RS60085B1 - Efikasna sinteza konjugata etilendicisteina i šećera za vizualizaciju i terapiju - Google Patents

Description

Opis

OSNOVA PRONALASKA

1. Oblast pronalaska

[0001] Predmetni pronalazak se uopšteno odonsi na oblast hemijske sinteze, vizualizacije, radioterapije, obeležavanja, hemoterapije, medicinske terapije, lečenja kardiovaskularne oblasti i lečenja kancera. Konkretnije, pronalazak se odnosi na nove metode sinteze konjugata za molekularnu vizualizaciju i terapiju.

2. Opis povezanog stanja tehnike

[0002] Kada su u pitanju sintetske preparacije molekularnih agenasa za obeležavanje metala, kada se takvi agensi pripremaju u vodenim (vlažnim) uslovima, prečišćavanje agenasa ponekad može da predstavlja problem. Prečišćavanje u vodenim uslovima može da se postigne upotrebom, na primer, ekskluzione hromatografije ili dijalize sa membranama određenih graničnih vrednosti molekulske težine; na primer, dijaliza je obično najefikasnija kada se odvajaju vrste molekulskih težina od 1000 g/mol ili više. Međutim, ova metoda prečišćavanja često izoluje ne samo željeni agens, već i bilo koju drugu vrstu koja može da prođe kroz membranu. Uvođenje nečistoća u agense za vizualizaciju može da predstavlja problem pri budućim primenama agensa za vizualizaciju, posebno u pogledu vizualizacije i/ili terapijske primene. Na primer, ako se smatra da je agens za vizualizaciju koji sadrži radionuklid ("pravi" agens za vizualizaciju) čist, ali zapravo sadrži nečistoće koje takođe sadrže radionuklid, pravilno merenje ili detekcija „pravog“ agensa za vizualizaciju može da bude prikriveno ili pogrešno predstavljeno zbog prisustva nečistoća.

[0003] Postupci za sintezu organskih jedinjenja u organskim rastvaračima i upotreba zaštitnih grupa obično donose poboljšanja u prečišćavanju jedinjenja u odnosu na vodena prečišćavanja. Ugradnja zaštitnih grupa omogućava zaštitu različitih funkcionalnih grupa intermedijara tokom sinteze i olakšava prečišćavanje tih intermedijara. Različiti načini prečišćavanja pomoću organskih rastvarača omogućavaju odvajanje i izolaciju željenih jedinjenja, kao što su agensi za vizualizaciju, sa vrlo malo nečistoća. Dalje, vrste sa molekulskim težinama ispod 1000 g/mol često mogu lako da se prečiste upotrebom postupaka za prečišćavanje iz oblasti organske hemije.

S obzirom na prednosti koje nude organska sinteza i prečišćavanje nad vodenim prečišćavanjem, verovatno je da će se postupcima organskog sintetizovanja i prečišćavanja agenasa za vizualizaciju dobiti agensi veće čistoće od onih koji se dobijaju vodenim prečišćavanjem. Međutim, dodavanje i uklanjanje zaštitnih grupa može da dovede do dodatnih troškova i da smanji efikasnost i čistoću krajnjih proizvoda.

[0004] Stoga postoji potreba za pripremom ovih i drugih agenasa pomoću tehnika sinteze kako bi se omogućilo dobijanje agenasaa veće čistoće na efikasniji način.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0005] Aspekti pronalaska obezbeđuju nove postupke za pripremanje konjugata tiazolidina i šećera i konjugata etilendicisteina i šećera. Za pripremanje konjugata tiazolidina i šećera, postupak može da obuhvata mešanje amino šećera sa tiazolidin-karboksilnom kiselinom, čime nastaje konjugat tiazolidina i šećera. Za dobijanje konjugata etilendicisteina i šećera, postupak može dalje da obuhvata redukciju konjugata tiazolidina i šećera redukcionim sredstvom koje sadrži alkalni metal i izvor elektrona.

[0006] Na primer, amino šećer je amino heksoza ili amino pentoza. Neograničavajući primeri amino heksoze uključuju amino derivat glukoze, galaktoze, manoze, idoze, taloze, altroze, aloze, guloze ili fruktoze. Poseban primer amino heksoze je glukozamin. Neograničavajući primeri amino pentoze uključuju amino derivat riboze, ksiloze, arabinoze ili liksoze. Amino šećer je šećer koji ima amino grupu koja se nalazi na položaju 2', 3', 4' ili 5' šećera. U određenom aspektu, amino šećer ima amino grupu koja je postavljena na 2' položaju u šećernom prstenu.

[0007] Postupak mešanja može se izvesti u organskom rastvaraču, kao što je dimetilformamid, dimetilsulfoksid, dioksan, metanol, etanol, heksan, metilen hlorid, acetonitril, tetrahidrofuran, ili njihova smeša. U drugim aspektima, postupak mešanja može se izvesti u vodenom rastvaraču.

[0008] Jedna, dve, tri, četiri, pet, ili sve hidroksilne grupe amino šećera mogu da budu zaštićene, na primer, acetil ili benzoil grupom, ili nezaštićene. U posebnom primeru, amino šećer je glukozamin zaštićen acetilnim grupama, kao što je hidrohlorid 1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-amino-α-D-glukopiranoze. Zaštitne grupe se obično koriste u organskoj sintezi, a ne u vodenoj sintezi.

[0009] Postupci ovog pronalaska mogu dalje da obuhvataju najmanje jedan korak prečišćavanja. Bilo koje jedinjenje ovog pronalaska može se prečistiti bilo kojim postupkom koji je poznat stručnjacima. Stručnjaci u ovoj oblasti poznaju takve postupke i kada se ti postupci mogu koristiti. Na primer, u višestepenoj sintezi koja ima za cilj da se dođe do određenog jedinjenja, korak prečišćavanja može da se izvede nakon svakog sintetskog koraka, nakon svakih nekoliko koraka, na različitim tačkama tokom sinteze, i/ili na samom kraju sinteze. U nekim postupcima, jedan ili više koraka prečišćavanja obuhvata tehniku odabranu iz grupe koja se sastoji od hromatografije na koloni silikagela, HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) i LC (tečna hromatografija). U nekim primerima izvođenja, postupci za prečišćavanje specifično isključuju ekskluzionu hromatografiju i/ili dijalizu. Postupci za prečišćavanje su detaljnije opisani u nastavku teksta. U određenom aspektu, postupak može da obuhvata prečišćavanje konjugata tiazolidina i šećera pre redukcije.

[0010] Za pripremanje konjugata etilendicisteina i šećera, konjugat tiazolidina i šećera može da se redukuje alkalnim metalom i izvorom elektrona. Alkalni metal može da bude litijum, natrijum ili kalijum. Izvor elektrona može da bude tečni amonijak, metilamin, etilamin ili etilendiamin. U određenom aspektu, redukcija može da bude Birch-ova redukcija.

[0011] Da bi se stvorio konjugat etilendicisteina (EC) i šećera obeležen jonom metala, postupak može dalje da sadrži heliranje metalnog jona sa konjugatom etilendicisteina i šećera. Na primer, metalni jon je izabran iz grupe jona metala koja se sastoje od jona tehnecijuma, jona kalaja, jona bakra, jona indijuma, jona talijuma, jona galijuma, jona arsena, jona renijuma, jona holmijuma, jona itrijuma, jona samarijuma, jona selena, jona stroncijuma, jona gadolinijuma, jona bizmuta, jona gvožđa, jona mangana, jona lutecijuma, jona kobalta, jona platine, jona kalcijuma i jona rodijuma. U nekim aspektima, metalni jon je radionuklid, i bilo koji radionuklid poznat stručnjacima u ovoj oblasti. Neograničavajući primeri radionuklida uključuju<99m>Tc,<117m>Sn,<177>Lu,<188>Re,<186>Re,<153>Sm,<166>Ho,<90>Y,<89>Sr,<67>Ga,<68>Ga,<111>In,<183>Gd,<59>Fe,<225>Ac,<212>Bi,<211>At,<45>Ti,<60>Cu,<61>Cu,<67>Cu,<64>Cu i<62>Cu. U drugim aspektima, metalni jon je neradioaktivni metal kao što je<187>Re.

[0012] Sledeći primeri izvođenja ovog pronalaska odnose se na postupke vizualizacije određene oblasti ili kompozicije koja sadrži konjugat etilendicisteina (EC) i šećera obeležen jonom metala i neomicin za upotrebu u dijagnostikovanju bolesti ili lečenju bolesti u organizmu subjekta. Postupak može da obuhvata dobijanje konjugata etilendicisteina (EC) i šećera obeleženog jonom metala, pripremljenog kao što je ovde opisano, i davanje subjektu farmaceutske ili dijagnostički efikasne količine konjugata etilendicisteina (EC) i šećera obeleženog jonom metala, pri čemu se oblast vizualizuje, bolest se dijagnostikuje ili se bolest leči.

[0013] Oblast koja treba da se vizualizuje može da bude tumor. Kompozicija može da se koristi za lečenje subjekta obolelog od kancera. U određenim aspektima, kancer je kancer dojke, kancer pluća, kancer prostate, kancer jajnika, kancer mozga, kancer jetre, kancer grlića materice, kancer debelog creva, kancer bubrega, kancer kože, kancer glave i vrata, kancer kostiju, kancer jednjaka, kancer bešike, kancer materice, limfatični kancer, kancer želuca, kaner pankreasa, kancer testisa, limfom ili leukemija.

