EA031569B1

EA031569B1 - Солевые и кристаллические формы ингибитора plk-4

Info

Publication number: EA031569B1
Application number: EA201690755A
Authority: EA
Inventors: Питер Брент Сампсон; Миклос Фехер; Хайнц В. Паулс
Original assignee: Юниверсити Хелс Нетуорк
Priority date: 2013-10-18
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2019-01-31
Also published as: ME03377B; CA2926845A1; US9884855B2; US20160264559A1; IL245038B; CN105764899A; LT3057965T; EP3057965A4; CY1121484T1; WO2015054793A1; MX359069B; HRP20190564T1; SI3057965T1; JP2016537326A; RS58413B1; US10472353B2; SG11201602783SA; US20210269428A1; PT3057965T; EP3057965A1

Abstract

Раскрыты фумаратная соль и малеатная соль соединения (I), представленного приведенной ниже структурной формулой, а также соответствующие фармацевтические композиции на их основе. Конкретные монокристаллические формы 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) характеризуются рядом свойств и физических параметров. Также раскрыты способы получения монокристаллических форм 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I). Настоящее изобретение также относится к способам лечения субъекта со злокачественной опухолью.

Description

Настоящее изобретение относится к способу ингибирования активности PLK4 у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности PLK4, предусматривающему введение субъекту эффективного количества 1: 1 фумарата соединения (I) или 1: 1 малеата соединения (I).

Настоящее изобретение также относится к 1:1 фумарату соединения (I) или 1: 1 малеату соединения (I) для применения в лекарственной терапии. В соответствии с одним вариантом осуществления лекарственная терапия предназначена для лечения субъекта со злокачественной опухолью. В качестве альтернативы, терапия предназначена для ингибирования активности PLK4 у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности PLK4.

- 1 031569

Другим аспектом по настоящему изобретению является применение 1:1 фумарата соединения (I) или 1: 1 малеата соединения (I) для производства лекарственного препарата для лечения субъекта со злокачественной опухолью.

Другим аспектом по настоящему изобретению является 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I) для лечения субъекта со злокачественной опухолью.

Другим аспектом по настоящему изобретению является применение 1:1 фумарата соединения (I) или 1:1 малеата соединения (I) для производства лекарственного препарата для ингибирования активности PLK4 у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности PLK4.

Другим аспектом по настоящему изобретению является 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I) для ингибирования активности PLK4 у субъекта, нуждающегося в ингибировании активности PLK4.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показана термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) для формы А 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 2 показана термограмма (DSC) для формы В 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 3 показана термограмма (DSC) для формы С 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 4 показана термограмма (DSC) для формы D 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 5 показана термограмма (DSC) для формы А 1:1 малеата соединения (I).

На фиг. 6 показана термограмма DSC для фосфата соединения (I).

На фиг. 7 показана порошковая рентгенограмма (XRPD) для формы А 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 8 показана рентгенограмма (XRPD) для формы В 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 9 показана рентгенограмма (XRPD) для формы С 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 10 показана рентгенограмма (XRPD) для формы D 1:1 фумарата соединения (I).

На фиг. 11 показана рентгенограмма (XRPD) для формы А 1:1 малеата соединения (I).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к 1:1 фумарату соединения (I), 1:1 малеату соединения (I), их характерным кристаллическим формам и соответствующим фармацевтическим композициям на их основе. Настоящее изобретение также относится к способам лечения субъекта со злокачественной опухолью. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения отдельных кристаллических форм 1: 1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I).

Кристаллические формы 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I)

В соответствии с частным вариантом осуществления по меньшей мере конкретный вес.% 1:1 фумарата соединения (I) или 1:1 малеата соединения (I) имеет кристаллическую форму. Конкретные весовые проценты включают 70, 72, 75, 77, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9% или вес.% в диапазоне 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 70-80, 80-90, 90-100%. Например, в соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере 80% (например, по меньшей мере 90% или 99 вес.%) 1:1 фумарата соединения (I) или 1:1 малеата соединения (I) имеют кристаллическую форму. Следует понимать, что все значения и диапазоны между такими значениями и диапазонами подразумеваются как охватываемые настоящим изобретением.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления по меньшей мере конкретный процент по весу 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) имеет монокристаллическую форму. Конкретные весовые проценты включают 70, 72, 75, 77, 80, 82, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5, 99,9% или весовой процент в диапазоне 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 7080, 80-90, 90-100%. Например, в соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере 80% (например, по меньшей мере 90% или 99%) по весу 1: 1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) имеют монокристаллическую форму. Следует понимать, что все значения и диапазоны между такими значениями и диапазонами подразумеваются как охватываемые настоящим изобретением.

Применяемое в настоящем документе выражение кристаллический относится к твердому веществу, имеющему кристаллическую структуру, в которой индивидуальные молекулы имеют высокооднородную регулярную фиксированную химическую конфигурацию. Кристаллический 1:1 фумарат соединения (I) и кристаллический 1:1 малеат соединения (I) могут представлять собой кристаллы монокристаллической формы 1: 1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) или смесь кристаллов различных монокристаллических форм. Монокристаллическая форма означает 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I) в виде монокристалла или множества кристаллов, в котором каждый кристалл имеет одинаковую кристаллическую форму.

Если конкретный процент по весу 1:1 фумарата соединения (I) (или 1:1 малеата соединения (I)) имеет монокристаллическую форму, то остаток фумарата (или 1:1 малеата соединения (I)) является некоторой комбинацией аморфного фумарата (или 1:1 малеата соединения (I)) и/или одной или нескольких других кристаллических форм 1: 1 фумарата соединения (I) (или 1: 1 малеата соединения (I)), за исключением монокристаллической формы. Если кристаллический 1:1 фумарат соединения (I) (или кристаллический 1:1 малеат соединения (I)) обозначен как конкретный процент одной конкретной кристаллической формы 1:1 фумарата соединения (I) (или 1:1 малеата соединения (I)), то остаток состоит из аморфной

- 2 031569 формы и/или кристаллических форм, отличных от одной или нескольких указанных конкретных форм. Примеры монокристаллической формы включают форму А 1:1 фумарата соединения (I) (или 1:1 малеата соединения (I)), характеризующуюся одним или несколькими свойствами, которые описаны в настоящем документе.

1:1 фумарат соединения (I) (или 1:1 малеат соединения (I)) имеет по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 99 или 99,9 вес.% чистоты по отношению к другим стереоизомерам, т.е. соотношение веса стереоизомера относительно веса всех стереоизомеров.

Получение кристаллической формы 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I).

Конкретные твердые формы 1: 1 фумарата соединения (I) или 1: 1 малеата соединения (I) можно получать, например, посредством медленного выпаривания, медленного охлаждения и осаждения антирастворителем.

Применяемый в настоящем документе термин антирастворитель относится к растворителю, в котором 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I) имеет низкую растворимость, и который вызывает выпадение из раствора в осадок фумарата или малеата в форме мелкодисперсного порошка или кристаллов.

В качестве альтернативы, 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I) можно затем перекристаллизовать из подходящего растворителя с добавлением затравочного кристалла или без его добавления.

Получение каждой конкретной твердой формы 1:1 фумарата соединения (I) или 1:1 малеата соединения (I) описано ниже в экспериментальном разделе.

Характеристика кристаллических форм 1: 1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I)

Образцы облучали К-альфа рентгеновским излучением меди при помощи рентгеновской трубки с вращающимся анодом, работающей при 40 кВ/30 мА. В соответствии с одним вариантом осуществления 1:1 фумарат соединения (I) имеет монокристаллическую форму, форму А. В соответствии с конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, показанной на фиг. 7. В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, которая содержит пики (углы 2Θ) в:

a) 9,7°, 16,7° и 20,1°±0,2 при 2Θ (основные пики); или

b) 8,2°, 9,7°, 16,7° и 20,1°±0,2 при 2Θ; или

c) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 14,9°, 16,7°, 20,1° и 23,5°±0,2 при 2Θ; или

d) 8,2°, 9,7°, 10,7°, 11,5°, 13,6°, 14,9°, 16,7°, 18,1°, 18,8°, 20,1°, 23,5° и 24,5°±0,2 при 2Θ.

