RO128889A0 - Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină - Google Patents
Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină Download PDFInfo
- Publication number
- RO128889A0 RO128889A0 ROA201200890A RO201200890A RO128889A0 RO 128889 A0 RO128889 A0 RO 128889A0 RO A201200890 A ROA201200890 A RO A201200890A RO 201200890 A RO201200890 A RO 201200890A RO 128889 A0 RO128889 A0 RO 128889A0
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- strain
- parts
- td50b
- harzianum
- trichoderma
- Prior art date
Links
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 title claims abstract description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 title claims description 9
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 claims abstract description 35
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 17
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 claims abstract description 15
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims abstract description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000344 soap Substances 0.000 claims abstract description 8
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 33
- 239000002361 compost Substances 0.000 claims description 31
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 claims description 14
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 13
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 13
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 13
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 claims description 10
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 9
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- MAUFTTLGOUBZNA-UHFFFAOYSA-N 6-n-Pentyl-alpha-pyrone Chemical compound CCCCCC1=CC=CC(=O)O1 MAUFTTLGOUBZNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 7
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 7
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 claims description 6
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 claims description 5
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 5
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 claims description 4
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 4
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 4
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 claims description 4
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 claims description 4
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 3
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 abstract description 7
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 48
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 27
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 12
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 7
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 7
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 7
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 7
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 7
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000009264 composting Methods 0.000 description 6
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- -1 6-pentyl-pyrone Chemical class 0.000 description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 3
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 3
- 239000005821 Propamocarb Substances 0.000 description 3
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 3
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 3
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N azanium;azane;2,3,4-trihydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 3
- CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N chlorothalonil Chemical compound ClC1=C(Cl)C(C#N)=C(Cl)C(C#N)=C1Cl CRQQGFGUEAVUIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- WZZLDXDUQPOXNW-UHFFFAOYSA-N propamocarb Chemical compound CCCOC(=O)NCCCN(C)C WZZLDXDUQPOXNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 3
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 3
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 2
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 2
- 239000005747 Chlorothalonil Substances 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical compound CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 244000154511 Rosa hybrid cultivar Species 0.000 description 2
- 235000002315 Rosa hybrid cultivar Nutrition 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001575049 Sonia Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000894120 Trichoderma atroviride Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000047670 Viola x wittrockiana Species 0.000 description 2
- 235000004031 Viola x wittrockiana Nutrition 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003872 anastomosis Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N citrulline Chemical compound OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000011121 hardwood Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N pentachloronitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 235000007686 potassium Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 2
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 2
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMNCVHDCPLYBSD-UHFFFAOYSA-N 3-pentylpyran-2-one Chemical class CCCCCC1=CC=COC1=O XMNCVHDCPLYBSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHBSPIPJMLAMEP-UHFFFAOYSA-N 6-pentyloxan-2-one Chemical compound CCCCCC1CCCC(=O)O1 GHBSPIPJMLAMEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005273 Canna coccinea Nutrition 0.000 description 1
- 240000008555 Canna flaccida Species 0.000 description 1
- 241000201841 Celosia Species 0.000 description 1
- 241000589585 Chryseobacterium balustinum Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 229930195711 D-Serine Natural products 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 241001331845 Equus asinus x caballus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000611205 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici Species 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000221781 Hypocreaceae Species 0.000 description 1
- 241000221775 Hypocreales Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 241000721662 Juniperus Species 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000346285 Ostrinia furnacalis Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000208183 Pelargonium x hortorum Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001326533 Sordariomycetes Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101150057615 Syn gene Proteins 0.000 description 1
- 241001460073 Trichoderma asperellum Species 0.000 description 1
- 241000227728 Trichoderma hamatum Species 0.000 description 1
- 241001304120 Trichoderma pseudokoningii Species 0.000 description 1
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000364021 Tulsa Species 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229940059913 ammonium carbonate Drugs 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940044197 ammonium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000004464 cereal grain Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 1
- 230000015961 delipidation Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002362 mulch Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000008659 phytopathology Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 244000022778 quail grass Species 0.000 description 1
- 235000008954 quail grass Nutrition 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 230000021749 root development Effects 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013376 serial cultivation Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001433 sodium tartrate Substances 0.000 description 1
- 229960002167 sodium tartrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011004 sodium tartrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000011122 softwood Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/38—Trichoderma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/885—Trichoderma
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la tulpina de, depozitată cu nr. de depozit NCAIM(P) F 001412, şi la o compoziţie cu eliberare controlată, care o conţine utilizată pentru culturi ornamentale. Tulpina conform invenţiei este antagonistăfaţă de ciuperci patogene alese dintre,,,. Compoziţia protejează culturile ornamentale de bolile produse de ciuperci fitopatogene. Compoziţia conform invenţiei conţine 76 p.g. rumeguş de lemn parţial hidrolizat, 10 p.g. făină, 4,8 p.g. esteri etilici ai acizilor graşi, 4 p.g. alcool vinilic, 3,5 p.g. lecitină, 0,75 p.g. săpun de potasiu, 0,4 p.g. glicerol şi minimum 10ufc/gTd50b, conform invenţiei.
Description
. ÎZ/IV.
TULPINĂ DE TRICHODERMA HARZIANUM Ș\ COMPOZIȚIE CU ELIBERARE CONTROLATĂ CARE CONȚINE RESPECTIVA TULPINA
Prezenta invenție se referă la o tulpină de Trichoderma harzianum care protejează plantele ornamentale față de unele boli, produce exohidrolaze cu rol în degradarea materialului vegetal și sintetizează compuși volatili odoranți, ca și la o compoziție cu eliberare controlată care conține această tulpină, destinată accelerării producerii de composturi supresive și odorante, aplicabile ca muici pentru protecția și nutriția culturilor ornamentale.
Sunt cunoscute o serie întreagă de tulpini de ciuperci microscopice aparținând genului Trichoderma, care sunt antagoniste pentru agenții fitopatogeni și au o competență saprofită ridicată, colonizând diferitele substraturi și conferindu-le caracteristici supresive pentru bolilor plantelor. Brevetul EP1400586 (B1), descrie o tulpină de Trichoderma asperellum, T34 (2), cu numărul de depozit CECT 20147, Coleccion Espaniola de Cultivos Tipo, Valencia, Spania, care are capacitatea de a coloniza substraturi de creștere pentru plante, cum sunt de exemplu turba, compostul (compost din lemn de esență tare, compost din coajă de conifere, compost din lemn de plută, compost din nămoluri de la stațiile de epurare, compost din resturi vegetale, etc.) sau formulări de tip CTV (compost - turbă - vermiculit). Substratul rezultat prin colonizare cu această tulpină prezintă avantajul de a fi supresiv atât față de Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici, cât și față de Rhizocotonia solanii. Procedeul revendicat pentru realizarea substratului supresiv implică distribuirea unei cantități efective, din tulpina de T34 (2), în substratul de creștere, pentru suprimarea atacului agenților fitopatogeni. Brevetul SUA 7070984 (B2) se referă la tulpina Li49 de T. viride, depozitată la ATTC cu numărul PTA-1225, care are o capacitate ridicată de a coloniza diferitele subtraturi, și care acționează ca parazit al agenților fitopatogeni, în special a celor din genurile Fusarium și Rhizoctonia. Tulpina este cultivată aseptic pe un mediu lichid, iar biomasa este recuperată și adăugată în proporție de cel puțin 10% într-un suport organic alcătuit din boabe de cereale, turbă și compost. Biopreparatul astfel rezultat este utilizat pentru tratament împotriva agenților fitopatogeni din sol, în doză de 5 livre pentru 1 acru (5,6 kg per ha). Brevetul SUA 4900348 revendică folosirea tulpinilor de Trichoderma hamatum ATCC 20764 sau 20765, în combinație cu bacteriile Xanthomonas maltophila ATCC 53199 și Flavobacterium balustinum ATCC 53199, pentru realizarea unui compost supresiv
(λ- 2 Ο 1 2 - Ο Ο 8 9 Ο - 2 7 -11- 2012 pentru Rhizoctonia solanii, Pythium ultinum și Fusarium, pornind de la scoarță de lemn de esență tare, scoarță de lemn de rășinoase sau nămol de la stațiile de epurare ca substrat de compostare.
Tulpinile de Trichoderma au și o semnificativă activitate de degradare a materialului vegetal, datorită producerii de enzime hidrolitice, în special celulaze. Brevetul TWI287535 (B) prezintă tulpina TC103 de Trichoderma spp., depozitată sub numărul BCRC 930070 la Bioresources Collection and Research Center, Taipei, care are capacitatea de accelera degradarea bagasei / reziduurilor de lemn cu formare de compost. Cererea de brevet RO 127471 (A1) protejează tulpina Td85 de T. pseudokoningii, număr de depozit DSM 23661, care prezintă concomitent antagonism față de agenții fitopatogeni din sol, capacitate ridicată de mineralizare a materialului vegetal și rezistență la compușii biofumiganți eliberați din biomasă de crucifere, și care este destinată pentru accelerarea mineralizării biomasei vegetale rezultate prin distrugerea culturilor „verzi” de crucifere, de protecție în timpul iernii.
Pentru unele tulpini de Trichoderma s-a evidențiat capacitatea de a produce compuși aromați, cum este de exemplu 6-pentil-pirona, care au și o activitate antifungică semnificativă. Cererea de brevet WO9520879 (A2), revendică utilizarea metaboliților antifungali produși de diferite tulpini de Trichoderma, 6-pentil-alfapironă, delta-decanolactonă și massoiolactonă, singuri sau împreună cu tulpinile care produc astfel de metaboliți, pentru combaterea bolilor fungice ale plantelor de cultură.
Nu s-au pus încă în evidență tulpini de Trichoderma, active în protecția plantelor ornamentale față de o serie de boli, și care să prezinte concomitent și capacitatea de: (/) producere de celulaze / β-glucanaze, cu rol în accelerarea descompunerii materialului vegetal din substratele de compostat, și (//) sinteza a unor compuși volatili care sunt, în același timp, antifungici și odoranți. Tulpinile antagoniste din această categorie, care au capacitatea de a sintetiza exo-hidrolaze implicate în degradare materialului vegetal și compuși odoranți antifungici, ar permite realizarea unor composturi supresive și odorante, utilizabile ca muici pentru protecția și nutriția culturilor ornamentale din spațiile verzi.
