težinskih % kao težinski odnos hijaluronske kiseline ili njene soli na osnovu ukupne težine smese hijaluronske kiseline ili njene soli i alkalnog vodenog rastvora.

8. Metod za dobijanje prema zahtevu 7, gde je koncentracija alkalnog vodenog rastvora 0,1N do 0,5N.

9. Metod za dobijanje prema zahtevu 7, gde je korak (a) izvođen u temperaturnom opsegu od 25 do 40 °C tokom 15 do 22 sata.

10. Metod za dobijanje prema zahtevu 7, gde puferski rastvor iz koraka (c) sadrži jedan ili više vrsta odabranih iz grupe koju čine limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina, bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina, tris(hidroksimetil)amino metan, tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin, HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina, TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina i PIPES (piperazin-N,N'-bis(2-etansulfonska kiselina) ili opciono još sadrži anestetik i izotonično sredstvo.

11. Prethodno napunjen špric u kojem je punjenje filer sa hidrogelom hijaluronske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 6.

12. Biomaterijal za uvećanje mekog tkiva koji sadrži hidrogel prema bilo kom od zahteva 1 do 6.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5