RS53195B2 - Polimerni konjugati k-252a i njihovi derivati - Google Patents

Polimerni konjugati k-252a i njihovi derivati

Info

Publication number
RS53195B2
RS53195B2 RS20140104A RSP20140104A RS53195B2 RS 53195 B2 RS53195 B2 RS 53195B2 RS 20140104 A RS20140104 A RS 20140104A RS P20140104 A RSP20140104 A RS P20140104A RS 53195 B2 RS53195 B2 RS 53195B2
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
substituted
group
polymer
unsubstituted
hydrogen
Prior art date
Application number
RS20140104A
Other languages
English (en)
Inventor
Silvio Traversa
Raffaella Bagnod
Domenico Barone
Rava Rossa Luisa Bertarione
Silvano Fumero
Valentina Mainero
Alessandra Marconi
Cecilia Oderda
Carlo Pincelli
Chiara Lorenzetto
Luca Beccaria
Original Assignee
Creabilis Therapeutics Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37075187&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS53195(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Creabilis Therapeutics Spa filed Critical Creabilis Therapeutics Spa
Publication of RS53195B publication Critical patent/RS53195B/sr
Publication of RS53195B2 publication Critical patent/RS53195B2/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
    • C08G73/06—Polycondensates having nitrogen-containing heterocyclic rings in the main chain of the macromolecule
    • C08G73/0666—Polycondensates containing five-membered rings, condensed with other rings, with nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C08G73/0672—Polycondensates containing five-membered rings, condensed with other rings, with nitrogen atoms as the only ring hetero atoms with only one nitrogen atom in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/12—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/12—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
    • C08G61/122—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides
    • C08G61/123—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds
    • C08G61/124—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds with a five-membered ring containing one nitrogen atom in the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

Opis
[0001] Predstavljeni pronalazak se odnosi na nove polimerne konjugate K-252a i njihove derivate i na njihovu upotrebu za pripremu farmaceutske kompozicije korisne za prevenciju, ublažavanje i lečenje patologija povezanih sa kinazom. Naročito, predstavljeni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) za upotrebu u prevenciji, ublažavanju i lečenju patologija povezanih sa HMGB1. U posebnom aspektu, pronalazak se odnosi na upotrebu novih polimernih konjugata K-252a i njihovih derivata u pripremi farmaceutske kompozicije korisne za prevenciju, ublažavanje i lečenje neuroloških poremećaja, neuropatija i neurodegenerativnih poremećaja centralnog i perifernog nervnog sistema. U sledećem poželjnom aspektu, pronalazak se odnosi na upotrebu polimernih konjugata u pripremi farmaceutske kompozicije korisne za prevenciju, ublažavanje i lečenje kožnih patologija, naročito kožnih patologija povezanih sa prekomernom proliferacijom keratinocita, naročito psorijazom. U sledećem aspektu, pronalazak se odnosi na polimerne konjugate za upotrebu u prevenciji, ublažavanju i lečenju bola povezanog sa NGF. Naročito, predstavljeni pronalazak se odnosi na polimerni konjugat K-252a i njegove derivate, pri čemu je polimer polietilen glikol ili metoksi-polietilen glikol.
[0002] K-252a je lipofilni alkaloid prvi put izolovan iz zemljišne gljive Nocardiopsis sp. (WO 97/38120), koji ima indolokarbazolni skelet predstavljen sledećom formulom:
[0003] K-252a snažno inhibira protein kinazu C (PKC), koja ima centralnu ulogu u regulaciji ćelijskih funkcija, i ima različite aktivnosti kao što je aktivnost inhibicije kontrakcije glatkih mišića (Jpn. 3. Pharmacol. 43(suppl.): 284, 1987), aktivnost inhibicije izlučivanja serotonina (Yamada et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 144:35-40, 1987), aktivnost inhibicije produžavanja nervnih vlakana (aksona) (Koizumi et al., J. Neurosci. Res. 8:715, 1988), aktivnost inhibicije oslobađanja histamina (Morita et al., Allergy 43:100-104, 1988), aktivnost inhibicije miozin kinaze lakog lanca glatkog mišića (Nakanishi et al., J. Biol. Chem.
263:6215-6219, 1988), anti-inflamatornu aktivnost (Papp et al., Acta Physiol. Hung. 80: 423-425, 1992), aktivnost ćelijskog preživljavanja (Glicksman et al., J. Neurochem. 64:1502-1512, 1995), itd. Takođe je navedeno u Grove et al., Exp. Cell Res., 193: 175-182, 1991 da K-252a ima aktivnost inhibicije proizvodnje IL-2. Takođe je postignuta kompletna sinteza K-252a (Wood et al., J. Am. Chem. Soc.117:10413-10414, 1995).
[0004] Faktor rasta nerava (NGF) je najbolje okarakterisani neurotrofin i potreban je za normalan razvoj i funkciju određenih senzornih i holinergičkih neurona (Levi-Montalcini, Annu. Rev. Neurosci. 5:341-362, 1982). Neurotrofni receptori visokog afiniteta, trks, sadrže porodicu proteina koja se sastoji od trk A, trk B i trk C (Knusel et al., J. Neurochem.59:715-722, 1992). Članovi ove familije receptora su proteini povezani sa membranom koji ispoljavaju aktivnost tirozin kinaze. Interakcija neurotrofin liganda sa trks indukuje fosforilaciju specifičnih tirozinskih ostataka na receptoru. Fosforilacija trks je neposredni odgovor na vezivanje neurotrofina. Postoji apsolutna potreba za aktivacijom enzimatskih puteva koji regulišu funkcionalne odgovore na neurotrofine od strane ćelije (Klein et al., Cell 65: 189-197, 1991; Lamballe et al., Cell 66:967-979, 1991). K-252a je inhibitor nekoliko enzima, uključujući trks. U skladu sa ovim efektom, K-252a blokira NGF-posredovano ćelijsko preživljavanje u nekim in vitro ćelijskim testovima (Koizumi et al., J. Neurosci.
8:715-721, 1988; Doherty et al., Neurosci. Lett. 96:1-6, 1989; Matsuda et al., Neurosci. Lett.
87:11-17, 1988), s obzirom na to da on utiče na fosforilaciono stanje trks.
[0005] U literaturi, pokazan je terapeutski potencijal K-252a i njegovih derivata, kao, na primer, bis-etil-tiometil analoga CEP-1347 u neurodegenerativnim bolestima (Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2004; 44:451-74; Neurochem Int. 2001 Nov-Dec; 39(5-6):459-68; Neuroport. 2000 Nov 9; 11 (16): 3453-6; Neuroscience.1998 Sep; 86(2): 461-72; Brains Res.
1994 Jul 4; 650(1): 170-4).
[0006] Keratinocite, ključna ćelijska komponenta kako za homeostazu tako i za patofiziološke procese kože, izlučuju određeni broj citokina i stimulisane su pomoću nekoliko faktora rasta. NGF je sintetisan u koži i značajno stimuliše proliferaciju normalnih humanih keratinocita u kulturi na način zavistan od doze. Ovaj efekat može biti sprečen dodavanjem K-252a, koji je specifičan inhibitor NGF receptora (trk) visokog afiniteta, na taj način sugerišući da je efekat NGF na humanim keratinocitama posredovan preko visoko-afinitetnog NGF receptora. Tako bi NGF mogao da deluje kao citokin u ljudskoj koži i da ima udela u poremećajima proliferacije keratinocita (Pincelli et al., J. Invest. Dermatol. 103:13-18, 1994). Neurogena inflamacija i uloga NGF je ekstenzivno ispitivana kod psorijaze. Tu postoje povećani nivoi NGF u keratinocitama i ushodna regulacija NGF receptora u kutanim nervima psorijatičkih plakova. NGF može da utiče na sve istaknute patološke događaje zabeležene kod psorijaze kao što je proliferacija keratinocita, angiogeneza, T ćelijska aktivacija, ekspresija adhezionog molekula, proliferacija kutanih nerava i ushodna regulacija neuropeptida. U dvostruko slepoj, placebo-konstrolisanoj studiji, uloga NGF i NGF receptora u psorijazi je ispitivana u in vivo sistemu upotrebom modela psorijaze teško kombinovane imunodeficijentne (SCID) mišjehumane kože. Transplantirani psorijatički plakovi na SCID miševima su tretirani sa K-252a. Psorijaza je značajno poboljšana posle 2 nedelje terapije. (Raychaudhuri et al., J. Invest. Dermatol. 122:812-819, 2004).
[0007] Dalje je objavljeno da NGF ima kritičnu ulogu u stvaranju bola i hiperalgezije kod nekoliko akutnih i hroničnih stanja bola. Ekspresija NGF je visoka u povređenim i tkivima pod upalom, i aktivacija NGF receptor tirozin kinaze TrkA na nociceptivnim neuronima pokreće i stimuliše prenos signala bola preko višestrukih mehanizama. Očekuje se da je antagonizam NGF visoko efikasan terapeutski pristup kod mnogih stanja bolesti, i da je bez štetnih efekata tradicionalnih lekova analgetika [Hefti FF et al. Trends Pharmacol. Sci. (2006) 27:85-91]. Dokaz ukazuje na to da su TrkA receptori potrebni za nociceptivne aktivnosti NGF. Većina inhibitora receptor tirozin kinaze blokira vezivanje ATP za katalitički domen tirozin kinaze [Madhusudan S et al. Clin. Biochem. (2004) 37: 618-635]. Alkaloid K-252a inhibira Trk prenos signala sa visokim potencijalnom i ublažava hipersenzitivnost u životinjskom modelu bola u pankreasu [Winston JH et al. J. Pain (2003) 4:329-337]. Međutim, K-252a nema selektivnost za TrkA s obzirom na to da je potentan inhibitor za nekoliko kinaza. Ovo znači da K-252a verovatno ima mnoge štetne efekte koji nisu povezani sa inhibicijom TrkA.
[0008] Patentna prijava WO 2005/014003 opisuje upotrebu inhibitora tirozin kinaze mikrobijalnog porekla koji pripadaju K-252 porodici da bi se pripremili topikalni lekovi sposobni da inhibiraju karakteristiku prekomerne proliferacije keratinocita kod poremećaja kao što su psorijaza i tumori kože.
[0009] B.H. Long i B.N. Balasubramanian (Non-camptothecin topoisomerase I active compounds as potential anticancer agents, Expert Opinion on Therapeutic Patents, 2000, United Kingdom; Vol. 10, no. 5, pages 635-666) navode da se indokarbazoli mogu koristiti kao stabilizatori intermedijera topoizomeraze I u hemoterapiji kancera. Pored ostalih, navedeno je jedinjenje K252a.
[0010] Evropska patentna prijava EP 0303 697 A1 navodi nove derivate K252, a među njima K252a. Navedena jedinjenja su fiziološki aktivne supstance koje imaju aktivnost inhibicije protein kinaze C i onkostatičku aktivnost.
[0011] Međunarodna patentna prijava PCT/EP2005/008258 navodi upotrebu K-252a i njegovih derivata u prevenciji i lečenju patologija povezanih sa HMGB1. HMGB1 je proinflamatorni hemokin koga oslobađaju nektrotičke ili umiruće ćelije, što dovodi do inflamatorne citokinske kaskade kod nekoliko humanih patologija. U poželjnoj varijanti prethodno navedene SAD patentne prijave opisuju novu upotrebu K-252a i njegovih derivata kao terapeutskog sredstva za prevenciju i lečenje restenoze. K-252a ima ustvari sposobnost blokiranja/inhibicije HMGB1-indukovane migracije i proliferacije ćelija glatkih mišića arterija, događaja koji su u osnovi formiranja restenoze. U tom smislu, K-252a i njegovi derivati su postavljeni kao omotač na površini vezivanjem, ugrađivanjem ili adsorbovanjem na medicinski uređaj, naročito na stent, u cilju omogućavanja oslobađanja aktivnog sredstva in situ.
[0012] Pored samog K-252a, različiti derivati K-252a su sintetisani i testirani za biološku aktivnost. Na primer, CEP1347, derivat K252a, zadržava neuroprotektivna svojstva, ali ne inhibira TrkA. Pokazano je da CEP1347 direktno inhibira MAPKKKs, uključujući MLK3 (Roux et al., J. Biol. Chem. 277:49473-49480, 2002). Sledeći derivat K-252a, KT5926, je ispitivan u odnosu na replikaciju virusa vezikularnog stomatitisa (VSV) u BHK-21 ćelijama (Kim et al., Biol. Pharm. Bull. 21:498-505, 1998). Poznato je da analozi K-252a sa konzervativnim supstitucijama na C3’ zadržavaju potenciju protiv opsega kinaza (Schneider et al., Org. Lett.7:1695-1698, 2005).
[0013] Efikasnost sistemski primenjenih lekova može biti otežana in vivo faktorima kao što su slaba rastvorljivost na fiziološkoj pH vrednosti i brza eliminacija glomerularnom filtracijom, ćelijskim klirensom i metabolizmom. U mnogim slučajevima, takvi nepovoljni efekti sprečavaju efikasnu terapeutsku upotrebu takvih sredstava. Uspešna strategija za poboljšanje efikasnosti i trajanja efekata sredstva za smanjenje potencijalnih toksikoloških efekata je kovalentno vezivanje biološki aktivnog sredstva za različite polimere. Jedan od polimera koji se najčešće koristi za poboljšanje farmakoloških i toksikoloških svojstava aktivnog sredstva je polialkilenoksid polietilen glikol, skraćeno PEG.
[0014] Polimeri polietilen glikola (PEG), koji su amfifilni, netoksični i imunološki inertni, mogu biti konjugovani za lekove kako bi se manipulisalo mnogim od farmakokinetičkih i toksikoloških svojstava. U oblasti primene lekova, PEG derivati su široko korišćeni u kovalentnoj vezi (tj., "PEG-ilacija") sa proteinima u cilju smanjenja imunogenosti, proteolize i klirensa bubrega i da bi se pojačala rastvorljivost (Zalipsky, Adv. Drug Del. Rev. 16:157-182, 1995). Slično, PEG je vezan za relativno hidrofobne lekove niske molekulske težine u cilju smanjenja toksičnosti, promene biološke raspodele i da bi se povećala rastvorljivost. Pegilovani lekovi mogu biti efikasniji od njihovih nemodifikovanih matičnih lekova zahvaljujući osobinama PEG koje su prenete na konjugate (Molineux, Pharmacotherapy 23: 3S-8S, 2003).
[0015] Cilj predstavljenog pronalaska je bio iskorišćavanje jedinstvenih karakteristika nekih polimera, naročito polietilen glikola (PEG) u cilju razvoja terapeutski korisnih oblika primene članova porodice indolokarbazola. Cilj pronalazača je bio dobijanje preko PEG modifikacije poboljšanog farmakokinetičkog i toksikološkog učinka jedinjenja indolokarbazola konjugovanog za polimer. Pored toga, promena u aktivnosti i/ili profilu toksičnosti novih konjugovanih jedinjenja takođe je bila fokus pronalaska.
[0016] Jedan od specifičnih problema koji su u osnovi predstavljenog pronalaska bio je iskoristiti jedinstvene karakteristike nekih polimera, naročito PEG, u cilju razvoja oblika K-252a za primenu koji omogućava poboljšani farmakokinetički i toksikološki učinak, postižući najbolju biodostupnost K-252a ili njegovog derivata na različite moguće načine primene. U posebnom aspektu predstavljenog pronalaska, problem je bio iskoristiti karakteristike polimera u cilju postizanja, u slučaju topikalne primene, smanjene apsorpcije K-252a ili njegovih derivata i prema tome smanjenja i čak eliminacije moguće sistemske toksičnosti i/ili sporednih efekata.
[0017] Predstavljeni pronalazak je prema tome usmeren na nove polimerne konjugate članova jedinjenja indolokarbazola i naročito K-252a ili nejgovih derivata, njihovu pripremu i njihovu upotrebu, pri čemu polimerni konjugat ima povećanu rastvorljivost u vodi, poboljšano farmaceutsko upravljanje, poboljšanu farmakokinetiku i biodostupnost i/ili smanjenu toksičnost i/ili imunogenost u poređenju sa nekonjugovanim jedinjenjima indolokarbazola ili sa K-252a jedinjenjem ili njegovim derivatima.