[0014] U sledećim aspektima, postupak može dodatno da se definiše kao postupak za vizualizaciju oblasti u telu subjekta koji obuhvata detekciju signala iz konjugata etilendicisteina (EC) i šećera obeleženog jonom metala koji je lokalizovan u toj oblasti. Signal može da se detektuje tehnikom odabranom iz grupe koja se sastoji od PET, PET/CT, CT, SPECT, SPECT/CT, MRI, PET/MRI, SPECT/MRI, optičke vizualizacije i ultrazvuka.

[0015] Oblast koja treba da se vizualizuje može da bude tumor ili srce. Postupak dalje može da se definiše kao postupak za vizualizaciju subjekta sa kardiovaskularnom bolešću. Kompozicija može da se koristi za dijagnostikovanje ili lečenje subjekta sa kardiovaskularnom bolešću. Kardiovaskularna bolest može da bude infarkt miokarda, kongestivno zatajenje srca, kardiomiopatija, valvularna bolest srca, aritmija, urođena srčana bolest, angina pektoris, nekardijalna kongestija krvotoka, sistolna srčana insuficijencija, srčana insuficijencija sa normalnom sistolnkom funkcijom ili desnostrana srčana insuficijencija.

[0016] U sledećem primeru izvođenja obezbeđena je kompozicija ili komplet konjugata koji sadrži konjugat etilendicisteina i šećera u skladu sa primerima izvođenja i neomicin. U nekim aspektima, kompozicija sadrži oko 0.1 mg do oko 1.0 mg neomicina po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera (npr. oko 0.2-0.8, 0.3-0.7, 0.4-0.6 ili oko 0.5 mg na 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera). U sledećim aspektima, kompozicija može dalje da sadrži antioksidante, stabilizujuće agense, konzervanse ili soli. Na primer, kompozicija može dodatno da sadrži askorbinsku kiselinu, cistein i/ili kalaj (II) hlorid. U nekim specifičnim aspektima, kompozicija sadrži (a) oko 0.5 do 2.0 mg askorbinske kiseline po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera; (b) oko 0.1 do 1.0 mg cisteina na 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera; i/ili (c) oko 0.05 do 0.5 mg kalaj (II) hlorida po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera. U nekim aspektima, kompozicija je vodeni rastvor ili rastvor koji je zamrznut i/ili liofilizovan.

[0017] U povezanom primeru izvođenja obezbeđen je postupak za pravljenje kompozicije konjugata koji obuhvata (a) rastvaranje konjugata etilendicisteina i šećera i neomicina u vodenom rastvoru (npr., rastvor kalaj (II) hlorida); i (b) liofilizaciju ili zamrzavanje rastvora, čime se dobija kompozicija konjugata etilendicisteina i šećera. Slično, obezbeđen je postupak za pravljenje metalnog helata konjugata etilendicisteina i šećera koji obuhvata mešanje rastvora koji sadrži konjugat etilendicisteina i šećera i neomicin sa metalnim jonom (npr., radioaktivni jon metala) pod odgovarajućim uslovima da se dobije helat.

[0018] U još jednom sledećem primeru izvođenja obezbeđen je postupak vizualizacije oblasti ili kompozicije koja sadrži konjugat etilenedicisteina (EC) i šećera obeležen metalnim jonom i neomicin za upotrebu u dijagnostikovanju bolesti, ili lečenje bolesti u organizmu subjekta, koji obuhvata primenu konjugata etilenedicisteina (EC) i šećera obeleženog metalnim jonom kod pacijenta u kombinaciji sa neomicinom. Na primer, postupak može da obuhvata (a) dobijanje kompozicije koja sadrži konjugat etilenedicisteina (EC) i šećera obeležen metalnim jonom i neomicin; i (b) davanje subjektu farmaceutski ili dijagnostički efikasne količine kompozicije, pri čemu se oblast vizualizuje, bolest se dijagnostikuje, ili se bolest leči.

[0019] U još jednom sledećem primeru izvođenja obezbeđena je kompozicija koja sadrži konjugat etilenidicisteina i šećera obeležen metalnim jonom i neomicin (npr. od oko 0,1 mg do oko 1,0 mg neomicina po 1 mg kontigata etilendicisteina i šećera). Na primer, u nekim aspektima kompozicija je za upotrebu u vizualizaciji oblasti, dijagnostikovanju bolesti ili lečenju bolesti kod subjekta.

[0020] Primeri izvođenja koji se razmatraju u kontekstu postupaka i/ili kompozicija pronalaska mogu se koristiti u odnosu na bilo koji drugi postupak ili kompoziciju koja je opisana u ovom dokumentu. Prema tome, primer izvođenja koji se odnosi na jedan postupak ili kompoziciju može se primeniti i na druge postupke i kompozicije ovog pronalaska.

[0021] Kako se koristi u specifikaciji, pojam u jednini može da označava jedninu ili množinu. Kako se koristi ovde u patentnom zahtevu/zahtevima, kada se koriste zajedno sa rečju "koji sadrži", reči u jednini mogu da označavaju jedno ili više od jednog.

[0022] Upotreba termina "ili" u patentnim zahtevima koristi se da označi "i/ili", osim ako je izričito naznačeno da se odnosi samo na alternative, ili su alternative međusobno isključive, mada otkriće podržava definiciju koja se odnosi na jedine alternative i "i/ili". Kako se ovde koristi, „još jedan“ može značiti najmanje drugi ili više njih.

[0023] U ovoj prijavi, termin "oko" se koristi da naznači da vrednost uključuje inherentnu varijaciju greške za određeni uređaj, metodu koja se koristi za određivanje vrednosti, ili varijaciju koja postoji među ispitanicima.

[0024] Ostali ciljevi, karakteristike i prednosti ovog pronalaska postaće jasni iz sledećeg detaljnog opisa. Treba, međutim, razumeti da su detaljan opis i konkretni primeri, iako ukazuju na poželjne primere izvođenja ovog pronalaska, dati samo kao ilustracija.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0025] Sledeće slike su deo ove specifikacije i uključene su kako bi se dodatno prikazali određeni aspekti pronalaska. Pronalazak se može bolje razumeti pozivanjem na jedan ili više ovih crteža u kombinaciji sa detaljnim opisom konkretnih primera izvođenja koji su ovde predstavljeni.

SL. 1. Efikasna sinteza ECG.

SL. 2. TLC analiza<68>Ga-ECG upotrebom fiziološkog rastvora kao eluanta. Radio-TLC analiza čistoće<68>Ga-ECG bila je >96%.

SL. 3. HPLC analiza<68/69>Ga-ECG i ECG (mobilna faza: H2O/acetonitril, 9:1 zapr./zapr., protok: 0.5 ml/min, kolona: C18 - extend (Agilent), UV ABS 210 nm). HPLC analiza čistoće<68>Ga-ECG bila je >96%.

SL. 4. ITLC (gore a, u fiziološkom rastvoru) i HPLC (dole b, NaI detektor) analiza<99m>Tc-ECG (mobilna faza: H2O/acetonitril, 9:1 zapr./zapr., protok: 0.5 ml/min, kolona: C18 - extend (Agilent), UV ABS: 210 nm). Radio-TLC i HPLC analiza čistoće<99m>Tc-ECG bile su >96%.

SL. 5.<18>F-FDG i<68>Ga-ECG PET vizualizacija kod pacova koji nose mezoteliom (400 µCi/pacovu, iv, tokom 45 minuta). Za generisanje dinamičke slike korišćene su računarski određene konture područja od interesa (ROI) (impulsi po pikselu) za tumor i mišiće u odgovarajućem vremenskom intervalu. Dinamički grafik je konstruisan od 0 do 45 minuta.

SL. 6.<68>Ga-ECG PET vizualizacija kod pacova koji nose mezoteliom (400 µCi/pacovu, iv, donji deo tela) pre i posle tretmana od 45 minuta. Gore: bazalni nivo pri veličini tumora od 1.5 cm, dole: tretirano paklitakselom (20 mg/kg, iv, jedna doza na dan 7). T: tumor.

SL. 7. Planarna scintigrafija<99m>Tc-EC (levo) i<99m>Tc-ECG (300 µCi/pacovu, iv, primljeno 500 000 impulsa) (sredina i desno) kod pacova koji nose mezoteliom. Brojevi predstavljaju odnose gustine impulsa tumor/mišići na 1 čas (gornji panel) i 2 časa (donji panel). T: tumor.

SL. 8.<1>H NMR G-Ac-T

SL. 9.<13>C NMR T-G-(Ac)4

SL. 10. MS T-G-(Ac)4

SL. 11.<1>H NMR EC-G

SL. 12.<13>C NMR EC-G

SL. 13. Maseni spektar EC-G

SL. 14. HPLC EC-G

SL. 15.<99m>TcEC-G (ITLC, upotrebom fiziološkog rastvora kao eluanta)

SL. 16. Instant-tankoslojna hromatografska analiza<99m>Tc-EC-G upotrebom fiziološkog rastvora kao mobilne faze. Papir: Waterman br. 1; kat. br: 3030614. Levi panel predstavlja proizvod napravljen upotrebom ovde opisanog kompleta; desni panel je standard<99m>Tc-EC-G.

SL. 17. HPLC analiza<99m>Tc-EC-G izvedena upotrebom ovde opisanog kompleta H2O/MeCN (9:1) kao eluent pri protoku od 0.50 mL/min. Kolona: Extend C18; SN: USFK004129, Agilent).

SL. 18. HPLC analiza standarda<99m>Tc-EC-G upotrebom H2O/MeCN (9:1) kao eluenta pri protoku od 0.50 mL/min. Kolona: Extend C18; SN: USFK004129, Agilent).

