RO120950B1 - Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice - Google Patents
Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice Download PDFInfo
- Publication number
- RO120950B1 RO120950B1 ROA200500117A RO200500117A RO120950B1 RO 120950 B1 RO120950 B1 RO 120950B1 RO A200500117 A ROA200500117 A RO A200500117A RO 200500117 A RO200500117 A RO 200500117A RO 120950 B1 RO120950 B1 RO 120950B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- acids
- triterpenic acids
- triterpenic
- bioactive complex
- acid
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 339
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 title claims abstract description 200
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 title claims abstract description 29
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 27
- -1 triterpene acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 73
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 19
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims abstract description 263
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 claims abstract description 32
- JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N Epioleonolsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4CCC3C21C JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N Oleanolic acid Natural products CC1(C)CC2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C1)C(=O)O YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 32
- 229940100243 oleanolic acid Drugs 0.000 claims abstract description 32
- HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N prosapogenin PS-A Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(O)=O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1O HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 29
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 240000006028 Sambucus nigra Species 0.000 claims abstract description 13
- 235000003142 Sambucus nigra Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 241001092040 Crataegus Species 0.000 claims abstract description 11
- QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N betulinic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N 0.000 claims abstract description 7
- WCGUUGGRBIKTOS-JJWDWEPMSA-N (1s,2r,4as,6ar,6as,6br,10s,12ar,14bs)-10-hydroxy-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydro-1h-picene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)C2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-JJWDWEPMSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 3-Epi-Betulin-Saeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-20(29)-Lupen-3,27-oic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C(O)=O)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N Betulinic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1C[C@H]([C@H]2CC[C@]3(C)[C@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N 0.000 claims abstract description 6
- PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N dihydrobetulinic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(C)C)C5C4CCC3C21C PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N nepehinol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000002997 Lavandula Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- NZCULBURCGAPSF-UHFFFAOYSA-N UNPD19956 Natural products C1CC(O)C(C)(CO)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)C(C)C5C4=CCC3C21C NZCULBURCGAPSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 92
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 78
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 44
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 39
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 38
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 35
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 35
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 35
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 32
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 30
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 30
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 claims description 28
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 26
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 25
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 24
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 24
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 23
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 23
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 23
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 22
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 21
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 21
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 21
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims description 21
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 19
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 16
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 16
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 15
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 claims description 14
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims description 12
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 12
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 12
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 12
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 12
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 claims description 11
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims description 11
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 10
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 9
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 claims description 9
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 claims description 9
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 9
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 claims description 9
- 244000041506 Lavandula officinalis Species 0.000 claims description 8
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims description 8
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 claims description 7
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 claims description 7
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 claims description 7
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 7
- 201000002282 venous insufficiency Diseases 0.000 claims description 7
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 claims description 6
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 6
- 201000002816 chronic venous insufficiency Diseases 0.000 claims description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000001823 pruritic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 6
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 claims description 6
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 5
- 206010047073 Vascular fragility Diseases 0.000 claims description 5
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002260 Keloid Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 claims description 4
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 claims description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 4
- 210000001117 keloid Anatomy 0.000 claims description 4
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 3
- 235000010701 Lavanda vera Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000178860 Lavandula latifolia Species 0.000 claims description 3
- 235000010658 Lavandula latifolia Nutrition 0.000 claims description 3
- 206010048591 Post thrombotic syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 244000114218 Salvia fruticosa Species 0.000 claims description 3
- 235000006293 Salvia fruticosa Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000258095 Salvia lavandulifolia Species 0.000 claims description 3
- 235000001500 Salvia lavandulifolia Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002912 Salvia officinalis Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000182022 Salvia sclarea Species 0.000 claims description 3
- 235000002911 Salvia sclarea Nutrition 0.000 claims description 3
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 claims description 3
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims description 3
- 229940069265 ophthalmic ointment Drugs 0.000 claims description 3
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 claims description 3
- 239000001691 salvia sclarea Substances 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000012549 training Methods 0.000 claims description 3
- 208000014139 Retinal vascular disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006374 Uterine Cervicitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000027709 Vulvovaginal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008323 cervicitis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 claims description 2
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 241001529749 Lavandula Species 0.000 claims 3
- WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-M (1s,2r,4as,6ar,6as,6br,8ar,10s,12ar,14bs)-10-hydroxy-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydro-1h-picene-4a-carboxylate Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C([O-])=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-M 0.000 claims 2
- 229940071203 oleanolate Drugs 0.000 claims 2
- 244000265913 Crataegus laevigata Species 0.000 claims 1
- 235000013175 Crataegus laevigata Nutrition 0.000 claims 1
- 240000000171 Crataegus monogyna Species 0.000 claims 1
- 235000004423 Crataegus monogyna Nutrition 0.000 claims 1
- 235000017156 Crataegus rhipidophylla Nutrition 0.000 claims 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 claims 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 claims 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 claims 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 claims 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 claims 1
- 244000165082 Lavanda vera Species 0.000 abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 241001072909 Salvia Species 0.000 abstract 1
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 35
- WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N (3beta)-3-hydroxyurs-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N 0.000 description 33
- 229940096998 ursolic acid Drugs 0.000 description 33
- PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N ursolic acid Natural products CC1CCC2(CCC3(C)C(C=CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C)C(=O)O PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 16
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 16
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 14
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 12
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 11
- 150000002887 oleanolic acids Chemical class 0.000 description 11
- 229940100655 ophthalmic gel Drugs 0.000 description 11
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 10
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 10
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 9
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 9
- ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N Cortisone acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 229960003290 cortisone acetate Drugs 0.000 description 9
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 9
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 8
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 8
- 230000000055 hyoplipidemic effect Effects 0.000 description 8
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M (3R,5S)-fluvastatin sodium Chemical compound [Na+].C12=CC=CC=C2N(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M 0.000 description 7
- GGLZPLKKBSSKCX-UHFFFAOYSA-N S-ethylhomocysteine Chemical compound CCSCCC(N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 7
- 229960003765 fluvastatin Drugs 0.000 description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- GXWUEMSASMVWKO-GNLHUFSQSA-N (4as,6ar,6as,6br,10s,12ar,14br)-10-[(2s,3r,4s,5s)-4,5-dihydroxy-3-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)CO[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CCC2C1(C)C)C)(C)CC[C@]1(CCC(C[C@@H]14)(C)C)C(O)=O)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GXWUEMSASMVWKO-GNLHUFSQSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000767 anti-ulcer Effects 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 6
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 6
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 6
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 6
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 6
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 6
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 6
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 6
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 6
- 150000003675 ursolic acids Chemical class 0.000 description 6
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 5
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl benzene Natural products OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 5
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Substances [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 description 4
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 4
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 4
- 235000004507 Abies alba Nutrition 0.000 description 3
- 244000101408 Abies amabilis Species 0.000 description 3
- 235000014081 Abies amabilis Nutrition 0.000 description 3
- 235000017894 Abies grandis Nutrition 0.000 description 3
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 3
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 3
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 3
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 3
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 3
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 3
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 3
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Substances N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 229960001021 lactose monohydrate Drugs 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N n-hexadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 3
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 3
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 description 3
- CXBDYQVECUFKRK-UHFFFAOYSA-N 1-methoxybutane Chemical compound CCCCOC CXBDYQVECUFKRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000408598 Cetia Species 0.000 description 2
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007730 Crataegus sp Nutrition 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 235000002725 Olea europaea Nutrition 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 101100127657 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) LAM4 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100127659 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) LAM5 gene Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001315 anti-hyperlipaemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000947 anti-immunosuppressive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 2
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000260 hypercholesteremic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- AIJDQMYBRDJHHT-ABAXQOPJSA-N leukotriene C3 Chemical compound CCCCCCCC\C=C/C=C/C=C/[C@@H](SC[C@H](NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](O)CCCC(O)=O AIJDQMYBRDJHHT-ABAXQOPJSA-N 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 2
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 229930189471 penicacid Natural products 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 229940023144 sodium glycolate Drugs 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N tris(1,1,3-tribromo-2,2-dimethylpropyl) phosphate Chemical compound BrCC(C)(C)C(Br)(Br)OP(=O)(OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr)OC(Br)(Br)C(C)(C)CBr JEJAMASKDTUEBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-methylselanyl-butanoic acid Chemical compound C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000218642 Abies Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- WSVLPVUVIUVCRA-KPKNDVKVSA-N Alpha-lactose monohydrate Chemical compound O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WSVLPVUVIUVCRA-KPKNDVKVSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000025940 Back injury Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035762 Disorder of lipid metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000007241 Experimental Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020961 Hypocholesterolaemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000605019 Lachesana tarabaevi M-zodatoxin-Lt1a Proteins 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000830535 Ligustrum lucidum Species 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000795633 Olea <sea slug> Species 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 101000722957 Rattus norvegicus Cystatin-S Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 240000002657 Thymus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 241000736767 Vaccinium Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 240000000038 Ziziphus mauritiana Species 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- RTEXIPZMMDUXMR-UHFFFAOYSA-N benzene;ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O.C1=CC=CC=C1 RTEXIPZMMDUXMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDHYEMXUFSJLGV-UHFFFAOYSA-N beta-phenethyl acetate Natural products CC(=O)OCCC1=CC=CC=C1 MDHYEMXUFSJLGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007963 capsule composition Substances 0.000 description 1
- 230000019259 carbohydrate homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- MOVRKLZUVNCBIP-RFZYENFJSA-N cortancyl Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O MOVRKLZUVNCBIP-RFZYENFJSA-N 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000001544 dysphoric effect Effects 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000005686 electrostatic field Effects 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 208000036796 hyperbilirubinemia Diseases 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000004460 liquid liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical class [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940045681 other alkylating agent in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- RXHIKAIVEMAPRU-JRIGQVHBSA-N sequiterpene Natural products C1=C(C)[C@@H](OC(C)=O)[C@H](O)[C@@]2(O)[C@H](C)CC[C@@H](C(C)=C)[C@H]21 RXHIKAIVEMAPRU-JRIGQVHBSA-N 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005995 skin dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007916 tablet composition Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000721 toxic potential Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000001562 ulcerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
- A61K36/537—Salvia (sage)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
- A61K36/734—Crataegus (hawthorn)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un complex bioactiv de acizi triterpenici, ce constă în aceea că are un conţinut de acizi de minimum 90%, format din: minimum 75% acid ursolic, 10...15% acid oleanolic şi4...10% acizi triterpenici, cum ar fi: acid hidroxiursolic, acid hidroxioleanolic, acid betulinic, acid dehidrobetulinic, obţinut sub formă de acizi în stare liberă sau ca săruri de Na, K, NH4,prin extracţie din următoarele specii de planteSalvia species, Lavandula species, Sambucus nigraşi Crataegus species, la procedeul de obţinere a complexului bioactiv şi la produse medicamentoase cu utilizări terapeutice.