[0018] U naročitom poželjnom aspektu, predstavljeni pronalazak je usmeren na polimerni konjugat K-252a ili njegove derivate, njihovu pripremu i njihovu upotrebu, pri čemu, posle topikalne primene, sistemska apsorpcija je ograničena i prema tome su sistemska toksičnost i/ili sporedni efekti sniženi ili čak eliminisani.
[0019] Pronalazak je definisan priloženim setom patentnih zahteva.
[0020] Prvi aspekt predstavljenog pronalaska je prema tome polimerni konjugat jedinjenja indolokarbazola opšte formule (I):
i poželjno opšte formule (II)
gde su Ra i Rb nezavisno vodonik ili organski ostatak izabran iz grupe koju čine supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi ili alkoksikarbonil; ili
Ra i Rb zajedno formiraju 5-7 -članu, poželjno 5 –članu cikličnu strukturu fuzionisanu direktno za strukturu jezgra indolo[2,3-a]karbazola, koja sadrži 0, 1 ili 2 heteroatoma, poželjno atoma azota, i izborno koja sadrži karbonil grupu i cikličnu strukturu koja je nesupstituisana ili supstituisana sa najmenje jednom supstituišućom grupom izabranom od karbonil grupe ili W1ili W2i pri čemu ako je heteroatom član ciklične strukture azot, azot je supstituisan ostatkom R3;
i gde Rc i Rd su
(a) nezavisno vodonik ili organski ostatak izabran iz grupe koju čine supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi ili alkoksikarbonil; ili jedan od Rc i Rd je izabran od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila i hidroksi, dok je drugi od Rc i Rd jednak 3-7 -člani, poželjno 5 ili 6 –člana ciklična grupa, poželjno ciklična ugljenohidratna grupa, pri čemu je ciklična grupa nesupstituisana ili supstituisana, poželjno supstituisana sa najmanje jednom funkcionalnom grupom pogodnom za konjugaciju polimerne grupe, poželjnije supstituisana na najmanje jednom, poželjno 2 do 3 i najviše svim položajima ciklusa sa hidroksi, supstituisanim ili nesupstituisanim nižim alkilom, nižim alkoksi, karboksi, alkoksikarbonil, amino, nižim alkilamino, nižim alkilaminokarbonilom ili oksim grupom; ili
(b) Rc i Rd zajedno formiraju 3-7 -članu, poželjno 5 ili 6 –članu cikličnu grupu, poželjno cikličnu ugljenohidratnu grupu, pri čemu je ciklična grupa nesupstituisana ili supstituisana, poželjno supstituisana sa najmanje jednom funkcionalnom grupom koja je pogodna za konjugaciju polimerne grupe, poželjnije supstituisana na najmanje jednom, poželjno dva ili tri, i maksimalno na svim položajima ciklusa sa hidroksi, supstituisanim ili nesupstituisanim nižim alkilom, nižim alkoksi, karboksi, alkoksikarbonil, amino, nižim alkilamino, nižim alkilaminokarbonilom i/ili oksim grupom,
i gde su ostaci R1, R2, R3, W1i W2definisani kao što je opisano u daljem tekstu;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0021] Jedinjenja (I) i (II) imaju najmanje jednu funkcionalnu grupu za koju je polimerna grupa konjugovana, poželjno koja se nalazi na radikalu Rci/ili Rd. Konjugat može da sadrži jednu ili nekoliko polimernih grupa, npr. jednu, dve, tri ili više polimernih grupa. Poželjno, jedinjenja konjugata prema predstavljenom pronalasku sadrže jednu polimernu grupu.
[0022] 3-7 –člana ciklična grupa, poželjno ciklična ugljenohidratna grupa je vezana za jedinjenje indolokarbazola vezivanjem za azot indola ili vezivanjem za oba azota indola strukture indolokarbazola. Stoga, vezivanje može da obuhvati jedan indol ili dva indola i poželjno je obezbeđeno preko jedne ili dve N-glikozidne veze.
[0023] Poželjno, 3-7 –člana ciklična grupa, poželjno ciklična ugljenohidratna grupa, je supstituisana furano ili supstituisana pirano grupa. Stoga, poželjna polimerna konjugovana jedinjenja su ciklofuranozilovana jedinjenja indolokarbazola ili ciklopiranozilovana jedinjenja indolokarbazola. Poželjna ciklofuranozilovana jedinjenja indolokarbazola koja su prema pronalasku konjugovana za polimernu grupu mogu biti izabrana od K-252a, K-252b, ICP-1. Poželjna ciklopiranozilovana jedinjenja indolokarbazola mogu biti izabrana od staurosporina, K-252d, TAN-1030a, RK-286c, MLR-52, rebekamicina, UNC-01, UNC-02 i RK-1409B.
[0024] Najmanje jedna polimerna grupa je konjugovana za jedinjenje formula (I) i/ili (II) kovalentnom hemijskom vezom u cilju obezbeđivanja stabilnog konjugata. Naročito, polimerna grupa je vezana za jedinjenja opštih formula (I) i/ili (II) vezivanjem na funkcionalnoj grupi izabranoj od hidroksi, amino, karboksi, alkoksikarbonil ili aminokarbonil grupe. U veoma poželjnoj varijanti pronalaska, polimerna grupa je vezana za jedinjenje opštih formula (I) i/ili (II) na jednom od ostataka Rc i Rd, naročito poželjno na cikličnoj ugljenohidratnoj grupi identifikovanoj pomoću ostataka R<c>i R<d>. Polimerna grupa jedinjenja prema pronalasku kao i poželjna hemijska veza pomoću koje polimer može biti vezan za jedinjenje indolokarbazola formula (I) i/ili (II) prikazani su u daljem tekstu.
[0025] Veoma poželjan aspekt predstavljenog pronalaska je polimerni konjugat, koji je predstavljen sledećom formulom (III):
gde su R1 i R2 isti ili različiti ostaci i svaki je nezavisno izabran iz grupe koju čine:
a) vodonik, halogen, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi, niži alkoksikarbonil, acil, nitro, karbamoil, niži alkilaminokarbonil, NR5R6, gde su i R5 i R6 nezavisno izabrani od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkinila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila, supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila, supstituisanog ili nesupstituisanog aralkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkilaminokarbonila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg arilaminokarbonila, alkoksikarbonila, karbamoila, acila ili R<5>i R6 su spojeni sa atomom azota iz heterociklične grupe,
b) -CO(CH2)jR4 , gde je j jednako 1 do 6, i R4 je izabran iz grupe koju čine
(i) vodonik, halogen, -N3,
(ii) -NR5R6, gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu,
(iii) -SR7, gde je R7 izabran iz grupe koju čine vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani aralkil, -(CH2)aCO2R10, (gde, a je 1 ili 2, i gde, R10 je izabran iz grupe koju čine vodonik i supstituisani ili nesupstituisani niži alkil), i -(CH2)aCO2NR5R6, (gde su a i R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu)
(iv) -OR8, -OCOR8, gde je R8 izabran od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkinila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila, supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila
c) -CH(OH)(CH 4
2)jR , gde su j i R4 kao što su definisani u prethodnom tekstu;
d) -(CH2)dCHR11CO2R12 ili -(CH2)dCHR11CONR5R6, gde je d jednako 0 do 5, R11 je vodonik, -CONR5R6, ili -CO2R13 (gde je R13 jednako vodonik ili supstituisani ili nesupstituisani niži alkil) i R<12>je vodonik ili supstituisani ili nesupstituisani niži alkil;
e) -(CH2)kR14 gde je k jednako 2 do 6 i R14 je halogen, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, -COOR15, -OR15, (gde je R15 jednak vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril,
1
supstituisani ili nesupstituisani heteroaril ili acil), -SR7 (gde je R7 kao što je definisan u prethodnom tekstu), -CONR5R6, -NR5R6 (gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu) ili -N3;
f) -CH=CH(CH2)mR16, gde, m je 0 do 4, i R16 je vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, -COOR15, -OR15 (gde je R15 kao što je definisan u prethodnom tekstu), -CONR5R6 ili -NR5R6 (gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu);
g) -CH=C(CO2R12)2, gde je R12 kao što je definisan u prethonom tekstu;
h) -C≡C(CH2)nR16, gde je n jednako 0 do 4 i R16 je kao što je definisan u prethodnom tekstu;
(i) -CH2OR22 , gde, R22 je tri-niži alkil silil u kome su tri niže alkil grupe iste ili različite ili gde R22 ima isto značenje kao R<8>.
(j) -CH(SR23)2i -CH2-SR7 gde, R23 je niži alkil, niži alkenil ili niži alkinil i gde je R<7>kao što je definisan u prethodnom.
[0026] R3 je vodonik, halogen, acil, karbamoil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil ili amino; X predstavlja -L1-X’ i Y predstavlja -L<2>-Y’, pri čemu, najmanje jedan od X’ i Y’ je polimer, bilo linearni ili granati, koji je vezan pomoću L<1>i/ili L<2>za tetrahidrofuran grupu jedinjenja formule (III); L1 i/ili L2 su kovalentna hemijska veza ili linker grupa koja vezuje tetrahidrofuran grupu za polimer X’ i/ili Y’;
kada je Y’ polimer, i X’ nije polimer, L<1>je kovalentna hemijska veza i X’ je izabran iz grupe koju čine
(a) vodonik, niži hidroksialkil, acil, karboksi, niži alkoksikarbonil,
(b) -CONR17aR17b, gde su svaki R17a i R17b nezavisno izabrani od
(i) vodonika, nižeg alkila, nižeg alkenila, nižeg alkinila,
(ii) -CH2R18; gde je R18 jednako hidroksi, ili
(iii) -NR19R20, gde su svaki R19 ili R20 nezavisno izabrani od vodonika, nižeg alkila, nižeg alkenila, nižeg alkinila ili R<19>ili R<20>su nezavisno ostatak αaminokiseline u kome je hidroksi grupa karboksil grupe isključena, ili R<19>ili R<20>su spojeni sa atomom azota tako da formiraju heterocikličnu grupu; i
(c) -CH=N-R21 , gde je R21 jednako hidroksi, niži alkoksi, amino, guanidino ili imidazolilamino;
kada je X’ polimer, i Y’ nije polimer, L<2>je kovalentna hemijska veza i Y’ je izabran od hidroksi, nižeg alkoksi, aralkiloksi ili aciloksi;
W1 i W2 su nezavisno vodonik, hidroksi ili W1 i W2 zajedno predstavljaju kiseonik;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0027] Termin "niži alkil", kada je korišćen pojedinačno ili u kombinaciji sa drugim grupama, označava pravolančanu ili granatu nižu alkil grupu koja sadrži od 1-6 atoma ugljenika, poželjno od 1-5, poželjnije od 1-4 i naročito poželjno 1-3 ili 1-2 atoma ugljenika. Ove grupe obuhvataju naročito metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, amil, izoamil, neopentil, 1-etilpropil, heksil i slično. Niža alkil grupa "niže alkoksi", "niže alkoksikarbonil", "niže alkilaminokarbonil", "niže hidroksialkil" i "tri-niže alkilsilil" grupe ima isto značenje kao "niži alkil" definisan u prethodnom tekstu.
[0028] "Niže alkenil" grupe su definisane kao C2-C6alkenil grupe koje mogu biti pravolančane ili granate i mogu biti u Z ili E obliku. Takve grupe obuhvataju vinil, propenil, 1-butenil, izobutenil, 2-butenil, 1-pentenil, (Z)-2-pentenil, (E)-2-pentenil, (Z)-4-metil-2-pentenil, (E)-4-metil-2-pentenil, pentadienil, npr., 1, 3 ili 2,4-pentadienil, i slično. Poželjnije C2-C6-alkenil grupe su C2-C5-, C2-C4-alkenil grupe i čak poželjnije C2-C3-alkenil grupe.
[0029] Termin "niže alkinil" grupe odnosi se na C2-C6-alkinil grupe koje mogu biti pravolančane ili granate i obuhvataju etinil, propinil, 1-butinil, 2-butinil, 1-pentinil, 2-pentinil, 3-metil-1-pentinil, 3-pentinil, 1-heksinil, 2-heksinil, 3-heksinil i slično. Poželjnije C2-C6-alkinil grupe su C2-C5-, C2-C4-alkinil grupe i poželjnije C2-C3-alkinil grupe.
[0030] Termin "aril" grupa se odnosi na C6-C14-aril grupe koje sadrže od 6 do 14 atoma ugljenika u prstenu. Ove grupe mogu biti mono-, bi- ili triciklične i to su fuzionisani prstenovi. Poželjne aril grupe obuhvataju fenil, bifenil, naftil, antracenil, fenantrenil i slično. Aril grupa "arilkarbonila" i "arilaminokarbonil" grupa ima isto značenje kao što je definisano u prethodnom tekstu.
[0031] Termin "heteroaril" grupe može da sadrži 1 do 3 heteroatoma nezavisno izabrana od azota, sumpora ili kiseonika i označava C3-C13-heteroaril grupe. Ove grupe mogu biti mono-, bi- ili triciklične. C3-C13heteroaril grupe prema predstavljenom pronalasku obuhvataju heteroaromatične i zasićene i delimično zasićene heterociklične grupe. Ove heterociklične grupe mogu biti monociklične, biciklične, triciklične. Poželjne 5 ili 6-člane heterociklične grupe su tienil, furil, pirolil, piridil, piranil, morfolinil, pirazinil, metilpirolil i piridazinil. C3-C13-heteroaril može biti biciklična heterociklična grupa. Poželjne biciklične heterociklične grupe su benzofuril, benzotienil, indolil, imidazolil i pirimidinil. Najpoželjniji C3-C13-heteroarili su furil i piridil.
[0032] Termin "niži alkoksi" obuhvata alkoksi grupe koje sadrže od 1 do 6 atoma ugljenika, poželjno od 1 do 5, poželjnije od 1-4 i naročito poželjno 1 do 3 ili 1 do 2 atoma ugljenika i mogu biti pravolančani ili granati. Ove grupe obuhvataju metoksi, etoksi, propoksi, butoksi, izopropoksi, terc-butoksi, pentoksi, heksoksi i slično.
[0033] Termin "acil" obuhvata niži alkanoil koji sadrži 1 do 6 atoma ugljenika, poželjno od 1 do 5, od 1 do 4, od 1 do 3 ili od 1 do 2 atoma ugljenika i može biti pravolančan ili granat. Ove grupe obuhvataju poželjno formil, acetil, propionil, butiril, izobutiril, tercijarni butiril, pentanoil i heksanoil. Acil grupa "aciloksi" grupe ima isto značenje kao što je definisana u prethodnom tekstu.
[0034] Termin "halogen" obuhvata fluoro, hloro, bromo, jodio i slično.
[0035] Termin "aralkil" grupa označava C7-C15-aralkil, pri čemu je alkil grupa supstituisana sa arilom. Alkil grupa i aril mogu biti izabrane od C1-C6alkil grupa i C6-C14-aril grupa kao što su definisane u prethodnom tekstu, pri čemu je ukupan broja toma ugljenika između 7 i 15. Poželjne C7-C15-aralkil grupe su benzil, feniletil, fenilpropil, fenilizopropil, fenilbutil, difenilmetil, 1,1-difeniletil, 1,2-difeniletil. Aralkil grupa "aralkiloksi" grupa ima isto značenje kao što je definisano u prethodnom tekstu.
[0036] Supstituisane niže alkil, alkenil i alkinil grupe imaju 1 do 3 nezavisno izabrana supstituenta, kao što su niži alkil, hidroksi, niži alkoksi, karboksil, niži alkoksikarbonil, nitro, halogen, amino, mono- ili di-niži alkilamino, dioksolan, dioksan, ditiolan i dition. Niža alkil supstituišuća grupa supstituisanih nižih alkil, alkenil i alkinil grupa, i niža alkil grupa nižih alkoksi, nižih alkoksikarbonil i mono- ili di-nižih alkilamino supstituenata supstituisanih nižih alkil, alkenil i alkinil grupa imaju ista značenja kao "niži alkil" definisan u prethodnom tekstu.