Основные пики, описанные в настоящем документе, имеют относительную интенсивность более 50% у формы А. Следует понимать, что этот конкретный угол 2Θ означает указанное значение±0,2°.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC), составляющими 112 и 158°C.

В соответствии с другим вариантом осуществления 1:1 фумарат соединения (I) имеет монокристаллическую форму, форму В. В соответствии с конкретным вариантом осуществления форма В 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, показанной на фиг. 8. В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления форма В 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в:

a) 11,9° и 14,9°±0,2 при 2Θ (основные пики); или

b) 11,9°, 14,9°, 18,7° и 21,5°±0,2 при 2Θ; или

c) 5,5°, 5,9°, 11,9°, 14,9°, 16,7°, 17,4°, 18,7°, 21,5° и 23,4°±0,2 при 2Θ.

Основные пики, описанные в настоящем документе, имеют относительную интенсивность выше 75% у формы В.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления форма В 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC), составляющими 58 и 162°C.

В соответствии с другим вариантом осуществления 1:1 фумарат соединения (I) имеет монокристаллическую форму, форму С. В соответствии с конкретным вариантом осуществления форма С 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой монокристалла, показанной на фиг. 9. В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления форма С 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в:

a) 16,8°, 16,9° и 19,9°±0,2 при 2Θ (основные пики); или

b) 9,8°, 16,8°, 16,9°, 19,9° и 23,5°±0,2 при 2Θ; или

c) 9,7°, 9,8°, 11,7°, 15,1°, 16,8°, 16,9°, 19,9°, 23,5° и 23,7°±0,2 при 2Θ.

Основные пики, описанные в настоящем документе, имеют относительную интенсивность выше 75% у формы С.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления форма С 1:1 фумарата соединения

- 3 031569 (I) характеризуется критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC), составляющими 62 и 156°C.

В соответствии с другим вариантом осуществления 1: 1 фумарат соединения (I) имеет монокристаллическую форму, форму D. В соответствии с конкретным вариантом осуществления форма D 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, показанной на фиг. 10. В соответствии с более конкретным вариантом осуществления дифракционная рентгенограмма формы D содержит пики в:

a) 9,6°, 12,8°, 16,0° и 22,0°±0,2 при 2Θ (основные пики); или

b) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 21,2° и 22,0°±0,2 при 2Θ; или

c) 9,6°, 12,8°, 16,0°, 16,9°, 20,8°, 21,2°, 21,5° и 22,0°±0,2 при 2Θ.

d) 9,6°, 11,7°, 12,0°, 12,8°, 16,0°, 16,6°, 16,9°, 18,1°, 19,2°, 19,8°, 20,7°, 20,8°, 21,2°, 21,5°, 22,0°, 22,5°, 24,0°, 26,0° и 29,8°±0,2 при 2Θ.

Основные пики, описанные в настоящем документе, имеют относительную интенсивность выше 85% у формы D.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления по меньшей мере 90 вес.% формы D 1:1 фумарата соединения (I) характеризуется критической температурой фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC), составляющей 219°C.

В соответствии с другим вариантом осуществления 1:1 малеат соединения (I) имеет монокристаллическую форму, форму А. В соответствии с конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 малеата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, показанной на фиг. 11. В соответствии с более конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 малеата соединения (I) характеризуется порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в:

a) 11,5°, 12,6°, 14,9° и 15,1°±0,2 при 2Θ; или

b) 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1° и 17,1°±0,2 при 2Θ; или

c) 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,9°, 15,1°, 17,1°, 18,6°, 23,5° и 26,1°±0,2 при 2Θ; или

d) 5,5°, 5,8°, 10,8°, 11,5°, 12,4°, 12,6°, 14,1°, 14,9°, 15,1°, 16,7°, 17,1°, 17,8°, 18,6°, 19,5°, 19,9°, 21,9°, 22,2°, 23,0°, 23,3°, 23,5°, 23,9° и 26,1°±0,2 при 2Θ.

Основные пики, описанные в настоящем документе, имеют относительную интенсивность выше 90% у формы А.

В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления форма А 1:1 малеата соединения (I) характеризуется критической температурой фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC), составляющей 219°C.

Фумаратная соль соединения (I) или малеатная соль соединения (I), описанные в настоящем документе, находятся либо в аморфной форме, либо в кристаллической форме. Фумаратная соль соединения (I) или малеатная соль соединения (I), описываемые в настоящем документе, включает как несольватированную форму, так и форму сольвата.

Форма сольвата относится к твердому веществу или кристаллической форме фумаратной соли соединения (I) или малеатной соли соединения (I), в которой растворитель объединен с фумаратной солью соединения (I) или малеатной солью соединения (I) в определенном соотношении (например, мольном соотношении, составляющем 1:1 или 1:2) в качестве составляющей части твердого вещества или кристалла.

Несольватированная форма относится к отсутствию определенного соотношения между молекулой растворителя и фумаратной солью соединения (I) или малеатной солью соединения (I), и молекула растворителя фактически (например, менее 10% по весу) не присутствует в фумаратной соли соединения (I) или малеатной соли соединения (I). Хорошо известные молекулы растворителя включают воду, метанол, этанол, н-пропанол и изопропанол.

В соответствии с настоящим изобретением форма А 1:1 фумарата соединения (I) является изопропаноловым сольватом, который имеет мольное соотношение 2:1 между фумаратом соединения (I) и изопропанолом. Форма B-D 1:1 фумарата соединения (I) и форма А 1:1 малеата соединения (I), описанные в настоящем документе, не являются сольватами, т.е. каждая является несольватированной формой.

Способы лечения при помощи фумарата соединения (I) и малеата соединения (I). 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) могут ингибировать различные киназы, включая PLK4. Таким образом, 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I) по настоящему изобретению пригодны при лечении заболеваний или состояний, ассоциированных с такой киназой. Например, полагают, что PLK4 участвует в клеточном митотическом развитии. Таким образом, низкомолекулярные ингибиторы такого фермента могут представлять собой потенциальные противоопухолевые средства.

В соответствии с конкретным вариантом осуществления 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) являются ингибиторами PLK4 и пригодны для лечения таких заболеваний, как злокачественная опухоль, ассоциированная с такой киназой.

В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к способу лечения субъекта со злокачественной опухолью, предусматривающему введение субъекту эффективного количества 1:1 фу

- 4 031569 марата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I). В соответствии с одним вариантом осуществления 1: 1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I) ингибируют рост опухоли. В частности, 1: 1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I) ингибируют рост опухоли, которая сверхэкспрессирует PLK4. В соответствии с другим вариантом осуществления 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I) ингибируют рост опухоли посредством индуцирования апоптоза опухолевых клеток или посредством ингибирования пролиферации опухолевых клеток.