Description
Prezenta invenție se referă la un complex bioactiv de acizi triterpenici, ca atare sau sub formă de săruri de Na, K sau NH4, la procedeul de obținere din plantele Salvia species, Lavandula species, Sambucus nigra și Crataegus species, și la produse medicamentoase pe baza acestuia, cu utilizări terapeutice în domenii cu largă incidență socială, atât pentru uz uman cât și veterinar.
Complexul bioactiv de acizi triterpenici realizat conform invenției, prezintă o puritate avansată (minim 90%), fiind standardizat în conținutul de acizi triterpenici și caracterizat prin screening farmacotoxicologic, din punct de vedere al activității specifice și al siguranței la administrare, ceea ce permite utilizarea sa drept componentă bioactivă de bază a unor produse medicamentoase de uz intern sau extern, în terapeutica umană și veterinară.
în baza studiilor farmacologice recent publicate, referitoare la acizii triterpenici (în special ursolic și oleanolic) este cunoscut că aceștia, deși izomeri, prezintă unele diferențe structurale ce determină o diferențiere a efectelor farmacologice care, deși sunt în mare parte similare, nu sunt identice. De aceea, în special în cazul preconizării utilizării în terapeutică a unui amestec de acizi triterpenici este foarte important și strict necesar să se cunoască cu precizie proporțiile acestora, deoarece o variabilitate în conținut a amestecului poate determina o variabilitate a activității farmacologice și a biodisponibilității produsului.
Analizând procedeele brevetate referitoare la obținerea acizilor triterpenici în stare pură sau în amestec, se constată că acestea sunt prezentate, în majoritate, la nivel de laborator și nu prezintă puritatea produsului obținut, cu specificarea metodei de analiză aplicate. Abia în anii recenți s-au publicat brevete de invenție privind obținerea unor bioproduse pe bază de acid ursolic și oleanolic în amestec, sub formă de concentrate de puritate scăzută (30...65%), evaluate analitic prin HPLC sau GC și destinate utilizării sub formă de suplimente nutriționale.
Evaluarea de ansamblu a brevetelor de invenție și a cererilor de brevete recente, care revendică procedee de obținere a acizilor triterpenici (în special ursolic și oleanolic), în stare pură sau în amestec, ca atare sau sub formă de săruri, cu baze anorganice sau organice, conduce la clasificarea lor în funcție de următoarele criterii:
a) sursele de materii prime vegetale:
-frunze și herba, recoltate de la plante din flora spontană sau din culturi, a căror prelucrare conduce la obținerea unor produse purificate, cu aplicații terapeutice;
- deșeuri fructifere, rezultate ca deșeu în industria alimentară, prin prelucrarea cărora se obțin concentrate cu un conținut scăzut de acizi triterpenici (30...65%). utilizabile pentru obținerea unor suplimente nutriționale.
b) produsul finit care constituie obiectivul principal al procedeului brevetat:
- acizi triterpenici în stare pură, ca atare sau sub formă de săruri;
- amestec de acizi triterpenici, trigliceride, zaharuri etc., obținut cu precădere din deșeuri fructifere.
în continuare sunt prezentate brevetele de invenție și cererile de brevete recente, care prezintă procedee de obținere a acizilor triterpenici (în special ursolic și/sau oleanolic):
- GR 10011738, intitulat „Metodă de separare a acizilor ursolic și oleanolic din frunzele de Olea europaea este un procedeu la nivel de laborator, care preconizează extracția frunzelor uscate de Olea europaea cu alcool etilic 95°, la temperatură ambiantă, timp de 15 zile, precipitarea acizilor triterpenici din extractul alcoolic prin diluarea acestuia cu apă, separarea și uscarea sedimentului, urmat de purificarea sa prin extracții succesive cu eter de petrol. Se prezintă o metodă de analiză prin cromatografie în strat subțire, cu ajutorul căreia se evaluează calitativ sedimentul purificat cu eter de petrol, ca fiind constituit din acid ursolic, iar extractele de eter de petrol, concentrate la sicc, conțin acid oleanolic.
RO 120950 Β1
Nu se menționează evaluarea cantitativă a acizilor ursolic și oleanolic astfel separați, 1 pentru a se putea aprecia puritatea substanțelor și eficiența procedeului de separare.
- US 6740778, intitulat „Metodă de preparare a acidului oleanolic și/sau acidului 3 măslinie”, prezintă o metodă de preparare a acestor acizi ca atare sau sub formă de săruri fiziologic acceptabile, utilizând ca materie primă planta Olea europaea de la care se prelu- 5 crează materialul rămas după extracția uleiului de măsline. Ca solvenți de extracție se utilizează solvenți organici hidrofili (alcooli, acetonă) sau lipofili (hexan, chloroform, acetat de 7 etil), iar extractele rezultate conținând acidul oleanolic sau măslinie se purifică prin extracție lichid-lichid sau cromatografie pe coloană de silicagel. Se menționează ca acizii triterpenici 9 astfel obținuți prezintă o puritate de 85...100%. iar sărurile respective prezintă o puritate de minimum 90%. 11
Deși metoda conduce la obținerea unor substanțe de puritate avansată, prezintă dezavantajul unor fluxuri tehnologice greu de aplicat la scara industrială, atât prin metodele de 13 purificare preconizate, cât și prin multitudinea solvenților organici utilizați.
- SU18186346, intitulat „Metodă de obținere a acidului ursolic, prezintă un procedeu 15 de obținere a acidului ursolic din deșeurile fructifere de Oxycoccus quadripetelus G, prin extracție cu alcool izopropilic, la temperatura ambiantă, timp de 24 ore, concentrarea extrac-17 tului alcoolic sub vid la reziduu, care este purificat prin extracții cu eter de petrol și transformări succesive în sare de Na și acid ursolic purificat.19
Se menționează o creștere a randamentului de prelucrare și a cantității de substanță obținută, fără a se specifica și puritatea sa.21
- RU 2108107, intitulat: „Metodă pentru prepararea unui total biologic activ de săruri ale acizilor triterpenici, prezintă un procedeu de obținere a acizilor triterpenici din specii de 23 brad alb (Abies sp.), sub formă unui total de săruri de Na ale acizilor triterpenici, care prevede extracția materiei prime vegetale cu amestec de eter de petrol - acetat de etil, concen- 25 trarea soluțiilor extractive la reziduu, care este dizolvat în acetat de etil, iar soluția organică este alcalinizată cu soluție 2% NaOH la pH=9, după care extractul apos alcalin, cu pH=7...8 27 este concentrat sub vid, până la obținerea unui extract sicc sub formă de pulbere, care constituie totalul de acizi triterpenici, ca sare de Na, cu un conținut de 38...45%.29
Nu se specifică structura chimică și denumirea acizilor triterpenici obținuți conform procedeului brevetat dar, din datele de literatură, este cunoscut că speciile de conifere conțin31 compuși triterpenici cu alte structuri chimice decât cele ale acizilor ursolic și oleanolic.