[0037] Svaka od supstituisane aril, supstituisane heteroaril i supstituisane aralkil grupe ima 1 do 3 nezavisno izabrana supstituenta, kao što su niži alkil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi, niži alkoksikarbonil, nitro, amino, mono- ili di-niži alkilamino i halogen. Niža alkil grupa
1
nižih alkil, nižih alkoksi, nižih alkoksikarbonil i mono- ili di-nižih alkilamino grupa među supstituentima ima isto značenje kao niži alkil definisan u prethodnom tekstu.
[0038] Heterociklična grupa formirana sa R<5>i R<6>kombinovana sa atomom azota obuhvata pirolidinil, piperidinil, piperidino, morfolinil, morfolino, tiomorfolino, N-metilpiperazinil, indolil i izoindolil.
[0039] α-aminokiselinske grupe obuhvataju glicin, alanin, prolin, glutaminsku kiselinu i lizin, koje mogu biti u L-obliku, D-obliku ili u obliku racemata.
[0040] Poželjno, R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halogen, nitro, -CH2OH, -(CH2)kR14 , -CH=CH(CH2)mR16, -C≡C(CH2)nR15, -CO(CH2)jR4 gde je R4 jednako -SR7, CH2O-(supstituisani ili nesupstituisani) niži alkil (pri čemu je supstituisani niži alkil poželjno metoksimetil, metoksietil ili etoksimetil), -NR<5>R<6>.
[0041] U prethodno navedenim poželjnim značenjima R<1>i R<2>, ostatak R<14>je poželjno izabran od fenila, piridila, imidazolila, tiazolila, tetrazolila, -COOR15, -OR15 (gde je R15 poželjno izabran od vodonika, metila, etila, fenila ili acila), -SR7 (gde je R7 poželjno izabran od supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, 2-tiazolina i piridila) i -NR<5>R<6>(gde su R<5>i R<6>poželjno izabrani od vodonika, metila, etila, fenila, karbamoila i nižeg alkilaminokarbonila). Pored toga, ostatak R16 je poželjno izabran od vodonika, metila, etila, fenila, imidazola, tiazola, tetrazola, -COOR15, -OR15 i -NR5R6 (gde ostaci R15, R5 i R6 imaju poželjna značenja kao što su opisana u prethodnom tekstu). U prethodno navedenim poželjnim značenjima R<1>i R2 , ostatak R7 je poželjno izabran iz grupe koju čine supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani fenil, piridil, pirimidinil, tiazol i tetrazol. Pored toga, k je poželjno 2, 3 ili 4, j je poželjno 1 ili 2 i m i n su nezavisno poželjno 0 ili 1.
[0042] Poželjno, R<3>je vodonik ili acetil, najpoželjnije vodonik.
[0043] Poželjno, svako W<1>i W<2>je vodonik.
[0044] Kada je Y’ polimer, i X’ nije polimer, X’ je poželjno izabran od karboksi, hidroksimetila ili nižeg alkoksikarbonila, pri čemu su naročito poželjni metoksikarbonil i karboksil.
[0045] Kada je X’ polimer i Y’ nije polimer, Y’ je poželjno izabran od hidroksi ili acetiloksi, najpoželjnije hidroksi.
[0046] Veoma poželjna varijanta predstavljenog pronalaska se odnosi na jedinjenje K252-a konjugovano na položaju X i/ili Y za polimer. Prema tome, u veoma poželjnoj varijanti predstavljenog pronalaska, polimerni konjugat formule (III) je predstavljen jedinjenjem u kome R1, R2, R3, W1, i W2su vodonik i najmanje jedan od X’ i Y’ je polimer, pri čemu, ako je Y’ polimer i X’ nije polimer, X’ je metoksikarbonil, i ako je X’ polimer, i Y’ nije polimer, Y’ je hidroksi.
[0047] Veoma poželjna varijanta predstavljenog pronalaska se odnosi na jedinjenje K252-b konjugovano u položaju X i/ili Y za polimer. Prema tome, u veoma poželjnoj varijanti predstavljenog pronalaska, polimerni konjugat formule (III) je predstavljen jedinjenjem u kome R1, R2, R3, W1, i W2su vodonik i najmanje jedan od X’ i Y’ je polimer, pri čemu, ako je Y’ polimer i X’ nije polimer, X’ je karboksil, i ako je X’ polimer, i Y’ nije polimer, Y’ je hidroksi.
[0048] Jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu biti pripremljena kao farmaceutski prihvatljive soli uključujući soli neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, jodovodonična, bromovodonična, fosforna, metafosforna, azotna kiselina i sumporna kiselina kao i soli organskih kiselina, kao što su vinska, sirćetna, limunska, jabučna, benzoeva, glikolna, glukonska, ćilibarna, aril sulfonska, (npr., p-toluen sulfonske kiseline, benzensulfonska), fosforna, malonska i slično. Pogodne kiseline za formiranje farmaceutski prihvatljivih soli su poznate stručnjaku iz date oblasti tehnike. Pored toga, farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja prema predstavljenom pronalasku mogu biti formirane sa farmaceutski prihvatljivim katjonom. Farmaceutski prihvatljivi katjoni su poznati stručnjaku iz date oblasti tehnike i obuhvataju katjone alkalnih metala (Li+, Na+, K+), katjone zemnoalkalnih metala (Mg2+, Ca2+, Ba2+), amonijum i organske katjone, kao što su kvaternarni amonijum katjoni.
[0049] Polimerna grupa prema predstavljenom pronalasku, koja, na primer, je predstavljena u opštoj formuli (III) pomoću X’ i/ili Y’, mora biti biokompatibilna, može biti prirodnog ili polu-sintetičkog ili sintetičkog porekla i može imati linearnu ili granatu strukturu. Polimerni deo jedinjenja prema pronalasku je izabran od polialkilen glikola, polialkilen oksida, poliakrilne kiseline, poliakrilata, poliakrilamida ili njihovih N-alkil derivata, polimetakrilne kiseline, polimetakrilata, polietilakrilne kiseline, polietilakrilata, polivinilpirolidona, poli(vinilalkohola), poliglikolne kiseline, polimlečne kiseline, poli (mlečne-ko-glikolne) kiseline, dektrana ili hitosana.
[0050] U veoma poželjnoj varijanti predstavljenog pronalaska, polimer je polietilen glikol (PEG) grupa, pri čemu terminalna OH grupa može biti izborno modifikovana npr. sa C1-C5alkil ili C1-C5acil grupama, poželjno sa C1-, C2- ili C3-alkil grupama ili C1-, C2- ili C3grupama. Poželjno, modifikovani polietilen glikol je metoksi-polietilenglikol (mPEG).
[0051] Polimer korišćen prema predstavljenom pronalasku ima molekulsku težinu u opsegu od 100 do 100,000 Da, poželjno od 200 do 50,000 Da, i poželjnije od 500 do 10,000 Da.
1
Prmea jednom poželjnom aspektu pronalaska, polimer je kratkolančani PEG koji poželjno ima terminalnu OH i/ili metoksi grupu sa molekulskom težinom u opsegu od 200 do 1500 Da, poželjno od 400 do 1200 Da i još poželjnije od 550 do 1100. U najpoželjnijoj varijanti, kratkolančani PEG ima prosečnu molekulsku težinu od 550 Da ili od 1100 Da. Prema drugom poželjnom aspektu pronalaska, polimer je dugolančani PEG koji poželjno ima terminalnu OH i/ili metoksi grupu, sa molekulskom težinom u opsegu od 4,000 do 6,000 Da, i poželjno od 4,500 do 5,500 Da. U najpoželjnijoj varijanti prvog aspekta pronalaska, koristi se dugolančani PEG ili mPEG sa prosečnom molekulskom težinom od 2,000 Da ili od 5,000 Da.
[0052] Polimerni lanac polimernog konjugata formula (I), (II) i/ili (III) je konjugovan kovalentnom hemijskom vezom za aktivno sredstvo u cilju dobijanja stabilnog konjugata. Sl.
1a i Sl.1b prikazuju npr. poželjan polimerni konjugat formule (III). Polimer može biti vezan direktno za jedinjenje formula (I) ili (II) ili za derivat K-252a formule (III). U ovom slučaju formule (III), L1 i L2 su kovalentna veza.
[0053] U poželjnoj varijanti predstavljenog pronalaska, polimerna grupa je vezana za derivat indolokarbazola upotrebom linker grupe. U poželjnoj varijanti jedinjenja formule (III), polimerna grupa X’ i/ili Y’ su vezane pomoću linker grupe, pri čemu u ovoj varijanti, L<1>i L<2>predstavljaju linker grupu. U poželjnoj varijanti formule (III) prema predstavljenom pronalasku, termin linker grupa L1 i/ili L2 označava grupu koja je dobijena pomoću hemijske reakcije ostatka na C3 položaju tetrahidrofuran grupe formule (III) i reaktivne grupe na polimernoj grupi. Prema tome, L1 i L2 , koje spajaju polimerne grupe X’ i Y’ za prsten tetrahidrofurana, mogu da predstavljaju linker grupu kao što je definisana u prethodnom tekstu.
[0054] Linker grupa može biti bilo koji ostatak poznat stručnjacima iz date oblasti tehnike polimerne konjugacije, dobijena reakcijom funkcionalne grupe pogodne za konjugaciju na jedinjenjima indolokarbazola formula (I) ili (II), poželjno na cikličnoj grupi R<c>i/ili R<d>, ili na supstituentu na prstenu tetrahidrofurana formule (III) i polimera ili polimera aktiviranog reaktivnom grupom. Primeri linker grupe, npr. primeri L1 i/ili L2 grupa, obuhvataju bez ograničenja veze estra, etra, acetala, ketala, vinil etra, karbamata, uree, amina, amida, enamina, imina, oksima, amidina, iminoestra, karbonata, ortoestra, fosfonata, fosfinata, sulfonata, sulfinata, sulfida, sulfata, disulfida, sulfinamida, sulfonamida, tioestra, arila, silana, siloksana, heterociklusa, tiokarbonata, tiokarbamata i fosfonamida. Poželjno, linker grupe ili naročito L<1>i L<2>su izabrani od veza karbamata, etra, estra, ugljenika, amida i/ili amina.
[0055] Pored toga, linker grupa može izborno da sadrži jednu ili više spejser grupa. U kontekstu predstavljenog pronalaska, spejser grupa je definisana kao bifunkcionalna grupa,
1
koja ima na oba terminusa reaktivnu funkcionalnu krajnju grupu. Sa jednom reaktivnom krajnjom grupom, spejser reaguje sa polimernom grupom, npr. X’ i Y’, ili sa reaktivnom grupom na polimernoj grupi. Sa dodatnom funkcionalnom grupom na drugom terminusu, spejser grupa se vezuje za funkcionalnu grupu pogodnu za konjugaciju na jedinjenjima indolokarbazola formula (I) ili (II), poželjno na cikličnoj grupi R<c>i/ili R<d>, ili za prsten tetrahidrofurana formule (III), poželjno sa ostatkom na C3 položaju prstena tetrahidrofurana formule (III). Pogodne spejser grupe su poznate stručnjacima iz date oblasti thenike. Primeri spejser grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na hetero-, bi-funkcionalne male molekule ili polimer. Na primer, spejser grupa može biti predstvaljena pomoću bifunkcionalnih C6-C12alkil grupa ili heterobifunkcionalnih alkil grupa koje sadrže od 1 -3 heteroatoma izabrana od N, S i O ili inetrmedijernog kratkog bifunkcionalnog PEG lanca.
[0056] U najpoželjnijoj varijanti, polimer, predstavljen u opštoj formuli (III) pomoću X’ ili Y’, poželjno se kovalentno vezuje direktno ili pomoću spejser grupe za atom kiseonika poreklom od hidroksi grupe na C3 položaju tetrahidrofuran grupe derivata K-252a. U ovoj poželjnoj varijanti, u opštoj formuli (III), Y’ predstavlja polimernu grupu i L<2>je poželjno karbamatna ili etarska veza (Sl. 1a). U alternativnoj najpoželjnoj varijanti, polimer je kovalentno konjugovan direktno ili preko spejser grupe za karbonil grupu poreklom od metilestar grupe na C3 položaju tetrahidrofuran grupe derivata K-252a. U ovoj alternativnoj varijanti, u opštoj formuli (III), X’ predstavlja polimernu grupu i L<1>je poželjno amidna ili veza amina (Sl.1b).
[0057] Kovalentno vezivanje polimerne grupe za jedinjenja indolokarbazola formula (I), (II) ili (III) dobijeno je pomoću poznate hemijske sinteze. Naročito, kovalentno vezivanje polimera za K-252a ili njegove derivate radi dobijanja jedinjenja formule (III) može se postići pomoću poznatih tehnika hemijske sinteze. Na primer, u jednom primeru varijante predstavljenog pronalaska, polimerna konjugacija K-252a ili njegovih derivata može se postići reakcijom polimera aktiviranog izocijanatom sa K-252a ili sa njegovim derivatima pod stabilnim reakcionim uslovima kao što je generalno prikazano sledećom reakcionom šemom:
Polimer-NCO HO-lek → Polimer-NH-CO-O-lek
[0058] Prema ovoj šemi sinteze, Sl.2 prikazuje primer prema predstavljenom pronalasku, gde je jedinjenje formule (III) dobijeno reakcijom polimerne grupe Y’ koja je PEG aktiviran izocijanatom i hidroksi grupa na C3 položaju tetrahidrofuran grupe iz K-252a. Konjugacija
1
između polimera i K-252a je stoga dobijena preko linker grupe L<2>koja je karbamatna linker grupa.
[0059] U predstavljenom pronalasku, iznenađujuće je nađeno da u poređenju sa članovima jedinjenja indolokarbazola i naročito u poređenju sa K-252a ili njegovim derivatima, jedinjenja formule (I), (II) i/ili (III) ispoljavaju poboljšani farmakokinetički i toksikološki učinak zahvaljujući njihovoj povećanoj rastvorljivosti, koja dovodi do poboljšane biodostupnosti. U sledećem aspektu predstavljenog pronalaska, iznenađujuće je nađeno da jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) pokazuju ograničenu sistemsku apsorpciju posle topikalne primene kao posledica njihove povećane molekularne veličine i hidrofilnosti, na taj način smanjujući sistemsku toksičnost i/ili sporedne efekte (videti Primer 2).
[0060] Dalje su pronalazači predstavljene prijave iznenađujuće našli da polimerni konjugati K-252a formula (I), (II) i/ili (III) ispoljavaju značajno povećanje u selektivnosti u inhibitornoj aktivnosti protiv TrkA tirozin kinaze u poređenju sa neselektivnom inhibitornom aktivnošću prema kinazi samih jedinjenja indolokarbazola i naročito K-252a i njegovih derivata (videti Primer 3). Na taj način, konjugacija jedinjenja indolokarbazola i naročito K-252a za polimerni molekul prema pronalasku dovodi do obezbeđivanja aktivnog sredstva selektivnog u odnosu na njegovo terapeutsko ciljno mesto sa posledičnim smanjenjem neželjenih sporenih efekata.
[0061] Stoga, sledeći aspekt predstavljenog pronalaska su jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) za upotrebu kao aktivna sredstva u leku. U poželjnom aspektu pronalaska, jedinjenja formule (I), (II) i/ili (III) se koriste kao aktivna sredstva u leku za sistemsku primenu i lečenje. U sledećem poželjnom aspektu, pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja formule (I), (II), i/ili (III) kao aktivnih sredstava u topikalnom leku.
[0062] Naročito, konjugovana polimerna jedinjenja prema predstavljenom pronalasku se koriste kao aktivna sredstva u leku korisnom za prevenciju, ublažavanje i lečenje patologija povezanih sa HMGB1.
