RS58413B1

RS58413B1 - So i kristalni oblici inhibitora plk-4

Info

Publication number: RS58413B1
Application number: RS20190269A
Authority: RS
Inventors: Peter Brent Sampson; Miklos Feher; Heinz W Pauls
Original assignee: Univ Health Network
Priority date: 2013-10-18
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2019-04-30
Also published as: US10392374B2; TW201609717A; ES2718603T3; PT3057965T; IL245038B; US20200140428A1; TR201902875T4; TWI659952B; US10472353B2; EA031569B1; CN105764899A; KR20160070106A; JP2016537326A; DK3057965T3; LT3057965T; MX359069B; EP3057965A1; SI3057965T1; KR20210137251A; AU2014336929B9

Description

Opis

STANJE TEHNIKE

[0001] Familija polo-sličnih kinaza (PLK) serin/treonin kinaza obuhvata barem četiri poznata člana: PLK1, PLK2 (takođe poznati kao Snk), PLK3 (takođe poznati kao Fnk ili Prk) i PLK4 (takođe poznati kao Sak). Agensi koji inhibiraju PLK4 imaju potencijal za lečenje kancera. Izvestan broj jakih PLK4 inhibitora se opisuje u U.S. brojevima patenata 8,263,596, 8,481,525, i 8,481,533. Struktura jednog inhibitora opisanog u ovim patentima je prikazana dole kao jedinjenje (I):

[0002] Postoji potreba za oblicima soli ovog jedinjenja koji su kristalni i inače imaju fizička svojstva koja su pogodna za proizvodnju velikih razmera. Takođe postoji potreba za farmaceutskim formulacijama u kojima je ovaj kandidat lek stabilan i efikasno isporučen pacijentu.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0003] Utvrđeno je da odnos 1:1 soli fumarne kiseline i odnos 1:1 soli maleinske kiseline jedinjenja (I) može da bude kristalizovan pod dobro definisanim uslovima da bi se dobili nehigroskopni kristalni oblici. Naznačenje "1:1" je molarni odnos između kiseline (fumarne ili maleinske) i jedinjenja (I). Zbog dve grupe karboksilne kiseline na fumarnoj kiselini i maleinskoj kiselini, moguće je da se formira so fumarne kiseline u odnosu 1:2 i u odnosu 1:2 so maleinske kiseline jedinjenja (I), u kom molarni odnos između kiseline (fumarne ili maleinske) jedinjenja (I) jeste 1:2. Odnos 1:1 soli fumarne kiseline jedinjenja (I) se ovde pominje kao "1:1 jedinjenje (I) fumarat"; i odnos 1:1 soli maleinske kiseline se pominje ovde kao "odnos 1:1 jedinjenje (I) maleat".

[0004] 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat ima nekoliko pogodnih svojstava kada se uporede sa drugim solima jedinjenja (I). Kao što je prikazano u Primerima 1 i 2, brojne soli jedinjenja (I), uključujući hidrohloridnu so, fosfat, sulfat, i citrat, ne bi bilo moguće dobiti u kristalnom obliku. Zanimljivo, 1:2 jedinjenje (I) fumarat i 1:2 jedinjenje (I) maleat takođe ne bi bilo moguće dobiti u kristalnom obliku.1:1 Jedinjenje (I) fumarat i odnos 1:1 jedinjenje (I) maleat su oba nehigroskopska i lakša za formulisanje nego slobodne baze i druge soli. Dakle, ova poželjna svojstva čine 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat pgodnim za proizvodnju velikih razmera i formulaciju kao lek kandidat.

[0005] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje fumarat so jedinjenja (I) pri čemu je molarni odnos između jedinjenja (I) i fumarne kiseline 1:1. Kao što je gore pomenuto, ova so se takođe pominje kao "1:1 jedinjenje (I) fumarat".

[0006] U jednom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje maleat so jedinjenja (I) pri čemu je molarni odnos između jedinjenja (I) i maleinske kiseline 1:1. Kao što je gore pomenuto, ova so se takođe pominje kao "1:1 jedinjenje (I) maleat".

[0007] U drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku supstancu koja obuhvata 1:1 jedinjenje (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenje (I) maleat) i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

[0008] Još jedno je varijantno rešenje, opisuje postupak za lečenje subjekta sa kancerom, koji obuhvata isporuku subjektu delotvorne količine 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat.

[0009] U drugom varijantnom rešenju je opisan postupak inhibiranja PLK4 aktivnosti kod subjekta kom je potrebna inhibicija PLK4 aktivnosti, i obuhvata isporuku subjektu delotvorne količine u odnosu od 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje maleat.

[0010] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat za upotrebu u medicinskoj terapiji. U jednom izvođenju, medicinska terapija je za lečenje subjekta sa kancerom. Alternativno, terapija je za inhibiranje PLK4 aktivnosti kod subjekta kom je potrebna inhibicija PLK4 aktivnosti.

[0011] Još jedno varijantno rešenje iz ovog pronalaska je upotreba 1:1 jedinjenja (I) fumarata ili 1:1 jedinjenja (I) maleata za proizvodnju leka za upotrebu za lečenje subjekta sa kancerom.

[0012] Još jedno varijantno rešenje iz ovog pronalaska je 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat za upotrebu za lečenje subjekta sa kancerom.

[0013] Još jedno varijantno rešenje ovog pronalaska je upotreba 1:1 jedinjenje (I) fumarata ili 1:1 jedinjenje (I) maleat za proizvodnju leka za inhibiciju PLK4 aktivnosti kod subjekta kom je potrebna inhibicija PLK4 aktivnosti.

[0014] Još jedno varijantno rešenje ovog pronalaska je 1:1 jedinjenje (I) fumarata ili 1:1 jedinjenje (I) maleat za inhibiranje PLK4 aktivnosti kod subjekta kom je potrebna inhibicija PLK4 aktivnosti.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

Slika 1 pokazuje termogram analize diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC) za oblik A 1:1 jedinjenja (I) fumarat.

Slika 2 pokazuje DSC termogram za oblik B od 1:1 jedinjenje (I) fumarat.

Slika 3 pokazuje DSC termogram za oblik C od 1:1 jedinjenje (I) fumarat.

Slika 4 pokazuje DSC termogram za oblik D od 1:1 jedinjenja (I) fumarat.

Slika 5 pokazuje DSC termogram za oblik A od 1:1 jedinjenja (I) meleat.

Slika 6 pokazuje DSC termogram za fosfat jedinjenja (I).

Slika 7 pokazuje obrazac rendgenske difrakcije praha (XRPD) za oblik A od 1:1

jedinjenje (I) fumarat.

Slika 8 pokazuje obrazac XRPD za oblik B od 1:1 jedinjenje (I) fumarat.

Slika 9 pokazuje obrazac XRPD za oblik C od 1:1 jedinjenje (I) fumarat.

Slika 10 pokazuje obrazac XRPD za oblik D od 1:1 jedinjenje (I) fumarat.

Slika 11 pokazuje obrazac XRPD za oblik A od 1:1 jedinjenje (I) maleat.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0016] Ovaj pronalazak obezbeđuje 1:1 jedinjenje (I) fumarat, 1:1 jedinjenje (I) maleat, njihove jedinstvene kristalne oblike i njihove odgovarajuće farmaceutske supstance. Takođe, opisuju se postupci za lečenje subjekta sa kancer. Dodatno, ovaj pronalazak obezbeđuje postupke za dobijanje specifičnih kristalnih oblika 1:1 jedinjenja fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat.

Kristalni oblici 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat

[0017] U specifičnom izvođenju, barem određeni procenat težine od 1:1 jedinjenja (I) fumarat ili 1:1 jedinjenja (I) maleat je kristalni. Specifični procenti težine obuhvataju 70%, 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, ili procenta težine 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90%, 90%-95%, 95%-100%, 70-80%, 80-90%, 90-100%. Na primer, u jednom izvođenju, barem 80% (npr., barem 90% ili 99%) težine 1:1 jedinjenja (I) fumarat ili 1:1 jedinjenja (I) maleat ima kristalni oblik. Treba razumeti da su sve vrednosti i opsezi između ovih vrednosti i opsega predviđene da budu obuhvaćene ovim pronalaskom.