- RU 2108803, intitulat: „Metodă de preparare a unui total de acizi triterpenici biologic33 activprezintă un procedeu de obținere a unui total de acizi triterpenici din acele de brad alb, prin extracție cu eter metil-butilic, tratarea extractului organic cu agent alcalin (soluție apoasă35
2% NaOH), separarea soluției apoase alcaline, acidifierea sa cu soluție HCI 10%, la pH=2 și izolarea produsului finit din soluția acidă prin extracție cu eter metil-butilic. Ca și în brevetul 37 precedent, nu se specifică denumirea și structura chimică a acizilor triterpenici astfel izolați, menționându-se numai cantitatea de substanță rezultată, fără a se indica și puritatea sa. 39
- RU 2151139, intitulat: „Metodă de obținere a unui total de acizi triterpenici biologic activ prezintă un procedeu de extracție a acizilor triterpenici din ace proaspete sau scoarță 41 de brad alb, tratate în prealabil cu abur, apoi extrase cu solvenți organici (eter metil-butilic; amestec: benzen-acetat de etil; amestec: eter de petrol-acetat de etil), urmat de separarea 43 totalului de acizi triterpenici prin tratarea succesivă a extractului organic cu soluții apoase bazice și acide. 45
Se menționează cantitatea de produs obținut, fără a se specifica denumirea chimică a acizilor triterpenici și puritatea produsului. 47
RO 120950 Β1 în plus, toate cele 3 brevete din Federația Rusă, prezentate, deși se referă la obținerea unui total de acizi triterpenici biologic activ, nu prezintă nici un fel de teste farmacologice care să evidențieze activitatea biologică a produselor obținute în baza cărora să se poată evalua posibilitățile de aplicare în terapeutică.
Un alt grup de brevete aparținând UNILEVER prezintă diferite procedee de preparare a unor concentrate din deșeuri fructifere, care conțin un amestec de acizi ursolic, oleanolic și alte componente, fiind destinate utilizării ca suplimente nutriționale.
-EP 1161879 și cererea de brevet US 2002037882, prezintă 2 procedee de laborator și pilot - care prevăd extracția cojilor de mere uscate cu acetonă la reflux (5O...58”C), concentrarea soluției extractive la reziduu și cristalizarea acestuia din amestec acetonă-apă 50/50 până la 95/5 (procedeul de laborator) sau din hexan (procedeul pilot).
Se obține un amestec de acid ursolic și oleanolic în proporții variabile, care mai conține și alte componente polare și apolare specifice cojilor de mere. Se prezintă și un procedeu de condiționare a amestecului triterpenic prin asociere cu mono-, di-, trigliceride și cu uleiuri ce conțin acizi grași nesaturați, în scopul utilizării ca suplimente nutriționale.
- EP 1250852 și cererea de brevet US 2003049365, prezintă un procedeu de laborator privind obținerea unor concentrate de acizi triterpenici (ursolic și oleanolic), ca atare sau sub formă de săruri, care prevede prelucrarea cojilor de mere în prealabil tratate cu soluții apoase acide (H3PO4) la pH=2 și cu soluții apoase alcaline (Na2CO3) la pH= 8-12, urmat de extracția cu acetonă la Soxhlet și concentrarea soluției extractive la reziduu sicc, care constituie concentratul de acid ursolic și oleanolic cu un conținut de 30...65% în raportul 4:6, alături de alte componente: zaharuri, gliceride și alți compuși triterpenici.
Se menționează utilizarea concentratelor astfel obținute la prepararea unor suplimente alimentare sub formă de capsule sau alte forme de condiționare.
- CN 1358733, prezintă un procedeu de extracție a acidului ursolic din frunzele plantei Ligustrum lucidum, care include următoarele faze: extracția frunzelor în contracurent cu alcool etilic la reflux, concentrarea extractului la reziduu, care se spală cu apă, se usucă iar extractul uscat se dizolvă în alcool etilic și se decolorează, apoi se concentrează și se diluează cu apă, rezultând un precipitat; se reglează pH-ul suspensiei la 2...2,5, după care precipitatul se separă, se spală cu apă la pH neutru, și se usucă sub vid.
Se menționează obținerea unui extract brut, având drept component principal acidul ursolic, fără a se indica evaluarea cantitativă și puritatea produsului, precum și ceilalți compuși existenți alături de acidul ursolic.
Din datele prezentate mai sus, cu privire la stadiul tehnicii în domeniul obținerii acizilor triterpenici din diferite surse de materii prime vegetale, rezultă următoarele:
- majoritatea procedeelor referitoare la obținerea acizilor ursolic și oleanolic în stare pură, nu menționează puritatea substanței și evaluarea sa prin metode analitice cantitative (HPLC, GC și altele).
- procedeele care revendică obținerea din deșeuri fructifere a unor concentrate de acizi triterpenici, pe baza de amestec de acid ursolic și oleanolic, deși prezintă evaluarea cantitativă a acestora prin HPLC, prezintă dezavantajul obținerii unor produse cu un conținut scăzut (30...65%), care nu pot fi aplicabile în terapeutică, condiționate ca medicamente, ci numai ca suplimente nutriționale;
- în plus, este cunoscut că deșeurile fructifere prezintă un conținut scăzut în acizi triterpenici (< 0,5%) ceea ce influențează negativ rentabilitatea tehnologiilor la nivel industrial comparativ cu tehnologiile de prelucrare a materiilor prime vegetale uzuale (plante medicinale și aromatice);
RO 120950 Β1
- nu se cunosc procedee de obținere a complexului de acizi triterpenici din plantele 1 Sambucus nigra și Crataegus species',
- nici unul din procedeele prezentate nu prezintă date tehnologice similare cu proce- 3 deul care face obiectul prezentei invenții și nici date farmacologice referitoare la activitatea biologică specifică a amestecului de acizi triterpenici revendicat, în vederea evaluării dome- 5 niilor de aplicabilitate terapeutică.
Analiza stadiului tehnicii în domeniul farmacologiei acizilor triterpenici evidențiază că 7 cea mai mare parte a efectelor lor farmacologice a fost demonstrată prin cercetări științifice experimentale ale căror rezultate au fost publicate sub formă de articole sau au făcut obiectul 9 unor cereri de brevet și brevete de invenție.
Astfel, J. Liu prezintă următoarele efecte farmacologice evidențiate la acizii oleanolic 11 și ursolic: antiinflamator, hepatoprotector, antihiperlipidemic, antiulceros, hipoglicemiant, antitumoral, anti HIV, antimicrobian. 13
Somova L.l. și colab. evidențiază activitatea cardiovasculară, antihipertensivă, antihiperlipidemică, antiaterosclerotică și antioxidantă a aciziloroleanolic și ursolic izolați din Olea 15 europeea.
Iar Kuttan G. și colab. menționeză activitatea imunomodulatoare a acizilor ursolic, 17 oleanolic și glycirrhizic.
US 4752606 prezintă o compoziție farmaceutică pe bază de acid oleanolic, ca atare 19 sau ca săruri fiziologic acceptabile, condiționată ca tablete și utilizabilă pentru tratarea profilactică sau curativă a diferitelor disfuncții ulcerogene ale stomacului sau intestinelor. 21
Cererea de brevet de invenție US 10/488682 publicată cu nr. US 2004/0235785 A1 prezintă o compoziție farmaceutică utilizabilă ca supliment dietetic în tratamentul sau preve- 23 nirea cancerului cu rol de potențatoralagențilorantitumorali, utilizați în imunoterapie și oncologie. Conform invenției, compoziția are la bază compuși din clasa terpenelor (mono-, di-, tri-, 25 sequiterpene).
Cererea de brevet de invenție JP 05-211065 publicată sub nr. 07-048260/1995 pre- 27 zintă un bioprodus utilizabil ca agent de creștere a celulelor sângelui (eritrocite) pe bază de acid ursolic, administrat în doze zilnice de 1 ...1000 mg și având un efect de prelungire a vieții 29 în tratamentul, prin radioterapie, al diferitelor forme de cancer.
Cererile de brevet de invenție EP 1495754 A2, publicată la 12.01.2005, și 31 EP 0943620 A2, publicată pe 22.09.1999, prezintă o metodă și o compoziție pe bază de derivați ai acidului betulinic aplicabilă pentru prevenirea sau inhibarea creșterii tumorilor maligne. 33 Se prezintă o metodă de obținere a acidului betulinic din scoarța tulpinilor plantei Ziziphus mauritiana (fam. Rhamnacaee), studii „in vitro asupra citotoxicității acidului betulinic față de 35 diferite linii celulare canceroase (melanom, fibrosarcom, cancer de sân și de colon, carcinom epidermoid) și rezultatele experimentelor „in vivo” la șoarece, care confirmă calitatea acidului 37 betulinic de agent antineoplazic.