[0063] Patologija povezana sa HMGB1 je stanje kod pacijenta u kome je povećana koncentracija jedarnog proteina HMGB1 i/ili proteina homolognih sa HMGB1 u acilovanom ili neacilovanom obliku prisutna u biološkim tečnostima i tkivima, u poređenju sa koncentracijom kod normalnih subjekata gde su ovi HMGB1 jedarni proteini praktično nedetektabilni. Ekstracelularni HMGB1, deluju kao potencijalni hemotaktički pro-inflamatoni hemokini. Patologije povezane sa HMGB1 su stoga patologije sa snažnom inhibitornom osnovom, patologije koje rezultiraju iz stimulacije citokina kao što je TNF-alfa, IL-1, IL-6 itd., ili patologije koje rezultiraju iz toksičnih događaja kao što su intoksikacija, infekcija, opekotine, itd. Naročito, visoke koncentracije HMGB1 proteina i homologih proteina su
1
nađene i određene u plazmi pacijenata sa sepsom, u plazmi i sinovijalnoj tečnosti pacijenata sa reumatoidnim artritisom, u mozgovima pacijenata sa Alchajmerovom bolešću, u plazmi i tkivima pacijenata sa melanomom, u plazmi pacijenata sa sistemskim lupus eritematodusom, u aterosklerotičkim plakovima aterosklerotičkih pacijenata, itd. Određivanje i dokaz HMGB1 proteina i/ili homologih proteina u biološkim tečnostima i tkivima može biti detektovan uobičajenim dijagnostičkim sredstvima poznatim stručnjaku iz date oblasti tehnike, uključujući, na primer, detekciju pomoću ELISA testova itd.
[0064] Prema tome, različite bolesti su okarakterisane relevantnim prisustvom ekstracelularnog HMGB1, koje naročito obuhvataju, ali bez ograničenja na, inflamatorne bolesti, stenozu, restenozu, aterosklerozu, reumatoidni artritis, autoimune bolesti, tumore, infektivne bolesti, sepsu, akutnu inflamatornu povredu pluća, lupus eritematodes, neurodegenerativne bolesti, bolesti centralnog i perifernog nervnog sistema i multiplu sklerozu. U posebno poželjnoj varijanti, konjugavana polimerna jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) su korišćena za prevenciju, ublažavanje i lečenje kardiovaskularnih bolesti, naročito ateroskleroze i/ili restenoze koje se javljaju u toku ili posle angioplastike. Poželjnije, lek se koristi za blokiranje, usporavanje i/ili smanjivanje regeneracije vezivnog tkiva u restenozi u toku ili posle angioplastike.
[0065] U naročito poželjnom aspektu pronalaska, konjugovana polimerna jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) su efikasna za upotrebu kao aktivno sredstvo u leku za prevenciju, ublažavanje i lečenje neuroloških poremećaja, neuropatija i neurodegenerativnih poremećaja centralnog i perifernog nervnog sistema.
[0066] Dalje su pronalazači pokazali da su nova jedinjenja polimernog konjugata sposobna da smanje i/ili inhibiraju izlučivanje citokina u plazmi putem sistemskog tretmana. Prema tome, jedinjenja polimernog konjugata se koriste kao aktivna sredstva u leku za sistemsku primenu korisnu za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje patologija u kojima je uključeno povećanje izlučivanja citokina u plazmi. Ove patologije su poželjno patologije, u kojima je uglavnom uključeno izlučivanje TNF-α, IFN-γ, MCP-1, MIP-1 i/ili RANTES.
[0067] Naročito, u kontekstu predstavljenog pronalaska, patologije koje su povezane sa povećanim izlučivanjem citokina u plazmi obuhvataju, ali bez ograničenja na, inflamatorne bolesti, autoimune bolesti, sindrom sistemskog inflamatornog odgovora, reperfuzionu povredu posle transplantacije organa, kardiovaskularnu zahvaćenost, akušerske i ginekološke bolesti, infektivne bolesti, alergijske i atopijske bolesti, patologije solidnog i tečnog tumora, bolesti odbacivanja transplanta, kongenitalne bolesti, dermatološke bolesti, neurološke
1
bolesti, kaheksiju, bubrežne bolesti, stanja jatrogene intoksikacije, metaboličke i idiopatske bolesti i oftalmološke bolesti.
[0068] U većini poželjnih varijanti, jedinjenja prema pronalasku se koriste kao aktivna sredstva u leku za sistemski tretman koristan za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje Behčetove bolesiti, Sjogrenovog sindroma, vaskulitisa, uveitisa, retinopatija.
[0069] U sledećem posebnom aspektu pronalaska, poželjno je da se jedinjenja konjugovanog polimera prema predstavljenom pronalasku koriste kao aktivna sredstva u topikalnom leku korisnom za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje patologija kože.
[0070] Patologije kože poželjne u kontekstu predstavljenog pronalaska su patologije okarakterisane hiperproliferacijom keratinocita, kao što su psorijaza, atopijski dermatitis, hronični ekcem, akne, pitirijazis rubra pilaris, keloidi, hipertrofirajući ožiljci i tumori kože, kao što je keratoakantom, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom bazalnih ćelija. U poželjnijoj varijanti, jedinjenja prema predstavljenom pronalasku se koriste kao aktivna sredstva u topikalnom leku korisnom za prevenciju, ublažavanje i lečenje psorijaze.
[0071] Zahvaljujući povećanoj selektivnosti jedinjenja prema pronalasku u inhibiciji TrkA, sledeći aspekt pronalaska je upotreba navedenih konjugovanih jedinjenja u prevenciji, ublažavanju i lečenju patologija u kojima TrkA ima kritičnu ulogu u patofiziološkom mehanizmu, koji dovodi do razvoja patologija. U ovom kontekstu, u veoma poželjnoj varijanti pronalaska, konjugovana K-252a polimerna jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) su korišćena kao aktivno sredstvo u leku za prevenciju, ublažavanje i lečenje bola i hiperalgezije povezanih sa NGF.
[0072] Stoga, sledeći aspekt predstavljenog pronalaska je upotreba jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) izborno kao što su definisana u prethodnom tekstu za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje patologija kao što su definisane u prethodnom tekstu.
[0073] Jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) se mogu koristiti bilo pojedinačno ili u kombinaciji sa jednim ili nekoliko dodatnih aktivnih sredstava. Naročito, jedinjenja polimernog konjugata prema pronalasku mogu biti korišćena u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim sredstvom sposobnim za inhibiciju ranog medijatora kaskade inflamatornog citokina, npr. antagonistom ili inhibitorom citokina izabranim iz grupe koju čine TNF, IL-1α, IL-1β, IL-Ra, IL-8, MIP-1α, MIF-1β, MIP-2, MIF i IL-6.
[0074] Dodatna sredstva koja se mogu koristiti u kombinaciji sa polimernim jedinjenjima prema pronalasku su npr. antagonisti i/ili inhibitori RAGE, antagonisti i/ili inhibitori HMGB1, antagonisti i/ili inhibitori interakcije receptora sličnog sa „Toll“ (TCR) sa HMGB1, funkcionalni N-terminalni domen trombomodulina sličan lektinu (D1) i/ili sintetička
2
dvolančana nukleinska kiselna ili molekul analog nukleinske kiseline sa savijenim oblikom strukture kao što je opisano u međunarodnoj patentnoj prijavi WO 2006/002971.
[0075] Jedinjenje formula (I), (II) i/ili (III) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli mogu se primenjivati u datom stanju, ili u obliku različitih farmaceutskih kompozicija prema farmakološkoj aktivnosti i svrsi primene. Sledeći aspekt predstavljenog pronalaska je farmaceutska kompozicija koja sadrži efikasnu količinu najmanje jednog jedinjenja formula (I), (II) i/ili (III) izborno zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, adjuvantima, razblaživačima i/ili aditivima. Farmaceutski nosači, adjuvanti, razblaživači i/ili aditivi su poznati stručnjaku iz date oblasti tehnike i mogu prema tome biti primenjeni u formulaciji farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje prema predstavljenom pronalasku.
[0076] Farmaceutska kompozicija prema predstavljenom pronalasku može biti primenjivana na pogodan način poznat stručnjaku iz date oblasti tehnike, npr. lekaru. Naročito, farmaceutska kompozicija prema pronalasku može biti primenjivana injekcijom ili infuzijom, naročito intravenskom, instramuskularnom, transmukozalnom, subkutanom ili intraperitonealnom injekcijom ili infuzijom i/ili oralnom, topikalnom, dermalnom, nazalnom primenom, inhalacijom, preko aerosola i/ili rektalne primene, itd. Primena može biti lokalna ili sistemska. Poželjno, primena jedinjenja i farmaceutske kompozicije prema pronalasku može biti izvedena parenteralnom primenom, naročito u obliku tečnih rastvora ili suspenzija; ili oralnom primenom, naročito u obliku tableta ili kapsula, ili intranazalno, naročito u obliku praškova, nazalnih kapi, ili aerosolova; ili dermalno, preko, na primer, masti, krema, ulja, lipozoma ili transdermalnih flastera.
[0077] Prema jednom aspektu pronalaska, farmaceustka kompozicija se primenjuje sistemski. Naročito, jedinjenja polimernog konjugata mogu biti primenjivana injekcijom ili infuzijom, naročito intravenskom, intramuskularnom, transmukozalnom, subkutanom ili intraperitonealnom injekcijom ili infuzijom i/ili oralnom primenom.
[0078] U najpoželjnijoj varijanti, farmaceutska kompozicija prema predstavljenom pronalasku se primenjuje topikalnom primenom, naročito dermalnom primenom. U slučaju dermalne primene, primena jedinjenja prema predstavljenom pronalasku može se izvesti u obliku lipozoma.
[0079] U sledećoj najpoželjnijoj varijanti pronalaska, farmaceutske kompozicije se primenjuju reverzibilno imobilizovane na površini medicinskog uređaja, naročito vezivanjem, oblaganjem i/ili ugrađivanjem jedinjenja i kompozicije prema pronalasku na medicinski uređaj, kao što su, ali bez ograničenja na, stentovi, kateteri, hirurški instrumenti, kanile, srčani zalisci ili vaskularne proteze. Posle dovođenja u dodir medicinskog uređaja sa telesnom tečnošću ili telesnim tkivom, oslobođena su reverzibilno imobilizovana jedinjenja. Posledično, obloženi medicinski uređaji deluju kao uređaji za primenu leka eluirajući lek, pri čemu se može kontrolisati kinetika oslobađanja leka, obezbeđujući neposredno oslobađanje ili kontrolisano, odloženo ili produženo oslobađanje leka, na primer. Tehnologije oblaganja medicinskih uređaja su dobro poznate stručnjaku iz date oblasti tehnike.
[0080] Farmaceutska kompozicija prema predstavljenom pronalasku može se koristiti za dijagnostičke ili za terapeutske primene. Za dijagnostičke primene, jedinjenje formule (I), (II) i/ili (III) može biti prisutno u obeleženom obliku, npr. u obliku koji sadrži izotop, npr. radioaktivni izotop ili izotop koji može biti detektovan pomoću nuklearne magnetne rezonance. Poželjna terapeutska primena je, u slučaju topikalne primene, prevencija, ublažavanje i lečenje psorijaze, dok je u slučaju sistemske primene, prevencija, ublažavanje i lečenje regeneracije vezivnog tkiva u restenozi.
[0081] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti korišćena kao jedino aktivno sredstvo u farmaceutskoj kompoziciji. Alternativno, ona se mogu koristiti u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima, npr. drugim aktivnim farmaceutskim sastojcima u lečenju prethodno definisanih patologija.
[0082] Koncentracije jedinejnja prema ovom pronalasku u farmaceutskoj kompoziciji mogu da variraju. Koncentracija će zavisiti od faktora kao što su ukupna doza leka koja će se primeniti, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost) korišćenih jedinjenja, način primene, starost, telesna težina i simptomi pacijenta. Jedinjenja ovog pronalaska su tipično obezbeđena u vodenom rastvoru fiziološkog pufera koji sadrži oko 0.1 do 10% tež./zapr. jedinjenja za parenteralnu primenu. Tipični opsezi doza su od oko 1 μg do oko 1 g/kg telesne težine na dan; poželjan opseg doza je od oko 0.01 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine na dan i poželjno oko 0.1 do 20 mg/kg jednom do četiri puta na dan. Poželjna doza leka koja će se primeniti verovatno zavisi od promenljivih kao što su tip i veličina napredovanja bolesti ili poremećaja, ukupan zdravstveni status određenog pacijenta, relativna biološka efikasnost izabranog jedinjenja i formulacija inertnog punioca jedinjenja i njegov način primene.
[0083] Poželjni derivati K-252a obuhvataju sintetička i/ili hemijski modifikovana jedinjenja, npr. jedinjenja koja imaju supstituente na sistemu prstena, npr. C1-C4alkil grupe, jedinjenja u kojima je metil estar grupa zamenjena drugom estarskom grupom, amidnom grupom ili sa H ili katjonom i/ili jedinjenja u kojima je N-atom u grupi cikličnog amida supstituisan sa C1-C4alkil grupom.
[0084] Predstavljeni pronalazak je dalje ilustrovan sledećim slikama i primerima.
SL. 1a i 1b prikazuju strukturu polimernih konjugata K-252a i njihovih derivata.
SL. 2 prikazuje strukturu K-252a-PEG konjugata gde je PEG vezan za lek preko karbamatne veze.
SL. 3 je hromatogram prečišćavanja PEG konjugata gde je PEG vezan za K-252a preko karbamatne veze i PEG lanac ima prosečnu molekulsku težinu od 2000 Da. Na umetnim slikama prikazan je MALDI-TOF spektar glavnih pikova.
SL. 4a prikazuje rezultate prosečne koncentracije u plazmi K-252a detektovane u frakciji plazme miševa posle topikalne primene K-252a.
Fig. 4b je grafikon koji prikazuje profil srednje koncentracije u plazmi prema vremenu posle jedne dermalne primene u dozi od ko 10 μmol/kg, koja odgovara 5.07 mg/kg, K-252a.
SL. 5 prikazuje antiproliferativnu aktivnost na keratinocitama konjugovanog jedinjenja K252a-PEG(2K) u MTT-testu posle 48 i 96 časova od perioda kontakta.
SL. 6 prikazuje antiproliferativnu aktivnost K252a-PEG(2K) na keratinocitu u MTT testu. SL.
6a se odnosi respektivno na 1, 2 i 4 časa perioda kontakta, pri čemu je brojanje ćelija izvedeno posle 48 časova. SL. 6b se odnosi respektivno na 1, 2 i 4 časa perioda kontakta, pri čemu je brojanje ćelija izvedeno posle 96 časova.
SL. 7 prikazuje antiproliferativnu aktivnost K252a na keratinocitu u MTT testu. SL. 7a se odnosi rspektivno na 1, 2 i 4 časa perioda kontakta, pri čemu je brojanje ćelija izvedeno posle 48 časova. SL.7b se odnosi respektivno na 1, 2 i 4 časa perioda kontakta, pri čemu je brojanje ćelija izvedeno posle 96 časova.
SL. 8 je grafikon u kome se poredi antiproliferativna aktivnost K252a i K252a-PEG(2K) na keratinocitu u MTT testu posle 4 časa perioda kontakta i posle izvođenja brojanja ćelija posle 96 časova.
Sl. 9a i Sl.9b prikazuju inhibitornu aktivnost K-252a i K-252a-PEG (2K), respektivno, prema uobičajenim tirozin kinazama.
2
Sl. 10 je grafikon koji prikazuje profile inhibicije kinaze za K-252a i K-252a-PEG(2K), respektivno, i prikazuje poređenje selektivnosti u inhibiciji kinaze K-252a-PEG(2k) naspram K-252a. Podaci prikazani na Sl.10 su normalizovani u odnosu na TrkA inhibitornu aktivnost.
Sl. 11 prikazuje IC50za K-252a i K-252a-PEG(2K) protiv TrkA i opdgovarajuću krivu inhibicije.
Sl. 12 prikazuje inhibiciju izlučivanja TNF-α u plazmi miševa tretiranih sa K-252a-PEG(2K) pre indukovanja endotoksemije sa injekcijom LPS-doze u poređenju sa kontrolnim miševima koji su primili samo rastvor nosača pre LPS tretmana. Na Slici, linije koje prikazuju grešku predstavljaju SEM – podaci analizirani pomoću „two-way“ ANOVA nakon čega slede Bonferroni post-testovi.