Pentru astfel de tulpini este necesară și realizarea unor compoziții cu eliberare controlată, care să faciliteze colonizarea materialelor destinate compostării, și în special a scoarței de copac care este utilizată ca muici organic pentru grădini și spații verzi. Pentil-pironele volatile produse de tulpinele de Trichoderma au un efect fungistatic și asupra celulelor vegetative / propagulelor din aceeași tulpină (Sahay2 ^1312-00890-2 7 -Η- 2012
Bagnon etal., 2000, Process Biochem., 36:103-109), colon zarea ulterioară de către aceeași tulpină a unui substrat în care se dezvoltă deja o populație producătoare de
6-pentil-pironă fiind limitată.
Această invenție se referă la tulpina de Trichoderma harzianum Td50b, depozitată cu numărul de depozit NCAIM (P) F 001412 la Național Collection of Agricultural and Industrial Microorganisms, Universitatea Corvinus din Budapesta, Ungaria, care produce exohidrolaze cu rol în degradarea materialului vegetal și prezintă antagonism pentru uni agenți patogeni ai culturilor ornamentale, inclusiv datorită sintetizării de compuși volatili odoranți cu activitate antifungică. Este un alt obiect al acestei invenții de a furniza un procedeu prin care să fie selectate rapid tulpinile care sunt antagoniste in vitro pentru diferiții agenți fitopatogeni producând exohidrolaze cu rol în degradarea componentelor materialului vegetal și sintetizând compuși volatili odoranți cu activitate antifungică. De asemenea această invenție se referă și la o compoziție cu eliberare controlată care: facilitează colonizarea materialelor destinate compostării, asigurând supraviețuirea propagulelor neeliberate și după colonizarea inițială a substratului cu tulpina producătoare de compuși volatili fungistatici, inclusiv pentru propagulele aceleași tulpini aflate în stare de dormanță, și, în final, accelerează procesul de obținere a composturilor destinate utilizării pentru mulcirea solului culturilor ornamentale.
Tulpina de Trichoderma harzianum Td50b este antagonistă in vitro față de Rhizoctonia solanii, Fusarium graminearum, F. culmorum, Pythium ultimum, Botrytis cinerea, Alternaria alternata, Sclerotinia sclerotiorum; protejează culturile ornamentale de bolile produse de ciupercile fitopatogene din sol implicate în complexul de răsărire {Rhizoctonia, Pythium, Fusarium) și producătoare de putregaiuri {Botrytis cinerea), produce celulaze cu rol în degradarea materialului vegetal din substratele de compostat, sintetizează 6-pentil-pironă, compus volatili care este, în același timp, antifungic și odorant, și accelerează formarea de compost supresiv din coajă de brad.
Tulpina T. harzianum Td50b, număr depozit NCAIM (P) F 001412, a fost selectată din izolate naturale prin utilizarea procedeului de selecție rapid constituit din următoarele etape:
Distribuirea aseptică a unui mediu agarizat, care conține ca principală sursă de carbon un derivat de celuloză, într-o placă cu 24 godeuri;
^2012-00890-2 7 -11- 2012
Inocularea mediului agarizat cu 5 izolate de testat, distribuite randomizat, și menținerea unor godeuri martor neinoculate;
Acoperirea cu o folie de plastic sterilă care permite schimbul de gaze;
Incubarea timp de 3 zile la 25°C;
Depunerea plăcii cu 24 godeuri în care s-au dezvoltat izolatele de testat peste o altă placă cu 24 godeuri cu mediu agarizat, în care a fost crescută timp de 2 zile o ciupercă microscopică, agent fitopatogen, față de care se testează antagonismul izolatelor;
Incubarea timp de 5 zile la 25°C a plăcilor reunite, cu placa cu mediu cu izolate de Trichoderma deasupra plăcii cu ciuperca fitopatogenă de testat, separate între ele de folia de plastic care permite schimbul de gaze;
Determinarea creșterii ciuperci fitopatogene test prin analiza imaginii plăcii de microtitrare preluate de un sistem de fotodocumentare și calcularea procentului de inhibiție cu ajutorul formulei: (Ar Α^/Αί x 100, unde Αί este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta martor netratat, iar An este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta în care a fost confruntat cu compușii volatili produși de unul din izolatele de testat;
analiza statistică a rezultatelor prin analiza varianței și identificarea eventualelor izolate active datorită producerii de compuși volatili;
inundarea mediului agarizat pe care au crescut izolatele de Trichoderma cu o soluție de Roșu de Congo 0,1% și, după 5 rriin, înlăturarea soluției de roșu de Congo și spălarea cu o soluție 1 M NaCI pentru 20 min;
evidențierea zonelor clare de celuloliză în jurul coloniilor de Trichoderma producătoare de celulaze;
Compoziția cu eliberare controlată pe baza tulpinii T. harzianum Td50b este alcătuită din 76 părți rumeguș de lemn parțial hidrolizat, 10 părți făină, 5,3 părți esteri etilici ai acizilor grași, 4 părți alcool polivinilic, 3,8 părți lecitină, 0,5 părți săpun de potasiu, 0,4 părți glicerol, și min. 106 ufc/g T. harzianum Td50b.
Prin aplicarea invenției se obțin următoarele avantaje:
- asigurarea unei colonizări uniforme și reproductibile de către tulpina Td50b cu propagule eliberate succesiv din compoziția conform prezentei invenții, datorită acumulării preponderente în componenta hidrofobă a compoziției a 6-pentil-pironei, compus volatil produs de populația provenită din primul val eliberat, deja dezvoltată în substrat și fungistatic pentru propagulele aceleași tulpini;
^*2012-00890-2 7 -Π- 2012
- accelerarea procesului de obținere a composturilor supresive și odorante prin folosirea compoziției care eliberează succesiv inocul de propagule ale tulpinii Td50b, înalt producătoare de celulaze
- formarea unui compost supresiv pentru bolile plantelor ornamentale și cu caracteristici odorante superioare prin utilizarea tulpinii Td50b ca activator de compostare;
In continuare invenția va fi descrisă în detaliu în următoarele exemple:
Exemplu 1. Tulpina de Trichoderma harzianum Rifai, tulpina Td50b, a fost izolată dintr-o probă de compost de coajă de brad provenită de la Stefanești, Argeș, (latitudine, 44° 51'53.49N; longitudine 24° 57' 0.67Έ). Izolatele au fost obținute folosind mediul selectiv propus de William et al., 2003 (Appl. Environ. Microbiol., 69: 4190-4191), care conține 0,2 g MgSO4.7H2O, 0,9 g Κ2ΗΡΟ4, 1,0 g NH4NO3, 0,15 g KCI, 0.15 g Roz Bengal (sare de sodiu, R3877 Sigma, Sigma - Aldrich, Saint Louis, MO, SUA), 3 g glucoză, 20 g agar în 950 ml apă distilată, la care se adaugă după sterilizare (prin autoclavare la 121°C pentru 20 min) ingrediente care-i conferă specificitatea. Ingredientele antimicrobiene care-i conferă specificitatea utilizate (exprimate per litru de mediu) au fost: 0,25 g cloramfenicol (C0378 Sigma - Aldrich), 9 ml de soluție stoc de streptomicină (1% masă/volum, S6501 Sigma-AIdrich), 0,2 g pentacloronitrobenzen (quintozene, P2205 Sigma-AIdrich) și 1,5 ml propamocarb condiționat (Previcur 607 SL, Bayer Crop Science, Monheim am Rhein, Germania, 607 g ingredient activ per litru). Toate aceste ingrediente s-au adus la 40 ml cu apă distilată sterilă, au fost sterilizate prin filtrare și apoi s-au adăugat la mediul bazai răcit la limita de solidificare.
Selecția tulpinii Td50b din izolatele obținute pe mediu selectiv de mai sus a fost realizată prin procedeul descris mai jos.
Intr-o placa cu 24 de godeuri (Corning® Costar® cell culture plates, 24 well, flat bottom, Corning, Tewksburry, MA, SUA) s-a distribuit aseptic mediu care permite concomitent și evidențierea activității endo-celulazice. Acest mediu agarizat utilizat și pentru identificarea celulolizei constă în mediu bazai (1 litru de mediu bazai conține: 5 g tartrat de amoniu, 1 g KH2PO4, 0,5 g MgSO4 7H2O, 0,1 g extract de drojdie, 0,001 g CaCI2.2H2O - 0,1 ml dintr-o soluție stoc 10 mg/ml) la care s-a adăugat 2% carboximetilceluloză de vâscozitate mică (CMC 100 cP) și care s-a agarizat cu 20 g /I agar. Mediul s-au autoclavat la 121°C timp de 20 min.
^*2012-00890-? 7 -II- ΖΚ
Godeurile cu mediu agarizat s-au inoculat cu 5 tulpini (4 izolate și o tulpină etalon, Trichoderma atroviride ATCC 74058, tulpină pentru care s-a pus în evidență producerea de 6-pentil-pironă, Reithner etal., 2005, Fungal Genet. Biol., 42:749-760) în 4 repetiții. S-a realizat și un martor (control), cu mediu agarizat, care nu a fost inoculat. Schema de randomizare pentru placa de 24 godeuri, 6 variante (Vr martor neinoculat; V2 - tulpină etalon; V3-V6 - izolate de testat) în 4 repetiții, utilizată în cadrul experimentelor de selectare prezentată în tab.1.
Tab.1. Schema de randomizare a celor 6 variante (tulpini) în 4 repetiții aplicată pentru placa cu 24 godeuri.