[0018] U drugom specifičnom izvođenju, barem specifični procenat težine od 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat je u jednom kristalnom obliku. Specifični procenti težine obuhvataju 70%, 72%, 75%, 77%, 80%, 82%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, ili procenti težine od 70%-75%, 75%-80%, 80%-85%, 85%-90%, 90%-95%, 95%-100%, 70-80%, 80-90%, 90-100%. Na primer, u jednom izvođenju, barem 80% (npr. barem 90% ili 99%) težine 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat ima jedan kristalni oblik. Treba razumeti da sve vrednosti i opsezi između ovih vrednosti i opsega jesu predviđene da budu obuhvaćene ovim pronalaskom.

[0019] Kako se ovde koristi, "kristalni" se odnosi na čvrstu supstancu koja ima strukturu kristala pri čemu pojedinačni molekuli imaju visoko homogenu propisno zaključanu hemijsku konfiguraciju. Kristalno1:1 jedinjenje (I) fumarat i kristalno 1:1 jedinjenje (I) maleat mogu biti kristali jednog kristalnog oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat, ili mešavina kristala različitih oblika jedinog kristalnog oblika. Jedan kristalni oblik znači 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat kao pojedinačni kristal ili više kristala u kojima svaki kristal ima isti oblik kristala.

[0020] Kada specifični procenat težine 1:1 jedinjenja (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenja (I) maleat) ima jedan kristalni oblik, ostatak fumarata (ili 1:1 jedinjenje (I) maleat) je neka kombinacija amorfnog fumarata (ili 1:1 jedinjenje (I) maleat), i/ili oblike jednog ili više kristala jedan ili više kristalnih oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenje (I) maleat) isključujući oblik jednog kristala. Kada se kristal 1:1 jedinjenja (I) fumarat (ili kristal 1:1 jedinjenja (I) maleat) definiše kao precizirani procenat jednog specifičnog kristalnog oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenja (I) maleat), ostatak se pravi od amorfnog oblika i/ili kristalnih oblika koji nisu jedan ili više specifičnih oblika koji se preciziraju. Primeri jednog kristalnog oblika obuhvataju oblik A od 1:1 jedinjenja (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenja (I) maleat) naznačen sa jednim ili više svojstava kako se ovde razmatra.

[0021] 1:1 jedinjenje (I) fumarat (ili 1:1 jedinjenje (I) maleat) je barem 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ili 99,9% prema čistoj težini u odnosu na druge stereoizomere, tj., odnos između težine stereoizomera i težine svih stereoizomera.

Dobijanje kristalnih oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat

[0022] Specifične oblike čvrste supstance koji imaju 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat moguće je pripremiti, na primer, sporim isparavanjem, sporim hlađenjem, i taloženjem protivrastvarača.

[0023] Kako se ovde koristi, "protivrastvarač" se odnosi na rastvarač, u kom 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat ima slabu rastvorljivost i prouzrokuje taloženje fumarata ili maleata iz rastvora u obliku finog praha ili kristala.

[0024] Alternativno, 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat moguće je zatim rekristalizovati iz pogodnog rastvarača sa ili bez dodavanja delića kristala kao semena.

[0025] Taloženje svakog specifičnog čvrstog oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat ili 1:1 jedinjenja (I) maleat je opisano u eksperimentalnom odeljku dole u tekstu.

Karakterizacija kristalnih oblika 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat

[0026] Uzorci su ozračeni bakarnim K-alfa X-zracima sa rendgenskom cevi koja radi na 40 kV/30 mA. U jednom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat je pojedinačan kristalni oblik, oblik A. U specifičnom izvođenju, oblik A 1:1 jedinjenja (I) fumarat se karakteriše obrascem rendgenske difrakcije praha pokazanim na Slici 7. U specifičnijem izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika A se karakteriše obrascem rendgenske difrakcije praha koji obuhvata vršne vrednosti (2 Θ�uglove) na:

a) 9,7°, 16,7°, i 20,1° ± 0,2 u 2 Θ�(glavne vršne vrednosti); ili

b) 8,2°, 9,7°, 16,7°, i 20,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili

c) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 14,9°, 16,7°, 20,1°, i 23,5° ± 0,2 u 2 Θ; ili

d) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 13,6°, 14,9°, 16,7°, 18,1°, 18,8°, 20,1°, 23,5°, i 24,5° ± 0,2 u 2 Θ.

[0027] Glavne vršne vrednosti opisane ovde imaju relativni intenzitet preko 50% u obliku A. Treba razumeti da precizirani 2 Θ�ugao znači preciziranu vrednosti ± 0,2°.

[0028] U drugom specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika A karakterišu vršne vrednosti temperature diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) u fazi tranzicije od 112 °C i 158 °C.

[0029] U jednom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat je kristalni oblik, oblik B. U specifičnom izvođenju, oblik B 1:1 jedinjenja (I) fumarat je karakterisan obrascem rendgenske difrakcije praha prikazanim na Slici 8. U specifičnijem izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika A karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha koji obuhvata vršne vrednosti na:

a) 11,9° i 14,9° ± 0,2 u 2 Θ�(glavne vršne vrednosti); ili

b) 11,9°, 14,9°, 18,7°, i 21,5° ± 0,2 u 2 Θ; ili

c) 5,5°, 5,9°, 11,9°, 14,9°, 16,7°, 17,4°, 18,7°, 21,5°, i 23,4° ± 0,2 u 2 Θ.

[0030] Glavne vršne vrednosti opisane ovde imaju relativni intenzitet preko 75% u obliku B.

[0031] U drugom specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika B karakterišu vršne vrednosti temperature diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) u fazi tranzicije od 58 °C i 162 °C.

[0032] U jednom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat je jedan kristalni oblik, oblik C. U specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika C karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha jednog kristala prikazan na Slici 9. U specifičnijem izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika C karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha koji obuhvata vršne vrednosti na:

a) 16,8°, 16,9°, i 19,9° ± 0,2 u 2 Θ�(glavne vršne vrednosti); ili

b) 9,8°, 16,8°, 16,9°, 19,9°, i 23,5° ± 0,2 u 2 Θ; ili

c) 9,7°, 9,8°, 11,7°, 15,1°, 16,8°, 16,9°, 19,9°, 23,5°, i 23,7° ± 0,2 u 2 Θ.

[0033] Glavne vršne vrednosti opisane ovde imaju relativni intenzitet od preko 75% u obliku C.

[0034] U drugom specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat oblika C karakterišu vršne vrednosti temperature diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) u fazi tranzicije od 62 °C i 156 °C.

[0035] U jednom drugom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat je jedan kristalni oblik, oblik D. U specifičnom izvođenju, oblik D 1:1 jedinjenja (I) fumarat karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 10. U mnogo specifičnijem izvođenju, obrazac rendgenske difrakcije praha oblika D obuhvata vršne vrednosti na:

a) 9,6°, 12,8°, 16,0°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ�(glavne vršne vrednosti); ili

b) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 21,2°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ; ili

c) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 20,8°, 21,2°, 21,5°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ.

d) 9,6°, 11,7°, 12,0°, 12,8°, 16,0°, 16,6°, 16,9°, 18,1°, 19,2°, 19,8°, 20,7°, 20,8°, 21,2°, 21,5°, 22,0°, 22,5°, 24,0°, 26,0°, i 29,8° ± 0,2 u 2 Θ.

[0036] Glavne vršne vrednosti opisane ovde imaju relativni intenzitet preko 85% u obliku D.

[0037] U drugom specifičnom izvođenju, barem 90% težine 1:1 jedinjenja (I) fumarat oblika D karakteriše vršna vrednost temperature diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) u fazi tranzicije od 219°C.

[0038] U još jednom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) maleat je jedan kristalni oblik, oblik A. U specifičnom izvođenju, oblik A 1:1 jedinjenja (I) maleat karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha na Slici 11. U još specifičnijem izvođenju, oblik A 1:1 jedinjenja (I) maleat karakteriše obrazac rendgenske difrakcije praha koji obuhvata vršne vrednosti na:

a) 11,5°, 12,6°, 14,9°, i 15,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili

b) 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1°, i 17,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili

c) 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1°, 17,1°, 18,6°, 23,5°, i 26,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili d) 5,5°, 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,1°, 14,9°, 15,1°, 16,7°, 17,1°, 17,8°, 18,6°, 19,5°, 19,9°, 21,9°, 22,2°, 23,0°, 23,3°, 23,5°, 23,9°, i 26,1° ± 0,2 u 2 Θ.

[0039] Ovde opisane glavne vršne vrednosti imaju relativni intenitet preko 90% u obliku A.

[0040] U drugom specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) maleat oblika A se karakteriše vršna vrednost temperature diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) u fazi tranzicije od 219°C.