Злокачественные опухоли, которые можно лечить или предупреждать посредством способов по настоящему изобретению, включают злокачественную опухоль легких, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль толстой кишки, злокачественную опухоль головного мозга, нейробластому, злокачественную опухоль предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому, злокачественную опухоль яичников, лимфому, лейкоз, меланому, саркому, паранеоплазию, остеосаркому, герминому, глиому и мезотелиому. В соответствии с одним конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль легких, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль толстой кишки, нейробластому, злокачественную опухоль предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому, злокачественную опухоль яичников, лимфому, лейкоз, остеосаркому, герминому, глиому, фибросаркому, саркому органов желудочнокишечного тракта, фиброзную гистиоцитому, круглоклеточную саркому, синовиальную саркому, злокачественную опухоль шейки матки, аногенитальную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль головы и шеи и злокачественную опухоль ротоглотки. В соответствии с одним конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль легких, злокачественную опухоль толстой кишки, злокачественную опухоль головного мозга, нейробластому, злокачественную опухоль предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому или злокачественную опухоль яичников. В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль легких, злокачественную опухоль молочной железы, злокачественную опухоль толстой кишки, злокачественную опухоль головного мозга, нейробластому, злокачественную опухоль предстательной железы, меланому, мультиформную глиобластому или злокачественную опухоль яичников. В соответствии с другим конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль легких, злокачественную опухоль молочной железы и злокачественную опухоль толстой кишки. В соответствии с еще одним конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль молочной железы. В соответствии с еще одним конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль молочной железы базального подтипа или протоковую злокачественную опухоль молочной железы подтипа В. В соответствии с одним вариантом осуществления злокачественная опухоль молочной железы базального подтипа представляет собой ER(эстрогеновый рецептор), HER2- и PR- (прогестероновый рецептор) негативную злокачественную опухоль молочной железы. В соответствии с еще одним конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль представляет собой злокачественную опухоль мягких тканей. Злокачественная опухоль мягких тканей представляет собой принятый в данной области термин, который охватывает опухоли, происходящие от любой мягкой ткани организма. Такая мягкая ткань соединяет, поддерживает или окружает различные структуры и органы организма, включая без ограничения гладкую мускулатуру, скелетную мускулатуру, сухожилия, фиброзные ткани, жировую ткань, кровеносные и лимфатические сосуды, околососудистую ткань, нервы, мезенхимальные клетки и синовиальные ткани. Таким образом, злокачественные опухоли мягких тканей могут происходить от жировой ткани, мышечной ткани, нервной ткани, суставной ткани, кровеносных сосудов, лимфатических сосудов и фиброзных тканей. Новообразования мягких тканей могут быть доброкачественными или злокачественными. Как правило, злокачественные опухоли мягких тканей известны под названиями саркомы или саркомы мягкой ткани. Существует большое количество типов опухолей мягкой ткани, включая липому, липобластому, гиберному, липосаркому, лейомиому, лейомиосаркому, рабдомиому, рабдомиосаркому, нейрофиброму, шванному (невриному), неврому, злокачественную шванному, неврофибросаркому, нейрогенную саркому, узловатый тендосиновит, синовиальную саркому, гемангиому, гломусную опухоль, гемангиоперицитому, гемангиоэндотелиому, ангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиому, фиброму, эластофиброму, поверхностный фиброматоз, фиброзную гистиоцитому, фибросаркому, фиброматоз, возвышающуюся дерматофибросаркому (DFSP), злокачественную фиброзную гистиоцитому (MFH), миксому, зернисто-клеточную опухоль, злокачественную мезенхимому, альвеолярную саркому мягких тканей, эпителиоидную саркому, светлоклеточную саркому и десмопластическую мелкоклеточную опухоль. В соответствии с конкретным вариантом осуществления злокачественная опухоль мягкой ткани представляет собой саркому, выбранную из группы, состоящей из фибросаркомы, саркомы органов желудочно-кишечного тракта, лейомиосаркомы, дедифференцированной липосаркомы, плеоморфной липосаркомы, злокачественной фиброзной гистиоцитомы, круглоклеточной саркомы и синовиальной саркомы.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения субъекта с опухолевыми клетками, предусматривающему введение субъекту некоторого количества соединения, раскрываемого в настоящем документе, которое является эффективным для эффективного уменьшения активности PLK4 у

- 5 031569 субъекта.

Термин эффективное количество означает количество, которое при введении субъекту приводит в результате к благоприятным или требуемым результатам, включая клинические результаты, например, ингибирует, подавляет или уменьшает злокачественную опухоль (что, например, определяют по клиническим симптомам или количеству клеток злокачественной опухоли) у субъекта по сравнению с контролем.

Применяемая в настоящем документе фраза лечение субъекта со злокачественной опухолью включает достижение, частичное или фактическое, одного или нескольких из следующих результатов: торможения роста злокачественной опухоли, уменьшения объема злокачественной опухоли (например, уменьшения размера опухоли), ингибирования скорости роста злокачественной опухоли, ослабления или уменьшения клинического симптома или признака, ассоциированного со злокачественной опухолью (такого как компоненты в ткани или в сыворотке) или повышения продолжительности жизни субъекта; и уменьшения вероятности повторного проявления злокачественной опухоли.

Применяемая в настоящем документе фраза уменьшение вероятности повторного проявления злокачественной опухоли означает ингибирование или замедление рецидива злокачественной опухоли в первичной локализации и/или во вторичной локализации или возле них после периода ремиссии. Это также означает, что злокачественная опухоль с меньшей вероятностью рецидивирует при описанном в настоящем документе лечении, нежели при его отсутствии.

Применяемый в настоящем документе термин ремиссия относится к состоянию злокачественной опухоли, при котором клинические симптомы или признаки, ассоциированные со злокачественной опухолью, исчезают или их нельзя выявить, обычно после того, как субъект был успешно подвергнут лечению при помощи противоопухолевой терапии.

Как правило, эффективное количество соединения по настоящему изобретению варьирует в зависимости от различных факторов, таких как получаемое лекарственное средство или соединение, фармацевтический состав, путь введения, тип заболевания или нарушения, вид субъекта или носителя, подвергаемого лечению, и т. п., но, тем не менее, может быть без труда определено специалистом в настоящей области. Эффективное количество соединения по настоящему изобретению может быть без труда определено рядовым специалистом в настоящей области посредством стандартных способов, известных в настоящей области.

В соответствии с одним вариантом осуществления эффективное количество 1:1 фумарата соединения (I) и 1:1 малеата соединения (I) варьирует от приблизительно 0,01 до приблизительно 1000 мг/кг веса тела, в качестве альтернативы от приблизительно 0,05 до приблизительно 500 мг/кг веса тела, в качестве альтернативы от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг/кг веса тела, в качестве альтернативы от приблизительно 0,1 до приблизительно 15 мг/кг веса тела, в качестве альтернативы от приблизительно 1 до приблизительно 5 мг/кг веса тела и в качестве другой альтернативы от приблизительно 2 до приблизительно 3 мг/кг веса тела. Специалист в настоящей области поймет, что на дозировку, необходимую для эффективного лечения субъекта, страдающего от злокачественной опухоли, могут влиять определенные факторы, и такие факторы включают без ограничения тяжесть заболевания или нарушения, предварительные средства лечения, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и наличие других заболеваний.

Более того, схема лечения субъекта при помощи эффективного количества соединения по настоящему изобретению может состоять из однократного введения или, в качестве альтернативы, предусматривать серию приемов. Например, 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I) можно вводить по меньшей мере один раз в неделю. Однако в соответствии с другим вариантом осуществления соединение можно вводить субъекту от приблизительно одного раза в неделю до одного раза ежедневно для заданного средства лечения. Длина периода лечения зависит от различных факторов, таких как тяжесть заболевания, возраст пациента, концентрация и активность соединений по настоящему изобретению, или их комбинации. Также будет понятно, что эффективная дозировка соединения, применяемого для лечения или профилактики, может повышаться или понижаться в течение конкретной схемы лечения или профилактики. Изменения дозировки могут обуславливаться результатами стандартных диагностических анализов, известных из уровня техники, и становиться очевидными благодаря ним. В некоторых случаях может быть необходимым постоянное введение.

Субъектом является млекопитающее, предпочтительно человек, но также им может быть животное, нуждающееся в ветеринарном лечении, например, домашние животные (например, собаки, коты и т.п.), сельскохозяйственные животные (например, коровы, овцы, свиньи, лошади и т.п.) и лабораторные животные (например, крысы, мыши, морские свинки и т.п.).

Соединения по настоящему изобретению можно вводить пациенту в различных формах в зависимости от выбранного пути введения, что будет понятно специалистам в настоящей области. Соединения по настоящему изобретению можно вводить, например, посредством перорального, парентерального, трансбуккального, подъязычного, назального, ректального введения, введения с использованием пластыря, помпы или внутрикожного введения и с помощью соответственно составленных фармацевтических композиций. Парентеральное введение включает внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное, внутри

- 6 031569 мышечное, внутрикожное, назальное, внутрилегочное, внутриоболочечное, ректальное введение и местные формы введения. Парентеральное введение может представлять собой непрерывную инфузию на протяжении выбранного периода времени.