SL. 19. Preuzimanje<99m>Tc-EC-G napravljenog pomoću kompleta i standara u tumorske ćelije mlečne žlezde pacova 13762. Leve kolone predstavljaju proizvod kompleta, a desne kolone su standardni proizvod.

DETALJAN OPIS POŽELJNIH PRIMERA IZVOĐENJA

[0026] Predmetni pronalazak se odnosi na nove sintetske postupke za pripremu konjugata tiazolidina i šećera kao prekursora za pripremanje konjugata etilendicisteina i šećera. Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje sintetske postupke za konjugat etilendicisteina i šećera. U nekim aspektima, ovi sintetski postupci mogu da umanje potrebu za dodavanjem zaštitnih grupa u etilendicistein (EC) i da povećaju efikasnost postupka i prečišćavanja konačnih proizvoda u poređenju sa drugim metodama opisanim u SAD patentnoj publikaciji br.20100055035.

[0027] U određenim aspektima, bar deo postupaka ovog pronalaska odvija se u organskom rastvaraču. Izbor rastvarača za postupke ovog pronalaska biće poznat stručnjaku u ovoj oblasti. Izbor rastvarača može da zavisi, na primer, od toga koji (jedan ili više) od njih će olakšati solubilizaciju svih reagenasa, ili, na primer, koji (jedan ili više) od njih će najbolje olakšati željenu reakciju (naročito ako je poznat mehanizam reakcije). Rastvarači mogu da obuhvataju, na primer, polarne rastvarače i/ili nepolarne rastvarače. Rastvarač može biti polarni aprotični rastvarač, poput dimetilsulfoksida. Izbori rastvarača uključuju, ali nisu ograničeni na, dimetilformamid, dimetilsulfoksid, dioksan, metanol, etanol, heksan, metilen hlorid, tetrahidrofuran i/ili acetonitril. U nekim primerima izvođenja, rastvarači uključuju etanol, dimetilformamid i/ili dioksan. Više od jednog rastvarača može da bude izabrano za bilo koju određenu reakciju ili postupak prečišćavanja. Voda može takođe da se umeša u bilo koji izabrani rastvarač; ovo može da se uradi da bi se, na primer, poboljšala rastvorljivost jednog ili više reaktanata. Takođe su dati postupci zasnovani na vlažnoj (vodenoj) hemiji.

[0028] Kao što je ovde opisano, neki aspekti ovog pronalaska uključuju upotrebu zaštitnih grupa radi zaštite amino šećera u njegovoj reakciji sa tiazolidinom ili njegovim derivatima. Međutim, aspekti ovog pronalaska mogu da izbegnu potrebu za dodavanjem zaštitnih grupa u etilendicistein (EC) kao u SAD patentnoj publikaciji br.20100055035.

[0029] Kada hemijska reakcija mora selektivno da se izvede na jednom reaktivnom mestu u multifunkcionalnom jedinjenju, druga reaktivna mesta moraju privremeno da budu blokirana. "Zaštitna grupa" ili "zaštićena nukleofilna grupa", kako se ovde koristi, definisana je kao grupa koja se koristi u svrhu ove privremene blokade. Tokom sinteze makromolekula ovog pronalaska, različite funkcionalne grupe moraju se zaštititi upotrebom zaštitnih grupa (ili zaštitnih agenasa) u različitim fazama sinteze. Postoje brojni postupci dobro poznati stručnjacima za postizanje takvog koraka. Za zaštitne agense, njihovu reaktivnost, ugradnju i upotrebu pogledajte npr. Greene and Wuts (1999). Funkcija zaštitne grupe je da štiti jednu ili više funkcionalnosti (npr. -NH2, -SH, -COOH) tokom sledećih reakcija koje se ne bi odvijale dobro, bilo zato što bi slobodna (drugim rečima, nezaštićena) funkcionalna grupa reagovala i bila funkcionalizovana na način koji nije u skladu sa potrebom da ona bude slobodna za naknadne reakcije, ili bi slobodna funkcionalna grupa interferirala sa reakcijom. Ista zaštitna grupa može da se koristi za zaštitu jedne ili više istih ili različitih funkcionalnih grupa. Takođe, različite zaštitne grupe mogu da se koriste za zaštitu iste vrste funkcionalne grupe unutar makromolekula ovog pronalaska u više koraka.

[0030] U pojedinim aspektima, hidroksilne grupe amino šećera kao polaznog materijala mogu biti zaštićene. Hidroksi (ili alkoholne) zaštitne grupe su dobro poznate stručnjacima. Pogledajte, na primer, Greene and Wuts (1999), poglavlje 2. Ove zaštitne grupe mogu da se ugrade putem zaštitnih agenasa koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Uklanjanje ovih grupa je takođe dobro poznato stručnjacima u ovoj oblasti.

[0031] Pogodna hidroksi zaštitna grupa može da bude izabrana iz grupe koja se sastoji od estara ili etara. Estri kao što su acetat, benzoil, terc-butilkarbonil i trifluoroacetil grupe mogu da se uklone kiselim ili baznim uslovima. Etri kao što su metoksi, etoksi i tri-benzilmetil mogu da se uklone jačim kiselim ili baznim uslovima. Poželjna zaštitna grupa je acetatni estar.

[0032] Predmetni pronalazak razmatra postupke za mešanje amino šećera sa tiazolidinkarboksilnom kiselinom. Uslovi pod kojima se odvija mešanje mogu da obuhvataju bilo koje uslove pogodne za formiranje peptidne veze između amino šećera i tiazolidin-karboksilne kiseline, kao što je prisustvo jednog ili više agenasa za kuplovanje ili katalizatora. Agensi za kuplovanje, kako se ovde koristi, su reagensi koji se koriste da olakšaju kuplovanje amino grupe i karboksilne grupe da bi se formirala peptidna veza. Takvi agensi su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i mogu da se upotrebe u određenim primerima izvođenja postupaka ovog pronalaska. Primeri agenasa za kuplovanje uključuju, ali nisu ograničeni na, sulfo-N-hidroksisukcinimid (sulfo-NHS), dimetilaminopiridin (DMAP), diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (DBU), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (EDAC) i dicikloheksilkarbodiimid (DCC).

Ostali karbodiimidi su takođe predviđeni kao agensi za kuplovanje. Agensi za kuplovanje su diskutovani, na primer, u Bodansky, 1993. i Grant, 1992. Ovi agensi za kuplovanje mogu da se koriste pojedinačno ili u kombinaciji jedni sa drugima, ili sa drugim agensima kako bi se olakšala konjugacija. Konjugovani proizvod se zatim može prečistiti, na primer, hromatografijom na koloni silika gela ili HPLC.

[0033] U nekim aspektima pronalaska, nije potrebna posebna reakcija uklanjanja zaštite. Reakcija redukcije može da ukloni zaštitne grupe tokom pretvaranja konjugata tiazolidina i šećera u konjugat etilendicisteina i šećera. Reakcija redukcije obuhvata upotrebu redukcionog agensa koji sadrži alkalni metal i izvor elektrona, npr. Luisovu bazu. Alkalni metal može da bude litijum, natrijum ili kalijum. Izvor elektrona može da bude Luisova baza, kao što je tečni amonijak, metilamin, etilamin ili etilendiamin. U određenom aspektu, redukcija može da bude Birch-ova redukcija. Na primer, redukciono sredstvo za Birch-ovu redukciju sadrži metal litijuma ili natrijuma i tečni amonijak. U alternativnim primerima izvođenja, redukciono sredstvo sadrži metal litijuma, metal natrijuma, metal kalijuma ili metal kalcijuma i metilamin ili etilamin. Reakciona smeša za Birch-ovu redukciju može da sadrži smešu rastvarača. Ova smeša rastvarača može da sadrži izopropil alkohol (IPA), t-butil alkohol, tetrahidrofuran (THF), amonijak ili njihove kombinacije. U zavisnosti od korišćenih reagensa, Birch-ova redukcija može da se odvija na temperaturi od oko -80 °C do oko 55 °C. Kada se tečni amonijak koristi kao reagens, redukcija može da se odvija na oko -80 °C do oko -35 °C. Kada se metilamin ili etilamin koriste kao reagens, redukcija može da se odvija na temperaturi od oko -10 °C do oko 10 °C. Reakciona smeša za za Birch-ovu redukciju održava se na gore navedenim temperaturama oko 10 minuta do oko 4 časa.

[0034] Kao što je gore pomenuto, stručnjaci u oblasti biće upoznati sa postupcima prečišćavanja jedinjenja ovog pronalaska. Kako se ovde koristi, "prečišćavanje" se odnosi na svako merljivo povećanje čistoće u odnosu na čistoću materijala pre prečišćavanja. Prečišćavanje svakog jedinjenja predmetnog pronalaska je uopšteno moguće, uključujući prečišćavanje intermedijara kao i prečišćavanje krajnjih proizvoda. Korak prečišćavanja nije uvek uključen u opšte metodologije koje su objašnjene u daljem tekstu, ali stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da jedinjenja mogu uopšteno da se prečišćavaju u bilo kom koraku. Primeri postupaka za prečišćavanje uključuju gel filtraciju, ekskluzionu hromatografiju (koja se takođe naziva gel filtraciona hromatografija, permeaciona gel hromatografija ili molekulska ekskluzija), dijalizu, destilaciju, rekristalizaciju, sublimaciju, derivatizaciju, elektroforezu, hromatografiju na koloni silika gela i tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC ), uključujući HPLC normalne faze i reverzno-faznu HPLC. U nekim primerima izvođenja, ekskluziona homatografija i/ili

1

dijaliza su specifično isključene kao oblici prečišćavanja jedinjenja ovog pronalaska. Prečišćavanje jedinjenja, na primer, putem hromatografije na koloni silica gela ili HPLC, donosi prednost dobijanja željenih jedinjenja u vrlo visokoj čistoći, često većoj nego kada su jedinjenja prečišćena drugim postupcima. Radiohemijska čistoća jedinjenja ovog pronalaska se takođe može odrediti. Postupci za određivanje radiohemijske čistoće dobro su poznati u stanju tehnike i uključuju hromatografske metode u kombinaciji sa metodama detekcije radioaktivnosti (npr. autoradiografskim analizama). Primeri poređenja čistoće jedinjenja koja su dobijena organskim i vlažnim metodologijama i prečišćena različitim postupcima dati su u daljem tekstu.