[0041] Fumarat so jedinjenja (I) ili maleat so jedinjenja (I) opisanog ovde je ili u amorfnom obliku ili u kristalnom obliku. Fumarat so jedinjenja (I) ili maleat so jedinjenja (I) opisanog u ovom pronalasku obuhvata i nesolvatni oblik i solvatni oblik.

[0042] "Solvatni oblik " se odnosi na čvrstu supstancu ili oblik kristala fumarat soli jedinjenja (I) ili maleat soli jedinjenja (I), pri čemu se rastvarač kombinuje sa fumarat solju jedinjenja (I) ili maleat solju jedinjenja (I) u definisanom odnosu (npr. molarni odnos 1:1 ili 1:2) kao integralni deo čvrste supstance ili kristala.

[0043] "Nerastvoreni oblik" se odnosi na nedefinisan odnos između molekula rastvarača i fumarat soli jedinjenja (I) ili maleat soli jedinjenja (I), i molekul rastvarača nije pretežno (npr. manje od 10% težine) postojao u fumarat soli jedinjenja (I) ili maleat soli jedinjenja (I). Dobro poznati molekuli rastvarača obuhvataju vodu, metanol, etanol, n-pronapol, i izopropanol.

[0044] U ovom pronalasku, oblik A 1:1 jedinjenja (I) fumarat je izopropanol solvat, koji ima molarni odnos od 2:1 između jedinjenja (I) fumarat i izopropanola. Oblik B-D 1:1 jedinjenja (I) fumarat i oblik A 1:1 jedinjenja (I) maleat ovde opisani nisu solvati, tj., svaki je u nesolvatnom obliku.

Postupci za lečenje upotrebom jedinjenja (I) fumarat i jedinjenja (I) maleat

[0045] 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat može inhibirati različite kinaze, uključujući PLK4. Dakle, 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat iz ovog pronalaska su korisni za lečenje bolesti ili stanja povezanih sa takvom kinazom. Na primer, veruje se da je PLK4 uključen u ćelijsku mitotoksičnu progresiju. Dakle, inhibitori malog molekula ovog enzima mogu biti potencijalni antitumorski agensi.

[0046] U specifičnom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat su PLK4 inhibitori, i korisni su za lečenje bolesti, kao što je kancer, povezan sa takvom kinazom.

[0047] Ovde je opisan i postupak za lečenje subjekta sa kancerom, koji obuhvata isporuku tom subjektu delotvorne količine 1:1 jedinjenja (I) fumarat ili 1:1 jedinjenja (I) maleat. U jednom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat suzbija rast tumora. Specifično, 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat inhibira rast tumora koji prekomerno ispoljava PLK4. U jednom drugom izvođenju, 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat inhibira rast tumora uvođenjem apoptoze ćelija tumora ili inhibiranjem proliferacije ćelija tumora.

[0048] Kanceri koje je moguće lečiti ili sprečiti obuhvataju kancer pluća, kancer dojke, kancer debelog creva, kancer mozga, neuroblastom, kancer prostate, melanom, glioblastom multiform, kancer jajnika, limfom, leukemiju, melanom, sarkom, paraneoplaziju, osteosarkom, germinom, gliom i mezoteliom. U jednom specifičnom izvođenju, kancer je kancer pluća, kancer dojke, kancer debelog creva, neuroblastom, kancer prostate, melanom, glioblastom multiform, kancer jajnika, limfom, leukemija, osteosarkom, germinom, gliom, fibrosarkom, gastrointestinalni sarkom, fibrozni histiocitom, sarkom okrugle ćelije, sinovijalni sarkom, kancer grlića materice, anogenitalni kancer, kancer glave i vrata, i orofaringealni kancer. U jednom specifičnom izvođenju, kancer je kancer pluća, kancer debelog creva, kancer mozga, neuroblastom, kancer prostate, melanom, glioblastom multiform ili kancer jajnika. U drugom specifičnom izvođenju, kancer je kancer pluća, kancer dojke, kancer debelog creva, kancer mozga, neuroblastom, kancer prostate, melanom, glioblastom multiform ili kancer jajnika. U drugom specifičnom izvođenju, kancer je kancer pluća, kancer dojke, i kancer debelog creva. U još jednom specifičnom izvođenju, kancer je kancer dojke. U još jednom specifičnom izvođenju, kancer je kancer dojke bazalnog podtipa ili kancer dojke luminalnog B podtipa. U jednom izvođenju, kancer dojke bazalnog podtipa je ER (receptor estrogena), HER2 i PR (receptor progesterona) negativni kancer dojke. U još jednom specifičnom izvođenju, kancer je kancer mekog tkiva. U ovoj oblasti pojam "kancer mekog tkiva" obuhvata tumore izvedene iz bilo kog mekog tkiva u organizmu. Takvo meko tkivo povezuje, nosi, ili oblaže različite strukture i organe tela, uključujući, ali bez ograničenja na, glatki mišić, mišić skeleta, tetive, fibrozna tkiva, masno tkivo, krvne i limfne sudove, perivaskularno tkivo, nerve, mezenhimalne ćelije i sinovijalna tkiva. Dakle, kanceri mekog tkiva mogu biti iz masnog tkiva, mišićnog tkiva, nervnog tkiva, tkiva zgloba, krvnih sudova, limfnih sudova i fibroznih tkiva. Kanceri mekog tkiva mogu biti benigni ili maligni. Generalno, maligni kanceri mekog tkiva se pominju kao sarkomi, ili sarkomi mekog tkiva. Postoji veliki broj tipova tumora mekog tkiva, uključujući lipom, lipoblastom, hibernom, liposarkom, leiomiom, leiomiosarkom, rabdomiom, rabdomiosarkom, neurofibrom, švanom (neurilemom), neurom, maligni švannom, neurofibrosarkom, neurogenski sarkom, čvorasta upala tetive sa sinovijom ili nodularni tenosinovitis (poznat i kao čvorasti tenosinovitis), sinovijalni sarkom, hemangiom, glomusni tumor, hemangiopericitom, hemangioendoteliom, angiosarkom, Kapošijev sarkom, limfangiom, fibrom, elastofibrom, površinska fibromatoza, fibrozni histiocitom, fibrosarkom, fibromatoza, dermatofibrosarkom protuberans (DFSP), maligni fibrozni histiocitom (MFH), miksom, tumor zrnaste (granularne) ćelije, maligni mezenhimomi, sarkom alveolarnog mekog dela, epitelioidni sarkom, sarkom bistre ćelije, i dezmoplastični tumor male ćelije. U specifičnom izvođenju kancer mekog tkiva je sarkom izabran iz grupe koja obuhvata fibrosarkom, gastrointestinalni sarkom, leiomiosarkom, dediferencirani liposarkom, pleomorfni liposarkom, maligni fibrozni histiocitom, sarkom okrugle ćelije, i sinovijalni sarkom.

[0049] Opisan je takođe i postupak lečenja subjekta sa ćelijama tumora, koji obuhvata isporuku subjektu, količine jedinjenja opisanog ovde koja je delotvorna da se smanji efikasno PLK4 aktivnost kod tog subjekta.

[0050] Pojam "delotvorna količina" znači količinu kada je isporučena subjektu koja daje povoljne ili željene rezultate, uključujući kliničke rezultate, npr. inhibira, potiskuje ili smanjuje kancer (npr. kako je određeno kliničkim simptomima, ili količinom ćelija kancera) kod nekog subjekta u poređenju sa kontrolom.

[0051] Kako se ovde koristi, "lečenje subjekta kancerom" obuhvata dostizanje, delimično ili pretežno, jednog ili više od sledećeg: zaustavljanje rasta kancera, smanjenje nivoa kancera (npr. smanjenje veličine tumora), inhibiranje brzine rasta kancera, ublažavanje ili poboljšanje kliničkog simptoma ili indikatora povezanog sa kancerom (kao što je komponenta tkiva ili seruma) ili povećanje dugovečnosti subjekta, i smanjenje verovatnoće da će se kancer ponovo javiti.

[0052] Kako se ovde koristi, pojam "smanjenje verovatnoće ponovne pojave kancera" označava inhibiranje ili odlaganje povratka kancera na ili blizu primarnog mesta i/ili na sekundarnom mestu posle perioda remisije. To takođe znači da je manje verovatno da će se taj kancer vratiti sa terapijom opisanom ovde nego u slučaju odsustva terapije.

[0053] Kako se ovde koristi, pojam "remisija" se odnosi na stanje kancera, pri čemu klinički simptomi ili indikatori povezani sa kancerom nestaju ili ne mogu da budu detektovani, obično pošto je subjekat uspešno lečen terapijom protiv kancera.