Фармацевтические композиции, включающие 1:1 фумарат соединения (I) и 1:1 малеат соединения (I)

1: 1 Фумарат соединения (I) или 1: 1 малеат соединения (I) или любую одну или несколько из раскрываемых в настоящем документе кристаллических форм можно соответственно составить в фармацевтические композиции для введения субъекту.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей 1:1 фумарат соединения (I) или 1:1 малеат соединения (I), которые описаны выше, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, причем по меньшей мере 80% (предпочтительно 90%, более предпочтительно 99 вес.%) соли имеет кристаллическую форму.

Фармацевтические композиции по настоящему исследованию необязательно включают один или несколько фармацевтически приемлемых для них носителей и/или разбавителей, таких как лактоза, крахмал, целлюлоза и декстроза. Также могут быть включены другие вспомогательные средства, такие как ароматизирующие средства, подсластители и консерванты, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилпарабены. Более подробные перечни подходящих вспомогательных средств можно найти в справочнике фармацевтических вспомогательных средств Handbook of Pharmaceutical Excipients (5^th Ed., Pharmaceutical Press (2005)). Специалист в настоящей области будет знать, как получить составы, пригодные для различных типов путей введения. Стандартные процедуры и ингредиенты для выбора и получения подходящих составов описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences (2003 - 20^th edition) и в издании Фармакопея Соединенных Штатов Америки: Национальный формуляр (USP 24 NF19), опубликованном в 1999 г. Носители, разбавители и/или вспомогательные средства являются приемлемыми в том смысле, что они являются совместимыми с другими ингредиентами фармацевтической композиции и не являются вредными для их реципиента.

Обычно для перорального терапевтического введения соединение по настоящему изобретению может быть включено со вспомогательным средством и применяться в форме принимаемых внутрь таблеток, таблеток для медленного растворения в щечном кармане, пастилок, капсул, крепких настоев, суспензий, сиропов, мягких капсул и т.п.

Обычно для парентерального введения растворы соединения по настоящему изобретению можно, в целом, приготовить в воде, соответственно смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также можно приготовить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, DMSO и их смесях со спиртом или без него и в маслах. В обычных условиях хранения и применения такие препараты содержат консервант для предупреждения роста микроорганизмов.

Обычно, для инъекционного применения подходят стерильные водные растворы или дисперсия и стерильные порошки описанного в настоящем документе соединения для приготовленного для немедленного приема препарата стерильных инъекционных растворов или дисперсий.

Для назального введения соединения по настоящему изобретению можно составить в виде аэрозолей, капель, гелей и порошков. Аэрозольные составы обычно содержат раствор или высокодисперсную суспензию активного вещества в физиологически приемлемом водном или безводном растворителе, и обычно они представлены в количествах дозы для однократного или многократного применения в стерильной форме в запечатанной емкости, которая может иметь форму картриджа или быть повторно заполняемой для применения с распылительным устройством. В качестве альтернативы, запечатанная емкость может представлять собой устройство для однократного дозирования, такое как карандаш для ингаляции с однократной дозой или аэрозольный распылитель, оснащенный клапаном-дозатором, который необходимо удалить после применения. Если лекарственная форма содержится в аэрозольном распылителе, он будет содержать газ-вытеснитель, который может представлять собой сжатый газ, такой как сжатый воздух или органический газ-вытеснитель, такой как фторхлорзамещенный углеводород. Аэрозольные лекарственные формы также могут быть представлены в аэрозольном ингаляторе с насосом.

Для трансбуккального или подъязычного введения соединения по настоящему изобретению могут быть составлены с таким носителем, как сахар, аравийская камедь, трагакант или желатин и глицерин, в виде таблеток, леденцов или пастилок.

Для ректального введения описанные в настоящем документе соединения могут быть составлены в форме суппозиториев, содержащих традиционную основу для суппозиториев, такую как какао-масло.

Настоящее изобретение проиллюстрировано посредством приведенных далее примеров, которые никоим образом не предназначены для его ограничения.

- 7 031569

Примеры

Сокращения

BSA бензолсульфоновая кислота

Д дней

EtOAc этилацетат

EtOH этанол ч часов

HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография

IPA изпропанол

ШАс изобутилацетат

МеОН метанол

MIBK метилизобутилкетон мин. минуты

МТВЕ метил-трет-бутилэфир

NMR ядерный магнитный резонанс pTSA паратолуол сульфоновая кислота

RBF круглодонная колба

RH относительная влажность

Отн. инт. относительная интенсивность кт комнатная температура темп, температура

TGA термогравиметрический анализ

THF тетрагидрофуран вес. % проценты по весу

XRPD порошковая рентгеновская дифрактометрия

Аналитические условия

Анализ посредством дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC)

Анализы DSC осуществляли на дифференциальном сканирующем калориметре Mettler 822e или Q2000 от ТА instruments. Образцы взвешивали в алюминиевой чашке, покрытой перфорированной крышкой, а затем спрессовывали. Аналитические условия представляли собой 30-120°C, 30-200°C, 30300°C и 40-300°C с линейным изменением Ю^/мин.

Термический гравиметрический анализ (TGA)

Анализы TGA осуществляли на термогравиметрическом анализаторе SDTA Mettler 851е. Образцы взвешивали в алюминий-оксидном тигеле и анализировали при температуре 30-230°C, 30-300°C и 30350°C и с линейным изменением Ю^/мин.

Порошковая рентгеновская дифрактометрия (XRPD)

Образцы анализировали на порошковом рентгеновском дифрактометре CubiX-Pro от Panalytical или дифрактометре Bruker AXS/Siemens D5000.

Условия для Panalytical: Образцы помещали на кремниевый держатель ультра-микрообразца с нулевым фоном. Образцы облучали К-альфа рентгеновским излучением меди при помощи рентгеновской трубки с вращающимся анодом, работающей при 40 кВ/30 мА. Образцы непрерывно сканировали в диапазоне от 3° до 45°.

Условия для Bruker AXS/Siemens D5000: Применяли мощное Си направленное излучение, работающее на 50 кВ/35 мА. Вторичный луч монохроматизировали посредством твердотельного датчика Kevex. Образцы сканировали в диапазоне 2-35° (2σ), где встречаются репрезентативные пики для большинства органических кристаллических соединений.

Гравиметрический анализ поглощения влаги.

Эксперименты с гравиметрическим анализом поглощения влаги осуществляли на анализаторе динамического поглощения паров Hiden посредством сначала удерживания образца при 40% RH и 25°C до достижения равновесной массы или в течение максимум четырех часов. Образец затем подвергали сканированию в режиме изотермической адсорбции (25°C) от 40 до 90% RH, ступенчато по 10%. Образец оставляли для уравновешивания до асимптотической массы в каждой точке на максимум четыре часа. После адсорбции запускали сканирование в режиме десорбции от 85 до 5% RH (при 25°C), ступенчато по -10%, снова оставляя на максимум четыре часа для уравновешивания до асимптотической массы. Затем осуществляли сканирование адсорбции от 0% RH до 40% RH, ступенчато по +10% RH.

Спектроскопия комбинационного рассеяния света.

Образцы для анализа при помощи спектроскопии комбинационного рассеяния света на микроскопе Kaiser RXN1 с датчиком PhAT. Твердые вещества, полученные в результате кристаллизации в 96луночном планшете, анализировали при помощи следующих условий:

- 8 031569 источник рамановских лучей: лазер 785 нм;

объектив микроскопа 1,2 мм;

время однократной экспозиции: 12 с;

количество слагаемых: 12.

Задействованные настройки экспозиции: фильтрование космического луча, темновое вычитание, калибровка интенсивности

Оптическая микроскопия

Образцы проверяли при помощи оптического поляризационного микроскопа Leica DMRB в комбинации с цифровой камерой (разрешение 1600x1200). Небольшие количества образцов диспергировали в минеральном масле на предметном стекле с покровными стеклами и рассматривали при 100 x увеличении и выше.

Двойное лучепреломление

Образцы для анализа двойного лучепреломления анализировали на устройстве для визуализации двойного лучепреломления от Coleman Technologies. Твердые вещества, полученные в результате кристаллизации в 96-луночном планшете, анализировали при помощи следующих условий:

освещение: 37;

экспозиция: 57,9; поляризация: 0,0; диаметр окна лунки: 6,2; целевая интенсивность: 80; целевой процентиль: 90,0;

максимальная средняя интенсивность: 100.