US 5985924 prezintă un nou agent supresor pentru metastaze, cu un grad scăzut de 39 toxicitate, pe bază de acid ursolic, ca atare sau sub formă de săruri, care poate fi administrat pacienților per os sau injectabil, în tratamentul post-operator al diferitelor forme de cancer. 41
Cererea de brevet de invenție JP 63166195 publicată cu nr. 02017121 A/1990 prezintă un medicament de uz extern, utilizabil pentru prevenirea cancerizării celulelor epiteliale 43 ale pielii, pe bază de acid ursolic sau oleanolic, ca atare sau în amestec.
Cererea de brevet de invenție JP 09-199323 publicată cu nr. 11-029467/1999 pre- 45 zintă un produs cu efecte inhibitoare asupra proteazei, pe baza de acid ursolic sau săruri ale sale, aplicabil în tratamentul sau prevenirea diferitelor disfuncții ale pielii (dermatite) și condi- 47 ționat sub formă de unguent, cremă, loțiune și emulsie. Se menționează efectele dermatoprotectoare ale produsului: antioxidante, hidratante și de înălbire a epidermei. 49
RO 120950 Β1
US 4857554 prezintă o metodă pentru tratamentul psoriazisului bazată pe utilizarea zilnică a unui unguent conținând acizii ursolic și oleanolicîn raport 3:1, dispersați într-o bază grasă cu lanolină și vaselină. Acțiunea produsului este demonstrată prin experiment clinic timp de 3 săptămâni, care a relevat că formele grave de psoriazis au fost vindecate în pro porție de 60...70%.
Din datele prezentate cu privire la stadiul tehnicii în domeniul farmacologiei acizilor triterpenici rezultă următoarele:
-toate studiile farmacologice referitoare la activitatea specifică a acestor acizi au fost efectuate separat pentru fiecare acid, evidențiindu-se o multitudine de efecte farmacologice care deși sunt în mare parte similare, nu sunt identice;
- nici unul dintre studiile menționate nu prezintă teste farmacologice efectuate pe amestec de acizi triterpenici, în scopul evidențierii sinergismului și potențării efectelor farmacologice, care pot fi superioare față de cele ale fiecărui component în parte;
- experimentele farmacologice preclinice sau clinice prezentate în cadrul studiilor menționate nu au fost efectuate comparativ pe organisme tinere, adulte sau îmbătrânite, deși este cunoscut faptul că parametrii biochimici și hematologici diferă sensibil în funcție de vârstă care influențează și eficiența terapeutică a medicamentului utilizat.
Problema tehnică pe care o rezolvă prezenta invenție este obținerea unui complex bioactiv de acizi triterpenici conținând acizii ursolic, oleanolic și alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ca atare sau sub formă de săruri de Na, K sau NH4, printr-un procedeu tehnologic aplicabil la scară industrială, care realizează extracția tuturor tipurilor structurale de acizi triterpenici existenți în materiile prime vegetale și care, în scopul creșterii selectivității și randamentelor proceselor de extracție, purificare și cristalizare, utilizează apele structurate (apă structurată „I cu pH acid și apă structurată „S cu pH alcalin) în componența solvenților utilizați la efectuarea acestor faze tehnologice, ceea ce conduce la un produs finit cu o puritate avansată (minim 90%) și o componență standardizată.
Complexul bioactiv de acizi triterpenici, constă în aceea că, are un conținut de acizi de minimum 90%, format din: minimum 75% acid ursolic, 10...15% acid oleanolic și 4...10% acizi triterpenici cum ar fi: acid hidroxiursolic, acid hidroxioleanolic, acid betulinic, acid dehidrobetulinic, obținut sub formă de acizi în stare liberă sau ca săruri de Na, K, NH4 prin extracție din următoarele specii de plante: Salvia species, Lavandula species, Sambucus nigra și Crataegus species prezentând următoarele efecte farmacologice:
- activitate de bioreglare a metabolismului proteic, glucidic și lipidic, în special asupra organismelor îmbătrânite, cu aplicații în terapia preventivă și curativă a maladiilor metabolice și cardiovasculare cu etiologie aterosclerotică, în special în geriatrie;
- activitate imunoprotectoare și hepatoprotectoare, de contracarare a efectelor adverse imunosupresoare și hepatotoxice, survenite după tratamentul cu glucocorticosteroizi și citostatice;
- activitate de întârziere a evoluției tumorilor;
- activitate antioxidantă;
- activitate antiinflamatoare locală, iar procedeul de obținere a complexului bioactiv de acizi triterpenici constă în aceea că materia primă vegetală uscată și pulverizată, cu 2...4% acizi triterpenici, constituită din Salvia species herba, Lavandula species herba - care poate fi rezultată și ca deșeu la obținerea uleiului volatil prin antrenare cu vapori de apă, Sambucus nigra - flori sau frunze sau Crataegus species herba, se extrage prin macerare dinamică în raportul 1/15...1/30 m/v, masă vegetală/solvent, cu unul dintre solvenții de extracție reprezentați de amestecurile
RO 120950 Β1 constituite din: 5...15% apă structurată „I cu 85...95% acetonă sau cu 85...95% alcool etilic 1 95c, timp de 8...24 h, la 15...80'0, rezultând soluția extractivă, care în scopul purificării, se trece pe o coloană cromatografică cu cărbune activ granulat cu pH acid, apoi se concen- 3 trează sub vid la temperatura de 35...40’0, până la 1/10...1/20 din volumul inițial, obținându-se o suspensie care se menține timp de 12...24 h la 5...10°C, apoi se filtrează sub vid, 5 substanța obținută după uscare la 105°C, timp de 3 h, constituind complexul bioactiv de acizi triterpenici brut cu un conținut de minimum 70%, care, în vederea purificării, se dizolvă la 7 reflux - 80° C - în raportul 1/100...1/200 m/vîn unul dintre solvenții reprezentați de amestecurile constituite din: 5...10% apă structurată „I sau „S cu 90...95% alcool etilic 95c sau cu 9
90.. .95% acetonă; soluția obținută se purifică prin adsorbție pe cărbune activ cu pH acid, adăugat în raportul 0,1...0,3% m/v, se filtrează, se concentrează sub vid la 35...40°C până 11 la 1/10... 1/20 din volumul inițial, suspensia microcristalină rezultată se lasă 12...24 h la
5.. .10°C pentru finalizarea cristalizării, se filtrează sub vid, precipitatul obținut se spală cu 13 0,3...0,5 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la 105°C minimum 3 h și se pulverizează, rezultând complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat obținut prin 1.. .2 cristalizări 15 în funcție de tipul materiei prime vegetale prelucrate la aceiași parametri, cu excepția celei de-a doua concentrări care se face la 1/5 din volumul inițial, cu un conținut de minimum 90% 17 reprezentat de: minim 75% acid ursolic, 10... 15% acid oleanolic și 4...10% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, 19 dehidrobetulinic, rezultând substanță activă pentru produse medicamentoase de uz uman și/sau veterinar, condiționate sub formă de: soluție injectabilă sau emulsie perfuzabilă, 21 tablete sau capsule operculate tari și/sau gelatinoase moi, gel, cremă sau unguent, soluție de uz extern sau spray, supozitoare sau ovule. 23
Avantajele invenției, comparativ cu stadiul tehnicii sunt următoarele:
- studiile farmacologice preclinice „in vivo”, efectuate asupra complexului bioactiv de 25 acizi triterpenici, au demonstrat că acesta prezintă o activitate farmacologică superioară față de cea a fiecărui component separat, datorită unor efecte sinergice de potențare reciprocă, 27 utilizate la obținerea unor noi produse medicamentoase.
- preconizează o creștere cu 10...15% a randamentului de extracție; 29
- se realizează un grad crescut de selectivitate a procesului de extracție;
- purificarea complexului bioactiv de acizi triterpenici asigură o cristalizare selectivă 31 și o puritate avansată a produsului finit (minimum 90%), precum și o standardizare a conținutului său în componente; 33
- obținerea complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de săruri de Na, de K sau de NH4 se realizează cu o puritate avansată (minim 90%) și un randament de fază 35 de 95%;
- procedeul tehnologic valorifică și alți acizi triterpenici prezenți în soluțiile extractive, 37 care conferă o creștere a biodisponibilității întregului complex.
- complexul bioactiv de acizi triterpenici prezintă un conținut de minimum 90% stan- 39 dardizat având o activitate farmacologică marcată și diversificată, exercitată la nivelul unor funcții vitale și anume: activitate de bioreglare a metabolismului proteic, glucidic și lipidic, în 41 special asupra organismelor îmbătrânite, activitate imunoprotectoare și hepatoprotectoare, de contracarare a efectelor adverse imunosupresoare și hepatotoxice, după tratamentul cu 43 glucocorticosteroizi, citostatice, antivirale și radioterapie, activitate de retardare a evoluției tumorilor, activitate antiinflamatoare locală. 45 în baza acestor efecte farmacologice, complexul bioactiv de acizi triterpenici, obținut conform invenției, a fost condiționat sub formă de noi produse medicamentoase de uz uman 47 și/sau veterinar precum: capsule, tablete, soluții injectabile, buvabile și de uz extern: colire, spray, gel, cremă, unguent, supozitoare, ovule, destinate unor noi aplicații terapeutice, față 49 de cele cunoscute în prezent.