Slike 13a) do 13e) prikazuju inhibiciju izlučivanja TNF-α, IFN-γ, MCP-1, MIP-1 i RANTES, respektivno, u plazmi miševa tretiranih ne-konjugovanim K-252a pre indukovanja endotoksemije sa injekcijom LPS doze u poređenju sa kontrolnim miševima koji su primili samo rastvor nosača pre LPS tretmana. Na slikama, znak "§" označava rezultate izvan opsega.
PRIMERI
[0085] U sledećim primerima, proizvod koji je identifikovan terminima "K-252a-PEG", "K-252a-PEG(2K)" ili "CT327" odgovara jedinjenju prema predstavljenom pronalasku u kome je K-252a konjugovan za -OH grupu tetrahidrofuran grupe sa linearnim 2kDa PEG lancem pomoću karbamatne veze.
Primer 1
Sinteza K-252a-PEG(2K) konjugata (jedinjenje CT327)
[0086] 1 mg/mL rastvor K-252a u dihlorometanu je pripremljen rastvaranjem 1.5 mg K-252a (odgovara 3.208 μmol) u 1.5 mL CH2Cl2pažljivim mešanjem. Rastvor je dodat u staklenu posudu koja sadrži 65.05 mg (32.525 μmol) metoksi-PEG-izocijanata 2K (m-PEG-izocijanat sa prosečnom molekulskom težinom od 2000 Da) i 100 μL 32.684 mg/mL rastvora trietilamina u CH2Cl2kao bazni katalizator. I polimer i katalizator su korišćeni u 10-strukom molarnom odnosu u poređenju sa K-252a. Smeša je održavana na sobnoj temperaturi pod magnetnim mešanjem (brzina obrtanja oko 500 rpm) i blagim fluksom azota preko noći (reakciono vreme = 16 h 40’). Rastvor je zatim isparavan i čvrsti ostatak je tretiran sa 300 μL DMSO. Smeša je prečišćena pomoću RP-HPLC na C18 koloni u cilju dobijanja željenog proizvoda (pik odgovara gradijentu od oko 59/41 ACN/vode). Odgovarajuće frakcije četiri uzastopnih postupaka prečišćavanja su sakupljene i sušene pomoću ACN isparavanja i zatim osušene zamrzavanjem. MALDITOF analiza je potvrdila identifikaciju proizvoda sa K-252a-PEG konjugatom (polidispergovani pik masenog spektra sa maksimalnom m/z vrednošću od 2468.81) [Sl.2,3].
Primer 2 - In vivo farmakokinetičke studije
Primer 2.1
Studija dermalne apsorpcije K-252a naspram K-252a-PEG na miševima
[0087] Predstavljena studija je izvedena sa ciljem merenja i procene kinetike apsorpcije posle dermalne primene K-252a-PEG kod miševa u poređenju sa kinetikom apsorpcije nekonjugovanog, tj. ne-PEG-ilovanog, K-252a molekula. Eksperiment je izveden upotrebom doze aktivnog sredstva u oba preparata od 3 mg/kg. Za predstavljenu studiju, tri uzastopna eksperimenta su izvedena in vivo upotrebom svaki put 6 mužjaka Balb/C miševa kupljenih iz Charles River (Calco, Italy). Miševi su podeljeni dalje u sledeće eksperimentalne grupe (dve životinje po grupi):
- Grupa 1: Miševi su tretirani sa 3 mg/kg K-252-a, dermalnom primenom i žrtvovani posle 30 minuta.
- Grupa 2: Miševi su tretirani sa 3 mg/kg K-252-a dermalnom primenom i žrtvovani posle 60 minuta.
- Grupa 3: Miševi su tretirani sa 3 mg/kg K-252-a-PEG(2K) iz Primera 1 dermalnom primenom i žrtvovani posle 60 minuta.
2
[0088] Formulacije K-252a i K-252a-PEG(2K) su respektivno pripremljene razblaživanjem stok rastvora (stok rastvor K252a iz Calbiochem broj serije B50496, rastvor 100 μg/214 μL DMSO; stok rastvor K-252a-PEG(2K) je rastvor od 0,226 mg K252a/mL DMSO) sa maslinovim uljem, dok se nije dostigla krajnja koncentracija K-252a od 0,3 mg/mL maslinovog ulja/ DMSO 6%. Rastvori su respektivno pripremljeni kao što sledi: 60 μL K-252a 5 mg/mL DMSO 940 μL maslinovog ulja i 30 μL K252a-PEG(2K), 5 mg/mL DMSO 470 μL maslinovog ulja. Preparati na bazi ulja su u obliku emulzija koje su postale homogene pomoću ponovljenih ultrazvučnih obrada. Na leđa svake životinje (obrijana električnim brijačem 72 časa pre eksprimenta) naneto je 240 μL rastvora K-252a i 235 μL rastvora K-252a-PEG (odgovara dozi od 3 mg/kg na osnovu prosečne telesne težine miševa od 23 - 24 g). Naneta emulzija je lagano masirana po leđima miševa da bi se pospešila apsorpcija. Miševi su zatim žrtvovani respektivno posle 30 ili 60 minuta pod etarskom anestezijom i krv je sakupljana iz ventralne aorte sa insulinskim špricem (približno 1 mL/životinji). Krv je zatim prebačena u Eppendorf koja sadrži 50 μL vodenog rastvora EDTA 5%. Uzorci krvi su zatim centrifugirani na 2000 g u trajanju od 5 minuta u rashladnoj (4°C) centrifugi, prečišćeni pomoću ekstrakcije čvrste faze (SPE) i kasnije analizirani preko HPLC kvantitativne analize (RTHPLC analiza sa XTerra C18 kolonom, eluent voda/ACN).
[0089] Uzorci plazme miševa tretiranih sa K-252a pokazali su određenu koncentraciju u plazmi za oba perioda kontakta. Rezultati su prikazani na slici 4, sa koje se može videti da je prosečna koncentracija K-252a u plazmi kod miševa u grupi 1, žrtvovanih posle 30 minuta, bila 23,33 ng/mL, dok je prosečna koncentracija K-252a u plazmi miševa grupe 2, žrtvovanih posle 60, bila 42,11 ηg/ml. Ovo pokazuje pojavu sistemske adsorpcije za dermalnu primenu K-252a. Sa druge strane, uzorci plazme miševa tretiranih dermalnom primenom pegilovanog konjugata K-252a-PEG(2K) nisu pokazali nikakvu koncentraciju aktivnog jedinjenja u plazmi čak posle 60 minuta perioda kontakta. Ustvari, nije bilo moguće otkriti nikakav hromatografski pik u uzorcima plazme miševa grupe 3, čak posle MALDI-TOF analize. Stoga, posle dermalne primene nije zabeležena nikava adsorpcija kroz kožu K-252a-PEG (2K) konjugata.
[0090] Ovi podaci su potvrđeni dodatnim eksperimentalnim studijama na većoj grupi testiranih životinja kao i sa dermalnom primenom različitih količina doze aktivnih sredstava.
2
Primer 2.2
Farmakokinetička (PK) studija na miševima: dermalna pojedinačna doza i ponovljene primene CT327 naspram K-252a
[0091] Svrha ovog eksperimenta bila je proceniti kinetiku apsorpcije CT327 u poređenju sa K-252a posle dermalne primene dva jedinjenja kod miševa posle jedne primene kao i komparativna kinetika dva test jedinjenja posle ponovljenih dermalnih primena.
• Životinje: miševi (Balb/c mužjaci, starosti 7-9 nedelja, Charles River Italia, prosečna telesna težina od 22.2-22.4 g); 5 eksperimentalnih grupa (kontrola, jedna i ponovljene primene K-252a, jedna i ponovljena primena CT327), 4 životinje/grupi, grupisane po slučajnom izboru.
• Materijal: K-252a (Cephalon serija br.04274F1a), CT327 (Alchemy serija br. ALC577.02), dimetil sulfoksid (DMSO) Hybri-max® (Sigma serija br. 114K2370), beli vazelin F.U. (AFOM Medical serija br. A908006570), Tween 20 (Sigma serija br. 092K0055), H2O MilliQ, mišja plazma (soj CD1,OF1 serija br. 50-18/12/05, nabavljen od Charles River Laboratories Italia SpA, Calco), acetonitril (Merck serija br. 1260430545), metanol (VWR BDH serija br.05Z4034), EDTA (Fluka serija br.393230/1).
• Primenjena doza: K-252a 5.075 mg/kg i CT327 25.27 mg/kg (na bazi 78.5% čistoće, tj.
32.19 mg/kg, ekvimolarna doza u odnosu na K-252a) za jednu dermalnu primenu; K-252a 1.03 mg/kg i CT327 5.06 mg/kg (na bazi 78.5% čistoće, tj. 6.45 mg/kg, ekvimolarna doza u odnosu na K-252a) za ponovljenu dermalnu primenu (jednom na dan u trajanju od 5 dana).
• Primena test artikala: Za dermalnu primenu, oko 0.25 g vazelin kreme je naneto na vrat svakog miša (obrijan dan pre početka eksperimenta, izbegavajući abraziju kože). Kontrolne životinje su primile samo nosač u istoj zapremini doze
• Formulacija test artikla: DMSO 1.1%/krema belog vazelina za jednu dermalnu primenu i DMSO 0.23%/krema belog vazelina za ponovljenu dermalnu primenu.
2
• Žrtvovanje životinja i sakupljanje krvi: Uzorci krvi su sakupljeni u sledećim vremenskim tačkama posle tretmana:
- jedna dermalna primena: 1, 3, 6, 9, 18, 24, 36, 48 i 72 časa posle primene K-252a ili CT327
- ponovljena dermalna primena: 3 časa i 24 časa posle poslednje primene K-252a i CT327 respektivno.
[0092] U svakoj vremenskoj tački sakupljanja krvi, uzorci krvi od približno 0.4 mL su sakupljeni iz ventralne aorte svake životinje upotrebom insulinskog šprica, pod dubokom etarskom anestezijom, i prebačeni u polietilenske Eppendorf epruvete koje sadrže 50 μL 5% vodenog rastvora EDTA da bi se sprečilo zgrušavanje krvi. Uzorci krvi su održavani na ledu do centrifugiranja na 1400 g u trajanju od 5 min. u rashlađenoj centrifugi (2-4°C). Zatim su iz svake epruvete izolovani uzorci plazme postavljeni u nove Eppendorf epruvete i zamrznuti na -20°C do HPLC analize.
[0093] Slika 4b prikazuje rezultate studije primene jedne doze. Prikazana je kriva koncentracije K-252a u plazmi posle jedne dermalne primene K-252a, prikazana kao srednje vrednosti ± greška (95% Cl, interval poverenja) (4 miša za svaku vremensku tačku, analiza u dve kopije). Umesto toga, nije detektovan profil koncentracije u plazmi za jednu dermalnu primenu CT327. Ustvari, analiza uzoraka plazme miševa koji su primili jednu dermalnu primenu CT327 u ekvimolarnoj dozi u poređenju sa miševima tretiranim sa K-252, nije otkrila nivoe test jedinjenja iznad granice detekcije (70.6 nM) ni u jednoj vremenskoj tački.
[0094] Kompjutersko fitovanje podataka iz svake eksperimentalne grupe je zatim izvedeno pomoću programa NCOMP verzije 3.1 (P.B. Laub et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 1996, 85(4):393-395). Vrednosti za površinu ispod profila koncentracije u plazmi – vremena, T1/2, Tmax, Cmax, itd. izračunati su pomoću uobičajenih formula koje su prethodno opisane (Gibaldi et al., Pharmacokinetics, 1982, Marcel Dekker, Inc., New York). Ovi PK parametri procenjeni pomoću fitovanja podataka koncentracije K-252a i CT327 u plazmi navedeni su u sledećoj Tabeli 1.
2
Tabela 1: Procenjeni farmakokinetički parametri u plazmi za K-252a i CT327 posle jedne dermalne primene na miševima (10 μmol/kg)
[0095] Rezultati ove studije su potvrdili da su posle jedne dermalne primene K-252a rezultati detektabilni u plazmi do 9 časova posle primene (sa polu-životom od 63 minuta), dok CT327 u dozi ekvivalentnoj onoj kod K-252a doze, rezultira time da je nedetektabilan u novou u plazmi do perioda kontakta od 72 časa.
[0096] Tabela 2 prikazuje rezultate studije dermalne ponovljene primene. Naročito, Tabela 2 prikazuje rezultate HPLC analize srednjih nivoa u plazmi za ponovljenu primenu K-252a i CT327. Kao što je prikazano, K-252a ispoljava detektabilnu i izmerivu koncentraciju u plazmi dok, što se tiče CT327, u sakupljenoj krvi posle ponovljenih primena nije otkriven detektabilni nivo test jedinjenja.
Tabela 2: Srednje koncentracije K-252a i CT327 u plazmi posle ponovljene dermalne primene (jednom dnevno u trajanju od 5 dana) u dozi od 1.03 mg/kg i 5.06 mg/kg respektivno (oko 2 μmol/kg)
[0097] Stoga, u ovoj drugoj studiji, procenjivana je apsorpcija posle ponovljene dermalne primene (jednom na dan u trajanju od 5 uzastopnih dana) u nižoj dozi (2 μmol/kg). Čak u ovom slučaju nije bio detektabilan nikakav hromatografski pik koji odgovara PEG-ilovanom molekulu CT327 u uzorku plazme miša. Dovoljno duga vremenska tačka za sakupljanje krvi (24 časa) je izabrana u cilju uzimanja u obzir eventualne veoma spore apsorpcije. Uprkos tome, predstavljeni podaci omogućavaju zaključak da se apsoropcija kroz kožu ne javlja posle dermalne primene K-252a-PEG(2K). Što se tiče K-252a jedinjenja, rezultirajući nivo K-252a u plazmi posle 3 časa nakon poslednje dermalne primene je 110.2 nM, što je čak malo više u
2
poređenju sa koncentracijom nađenom u istoj dozi i na istoj vremenskoj tački za jednu dermalnu primenu (72.9 nM ± 32.5, kao vrednost ± 95% Cl).
[0098] U zaključku, rezultati predstavljenih studija potvrđuju efikasnost polimerne konjugacije K-252a u izbegavanju sistemske apsorpcije K-252a bilo posle jedne dermalne primene u višoj dozi ili posle 5-dnevnog topikalnog tretmana u nižoj dozi.
Primer 3. In vitro farmakologija
Primer 3.1
[0099] In vitro studije za karakterizaciju antiproliferativne aktivnosti K252a-PEG (2K) kao inhibitora Trka na humanim keratinocitima.
[0100] Metabolički MTT-test je izveden kao test ćelijske vijabilnosti. MTT-test je izveden upotrebom dobro poznatog i odobrenog protokola, pri čemu se rezultati kvantitativno određuju preko spektrofotometrijskog merenja, broj živih ćelija koji je direktno proporcionalan količini proizvoda formazana formiranog kao redukcioni prozvod MTT ([3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijumbromida]) (Mosmann T., Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Methods. 1983, Dec. 16, 65(1-2):55-63). U predstavljenoj studiji, MTT-test je izveden na sub-konfluentnim kulturama keratinocita zasejanim u 96-komornim pločama za ćelijsku kulturu (8000 ćelija/komorici). Pošto su ćelije izložene supstanci koja mora biti analizirana, ćelije su inkubirane u trajanju od 4 časa na 37°C sa MTT (0,05 %) u podlozi za rast keratinocita bez seruma (KGM Clonetics Corp. San Diego, CA, USA). Posle solubilizacije ćelija sa deterdžentima, formiranje sredstva za bojenje formazana je detektovano korišćenjem spektrofotometra za više-komornu ploču na 540 nm. Rezultati su dati kao jedinica optičke gustine (OD).
[0101] Antiproliferativna aktivnost konjugacionog proizvoda K-252a-PEG(2K) testirana je sa MTT testom, za vreme kontakta izolovanih keratinocita u komoricama sa rastvorom jedinjenja koje se testira, od 48 časova i 96 časova respektivno i za koncentracije K-252a-PEG(2K) od 5, 10, 50 i 100 nM. Svi eksperimenti su izvedeni najmanje tri puta. Statistička analiza rezultata MTT testa je izvedena upotrebom ANOVA modela (prikazane greške predstavljaju interval poverenja 95%, p= 0,05). Slika 5 prikazuje rezultat MTT-testa sa K-252a-PEG(2K). Jasno je pokazano da K-252a-PEG ispoljava inhibitorno dejstvo na keratinocitama za koncentracije ≥ 10 nM posle 48 časova perioda kontakta, dok je inhibitorni efekat prikazan za bilo koje koncentracije posle perioda kontakta od 96 časova.