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| A | V4 | V5 | V3 | V6 | V2 | V1 |
| B | V6 | V2 | V4 | V5 | V1 | V3 |
| C | V3 | V1 | V5 | V2 | V4 | V6 |
| D | V5 | V3 | V1 | V4 | V6 | V2 |
Placa s-a acoperit cu folie de plastic sterilă (Breathe-Easy™ sealing membrane, Z380059 Sigma), care permite schimbul de gaze, și s-a incubat 3 zile la 25°C. S-a verificat vizual creșterea. In paralel s-a cultivat 2 zile fitopatogenul test Rhizoctonia solanii ATCC 66873 (American Type Culture Collection, Manassas, VA, SUA, tulpină izolată din muici de scoarță de conifere, aparținând grupului de anastomoză hifală AG-4, grup regăsit cu precădere ca agent cauzal al bolilor produse plantelor ornamentale), pe o altă placă de microtitrare cu 24 godeuri, fiecare conținând 1,5 ml de mediu cartof - glucoză - agar, inoculat cu 0,1 ml de suspensie hifală de R. solanii conținând 2,5 mg hife per ml (suspensie reconstituită din miceliu cultivat pe mediu cartof - glucoză lichid). După inițierea dezvoltării coloniilor de Trichoderma s-a depus placa de microtitrare cu mediu agarizat cu tulpini de Trichoderma peste cea care conține ciuperca test. Intre cele două plăci s-a menținut folia sterilă, care permite schimbul de gaze. S-au incubat timp de 5 zile la 24°C plăcile reunite, cu placa cu mediu cu izolate de Trichoderma deasupra plăcii cu ciuperca fitopatogenă de testat, separate între ele de folia de plastic care permite schimbul de gaze. Creșterea ciupercii fitopatogene test a fost determinată prin analiza imaginii plăcii de microtitrare, preluate de un sistem de fotodocumentare
C\- 2 Ο 1 2 - Ο Ο 8 9 Ο - 2 7 -11- 2012
InGenius și prelucrate de către softul Dimension (Syngene, Carribridge, Marea
Britanie). Procentul de inhibiție a fost calculat cu ajutorul formulei (1) de mai jos:
AtxlOO unde Ai este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta martor netratat, iar An este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta în care a fost confruntat cu compușii volatili produși de unul din izolatele de testat. Datele referitoare la inhibarea ciupercii - test s-au prelucrat prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft, Tulsa, OK, SUA), determinându-se activitatea de inhibare a izolatelor testate comparativ cu tulpina etalon.
Mediul agarizat pe care au crescut izolatele de Trichoderma a fost inundat cu o soluție de Roșu de Congo 0,1% și, după 5 min, soluția de Roșu de Congo a fost înlăturată și au fost spălate plăcile cu o soluție 1 M NaCI pentru 20 min. S-au identificat tulpinile de Trichoderma producătoare de celulaze prin evidențierea zonele clare de celuloliză în jurul coloniilor.
La sfârșitul a peste 25 cicluri de testări, în care au fost testate peste 100 izolate, a fost identificată tulpina Td50b, ca fiind cea care prezintă concomitent o activitate celulozolitică semnificativă, evidențiată prin zone clare de celuloliză în jurul coloniilor, și activitate inhibitorie ridicată datorată compușilor volatili.
încadrare taxonomică a tulpinii de Trichoderma harzianum Td50b este: Filumul Ascomycota, Clasa Sordariomycetes, Ordinul Hypocreales, Familia Hypocreaceae, genul Trichoderma.
Caracteristicile morfologice ale tulpinii Td50b sunt descrise mai jos.
Dezvoltarea coloniei: 4,5-7,5(-9,0) cm diametru după 5 zile, pe mediul CGA, inițial ± hialină, ulterior albicioasă-verde cu zone de mănunchiuri de conidiofori albastru-verzi; reversul coloniei necolorat;
Conidiofori: ramificați piramidal, cu ramuri mai scurte spre apex;
Fialide: în grupuri de 2-4, destul de subțiri și adesea curbate, de (6)8-14(-20) X 2.4-3,0 pm;
Conidii subgloboase sau elipsoidale, de 3,6-4,5 pm în diametru cu pereții aspri;
Clamidospori prezenți în miceliul culturilor mai vârstnice, intercalări și uneori terminali, cel mai adesea globoși, hialirii, cu pereții netezi.
Ο 1 2 - C Ο 8 9 D - 2 7 -11- 2012
Caracteristicile fiziologice, de utilizare a diferitelor substrate, sunt descrise în cele ce urmează.
Surse de carbon: optime: manita, fructoza, riboza, glucoza (dextroza), galactoza, manoza; dezvoltare fungalâ moderată pe: arabinoză, sorboză, melibioză, maltoză, lactoză, celobioză, celuloză, amidon, inulină; dezvoltare fungală slabă pe: sorbitol, xiloză, zaharoză (sucroză), glicerol;
Surse de azot: optime: DL-leucina, L-cystina, DL-citrulina, DL-nor-leucină, azotatul de amoniu, tartratul de amoniu; dezvoltare fungală moderată pe: L-arginină, L-leucină, glicocol, asparagină, riboflavină, sulfat de amoniu, carbonat de amoniu, fosfat monobazic; dezvoltare fungală slabă pe: triptofan, tirozină, D-serină, lizină, uree, azotați de sodiu, calciu și potasiu;
Caracteristici fizice de creștere și sporulare sunt:
Temperatura: temperatura optimă: 20-25°C; temperatura minimă: 2°C; temperatură maximă: 37°C;
Reacția substratului de cultură: pH optim: 4.0-5.5; dezvoltare slabă a ciupercii la valori de pH de la 9,0 la13.0.
Identificarea realizată pe criterii morfologice a fost confirmată de analiza moleculară a ITS1 (internai transcribed spacers 1) a clusterului pentru gena rRNA (marker universal fungal BarCode, http://www.isth.info). S-au folosit primerii specifici ITS1 SR6R f și LR1 r (conform protocol BarCode http://www.isth.info/methods). Secvențierea nucleotidică a fost realizată cu metoda Dye Terminator Cycle Sequencing, folosind un secvențiator automat de tip ABI PRISM 310 (Perkin Elmer. Waltham, MA, SUA). Compararea secvențelor s-a realizat cu programul TrichoBlast (http://www.isth.info/tools/blast/index.php).
Tulpina Td50b este puternic antagonistă față de ciupercile fitopatogene: Rhizoctonia solanii, Fusarium graminearum, F. culmorum, Pythium ultimum, Botrytis cinerea, Alternaria alternata, Sclerotinia sclerotiorum. Gradul de antagonism al tulpinii de Trichoderma harzianum Td50b față de ciupercile fitopatogene s-a determinat in vitro prin metoda culturilor duble (Coskuntuna și Ozer, 2008, Crop Protection, 27:330-336). Tulpina de Trichoderma harzianum Td50b și cele ale agenților fitopatogeni de testat (Rhizoctonia solanii ATCC 66873, Fusarium graminearum DSM4527, F. culmorum ATCC 36017, Pythium ultimum, DSM 62987, Botrytis cinerea DSM 5144, Alternaria alternata DSM 62010, Sclerotinia sclerotiorum DSM 1946) au fost cultivate separat pe mediu cartof - glucoza - agar (CGA), timp de ^-2012-00890-2 Ί -11- 2012
zile, la 25°C și la întuneric. Din gazonul format după 7 zile au fost prelevate cu o preducea discuri de 0,5 mm care s-au depus la 1 cm de pereții unei plăci Petri cu mediu cu diametrul de 9 cm, în părți opuse, fiecare disc fiind separat de aprox. 6 cm. Interacția dintre colonii a fost determinată după 5 zile de incubare la 25°C și la întuneric, folosind cala propusă de Beli și colab. (Beli et al., 1982, Phytopathology, 72:379-382), cu 5 note: 1- tulpina de Trichoderma crește complet peste fitopatogen, acoperind întreaga suprafață; 2 - tulpina de Trichoderma crește pe mai mult de două treimi din suprafața mediului de cultură; 3 - tulpina de Trichoderma și patogenul cresc fiecare pe aproximativ jumătate din suprafața mediului; 4 - fitopatogenul crește pe mai mult de două treimi din suprafața mediului de cultură; 5 - fitopatogenul crește complet peste Trichoderma, acoperind întreaga suprafață Experimentele s-au realizat în triplicat și s-au repetat de trei ori.
Din analiza rezultatelor experimentale obținute in vitro (tabelul 2), se constată că tulpina de Trichoderma harzianum Td50b prezintă antagonism marcat față de Rhizoctonia solanii ATCC 66873, Fusarium graminearum DSM4527, F. culmorum ATCC 36017, Pythium ultimum, DSM 62987, Botrytis cinerea DSM 5144, Alternaria alternata DSM 62010, Sclerotinia sclerotiorum DSM 1946.