Ядерный магнитный резонанс

Образцы для протонного NMR анализировали с помощью спектрометра Bruker, 400 МГц.

Пример 1. Комбинаторный скрининг солевых форм

Комбинаторный скрининг солевых форм проводили с использованием шести растворителей (IPA, THF, ацетона, ацетонитрила, EtOH и EtOAc) и двадцати восьми фармацевтически приемлемых кислот (HCl, HBr, H₃PO₄, H₂SO₄, CH₃SO₃H, pTSA, BSA, нафталинсульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, адипиновая кислота, этандисульфоновая кислота, малеиновая кислота, бензойная кислота, L-оксиянтарная кислота, лимонная кислота, L-молочная кислота, гиппуровая кислота, L-пироглутаминовая кислота, янтарная кислота, L-винная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, глутаровая кислота, L-аскорбиновая кислота, сорбиновая кислота, бензойная кислота и малоновая кислота). В каждую лунку 96-луночного планшета вносили 200 мкл 20 мг/мл раствора соединения (I) в МеОН. Затем выпаривали растворитель под потоком азота, оставляя в каждой лунке примерно 4 мг исходного материала. Затем в каждую лунку добавляли представляющий интерес основной растворитель (500 мкл). Планшеты нагревали до 50°C и перемешивали при помощи магнитной мешалки в течение 10 мин для обеспечения полного растворения А. Затем в каждую лунку вносили раствор предусмотренного противоиона объемом, соответствующим 1,05 эквивалента каждой кислоты, и оставляли для уравновешивания при температуре на 10 мин. Затем планшеты охлаждали со скоростью 20°C/n до 25°C и в этот момент создавали производный основной планшет путем переноса 200 мкл из каждой лунки в планшет для выпаривания. Затем планшеты охлаждали до температуры окружающей среды, выдерживали на протяжении ночи при 5°C и проверяли на наличие твердых веществ. Затем из основных планшетов удаляли растворитель путем впитывания во впитывающую бумагу. Основные планшеты и планшеты для выпаривания затем сушили на протяжении ночи в атмосфере азота. Лунки, которые содержали твердый материал, затем оценивали и ранжировали в отношении двойного преломления, специфичного спектра рамановского рассеяния и пороговой растворимости. Подходящие комбинации растворителя и противоиона затем повторно оценивали в отношении образования соли с А в большем масштабе.

Пример 2. Солеобразование в промежуточном масштабе

Примерно 40 мг соединения (I) отвешивали в 8 мл склянку, содержавшую якорь магнитной мешалки. В склянку добавляли основной растворитель для обеспечения растворения при повышенной температуре. После растворения по каплям добавляли 1,05 эквивалента кислоты в виде 0,125, 0,25 или 0,5 М раствора. Все смеси оставляли перемешиваться при повышенной температуре в течение 15 мин, после чего охлаждали до комнатной температуры со скоростью 10°CA и перемешивали в течение ночи. Образцы, в которых не наблюдали осаждения после охлаждения, прочесывали палочкой для индукции образования центров кристаллизации и хранили в морозилке при температуре от -10 до -20°C. Спустя 1 ч склянки инспектировали в отношении роста кристаллов. Образцы из условий, которые вызывали образование твердых веществ, центрифугировали, фильтровали или выпаривали в атмосфере азота. Все остальные образцы оставляли уравновешиваться при -20°C на 72 ч. Склянки, в которых не наблюдали осаждения, затем сушили в атмосфере азота. Полученные твердые вещества затем суспендировали с IPA в течение 5 дней. В результате этих экспериментах выявляли лишь аморфные твердые вещества для всех противоионов, за исключением соли фумаровой кислоты. Ниже описаны характерные полиморфные формы фума

- 9 031569 ратной соли соединения (I).

Получение кристаллических солей соединения (I).

Пример 3. Получение формы А 1:1 фумарата соединения (I).

Соединение (I) (42 мг, 0,078 ммоль) растворяли в ацетонитриле (0,5 мл) и нагревали до 50°C. Добавляли фумаровую кислоту (0,33 мл 0,25 М раствора в IPA) и смесь перемешивали в течение 15 мин. Осадок отфильтровывали и определяли как аморфный по причине отсутствия наблюдаемого двойного преломления. Аморфное твердое вещество затем суспендировали с IPA (0,5 мл) в течение 5 дней. Для твердого вещества, полученного из суспензии, наблюдали двойное преломление, и дополнительно охарактеризовывали как сольват IPA с помощью XRPD, DSC, ¹H NMR и TGA, и обозначали формой А фумарата.

Таблица 1. XRPD формы А фумарата

угол 2Θ	Отн. ИНТ. (%)
8,17	43%
9,69	100%
10,69	33%
11,51	30%
13,63	25%
14,89	36%
16,73	61%
18,09	27%
18,83	23%
20,05	50%
23,49	34%
24,45	26%

Пример 4. Получение формы D 1:1 фумарата соединения (I).

Десольватация фумаратной формы А путем вакуумной сушки при 60°C в течение 2 дней приводила в результате к получению кристаллического материала с термограммой DSC и XRPD, обозначаемого как форма В. Форму В также можно было непосредственно получить путем растворения аморфной монофумаратной соли в EtOAc и введения затравки кристаллов формы В. Гравиметрический анализ поглощения влаги показывал, что солевая форма была гигроскопичной и формировала тетрагидрат при 90% RH.

Таблица 2. XRPD формы В фумарата.

угол 20	Отн. ИНТ. (%)
5,51	39,5
5,91	38,7
11,91	100,0
14,93	83,5
16,71	40,2
17,35	40,4
18,73	42,8
21,53	41,0
23,41	43,3

Пример 5. Получение формы С 1:1 фумарата соединения (I).

Третий полиморф фумарата можно получить путем растворения аморфной фумаратной соли в THF и введения затравки кристаллов формы В фумарата. Растворитель медленно выпаривали до получения белого твердого вещества, у которого наблюдали картину XRPD и спектр рамановского рассеяния, отличные от формы В, и обозначали формой С фумарата.

Таблица 3. XRPD формы С фумарата.

угол 2Θ	Отн. ИНТ. (%)
9,71	68,1
9,83	70,2
11,71	59,5
15,05	60,1
16,83	88,7
16,87	84,7
19,93	100,0
23,45	70,7
23,65	69,6

Пример 6. Получение формы D 1:1 фумарата соединения (I).

Суспендирование формы С фумарата с ацентонитрилом в течение 10 дней при комнатной температуре приводило к переходу в новую кристаллическую форму, обозначаемую формой D, у которой наблюдали отличный спектр рамановского рассеяния и картину XRPD. Фазовый переход по результатам DSC был намного выше, чем у других форм, и наблюдали наивысшую стабильность среди четырех выявленных полиморфов. Форму D можно непосредственно получить следующим образом: в 250-мл RBF с тремя горлышками, снабженную якорем магнитной мешалки, вносили соединение (I) (6,01 г, 11 ммоль) и фумаровую кислоту (1,41 г, 12 ммоль). Добавляли ацетон (50 мл) и суспензию нагревали до 50°C до тех пор, пока раствор не становился прозрачным. Спустя 10 мин наблюдали осаждение и перемешивание продолжали в течение дополнительных 30 мин. Добавляли МТВЕ (25 мл) и охлаждали раствор до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Твердые вещества отфильтровывали и сушили под

- 10 031569 вакуумом при 60°C в течение 2 дней с получением титульного соединения (I) в виде белого твердого вещества (6,65 г, 91%).

‘и NMR (400 МГц, CD₃OD) δ 8,00 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 7.68 (d, J = 8,0 Гц, 2Н), 7,50-7,45 (m, 5H), 7,03 (d, J = 8,1 Гц, 1H), 6,83 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 6,73 (s, 2H), 6,60 (dd, J = 8,4, 2,5 Гц, 1H), 5,58 (s, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,82-3,78 (m, 2H), 3,36 (t, J = 8,4 Гц, 1H), 3,26 (s, 3Н), 3,13-3,10 (m, 2Н), 2,34 (t, J = 11,4 Гц, 2Н), 2,252,16 (m, 2Н), 1,01 (d, J = 6,0 Гц, 6Н).