[0035] Postupci za određivanje čistoće jedinjenja dobro su poznati stručnjacima u ovoj oblasti i uključuju, u neograničavajućim primerima, autoradiografiju, masenu spektroskopiju, određivanje tačke topljenja, ultraljubičastu analizu, kalorimetrijsku analizu, (HPLC), tankoslojnu hromatografiju i analizu nuklearne magnetne rezonance (NMR) (uključujući, ali ne ograničavajući se na,<1>H i<13>C NMR). U nekim primerima izvođenja, kalorimetrijska metoda može da se koristi za titriranje čistoće intermedijara ili krajnjih proizvoda. U jednom primeru izvođenja, čistoća nepoznatog jedinjenja može da se odredi poređenjem sa jedinjenjem poznate čistoće: ovo poređenje može biti u obliku odnosa čija mera opisuje čistoću nepoznatog jedinjenja. Kompjuterski programi dostupan na različitim instrumentima (npr. spektrofotometri, HPLC, NMR) mogu pomoći stručnjaku u ovim određivanjima, kao i druga sredstva koja su poznata stručnjacima u ovoj oblasti.

[0036] Predmetni pronalazak dalje razmatra postupke za heliranje (koja se takođe naziva koordinacija) jednog ili više metalnih jona sa konjugatom etilendicisteina i šećera da bi se stvorio konjugat etilendicisteina (EC) i šećera obeležen metalnim jonom. Takvi koraci heliranja mogu da se izvedu u organskom rastvaraču. U drugim primerima izvođenja, heliranje se odvija u vodenom medijumu. U nekim primerima izvođenja, helatorski EC i šećer mogu svaki da doprinesu heliranju jona metala. U poželjnim primerima izvođenja, metalni jon je heliran samo sa helatorskim EC. Helirani metalni jon može biti vezan, na primer, jonskom vezom, kovalentnom vezom ili koordinatnom kovalentnom vezom (koja se takođe naziva dativna veza). Postupci za takvu koordinaciju su dobro poznati stručjacima u ovoj oblasti. U jednom primeru izvođenja, koordinacija može da se ostvari mešanjem jona metala u rastvor koji sadrži konjugat etilendicisteina i šećera. U drugom primeru izvođenja, koordinacija može da se ostvari mešanjem jona metala u rastvor koji sadrži konjugat EC i šećera.

[0037] U nekim neograničavajućim primerima, metalni jon može biti tehnecijum, indijum, renijum, galijum, bakar, holmijum, platina, gadolinijum, lutecijum, itrijum, kobalt, kalcijum, arsen ili bilo koji njihov izotop. Bilo koji metalni jon opisan u ovom dokumentu može biti heliran sa jedinjenjem ovog pronalaska.

[0038] Izvesni aspekti ovog pronalaska se odnose na kompozicije u kojima je terapijski fragment konjugovan sa helatorskim konjugatom ovog pronalaska, kao što je konjugat etilendicisteina i šećera. Kompozicija ovog pronalaska može u određenim primerima izvođenja da bude korisna u dvostrukoj vizualizaciji i terapiji. U određenim konkretnim primerima izvođenja, terapijski fragment je fragment koji je agens za koji se zna ili veruje da je koristan u lečenju ili prevenciji hiperproliferativne bolesti kod subjekta. Subjekt može biti životinja, poput sisara. U određenim konkretnim primerima izvođenja, subjekt je čovek.

[0039] U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, terapijski fragment je terapijski jon metala (npr. Re-188, Re-187, Re-186, Ho-166, Y-90, Sr-89 i Sm-153), i metal-helatni konjugat etilendicisteina i šećera je agens koje je terapijski agens (pre nego agens za vizualizaciju) koji može da se primeni u lečenju ili prevenciji hiperproliferativne bolesti.

[0040] Hiperproliferativna bolest je ovde definisana kao svaka bolest povezana sa nenormalnim rastom ćelija ili nenormalnim metaboličkim prometom ćelija. Na primer, hiperproliferativna bolest može da bude kancer. Izraz "kancer", kako se ovde koristi, definisan je kao nekontrolisan i progresivan rast ćelija u tkivu. Iskusan stručnjak je svestan da postoje i drugi sinonimi, poput neoplazme ili maligniteta ili tumora. Bilo koja vrsta kancera je predviđena za lečenje kompozicijama za upotrebu prema ovom pronalasku. Na primer, kancer može biti kancer dojke, kancer pluća, kancer jajnika, kancer mozga, kancer jetre, kancer grlića maternice, kancer debelog creva, bubrežni kancer, kancer kože, kancer glave i vrata, kancer kostiju, kancer jednjaka, kancer mokraćne bešike, kancer materice, kancer želuca, kancer pankreasa, kancer testisa, limfom ili leukemija. U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, kancer je metastatski kancer.

[0041] U nekim primerima izvođenja ovog pronalaska, kompozicije ovog pronalaska su pogodne za dvostruku hemoterapiju i terapiju zračenjem (radiohemoterapiju). Na primer, helatorski konjugat EC i šećera naveden u ovom tekstu može biti heliran sa jonom metala koji je terapijski metalni jon, kao i sa terapijskim fragmentom (kao što je fragment protiv kancera). Kao još jedan primer, terapijski metalni jon može da bude heliran i sa EC i sa šećernim fragmentom u konjugatu EC i šećera.

[0042] Na primer, metalni jon može da bude beta-emiter. Kako je ovde definisano, beta emiter je svaki agens koji emituje beta energiju bilo kog opsega. Primeri beta emitera uključuju Re-188, Re-187, Re-186, Ho-166, Y-90 i Sn-153. Stručnjak u ovoj oblasti će biti upoznat sa ovim agensima za upotrebu u lečenju hiperproliferativne bolesti, poput kancera.

[0043] Stručnjak u ovoj oblasti će biti upoznat sa dizajnom hemoterapijskih protokola i protokola za terapiju zračenjem koji mogu da se koriste pri primeni jedinjenja ovog pronalaska. Kao što je navedeno u daljem tekstu, ovi agensi mogu da se koriste u kombinaciji sa drugim terapijskim modalitetima usmerenim na lečenje hiperproliferativne bolesti, poput kancera. Dalje, stručnjak u ovoj oblasti biće upoznat sa odabirom odgovarajuće doze za davanje subjektu. Protokol može da sadrži jednu dozu ili više doza. Kod pacijenta će biti nadzirana toksičnost i reagovanje na lečenje pomoću protokola poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

[0044] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska sadrže terapijski ili dijagnostički efikasnu količinu kompozicije ovog pronalaska. Izrazi "farmaceutski ili farmakološki prihvatljiv" ili "terapijski efikasan" ili "dijagnostički efikasan" odnose se na molekulske entitete i kompozicije koje ne proizvode štetne, alergijske ili druge neugodne reakcije kada se daju životinji, kao što je, na primer, čoveku, po potrebi. Priprema terapijski efikasnih ili dijagnostički efikasnih kompozicija biće poznata stručnjacima u oblasti u svetlu ovog otkrića, kao što je prikazano u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18 ed. Mack Printing Company, 1990. Osim toga, za primenu kod životinje (npr. čoveka) podrazumeva se da preparati treba da ispunjavaju standarde u pogledu sterilnosti, pirogenosti, opšte bezbednosti i čistoće, prema zahtevima Kancelarija za biološke standarde FDA.

[0045] Kako se ovde koristi, "kompozicija koja sadrži terapijski efikasnu količinu" ili " kompozicija koja sadrži dijagnostički efikasnu količinu" uključuje bilo koji i sve rastvarače, podloge za dispergovanje, premaze, površinski aktivne materije, antioksidante, konzervanse (npr. antibakterijski agensi, antifungalni agensi), izotonične agense, agense za odlaganje apsorpcije, soli, konzervanse, lekove, stabilizatore lekova, gelove, veziva, pomoćne materije, agense za dezintegraciju, lubrikanse, zaslađivače, arome, boje, slične materijale i njihove kombinacije, kao što je poznato stručnjaku u ovoj oblasti. Osim ako je bilo koji konvencionalni nosač nekompatibilan sa aktivnim sastojkom, razmatra se njegova upotreba u predmetnim kompozicijama.