[0054] Generalno, delotvorna količina jedinjenja iz ovog pronalaska zavisi od različitih faktora, kao što je dati lek ili jedinjenje, farmaceutska formulacija, ruta isporuke, tip bolesti ili poremećaja, identitet subjekta ili domaćina koji se leči, i slično, ali, bez obzira na to, moguća je rutinsko utvrđivanje od strane stručnjaka u toj oblasti. Delotvornu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska može lako da utvrdi običan stručnjak u ovoj oblasti putem rutinskih postupaka poznatih u ovoj oblasti.

[0055] U jednom izvođenju, delotvorna količina 1:1 jedinjenja (I) fumarat i 1:1 jedinjenja (I) maleat se kreće u opsegu od oko 0,01 do oko 1000 mg/kg telesne težine, alternativno oko 0,05 do oko 500 mg/kg telesne težine, alternativno oko 0,1 do oko 100 mg/kg telesne težine, alternativno oko 0,1 do oko 15 mg/kg telesne težine, alternativno oko 1 do oko 5 mg/kg telesne težine, i kao još jedna alternativa, od oko 2 do oko 3 mg/kg telesne težine. Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da izvesni činioci mogu uticati na dozu neophodnu da se efikasno leči subjekat koji boluje od kancera i ovi činioci obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, ozbiljnost bolesti ili poremećaja, prethodna lečenja, opšte zdravlje i/ili starost subjekta i druge prisutne bolesti.

[0056] Pored toga, režim "lečenja" subjekta sa delotvornom količinom jedinjenja iz ovog pronalaska može da obuhvati jednu isporuku, ili alternativno može obuhvatiti niz primena. Na primer, 1:1 jedinjenje fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat moguće je isporučiti barem jednom nedeljno. Međutim, u drugom izvođenju, jedinjenje može biti isporučeno subjektu od oko jednom nedeljno do jednom dnevno za datu terapiju. Dužina perioda lečenja zavisi od raznovrsnih činioca, kao što je ozbiljnost bolesti, starost pacijenta, koncentracija i aktivnost jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihova kombinacija. Jasno će biti i da je delotvorno doziranje jedinjenja korišćenog za lečenje ili profilaksu moguće povećati ili smanjiti tokom specifičnog režima lečenja ili profilakse. Promene u količini doze mogu kao rezultat imati i postati očigledne standardnim dijagnostičkim ogledima poznatim u ovoj oblasti. U nekim slučajevima, može biti neophodna hronična isporuka.

[0057] Pod pojmom "subjekat" obuhvaćen je sisar, poželjno ljudsko biće, ali može takođe da bude životinja kojoj je potrebno veterinarsko lečenje, itd., kućne životinje (npr. psi, mačke, i slično), životinje sa farme (npr. krave, ovca, svinje, konji, i slično) i laboratorijske životinje (npr. pacovi, miševi, morska prasad, i slično).

[0058] Jedinjenja iz ovog pronalaska moguće je isporučiti pacijentu u različitim oblicima zavisno od izabrane rute isporuke, kao što će razumeti stručnjak u ovoj oblasti. Jedinjenja iz ovog pronalaska moguće je isporučiti, na primer, oralno, parenteralno, bukalno, podlingvalno, nazalno, rektalno, flasterom, pumpom ili transdermalnom isporukom i farmaceutske supstance formulisane u skladu sa tim. Parenteralna isporuka obuhvata intravenozni, intraperitonealni, potkožni, u mišić, transepitelni, nazalni, intrapulomonarni, intratekalni, rektalni i topikalni režim isporuke. Parenteralna isporuka može biti neprekidna infuzija tokom izabranog perioda vremena.

Farmaceutske supstance obuhvataju 1:1 jedinjenje (I) fumarat i 1:1 jedinjenje (I) maleat

[0059] 1:1 jedinjenje (I) fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat ili bilo koji jedan ili više kristalnih oblika opisanih ovde mogu biti pogodno formulisani u farmaceutske supstance za isporuku subjektu.

[0060] U jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku supstancu koja obuhvata 1:1 jedinjenje fumarat ili 1:1 jedinjenje (I) maleat kao što je gore opisano, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač, pri čemu je kristal barem 80% (preporučljivo 90%, još preporučljivije 99%) težine soli.

[0061] Farmaceutske supstance iz ovog opisa opciono obuhvataju jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili razblaživača, kao što je laktoza, skrob, celuloza i dekstroza. Drugi ekscipijenti, kao što su aromatizujući agensi; zaslađivači; i konzervansi, kao što su metil, etil, propil i butil parabeni, takođe mogu biti obuhvaćeni. Potpuniji spiskovi pogodnih ekscipijenata mogu biti pronađeni u Handbook of Pharmaceutical Excipients (5th Ed., Pharmaceutical Press (2005)). Stručnjak u ovoj oblasti će znati kako da se pripreme formulacije pogodne za različite tipove rute isporuke. Uobičajeni postupci i sastojci za odabir i pripremu pogodnih formulacija su opisani, na primer, u Remington’s Pharmaceutical Sciences (2003 - 20th edition) i The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19) objavljenom 1999. Nosači, razblaživači i/ili ekscipijenti su "prihvatljivi" u smislu da su kompatibilni sa drugim sastojcima te farmaceutske supstance i nisu štetni za primaoca.

[0062] Obično, za oralnu terapijsku isporuku, jedinjenje iz ovog opisa moguće je isporučiti sa ekscipijentom i koristiti u obliku tableta koje se gutaju, bukalnih tableta, troheja, kapsula, eliksira, suspenzije, sirupa, vafera, i sličnih.

[0063] Obično za parenteralnu isporuku, rastvori jedinjenja iz ovih opisa mogu generalno da budu dobijeni u vodi pogodno pomešani sa surfaktantom kao što je hidroksipropilceluloza. Disperzije mogu takođe da se pripreme u glicerolu, tečnim polietilen glikolima, DMSO i njihovim mešavinama sa ili bez alkohola, i u uljima. Pod uobičajenim uslovima skladištenja i upotrebe, ovi preparati obuhvataju konzervans da bi se sprečio rast mikroorganizama.

[0064] Obično, pogodni da se koriste za ubrizgavanje su sterilni vodeni rastvori ili disperzija, i sterilni prahovi, ovde opisanog jedinjenja za improvizovano dobijanje sterilnih rastvora ili disperzija koje je moguće ubrizgavati.

[0065] Za nazalnu isporuku, jedinjenja iz ovih opisa moguće je formulisati kao aerosole, kapi, gelove i prahove. Aerosolne formulacije obično sadrže rastvor ili finu suspenziju aktivne supstance u fiziološki prihvatljivom vodenom ili nevodenom rastvaraču i obično su predstavljeni u jednodoznoj ili višedoznim količinama u sterilnom obliku u zaptivenoj posudi, koja može imati oblik patrone ili ju je moguće dopuniti za upotrebu sa uređajem za raspršivanje. Alternativno, zaptivena posuda može biti uređaj za jediničnu raspodelu kao što je nazalni inhalator za jednu dozu ili aerosolni dispenzer sa mernim ventilom koji je predviđen za odlaganje posle upotrebe. Kada dozni oblik obuhvata aerosolni dispenzer, sadržaće i potisni gas koji može biti komprimovan gas kao što je komprimovan vazduh ili organski potisni gas kao što je fluorohlorohidrokarbon. Aerosolni oblici doze mogu takođe imati oblik raspršivača sa pumpom.

[0066] Za isporuku bukalno ili ispod jezika, jedinjenja iz ovih opisa mogu biti formulisana sa nosačem kao što je šećer, akacija, tragakant, želatin i glicerin, kao tablete, lozenge ili pastile.

[0067] Za rektalnu isporuku, jedinjenja opisana ovde moguće je formulisati u obliku supozitorija koje sadrže uobičajenu supozitornu bazu kao što je kako prah.

[0068] Ovaj pronalazak je ilustrovan putem sledećih primera, koje ni na koji način ne treba posmatrati kao ograničenje.