Tab. 2. Antagonismul in vitro al tulpinii de Trichoderma harzianum Td50b față de agenți fitopatogeni.
| Agent fitopatogen | Activitate antagonistă | Comportare |
| Rhizoctonia solanii ATCC 66873 | 1,77 | Puternic antagonist (PA) |
| Fusarium graminearum DSM4527 | 1,88 | Puternic antagonist (PA) |
| F. culmorum ATCC 36017 | 1,88 | Puternic antagonist (PA) |
| Pythium ultimum, DSM 62987 | 1,66 | Puternic antagonist (PA) |
| Botrytis cinerea DSM 5144 | 1,44 | Puternic antagonist (PA) |
| Alternaria alternata DSM 62010 | 2,00 | Puternic antagonist (PA) |
| Sclerotinia sclerotiorum DSM 1946 | 1,88 | Puternic antagonist (PA) |
S-a determinat și activitatea enzimatică din micelii de T. harzianum Td50b, obținute prin creștere pe mediu lichid bazai suplimentat cu 2% CMC. 1 litru de mediu bazai conține: 5 g tartrat de amoniu, 1 g KH2PO4, 0,5 g MgSO4-7H2O, 0,1 g extract
CV 2 Ο 1 2 - Ο Ο 8 9 Ο - 2 Ί -11- 2012 de drojdie, 0,001 g CaCl2.2H2O - 0,1 ml dintr-o soluție stoc 10 mg/ml. la care s-a adăugat 2% carboximetilceluloză de vâscozitate mică (CMC 100 cP. Pe acest mediu, sterilizat prin autoclavare 20 min la 121°C, a fost cultivată tulpina T. harzianum Td50b timp de 7 zile. S-a colectat circa 1 g de miceliu, care s-a omogenizat în tampon TRIS 100 mM (pH 7,5) la 4°C pentru o oră, folosind un Thermomixer (Eppendorf, Harriburg, Germania). S-a recuperat supernatantul după centrifugare la 10,000 x g la 4°C pentru 20 min. Proteina totală din extract a fost determinată după metoda Bradford, folosind albumina serică bovină ca standard. Activitatea enzimatică a fost determinată folosind hârtia de filtru Whatman nr.1 ca substrat. Hârtia de filtru a fost tăiată în fâșii de 1 x 6 cm, din care s-au luat 50 mg care s-au suspendat, într-o eprubetă de 18 mm / 10 ml, într-un ml tampon citrat - sodiu 0,05 M, pH 4,8. Peste amestecul hârtie de filtru - tampon s-au adăugat 0,5 ml de extract enzimatic. S-a vortexat pentru o suspendare eficientă a hârtiei de filtru și s-a incubat timp de 1 h la 45°C. După trecerea perioadei de incubare reacția s-a stopat cu 3 ml reactiv dinitrosalicilic DNS (care conține 283,2 ml apă deionizată, 2,12 g de acid 3,5 dinitrosalicilic, 3,96 g NaOH, 61,2 g de tartrat dublu de sodiu și potasiu, 1,52 ml fenol lichid 89% și 1,66 g bisulfit de sodiu). Eprubetă a fost încălzită pe baie de apă la fierbere timp de 5 min, pentru dezvoltarea reacției de culoare, după care s-a citit densitatea optică la 545 nm. Activitatea enzimatică s-a exprimat în unități FPU (Ghose, 1987, Pure Appl. Chem, 59:257-268), folosind o curbă etalon de glucoză. 1 unitate FPU este 0,37 / activitatea enzimatică care eliberează echivalent a 2 mg glucoză * unități enzimatice (pmoli grupări reducătoare care reacționează cu DNS eliberate per min). Tulpina Td50b a produs în condițiile experimentale date 0,32+0,08 FPU per mg proteină, ceea ce înseamnă că este o tulpină înalt producătoare de celulază (Kovacs etal., 2008, Enz. Microbiol., Technol., 43: 48-55).
S-a determinat și capacitatea tulpinii Td50b de a produce și acumula 6-pentilα-pironă (6-PP). Tulpinile Td50b și ATCC 74058 au fost cultivate pe mediu lichid cartof-glucoză, în condiții staționare, fără agitare, timp de 5 zile, la 25°C. După 5 zile miceliul format a fost omogenizat cu mediul de cultură cu un blender de laborator (Waring®, Laboratory Blender, Fischer Scientific, Waltham, MA, SUA). Cantitatea de biomasă din omogenat a fost determinată gravimetric, după filtrare pe hârtie Whatman nr.1 și uscare la 110°C până la masă constantă. S-au luat 25 ml de omogenat biomasă - mediu de cultură, care au fost extrași cu câte 25 ml de clorură de metilen. Fracțiile inferioare, conținând solventul cu densitate mai mare decât cea < 2 Ο 1 2 - : 3 p 9 ο - 2 1 -11- 20Î2
a apei, s-au reunit, au fost uscate pe sulfat de sodiu anhidru, concentrate la sec și reluate în 0,1 ml clorură de metilen. Determinarea 6-PP a fost făcută gazcromatografic, cu detector spectrometru de masă. S-a folosit un gaz-cromatograf Agilent 700, echipat cu spectrometru de masă quadrupol (Agilent, Santa Clara, CA, SUA). 6-PP a fost separată pe o coloană DB-5 (diametru interior 0,32 mm, lungime 30 m, grosimea filmului 0,25 pm). S-a aplicat 1 μΙ de probă în modul split, cu un raport de spliare de 1:100 până la sfârșitul perioadei de separare. Coloană a fost menținută la 40°C pentru 2 min, urmată de o creștere de 20°C/min până la 120°C, care a fost menținută pentru 2 min, și apoi la 210°C cu 10°C/min. Temperatura detectorului și a injectorului a fost de 250°C. S-a folosit heliul ca gaz purtător, cu un debit de 1,2 ml/min. Pentru cuantificare s-a realizat o curbă etalon folosind 6-PP pură (SigmaAldrich). Cantitatea determinată de 6-PP a fost raportată la volumul de mediu de cultură și la cantitatea de biomasa uscată determinată gravimetric din respectivul mediu de cultură. S-a lucrat în triplicat. Rezultatele obținute sunt prezentate în tabelul 3, ca medii ale celor trei repetiții, comparativ cu date raportate pentru alte tulpini de Trichoderma cultivate pe medii lichide. Aceste rezultate susțin capacitatea tulpinii Td50b de a sintetiza cantități semnificative de 6-PP.
Tab.3. Randamentul de sinteză al 6-pentil-a-pironei de către tulpinile testate, comparativ cu cel raportat pentru alte tulpini cultivate pe medii lichide
| Tulpina | Condiții de creștere | Concentrația finală | Referința |
| T. harzianum Td50b | Mediu cartof-glucoză, 25°C, 5 zile | 350 mg/l 83,41 mg/h | Prezentul exemplu |
| T. atroviride ATCC 74058 | Mediu cartof-glucoză, 25°C, 5 zile | 238 mg/l 65,75 mg/g | Prezentul exemplu |
| T. harzianum IMI 206040 | Mediu extract de malț - glucoză, 29°C, 5 zile | 182 mg/l 60,67 mg/g | Serrano-Carreon et al., 20041 |
| T. harzianum, Indian străin | Mediu cartof-glucoză, 30°C, 5 zile | 455 mg/l 98,91 mg/g | Kalyarii etal., 20002 |
| T. konigii7a, IMI 308475 | Mediu cartof-glucoză, 20°C, 7 zile | 145 | Simon etal., 19883 |
1 - Serrano-Carreon etal., 2004, Biotechnol. Lett., 26:1403-1406 2 - Kalyani et al., 2000, Appl. Microbiol. Biotechnol., 53:610-612 3 - Simon etal., 1988, Soil Biol. Biochem., 20:263-264
Exemplu 2. Tulpina T. harzianum Td50b a fost testată din punct de vedere al antagonismului in situ pe resturi vegetale de trandafir față Botrytis cinerea DSM 5144 ^201 2 - 0 0 0 9 0 -2 7 -11- 2D12 (izolată inițial de pe trandafiri). Au fost prelevate discuri cu diametrul de 1 cm de frunze verzi și de petale de trandafir (Roșa hybrida cv. Sonia), care au fost inoculate cu 0,3 ml suspensie de spori 106 conidii/ml de B. cinerea DSM 5144, aplicați prin stropire cu un atomizor de sticlă cu dop metalic și pară de cauciuc (model 15-RD, DeVilbiss Healthcare, Somerset, PA, SUA). Discurile inoculate au fost plasate în rulouri de șervete de hârtie umezite, iar rulourile de hârtie au fost plasate înăuntrul unor pungi transparente de polietilenă. Pungile au fost închise și menținute la temperatura camerei, timp de 3 zile în cazul petalelor și, respectiv, de 7 zile în cazul frunzelor, pentru a se dezvolta simptomele caracteristice infecției cu B. cinerea.
Discurile de petale și de frunze cu sirriptome de putregai cenușiu au fost apoi lăsate să se usuce timp de 10 zile, pentru a simula resturile uscate de trandafiri infectate cu Botrytis cinerea. Discurile infectate și uscate au fost apoi imersate timp de 20 secunde în suspensii de spori de T. harzianum Td50b în tampon fosfat salin steril, 104 și 105 spori/ml, și, respectiv, în tampon fosfat salin steril în cazul unei variante martor, iar apoi au fost distribuite câte 12 în plăci Petri cu diametrul de 15 cm. Experimentul a inclus următoarele variante: Vi - martor inoculat cu B. cinerea și netratat ulterior
V2 - martor inoculat cu B. cinerea și tratat ulterior cu tampon fosfat salin steril
V3 - inoculat cu B. cinerea și tratat cu T. harzianum Td50b 104 spori/ml
V4 - inoculat cu B. cinerea și tratat cu T. harzianum Td50b 104 spori/ml
Fiecare variantă s-a lucrat în 4 repetiții, fiecare repetiție fiind reprezentată de 12 discuri de petale, respectiv frunze, dispuse în plăci Petri de 15 cm. Petriurile cu diferite repetiții au fost amplasate randomizat în cadrul procedurilor experimentale.
Plăcile Petri au fost menținute timp de 24 de ore la întuneric la 25°C în cameră umedă (Model HCP108, Memmert, Scwabach, Germania) și apoi au fost trecute în cameră climatică (Model SGC 120 LED, Weiss Gallenkamp, Lougborough, Marea Britanie) unde au fost menținute la 60 μιτιοΙ fotoni / m2/s, cu o fotoperioadă de 12 ore, la 20°C și 70% umiditate, timp de 3 zile pentru petale și, respectiv, de 7 zile pentru frunze.
După incubare s-a estimat suprafața pe care s-au format conidiofori de B. cinerea, prin disecție și examinare vizuală la microscop binocular, folosind următoarea scară de notare: 0 - sub 1%; 1 - între 1 și 25%; 2 - între 25 și 50%; 3 între 50 și 75%; 4 între 75 și 99%; 5 peste 99%. Intensitatea medie a sporulării a fost calculată ca medie ponderată pe fiecare repetiție, conform formulei (2) de mai jos.
2012-00890-2 7 -11- 2012
ΣίΙιηίΡί
Σ?=1Ρί (2) unde: η, sunt notele conform scării de mai sus, iar p, sunt ponderile procentuale din total note ale fiecărei note.
Datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft).
Rezultatele experimentului sunt prezentate în tabelul 4. Aceste rezultate dovedesc o capacitate semnificativă a tulpinii T. harzianum Td50b de a inhiba sporularea ciupercii microscopice fitopatogene B. cinerea pe resturi vegetale de trandafir.
Tab. 4. Influența tratamentului cu suspensie de spori T. harzianum Td50b asupra sporulării fitopatogenului B. cinerea pe resturi vegetale de trandafir*.
| Variantă | Intensitatea medie a sporulării pe frunze | Intensitatea medie a sporulării pe petale |
| Vî - martor inoculat cu B. cinerea și netratat ulterior | 3,25a | 4,12a |
| V2 - martor inoculat cu B. cinerea și tratat ulterior cu tampon fosfat salin steril | 3,62a | 4,37a |
| V3 - inoculat cu B. cinerea și tratat cu T. harzianum Td50b 104 spori/ml | 0,88b | 1,37b |
| V4 - inoculat cu B. cinerea și tratat cu T. harzianum Td50b 104 spori/ml | 0,75a | 1,12a |
| DL5% | 0,88 | 0,75 |
* Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P>0,05
Acest antagonism pronunțat in situ are semnificație practică, prezența antagonistului Td50b reducând formarea inoculului primar de B. cinerea din resturile vegetale infectate de trandafir și, implicit, ciclul de dezvoltare al putregaiului cenușiu al trandafirului.
Exemplu 3. Tulpina T. harzianum Td50b a fost testată din punct de vedere al capacității antagoniste in vivo, pentru protecția plantelor ornamentale împotriva agenților fitopatogeni de sol. Semințe de mușcată hibridă (Pelargonium x hortorum) „Moulin Rouge” au fost însămânțate pe 18 aprilie, pentru a obține plantele stoc, din care s-au obținut prin butășire, la începutul lunii septembrie, plantele pentru experimente. Butașii au fost plasați în cameră umedă în vermiculit, pentru a stimula
^2012-00890-2 1 2012 dezvoltarea rădăcinilor. După trei săptămâni butași uniformi ca dezvoltare a rădăcinilor și tulpinii au fost plantați în ghivece de plastic de 15 cm, conținând un substrat de creștere îmbogățit cu nutrienți pentru primele săptămâni de creștere (Canna Terra Professional Plus, Canna Internațional BV, Oosterhout, Olanda). Ghivecele au fost menținute în condiții de seră, la 22±2°C în timpul zilei și 17±2°C în timpul nopții, cu o fotoperioadă de 12 ore, suplimentată cu lumină cu intensitatea de 160 mE/m2/s, provenită din lămpi cu halogen, atunci când intensitatea luminoasă scădea sub 500 mE/m2/s. Substratul conținea rezerve de nutrienți inițiale, astfel încât plantele au fost fertilizate numai după trei săptămâni de creștere, prin aplicarea a 100 ml de soluție nutritivă 1 g/l de îngrășământ 20-8-20 (N-P2O5-K2O, Eurofertil, TimacAgro Romania).
Experimentul de testare in vitro a inclus următoarele variante:
Vi - martor neinoculat (cu fitopatogen sau Td50b)
V2 - inoculat cu T. harzianum Td50b, 104 spori/ml, la 4 săptămâni de la transplantare
V3 - inoculat cu P. ultimum, DSM 62987, 106 propagule/ml, 8 săptămâni după transplantare;
V4 - inoculat cu T. harzianum Td50b, 104 spori/ml, la 4 săptămâni de la transplantare și cu Pythium ultimum, DSM 62987, 106 propagule/ml, 8 săptămâni după transplantare.
Fiecare variantă a inclus 12 ghivece, care au fost aranjate în blocuri de câte trei per repetiție, într-o schemă randomizată de tip pătrat latin, 4 variante în 4 repetiții.
La 4 săptămâni de la transplantarea butașilor în sol au fost inoculate variantele V2 și V4, cu câte 50 ml de tampon fosfat steril, 0,1 m, pH 7,2, conținând 104 ufc/ml spori de T. harzianum Td50b. Tulpina antagonistă a fost cultivată pe plăci Roux conținând mediu cartof - glucoză - agar timp de 7 zile. Sporii formați au fost reluați în tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2. Normalizarea numărului de propagule a fost făcută prin numărare la cameră de numărare. Celelalte variante, V-ι și V3, au fost tratate cu câte 50 ml tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2.
La 8 săptămâni de la transplantarea butașilor au fost inoculate variantele V3 și V4 cu Pythium ultimum. întrucât la temperatura camerei P. ultimum nu produce zoospori (van der Plaats-Niterink, 1981, Monograph of the genus Pythium. Institute of the Royal Netherlands Academy of Sciences and Letters, Baarn, Olanda, pp. 164167), suspensia de propagule de P. ultimum a fost realizată din hife și oospori, fiind ^'2 Ο 12 - Ο Ο 89 Ο - 2 7 -11- 2(jî2
preparată prin cultivare pe mediu lichid (erlenmeyere de 250 ml) care conțineau 100 ml de mediu lichid cartof - glucoză, incubat pe un agitator rotativ, la 150 rotații pe min, timp de 7 zile la 24°C. Numărul de propagule a fost determinat prin numărare la cameră de numărare, aducându-se la 106 ufc/ml în mediu lichid cartof - glucoză.
La 4 săptămâni de la infecția cu P. ultimum, respectiv 12 săptămâni de la butășire, a fost cântărită masa proaspătă și cea uscată a rădăcinilor și a părților aeriene (tulpini și frunze) ale plantelor de mușcată. Datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft).
Rezultatele sunt prezentate în tabelul 5 și demonstrează atât existența unui antagonism al tulpinii Trichoderma harzianum Td50b față de P. ultimun, cât și capacitatea acestei tulpini de a determina a stimulare a creșterii plantelor de mușcată, în condițiile experimentale date.
Tab. 5. Efectul tratamentelor cu T. harzianum Td50b asupra dezvoltării bolii produse de P. ultimum la mușcate și asupra creșterii plantelor de mușcată.
| Variantă experimentală | Masă rădăcină, g | Masă tulpină, g | ||
| proaspătă | uscată | proaspătă | uscată | |
| Vi - martor neinoculat | 13,04b | 1,74b | 107,16c | 14,83bc |
| V2 - T. harzianum Td50b, 104 spori/ml | 16,24a | 2,85a | 127,42a | 17,12a |
| V3 - P. ultimum, DSM 62987, 106 propagule/ml | 10,62c | 1,25c | 105,74c | 14,24c |
| V4- T. harzianum Td50b, 104 spori/ml P. ultimum, DSM 629 87, 106 propagule/ml | 14,08ab | 2,34a | 116,41b | 16,35ab |
| DL 5% | 1,72 | 0,35 | 9,24 | 1,07 |
Un alt experiment a avut ca scop determinarea capacității tulpinii Td50b de a proteja răsadurile de plante ornamentale de căderea plantulelor produsă de Rhizoctonia solanii.
Inoculul de Rhizoctonia solanii ATCC 66873, grup de anastomoză AG4, a fost cultivat pe tărâțe de grâu timp de 10 zile. Tărâțele de grâu au fost sitate pentru a obține fracția de 0,25 ... 0, 5 mm, spălate cu apă distilată, repartizate îri plăci Roux și sterilizate, repetat de două ori, prin autoclavare la 121°C, timp de 30 min. Tărâțele au fost distribuite câte 100 g în plăci Roux de 450 ml, umectate cu câte 50 ml tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2 și inoculate cu 1 ml suspensie de 106 propagule/ml obținute din culturi pe mediu agarizat.
^‘2012-00890-2 7 -11- 2012
Substratul de creștere pentru plantele ornamentale a fost reprezentat de substratul Potground H70 (Klasmann - Delimann, Geeste, Germania), cu pH 6,0, care conține 25% turbă blondă 0-7 mm, 75% turbă neagră și 1,5 g/l îngrășământ complex NPK, destinat producerii de răsaduri de legume și flori.
Creșterea răsadurilor de flori ornamentale s-a realizat în tăvițe alveolare cu 32 de alveole (model EPE 32, Marcoser, Matca, Galați, România), care aveau un volum de 102 ml pentru fiecare alveolă.
Plantele ornamentale folosite pentru experiment au fost panseluțele {Viola x wittrockiana cv. Berna), petuniile {Petunia x hybrida cv. Colour parade F1), creasta cocoșului {Celosia cristata, cv. Orange).
Substratul de creștere a fost amestecat cu tărâțe infectate, în raport de 0,25% v/v; 7 ml din acest amestec inoculat a fost distribuit în alveolele fiecărei tăvițe, iar peste acest substrat infectat cu Rhizoctonia solanii au fost depuși câte 68 ml de substrat de creștere sterilizat prin iradiere gamma. In cazul variantei martor neinoculat substratul de creștere a fost amestecat cu tărâțe de grâu sterilizate prin autoclavare și umectate cu tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2.
Tratamentele împotriva căderii plantulelor s-au efectuat cu o suspensie de T. harzianum Td50b, și cu un produs standard chimic, propamocarb condiționat (Previcur 607 SL, Bayer Crop Science, 607 g ingredient activ per litru). Tulpina Td50b a fost aplicată ca suspensie 104 spori în tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2, câte 3,25 ml pentru fiecare alveolă (corespunzând unei doze de 103 spori /g de substrat). Propamocarbul condiționat a fost diluat 1% în apă deionizată, iar din această soluție s-au aplicat câte 3 ml per alveolă cu diametru de 6,2 cm, corespunzând unei doze recomandate de 10 ml produs condiționat per metru pătrat de sol pentru răsaduri. Martorul neinoculat și varianta netratată cu produse împotriva căderii plantulelor au fost tratate cu câte 3,25 ml tampon fosfat steril, 0,1 M, pH 7,2.