Таблица 4. XRPD формы D

угол 2Θ	Отн. ИНТ. (%)
9,59	97,3
11,69	39,2
12,03	53,4
12,83	100,0
15,95	92,6
16,55	47,2
16,93	73,3
18,13	47,8
19,23	59,0
19,81	55,4
20,67	59,1
20,79	61,9
21,23	71,5
21,49	66,6
21,97	97,2
22,53	42,1
23,97	53,9
24,03	46,2
26,03	32,5
29,75	41,6

Соль фумаровой кислоты можно получить в виде формы D при различных условиях. Кристаллическую форму можно получить путем внесения затравки кристаллов формы В или D, как показано в табл.

5. Соль можно непосредственно кристаллизовать путем растворения исходного соединения (I) в таких полярных растворителях, как этилацетат, ацетон или этанол, и введения фумаровой кислоты в таких полярных растворителях, как метанол, этанол, THF и изопропанол, которые показаны в табл. 6. Выходы, как правило, повышались при добавлении такого антирастворителя, как МТВЕ. Условия, которые не давали форму D, включали растворение соединения (I) в менее полярных растворителях, таких как ацетонитрил, 2-метилтетрагидрофуран и метилизобутилкетон. Также добавление гексана в качестве антирастворителя не способствовало образованию кристаллической формы D.

Предпочтительную форму D также можно получить путем растворения соединения (I) в соответствующем растворителе, таком как метанол, этанол, THF или ацетон, и непосредственного введения фумаровой кислоты в виде твердого вещества, как показано в табл. 7. Выходы повышались при добавлении такого антирастворителя, как МТВЕ или IBA. Форму D не получали при помощи такого способа, если основной растворитель был менее полярным, как это было в случае с этилацетатом и МТВЕ.

Нельзя было получить соотношение соединение (1)/кристаллическая соль фумаровой кислоты, равное 2:1. Два эквивалента соединения (I) растворяли в основном растворителе, таком как EtOAc, EtOH, THF, IPA, и добавляли один эквивалент фумаровой кислоты в виде твердого вещества или в растворе с IPA или EtOH. Полученные в результате растворы нагревали до 50°C в течение 30 мин и охлаждали до комнатной температуры. Добавляли МТВЕ и смесь суспендировали в течение 24 ч. Характеристика как твердого вещества, так и фильтрата с помощью ‘Н NMR выявляла, что было получено соотношение соединение Д)/фумаратная соль, которое составляло лишь 1:1.

Таблица 5. Кристаллизация фумаратной соли с внесением затравки

Основной растворитель	Растворитель для введения	Эквиваленты	Темп. (°C)	Добавление затравки	Выход (%)	Форма
EtOAc	EtOH	1,05	50	В	77	D
EtOAc	EtOH	1,05	50	D	67	D

Таблица 6. Кристаллизация фумаратной соли

Основной растворитель	Растворитель для введения	Эквиваленты	Темп. (°C)	Антирастворитель	Выход (%)	Форма
EtOAc	МеОН	1,05	50	МТВЕ	54	D
EtOAc	EtOH	1,05	50	МТВЕ	51	D
EtOAc	THF	1,05	50	МТВЕ	53	D
EtOAc	IPA	1,05	50	МТВЕ	50	D
EtOAc	THF	1,05	50	Г ексан	-	-
2-MeTHF	MeOH	1,05	50	МТВЕ	-	-
2-MeTHF	EtOH	1,05	50	МТВЕ	-	-
2-MeTHF	THF	1,05	50	МТВЕ	-	-
Ацетон	MeOH	1,05	50	МТВЕ	75	D
Ацетон	EtOH	1,05	50	Нет	40	D
Ацетон	THF	1,05	50	МТВЕ	72	D
Ацетон	THF	1,05	50	Г ексан	-	-
MIBK	THF	1,05	50	МТВЕ	-	-
EtOH	THF	1,05	50	МТВЕ	69	D
EtOH	THF	1,05	50	Г ексан	-	-
THF	THF	1,05	50	Г ексан	-	-

- 11 031569

Таблица 7. Кристаллизация с фумаровой кислотой, добавляемой в виде твердого вещества

Основной растворитель	Эквиваленты	Темп. (°C)	Антирастворитель	Выход (%)	Форма
МеОН	1,01	50	Нет	43	D
EtOH	1,14	50	Нет	61	D
EtOH	1,05	50	МТВЕ	74	D
EtOH	1,05	50	IB Ас	74	D
THF	1,01	50	МТВЕ	64	D
Ацетон	0,99	50	Нет	53	D
Ацетон	1,05	50	МТВЕ	82	D
Ацетон	1,05	50	IB Ас	81	D
EtOAc	1,01	50	Нет	-	-
МТВЕ	1,01	50	Нет	-	-

Повторная обработка результатов комбинаторного скрининга солевых форм

Исходя из результатов изначального комбинаторного процесса, только фумаратная соль была выявлена кристаллической. Результаты, полученные благодаря высокопроизводительному скринингу, повторно оценивали и получали новые количественные показатели, которые не зависели от растворителя для каждого противоиона. Такую повторную обработку проводили для различных солей путем комбинирования предшествующих количественных показателей (визуальный осмотр образования твердого вещества, двойное преломление, специфичность спектра рамановского рассеяния и пороговую растворимость) для всех растворителей и их суммирования как для исходного планшета, так и для планшета для выпаривания.

Две кислоты с наиболее высокими повторными количественными показателями, малеиновую и метансульфоновую кислоты, затем оценивали в дополнительных условиях растворителя и антирастворителя. У солей, полученных из метансульфоновой кислоты, наблюдали гигроскопичность. Тем не менее, была выявлена кристаллическая соль с малеиновой кислотой. Получение и характеристики малеатной соли соединения А описаны ниже.

Пример 7. Получение формы А 1:1 малеата соединения (I)

В 250-мл круглодонную колбу с тремя горлышками и якорем магнитной мешалки вносили соединение (I) (4,96 г, 9,3 ммоль). Добавляли ацетон (55 мл) и нагревали до 50°C. Добавляли малеиновую кислоту (20 мл 0,5 М раствора в ацетоне), что в результате давало прозрачный раствор, который становился мутным спустя 1 мин.

Раствор охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 ч в виде сгущенной суспензии. Твердые вещества фильтровали, промывали при помощи МТВЕ и сушили в течение 30 ч при 60°C под вакуумом с получением белого твердого вещества (5,52 г, 91%). Соль характеризовали как кристаллическую с помощью XRPD и обозначали формой А.

¹Н NMR (CD3OD) δ: 8,04 (d, J = 8,5 Гц, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Гц, 2Н), 7,45-7,61 (m, 5Н), 7,07 (d, J = 8,8 Гц, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Гц, 1H), 6,62 (dd, J = 8,5, 2,5 Гц, 1H), 6,27 (s, 2Н), 5,59 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 4,30 (s, 2H), 3,86-3,82 (m, 2H), 3,34-3,43 (m, 2H), 3,27 (s, 3Н), 2,74-2,68 (m, 2Н), 2,32-2,10 (m, 2Н), 1,23 (d, J = 6,3 Гц, 6Н).

Т аблица 8. XRPD формы А малеата

угол 2Θ	Отн. интенсивность
5,45	28,2
5,75	54,4
10,83	70,9
11,49	111,9
12,37	79,3
12,59	103,2
14,05	38,1
14,91	96,1
15,07	100,0
16,73	29,6
17,05	75,9
17,83	20,6
18,55	51,7
19,51	34,8
19,91	30,7
21,89	25,9
22,15	34,6
23,03	39,4
23,31	45,3
23,51	56,1
23,89	33,3
26,09	60,3

Форму А малеата можно получить из полярного растворителя, такого как EtOH, ацетон, изопропилацетат, этилацетат, изопропанол или THF, с добавлением или без добавления неполярного антирастворителя, такого как МТВЕ. Нельзя было получить соотношение соединение (^/кристаллическая соль малеиновой кислоты, равное 2:1.