[0102] Ovi rezultati prikazuju da konjugacija K-252a sa polimerom PEG ne utiče na antiproliferativnu aktivnost aktivnog molekula K-252a (Slika 5). Ustvari posle perioda kontakta od 48 časova i 96 časova pokazana je inhibitorna aktivnost na proliferaciju keratinocita.
[0103] Dodatna MTT test analiza je stoga izvedena da bi se dokazalo da bi odsustvo ili odlaganje sistemske apsorpcije PEG-konjugovanog K252a posle topikalne primene (kao što je prikazano u primeru 2) i odložena inhibitorna aktivnost na proliferaciju keratinocita, mogla verovatno biti rezultat odloženog ulaska konjugovanog K-252a-PEG(2K) jedinjenja u ćeliju keratinocitu, zahvaljujući konjugaciji, tj pegilaciji.
[0104] Prema tome, sledeći in vivo MTT test je izveden kao što je opisano u prethodnom tekstu, sa K-252a i sa K-252a-PEG(2K) kao jedinjenjem koje se testira, da bi se testirala antiproliferativna aktivnost keratinocita, pri čemu su vremena kontakta aktivnog jedinjenja sa keratinocitama u komoricama smanjena. Koncentracija K252a i K-252a-PEG(2K) bila je 25, 50 i 100 nM respektivno. Periodi kontakta bili su za svaku koncentraciju 1, 2 i 4 časa respektivno. Brojanje ćelija je izvedeno posle 48 časova i posle 96 časova.
[0105] Rezultati MTT testa sa K-252a-PEG(2K) prikazani su na Slici 6. Kako posle 48 časova tako i posle 96 časova, efekat konjugovanog jedinjenja K-252a-PEG(2K) na proliferaciju keratinocita izgleda da nije statistički različit od efekta dobijenog sa kontrolnim uzorkom (Slika 6a i Slika 6b).
[0106] Isti MTT test je izveden sa nekonjugovanim K-252a, pri čemu su rezultati prikazani na Slici 7a (brojanje ćelija posle 48 časova) i Slici 7b (brojanje ćelija posle 96 časova). Ovi rezultati su pokazali statistički značajnu antiproliferativnu aktivnost K-252a, za svako vreme kontakta, u koncentraciji ≥ 200 nM i sa brojanjem ćelija posle 48 časova. Kada se brojanje ćelija izvodi posle 96 časova, antiproliferativna aktivnost je čak dobijena za svaku testiranu koncentraciju i svako vreme kontakta.
[0107] Slika 8 prikazuje poređenje podataka inhibitorne aktivnost 100 nM K-252a i K-252a-PEG(2K) respektivno za prethodno opisani MTT test sa vremenom kontakta od 4 časa i sa brojanjem ćelija koje izvedeno posle 96 časova.
[0108] Ovi rezultati otkrivaju da, suprotno nekonjugovanom K-252a jedinjenju, vreme kontakta od 4 časa nije dovoljno za K-252a-PEG(2K) da bi se razvila njegova antiproliferativna aktivnost za koncentracije ≤ 100 nM (čak kada je brojanje ćelija izvedeno posle 96 časova). U poređenju sa nekonjugovanim, tj. nepegilovanim K-252a, za niže
1
koncentracije K-252a-PEG(2K) potreban je duži period kontakta da bi se dobio željeni efekat inhibicije na proliferativnu aktivnost keratinocita. Za K-252a-PEG(2K) pokazano je jasno odlaganje u njegovom kapacitetu za ulazak u ćeliju i prema tome pokazano je odlaganje u prolaženju kroz ćelijsku membranu, što je rezultat pegilacije K-252a molekula.
[0109] Ovo izgleda da dalje potvrđuje hipotezu da K-252a jedinjenje i njegovi derivati ispoljavaju svoju aktivnost posle intracelularne akumulacije K-252a jedinjenja i njegovih derivata i kasnijeg sporog oslobađanja aktivnih molekula čak posle uklanjanja podloge za kulturu.
Primer 3.2
In vitro procena profila inhibicije kinaze za K-252a i CT327
[0110] U literaturi je dobro poznato da je K-252a potentan inhibitor nekoliko kinaza. U predstavljenoj studiji, procenjivana je inhibitorna aktivnost K-252a protiv izabranih uobičajenih tirozin kinaza i serin/treonin kinaza. Sličan eksperiment je izveden za procenu inhibitorne aktivnosti CT327.
[0111] K-252a (Acros serija A020265401) je rastvoren u DMSO da bi se napravio 1 mM stok rastvor koji je zatim razblažen sa DMSO da bi se dobio 20 μM rastvor, koji je dalje razblažen test puferom da bi se postigla koncentracija od 0.8 μM. K-252a je testiran u koncentraciji od 200 nM. Priprema CT327 i referentnih jedinjenja je izvedena praćenjem sličnog postupka. CT327 je takođe testiran u koncentraciji od 200 nM. Kao referentna jedinjenja prema pronalasku korišćeni su inhibitori protein kinaze dobro poznati u tehnici, kao što su staurosporin, 5-jodotubericidin, NK inhibitor II i SB202190 (kao što su prikazani u Tabeli 3).
Tabela 3: Referentna jedinjenja
[0112] Studije inhibicije kinaze za K-252a i C327 izvedene su upotrebom standardnih testova za odgovarajuću kinazu.
2
[0113] Rezultati inhibicije tirozin kinaze i inhibicije serin/treonin kinaza za K-252a prikazani su u Tabeli a i b, respektivno, prikazanim na Slici 9a. Inhibitorna aktivnost CT327 protiv testirane tirozin kinaze i serin/treonin kinaza je prikazana u Tabeli a i b, respektivno, prikazanim na Slici 9b. Vrednost koja se očitava za reakcionu kontrolu (sa ATP) je podešena kao 0% inhibicija i vrednost koja se očitava za pozadinu (bez ATP) je podešena kao 100% inhibicija.
[0114] K-252a je pokazao u koncentraciji od 200 nM veoma snažnu inhibitornu aktivnost od više od 90% protiv 16 testiranih kinaza (TNK1, JAK2, JAK3, TYK2, FLT3, PDGFRα, PDGFRβ, RET, TrkA, TrkB, TrkC, CHK1, CHK2, JNK1, JNK2, AurA i MAP2K3) i snažnu inhibiciju između 80% i 90% protiv dodatnih 7 testiranih kinaza (MER, JAK1, MET, KIT, BLK, FGR i CaMK2a).
[0115] Nasuprot tome, CT327 je pokazao, u istoj koncentraciji u poređenju sa K-252a (200 nM), snažnu inhibitornu aktivnost (> 50%) samo protiv TrkA unutar testiranih tirozin kinaza. Niska aktivnost je pokazana od strane CT327 protiv JAK2, JAK3 i FLT3 (između 20% i 30%), dok je veoma niska aktivnost zabeležena protiv TNK1, EphB4, PDGFRβ, BLK, LCK, TrkB i TrkC (između 10% i 20%). Nikakva inhibicija nije zabeležena za većinu testiranih tirozin kinaza.
[0116] Unutar serin/treonin kinaza, CT327 je pokazao snažnu inhibitornu aktivnost (> 40%) samo protiv MAP2K3, veoma nisku (14%) protiv JNK3 (istaknuto zelenom bojom) i inhibitorne aktivnost nije bilo protiv drugih testiranih serin/treonin kinaza.
[0117] Slika 10 prikazuje poređenje selektivnosti CT327 nasuprot K-252a. Rezultati jasno pokazuju dramatično poboljšanje u selektivnosti inhibicije kinaze za CT327 nasuprot K-252a. Naročito, rezultati pokazuju povećanu selektivnost u aktivnosti kinaze za CT327 u odnosu na TrkA u grupi tirozin kinaza i u odnosu na MAP2K3 u grupi serin/treonin kinaza.
[0118] Ovi podaci sugerišu da je selektivnost inhibicije za CT327 naročito usmerena na glavna ciljna mesta TrkA i MAP2K3, sa posledičnim potencijalnim smanjenjem neželjenih bioloških efekata kao posledica inhibitorne aktivnosti protiv drugih kinaza. Stoga, što su manje inhibirane druge kinaze, to je verovatno da će molekul biti manje toksičan.
[0119] Ukupno, rezultati studija opisanih u Primerima 2 i 3 čine polimerne konjugate K-252a formule (I), i naročito K-252a-PEG (2K), obećavajućim knadidatima za aktivna sredstva u leku, zahvaljujući intaktnoj biološkoj aktivnosti i istovremenom smanjenom riziku od štetnih efekata.
Primeri 3.3
In vitro procena IC50prema TRKA za K-252a i CT327
[0120] Svrha ove studije je izmeriti IC50vrednosti za CT327 i K-252a prema TrkA kinazi. Rastvori test jedinjenja su razblaženi sa DMSO da bi se postigla 100-struko niža koncentracija i zatim dalje 25-struko razblaženi sa test puferom (15 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.01% Tween-20, 2 mM DTT) da bi se dobili konačni test rastvori. CT327 i K-252a su testirani u sledećim koncentracijama: 1000 nM, 300 nM, 100 nM, 30 nM, 10 nM, 3 nM, 1 nM, 0.3 nM, 0.1 nM, 0.03 nM. Priprema referentnog jedinjenja (Staurosporin) je izvedena pomoću postupka koji je sličan onom korišćenom za pripremu test jedinjenja. Staurosporin je testiran u sledećim koncentracijama: 100 nM, 30 nM, 10 nM, 3 nM, 1 nM, 0.3 nM, 0.1 nM, 0.03 nM, 0.01 nM i 0.003 nM. Test postupak je sledeći:
4
[0121] Vrednost koja se očitava za reakcionu kontrolu (sa ATP) je podešena kao 0% inhibicija, i vrednost koja se očitava za pozadinu (bez ATP) je podešena kao 100% inhibicija, tada se izračunava procenat inhibicije svakog test rastvora. IC50vrednost je izračunata iz krivih koncentracije prema % inhibicije fitovanjem na četvorotparametarsku logističku krivu.
[0122] IC50vrednosti za K-252a i CT327 protiv TrkA bile su 0.50 nM i 186 nM, respektivno. Odgovarajuća IC50vrednost referentnog jedinjenja (Staurosporin) protiv TrkA bila je 0.12 nM. Ovi rezultati su rezimirani na Sl.11.
Primer 4
Studija akutne toksičnosti pojedinačne doze na miševima za CT327 naspram K-252a
[0123] Svrha ove studije je bila izvesti nekliničku studiju toksičnosti, u cilju procene toksičnosti CT327 kada je primenjen kao pojedinačna doza kod miševa intraperitonealnim putem i oralnom primenom, u poređenju sa njegovim prekursorom K-252a. Ukupno 70 miševa (Balb/c, 35 mužjaka i 35 ženki) podeljeno je u 14 podgrupa (7 grupa sastavljenih od 5 mužjaka i 7 grupa sastavljenih od 5 ženki) da bi primili sledeće nivoe doza test jedinjenja:
- K-252a: 30, 45, 60, 75 i 90 mg/Kg
- CT327: 316.68 i 475.02 mg/Kg (odgovara 60 i 90 mg K-252a, respektivno).
[0124] Posmatranja, koja su uključila kliničke znake i promene raspoloženja, izvođena su svakih 30 minuta prvih 6 časova posle primene, i dva puta na dan u toku sledećih 7 dana.
[0125] Među grupama mužjaka tretiranim sa K-252a, preživeli su samo oni koji su primili najnižu dozu (30 mg/Kg), dok su ostali nađeni mrtvi u toku prvih 22 časa posle doziranja. Rezultirajuća LD50bila je 37.74 mg/kg.
[0126] Takođe, ženke miševa koje su primile najnižu dozu K-252a su preživele i, kao i mužjaci kojima je data ista doza, pokazale su veoma blagu/blagu sedaciju koja je nestala u roku od 8-10 časova. Jedna ženka je preživela od pet kojima je dato 45 mg/kg i jedna među onima koje su primile 60 mg/kg. Najviše doze K-252a bile su letalne za sve ženke miševa. LD50za ženke je bila 41.44 mg/kg. Prosečna LD50za mužjake i ženke zajedno je prema tome bila 39.02 mg/kg.
[0127] Doze CT327 jednake 316.68 i 475.02 mg/kg, koje odgovaraju 60 i 90 mg/kg K-252a respektivno, nisu indukovale nikakav bihejvioralni i/ili klinički znak toksičnosti u bilo kojoj od tretiranih grupa, bilo unutar nekoliko sati neposredno posle doziranja ili u toku perioda posmatranja od 7 dana.
[0128] Slični rezultati su dobijeni posle oralne primene. Naročito, nađeno je da je LD50za K-252a jednaka 78 mg/kg, dok mortalitet nije zabeležen do maksimalne doze od 790 mg/kg CT327.
Primer 5
[0129] Izvedena je studija sa svrhom da se kvantitativno odredi panel od 24 citokina u plazmi miševa u različitim vremenskim tačkama posle endotoksemije indukovane sa LPS i da bi se uporedili dobijeni profili sa onima od endotoksemičnih miševa prethodno tretiranih sa CT327.
Protokol studije
[0130] Životinje su podeljene u dve eksperimentalne grupe (55 miševa/grupi) koje su tretirane praćenjem ovog režima:
Indukcija endotoksemije: u vreme 0 obe grupe su primile dozu LPS koja odgovara 4 mg/kg, i.p.
[0131] Tretmani CT327: "tretirana" eksperimentalna grupa primila je jednu dozu CT327 koja odgovara 105.56 mg/kg, i.p. Ova doza je primenjena 15 minuta pre indukcije endotoksemije sa LPS (vreme 0). U isto vreme "kontrolna" grupa je primila istu zapreminu rastvora nosača.
[0132] Svaka eksperimentlna grupa je podeljena u 11 podgrupa sa 5 miševa/podgrupi. Svaka podgrupa je žrtvovana u različitim vremenskim tačkama i sakupljeni su uzorci krvi.
[0133] Vremenske tačke za sakupljanje uzoraka krvi bile su:
• Vreme: vreme 0 (polazno); pre LPS tretmana
• Vreme: 30 minuta; posle LPS tretmana
• Vreme: 1 čas; posle LPS tretmana
• Vreme: 2 časa; posle LPS tretmana
• Vreme: 3 časa; posle LPS tretmana
• Vreme: 6 časova; posle LPS tretmana
• Vreme: 12 časova; posle LPS tretmana
• Vreme: 18 časova; posle LPS tretmana
• Vreme: 24 časa; posle LPS tretmana
• Vreme: 48 časova; posle LPS tretmana
• Vreme: 72 časa; posle LPS tretmana
[0134] Uzorci krvi su sakupljeni u epruvetama sa natrijum citratom (100 μl natrijum citrata 0.1 M/900 μl krvi) i centrifugirani na 1000 g na 4°C u trajanju od 10 minuta. Uzorci plazme su sakupljeni i 50 μl/uzorku je zamrznuto na -80°C do testiranja za profilisanje višestrukih citokina. Uzoci su analizirani u dve kopije preko Bio-Plex System (Bio-Rad) upotrebom 23-strukog panela u Dept. of Genetics, Biology and Biochemistry, Torino University, koji vodi Prof. Silengo. Određeni su nivoi sledećih citokina u plazmi: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12(p40), IL-12(p70), IL-17, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, KC, MIP-1-α; RANTES, TNF-α, IL-9, IL-13, eotaksin, MCP-1, MIP-1-α.
[0135] Najznačajniji rezultati su prikazani na Slikama 12 i 13. Slika 12 naročito prikazuje značajno smanjenje izlučivanja TNF-α u nivoima u plazmi miševa koji su prethodno tretirani jedinjenjem CT327 prema pronalasku.
[0136] Slike 13a-e prikazuju umesto toga rezultate paralelnog eksperimenta izvedenog sa K-252a. Zabeleženo je značajno smanjenje ne samo TNF-α, već takođe i IFN-γ, MCP-1, MIP-α i RANTES.