EKSPERIMENTALNI DEO

Skraćenice:

[0069]

BSA benzen sulfonska kiselina

d dana

EtOAc etil acetat

EtOH etanol

h sati

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

IPA izopropanol

IBAc izobutil acetat

MeOH metanol

MIBK metil izobutil keton

min minuta

MTBE metil tert-butiletar

NMR nuklearna magnetska rezonanca

pTSA para toluensulfonska kiselina

RBF laboratorijska posuda okruglog dna

RH relativna vlažnost

Rel. Int. relativni intenzitet

rt sobna temperatura

temp temperatura

TGA termogravimetrijska analizaTHF tetrahidrofuran

wt% procenat težine

XRPD X-rendgenska difrakcija prahom

Uslovi analize

Analiza diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC)

[0070] DSC analize su izvedene na Mettler 822e diferencijalnom skenirajućem kalorimetru ili TA instrumentima Q2000. Uzorci su izmereni u plitkoj aluminijumskoj posudi pokrienoji sa kliznim poklopcem sa rupicama, i zatim krimpovani. Uslovi analize su bili 30-120, 30-200, 30-300 °C i 40-300 °C ograničeni na 10 °C/min.

Toplotna gravimetrijska analiza (TGA)

[0071] TGA analize su izvedene na Mettler 851e SDTA termogravimetrijskom analizatoru.

Uzorci su izmereni u aluminijskoj posudi i analizirani od 30-230, 30-300 i 30-350 °C i pri brzini rampe od 10 °C/min.

Rendgenska difrakcija praha (XRPD)

[0072] Uzorci su analizirani na Panalytical CubiX-Pro rendgenskom difraktometru praha ili Bruker AXS/Siemens D5000 difraktometru.

[0073] Panalytical uslovi: Uzorci su postavljeni na silikon nula-povratni ultra-mikro držač uzorka. Uzorci su ozračeni bakarnim K-alfa rendgenskim zracima sa rendgenskom cevi koja radi na 40 kV/30 mA. Uzorci su skenirani u kontinualnom režimu duž opsega 3 do 45°.

Bruker AXS/Siemens D5000 uslovi: Korišćen je Cu-target visoke snage za rad pri 50kV/35mA. Sekundarni snop je monohromatizovan putem Kevex detektora čvrstog stanja. Uzorci su skenirani duž opsega 2 - 35° (2 σ) pri čemu nastaju reprezentativne vršne vrednosti za većinu organskih kristalnih jedinjenja.

Gravimetrijska sorpcija vlage

[0074] Eksperimenti sa gravimetrijskom sorpcijom vlage su izvedeni na dinamičkom analizatoru sorpcije isparenja Hiden tako što je uzorak prvo držan na 40% RH i 25 °C sve dok nije dostignuta težina ravnoteže ili maksimalno četiri sata. Uzorci su zatim podvrgnuti proveri na izotermičku (25 °C) adsorpciju od 40 do 90% RH u koracima od 10%. Uzorci su ostavljeni da se uravnoteže na asimptotsku težinu u svakoj tački tokom maksimalno četiri sata. Posle adsorpcije, provera za desorpciju od 85 do 5% RH (na 25 °C) je izvedena u koracima -10% što je ponovo ostavilo maksimalno četiri sata za izjednačavanje na asimptotsku težinu. Provera adsorpcije je zatim izvedena od 0% RH do 40% RH u koracima od 10%RH.

Ramanova spektroskopija

[0075] Uzorci za Ramanovu analizu su analizirani na makroskopu Kaiser RXN1 Macroscope makroskopu sa sondom PhAT Probe. Dobijene čvrste supstance iz kristalizacija sa ploče od 96 pregrada su analizirane korišćenjem sledećih uslova:

Ramanov izvor: 785 nm laserski

Objektiv mikroskopa 1,2 mm

Jednokratno vreme izlaganja: 12 sek

Zajednička dodavanja: 12

Omogućene opcije ekspozicije: Cosmic Ray filtriranje, tamno oduzimanje, intenzitet kalibracije

Optička mikroskopija

[0076] Uzorci su ispitani sa mikrosokopom Leica DMRB sa polarizovanim svetlom u kombinaciji sa digitalnom kamerom (1600 ± 1200 rezolucija). Male količine uzoraka su naprskane na mineralno ulje na kliznom staklu sa pokrivnim stakalcima i pregledani sa uvećanjem od 100x, ili većim.

Dvostruka refrakcija

[0077] Uzorci za analizu dvostrukom refrakcijom su analizirani na skeneru sa dvostrukom refrakcijom Coleman Technologies. Dobijene čvrste supstance kristalizacija sa ploče od 96 pregrada su analizirane korišćenjem sledećih uslova:

Osvetljenje: 37

Ekspozicija: 57,9

Polarizacija: 0,0

Dobar prečnik maske:6.2

Ciljni intenzitet: 80

Ciljni procenat: 90.0

Maksimalni srednji

intenzitet: 100

Nuklearna magnetna rezonanca

[0078] Uzorci za NMR protona su analizirani korišćenjem spektrometra Bruker 400 MHz.

Primer 1: Kombinatorno proveravanje soli

[0079] Proveravanje soli je izvedeno korišćenjem šest rastvarača (IPA, THF, aceton, acetonitril, EtOH i EtOAc) i dvadeset osam farmaceutski prihvatljivih kiselina (HCl, HBr, H3PO4, H2SO4, CH3SO3H, pTSA, BSA, naftalen sulfonska kiselina, etan sulfonska kiselina, metan sulfonska kiselina, adipinska kiselina, etan disulfonska kiselina, maleinska kiselina, benzojeva kiselina, L-jabučna kiselina, limunska kiselina, L-mlečna kiselina, hipurinska kiselina, L-piroglutaminska kiselina, sukcinska kiselina, L-tartarna kiselina, mravlja kiselina, fumarna kiselina, glutarna kiselina, L-askorbinska kiselina, sorbinska kiselina, benzojeva kiselina, i malonska kiselina). Ploča sa 96 pregrada je napunjena sa 200 µL od 20 mg/mL rastvora jedinjenja (I) u MeOH u svakoj pregradi. Rastvarač je zatim ispario pod protokom azota, ostavljajući približno 4 mg početnog materijala u svakoj pregradi. Primarni rastvarač koji je predmet interesovanja je zatim dodat u svaku pregradu (500 µL). Ploče su zagrejane do 50 °C i mešane magnetski tokom 10 min da bi se osiguralo potpuno rastvaranje A. Svaka pregrada je zatim napunjena sa naznačenim kontrajonskim rastvorom u količini koja odgovara 1,05 ekvivalenta svake kiseline i ostavljena da se izjednači na temperaturi tokom 10 min. Ploče su zatim ohlađene na 20 °C/h do 25 °C, u kojoj tački je glavna ploča je dobila ćerku-ploču prenosom 200 µL iz svake pregrade u ploču za isparavanje. Ploče su zatim ohlađene do temperature okoline, čuvane preko noći na 5 °C i proverene za prisustvo čvrstih supstanci. Rastvarač iz glavnih ploča je zatim uklonjen ispuštanjem sa upijajućim papirom. Glavna ploča i ploče za isparavanje su zatim osušene pod azotom tokom noći. Pregrade koje su sadržale čvrsti materijal su zatim ocenjene i rangirane za dvostruku refrakciju, jedinstveni Ramanov spektar i graničnu rastvorljivost. Kombinacije pogodnog rastvarača i kontrajona su zatim ponovo procenjene za formiranje soli sa A pri povećanoj skali.

Primer 2: Stvaranje intermedijarnih naslaga soli

[0080] Približno 40 mg jedinjenja (I), je izmereno u 8 mL bočicu koja obuhvata magnetni štap za mešanje. Bočica, primarni rastvarač je dodata da bi se osiguralo rastvaranje pri povišenoj temperaturi. Posle rastvaranja, 1,05 ekvivalenta kiseline je dodato ukapavanjem kao 0,125, 0,25 ili 0,5 M rastvor. Sve mešavine su ostavljene da se mešaju na povišenoj temperaturi tokom 15 min. posle čega je usledilo hlađenje do sobne temperature pri brzini od 10 °C/sat i mešanje tokom noći. Uzorci koji nisu ispoljili taloženje posle hlađenja su sastrugani lopaticom da bi se indukovala nukleacija i sačuvali u zamrzivaču na -10 do -20 °C. Bočice su pregledane za rast kristala posle 1 sat. Uzorci iz uslova koji su omogućili čvrste supstance su centrifugirani, filtrirani ili isparavani pod azotom. Svi drugi uzorci su ostavljeni da se izjednače na -20°C tokom 72 sata. Bočice koje nisu pokazale taloženje su zatim osušene pod azotom. Čvrste supstance dobijene kao rezultat su zatim emulzifikovane sa IPA tokom 5 dana. Iz ovih eksperimenata, samo su amorfne čvrste supstance indentifikovane za sve kontrajone izuzev za so. Jedinstveni polimorfni oblici soli jedinjenja (I) fumarata su opisani dole u tekstu.