Получение аморфных солей соединения (I)

Пример 8. Получение HCl соли соединения (I)

Соединение (I) (6,7 г, 12,5 ммоль) растворяли в THF (25 мл), и добавляли 1 М HCl в простом эфире

- 12 031569 (13,8 мл, 13,8 ммоль) при комнатной температуре, и разводили раствор простым эфиром (200 мл). Смесь выдерживали при комнатной температуре в течение 1 ч, а полученное твердое вещество фильтровали. Твердое вещество формировало гель при отстаивании, и его растворяли в воде (100 мл) и сушили сублимацией с получением желтого порошка (5,8 г, 81%).

'll NMR (400 МГц, CD₃OD) δ 7,75 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 7,57 (d, J = 8,0 Гц, 2Н), 7,46 (d, J = 8,0 Гц, 2Н), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 16,8 Гц, 1H), 7,30 (d, J = 16,4 Гц, 1H), 6,82 (d, J = 9,2 Гц, 1H), 6,80 (d, J = 8,8 Гц, 1H), 6,51 (d, J = 8,4 Гц, 1H), 5,19 (s, 1H), 4,28 (s, 2H), 3,92-3,80 (m, 2H), 3,40-3,30 (m, 2H), 3,27 (t, J = 8,4 Гц, 1H), 3,15 (s, 3Н), 2,70 (t, J = 11,4 Гц, 2Н), 2,15-2,05 (m, 2Н), 1,18 (d, J = 6,0 Гц, 6Н).

Пример 9. Получение фосфатной соли соединения (I)

Соединение (I) (148 мг, 0.27 ммоль) растворяли в EtOAc (0,5 мл), и добавляли 0,5 М фосфорную кислоту в EtOAc (0,58 мл, 0,28 ммоль) при 50°C, и раствор перемешивали в течение 15 мин, и охлаждали до комнатной температуры. Твердые вещества отфильтровывали и сушили в течение 4 дней при 60°C с получением титульного соединения (I) в виде белого твердого вещества (149 мг, 85%).

' H NMR (CD₃OD) δ 8,00 (d, J = 8,5 Гц, 1H), 7,72 (d, J = 8,2 Гц, 2Н), 7,49-7,58 (m, 5Н), 7,04 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Гц, 1H), 6,61 (dd, J = 8,5, 2,5 Гц, 1H), 5,58 (d, J = 2,5 Гц, 1H), 4,21 (s, 2H), 3,97-3,89 (m, 2H), 3,34-3,39 (m, 1H), 3,26 (s, 3Н), 2,55 (t, J = 11,8 Гц, 2Н), 2,16-2,26 (m, 2Н), 1,19 (d, J = 6,0 Гц, 6Н).

Испытание на растворимость и фармакокинетические анализы

Способы

Однократную пероральную дозу в растворе и в виде порошка в капсуле HCl соли (I), формы D фумарата и формы А малеата вводили самкам крыс Спрег-Доули в количестве 5 мг/кг. Собирали образцы крови с добавлением литий-гепарина и центрифугировали с получением плазмы крови. Плазму крови затем анализировали в отношении уровней соединения (I) в плазме крови с помощью LC/MS.

Получение испытываемого продукта для введения дозы в капсуле крысам

Всех животных, которые участвовали в схеме введения доз, взвешивали и присваивали им номера. Все капсулы (твердые капсулы из свиного желатина, размер 9, Torpac), которые соответствовали каждому животному, которому необходимо было вводить дозу, строго нумеровали при помощи маркера Sharpie с тонким наконечником. Небольшую пластиковую миску для взвешивания размещали на весах, причем одну крышку капсул размещали на миске, а основание устройства для заполнения капсул с другой частью капсулы загружали в резервуар. Весы обнуляли по весу тары. На верхушке устройства для загрузки капсул размещали воронку и точно регистрировали общую массу. Кусок размером 4x4 дюйма парафинированной бумаги складывали пополам, создавая складку к середине. Небольшое количество тонкоизмельченного соединения (при необходимости измельчали соединение при помощи ступки и пестика) размещали в складке парафинированной бумаги и повторно ее складывали. Сложенную парафинированную бумагу слегка наклоняли над воронкой устройства для заполнения капсул. Мелкую лопатку использовали для выталкивания некоторого количества порошка соединения из складки на воронку, позволяя ему небольшими количествами сыпаться в загрузочную часть воронки и в конечном счете в капсулу. Регистрировали разницу массы от общей массы. Воронку для загрузки капсулы удаляли и дверцу весов закрывали для того, чтобы установить с достаточной точностью вес соединения внутри капсулы. Воронку возвращали в устройство для загрузки капсул и продолжали загрузку до тех пор, пока внутри капсулы не оказывалось необходимое количество лекарственного средства. Примечание: при добавлении незначительных количеств в капсулу просто счищали тонкоизмельченное лекарственное средство, которое оседало на воронке, в загрузочную колонку. Удаляли воронку и записывали вес. Рассчитывали количество действующего лекарственного средства путем умножения взвешенного материала на соотношение биоэквивалентности. Записывали количество действующего лекарственного средства. Крышку капсулы на миске для взвешивания использовали для плотного закрытия капсулы до тех пор, пока она не фиксировалась на своем месте.

Всем животным (n = 3/группа) вводили перорально дозу объемом 5 мл/кг. После введения дозы у каждой крысы брали кровь в каждый из обозначенных моментов времени. У контрольных животных кровь брали согласно такой же процедуре. Кровь брали из боковой подкожной вены. Аликвоты крови (~50 мкл) собирали в пробирки с покрытием лития-гепарина, аккуратно перемешивали, затем выдерживали на льду и центрифугировали на 2500xg в течение 15 мин при комнатной температуре в пределах 1 ч с момента забора. Собирали слой плазмы, выдерживали на льду и в конечном итоге хранили замороженным при -80°C до последующей обработки.

Биоаналитические способы

Проводили биоаналитическую количественную оценку с помощью HPLC/тандемной квадрупольной масс-спектрометрии (HPLC-MS). Рассчитывали и записывали концентрации в плазме крови и T_1/2.

Анализ плазмы крови

Стандартный раствор 5 мг/мл в DMSO разводили в 100 раз и делали последовательные серийные разведения в 50% DMSO. Аликвоты (2 мкл) серийных разведений перемешивали с 18 мкл контрольной плазмы крови (итого 20 мкл) для применения при построении стандартной кривой. Образцы плазмы крови (20 мкл) и стандартные образцы затем разводили 5x ледяным ацетонитрилом, содержавшим 100 нг/мл

- 13 031569 верапамила в качестве внутреннего стандарта (80% (об./об.) ацетонитрил). Осажденные ацетонитрилом образцы и стандарты фильтровали через 0,22 мкм мембраны в планшете 96-луночного формата. Фильтраты затем разводили водой до 30% ацетонитрила.

Анализ доз

Раствор для введения дозы (100 мкл) разводили при помощи DMSO (900 мкл) для обеспечения однородности образца. Затем осуществляли разведение полученного в итоге раствора в 30% ацетонитриле (содержавшем внутренний стандарт) в трех повторностях для приведения номинальной концентрации до менее 500 нг/мл, что подходило для LC-MS анализа. Серийное разведение из маточного раствора 5 мг/мл DMSO в 30% ацетонитриле (содержавшем внутренний стандарт) давало подходящую стандартную кривую. Образцы и стандарты (10 мкл) вводили инъекцией в LC-MS систему, как описано ниже. Концентрации растворов с дозами записывали в мг/мл.

LC-MS анализ

LC: 10 мкл каждого образца и стандарта вводили инъекцией на колонку Acquity, CSH 1,7 мкм, 2,1x100 мм от компании Waters со скоростью 0,6 мл/мин при помощи системы Acquity UPLC. C18 колонку уравновешивали с 10% ацетонитрила. Соединения элюировали с градиентом до 99% ацетонитрила. Все подвижные фазы содержали 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты.

Хроматографическое элюирование ________

t (мин.)	% В
0	5
0,75	5
1	20
4,5	99,9
5	99.9
5,4	5
6	5

MS: Элюент из колонки анализировали с помощью электрораспылительной ионизации в системе для тандемной квадрупольной масс-спектрометрии (Waters Xevo TQ). Состав элюента анализировали по трем ионным парам, специфическим для внутреннего стандарта, и трем ионным парам, специфическим для аналита.