Primer 6
Sinteza K-252a-PEG(1100) (jedinjenja CT336)
1) Sinteza m-PEG1100-O-CH2-COOEt
[0137] U pogodnu reakcionu posudu pod inertnom atmosferom t-BuOK (11.2 g, 100.0 mmol) je dodat u anhidrovani THF (70.0 mL) na sobnoj temperaturi uz mešanje.
[0138] Kada je rastvaranje završeno dodat je MeO-PEG1100-OH (22.0 g, 20.0 mmol) i zatim je ukapavanjem dodavan BrCH2CO2Et (16.7 g, 100.0 mmol) u roku od 30 min i reakciona posuda je hlađena pomoću vodenog kupatila.
[0139] Posle 2 časa rastvarač je uklonjen pod vakuumom na 40°C.
[0140] Dobijeni ostatak (oko 65 g) je rastvoren u H2O (100 mL) i rastvor je brzo ekstrahovan sa CH2Cl2(3 X 100 mL). Organski sloj je anhidrovan (Na2SO4) i rastvarač je uklonjen pod vakuumom na 40°C.
2) Sinteza m-PEG1100-O-CH2-COOH
[0141] Sirovi m-PEG-O-CH2-COOEt (oko 20 g) koji je dobijen kao što je opisano u prethodnom tekstu je rastvoren u vodenom rastvoru NaOH (1 N, 200 mL) i zagrevan na 60°C u trajanju od 3 časa uz mešanje.
[0142] Reakciona smeša je zatim zakišeljena do pH 3 upotrebom vodenog rastvora HCl (1 N, oko 165 mL) i zatim podeljena sa CH2Cl2(5 X 100 mL). Sakupljeni organski ekstrakti su anhidrovani (Na2SO4) i rastvarač je uklonjen pod vakuumom na 40°C.
[0143] Dobijeno viskozno ulje (oko 18 g) je sipano u hladan anhidrovani Et2O (75 mL), i beli talog je filtriran, sakupljen i preostali rastvarač je isparavan pod vakuumom na sobnoj temperaturi (15 g).
3) Sinteza m-PEG1100-O-CH2-NCO
[0144] U pogodnoj reakcionoj posudi, m-PEG1100-O-CH2-COOH (10.0 g, 9.1 mmol) je rastvoren u toluenu (80mL) uz mešanje. Oko 15 mL rastvarača je zatim izdestilovano u cilju sušenja smeše azeotropnom destilacijom.
[0145] Ostatak je hlađen do sobne temperature i redom su dodati anhidrovani Et3N (1.1 g, 10.9 mmol) i difenil fosforil azid [(C6H5O)2P(O)N3] (2.7 g, 10.0 mmol).
[0146] Posle 30 min na sobnoj temperaturi smeša je zagrevana do refluksa u trajanju od 2 časa, zatim je rastvarač isparavan pod vakuumom na 60°C.
[0147] Dobijeno viskozno ulje (oko 9 g) je sipano u hladan anhidrovani Et2O (200 mL), beli talog je filtriran, sakupljen i preostali rastvarač je uklonjen pod vakuumom na sobnoj temperaturi (6.0 g).
4) Sinteza K-252a-PEG1100konjugata
[0148] 1 mg/mL rastvor K-252a u DCM je pripremljen rastvaranjem 1.5 mg K-252a (odgovara 3.2 μmol) u 1.5 mL CH2Cl2pažljivim mešanjem. Rastvor je dodat u staklenu posudu koja sadrži 38.06 mg (32.5 mmol) m-PEG1100-O-CH2-NCO i 100 μL 32.8 mg/mL rastvora trietilamina u CH2Cl2kao osnovni katalizator. I polimer i katalizator su korišćeni u 10-strukom molarnom odnosu u poređenju sa K-252a. Smeša je održavana na sobnoj temperaturi pod magnetnim mešanjem (brzina obrtanja oko 500 rpm) i blagim fluksom azota preko noći (reakciono vreme = 16 časova 40 min.). Rastvor je zatim isparavan i čvrsti ostatak je tretiran sa 300 μL DMSO. Smeša je prečišćena pomoću RPHPLC na C18 koloni u cilju dobijanja željenog proizvoda (pik odgovara gradijentu od oko 61/39 ACN/H2O). Odgovarajuće frakcije četiri uzastopna postupka prečišćavanja sakupljene su i sušene pomoću ACN isparavanja i zatim osušene zamravanjem. MALDI-TOF analiza je potvrdila identifikaciju proizvoda sa K-252a-PEG1100konjugatom.
Reference
[0149]
Tapley P et al., "K252a is a selective inhibitor of the tyrosine protein kinase activity of the trk family of oncogenes and neurotrophin receptors", Oncogene 7:371-381, 1992
Di Marco E et al., "Nerve growth factor binds to normal human keratinocytes through high and low affinity receptors and stimulates their growth by a novel autocrine loop", J. Biol. Chem. 268:22838-22846, 1993
Delsite R et al., "Anti-proliferative effect of the kinase inhibitor K252a on human prostatic carcinoma cell lines", J. Androl.17:481-490, 1996
Reddy KR, "Controlled-release, pegylation, liposomal formulations: new mechanisms in the delivery of injectable drugs", Ann. Pharmacother. 34:915-923,2000
Harris JM et al., "Effect of pegylation on pharmaceuticals", Nat. Rev. Drug Discov. 2:214-221, 2003
Pepinsky RB et al., "Design, synthesis, and analysis of a polyethylene glycol-modified (PEGylated) small molecule inhibitor of integrin α4β1 with improved pharmaceutical properties", J. Pharmacol. Exp. Ther. 312:742-750, 2005
Yang H et al., "HMGB1 as a cytokine and therapeutic target", J. Endotoxin Res. 8:469-472, 2002
Wang H et al., "Extracellular role of HMGB1 in inflammation and sepsis", J. Intern. Med.
255:320-331, 2004
Lotze MT et al., "High-mobility group box 1. protein (HMGB1): nuclear weapon in the immune arsenal", Nat. Rev. Immunol. 5:331-342, 2005
4

Claims (33)

  1. Patentni zahtevi 1. Polimerni konjugat jedinjenja indolokarbazola opšte formule (I):
  2. gde su Ra i Rb nezavisno vodonik ili organski ostatak izabran iz grupe koju čine supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi ili alkoksikarbonil; ili Ra i Rb zajedno formiraju 5-7 –članu cikličnu strukturu fuzionisanu direktno za strukturu jezgra indolo[2,3-a]karbazola, koja sadrži 0, 1 ili 2 heteroatoma i koja izborno sadrži karbonil grupu i cikličnu strukturu koja je nesupstituisana ili supstituisana sa najmanje jednom supstituišućom grupom izabranom od karbonil grupe ili W<1>ili W<2>i pri čemu ako je heteroatom član ciklične strukture azot, azot je supstituisan sa ostatkom R3; i gde, Rc i Rd su (a) nezavisno vodonik ili organski ostatak izabran iz grupe koju čine supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi ili alkoksikarbonil; ili jedan od Rc i Rd je izabran od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila i hidroksi, dok, drugi od Rc i Rd je 3-7 –člana ciklična grupa, pri čemu je ciklična grupa nesupstituisana ili supstituisana, sa najmanje jednom funkcionalnom grupom pogodnom za konjugaciju polimerne grupe, ili (b) Rc i Rd zajedno formiraju 3-7 –članu cikličnu grupu, pri čemu je ciklična grupa nesupstituisana ili supstituisana sa najmanje jednom funkcinalnom grupom pogodnom za konjugaciju polimerne grupe, i pri čemu su R<1>i R<2>isti ili različiti ostatak i svaki je nezavisno izabran iz grupe koju čine: (a) vodonik, halogen, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, hidroksi, niži alkoksi, karboksi, niži alkoksikarbonil, acil, nitro, karbamoil, niži alkilaminokarbonil, -NR5R6, gde su svaki R5 i R6 nezavisno izabrani od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkinila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila, supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila, supstituisanog ili nesupstituisanog aralkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkilaminokarbonila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg arilaminokarbonila, alkoksikarbonila, karbamoila, acila ili R<5>i R6 su spojeni sa atomom azota iz heterociklične grupe, (b) -CO(CH2)jR4 , gde je j jednako 1 do 6, i R4 je izabran iz grupe koju čine (i) vodonik, halogen, -N3, (ii) -NR5R6, gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu, (iii) -SR7, gde je R7 izabran iz grupe koju čine vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, supstituisani ili nesupstituisani aralkil, -(CH2)aCO2R10 (gde je a jednako 1 ili 2, i gde je R10 izabran iz grupe koju čine vodonik i supstituisani ili nesupstituisani niži alkil) i -(CH2)aCO2NR5R6, (iv) -OR8, -OCOR8, gde je R8 izabran od vodonika, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkenila, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkinila, supstituisanog ili nesupstituisanog arila, supstituisanog ili nesupstituisanog heteroarila (c) -CH(OH)(CH2)jR4 , gde su j i R4 kao što su definisani u prethodnom tekstu; (d) -(CH2)dCHR11CO2R12 ili -(CH2)dCHR11CONR5R6, gde je d jednako 0 do 5, R11 je vodonik, -CONR5R6, ili -CO2R13, gde, R13 je vodonik ili supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, i R<12>je vodonik ili supstituisani ili nesupstituisani niži alkil; (e) -(CH 4 2)kR14 gde, k je 2 do 6 i R1 je halogen, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, -COOR15, -OR15, (gde, R15 je vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril ili acil), -SR7 (gde je R7 kao što je definisan u prethodnom tekstu), -CONR5R6, -NR5R8 (gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu) ili -N3; (f) -CH=CH(CH2)mR16, gde je m jednako 0 do 4, i R16 je vodonik, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil, supstituisani ili nesupstituisani aril, supstituisani ili nesupstituisani heteroaril, -COOR15, -OR15 (gde je R15 kao što je definisan u prethodnom tekstu) -CONR5R6 ili -NR5R6 (gde su R5 i R6 kao što su definisani u prethodnom tekstu); (g) -CH=C(CO2R12)2, gde je R12 kao što je definisan u prethodnom tekstu; (h) -C≡C(CH2)nR16, gde je n jednako 0 do 4 i R16 je kao što je definisan u prethodnom tekstu; (i) -CH2OR22 , gde, R22 je tri-niži alkil silil u kome su tri niže alkil grupe iste ili različite ili gde R22 ima isto značenje kao R<8>. (j) -CH(SR23)2i -CH2-SR7 gde, R23 je niži alkil, niži alkenil ili niži alkinil i gde R<7>je kao što je definisan u prethodnom tekstu; i R3 je vodonik, halogen, acil, karbamoil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkil, supstituisani ili nesupstituisani alkenil, supstituisani ili nesupstituisani niži alkinil ili amino; i W1 i W2 su nezavisno vodonik, hidroksi ili W1 i W2 zajedno predstavljaju kiseonik; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačen time što jedinjenje formule (I) ima najmanje jednu funkcionalnu grupu za koju je konjugovana polimerna grupa, pri čemu je najmanje jedna funkcionlna grupa za koju je polimerna grupa konjugovana izabrana od hidroksi, supstituisanog ili nesupstituisanog nižeg alkila, nižeg alkoksi, karboksi, alkoksikarbonil, amino, nižeg alkilamino, nižeg alkilaminokarbonila i/ili oksim grupe i pri čemu polimer je polimer izabran od polialkilen glikola, polialkilen oksida, poliakrilne kiseline, poliakrilata, poliakrilamida ili njihovih N-alkil derivata, polimetakrilne kiseline, polimetakrilata, polietilakrilne kiseline, polietilakrilata, polivinilpirolidona, poli(vinilalkohola), poliglikolne kiseline, polimlečne kiseline, poli (mlečne-ko-glikolne) kiseline, dektrana ili hitosana, i pri čemu termin "niži alkil" kada se koristi pojedinačno ili u kombinaciji sa drugim grupama označava pravolančanu ili granatu nižu alkil grupu koja sadrži od 1-6 atoma ugljenika, 4 termin "niži alkenil" označava C2-C6alkenil grupu koja može biti pravolančana ili granata i može biti u Z ili E obliku, termin "niži alkinil" označava C2-C6-alkinil grupu koja može biti pravolančana ili granata, i termin "niži alkoksi" označava alkoksi grupu koja sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika. 2. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što, jedinjenje indolokarbazola formule (I) je jedinjenje opšte formule (II):
  3. 3. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 1 ili 2 predstavljen sledećom formulom (III):
    pri čemu su R1, R2, R3i W1i W2kao što su definisani u patentnom zahtevu 1; i pri čemu X predstavlja -L1-X’ i Y predstavlja -L<2>-Y’, pri čemu je najmanje jedan od X’ i Y’ polimer, bilo linearni ili granati, koji je vezan preko L1 i/ili L2 za prsten tetrahidrofurana jedinjenja formule (III); L1 i/ili L2 su kovalentna hemijska veza ili linker grupa; kada je Y’ polimer i X’ nije polimer, L<1>je kovalentna hemijska veza i X’ je izabran iz grupe koju čine (a) vodonik, niži hidroksialkil, acil, karboksi, niži alkoksikarbonil, (b) -CONR17aR17b, pri čemu su svaki R<17a>i R<17b>nezavisno izabrani od (i) vodonika, nižeg alkila, nižeg alkenila, nižeg alkinila, (ii) -CH2R18; pri čemu je R<18>jednako hidroksi, ili (iii) -NR19R20, pri čemu su svaki R<19>ili R<20>nezavisno izabrani od vodonika, nižeg alkila, nižeg alkenila, nižeg alkinila ili R<19>ili R<20>su nezavisno ostatak αaminokiseline i kome je hidroksi grupa karboksil grupe isključena, ili R<19>ili R<20>su spojeni sa atomom azota tako da formiraju heterocikličnu grupu; i (c) -CH=N-R21 , pri čemu, R<21>je hidroksi, niži alkoksi, amino, guanidino ili imidazolilamino; kada je X’ polimer i Y’ nije polimer, L<2>je kovalentna hemijska veza i Y’ je izabran od hidroksi, nižeg alkoksi, aralkiloksi ili aciloksi; i pri čemu polimer je polimer izabran od polialkilen glikola, polialkilen oksida, poliakrilne kiseline, poliakrilata, poliakrilamida ili njihovih N-alkil derivata, polimetakrilne kiseline, polimetakrilata, polietilakrilne kiseline, polietilakrilata, polivinilpirolidona, poli(vinilalkohola), poliglikolne kiseline, polimlečne kiseline, poli (mlečne-ko-glikolne) kiseline, dektrana ili hitosana, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Polimerni konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačen time što, polimer je polimer izabran od polietilen glikola (PEG) ili metoksi-polietilen glikola (m-PEG).
  5. 5. Polimerni konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, naznačen time što, polimer je polimer koji ima molekulsku težinu od 100 do 100000 Da. 4
  6. 6. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 4 ili 5, naznačen time što, polimer je PEG ili mPEG sa prosečnom molekulskom težinom od 2000 Da ili 5000 Da.
  7. 7. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 4 ili 5, naznačen time što, polimer je PEG ili mPEG sa prosečnom molekulskom težinom od 550 Da ili 1100 Da.
  8. 8. Polimerni konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva od 2 do 7, naznačen time što je kovalentna hemijska veza između polimera i jedinjenja formula (I) ili (II) ili pri čemu su L<1>i/ili L2 formule (III) izabrani od veze karbamata, etra, estra, ugljenika, amida i/ili amina.
  9. 9. Polimerni konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 2 do 8, naznačen time što, R1, R2, R3, W1, i W2su vodonik, Y’ je polimer i X’ je metoksikarbonil ili karboksil.
  10. 10. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 9, naznačen time što je L<2>veza etra ili karbamata.
  11. 11. Polimerni konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 2 do 8, naznačen time što, R1, R2, R3, W1, i W2su vodonik, X’ je polimer i Y’ je hidroksi.
  12. 12. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 11, naznačen time što, L<1>je veza amina ili amida.