Dobijanje kristalnih soli jedinjenja (I)

Primer 3: Dobijanje oblika A 1:1 jedinjenja (I) fumarat

[0081] Jedinjenje (I) (42 mg, 0,078 mmol) je rastvoreno u acetonitrilu (0,5 mL) i zagrejano do 50 °C. Fumarna kiselina (0,33 mL od 0,25M rastvor u IPA) je dodat i mešavina je mešana tokom 15 min. Talog je filtriran i određen da bude amorfan usled nedostatka primetne dvostruke refrakcije. Amorfna čvrsta supstanca je zatim emulzifikovana sa IPA (0,5 mL) tokom 5 dana. Čvrsta supstanca je dobijena iz emulzije je pokazala dvostruku refrakciju i dalje je karakteristna kao IPA solvat putem XRPD, DSC,<1>H NMR i TGA i označila je oblik A fumarata.

Tabela 1. XRPD fumarata, oblik A

Primer 4: Dobijanje oblika B 1:1 jedinjenje (I) fumarat

[0082] Rastvaranje oblika A fumarata vakuumskim sušenjem na 60 °C tokom 2 dana je dalo kao rezultat kristalni materijal sa DSC termogramom i XRPD naznačen kao oblik B. Oblik B je takođe moguće pripremiti direktno putem rastvaranja amorfne mono fumarat soli u EtOAc i zasejavanje sa oblikom B kristala. Gravimetrijska sorpcija vlage ukazuje da je oblik soli higroskopski i formira tetrahidrat pri 90%RH.

Tabela 2. XRPD fumarata, oblik B

Primer 5: Dobijanje oblika C 1:1 jedinjenja (I) fumarat

[0083] Treći polimorf fumarata moguće je dobiti rastvaranjem amorfne fumarat soli u THF i zasejavanjem sa kristalima fumarata oblika B. Rastvarač je polako isparavao do bele čvrste supstance koja je ispoljila obrazac XRPD i Ramanov spektar drugačiji od oblika B i označena je kao fumarat oblika C.

Tabela 3. XRPD fumarat, oblik C

Primer 6: Dobijanje oblika D 1:1 jedinjenja (I) fumarat

[0084] Emulzifikovanje fumarata oblika C sa acetonitrilom tokom 10 dana na sobnoj temperaturi je dalo kao rezultat tranziciju u novi kristalni oblik, i označilo je oblik D, koji je pokazao distinktivan Ramanov spektar i obrazac XRPD. Faza tranzicije je putem DSC bila mnogo viša nego drugi oblici i pokazala je da je identifikovana najviša stabilnost četiri polimorfa. Oblik D može biti direktno pripremljen kao što je opisano u nastavku: Trogrla tikva od 250-mL RBF opremljena štapićem za mešanje je napunjena jedinjenjem (I) (6,01 g, 11 mmol) i fumarnom kiselinom (1,41 g, 12 mmol). Aceton (50 mL) je dodat i emulzija je zagrejana do 50 °C sve dok rastvor nije postao bistar. Taloženje je primećeno posle 10 min, i mešanje je nastavljeno još dodatnih 30 min. MTBE (25 mL) je dodat u rastvor je ohlađen do sobne temperature i mešan tokom noći. Čvrsta supstance su filtrirane i osušene pod vakuumom na 60 °C tokom 2 dana da bi se dobilo jedinjenje (I) iz naslova kao bela čvrsta supstanca (6,65 g, 91%).1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ�8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.50-7.45 (m, 5H), 7.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 2H), 6.60 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 5.58 (s, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.82-3.78 (m, 2H), 3.36 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.13-3.10 (m, 2H), 2.34 (t, J = 11.4 Hz, 2H), 2.25-2.16 (m, 2H), 1.01 (d, J = 6.0 Hz, 6H).

T

[0085] So fumarne kiseline može biti generisana kao oblik D pod različitim uslovima. Kristalni oblik moguće je generisani kroz zasejavanje oblika B ili D sa kristalima kako je prikazano u Tabeli 5. So može da bude kristalizovana direktno rastvaranjem roditeljskog jedinjenja (I) u polarnim rastvaračima kao što je etil acetat, aceton ili etanol i isporučivanje fumarne kiseline u polarnim rastvaračima kao što je metanol, etanol, THF i izopropanol, kao što je prikazano u Tabeli 6. Prinosi su generalno poboljšani kada se doda protivrastvarač, kao što je MTBE. Uslovi koji ne daju oblik D obuhvataju kada se jedinjenje (I) rastvori u manje polarnim rastvaračima kao što je acetonitril, 2-metiltetrahidrofuran i metilizobutil keton. Takođe, dodavanje heksana kao protivrastvarača ne pospešuje kristalni oblik D.

[0086] Preporučeni oblik D moguće je takođe generisati rastvaranjem jedinjenja (I) u odgovarajućem rastvaraču, kao što je metanol, etanol, THF ili aceton i isporuku fumarne kiseline direktno kao čvrstu supstancu, kao što se vidi u Tabeli 7. Prinosi su poboljšani kada se doda protivrastvarač kao MTBE ili IBAc. Oblik D se ne izvodi ovim postupkom kada je primarni rastvarač manje polaran, kao što je slučaj sa etil acetatom i MTBE.

[0087] 2:1 jedinjenje (I)/ fumarna kiselina kristalna so nije bilo moguće generisati. Dva ekvivalenta jedinjenja (I) je rastvoreno u primarnom rastvaraču kao što je EtOAc, EtOH, THF, IPA i jedan ekvivalent fumarne kiseline je dodat kao čvrsta supstanca, ili u rastvoru sa IPA ili EtOH. Rastvori dobijeni kao rezultat su zagrejani do 50°C tokom 30 min i ohlađeni do sobne temperature. MTBE je dodata i mešavina je emulzifikovana tokom 24 sata. Karakterizacija i čvrste supstance i filtrata putem<1>H NMR je otkrila samo da je dobijeno 1:1 jedinjenje (I)/ fumarat so.

Tabela 5. Kristalizacija soli fumarata sa zasejavanjem

Tabela 6. Kristalizacija soli fumarata

Tabela 7. Kristalizacija sa fumarnom kiselinom dodatom kao čvrsta supstanca

Ponovno sabiranje kombinatornih rezultata analize soli

[0088] Iz ovog početnog postupka kombinacije, samo je so fumarata identifikovana kao kristalna. Rezultati pregleda sa visokim učinkom su ponovo procenjeni i novi rezultati su generisani i bili su nezavisni od rastvarača za svaki kontrajon. Ovo ponovno ocenjivanje je nastavljeno za različite soli kombinovanjem prethodnih ocena (vizuelni pregled formiranja čvrste supstance, dvostruku refkraciju, jedinstvenost putem Ramanovog spektra i graničnu rastvorljivost) u svim rastvaračima i sabiranje kako za glavne ploče tako i za ploče za isparavanje. Dve kiseline koje su imale najviše ponovne ocene, maleinska i metan sulfonska kiselina, su dodatno procenjene u uslovima dodatnog rastvarača i protivrastvarača. Soli dobijene iz metan sulfonske kiseline su ispoljile higroskopnost. Međutim, identifikovana je kristalna so sa maleinskom kiselinom. Dole u tekstu je opisano dobijanje i karakterizacija soli maleata jedinjenja A.

Primer 7: Dobijanje oblika A 1:1 jedinjenja (I) maleat

[0089] U trogrlu tikvu okruglog dna od 250 mL koja ima i štapić za mešanje je sipano jedinjenje (I) (4,96 g, 9,3 mmol). Aceton (55 mL) je dodat i zagrejan do 50 °C. Dodata je maleinska kiselina (20 mL od 0,5 M rastvora u acetonu) što je dalo kao rezultat bistar rastvor koji je postao zamućen posle 1 min. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i mešan tokom 24 sata kao gusta emulzija. Čvrste supstance su filtrirane, oprane sa MTBE i osušene tokom 30 sati na 60 °C pod vakuumom da bi se dobila bela čvrsta supstanca (5,52 g, 91%). So je karakterisana kao kristalna putem XRPD i označena oblikom A.

<1>H NMR (CD3OD) δ: 8.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.45 - 7.61 (m, 5H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.62 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 6.27 (s, 2H), 5.59 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.86-3.82 (m, 2H), 3.34-3.43 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.74-2.68 (m, 2H), 2.32-2.10 (m, 2H), 1.23 (d, J = 6.3 Hz, 6H).