Фармакокинетические анализы

Экспериментальные образцы сравнивали с образцами стандартной кривой для определения концентраций соединения. Средние концентрации соединения (в мкг/мл ± среднее квадратичное отклонение) регистрировали для каждого момента времени. Предел обнаружения (LLOQ) отмечали как образец стандартной кривой с наиболее низким значением, у которого наблюдали отклонение менее 20% от номинальной концентрации. РК анализ осуществляли с помощью плагина PKfit для Excel; С,,,_|кс определяли как максимальную среднюю концентрацию, наблюдаемую в заданный момент времени; площадь под кривой (AUC) регистрировали для to - Т_{последний} часов. Периоды полувыведения из плазмы крови регистрировали, если минимум в 3 конечных моментах времени наблюдали выведения первого порядка с r²>0,8.

Как можно видеть в табл. 9, было показано, что кристаллические соли соединения (I) менее растворимы в деионизированной воде по сравнению с аморфными фосфатными и HCl солями. Во многих зарегистрированных случаях повышенная растворимость аморфных солей приводила в результате к повышению концентраций в плазме крови по сравнению с более стабильной кристаллической формой (Hancock and Parks (2000) Pharm. Res. 17: 397-404; Pudipeddi and Serajuddin (2005) J. Pharm. Sci. 94: 929-39). Тем не менее, при сравнении профилей зависимости концентрации в плазме крови от времени и фармакокинетических параметров аморфных и кристаллических солей после введения пероральной дозы в виде порошка в капсуле (PIC) самкам крыс Спрег-Доули отличие фармакокинетических параметров было минимальным (табл. 10).

- 14 031569

Таблица 9. Сводная информация по характеристикам солей соединения (I)

Противоион	XRPD	Соотношение соединение (I): кислота	DSC (°C)	Потеря по TGA (вес. %)	Г равиметрический анализ поглощения влаги	Растворимость в DI воде (мкг/мл)
Фумарат	А	1,0:0,9	112, 158	7,2 (45-160°С)
Фумарат	В	1,03,0	58, 162	2,6 (40-120°С)	3,7 вес. %, 60% RH 10,5 вес. %, 90% RH
Фумарат	С	1,0:1,1	62, 156	2,6 (30-100°С)		625
Фумарат	D	1,0:1,0	219	0,9 (30-100°С)	2,1 вес. %, 60% RH 4,0 вес. %, 90% RH	170
Малеат	А	1,0:0,95	219	Не наблюдали потерю до начала плавления	1,3 вес. %, 60% RH 2,2 вес. %, 90% RH
Фосфат	Аморфная	1,0:1,1	83, 179	1,9	6,1 вес. %, 60% RH 10,9 вес. %, 90% RH	> 1 х 10⁵
НС1	Аморфная			2,3 (30-150°С)		> 1 х 10⁵

Таблица 10. Фармакокинетические параметры после перорального введения солей соединения (I), в виде порошка в капсуле, крысам Спрег-Доули

Солевая форма	НС1	Фумарат (форма D)	Малеат (форма А)
Пероральная доза (мг/кг)	5,0	5,0	5,0
Смаке (нг/мл)	250	270	200
AUCo-шос.кднии (нг.ч/мл)	2400	2780	1500

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фумаратная соль соединения (I), представленного следующей структурной формулой:

Соединение (I) , причем мольное соотношение между соединением (I) и фумаровой кислотой составляет 1:1.
2. Фумаратная соль по п.1, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 8,2, 9,7, 16,7 и 20,1°±0,2 при 2θ.
3. Фумаратная соль по п.1, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 8,2, 9,7, 10,7, 11,5, 13,6, 14,9,

16.7, 18,1, 18,8, 20,1, 23,5 и 24,5°±0,2 при 2θ.
4. Фумаратная соль по п.2 или 3, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC) 112 и 158°C.
5. Фумаратная соль по п.1, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму В, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 11,9, 14,9, 18,7 и 21,5°±0,2 при 2θ.
6. Фумаратная соль по п.5, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму В, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 5,5, 5,9, 11,9, 14,9, 16,7, 17,4,

18.7, 21,5 и 23,4°±0,2 при 2θ.
7. Фумаратная соль по п.5 или 6, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму В, характеризующуюся критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC) 58 и 162°C.
8. Фумаратная соль по п.1, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму С, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 9,8, 16,8, 16,9, 19,9 и 23,5°±0,2 при 2θ.
9. Фумаратная соль по п.8, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму С, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 9,7, 9,8, 11,7, 15,1, 16,8, 16,9, 19,9, 23,5 и 23,7°±0,2 при 2θ.
10. Фумаратная соль по п.8 или 9, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму С, характеризующуюся критическими температурами фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC) 62 и 156°C.
11. Фумаратная соль по п.1, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму D, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 9,6, 12,8, 16,0, 16,9, 20,8, 21,2,

- 15 031569

21,5 и 22,0°±0,2 при 2θ.
12. Фумаратная соль по п.11, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму D, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 9,6, 11,7, 12,0, 12,8, 16,0, 16,6, 16,9, 18,1, 19,2, 19,8, 20,7, 20,8, 21,2, 21,5, 22,0, 22,5, 24,0, 26,0 и 29,8°±0,2 при 2θ.
13. Фумаратная соль по п.11 или 12, причем фумаратная соль имеет монокристаллическую форму D, характеризующуюся критической температурой фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC) 219°C.
14. Фумаратная соль по любому из пп.1-13, причем по меньшей мере 90 вес.% фумаратной соли имеет монокристаллическую форму.
15. Малеатная соль соединения (I), представленного следующей структурной формулой:

Compound (Т) причем мольное соотношение между соединением (I) и малеиновой кислотой составляет 1:1.
16. Малеатная соль по п.15, причем малеатная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 11,5, 12,6, 14,9 и 15,1°±0,2 при 2θ.
17. Малеатная соль по п.16, причем малеатная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся порошковой рентгенограммой, которая содержит пики в 5,5, 5,8, 10,8, 11,5, 12,4, 12,6, 14,1, 14,9, 15,1, 16,7, 17,1, 17,8, 18,6, 19,5, 19,9, 21,9, 22,2, 23,0, 23,3, 23,5, 23,9 и 26,1°±0,2 при 2θ.
18. Малеатная соль по п.16 или 17, причем малеатная соль имеет монокристаллическую форму А, характеризующуюся критической температурой фазового перехода по дифференциальному сканирующему калориметру (DSC) 219°C.
19. Малеатная соль по любому из пп.15-18, причем по меньшей мере 90 вес.% соли имеет кристаллическую форму.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая фумаратную соль по любому из пп.1-14 или малеатную соль по любому из пп.15-19 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
21. Способ лечения субъекта со злокачественной опухолью, включающий введение субъекту эффективного количества соли по любому из пп.1-19 или фармацевтической композиции на ее основе.
22. Способ по п.21, в котором злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли молочной железы, злокачественной опухоли толстой кишки, нейробластомы, злокачественной опухоли предстательной железы, меланомы, мультиформной глиобластомы, злокачественной опухоли яичников, лимфомы, лейкоза, остеосаркомы, герминомы, глиомы, фибросаркомы, саркомы органов желудочно-кишечного тракта, фиброзной гистиоцитомы, круглоклеточной саркомы, синовиальной саркомы, злокачественной опухоли шейки матки, аногенитальной злокачественной опухоли, злокачественной опухоли головы и шеи и злокачественной опухоли ротоглотки.
23. Способ по п.22, в котором злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из злокачественной опухоли легких, злокачественной опухоли молочной железы и злокачественной опухоли толстой кишки.

мВт SUC-M-88-20, 24.08.2011 17:27:57

SUC-M-88-20, 1,4920 мг

Способ: 30-300-ЮС/мин.

30,0-300,0°С 10,00°С/мин.

Начало 148,56°С

Экстрапол. пик 113.53°С Пиковое значение -2.79 мВт нормализованное -1.87 Wg^A-l Пик И2.06°С

Экстрапол. пик 158.2 ГС Пиковое значение -2.90 мВт нормализованное -1.94 Wg^A-l Пик 158.04°С