RO 120950 Β1
Procedeul conform invenției constă în aceea că, materia primă vegetală uscată și pulverizată, cu 2...4% acizi triterpenici, constituită din Salvia species herba, Lavandula species herba - care poate fi rezultată și ca deșeu la obținerea uleiului volatil prin antrenare cu vapori de apă, Sambucus nigra - flori sau frunze sau Crataegus species herba, se extrage prin macerare dinamică în raportul 1/15...1/30 m/v, masa vegetală/solvent, cu unul dintre solvenții de extracție reprezentați de amestecurile constituite din: 5...15% apă structurată „I cu
85...95% acetonă sau cu 85...95% alcool etilic 95c, timp de 8...24 h, la 15...80’0, rezultând soluția extractivă, care, în scopul purificării se trece pe o coloană cromatografică cu cărbune activ granulat cu pH acid, apoi se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40’C, până la 1/10...1/20 din volumul inițial, obținându-se o suspensie care se menține timp de 12...24 h la 5...10’C, apoi se filtrează sub vid, substanța obținută după uscare la 105’C, timp de 3 h, constituind complexul bioactiv de acizi triterpenici brut cu un conținut de minimum 70%. în vederea purificării, produsul brut se dizolvă la reflux - 80’C - în raportul 1/100...1/200 m/v în unul dintre solvenții reprezentați de amestecurile constituite din: 5...10% apă structurată T sau “S” cu 90...95% alcool etilic 95c sau cu 90...95% acetonă.
Soluția obținută se purifică prin adsorbție pe cărbune activ cu pH acid, adăugat în raportul 0,1. ..0,3% m/v, se filtrează, se concentrează sub vid la 35...40°C până la 1/10...1/20 din volumul inițial, suspensia microcristalină rezultată se lasă 12...24 h la 5...10’C pentru finalizarea cristalizării, se filtrează sub vid, precipitatul obținut se spală cu 0,3...0,51 apă distilată, până la pH neutru, se usucă la 105°C minimum 3 h și se pulverizează, rezultând complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, obținut prin 1...2 cristalizări la aceeași parametri, în funcție de tipul materiei prime vegetale prelucrate, cu excepția celei de-a doua concentrări care se face la 1/5 din volumul inițial, cu un conținut deminimum 90%, standardizat și constituit din:minimum 75% acid ursolic, 10...15% acid oleanolic și 4...10% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic.
Pentru obținerea complexului de acizi triterpenici sub formă de săruri de Na, de K sau de NH4, produsul cristalizat, cu un conținut deminimum 90%, se dizolvă la reflux la 80’C în raportul 1/100...1/200 m/v în amestecul de solvenți cu pH alcalin: 90...95% alcool etilic 95c cu 5...10% apă structurată „S, care conține 1% NaOH sau 1% KOH sau 5% NH4OH 25%; soluția obținută se concentrează sub vid la 35...40°C până la 1/5... 1/10 din volumul inițial, suspensia rezultată se menține 12...24 h la 5.,.10’C pentru finalizarea cristalizării, urmat de filtrare sub vid, spălarea precipitatului cu 0,1...0,3 I apă distilată până la pH neutru, uscare la 105’C timp de 3 h și pulverizare. Rezultă complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, ca sare de Na, de K sau de NH4, cu un conținut de minimum 90%, evaluat și un randament de fază de 95%.
în continuare sunt descrise 20 de exemple de realizare a invenției, care se referă la complexul bioactiv, la procedeul de obținere a complexului bioactiv de acizi triterpenici, la testele farmacologice efectuate în vederea evidențierii activității sale specifice și evaluării aplicațiilor în terapeutică, precum și la produsele medicamentoase condiționate.
Exemplul 1. Varianta A. Obținerea complexului bioactiv de acizi triterpenici la scara industrială din herba Salvia species (salvie) kg materie primă vegetală uscată și pulverizată, constituită din herba Salvia species (Salvia officinalis, Salvia lavandulifolia, Salvia triloba, Salvia sclarea, etc), cu un conținut de 3...4% acizi triterpenici, se extrag cu 500 I solvent de extracție constituit din: 90 volume (450 I) acetonă + 10 volume (50 I) apă structurată „I, cu pH= 1,8...2,6, prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30’C), după care se colecteazăminimum 4001 soluție extractivă care se trece pe o coloană cromatografică cu 2kg
RO 120950 Β1 cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează 1 sub vid la temperatura de 35...40°C, până la volumul de 401, obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de 3 pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. Se obțin minimum 1200 g pulbere galbenă slab verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un con- 5 ținut de minimum 70%.
în scopul purificării produsului se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid con- 7 stituit din 90 volume (108 I) alcool etilic 95c + 10 volume (12 I) apă structurată „I, cu pH =
1.8.. .2.6, în care se adaugă pentru dizolvare 1200 g pulbere constituită din complexul bio- 9 activ de acizi triterpenici brut (calculându-se pentru 1 g substanță -100 ml amestec de solvenți); suspensia se încălzește la 80°C, timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substan- 11 ței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se filtrează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40’C, până la 13 1/10 din volumul inițial (12 I), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, pre- 15 cipitatul se spală cu 0,51 apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. 17
Rezultăminimum 630 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de 96,6% constituit din: 80,9% acid 19 ursolic, 10,2% acid oleanolic și 5,5% alți acizi triterpenici, constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii; hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă 21 un randament final deminimum 50% raportat la conținutul de 4% acizi triterpenici ai materiei prime vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente 23 de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray). 25
Varianta B. 30 kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din herba
Salvia species (Salvia officinalis, Salvia lavandulifolia, Salvia triloba, Salvia sclarea etc), cu 27 un conținut de 3...4% acizi triterpenici, se extrag cu 500 I solvent de extracție, constituit din:
volume (450 I) alcool etilic 95c + 10 volume (50 I) apă structurată „I (pH= 1,8...2,6), prin 29 macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colecteazăminimum 400 I soluție extractivă, care se trece pe o coloană cromatografică cu 2 kg 31 cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40°C, până la volumul de 401, obținându-se o suspensie care 33 se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. 35
Se obțin minimum 1200 g pulbere galbenă, slab verzuie, care constituie complexul de acizi triterpenici brut, cu un conținut deminimum 70%. 37
Pentru purificarea produsului brut se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid, constituit din 90 volume (1081) acetonă + 10 volume (121) apă structurată „I cu un pH=1,8...2,6 39 în care se adaugă, pentru dizolvare, 1200 g pulbere constituită din complexul brut de acizi triterpenici (calculându-se pentru 1 g substanță-100 ml amestec de solvenți); suspensia se 41 încălzește la 80°C timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se filtrează, soluția obți- 43 nută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40”C, până la 1/10 din volumul inițial (12 I), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de 45
5.. . 10°C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu
0,5 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3 h și se 47 pulverizează.
RO 120950 Β1
Rezultă minimum 640 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de 96,7% constituit din: 80,4% acid ursolic, 11,7% acid oleanolic și 4,6% alți acizi triterpenici, constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final deminimum 50% raportat la conținutul de 4% acizi triterpenici al materiei prime vegetale prelucrate.
Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Exemplul 2. Varianta A. Obținerea complexuluibioactiv de acizi triterpenicila scară industrială din herba Lavandula species (lavanda) kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din herba Lavandula species (Lavandula angustifolia, Lavandula vera, Lavandula spica, Lavandula fragrans, Lavandula latifolia etc.) sau din deșeul de lavandă, rezultat la obținerea uleiului volatil prin antrenare cu vapori de apă, cu un conținut de 2...4% acizi triterpenici se extrag cu 5001 solvent de extracție, constituit din: 90 volume (4501) acetonă + 10 volume (501) apă structurată „I, cu pH= 1,8...2,6 prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colecteazăminimum 400 I soluție extractivă care se trece pe o coloană cromatografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid la temperatura de 35...40°C, până la volumul de 40 I, obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5 ..10’C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105’C, timp de 3 h și se pulverizează. Rezultăminimum 900 g pulbere verzuie, care constituie complexul de acizi triterpenici brut, cu un conținut de minimum 70%.