Tabela 8. XRPD maleata, oblik A

[0090] Maleat oblika A moguće je generisati iz polarnog rastvarača, kao što je EtOH, aceton, izopropil acetat, etil acetat, izopropanol ili THF sa ili bez dodavanja nepolarnog protivrastvarača, kao što je MTBE. kristalnu so 2:1 jedinjenja (I)/maleinske kiseline nije bilo moguće generisati.

Dobijanje amorfnih soli jedinjenja (I)

Primer 8: Dobijanje HCl soli jedinjenja (I)

[0091] Jedinjenje (I) (6,7 g, 12,5 mmol) je rastvoreno u THF (25 mL) i 1M HCl u etru (13,8 mL, 13,8 mmol) je dodato na sobnoj temperaturi i rastvor je razblažen sa etrom (200 mL). Mešavina je čuvana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i filtrirana čvrsta supstanca je dobijena kao rezultat. Čvrsta supstanca posle nekog perioda formira gel i rastvorena je u vodi (100 mL) i osušena zamrzavanjem u žuti prah (5,8 g, 81%).

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ�7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.35 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.28 (s, 2H), 3.92-3.80 (m, 2H), 3.40-3.30 (m, 2H), 3.27 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.70 (t, J = 11.4 Hz, 2H), 2.15-2.05 (m, 2H), 1.18 (d, J = 6.0 Hz, 6H).

Primer 9: Dobijanje soli fosfata jedinjenja (I)

[0092] Jedinjenje (I) (148 mg, 0,27 mmol) je rastvoreno u EtOAc (0,5 mL) i 0,5 M fosforne kiseline u EtOAc (0,58 mL, 0,28 mmol) je dodato na 50 °C i rastvor je mešan tokom 15 min i ohlađen do sobne temperature. Čvrste supstance su filtrirane i osušene tokom 4 dana na 60 °C da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (I) kao bela čvrsta supstanca (149 mg, 85%).

<1>H NMR (CD3OD) δ�8.00 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.49-7.58 (m, 5H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.97-3.89 (m, 2H), 3.34 - 3.39 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.55 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.16-2.26 (m, 2H), 1.19 (d, J = 6.0 Hz, 6H).

Test rastvorljivosti i postupci farmakokinetičke analize:

[0093] Jedna oralna doza u rastvoru i kao prah u kapsuli od HCl so jedinjenja (I), fumarat oblika D i maleat oblika A su isporučeni ženkama Sprag-Dauli (Sprague-Dawley) pacova u dozi od 5 mg/kg. Uzorci krvi su uzeti u prisustvu litijum heparina, i centrifugirani da se generiše plazma. Plazma je zatim analizirana za nivoe jedinjenja (I) u plazmi putem LC/MS.

Dobijanje probnog artikla za doziranje kapsulama za pacove:

[0094] Sve životinje uključene u raspored doziranja su izmerene i dodeljeni su im brojevi. Sve kapsule (Veličina 9 od tvrdih kapsula napravljenih od svinjskog želatina, Torpac) odgovarajuće svakoj životinji kojoj treba isporučiti dozu su pažljivo označene brojevima sa finim vrhom Sharpie. Mala plastična posuda za merenje je postavljena na vagu, sa jednim poklopcem kapsule postavljenim na posudu i bazom uređaja za punjenje kapsule sa drugim delom kapsule je napunjen u rezervoar. Ravnoteža je tarirana. Levak je postavljen na vrh uređaja za punjenje kapsule i ukupna masa je pažljivo zabeležena. Deo 4"x4" voštanog papira je savijen na pola što je stvorilo nabor niz srednji deo. Mala količina fino samlevenog jedinjenja (samleti jedinjenje ako je neophodno korišćenjem avana i tučka) je odložena u nabor voštanog papira i ponovo je presavijen. Presavijen voštani papir je pažljivo stavljen pod ugao iznad aparata sa levkom za punjenje kapsule. Fina kapsula je korišćena da se istisne količina praha jedinjenja iz nabora u levak što omogućava da iscuri u mesto utovara i na kraju kapsulu. Zabeležena je razlika u masi od ukupne mase . Levak za punjenje kapsule je uklonjen i vrata za ravnotežu zatvorena da bi se proverila apsolutna težina jedinjenja unutar te kapsule. Levak je vraćen na aparat za punjenje kapsule i punjenje je nastavljeno sve dok željena količina leka nije bila unutar te kapsule. Napomena: Prilikom dodavanja malih količina u kapsulu, samo je iščetkan fin lek u prahu koji je stavljen u levak u stubu za punjenje. Levak je uklonjen i težina je registrovana. Izračunata količina stvarnog leka umnožavanjem izmerenog materijala putem odnosa bioekvivalentnosti. Količina stvarnog leka je registrovana. Poklopac kapsule na posudi za merenje je korišćen da zatvori tu kapsulu nepropusno sve dok ne nalegne na pravo mesto.

[0095] Sve životinje (n= 3/grupi) su dozirane oralno u količini od 5 mL/kg. Posle doziranja, za svakog pacova je uzet uzorak krvi u svakoj od naznačenih vremenskih tački. Za kontrolne životinje, krv je prikupljena istim postupkom. Krv je prikupljena iz bočne safenozne vene. Alikvoti krvi ( ~50 µL) su prikupljeni u epruvete obložene litijum heparinom, pomešane pažljivo, i čuvane na ledu i centrifugirane na 2.500 xg tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi, u roku od 1 sata od prikupljanja. Sloj plazme je prikupljen, držan na ledu i konačno održavan zamrznut na -80 °C sve do dalje prerade.

Bioanalitički postupci

[0096] Izvedena je bioanalitička kvantifikacija korišćenjem HPLC/tandem četvorostruke masene spektrometrije (HPLC-MS). Koncentracije u plazmi i T1/2su izračunate i prijavljeni.

Plazma ogled:

[0097] Količina od 5 mg/mL standardnog rastvora u DMSO je rastvorena 100-struko i naknadno je serijski razblažena u 50% DMSO. Alikvoti (2 µL) od nekoliko razređenja su pomešani sa 18 µL kontrolne plazme (20 µL ukupno) za upotrebu kao standardna krivulja. Uzorci plazme (20 µL) i standardni uzorci su zatim razblaženi 5x sa ledeno hladnim acetonitrilom koji sadrži 100 ng/mL verapamila kao internim standardom (80% (v/v) acetonitril). Uzorci sa nataloženim acetonitrilom i standardni su filtrirani kroz 0,22 µm membrane i na formatu ploče sa 96 pregrada. Filtrati su zatim razblaženi sa vodom do 30% acetonitrila.

Ogled sa dozom:

[0098] Rastvor za doziranje (100 µL) je razblažen sa DMSO (900 µL) da bi se osigurala homogenost uzorka. Razblaživanje rastvora dobijenog kao rezultat u 30% acetonitrila (koji je sadržao interni standard) je zatim izvedeno trostruko da bi se dovela nominalna koncentracija do manje od 500 ng/mL, što je pogodno za LC-MS analizu. Serijsko razblaženje od 5 mg/mL DMSO koncentrovanog rastvora, u 30% acetonitrila (je sadržao interni standard) je dalo pogodnu standardnu krivulju. Uzorci i standardi (10 µL) su ubrizgani u LC-MS sistem, kako je opisano dole u tekstu. Koncentracije rastvora doze su prikazane u mg/mL.

LC-MS analiza:

[0099] LC: 10 µL svakog uzorka i standarda su ubrizgani u Waters Acquity CSH 1,7 µm 2,1x100 mm stuba pri 0,6 mL/min pomoću Acquity UPLC. Ta C18 kolona je izjednačena na 10% acetonitrila. Jedinjenja su eluirana sa gradijentom do 99% acetonitrila. Sve mobilne faze su sadržale 0,1% (v/v) mravlje kiseline. Hromatografsko eluiranje:

[0100] MS: Eluent kolone je analiziran jonizacijom elektroraspršivanjem na tandem četvrostrukomi sistemu masenog spektra (Waters Xevo TQ). Sastav eluenta je analiziran za tri jonska para specifična za interni standard i tri jonska para specifična za taj analit.

Farmakokinetičke analize

[0101] Eksperimentalni uzorci su upoređeni sa standardnim uzorcima krivulje da bi se odredile koncentracije jedinjenja. Prosečne koncentracije jedinjenja (u µg/mL /- standardno odstupanje) su prijavljene za svaku vremensku tačku. Ograničenje detekcije (LLOQ) je prijavljeno kao najniži standardni uzorak krivulje koji pokazuje odstupanje manje od 20 % nominalne koncentracije. PK analiza je izvedena putem Excel plugin PKfit; Cmakssu određene kao maksimalna prosečna koncentracija primećena u datoj vremenskoj tački; površina pod krivuljom (AUC) je prijavljena za do dva do tmaksimalnogsati. Poluvekovi trajanja plazme su prijavljeni kada je minimalno 3 terminalne vremenske tačke prikazalo eliminaciju prvog reda sa r<2>>0,8.