[0046] Kompozicije ovog pronalaska mogu da sadrže različite vrste nosača u zavisnosti od toga da li treba da se primene u čvrstom, tečnom ili aerosolnom obliku i da li treba da budu sterilne za načine primene kao što je injektovanje. Kompozicije iz ovog pronalaska mogu da se primene intravenozno, intradermalno, intraarterijski, intraperitonealno, intralezionalno, intrakranijalno, intraartikularno, intraprostatički, intrapleuralno, intratrahealrno, intranazalno, intravitrealno, intravaginalno, intrarektalno, topikalno, intratumoralno, intramuskularno, intraperitonealno, subkutano, subkonjuktivalno, intravezikularno, mukozno, intraperikardijalno, intraumbilikalno, intraokularalno, oralno, topikalno, lokalno, injekcijom, infuzijom, kontinuiranom infuzijom,

1

lokalizovanim perfuzijama koje direktno oblivaju ciljne ćelije, kateterom, ispiranjem, u lipidnim kompozicijama (npr. lipozomi), ili drugim postupkom ili bilo kojom kombinacijom prethodno opisanog, kao što je poznato stručnjaku u ovoj oblasti.

[0047] Konkretna potrebna količina kompozicije ovog pronalaska koja se daje pacijentu može se odrediti prema fizičkim i fiziološkim faktorima kao što su telesna težina, ozbiljnost stanja, tip tkiva koje treba da se vizualizuje, vrsta bolesti koja se leči, prethodna ili istovremena vizualizacija ili terapijske intervencije, idiopatija pacijenta i put primene. Lekar koji je nadležan za primenu u svakom slučaju će odrediti koncentraciju aktivnog/aktivnih sastojaka u kompoziciji i odgovarajuću dozu/doze kod svakog pojedinačnog subjekta.

[0048] U određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije mogu da sadrže, na primer, najmanje oko 0.1% helata helator-metalni jon. U drugim primerima izvođenja, aktivno jedinjenje može da sadrži između oko 2% do oko 75% težine jedinice doziranja, ili između oko 25% do oko 60%, na primer, i bilo koji opseg koji proizilazi iz navedenog. U ostalim neograničavajućim primerima, doza može takođe da sadrži od oko 0.1 mg/kg/telesne težine do oko 1000 mg/kg/telesne težine ili bilo koje količine unutar ovog raspona, ili bilo koje količine veće od 1000 mg/kg/telesne težine po primeni.

[0049] U svakom slučaju, kompozicija može da sadrži različite antioksidante da bi se usporila oksidacija jedne ili više komponenti. Pored toga, sprečavanje dejstva mikroorganizama može da bude postignuto konzervansima kao što su različiti antibakterijski i antifungalni agensi, uključujući, ali ne ograničavajući se na parabene (npr. metilparabeni, propilparabeni), hlorobutanol, fenol, sorbinsku kiselinu, timerosal ili njihove kombinacije.

[0050] Kompozicije ovog pronalaska mogu da budu formulisane u obliku slobodne baze, neutralnom obliku, ili u obliku soli. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli formirane sa slobodnim karboksilnim grupama koje potiču iz neorganskih baza, kao što su, na primer, natrijum, kalijum, amonijum, kalcijum ili feri hidroksidi; ili takvih organskih baza kao što su izopropilamin, trimetilamin, histidin ili prokain.

[0051] U primerima izvođenja gde je kompozicija u tečnom obliku, nosač može biti rastvarač ili disperzioni medijum koji sadrži, ali nije ograničen na vodu, etanol, poliol (npr. glicerol, propilen glikol, tečni polietilen glikol, itd.), lipide (npr. trigliceridi, biljna ulja, lipozomi) i njihove kombinacije. Odgovarajuća fluidnost može da se održava, na primer, upotrebom premaza, kao što je lecitin; održavanjem potrebne veličine čestica disperzijom u nosačima kao što su, na primer tečni poliol ili lipidi; upotrebom površinski aktivnih sredstava kao što je, na primer, hidroksipropilceluloza; ili kombinacijom ovih metoda. U mnogim slučajevima biće poželjno uključivanje izotoničnih agenasa, kao što su, na primer, šećeri, natrijum hlorid ili kombinacije istih.

[0052] Sterilni injekcioni rastvori mogu da se pripreme upotrebom tehnika poput sterilne filtracije. Uopšteno, disperzije se pripremaju uključivanjem različitih sterilisanih aktivnih sastojaka u sterilni vehikulum koji sadrži osnovni disperzni medijum i/ili druge sastojke. U slučaju sterilnih prahova za pripremu sterilnih injekcionih rastvora, suspenzija ili emulzija, poželjni načini pripreme su tehnike vakuumskog sušenja ili sušenja liofilizacijom koje daju prah aktivnog sastojka uz bilo koji dodatni željeni sastojak iz njegovog prethodno sterilno-filtriranog tečnog medijuma. Tečni medijum bi trebalo da bude pogodno puferisan ako je potrebno, i tečni razblaživač prvo učinjen izotoničnim, pre injektovanja sa dovoljno fiziološkog rastvora ili glukoze. Takođe se razmatra priprema visoko koncentrovanih kompozicija za direktno injektovanje, pri čemu je predviđeno da upotreba DMSO (dimetilsulfoksid) kao rastvarača rezultuje ekstremno brzim prodiranjem, čime se visoke koncentracije aktivnih agenasa isporučuju na malom području.

[0053] Kompozicija mora da bude stabilna u uslovima proizvodnje i skladištenja i sačuvana od kontaminirajućeg delovanja mikroorganizama, poput bakterija i gljivica. Poznato je da kontaminaciju endotoksinom treba održavati minimalno na bezbednom nivou, na primer, manje od 0.5 ng/mg proteina.

[0054] U određenim primerima izvođenja, produžena apsorpcija kompozicije za injektovanje može da se postigne korišćenjem u kompozicijama sredstava koja odlažu apsorpciju, kao što su, na primer, aluminijum monostearat, želatin ili njihove kombinacije.

[0055] Kompozicije ovog pronalaska mogu da se koriste u raznim tehnikama nuklearne medicine za vizualizaciju koje su poznate stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, vizualizacija gama kamerom zamišljena je kao metoda vizualizacije koja može da se koristi za merenje signala dobijenog iz metalnog jona helirnog sa konjugatom EC i šećera. Stručnjak u ovoj oblasti će biti upoznat sa tehnikama za primenu vizualizacije gama kamerom (videti, na primer, Kundra et al., 2002).

[0056] Modaliteti vizualizacije radionuklida (pozitronsko-emisiona tomografija, (PET); jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija (SPECT)) su dijagnostičke tehnike vizualizacije u poprečnom preseku koje mapiraju lokaciju i koncentraciju radioaktivnih obeleživača obeleženih radiouklidom. Iako CT i MRI pružaju značajne anatomske informacije o lokaciji i obimu tumora, pomoću ovih modaliteta vizualizacije ne mogu se adekvatno razlikovati invazivne lezije od edema, radijacijske nekroze, gradacije ili glioze. PET i SPECT mogu da se koriste za lokalizaciju i karakterizaciju tumora merenjem metaboličke aktivnosti.

1

[0057] PET i SPECT pružaju informacije koje se odnose na informacije na ćelijskom nivou, kao što je ćelijska vijabilnost. Kod PET, pacijent guta ili mu se ubrizgava blago radioaktivna supstanca koja emituje pozitrone, a koja može da se prati dok se supstanca kreće kroz telo. Kod uobičajene primene, na primer, pacijentima se daje glukoza sa pričvršćenim pozitronskim emiterima i njihov mozak se prati kada obavljaju različite zadatke. Pošto mozak koristi glukozu dok radi, PET slika pokazuje oblasti u kojima je aktivnost mozga velika.

[0058] Usko povezana s PET-om je jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija, ili SPECT. Glavna razlika između ove dve metode je u tome što umesto supstance koja emituje pozron, SPECT koristi radioaktivni obeleživač koji emituje fotone niske energije. SPECT je važan za dijagnostikovanje bolesti koronarnih arterija, a već se oko 2.5 miliona SPECT studija srca radi svake godine u Sjedinjenim Državama.

[0059] PET radiofarmaceutici za vizualizaciju obično su obeleženi pozitronskim emiterima kao što su<11>C,<13>N,<15>O,<18>F,<82>Rb,<62>Cu i<68>Ga. SPECT radiofarmaceutici obično su obeleženi pozitronskim emiterima kao što su<99m>Tc,<201>Tl i<67>Ga. Što se tiče vizualizacije mozga, radiofarmaceutici PET i SPECT klasifikuju se prema propusnosti krvno-moždane-barijere (BBB), cerebralnoj perfuziji i vezivanju receptora metabolizma, kao i vezivanju antigen-antitelo (Saha et al., 1994). SPECT agensi krvno-moždane barijere, kao što su<99m>TcO4-DTPA,<201>Tl i [<67>Ga]citrat isključeni su iz normalnih ćelija mozga, ali ulaze u ćelije tumora zbog izmenjene BBB. SPECT perfuzijski agensi kao što su [<123>I]IMP, [<99m>Tc]HMPAO, [<99m>Tc]ECD su lipofilni agensi, i zbog toga difunduju u normalan mozak. Važni SPECT radiofarmaceutici koji vezuju receptore uključuju [<123>I]QNE, [<123>I]IBZM i [<123>I]iomazenil. Ovi obeleživači se vezuju za specifične receptore i od značaja su za procenu bolesti povezanih sa receptorima.

[0060] Kompjuterizovana tomografija (CT) se u kontekstu ovog pronalaska razmatra kao modalitet vizualizacije. Upotrebom niza rendgenskih zraka, ponekad i više od hiljadu, iz različitih uglova, a zatim njihovim kombinovanjem sa računarom, CT omogućava izgradnju trodimenzionalne slike bilo kog dela tela. Računar je programiran da prikazuje dvodimenzionalne isečke iz bilo kog ugla i na bilo kojoj dubini.