Pentru purificarea produsului, acesta se dizolvă în 100 volume (901) amestec de solvenți cu pH acid, constituit din: 90 volume (81 I) alcool etilic 95° + 10 volume (9 I) apă structurată „I (pH = 1,8... 2,6), prin încălzire la 80°C, timp de 1 h, soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1...0,3% m/v cărbune activ acid, se filtrează, se concentrează sub vid, la
35...40°C, până la 1/10 din volumul inițial (91), când rezultă o suspensie microcristalină care se menține 24 h la temperatura de 5...10’C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,41 apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. Se obținminimum 560 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare, astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (56 I) amestec de solvenți constituit din: 90% volume (50,4 I) alcool etilic 95c + 10 volume (5,6 I) apă structurată „I (pH=1,8...2,6) prin încălzire la 80°C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40°C, până la 1/5 din volumul inițial (11,2
I), rezultând o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de 5...10’C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,41 apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3h și se pulverizează. Rezultăminimum 490 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de 93,7% constituit din: 77,5% acid ursolic, 10,1% acid oleanolic și 6,1% alți acizi triterpenici, constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final deminimum 50%, raportat la conținutul de 3% acizi triterpenici al materiei prime vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Varianta B. 30 kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din herba Lavandula species (Lavandula angustifolia, Lavandula vera, Lavandula spica, Lavandula
RO 120950 Β1 fragrans, Lavandula latifolia etc.) sau din deșeul de lavandă, rezultat la obținerea uleiului 1 volatil prin antrenare cu vapori de apă, cu un conținut de 2...4% acizi triterpenici se extrag cu 500 I solvent de extracție, constituit din: 90 volume (450 I) alcool etilic 95c + 10 volume 3 (50 I) apă structurată „I (pH= 1,8...2,6), prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colectează minimum 400 I soluție extractivă, care 5 se trece pe o coloană cromatografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid, la temperatura de 35.. .40’C, până la volu- 7 mul de 401, obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105’C, timp de 3 h și se pul- 9 verizează. Rezultă minimum 900 g pulbere verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un conținut de minimum 70%. 11
Pentru purificarea produsului, acesta se dizolvă în 100 volume (901) amestec de solvenți cu pH acid, constituit din: 90 volume (81 I) acetonă + 10 volume (9 I) apă structurată 13 „I cu un pH=1,8...2,6, suspensia se încălzește la 80’C timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ 15 acid; suspensia se filtrează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de
35...40°C, până la 1/10 din volumul inițial (91), când rezultă o suspensie microcristalină, care 17 se menține 24 h la temperatura de 5...10’C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,41 apă distilată, până la pH neutru, se usucă la tem- 19 peratura de 105’C, timp de 3 h și se pulverizează.
Se obținminimum 570 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul 21 bioactiv de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (57 I) amestec de solvenți constituit 23 din: 90 volume (51,3 I) alcool etilic 95c+ 10 volume (5,7 l)apă structurată „I (pH=1,8...2,6), prin încălzire la 80'C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40’C, 25 până la 1/5 din volumul inițial (11,41), rezultând o suspensie microcristalină, care se menține 24h la temperatura de 5...10°C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, 27 precipitatul se spală cu 0,4 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105’C, timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 480 g pulbere albă, microcristalină, 29 constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de 94,2% constituit din: 78,1 % acid ursolic, 11,2% acid oleanolic și 4,9% alți acizi triterpenici constituiți 31 din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final de minimum 50% raportat la conținutul de 3% acizi 33 triterpenici ai materiei prime vegetale prelucrate.
Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern 35 (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Exemplul 3. Varianta A. Obținerea complexului bioactivde acizi triterpenici la scară 37 industrială din flori sau frunze de Sambucus nigra (soc) kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din flori sau frunze de 39 Sambucus nigra, cu un conținut de 2...3% acizi triterpenici, se extrag cu 500 I solvent de extracție, constituit din: 90 volume (450 I) acetonă + 10 volume (50 I) apă structurată „I, cu 41 pH= 1,8...2,6 prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30’C), după care se colectează minimum 400 I soluție extractivă care se trece pe o coloană croma- 43 tografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid la temperatura de 35...40’C, până la volumul de 40 I, obținându-se 45 o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10’C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. 47
RO 120950 Β1
Rezultăminimum 600 g pulbere verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un conținut de minimum 70%.
în scopul purificării produsului se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid, constituit din 90 volume (54 I) alcool etilic 95c + 10 volume (61) apă structurată „I cu pH = 1,8...2,6 în care se adaugă pentru dizolvare, 600 g pulbere constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici brut (calculându-se pentru 1 g substanță -100 ml amestec de solvenți); suspensia se încălzește la 80’C, timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se filtrează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40°C, până la 1/10 din volumul inițial (61), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de
5.. .10’C, pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,3 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105’C, timp de 3 h și se pulverizează.
Se obținminimum 400 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (401) amestec de solvenți constituit din 90 volume (361) alcool etilic 95c +10 volume (41) apă structurată „I (pH = 1,8...2,6), prin încălzire la 80’C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40°C, până la 1/5 din volumul inițial (8 I), rezultând o suspensie microcristalină, care se filtrează sub vid, precipitalul se spală pe filtru cu 0,3 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105’C, timp de 3 h și se pulverizează.
Rezultăminimum 330 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, cristalizat, cu un conținut de 91,8% constituit din: 76,2% acid ursolic, 11,1% acid oleanolic și 4,5% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final de minimum 50%, raportat la conținutul de 2% acizi triterpenici ai materiei prime vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Varianta B. 30 kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din flori sau frunze de Sambucus nigra, cu un conținut de 2...3% acizi triterpenici, se extrag cu 500 I solvent de extracție, constituit din: 90 volume (450 I) alcool etilic 95c + 10 volume (50 I) apă structurată „I (pH= 1,8 ...2,6), prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colectează minimum 400 I soluție extractivă, care se trece pe o coloană cromatografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40Ό, până la volumul de 401, obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10’C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 600 g pulbere galbenă, slab verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un conținut deminimum 70%.
Pentru purificarea produsului brut se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid, constituit din 90 volume (54 I) acetonă + 10 volume (6 I) apă structurată „I cu un pH=1,8...2,6 în care se adaugă, pentru dizolvare, 600 g pulbere constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici brut (calculându-se pentru 1 g substanță -100 ml amestec de solvenți); suspensia se încălzește la 80’C timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se filtrează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40’C, până la 1/10 din volumul inițial (6 I), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de
5.. .10’C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,3 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3 h și se pulverizează.
RO 120950 Β1
Se obțin minimum 400 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul 1 bioactiv de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (40 I) amestec de solvenți constituit 3 din: 90 volume (361) alcool etilic 95c +10 volume (4 I) apă structurată „I (pH=1,8...2,6), prin încălzire la 80°C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40°C, până 5 la 1/5 din volumul inițial (8 I), rezultând o suspensie microcristalină, care se filtrează sub vid, precipitalul se spală pe filtru cu 0,3 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la 7 temperatura de 105°C, timp de 3h și se pulverizează.
Rezultă minimum 325 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioac- 9 tiv de acizi triterpenici, cristalizat, cu un conținut de 91,5% constituit din: 77,1% acid ursolic, 10,3% acid oleanolic și 4,1% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre 11 acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final deminimum 50% raportat la conținutul de 2% acizi triterpenici ai materiei prime 13 vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, 15 spray).
Exemplul 4. Varianta A. Obținerea complexului bioactivde acizi triterpenici la scară 17 industrială din herba Crataegus species kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din herba (frunze cu 19 flori) de Crataegus sp. cu un conținut de 2,5...3,5% acizi triterpenici, se extrag cu 500 I solvent de extracție, constituit din: 90 volume (4501) acetonă + 10 volume (501) apă structurată 21 „I, cu pH= 1,8...2,6 prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colecteazăminimum 400 I soluție extractivă care se trece pe o 23 coloană cromatografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid la temperatura de 35...40°C, până la volumul de 40 I, 25 obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. 27
Rezultă minimum 1000 g pulbere verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un conținut de minimum 70%. 29 în scopul purificării produsului se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid, constituit din 90 volume (90 I) alcool etilic 95c + 10 volume (10 I) apă structurată „I cu pH = 31
1,8...2,6 în care se adaugă pentru dizolvare, 1000 g pulbere constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici brut (calculându-se pentru 1 g substanță -100 ml amestec de solvenți); 33 suspensia se încălzește la 80°C, timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se fii- 35 trează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40°C, până la 1/10 din volumul inițial (10 I), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la 37 temperatura de 5...10°C, pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,2 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, 39 timp de 3 h și se pulverizează.
Se obțin minimum 500 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul 41 bioactiv de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (50 I) amestec de solvenți constituit 43 din 90 volume (451) alcool etilic 95° +10 volume (51) apă structurată „I (pH = 1,8...2,6), prin încălzire la 80°C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40°C, până 45 la 1/5 din volumul inițial (101), rezultând o suspensie microcristalină, care se filtrează sub vid, precipitalul se spală pe filtru cu 0,2 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la 47 temperatura de 105°C, timp de 3h și se pulverizează.