[0102] Kako je prikazano u Tabeli 9, kristalne soli jedinjenja (I) su se pokazale manje rastvorljivim u dejonizovanoj vodi u poređenju sa amorfnim fosfatom i HCl solima. U brojnim prijavljenim slučajevima, povećana rastvorljivost amorfnih soli daje kao rezultat povećanje koncentracija plazme u odnosu na stabilniji kristalni oblik (Hancock and Parks (2000) Pharm. Res. 17: 397-404; Pudipeddi and Serajuddin (2005) J. Pharm. Sci. 94: 929-39). Međutim, kada su upoređeni profili vremena koncentracije plazme i farmakokinetički parametri amorfnih i kristalnih soli posle oralnog doziranja kao prah u kapusli (PIC) kod ženki Sprag- Dauli pacova, razlika u farmakokinetičkim parametrima je bila minimalna (Tabela 10).

Tabela 9: Sažetak karakterizacije soli jedinjenja (I)

Tabela 10: Farmakokinetički parametri posle PO isporuke jedinjenja (I) soli, praška u kapsuli, pacovima sorte Sprag-Dauli (Sprague- Dawley)

Claims

Patentni zahtevi 1. Fumarat so jedinjenja (I) je predstavljena sledećom strukturnom formulom:

Jedinjenje (I) pri čemu je molarni odnos između jedinjenja (I) i fumarne kiseline 1:1.
2. Fumarat so iz patentnog zahteva 1, pri čemu je barem 80% težine soli u jednom kristalnom obliku.
3. Fumarat so iz patentnog zahteva 1 ili 2, pri čemu je barem 99% težine soli u jednom kristalnom obliku.
4. Fumarat so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-3, pri čemu je barem 90% težine fumarat soli jedan kristalni oblik A, naznačen time što obrazac rendgenske difrakcije na prahu (XRPD) ima vršne vrednosti na: a) 9,7°, 16,7°, i 20,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili b) 8,2°, 9,7°, 16,7°, i 20,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili c) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 14,9°, 16,7°, 20,1°, i 23,5° ± 0,2 u 2 Θ; ili d) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 13,6°, 14,9°, 16,7°, 18,1°, 18,8°, 20,1°, 23,5°, i 24,5° ± 0.2 u 2 Θ.
5. Fumarat so iz bilo kod od patentnih zahteva 1-3, pri čemu barem 90% težine fumarat soli jeste jedan kristalni oblik, oblik B, naznačen time što obrazac rendgenske difrakcije na prahu (XRPD) ima vršne vrednosti na: a) 11,9° i 14,9° ± 0,2 u 2 Θ; ili b) 11,9°, 14,9°, 18,7°, i 21,5° ±0,2 u 2 Θ; ili c) 5,5°, 5,9°, 11,9°, 14,9°, 16,7°, 17,4°, 18,,7°, 21,5°, i 23,4° ± 0,2 u 2 Θ.
6. Fumarat so iz bilo kog patentnog zahteva 1-3, pri čemu 75-80% težine fumarat soli jeste jedan kristalni oblik C, naznačen time što obrazac rendgenske difrakcije praha obuhvata vršne vrednosti na: a) 16,8°, 16,9°, i 19,9° ± 0,2 u 2 Θ; ili b) 9,8°, 16,8°, 16,9°, 19,9°, i 23,5° ± 0,2 u 2 Θ; ili c) 9,7°, 9,8°, 11,7°, 15,1°, 16,8°, 16,9°, 19,9°, 23,5°, i 23,7° ± 0,2 u 2 Θ.
7. Fumarat so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-3, pri čemu barem 90% težine fumarat soli jeste jedan kristalni oblik oblik D, naznačen time što obrazac rendgenske difrakcije praha obuhvata vršne vrednosti na: a) 9,6°, 12,8°, 16,0°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ; ili b) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 21,2°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ; ili c) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 20,8°, 21,2°, 21,5°, i 22,0° ± 0,2 u 2 Θ. d) 9,6°, 11,7°, 12,0°, 12,8°, 16,0°, 16,6°, 16,9°, 18,1°, 19,2°, 19,8°, 20,7°, 20,8°, 21,2°, 21,5°, 22,0°, 22,5°, 24,0°, 26,0°, i 29,8° ± 0,2 u 2 Θ.
8. Fumarat so iz bilo kod od patentnih zahteva 1-4, pri čemu barem 90% težine fumarat soli jeste jedan kristalni oblik A, naznačen time što diferencijalni skenirajući kalorimetar (DSC) dostiže u fazi tranzicije vršne vrednosti temperatura od 112 °C i 158 °C.
9. Fumarat so iz bilo kog od patentnh zahteva 1-3, i 5, pri čemu barem 90% težine soli fumarata jeste jedan kristalni oblik B, naznačen time što diferencijlni skenirajući kalorimetar (DSC) u fazi tranzicije dostiže vršne vrednosti temperatura od 58 °C i 162 °C.
10. Fumarat so prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, i 6, pri čemu barem 90% težine fumarat soli jeste jedan kristalni oblik C, naznačen time što diferencijalni skenirajući kalorimetar (DSC) dostiže u fazi tranzicije vršne vrednosti temperatura od 62 °C i 156 °C.
11. Fumarat so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-3, i 7, pri čemu barem 90% težine soli fumarata jeste jedan kristalni oblik D, naznačen time što diferencijlni skenirajući kalorimetar (DSC) u fazi tranzicije dostiže vršne vrednosti temperatura od 219°C.
12. Maleat so jedinjenja (I) je predstavljena sledećom strukturnom formulom:

Jedinjenje (I) pri čemu je molarni odnos između jedinjenja (I) i maleinske kiseline 1:1.
13. Maleat so iz patentnog zahteva 12, pri čemu barem 90% težine soli jeste u jednom kristalnom obliku.
14. Maleat so iz patentnog zahteva 12 ili 13, pri čemu barem 99% težine soli jeste u jednom kristalnom obliku.
15. Maleat so iz bilo kog od patentnih zahteva 12-14, pri čemu barem 90% težine maleat soli jeste jedan kristalni oblik A, naznačen time što obrazac rendgenske difrakcije praha obuhvata vršne vrednosti na: a) 11,5°, 12,6°, 14,9°, i 15,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili b) 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1°, i 17,1° ± 0,2 u 2 Θ; ili c) 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1°, 17,1°, 18,6°, 23,5°, i 26,1° ± 0,2 u 2 Θ; d) 5,5°, 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,1°, 14,9°, 15,1°, 16,7°, 17-1°, 17,8°, 18,6°, 19,5°, 19,9°, 21,9°, 22,2°, 23,0°, 23,3°, 23,5°, 23,9°, i 26,1° ± 0,2 u 2 Θ.
16. Maleat so iz bilo kog od patentnih zahteva 12 -15, pri čemu barem 90% težine maleat soli jeste jedan kristalni oblik A, naznačen time i diferencijalni skenirajući kalorimetar (DSC) u fazi tranzicije dostiže vršne vrednosti temperatura od 219°C.
17. Farmaceutska supstanca obuhvata fumarat so iz bilo kog od patentnih zahteva 1-11 ili maleat so iz bilo kog patentnih zahteva 12-16, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač, pri čemu barem 80% težine soli ima kristalni oblik.
18. So iz bilo kog od patentnih zahteva 1-16 ili njena farmaceutska supstanca za upotrebu za lečenje kancera, poželjno, kancera izabranog iz grupe koja obuhvata kancer pluća, kancer dojke, kancer debelog creva, neuroblastom, kancer prostate, melanom, glioblastom multiform, kancer jajnika, limfom, leukemiju, osteosarkom, germinom, gliom, fibrosarkom, gastrointestinalni sarkom, vlaknasti histiocitom, sarkom okrugle ćelije, sinovijalni sarkom, kancer grlića materice, anogenitalni kancer, kancer glave i vrata, i orofaringealni kancer.
19. So za upotrebu iz patentnog zahteva 18, pri čemu se kancer bira iz grupe koja obuhvata kancer pluća, kancer dojke i kancer debelog creva, poželjno, kancer je kancer dojke.