[0061] U slučaju CT, intravenska injekcija radionepropusnog kontrastnog agensa može da pomogne u identifikaciji i razgraničenju masa mekih tkiva kada početni CT skenovi nisu dijagnostički. Slično tome, kontrastni agensi pomažu u proceni vaskularnosti mekog tkiva ili lezije kostiju. Na primer, upotreba kontrastnih agenasa može da pomogne razgraničenju odnosa tumora i susednih vaskularnih struktura.

[0062] CT kontrastni agensi uključuju, na primer, jodovane kontrastne agense. Primeri ovih agenasa uključuju iotalamat, ioheksol, diatrizoat, iopamidol, etiodol i iopanoat. Za

1

gadolinijumske agense se takođe navodi da se koriste kao CT kontrastni agensi (videti, npr., Henson et al., 2004). Na primer, gadopentatni agensi su korišćeni kao CT kontrastni agensi (diskutovano u Strunk and Schild, 2004).

[0063] Vizualizacija magnetnom rezonancom (MRI) je modalitet vizualizacije koji je noviji od CT koji koristi magnetne i radiofrekventne signale velike snage za proizvodnju slika. Najzastupljenija molekulska vrsta u biološkom tkivu je voda. Kvantno-mehanički "spin" protonskih jezgara vode u konačnom rezultatu pojačava signal u eksperimentima vizualizacije. Kod MRI, uzorak koji treba da se vizualizuje postavlja se u jako statičko magnetno polje (1-12 Tesla), a spinovi se pobuđuju pulsom radiofrekventnog (RF) zračenja kako bi se proizvela neto magnetizacija u uzorku. Različiti gradijenti magnetnog polja i drugi RF impulsi tada deluju na spinove kako bi kodirali prostorne informacije u snimljene signale. Sakupljanjem i analizom ovih signala moguće je izračunati trodimenzionalnu sliku koja se, poput CT slike, normalno prikazuje u dvodimenzionalnim isečcima.

[0064] Kontrastni agensi koji se koriste u MR vizualizaciji razlikuju se od onih koja se koriste u drugim tehnikama vizualizacije. Njihova svrha je da pomognu u razlikovanju komponenti tkiva sa identičnim karakteristikama signala i da skrate vremena relaksacije (što će proizvesti jači signal na T1-ponderisanim spin-eho MR slikama i manje intenzivan signal na T2-ponderisanim slikama). Primeri kontrastnih sredstava MRI uključuju helate gadolinijuma, helate mangana, helate hroma i čestice gvožđa.

[0065] I CT i MRI pružaju anatomsku informaciju koja pomaže u razlikovanju granica tkiva i vaskularne strukture. U poređenju sa CT, nedostaci MRI uključuju nižu toleranciju pacijenta, kontraindikacije kod pejsmejkera i određenih drugih implantiranih metalnih uređaja i artefakte povezane sa višestrukim uzrocima, od kojih kretanje nije najmanje (Alberico et al., 2004). CT je, s druge strane, brza, dobro se podnosi i lako je dostupna, ali ima nižu rezoluciju kontrasta od MRI i zahteva jodirani kontrast i jonizujuće zračenje (Alberico et al., 2004). Nedostatak i CT i MRI je što nijedan od ovih modaliteta vizualizacije ne daje funkcionalnu informaciju na ćelijskom nivou. Na primer, ni jedan modalitet ne pruža informacije o ćelijskoj vijabilnosti.

[0066] Optička vizualizacija je još jedan način vizualizacije koji je široku prihvaćen u određenim oblastima medicine. Primeri uključuju optičko obeležavanje ćelijskih komponenti i angiografiju, kao što je fluoresceinska angiografija i angiografija sa indocijanin-zelenom. Primeri sredstava za optičku vizualizaciju uključuju, na primer, fluorescein, derivat fluoresceina, indocijanin-zeleno, Oregon zeleno, derivat Oregon zelenog, rodamin-zeleno, derivat rodamin-zelenog, eozin, eritrozin, Teksas-crveno, derivat Teksas-crvenog, malahit zeleno, sulfosukcinimidil estar nano-

1

zlata, kaskadno plavu, derivat kumarina, naftalen, derivat piridiloksazola, kaskadno žutu boju ili dapoksilnu boju.

[0067] Još jedan modalitet biomedicinske vizualizacije koji je stekao široku prihvaćenost je ultrazvuk. Ultrazvučna vizualizacija je korišćena neinvazivno za obezbeđivanje poprečnih preseka, pa čak i trodimenzionalnih slika, u realnom vremenu struktura mekih tkiva i podataka o protoku krvi u telu. Visokofrekventni zvučni talasi i računar omogućavaju stvaranje slika krvnih sudova, tkiva i organa.

[0068] Ultrazvučna vizualizacija protoka krvi može da bude ograničena nizom faktora kao što su veličina i dubina krvnih sudova. Ultrazvučni kontrastni agensi, razvijeni relativno nedavno, uključuju perfluor i analoge perfluora, koji su dizajnirani da prevaziđu ova ograničenja pomažući u pojačanju crno-belih slika i signala Doplera.

[0069] Određeni primeri izvođenja ovog pronalaska odnose se na postupke za vizualizaciju oblasti u telu subjekta koji koriste dva načina vizualizacije koji uključuju merenje prvog signala i drugog signala iz kompleksa fragment za vizualizaciju-helator-jon metala. Prvi signal potiče od jona metala, a drugi signal potiče od fragmenta za vizualizaciju. Kao što je gore navedeno, bilo koji modalitet vizualizacije koji je poznat stručnjacima u ovoj oblasti može da se primeni u ovim primerima izvođenja predmetnih metoda vizualizacije.

[0070] Modaliteti vizualizacije se izvode u bilo koje vreme tokom, ili posle primene kompozicije koja sadrži dijagnostički efikasnu količinu kompozicije ovog pronalaska. Na primer, studije vizualizacije mogu se izvesti tokom primene kompozicije za dvostruku vizualizaciju ovog pronalaska, ili u bilo kom trenutku nakon toga. U nekim primerima izvođenja, prvi modalitet vizualizacije izvodi se tako da započinje istovremeno sa davanjem dvostrukog agensa za vizualizaciju, ili otprilike 1 sekund, 1 čas, 1 dan, ili bilo koji duži vremenski period nakon primene dvostrukog agensa za vizualizaciju, ili u bilo koje vreme između bilo kojeg od navedenih vremena.

[0071] Drugi modalitet vizualizacije može da se sprovede istovremeno sa prvim modalitetom vizualizacije, ili u bilo koje vreme posle prvog modaliteta vizualizacije. Na primer, drugi modalitet vizualizacije može se izvesti oko 1 sekund, oko 1 čas, oko 1 dan, ili bilo koji duži vremenski period nakon završetka prvog modaliteta vizualizacije, ili u bilo koje doba između bilo kojeg od navedenih vremena. U nekim primerima izvođenja ovog pronalaska, prvi i drugi modalitet vizualizacije izvode se istovremeno, tako da počinju u isto vreme nakon primene agensa. Stručnjak u ovoj oblasti biće upoznat sa obavljanjem različitih modaliteta vizualizacije predviđenih ovim pronalaskom.

1

[0072] U nekim primerima izvođenja predmetnih postupaka za dvostruku vizualizaciju, isti uređaj za vizualizaciju koristi se za obavljanje prvog modaliteta vizualizacije i drugog modaliteta vizualizacije. U drugim primerima izvođenja, drugačiji uređaj za vizualizaciju koristi se za obavljanje drugog modaliteta vizualizacije. Stručnjak u ovoj oblasti će biti upoznat sa uređajima za vizualizaciju koji su dostupni za obavljanje prvog modaliteta vizualizacije i drugog modaliteta vizualizacije, a iskusni stručnjak će biti upoznat sa upotrebom ovih uređaja za generisanje slika. Više detalja o dijagnostičkim i terapijskim metodama može se naći u US 2008/0107198.

[0073] Sledeći primeri su uključeni da pokažu poželjne primere izvođenja ovog pronalaska. Stručnjaci u oblasti treba da zapaze da tehnike opisane u sledećim primerima predstavljaju tehnike za koje su pronalazači otkrili da dobro funkcionišu pri praktikovanju pronalaska, pa se mogu smatrati poželjnim načinima njegove primene.

PRIMERI

Primer 1 - Sinteza N,N-etilendicistein-glukozamina (EC-G). Videti SL. 1.

Opšte

[0074] Sve hemikalije i rastvarači nabavljeni su od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Nuklearna magnetna rezonanca (NMR) sprovedena je na spektrometru Bruker 300MHz, a masena spektrometrija je sprovedena na masenom spektrometru Waters Q-TOF Ultima (Milford, MA) u glavnom centru onkološkog centra MD Anderson pri Univerzitetu u Teksasu (UTMDACC; Houston, TX). Hemijski pomaci prikazani su u δ (ppm), a vrednosti J u Hertz. FDG je dobijen od Odseka za nuklearnu medicinu UTMDACC.