RO 120950 Β1
Rezultă minimum 450 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, cristalizat, cu un conținut de 92,6%, constituit din: 76,5% acid ursolic, 12% acid oleanolic și 4,1% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final de minimum 55%, raportat la conținutul de 2,5% acizi triterpenici ai materiei prime vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Varianta B. 30 kg materie primă vegetală, uscată și pulverizată, constituită din herba (frunze cu flori) de Crataegus sp. cu un conținut de 2,5...3,5% acizi triterpenici, se extrag cu 5001 solvent de extracție, constituit din: 90 volume (4501) alcool etilic 95c + 10 volume (50 I) apă structurată „I (pH= 1,8 ...2,6), prin macerare dinamică, timp de 12 h, la temperatura ambiantă (15...30°C), după care se colectează minimum 400 I soluție extractivă, care se trece pe o coloană cromatografică cu 2 kg cărbune activ granulat acid, rezultând o soluție extractivă purificată, care se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40°C, până la volumul de 40 I, obținându-se o suspensie care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C, după care se filtrează sub vid, iar precipitatul de pe filtru se usucă la 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 1000 g pulbere galbenă, slab verzuie, care constituie complexul bioactiv de acizi triterpenici brut, cu un conținut de minimum 70%.
Pentru purificarea produsului brut se utilizează amestecul de solvenți cu pH acid, constituit din 90 volume (90 I) acetonă + 10 volume (10 I) apă structurată „I cu un pH=1,8...2,6 în care se adaugă, pentru dizolvare, 1000 g pulbere constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici brut (calculându-se pentru 1 g substanță -100 ml amestec de solvenți); suspensia se încălzește la 80°C timp de 1 h, până la dizolvarea completă a substanței, iar soluția galbenă rezultată se tratează cu 0,1 ...0,3% m/v cărbune activ acid; suspensia se filtrează, soluția obținută se concentrează sub vid, la temperatura de 35...40°C, până la 1/10 din volumul inițial (101), când rezultă o suspensie microcristalină, care se menține 24 h la temperatura de 5...10°C pentru finalizarea cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul se spală cu 0,2 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3 h și se pulverizează. Se obțin minimum 500 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 85%, care se purifică prin recristalizare astfel: substanța se dizolvă în 100 volume (501) amestec de solvenți constituit din: 90 volume (451) alcool etilic 95c +10 volume (5 I) apă structurată „I (pH=1,8...2,6), prin încălzire la 80°C, timp de 1 h, iar soluția obținută se concentrează sub vid, la 35...40°C, până la 1 /5 din volumul inițial (101), rezultând o suspensie microcristalină, care se filtrează sub vid, precipitatul se spală pe filtru cu 0,2 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C, timp de 3h și se pulverizează.
Rezultă minimum 430 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, cristalizat, cu un conținut de 93% constituit din: 77,8% acid ursolic, 10,7% acid oleanolic și 4,5% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, ceea ce reprezintă un randament final de minimum 53% raportat la conținutul de 2,5% acizi triterpenici ai materiei prime vegetale prelucrate. Acest bioprodus este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (tablete, capsule, soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray).
Exemplul 5. Obținerea complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de sare de Na
200 g pulbere complex bioactiv cristalizat de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 90%, obținut conform modului de lucru descris în exemplele de realizare nr. 1,2 și 3 se dizolvă în 20 I (raport 1/100 m/v) amestec de solvenți constituit din: 90 volume (18 I) alcool etilic 95c + 10 volume (2 I) apă structurată „S (pH = 10...12), care conține 1% NaOH, prin încălzire la reflux (80°C), obținându-se o soluție limpede care se concentrează sub vid
RO 120950 Β1 la temperatura de 4O...45°C, până la 1/4 din volumul inițial (51), rezultând o suspensie micro- 1 cristalină, care se menține 24 h, la temperatura de 5...10°C, în vederea finalizării cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul de pe filtru se spală cu minimum 0,11 apă distilată 3 până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105°C timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 190 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triter- 5 penici, sub formă de sare de Na a acizilor ursolic, oleanolic și a altor acizi triterpenici precum: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, cu un conținut de 90%, ceea ce 7 reprezintă un randament de fază de 95%. Bioprodusul este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel 9 oftalmic, spray).
Exemplul 6. Obținerea complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de 11 sare de K
200 g complex bioactiv cristalizat de acizi triterpenici, cu un conținut de minimum 13 90%, obținut conform modului de lucru descris în exemplele 1, 2 și 3, se dizolvă în 20 I amestec de solvenți constituit din: 90 volume (18 I) alcool etilic 95c + 10 volume (2 I) apă 15 structurată „S (pH =10...12), care conține 1% KOH, prin încălzire la reflux (80°C); soluția limpede rezultată se concentrează sub vid la temperatura de 40...45°C, până la 1/4 din volumul 17 inițial (5 I), rezultând o suspensie microcristalină, care se menține 24 h, la temperatura de
5...10°C, în vederea finalizării cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul de pe 19 filtru se spală cu minimum 0,11 apă distilată până la pH neutru, se usucă la temperatura de 105’C timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 190 g pulbere albă, microcristalină, 21 constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, sub formă de sare de K a acizilor ursolic, oleanolic și altor acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiur- 23 solie, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, cu un conținut de 90%, ceea ce reprezintă un randament de fază de 95%. 25
Bioprodusul este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern (colire, gel oftalmic, spray). 27
Exemplul 7. Obținerea complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de sare de NH4 29
200 g complex bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, cu un conținut de minimum 95%, obținut conform modului de lucru descris în exemplele 1, 2 și 3, se dizolvă în 20 I 31 amestec de solvenți constituit din: 90 volume (18 I) alcool etilic 95°C + 10 volume (2 I) apă structurată „S (pH = 10...12), care conține 5% NH4OH 25%, prin încălzire la reflux (80°C); 33 soluția limpede rezultată se concentrează sub vid la temperatura de 40..,45°C, până la 1/4 din volumul inițial (51), rezultând o suspensie microcristalină, care se menține 24 h, la tempe- 35 ratura de 5... 10°C, în vederea finalizării cristalizării, după care se filtrează sub vid, precipitatul de pe filtru se spală cu minimum 0,1 I apă distilată până la pH neutru, se usucă la tempera- 37 tura de ΙΟδ'Ό timp de 3 h și se pulverizează. Rezultă minimum 190 g pulbere albă, microcristalină, constituită din complexul bioactiv de acizi triterpenici, sub formă de sare de NH4 39 a acizilor ursolic, oleanolic și altor acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic, cu un conținut de minimum 41 90%, ceea ce reprezintă un randament de fază de 95%. Bioprodusul este utilizabil la condiționarea unor medicamente de uz intern (soluții injectabile și buvabile) sau de uz extern 43 (colire, gel oftalmic, spray).
Caracterizarea analitică a complexului bioactiv de acizi triterpenici 45
Caracterizarea calitativă și cantitativă a complexului bioactiv de acizi triterpenici, obținut conform invenției, s-a efectuat prin utilizarea metodelor de analiză spectrofotometrică, 47 cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), gaz-cromatografie cuplată cu spectrometru de masă (GC-MS) și rezonanța magnetică nucleară 13C (13C-RMN). Metoda spectrofo- 49 tometrică utilizată are drept scop evaluarea conținutului total de acizi triterpenici și se bazează pe formarea unui complex al acestor acizi cu vanilina, care absoarbe la 550 nm. 51
RO 120950 Β1
Datele experimentale obținute sunt următoarele:
Caracterizarea complexului bioactiv de acizi triterpenici prin metoda spectrofotometrică
| Planta | Salvia species | Lavandula species | Sambucus nigra | Crataegus species | ||||
| Proba | 1 A | 1 B | 2A | 2B | 3A | 3B | 4A | 4B |
| Conținut total % | 96,6 | 96,7 | 93,7 | 94,2 | 91,8 | 91,5, | 92,6 | 93 |
Prin metoda HPLC s-a realizat caracterizarea cantitativă a acidului o eanolicși acidului ursolic din complexul bioactiv de acizi triterpenici, aplicând metoda standardului extern în următoarele condiții:
- coloana cromatografică cu fază inversă C18,
- fază mobilă: metanol/acid formic 0,1 M;
- detecție în UV (205 nm).
Prin metoda de cromatografie lichidă semipreparativă, GC-MS și 13C-RMN s-a stabilit calitativ conținutul total de 4... 10% alți acizi triterpenici, prezenți în complexul bioactiv de acizi triterpenici, alături de acidul ursolic și acidul oleanolic, ca fiind unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic după cum se poate observa din cromatogramele prezentate în figură.