In fiecare alveolă au fost introduse semințe din plantele ornamentale deja precizate. Plantulele au fost menținute în condiții de seră, la 22±2°C în timpul zilei și 17±2°C în timpul nopții, cu o fotoperioadă de 12 ore, suplimentată cu lumină cu intensitatea de 160 mE/m2/s, provenită din lămpi cu halogen, atunci când intensitatea luminoasă scădea sub 500 mE/m2/s. Substratul conținea rezerve de nutrienți inițiale, astfel încât plantele au fost fertilizate numai după două săptămâni de creștere, prin aplicarea a 100 ml de soluție nutritivă 1 g/l de îngrășământ 20-8-20 (N-P2O5-K2O, Eurofertil, TimacAgro Romania).
^‘2012-00890-2 7 -11- 2012
Fiecare variantă, Vi - martor neinfestat, V2 - variantă infestată cu R. solanii și netratată cu produse împotriva căderii plantulelor, V3 - tratament cu produs chimic; V4 - tratament cu T. harzianum Td50b, a fost realizată în 4 repetiții, fiecare repetiție fiind reprezentată de o tavă cu alveole. Tăvile cu alveole au fost aranjate în bloc randomizat în seră, plantele gazdă fiind randomizate între blocuri, iar diferitele tratament în cadrul sub-blocurilor plantă gazdă.
La 3 săptămâni de la semănarea plantelor, a fost determinată rata de supraviețuire a răsadurilor de plante ornamentatele. Datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft).
Rezultatele sunt prezentate în tabelul 6 și arată o eficacitate ridicată a tulpinii Td50b în protecția față de căderea plantulelor determinată de R. solanii AG-4, similară cu cea a produsului chimic.
Tab. 6. Influența tratamentelor cu T. harzianum Td50 asupra supraviețuirii plantulelor de plante ornamentale crescute pe substrate inoculate cu R. solanii Ag-4
| Varianta experimentală | Număr mediu plante per tavă cu 32 alveole: | ||
| Viola x wittrockiana | Petunia x hybrida | Celosia cristata | |
| Martor neinoculat cu R. solanii AG-4 și netratat | 24,25 | 25,75 | 25,5 |
| Martor inoculat cu R. solanii AG-4 și netratat | 4,0 | 6,5 | 9,25 |
| Propamocarb, echiv. 10 ml p/c per m2 | 19,5 | 20,25 | 22,5 |
| T. harzianum Td50b, 103 spori/g substrat | 18,5 | 20,5 | 20,25 |
| DL5% | 8,25 | 7,5 | 7,5 |
Exemplu 4. Tulpina T. harzianum Td50b a fost multiplicată și inclusă într-o compoziție care să-i faciliteze colonizarea substratului de compostare. Multiplicarea s-a realizat pe un mediu industrial pe bază de zer. In zerul dulce obținut de la fabricarea cașului s-a determinat substanța uscată refractometric, s-a diluat până la 3% substanță uscată din zer cu apă deionizată și apoi s-au adăugat 1,5% borhot de porumb de la fabricarea etanolului (masă / volum); 0,5% KH2PO4, (masă / volum); 0,5% (NH4)2SO4 (masă / volum). S-au distribuit câte 100 ml în flacoane erlenmeyer de 500 ml închise cu dop de vată, s-au sterilizat la 121°C timp de 25 min, după care s-au inoculat aseptic cu 5 ml de suspensie conținând 107 spori/ml și s-a incubat pentru 5 zile la 25°C pe masă rotativă, 150 rpm. Câte 10 ml de suspensie au fost 17 ^-2012-00890-2 7 -11- 2ΠΪ2 utilizați pentru a inocula pungi de polipropilenă care conțineau câte 100 grame rumeguș de brad umectat cu 50 ml de apă deionizată. Pungile de polipropilenă cu rumeguș umectat au fost în prealabil sterilizate la 121 °C, timp de 25 min.
După inoculare s-a incubat timp de 7 zile la cameră climatică (Model SGC 120 LED, Weiss Gallenkamp, Lougborough, Marea Britanie) unde au fost menținute la 60 pmol fotoni / m2/ s, cu o fotoperioadă de 12 ore, la 25°C și 70% umiditate. După 7 zile pungile au fost iluminate timp de 15 min cu lumină albastră 440-460 nm, 60 μηποΙ fotoni / m2 / s, iar apoi pungile au fost incubate la întuneric și la 25°C timp de alte trei zile.
Biomasa de T. harzianum amestecată cu rumeguș parțial degradat s-a malaxat în raport de 1:1 cu o suspensie conținând 10% făină, 10% amestec de esteri etilici ai acizilor grași, lecitină, săpun de potasiu, glicerina, lipide din ulei de rapiță și 4% alcool polivinilic (26-88, pulbere EMPROVE®, Merck, Darmstadt, Germania). Pasta rezultată a fost extrudată pe o mașină de făcut paste, (Model TR95A, Helco, Craiova, România), iar tăiței rezultați au fost granulați pe un echipament de sferonizare (model Spheronis R-250m Grabler, Ettlingen, Germania). Granulele rezultate au fost uscate într-un uscătorîn pat fluid (Model TC20, Retsch, Germania), la o temperatură maximă de 37°C.
Amestecul de esteri etilici ai acizilor grași, lecitină, săpun de potasiu, glicerină, lipide nesaponificabile din ulei de rapiță s-a obținut conform procedeului descris în continuare. 1000 g de ulei degumat de rapiță, cu caracteristicile prezentate în tabelul 7 a fost adus într-o autoclavă de 2 litri din oțel inox, cu sistem de agitare și de încălzire, sub atmosferă protectoare de azot.
Tab. 7. Caracteristicile uleiului degumat de rapiță folosit
| Apă și compuși volatili | % m/m | 0,4 |
| Substanțe nesaponificabile | % m/m | 1,4 |
| Acizi grași liberi | % m/m | 1,9 |
| Index de saponificare | mg KOH/g | 169,5 |
| Compoziția medie în acizi grași (% w/w): C16: 2.4; C18: 1.2 ; C18-1: 16.1; C18-2: 24.5; C18-3: 7.3; C20-1: 7.3; C22-1: 42.4 |
S-au dizolvat 25 g de hidroxid de potasiu de puritate 98% în 210 g de etanol cu 0,3% apă, iar soluția rezultată a fost adăugată în autoclav peste uleiul degumat de rapiță. Se pornește agitarea și încălzirea la 40°C. După un timpul de reacție de 8 ore, c\- 2 Ο 1 2 - Ο Ο 8 9 ο - 2 1 -11- 2012 masa de reacție s-a răcit la temperatura camerei. S-au colectat 1225 g de masă transparentă de reacție (R1). 500 g de produs P1 s-a tratat cu acid oleic tehnic, obținându-se un produs cu următoarea compoziție: (% m/m): esteri etilici de acizi grași (FAEE) 74,5; trigliceride 5,9; glicerol 7,1; săpun de potasiu 11,4 și apă 1,1. 140 g din produsul de reacție (P1) a tratat prin agitare viguroasă cu 60 g emulsifiant lecitină de soia lichidă obținându-se un amestec cu compoziția cu următoarea compoziție: (% m/m): esteri etilici de acizi grași (FAEE) 48,7; grăsimi nereacționate din ulei de rapiță 4; glicerol 4,5; săpun de potasiu 7,5, lecitină 34,6 și apă 0,7. Acest amestec a fost folosit pentru obținerea compoziție cu eliberare controlată conținând T. harzianum Td50b.
Compoziția cu eliberare controlată pe baza tulpinii T. harzianum Td50b rezultată este alcătuită din 60 părți rumeguș de lemn parțial hidrolizat, 10 părți făină, 4,8 părți esteri etilici ai acizilor grași, 4 părți alcool polivinilic, 3,5 părți lecitină, 0,75 părți săpun de potasiu, 0,45 părți glicerol, 0,4 părți grăsimi din ulei de rapiță, restul până la 100 părți apă, și min. 106 ufc/g T. harzianumTd50b.
Numărul de spori de T. harzianum Td50 din compoziția de mai sus a fost determinat prin extragere în tampon fosfat salin, diluții seriale și cultivare pe mediul selectiv propus de William etal., 2003, prezentat în detaliu în exemplul 1.
Compoziția a fost testată din punct de vedere al acțiunii de accelerare a vitezei de degradare a materialului vegetal. Materialul vegetal (scoarță de brad) a fost măcinat și trecut pe sita de 0,250 mm. Din pulberea măcinată s-au luat câte 10 g care s-au adus flacon erlenmayer de 50 ml împreună cu 20 ml apă distilată . S-a omogenizat prin agitare și s-a trat apoi cu 1 ml de suspensie de T. harzianum Td50b conținând 106 spori/ml, sau, respectiv, cu 1 gram de compoziție conform exemplu. Toate variantele s-au lucrat în 5 repetiții, iar flacoanele erlerimeyer au fost menținut la temperatura camerei timp de 7 zile.
După incubare amestecul a fost trecut într-un vas de respirație Strathox (Strathkelvin Instrumente Limited, Glasgow, Marea Britanie). S-au efectuat în paralele determinările de respirație / consum de oxigen timp de 12 ore.
După efectuarea determinărilor de respirație s-au prelevat câte 1 g probe de material, care au fost extrase cu 1 ml clorură de metilen timp de 20 min. 0,45 ml din extract au fost trecuți într-un flacon de filtrare într-o singură etapă, cu membrană filtrantă de 0,2 pm din nailon (Thomson Instrument Company, Oceanside, CA, SUA), ^2012-00890-2 7 2012 iar din filtrat s-a determinat 6-PP gaz-cromatografic, conform metodei prezentate deja.
Probele au fost analizate comparativ cu un martor fără inocul de Trichoderma, care a fost numai tratat cu apă sterilă și incubat la temperatura camerei, în aceleași condiții experimentale. Datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft).
Rezultatele sunt prezentate în tab. 8. Aceste rezultate demonstrează o capacitate ridicată de degradare a materialului vegetal de către tulpina Td50, care este semnificativ influențată de includerea acestei tulpini în compoziția realizată conform exemplu.