Sinteza ECG

Korak 1. Sinteza T-G-(AC)4

[0075] U rastvor tiazolidin-4-karboksilne kiseline (T) (2.6 g, 0.02 mol) u DMF (20 ml) i 5.0 ml trimetilamina, dodat je 1-hidroksibenzotriazol hidrat 2.7 g (0.02 mol). Posle 30 min, u smešu su dodati hidrohlorid 1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-amino-α-D-glukopiranoze (G-(Ac)4) (7.7g, 0.02 mol), N,N'-dicikloheksilkarbodiimid (DCC; 4.2 g, 0.02 mol) i 4-dimetilaminopiridin (DMAP; 1.2 g, 0.01 mol) i mešani preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvor je uparen do suva na visokom vakuumu. Ostatku je dodat dihlorometan (CH2Cl2) (50 ml) i ostavljen na 4°C preko noći, zatim je filtriran. Proizvod je prečišćen silika gelom eluiranjem sa CH2Cl2/MeOH (95/5, zapr./zapr.) da

1

bi se dobio beli proizvod T-G-(Ac)44.08 g (44.2%). NMR i masena spektrometrija su korišćeni da bi se potvrdila struktura T-G-(Ac)4.

Korak 2. Reakcija redukcije

[0076] Natrijum je dodat deo po deo rastvoru T-G-(Ac)4(4.08 g, 8.8 mmol) u tečnom amonijaku (170 g). Boja rastvora se polaako promenila u tamno plavu. Posle 30 minuta, dodata je mala količina amonijum hlorida. Tečni amonijak je uklonjen pod sniženim pritiskom. Preostali čvrsti ostatak je triturisan metanolom (100 ml). Čvrsti ostatak je zatim filtriran i opran dodatnim metanolom (50 ml) da bi se dobio sirovi proizvod u količini od 4.16 g. Da bi se dobio analitički čist ECG, sirovi proizvod (0.1 g) je rastvoren u 1.0 ml HCl (0.1 N) i prečišćen na koloni sefadeksa eluiranjem pomoću H2O. Vodene frakcije su kombinovane i liofilizovane da bi se dobio ECG 0.029 g (46.7%). NMR, masena spektrometrija i HPLC su korišćeni za potvrđivanje strukture ECG.

Rezultati

[0077] Šema sinteze prikazana je na SL. 1. ECG je sintetisan dvostepenim reakcijama. U prvom koraku, tiazolidin-4-karboksilna kiselina (T) reagovala je sa hidrohloridom 1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-amino-α-D-glukopiranoze (G-(Ac)4) u prisustvu 1-hidroksibenzotriazol hidrata, DCC i DMAP. Posle prečišćavanja, prinos proizvoda T-G-(Ac)4bio je 44.2%.<1>H NMR (D2O, δ):1.97-2.14(m, 12H), 3.88(t, 1H), 3.93 (s, 2H), 4.05-4.10 (m, 6H) 4.22-4.30 (m, 2H), 5.09 (t, 1H), 5.34 (t, 1H), 5.80(d, 1H), 6.93(d, 1H,).<13>C NMR(D2O, δ): 171.19, 171.00, 170.65, 169.35, 166.35, 141.76, 92.05, 82.45, 72.79, 72.02, 68.02, 61.73, 60.39, 53.21, 42.32, 20.84, 20.68, 20.58, 20.55. FAB MS m/z: 462.5.

[0078] U drugom koraku, T-G-(Ac)4je redukovan natrijumom u tečnom amonijaku (Birch-ova redukcija). Sirovi proizvod je prečišćen pomoću kolone sefadeksa da bi se dobio ECG (46.7%). HPLC pokazuje da je čistoća preko 82%.<1>H NMR (D2O, δ): 3.15-3.20 (m, 4H), 3.78-4.05 (m, 6H), 4.08-4.15 (m, 8H), 4.2-4.3(d, 2H), 4.68-4.73 (d, 2H), 5.19-5.21(d, 2H).<13>C NMR (D2O, δ): 174.81, 174.56, 94.95, 90.87, 90.84, 75.96, 73.91,73.85, 71.59, 70.71, 70.66, 70.10, 69.88, 60.72, 60.62, 56.72, 54.11, 23.33, 22.23, 21.96. FAB MS m/z: 591.

Primer 2 - Sinteza hladnog Ga-ECG

[0079]<69>GaCl3(20 mg, 0.11 mmol) u 0.2 ml H2O dodat je u rastvor ECG (60 mg, 0.1 mmol) u 0.5 ml H2O. pH vrednost je podešena na 4-5 sa 0.1 N NaOH (50 µl). Rastvor je zagrevan 30 min

2

na 60 °C. Proizvod je prečišćen na sefadeks koloni eluiranjem sa H2O da bi se dobio Ga-ECG. Posle liofilizacije, Ga-ECG je dobijen kao bela čvrsta supstanca (52 mg, 78.1%). NMR, masena spektrometrija i HPLC upotrebljeni su za potvrđivanje strukture<69>Ga-ECG.

[0080] NMR hladnog<69>Ga-ECG bio je<1>H NMR (D2O, δ): 2.94-3.38 (m, 8H), 3.43-3.65 (m, 4H), 3.50-3.80 (m, 10H), 3.92-4.02 (t, 2H), 4.23-4.34(d, 2H), 5.15-5.34(d, 2H),<13>C NMR(D2O, δ): 175.51, 175.16, 95.55, 90.85, 90.67, 75.76, 74.90,73.55, 71.59, 70.71, 70.66, 70.10, 69.88, 60.72, 60.62, 56.72, 54.11, 23.53, 22.83, 22.16. Radio-TLC i HPLC analiza čistoće<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG bile su >96% (SL. 2-4). HPLC hladnog<69>Ga-ECG korišćena je za potvrđivanje strukture<68>Ga-ECG (SL.3).

Primer 3 - Radiosinteza<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG

[0081]<68>GaCl3je dobijen iz<68>Ge/<68>Ga generatora (Eckert Ziegler, Valencia, CA) eluiranjem sa 0.1N HCl.<68>GaCl3(120 µl, 300 µCi) je dodat rastvoru ECG (1.2 mg) u 0.1 ml H2O, i pH vednost je podešena na 4-5 sa NaHCO3(40 µl, 0.1 N). Rastvor je zagrevan na 60°C tokom 15 min. Natrijum pertehnetat (Na<99m>TcO4) je dobijen iz<99>Mo/<99m>Tc generatora kompanije Covidien (Houston, TX). Radiosinteza<99m>Tc-ECG je postignuta dodavanjem<99m>Tc-pertehnetata (40-50 mCi) u liofilizovani ostatak ECG (5 mg) i kalaj (II) hlorid (SnCl2, 100 µg). Kompleksiranje ECG sa<99m>Tc je izvedeno na pH 6.5. Radiohemijska čistoća ja određena pomoću TLC (Waterman No.1, Aldrich-Sigma, St. Louis, MO) eluiranjem fiziološkim rastvorom. Tečna hromatografija visokih performansi (HPLC), opremljena detektorom NaI i UV detektorom (210 nm), sprovedena je na C-18 reverzno-faznoj koloni (C18-extend, Agilent, Santa Clara, CA) eluiranjem smešom acetonitril/voda (1:9, zapr./zapr.) pri protoku 0.5 ml/min. HPLC hladnog<69>Ga-ECG je korišćena za potvrđivanje strukture<68>Ga-ECG.

Primer 4 - Biodistribucija radioaktivnih obeleživača kod pacova koji nose mezoteliom

[0082] Ženke pacova Fischer 344 (150±25 g) (Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN) (n=3 pacova/vremenskoj tački) inokulisane su malignim ćelijama pleuralnog mezotelioma poreklom od ćelijske linije IL-45. Tumorske ćelije (10<6>ćelija/pacovu) su injektovane (i.m.) u zadnje noge. Studije su sprovedene 14 do 17 dana posle inokulacije kada su tumori imali prečnik od približno 1 cm. U studijama distribucije u tkivu, svaka životinja je injektovana (i.v., 10 µCi/pacovu, 10 µg/pacovu) sa<99m>Tc-ECG,<68>Ga-ECG i<18>F-FDG. Pacovi su žrtvovani na 0.5-4 časa. Izabrana tkiva su hirurški izvađena, odmerena i izmerena im je radioaktivnost korišćenjem gama brojača (Packard Instruments, Downers Grove, IL). Biološka raspodela obeleživača u svakom uzorku izračunata je kao procenat injektovane doze po gramu vlažne težine tkiva (%ID/g).

[0083] Preuzimanje<68>Ga-ECG,<99m>Tc-ECG i<18>F-FDG u tumor i tkivo (%ID/g) prikazano je u tabelama 1-3. Najveće preuzimanje<99m>Tc-ECG u tumor je 0.47 na 30 min posle injekcije, i ono opada na 0.08 na 240 min posle injekcije. Preuzimanje u tumor (%ID/g), odnosi gustine impulsa tumor/pluća, tumor/krv i tumor/mišići za<99m>Tc-ECG (30-240 min) bili su 0.47±0.06 do 0.08±0.01; 0.71±0.07 do 0.85±0.04; 0.47±0.03 do 0.51±0.01, i 3.49±0.24 do 5.06±0.25; za<68>Ga-ECG (15-60 min) su bili 0.70±0.06 do 0.92±0.08; 0.64±0.05 do 1.15±0.08; 0.42±0.03 do 0.67±0.07, i 3.84±0.52 do 7.00±1.42; za FDG (30-180 min) su bili 1.86±0.22 do 1.38±0.35; 3.18±0.44 do 2.92±0.34, 4.19±0.44 do 19.41±2.05 i 5.75±2.55 do 3.33±0.65, redom. Veće preuzimanje u bubrege zapaženo je i za<68>Ga-ECG i za<99m>Tc-ECG grupe, verovatno zato što konjugati EC i EC mogu da interaguju sa renalnim tubulama u bubregu (Yang et al., 2003).