  13. 13. Polimerni konjugat prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva za upotrebu kao aktivno sredstvo u leku.
  14. 14. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 13 za upotrebu kao aktivno sredstvo u topikalnom leku.
  15. 15. Polimerni konjugat prema patentnom zahtevu 13 za upotrebu kao aktivno sredstvo u leku za sistemsko lečenje.
  16. 16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedan polimerni konjugat prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, izborno zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, adjuvantima, razblaživačima i/ili aditivom. 4
  17. 17. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16 za dijagnostičku primenu.
  18. 18. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 16 za terapeutsku primenu.
  19. 19. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje patologija povezanih sa HMGB1.
  20. 20. Upotreba prema patentnom zahtevu 19, naznačena time što su patologije povezane sa HMGB1 stenoza, restenoza, ateroskleroza, reumatoidni artritis, autoimune bolesti, tumori, infektivne bolesti, sepsa, akutna inflamatorna povreda pluća, lupus eritematodes, neurodegenerativne bolesti, bolesti centralnog i perifernog nervnog sistema i multipla skleroza.
  21. 21. Upotreba prema patentnom zahtevu 20, naznačena time što, patologija povezana sa HMGB1 je stenoza ili restenoza.
  22. 22. Upotreba prema patentnim zahtevima 19 do 21, naznačena time što je polimerni konjugat reverzibilno imobilizovan na površini medicinskog uređaja.
  23. 23. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje neuroloških poremećaja, neuropatija i neurodegenerativnih poremećaja centralnog i perifernog nervnog sistema.
  24. 24. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje dermalnih patologija.
  25. 25. Upotreba prema patentnom zahtevu 24, gde su dermalne patologije naznačene hiperproliferacijom keratinocita.
  26. 26. Upotreba prema patentnom zahtevu 24 ili patentnom zahtevu 25, naznačena time što, dermalne patologije su psorijaza, atopijski dermatitis, hronični ekcem, akne, pitirijazis rubra pilaris, keloidi, hipertrofirajući ožiljci i tumori kože. 4
  27. 27. Upotreba prema patentnom zahtevu 26, naznačena time što, dermalna patologija je psorijaza.
  28. 28. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje bola i hiperalgezije povezane sa NGF.
  29. 29. Upotreba prema bilo kom od patentnih zahteva 24 do 28, naznačena time što je lek pripremljen za topikalnu primenu.
  30. 30. Upotreba prema patentnom zahtevu 29, naznačena time što se primena izvodi u obliku lipozoma.
  31. 31. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje inflamatornih bolesti, autoimunih bolesti, sindroma sistemskog inflamatornog odgovora, reperfuzione povrede posle transplantacije organa, kardiovaskularnih zahvaćenosti, akušerskih i ginekoloških bolesti, infektivnih bolesti, alergijskih i atopijskih bolesti, patologija solidnog i tečnog tumora, bolesti odbacivanja transplanta, kongenitalnih bolesti, dermatoloških bolesti, neuroloških bolesti, kaheksije, renalnih bolesti, stanja jatrogene intoksikacije, metaboličkih i idiopatskih bolesti i oftalmoloških bolesti.
  32. 32. Upotreba polimernog konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12 za proizvodnju leka za prevenciju, ublažavanje i/ili lečenje Behčetove bolesti, Sjogrenovog sindroma, vaskulitisa, uveitisa, retinopatija.
  33. 33. Upotreba prema patentnim zahtevima 28, 31 ili 30 naznačena time što je lek za sistemsku primenu. 4
RS20140104A 2005-08-25 2006-08-25 Polimerni konjugati k-252a i njihovi derivati RS53195B2 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US71089005P 2005-08-25 2005-08-25
US72045405P 2005-09-27 2005-09-27
US81146906P 2006-06-07 2006-06-07
PCT/EP2006/008374 WO2007022999A1 (en) 2005-08-25 2006-08-25 Polymer conjugates of k-252a and derivatives thereof
EP06777076.8A EP1919979B2 (en) 2005-08-25 2006-08-25 Polymer conjugates of k-252a and derivatives thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS53195B RS53195B (sr) 2014-06-30
RS53195B2 true RS53195B2 (sr) 2018-08-31

Family

ID=37075187

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20140104A RS53195B2 (sr) 2005-08-25 2006-08-25 Polimerni konjugati k-252a i njihovi derivati

Country Status (20)

Country Link
US (1) US8673347B2 (sr)
EP (1) EP1919979B2 (sr)
JP (1) JP5366548B2 (sr)
KR (1) KR101379693B1 (sr)
AU (1) AU2006284096B2 (sr)
BR (1) BRPI0615277A2 (sr)
CA (1) CA2620032C (sr)
CY (1) CY1114995T1 (sr)
DK (1) DK1919979T4 (sr)
EA (1) EA017318B1 (sr)
ES (1) ES2444003T5 (sr)
HR (1) HRP20140218T4 (sr)
IL (1) IL189187A (sr)
MX (1) MX2008002524A (sr)
NZ (1) NZ566160A (sr)
PL (1) PL1919979T5 (sr)
PT (1) PT1919979E (sr)
RS (1) RS53195B2 (sr)
SI (1) SI1919979T2 (sr)
WO (1) WO2007022999A1 (sr)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2663300C (en) 2006-09-15 2014-10-07 Creabilis Therapeutics S.P.A. Polymer conjugates of box-a of hmgb1 and box-a variants of hmgb1
DK2350075T3 (da) 2008-09-22 2014-05-26 Array Biopharma Inc Substituerede imidazo[1,2b]pyridazinforbindelser som trk-kinase-inhibitorer
PT3106463T (pt) 2008-10-22 2018-05-18 Array Biopharma Inc Compostos de pirazolo[1,5-]pirimidina substituídos como inibidores de cinase trk
MY171292A (en) * 2008-12-22 2019-10-07 Creabilis S A Synthesis of polymer conjugates of indolocarbazole compounds
AR077468A1 (es) 2009-07-09 2011-08-31 Array Biopharma Inc Compuestos de pirazolo (1,5 -a) pirimidina sustituidos como inhibidores de trk- quinasa
RU2735545C2 (ru) 2010-05-20 2020-11-03 Эррэй Биофарма Инк. Макроциклические соединения в качестве ингибиторов киназы trk
WO2014177510A2 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Creabilis Sa Polymer conjugates of indolocarbazole compounds in the treatment of pruritus
EP3060250A1 (en) 2013-10-22 2016-08-31 NovImmune SA Methods and compositions for diagnosis and treatment of disorders in patients with elevated levels of tlr4 ligands and other biomarkers
EP3218380B1 (en) 2014-11-16 2021-03-17 Array Biopharma, Inc. Preparation of a crystalline form of (s)-n-(5-((r)-2-(2,5-difluorophenyl)-pyrrolidin-1-yl)-pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide hydrogen sulfate
PE20180329A1 (es) 2015-06-01 2018-02-13 Loxo Oncology Inc Metodos para diagnosticar y tratar el cancer
PT3322706T (pt) 2015-07-16 2021-03-08 Array Biopharma Inc Compostos de pirazolo[1,5-a]piridina substituídos como inibidores da quinase do ret
TN2019000271A1 (en) 2015-10-26 2021-01-07 Univ Colorado Regents Point mutations in trk inhibitor-resistant cancer and methods relating to the same
US10045991B2 (en) 2016-04-04 2018-08-14 Loxo Oncology, Inc. Methods of treating pediatric cancers
IL304018A (en) 2016-04-04 2023-08-01 Loxo Oncology Inc Liquid formulations of (S)-N-(5-((R)-2-(5,2-difluorophenyl)-pyrrolidine-1-yl)-pyrazolo[5,1-A]pyrimidin-3-yl)-3 -hydroxypyrrolidine-1-carboxamide
TN2019000332A1 (en) 2016-04-04 2021-05-07 Loxo Oncology Inc Methods of treating pediatric cancers
ES2952056T3 (es) 2016-05-18 2023-10-26 Loxo Oncology Inc Preparación de (s)-n-(5-((r)-2-(2,5-difluorofenil)pirrolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroxipirrolidina-1-carboxamida
JOP20190077A1 (ar) 2016-10-10 2019-04-09 Array Biopharma Inc مركبات بيرازولو [1، 5-a]بيريدين بها استبدال كمثبطات كيناز ret
TWI704148B (zh) 2016-10-10 2020-09-11 美商亞雷生物製藥股份有限公司 作為ｒｅｔ激酶抑制劑之經取代吡唑并[1,5-a]吡啶化合物
JOP20190092A1 (ar) 2016-10-26 2019-04-25 Array Biopharma Inc عملية لتحضير مركبات بيرازولو[1، 5-a]بيريميدين وأملاح منها
JP6888101B2 (ja) 2017-01-18 2021-06-16 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド ＲＥＴキナーゼ阻害剤としての置換ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン化合物
WO2018136663A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Array Biopharma, Inc. Ret inhibitors
JOP20190213A1 (ar) 2017-03-16 2019-09-16 Array Biopharma Inc مركبات حلقية ضخمة كمثبطات لكيناز ros1
WO2018175340A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Reduced exposure conjugates modulating therapeutic targets
WO2018175301A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Polymer conjugate of montesanib with reduced exposure
WO2018175315A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates of staurosporine derivatives having reduced exposure
WO2018175302A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates targeting c-src with reduced exposure
WO2018208369A1 (en) 2017-05-10 2018-11-15 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Uses of polymer conjugates of indolocarbazole compounds with reduced exposure
TWI791053B (zh) 2017-10-10 2023-02-01 美商亞雷生物製藥股份有限公司 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之結晶形式及其醫藥組合物
TWI876442B (zh) 2017-10-10 2025-03-11 美商絡速藥業公司 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之調配物
US20190247398A1 (en) 2017-10-26 2019-08-15 Array Biopharma Inc. Formulations of a macrocyclic trk kinase inhibitor
WO2019126270A1 (en) * 2017-12-20 2019-06-27 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Formulations for dermal delivery of polymer conjugates of indolocarbazole compounds with reduced exposure
WO2019143971A2 (en) * 2018-01-18 2019-07-25 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Formulations for dermal delivery of polymer conjugates of indolocarbazole compounds with reduced exposure
WO2019143991A1 (en) 2018-01-18 2019-07-25 Array Biopharma Inc. SUBSTITUTED PYRAZOLO[3,4-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS AS RET KINASE INHIBITORS
WO2019143977A1 (en) 2018-01-18 2019-07-25 Array Biopharma Inc. Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidines compounds as ret kinase inhibitors
JP6997876B2 (ja) 2018-01-18 2022-02-04 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド Ｒｅｔキナーゼ阻害剤としての置換ピラゾリル［４，３－ｃ］ピリジン化合物
JP7223502B6 (ja) * 2018-02-22 2024-02-08 公益財団法人川崎市産業振興財団 医薬組成物
US20210023086A1 (en) 2018-03-29 2021-01-28 Loxo Oncology, Inc. Treatment of trk-associated cancers
WO2020023387A1 (en) * 2018-07-23 2020-01-30 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Uses of polymer conjugates of indolocarbazole compounds with reduced exposure
JP7286755B2 (ja) 2018-07-31 2023-06-05 ロクソ オンコロジー， インコーポレイテッド （ｓ）－５－アミノ－３－（４－（（５－フルオロ－２－メトキシベンズアミド）メチル）フェニル）－１－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）－１ｈ－ピラゾール－４－カルボキサミドの噴霧乾燥分散体および製剤
CA3111984A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Array Biopharma Inc. Fused heterocyclic compounds as ret kinase inhibitors
CN113474337A (zh) 2018-12-19 2021-10-01 奥瑞生物药品公司 作为fgfr抑制剂用于治疗癌症的7-((3，5-二甲氧基苯基)氨基)喹喔啉衍生物
JP2022515198A (ja) 2018-12-19 2022-02-17 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド ＦＧＦＲチロシンキナーゼの阻害剤としての置換ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン化合物

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0303697B1 (en) * 1987-03-09 1997-10-01 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Derivatives of physiologically active substance k-252
US5461146A (en) * 1992-07-24 1995-10-24 Cephalon, Inc. Selected protein kinase inhibitors for the treatment of neurological disorders
WO2001085151A2 (en) 2000-05-08 2001-11-15 Psoriasis Research Institute Chimeric animal model and treatment of psoriasis
US7754217B2 (en) 2001-03-16 2010-07-13 Bio3 Research Srl HMGB1 protein inhibitors and/or antagonists for the treatment of vascular diseases
EP1392870B1 (en) * 2001-05-09 2008-02-27 Discoverx, Inc. Screening for enzyme inhibitors
AU2003250150A1 (en) 2003-07-23 2005-02-25 Creabilis Therapeutics S.R.L. Topical use of tyrosine kinase inhibitors of microbial origin to prevent and treat skin disorders characterised by excessive cell proliferation
MX2007001155A (es) 2004-07-29 2007-08-14 Creabilis Therapeutics Spa Uso de inhibidores de k-252a y de quinasa para la prevencion o el tratamiento de patologias asociadas con hmgb1.
TW200626610A (en) * 2004-10-13 2006-08-01 Wyeth Corp Analogs of 17-hydroxywortmannin as PI3K inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
DK1919979T3 (da) 2014-04-14
HRP20140218T4 (hr) 2017-06-16
BRPI0615277A2 (pt) 2009-08-04
AU2006284096A1 (en) 2007-03-01
JP2009506000A (ja) 2009-02-12
SI1919979T2 (sl) 2017-07-31
PL1919979T5 (pl) 2017-10-31
EP1919979A1 (en) 2008-05-14
ES2444003T5 (es) 2017-07-05
EA200800661A1 (ru) 2008-06-30
EP1919979B2 (en) 2017-03-29
NZ566160A (en) 2010-12-24
PL1919979T3 (pl) 2014-06-30
EA017318B1 (ru) 2012-11-30
US20080193517A1 (en) 2008-08-14
DK1919979T4 (en) 2017-07-17
CY1114995T1 (el) 2016-12-14
KR101379693B1 (ko) 2014-04-10
CA2620032A1 (en) 2007-03-01
WO2007022999A1 (en) 2007-03-01
HK1123563A1 (en) 2009-06-19
MX2008002524A (es) 2008-03-14
AU2006284096B2 (en) 2012-03-29
EP1919979B1 (en) 2014-01-15
IL189187A (en) 2013-04-30
ES2444003T3 (es) 2014-02-21
KR20080039511A (ko) 2008-05-07
RS53195B (sr) 2014-06-30
CA2620032C (en) 2014-02-04
IL189187A0 (en) 2008-06-05
PT1919979E (pt) 2014-03-07
US8673347B2 (en) 2014-03-18
JP5366548B2 (ja) 2013-12-11
HRP20140218T1 (en) 2014-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1919979B1 (en) Polymer conjugates of k-252a and derivatives thereof
AU2019246389B2 (en) IL-2 conjugates
KR101394768B1 (ko) 캄토테신-세포 투과 펩티드 결합체 및 이를 포함하는 약학 조성물
CA2616957C (en) Antitumoral bioconjugates of hyaluronic acid or its derivatives obtained by indirect chemical conjugation
JP5856069B2 (ja) 新規なシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体
JPWO2004039869A1 (ja) カンプトテシン類の高分子誘導体
CN101248105B (zh) K-252a及其衍生物的聚合物缀合物
HK1123563B (en) Polymer conjugates of k-252a and derivatives thereof
WO2014184564A1 (en) Novel polymer conjugates
KR20180093059A (ko) 아밀린 및 아밀린-모방 화합물의 비-응집성 바이오접합체, 이를 포함하는 조성물 및 이의 제조 방법과 용도
TW201340982A (zh) 聚合物複合體、藥物組合物、治療或紓緩疾病或症狀的方法、診斷疾病或症狀的方法以及聚合物複合體的用途
WO2025122826A1 (en) Hyaluronic acid-nonsteroidal anti-inflammatory drug conjugates for treating inflammation-mediated pathologies
EP3394090A1 (en) Non-agglomerating bioconjugates of amylin and amylin-mimetic compounds, compositions comprising the same, and making and use thereof
WO2017119272A1 (ja) マクロライド系免疫抑制剤の高分子誘導体