Tab. 8. Degradarea scoarței de brad de către tulpina T. harzianum Td50b și acumularea de 6-pentil-a-pironă în mediu.
| Varianta | Respirație (mg/l O2 consumați, medie orară) | 6-PP (pg/g material) |
| T. harzianum Td50b suspensie 106 spori/ml | 1,06±0,32b | 152±23b |
| Compoziție cf. ex 4 cu T. harzianum Td50b 106 spori/g | 1,68±0,22a | 273±32a |
| Martor netratat cu Trichoderma | 0,52±0,14c | ND |
Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P>0,05. ND - nedetectabil
Exemplu 5. Compoziția realizată conform exemplului 4 de mai sus a fost utilizată pentru obținerea de compost supresiv din coajă de brad, iar acest compost a fost testat din punct de vedere al protejării plantelor ornamentale față de unele boli produse de agenți fitopatogeni. 10 kg de coajă de brad măcinată grosier au fost trecute în lighene de plastic de 30 litri și au fost tratate cu 100 ml T. harzianum Td50b suspensie 106 spori/rril sau cu compoziție cf. ex 4 cu T. harzianum Td50b 106 spori/g. S-a umectat cu 10 litri de soluție 2% (m/v) îngrășământ complex NP 20-20 în apă de robinet, conținând 4 g N și 4 g P2O5, și s-a omogenizat. S-a lucrat față de un martor tratat cu 100 ml apă sterilă, fiecare variantă în 4 repetiții. S-a menținut la temperatura camerei timp de 90 zile, în zilele 22, 44 și 66 efectuându-se analize ale conținutului de celuloză, lignină și 6-PP. Celuloza a fost determinată după delipidizarea susbtratului prin extracție la Soxhlet cu benzen, tratare repetată cu o soluție alcalină de carbonat de sodiu pentru îndepărtarea hemicelulozelor, hidroliză cu acid sulfuric, neutralizare cu hidroxid de sodiu și determinarea glucidelor reducătoare cu reactiv
Λ-2 Ο 1 2 - Ο Ο 8 9 Ο - 2 Ί -ΙΕ 2012
DNS. Lignina a fost determinată gravimetric din probe, după extracții repetate la reflux cu soluții de acid sulfuric a materialului delipidizat. 6-PP a fost determinată gaz-cromatografic, după extragere în clorură de metilen, așa cum a fost deja prezentat.
Toate experimentele au fost realizate în 4 repetiții, iar datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft). Rezultatele sunt prezentate în tab. 9 și demonstrează faptul că tratamentul cu tulpina Td50 accelerează descompunerea materialului vegetal, iar compoziția conform brevetului facilitează acest proces de accelerare a degradării materialului vegetal. Nivelul de 6-PP se stabilizează la valori apropiate în cazul ambelor tratamente la care s-a aplicat tulpina de T. harzianumTd50b, datorită volatilității compusului odorant.
Tab. 9. Accelerarea degradării scoarței de brad din substratul de compostare de către tulpina T. harzianum Td50b și acumularea de 6-pentil-a-pironă în material.
| Varianta | Conținut celuloză (%) | Conținut lignină (%) | Conținut 6-PP (pg/g material) | ||||||
| 22z | 44z | 66z | 22z | 44z | 66z | 22z | 44z | 66z | |
| T. harzianum Td50b suspensie 106 spori/ml | 37,52 | 30,23 | 25,47 | 27,15 | 24,63 | 23,27 | 143 | 154 | 128 |
| Compoziție cf. ex 4 cu T. harzianum Td50b 106 spori/g | 35,61 | 28,74 | 23,12 | 26,03 | 24,02 | 22,83 | 181 | 173 | 148 |
| Martor netratat cu Trichoderma | 39,62 | 33,51 | 28,72 | 28,22 | 26,17 | 24,43 | ND | 12 | ND |
Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P>0,05. ND - nedetectabil
Compostul rezultat a fost folosit pentru tratamentul plantelor de trandafir împotriva atacului de Botrytis. Plantele de trandafir (Roșa hybrida cv. Sonia), s-au obținut prin butășire, în ghivece cu substrat Potground H70 (Klasmann - Delimann, Geeste, Germania), cu pH 6,0, care conține 25% turbă blondă 0-7 mm, 75% turbă neagră și 1,5 g/l îngrășământ complex NPK. Plantele s-au înrădăcinat timp de 14 zile în condiții de umiditate crescută, obținute prin acoperirea ghivecelor cu folie de plastic. La 5 săptămâni de la plantare s-a procedat la tăierea plantelor înrădăcinate cu o foarfecă de grădină, la o înălțime 7 cm.
Plantele au fost menținute în condiții de seră, la 22±2°C în timpul zilei și 17±2°C în timpul nopții, cu o fotoperioadă de 12 ore, suplimentată cu lumină cu intensitatea de 160 mcE/m2/s, provenită din lămpi cu halogen, atunci când intensitatea luminoasă scădea sub 500 mcE/m2/s. Substratul conținea rezerve de a- 2 O 1 2 - O O 8 9 O - 2 7 -11- 2012 nutrienți inițiale, astfel încât plantele au fost fertilizate numai după o săptămână de la finalizarea înrădăcinării, prin aplicarea a 50 ml de soluție nutritivă 1 g/l de îngrășământ 20-8-20 (N-P2O5-K2O, Eurofertil, TimacAgro Romania) pe fiecare ghiveci.
După înrădăcinare plantele au fost repartizate în blocuri experimentale conform variantelor experimentale de mai jos:
Vi - martor netratat, neinoculat;
V2 - martor netratat, inoculat cu B. cinerea 106 spori/ml;
V3 - tratat cu chlorotalonil (standard chimic), inoculat cu B. cinerea 106 spori/ml;
V4 - compost coajă de brad, netratat cu Trichoderma, aplicat ca muici după înrădăcinare; inoculat cu B. cinerea 106 spori/ml;
V5 - compost coajă de brad, format după tratare cu T. harzianum Td50b suspensie 106 spori/ml, aplicat ca muici după înrădăcinare, inoculat cu B. cinerea 106 spori/ml;
V6 - compost coajă de brad, format după tratare cu compoziție cf. ex 4 cu T. harzianum Td50b 106 spori/g, aplicat ca muici după înrădăcinare, inoculat cu B. cinerea 106 spori/ml.
Compostul obținut din coajă de brad, cu sau fără aplicarea tulpinii Td50b, a fost aplicat ca muici la suprafața ghivecelor, în strat de circa 2,5 cm, imediat după terminarea înrădăcinării butașilor. Tratamentul cu produs chimic s-a realizat prin stropire la acoperire, la tăiere și după 7 zile, cu o soluție obținută prin diluarea a 2,5 ml produs condiționat (Bravo 500 SC, Syngenta Crop Protection, Basel, Elveția) în 1 litru de apă. Inocularea cu spori de B. cinerea s-a realizat în a 2-a zi de la tăiere, după creșterea umidității în seră la 80%. Botrytis cinerea DSM 5144 a fost cultivată pe mediu cartof-glucoză-agar în plăci Petri 0 9 cm. Suspensia de spori a fost realizată prin inundarea gazonului de Botrytis, cultivat 10 zile la 25°C, 70% umiditate și la 60 pmol fotoni / m2/ s, cu o fotoperioadă de 12 ore, cu 5 ml soluție de tampon fosfat steril, conținând Tween 20 0,04%, și eliberarea sporilor din coloniile cu o ansă Drigalsky. Suspensia de spori a fost normalizată la 106 spori/ml prin numărare la cameră de numărare. Pe fiecare planta au fost aplicați prin stropire câte 2 ml suspensie spori, folosindu-se un atomizor de sticlă cu dop metalic și pară de cauciuc (model 15-RD, DeVilbiss Healthcare).
6V 2 0 1 2 - Ο Ο 8 9 Ο - 2 1 -11~ 2012
La 2 săptămâni de la aplicarea inoculării cu B. cinerea s-a determinat frecvența atacului pe frunze, numărul total de frunze per planta și procentul de frunze ofilite. Toate experimentele au fost realizate în 4 repetiții, iar datele au fost prelucrate statistic prin analiza varianței (Statistica 10, StatSoft).
In tabelul 10 sunt prezentate rezultatele obținute în cadrul acestui experiment. Aceste rezultate demonstrează faptul că în compostul format sub acțiunea ciupercii antagoniste T. harzianum Td50b se formează compuși, inclusiv din categoria odoranților volatili, care reduc atacul de B. cinerea pe părțile aeriene ale plantelor de trandafiri, cel mai probabil prin activarea răspunsului de apărare din plante. Compostul din coajă de brad, format sub acțiunea ciupercii antagoniste T. harzianum Td50b, eliberează și nutrienți, și alți compuși biologic actiiv, care susțin și stimulează creșterea plantelor de trandafir.