Primer 5 -Studije scintigrafske vizualizacije

[0084] Ženke pacova Fischer 344 (150±25 g) koje nose maligni pleuralni metoteliom (u zadnjim nogama) poreklom od ćelijske linije IL-45 upotrebljene su za studije vizualizacije. Studije su sprovedene 14 do 17 dana posle inokulacije kada su tumori dostigli prečnik od približno 1 cm. Scintigrafske slike su dobijene ili pomoću mikro-PET (Inveon) ugrađenog u koordinantni PET/CT sistem za sakupljanje podataka, ili sa M-gama kamere (Siemens Medical Systems, Inc., Hoffman Estates, IL) opremljene niskoenergetskim kolimatorima sa paralelnim otvorima. Kod svake životinje primenjen je<99m>Tc-ECG (300 µCi/pacovu, iv),<68>Ga-ECG i<18>F-FDG (400 µCi/pacovu, iv), i slike su dobijene na 0.5-4 časa. Da bi se pokazalo da<68>Ga-ECG može da se koristi za slikom-vođenu terapiju, isti pacovi koji nose mezoteliom (n=3) pri zapremini tumora od 1.5 cm tretirani su paklitakselom (20 mg/kg, iv, jedna injekcija). Pre tretmana i na dan 7 posle tretmana paklitakselom, pacovi koji nose tumor vizualizovani su pomoću<68>Ga-ECG. Računarski određene konture područja od interesa (ROI) (impulsa po pikselu) upotrebljene su za određivanje odnosa gustine impulsa tumor/fon za<99m>Tc-ECG. Računarski određene konture područja od interesa (ROI) (impulsa po pikselu) za tumor i mišić u odgovarajućem vremenskom intervalu korišćene su za generisanje dinamičkog grafika za<68>Ga-ECG i<18>F-FDG. Dinamički grafik bio je od 0 do 45 minuta. Paklitaksel je odabran jer proizvodi anti-proliferativna dejstva inhibicijom glukoznih transportera (Glut-1) u studijama na ćelijskim linijama (Rastogi et al., 2007). Takođe, objavljeno je da mezoteliom odgovara na lečenje paklitakselom u životinjskom modelu (Schulz et al., 2011).

[0085] Scintigrafske vizualizacije pacova kod kojih je primenjen<68>Ga-ECG,<99m>Tc-ECG i<18>F-FDG pokazale su da tumori mogu da budu jasno vizualizovani na 0.5-4 časa (SL. 5-7). Dinamički grafik preuzimanja<68>Ga-ECG i<18>F-FDG u tumor pokazao je sličan obrazac transporta (SL. 5).<68>Ga-ECG je omogućavao praćenje odgovora na lečenje paklitakselom kod istih pacova koji su imali mezoteliom (SL 6). Dva pacova koja su primila<99m>Tc-ECG (sredina i desno) su nasumično izabrana za poređenje sa pacovima koji primaju<99m>Tc-EC (levo) na istom panelu vizualizacije. Tumor u grupi<99m>Tc-ECG pokazao je mnogo veće preuzimanje nego grupa<99m>Tc-EC (kontrola) na 1 i 2 časa (SL. 7).

[0086] Ukupno, ostvarena je efikasna sinteza ECG sa visokim prinosom.<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG su pripremljeni sa visokom radiohemijskim čistoćama. Studije biološke raspodele i planarne vizualizacije pokazale su farmakokinetičku raspodelu i izvodljivost upotrebe<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG za vizualizaciju mezotelioma.<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG su pokazali povećano preuzimanje u mezoteliom u ispitivanom modelu, što ukazuje da su pogodni za procenu zapremine tumora.<68>Ga-ECG i<99m>Tc-ECG mogu da budu pogodni za skrining, dijagnostikovanje, određivanje stadijuma i procenu efikasnosti lečenja u pogledu svih vrsta kancera.

Primer 6 - Proizvodnja kompleta ECG

[0087] Jedan komplet ECG je proizveden rastvaranjem 1.0 mg ECG u 0.1 mL vode. Ovome je dodat 1 mg L-askorbinske kiseline u 0.1 mL vode, 0.5 mg neomicina u 0.1 mL, 0.5 mg L-cisteina i 0.1 mL rastvora 1 mg/mL kalaj (II) hlorida. Proizvod je liofilizovan do jediničnog hladnog kompleta.<99m>Tc-ECG napravljen upotrebom kompleta analiziran je instanttankoslojnom hromatografijom upotrebom fiziološkog rastvora kao mobilne faze. Rezultati su pokazali istu retenciju kako za proizvod kompleta tako i za standardni<99m>Tc-ECG proizvod (SL.

16). Proizvod kompleta i standardni proizvod analizirani su i pomoću HPLC upotrebom H2O/MeCN (9:1) kao eluenta pri protoku od 0.50 mL/min (SL. 17 i 18). Pruzimanje proizvoda kompleta i standardnog proizvoda analizirano je kod preuzimanja u tumorske ćelije mlečne žlezde pacova 13762. Nađeno je da proizvod kompleta ispoljava više od 5-struko boljeg preuzimanje nego standardni proizvod (SL. 19).

REFERENCE

[0088]

U.S. Publn.2008/0107198

Alberico et al., Surg. Oncol. Clin. N. Am., 13(1):13-35, 2004.

2

Bodansky, In: Peptide Chemistry, 2<nd>Ed., Springer-Verlag, New York, 1993.

Grant, In: Synthetic Peptides, Freeman & Co., New York, 1992.

Green and Wuts, Protective Groups in organic Synthesis, 3<rd>Ed. Wiley, NY, 1999.

Henson et al., Am. J. Neuroradiol., 25(6):969-972, 2004.

Kundra et al., J. Nucl. Med., 43(3):406-412, 2002.

Rastogi et al., Cancer Lett., 257(2):244-251, 2007.

Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1289-1329, 1990.

Saha et al., Semin. Nucl. Med., 24(4):324-349 ,1994.

Schulz et al., Ann. Thorac. Surg., 92(6):2007-2013, 2011.

Strunk and Schild, Eur. Radiol., 14(6):1055-1062, 2004.

Yang et al., Radiology, 226:465-473, 2003.

Claims (16)

1. Patentni zahtevi 1. Postupak za pripremu konjugata tiazolidina i šećera koji obuhvata mešanje amino šećera sa tiazolidin-karboksilnom kiselinom, čime se proizvodi konjugat tiazolidina i šećera.
2. 2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, koji dalje obuhvata redukovanje konjugata tiazolidina i šećera redukujućim agensom koji sadrži alkalni metal i izvor elektrona da bi se time dobio konjugat etilendicisteina i šećera.
3. 3. Postupak prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što je amino šećer glukozamin ili hidrohlorid 1,3,4,6-tetra-O-acetil-2-amino-α-D-glukopiranoze.
4. 4. Postupak prema patentnom zahtevu 2, koji dalje obuhvata heliranje metalnog jona sa konjugatom etilendicisteina i šećera za stvaranje konjugata etilendicisteina (EC) i šećera obeleženog metalnim jonom.
5. 5. Postupak prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što je metalni jon izabran iz grupe metalnih jona koja se sastoji od jona tehnecijuma, jona kalaja, jona bakra, jona indijuma, jona talijuma, jona galijuma, jona arsena, jona renijuma, jona holmijuma, jona itrijuma, jona samarijuma, jona selena, jona stroncijuma, jona gadolinijuma, jona bizmuta, jona gvožđa, jona mangana, jona lutecijuma, jona kobalta, jona platine, jona kalcijuma i jona rodijuma.
6. 6. Postupak prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što je metalni jon radionuklid izabran iz grupe koja se sastoji od<99m>Tc,<117m>Sn,<177>Lu,<188>Re,<186>Re,<153>Sm,<166>Ho,<90>Y,<89>Sr,<67>Ga,<68>Ga,<111>In,<183>Gd,<59>Fe,<225>Ac,<212>Bi,<211>At,<45>Ti,<60>Cu,<61>Cu,<67>Cu,<64>Cu i<62>Cu ili neradioaktivni metal odabran od<187>Re.
7. 7. Kompozicija koja sadrži konjugat etilendicisteina i šećera ili konjugat etilendicisteina i šećera obeležen jonom metala i neomicin.
8. 8. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, koja sadrži oko 0.1 mg do oko 1.0 mg neomicina po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera.
9. 9. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, koja dodatno sadrži antioksidant. 2
10. 10. Kompozicija koja sadrži konjugat etilendicisteina (EC) i šećera obeležen metalnim jonom i neomicin za upotrebu u dijagnostikovanju bolesti, ili lečenju bolesti kod subjekta.
11. 11. Postupak za vizualizaciju oblasti u telu subjekta kod koga je primenjen konjugat etilendicisteina (EC) i šećera obeležen metalnim jonom i neomicin, naznačen time što postupak obuhvata vizualizaciju oblasti.
12. 12. Postupak prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što je tiazolidin-karboksilna kiselina:
13. 13. Postupak prema patentnom zahtevu 1 koji dalje obuhvata agens za kuplovanje.
14. 14. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time što kompozicija dodatno sadrži askorbinsku kiselinu, cistein, ili kalaj(II) hlorid.
15. 15. Kompozicija prema patentnom zahtevu 14, naznačena time što kompozicija sadrži: (a) oko 0.5 do 2.0 mg askorbinske kiseline po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera; (b) oko 0.1 do 1.0 mg cisteina po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera; ili (c) oko 0.05 do 0.5 mg kalaj(II) hlorida po 1 mg konjugata etilendicisteina i šećera.
16. 16. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time što je kompozicija liofilizovana.