Tab. 10. Efectul diferitelor tratamente, inclusiv prin aplicarea ca muici a compostului de coajă de brad obținut cu T. harzianum Td50b, asupra frecvenței atacului de B. cinerea, numărului total de frunze per plantă și a procentului de frunze ofilite.
| Variantă experimentală | Frecvența atacului (%) | Număr total frunze per plantă | Procent frunze ofilite (%) |
| martor netratat, neinoculat | 14,8±6,7ab | 11,5±1,5b | 21,53±1,52 |
| B. cinerea 106 spori/ml | 74,3±9,7c | 8,5±1,5c | 69,04±2,38 |
| Chlorotalonil (0,25% p.c.) B. cinerea 106 spori/ml | 12,1 ±4,3a | 13±2ab | 19,09±0,91 |
| Muici compost coajă de brad, B. cinerea 106 spori/ml | 59,6±11,3c | '10,5±1,5 | 49,94±1,52 |
| Muici compost coajă de brad, format după tratare cu T. harzianum Td50b suspensie 106 spori/ml, B. cinerea 106 spori/ml | 23,4±5,7b | 12,5±2,5 | 28,33±1,66 |
| Muici compost coajă de brad, format după tratare cu compoziție cf. ex 4, B. cinerea 106 spori/ml | 16,5±7,8ab | 14,5±1,5 | 17,06±1,68 |
Valorile urmate de aceeași literă nu diferă semnificativ pentru P>0,05
Claims (3)
1. Tulpina de Trichoderma harzianum Td50b NCAIM (P) F 001412 caracterizată prin aceea că este antagonistă in vitro față de Rhizoctonia solanii, Fusarium graminearum, F. culmorum, Pythium ultimum, Botrytis cinerea, Alternaria alternata, Sclerotinia sclerotiorum; protejează culturile ornamentale de bolile produse de ciupercile fitopatogene din sol implicate în complexul de răsărire (Rhizoctonia, Pythium, Fusarium) și producătoare de putregaiuri (Botrytis cinerea), produce celulaze cu rol în degradarea materialului vegetal din substratele de compostat, sintetizează 6-pentil-pironă, compus volatili care este, în același timp, antifungic și odorant, și accelerează formarea de compost supresiv din coajă de brad.a fost
2. Tulpina de Trichoderma harzianum Td50b NCAIM (P) F 001412 conform revendicării 1 caracterizată prin aceea că a fost selectată din izolate naturale prin utilizarea procedeului de selecție rapid constituit din următoarele etape: distribuirea aseptică a unui mediu agarizat, care conține ca principală sursă de carbon un derivat de celuloză, într-o placă cu 24 godeuri; inocularea mediului agarizat cu 5 izolate de testat, distribuite randomizat, și menținerea unor godeuri martor neinoculate; acoperirea cu o folie de plastic sterilă care permite schimbul de gaze; incubarea timp de 3 zile la 25°C; depunerea plăcii cu 24 godeuri în care s-au dezvoltat izolatele de testat peste o altă placă cu 24 godeuri cu mediu agarizat, în care a fost crescută timp de 2 zile o ciupercă microscopică, agent fitopatogen, față de care se testează antagonismul izolatelor; incubarea timp de 5 zile la 25°C a plăcilor reunite, cu placa cu mediu cu izolate de Trichoderma deasupra plăcii cu ciuperca fitopatogenă de testat, separate între ele de folia de plastic care permite schimbul de gaze; determinarea creșterii ciuperci fitopatogene test prin analiza imaginii plăcii de microtitrare preluate de un sistem de fotodocumentare și calcularea procentului de inhibiție cu ajutorul formulei: (A,- An)/A1 x 100, unde A1 este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta martor netratat, iar An este suprafața acoperită de agentul fitopatogen în varianta în care a fost confruntat cu compușii volatili produși de unul din izolatele de testat; analiza statistică a rezultatelor prin analiza varianței și identificarea eventualelor izolate active datorită producerii de compuși volatili; inundarea mediului agarizat pe care au crescut izolatele de Trichoderma cu o soluție de Roșu de Congo 0,1% și, după 5 min, înlăturarea soluției de roșu de Congo și ^“2012-00890-2 7 -W- 2012 spălarea cu o soluție 1 M NaCI pentru 20 min; evidențierea zonelor clare de celuloliză în jurul coloniilor de Trichoderma producătoare de celulaze.
3. Compoziție cu eliberare controlată pe baza tulpinii T. harzianum Td50b caracterizată prin aceea că este alcătuită din 76 părți rumeguș de lemn parțial hidrolizat, 10 părți făină, 5,3 părți esteri etilici ai acizilor grași, 4 părți alcool polivinilic, 3,8 părți lecitină, 0,5 părți săpun de potasiu, 0,4 părți glicerol, și min. 106 ufc/g T. harzianum Td50b.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200890A RO128889B1 (ro) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină |
| EP12464023.6A EP2735607A1 (en) | 2012-11-27 | 2012-11-29 | Strain of Trichoderma harzianum and controlled release composition which contains said strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201200890A RO128889B1 (ro) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO128889A0 true RO128889A0 (ro) | 2013-10-30 |
| RO128889B1 RO128889B1 (ro) | 2017-06-30 |
Family
ID=47750385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201200890A RO128889B1 (ro) | 2012-11-27 | 2012-11-27 | Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2735607A1 (ro) |
| RO (1) | RO128889B1 (ro) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201509055D0 (en) * | 2015-05-27 | 2015-07-08 | Alpha Biopesticides Ltd | New product |
| RO133904B1 (ro) * | 2018-08-28 | 2023-11-29 | Institutul Naţional De Cercetare Dezvoltare Pentru Chimie Şi Petrochimie - Icechim Bucureşti | Procedeu de obţinere a suspensiilor stabile de nanoparticule de seleniu şi silice |
| CN110881480B (zh) * | 2018-09-06 | 2021-12-24 | 浙江泛亚生物医药股份有限公司 | 一种防治小麦赤霉病的哈茨木霉菌生物制剂 |
| EP4161275A1 (en) * | 2020-06-08 | 2023-04-12 | Danstar Ferment Ag | Novel formulations for increasing the germination rate of fungal spores |
| CN112266879B (zh) * | 2020-09-23 | 2022-11-22 | 岭南师范学院 | 一株哈茨木霉sq-18菌株及其在防治草坪草病害中的应用 |
| CN113229294B (zh) * | 2021-01-29 | 2022-04-15 | 宁夏农林科学院植物保护研究所（宁夏植物病虫害防治重点实验室） | 一种基于哈茨木霉菌m-17厚垣孢子的可湿性粉剂组合物、制备方法及应用 |
| ES2923101B2 (es) * | 2021-03-12 | 2024-03-25 | Consejo Superior Investigacion | Composiciones obtenidas de hongos y sus usos |
| CN116103157A (zh) * | 2022-04-29 | 2023-05-12 | 广西大学 | 一种降解甘蔗渣纤维素的木霉菌株的筛选方法 |
| WO2025206967A1 (en) | 2024-03-28 | 2025-10-02 | National Institute For Research & Development In Chemistry And Petrochemistry - Icechim | Trichoderma pseudokoningii strain that responds to strigolactone mimics |
| US12402630B1 (en) | 2024-06-03 | 2025-09-02 | King Saud University | Biocontrol formulation for controlling plant pathogens |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4900348A (en) | 1983-08-02 | 1990-02-13 | The Ohio State University Research Foundation | Production of disease suppresive compost and container media, and microorganism culture for use therein |
| NZ250838A (en) | 1994-02-07 | 1998-05-27 | Horticulture & Food Res Inst | Antifungal treatment of plants with massoialactone and/or 6-pentyl-<alpha>-pyrone and/or delta-decanolactone |
| US6372007B1 (en) | 1999-01-29 | 2002-04-16 | Rafael Munoz | Organic compost |
| ES2188385B1 (es) | 2001-06-26 | 2004-12-01 | Universidad De Barcelona | Sustratos para el control biologico de enfermedades de plantas. |
| RO127471B1 (ro) | 2010-11-24 | 2015-02-27 | Institutul De Cercetare-Dezvoltare Pentru Protecţia Plantelor | Tulpină de trichoderma pseudokoningii destinată sistemelor de agricultură conservativă |
-
2012
- 2012-11-27 RO ROA201200890A patent/RO128889B1/ro unknown
- 2012-11-29 EP EP12464023.6A patent/EP2735607A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO128889B1 (ro) | 2017-06-30 |
| EP2735607A1 (en) | 2014-05-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO128889A0 (ro) | Tulpină de trichoderma harzianum şi compoziţie cu eliberare controlată care conţine respectiva tulpină | |
| Varma et al. | Piriformospora indica: an axenically culturable mycorrhiza-like endosymbiotic fungus | |
| Sang et al. | Root treatment with rhizobacteria antagonistic to Phytophthora blight affects anthracnose occurrence, ripening, and yield of pepper fruit in the plastic house and field | |
| CN101974438B (zh) | 一株桉树内生菌及其用途 | |
| CN102839131B (zh) | 一株绿色木霉菌及其应用 | |
| CN113801808B (zh) | 一株阿比科恩链霉菌及其应用 | |
| CN106591144B (zh) | 一株多功能木霉菌株及其应用 | |
| CN105950509A (zh) | 一种生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN104357345B (zh) | 一种拮抗油茶多种新炭疽病原菌的菌株及其应用方法 | |
| CN106119136A (zh) | 黑附球菌及其应用 | |
| Kamel et al. | Potentiality of some yeast species as biocontrol agents against Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum the causal agent of cucumber wilt | |
| CN102732430A (zh) | 一种黑曲霉菌及其应用 | |
| CN107893034B (zh) | 一种金针菇病原细菌的鉴定及抗病白色金针菇菌株的筛选方法 | |
| CN118879513A (zh) | 树仔菜内生菌平脐蠕孢菌菌株szn-1及其应用 | |
| CN106010983B (zh) | 棉花内生真菌cef-559及其在棉花黄萎病防治中的应用 | |
| CN118389301A (zh) | 一种黄牛肝菌yafmf012及其分离方法和根苗侵染方法 | |
| CN101919412B (zh) | 一种炭疽菌菌株及含有其孢子的生物除草试剂 | |
| CN109609403B (zh) | 一种生防菌及其在农作物霜霉病防治方面的应用 | |
| CN1637133A (zh) | 一种香蕉内生菌及其用途 | |
| CN104974939B (zh) | 一种防治杨树溃疡病的木贼镰孢菌株及其应用 | |
| CN104593266A (zh) | 一种番茄内生真菌交织枝顶孢及其在番茄根结线虫病生防中的应用 | |
| CN106167767B (zh) | 防治香蕉枯萎病的内生真菌l-14及其应用 | |
| CN112075457A (zh) | 棘孢木霉在促进苦瓜生长和提高苦瓜抗病性中的应用 | |
| Rai | Piriformospora indica as a new and emerging mycofertilizer and biotizer: potentials and prospects in sustainable agriculture | |
| Vejsadova et al. | Influence of bacteria on growth and phosphorus nutrition of mycorrhizal corn |