Datele experimentale obținute sunt următoarele:
Caracterizarea prin HPLC a complexului bioactiv de acizi triterpenici
| Exemple de realizare a invenției | |||||
| Salvia species | 1A | 1B | |||
| Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alți acizi triterpenici (%) | Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alti acizi > triterpenici* (%) |
| 80,9 | 10,2 | 5,5 | 80,4 | 11,7 | 4,6 |
| Lavandula species | 2A | 2B | |||
| Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alți acizi triterpenici (%) | Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alți acizi triterpenici* (%) |
| 77,5 | 10,1 | 6,1 | 78,1 | 11,2 | 4,9 |
| Sambucus nigra | 3A | 3B | |||
| Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alți acizi triterpenici (%) | Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alti acizi triterpenici* (%) |
| 76,2 | 11,1 | 4,5 | 77,1 | 10,3 | 4,1 |
| Crataegus species | 4A | 4B | |||
| Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alți acizi triterpenici (%) | Acid ursolic (%) | Acid oleanolic (%) | Alti acizi 1 triterpenici* (%) |
| 76,5 | 12 | 4,1 | 77,8 | 10,7 | 4,5 |
* Determinați cantitativ indirect prin metoda spectofotometrica și HPLC
RO 120950 Β1
Teste toxicologice șl farmacologice preclinice 1
Testele farmacotoxicologice preclinice „in vivo au urmărit evaluarea toxicității acute a complexului bioactiv de acizi triterpenici, efectuată pe două specii de rozătoare: șoarece 3 si șobolan si evidențierea activității specifice a bioprodusului, la șobolani Wistar tineri și bătrâni și la iepuri Chinchilla. 5
Studiile farmacotoxicologice au evidențiat că valoarea potențialului toxic (pT) al complexului bioactiv de acizi triterpenici este mai mică de 2,00 (pT<1,85), ceea ce determină 7 încadrarea bioprodusului în grupa substanțelor „practic netoxice.
în continuare, se prezintă rezultatul testărilor referitoare la activitatea farmacologică 9 specifică a complexului bioactiv de acizi triterpenici.
A. Activitatea de bioreglare metabolică în procesele de îmbătrânire 11
Având în vedere că o serie de plante medicinale aparținând familiei Labiatae, care conțin drept componente bioactive predominante acizii triterpenici, sunt utilizate în medicina 13 tradițională din diverse țări și ca remedii pentru prevenirea sau tratarea îmbătrânirii, studiile farmacologice referitoare la activitatea specifică a complexului bioactiv de acizi triterpenici 15 (CBAT) au fost orientate spre evidențierea și evaluarea influenței complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra prevenirii și/sau încetinirii proceselor de îmbătrânire. 17
/. Activitatea de bioreglare a metabolismului proteic
Deși fenomenele biologice și biochimice legate de procesul de îmbătrânire nu sunt 19 încă complet elucidate, rezultatele studiilor experimentale relevă importanța unor factori responsabili de apariția senescenței dintre care se pot menționa: 21
- sinteza de proteine cu o structură alterată, datorită deficienței funcționale a enzimelor ce catalizează diverse etape ale sintezei proteice;23
- efectele unor analogi de aminoacizi și baze azotate, componente ale acizilor nucleici, asupra longevității; astfel, s-a demonstrat că analogii de aminoacizi (exemplu:25
DL-etionina, DL-seleno-metionina) pot fi inclușiîn lanțul polipeptidical proteinelor enzimatice, diminuând activitatea acestora și determinând scurtarea semnificativă a duratei de viață.27
Testele aplicate în scopul evidențierii influenței complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra metabolismului proteic au constat în evaluarea proteinelor serice a cola- 29 genului din piele la șobolani Wistar tineri și bătrâni, în condiții normale de creștere, precum și în condiții de stimulare a proceselor de îmbătrânire printr-un mecanism de diminuare a 31 activității proteinelor enzimatice prin administrarea DL-etioninei. De asemenea, s-a urmărit relația doză-efect la nivelul conținutului și sintezei de proteine hepatice la șobolani Wistar 33 bătrâni. Datele experimentale obținute sunt prezentate în tabelele 1,2.
Din tabel se constată următoarele: 35
- tratamentul cu complex bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) administrat concomitent cu DL-etionina determină o intensificare mai accentuată a ritmului de creștere la animalele 37 bătrâne față de cele tinere;
- eficiența selectivă a CBAT asupra animalelor bătrâne este demonstrată și în cazul 39 evaluării proteinelor totale serice, precum și a fracțiunii de colagen solubil din piele, la animalele cărora li s-a administrat DL-etionina; datele obținute demonstrează scăderea semni- 41 ficativă a proteinelor serice și a colagenului solubil din piele, în cazul șobolanilor bătrâni la care apoi tratamentul cu CBAT stimulează sinteza proteică. 43
I
I
’C
R
ο Di
•Ku.
'p < 0,05; bp < 0,005 vs. martor
| Φ | >co |
| 4—» Φ | s |
| 4—’ D | o |
| ω | CL t- |
| 0 | 8 |
| ω 4-* ω | >«J ro | >ro |
| 4-4 o Φ | o CL | ro 4— |
| 0 | o o | Έ |
co CM co
RO 120950 Β1
- administrarea DL-etioninei influențează diferențiat creșterea în greutate a animalelor, în funcție de vârsta acestora, animalele bătrâne prezentând o încetinire a ritmului de creștere cu 12,75% față de martor, comparativ cu 5,09% la animalele tinere;
- tratamentul cu complex bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) administrat concomitent cu DL-etionina determină o intensificare mai accentuată a ritmului de creștere la animalele bătrâne față de cele tinere;
- eficiența selectivă a CBAT asupra animalelor bătrâne este demonstrată și în cazul evaluării proteinelor serice, precum și a fracțiunii de colagen solubil din piele, la animalele cărora li s-a administrat DL-etionina; datele obținute demonstrează scăderea semnificativă a proteinelor serice și a colagenului solubil din piele în cazul șobolanilor bătrâni la care tratamentul cu CBAT stimulează sinteza proteică.
Tabelul 2
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra proteinelor hepatice la șobolani Wistar bătrâni.
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t- Studenția p< 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Proteine hepatice inițiale, (mg/g țesut) | Diferența (%) ’ | Sinteza de proteine hepatice, (dpm/mg prot.) | Diferența (%) ’ | |
| Martor (n=10) | 155,4±3,18 | - | 5,76±0,69 | - |
| CBAT 50 mg/kgm.c. (n=10) | 168,8±4,96a | +8,62 | 8,11±0,78b | +40,8 |
| CBAT 100 mg/kg m.c. (n=10) | 182,2±7,2a | +17,24 | 8,78±0,91b | +52,4 |
ap = 0,01, bp=0,001 vs.martor
Din tabel rezultă că administrarea complexul bioactiv de acizi triterpenici determină creșterea conținutului de proteine hepatice, în funcție de doză, corelată cu intensificarea sintezei proteinelor hepatice la animale bătrâne, la care acest proces este încetinit.
Rezultatele obținute și prezentate în tabelele nr. 1 și 2 demonstrează că, complexul bioactiv de acizi triterpenici acționează în mod selectiv asupra organismelor îmbătrânite, redresând modificările determinate de vârstă ale metabolismului proteic, ceea ce justifică utilizarea terapeutică curativă a bioprodusului în procesele degenerative ale colagenului vascular, articular, tisular și dermic, precum și în terapia preventivă geriatrică.
II. Activitatea de bioreglare a metabolismului glucidic
Studiul influenței complexului bioactiv de acizi triterpenici asupra metabolismului glucidic s-a efectuat prin testarea efectelor sale hipoglicemiante în diabetul zaharat experimental la șobolani albi Wistar, indus cu ajutorul a doua modele experimentale: cu streptozotocină, respectiv cu prednison.
a. Diabetul zaharat indus cu streptozotocină
Inducerea diabetului streptozotocinic s-a efectuat prin procedeul clasic utilizat în cercetările de diabetologie, care prevede administrarea intravenoasă la șobolani albi Wistar, ce au fost privați de hrană timp de 18 h, a unei soluții de streptozotocină în tampon citrat 0,01 M, în doză de 50 mg/100 g m.c; după 1 h s-a administrat intraperitoneal 1 ml glucoza soluție apoasă 30%, iar la 24 h de la injectarea streptozotocinei, s-a verificat instalarea diabetului experimental.
RO 120950 Β1
Lotul de animale cu diabet indus experimental a fost tratat cu complex bioactiv de acizi triterpenici doză de 50 mg/100 g m.c, timp de 10 zile, după care s-au investigat parametrii metabolismului glucidic: glicemia, glicogenul hepatic și aspectele histologice ale pancreasului, tiroidei, splinei și timusului, ca principale glande endocrine implicate în homeostazia glucidică. Pentru evaluarea activității antioxidante s-a determinat nivelul superoxid-dismutazei (SOD) hepatice.
Datele experimentale obținute sunt prezentate în tabelul 3.
Tabelul 3
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra unor parametri ai metabolismului glucidic la șobolani albi Wistar, cu diabet indus experimental cu streptozotocină.
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t-Student la p< 0,05
| Lot | Parametru | ||||
| Glicemia (mg %) | Diferență fată de I martor (%) | Glicogen hepatic (mg/100 g țesut) | Diferență 1 față de martor (%) | SOD hepatic U/mg proteine | |
| LM (n=12) | 84,22 ± 4,08 | - | 567+20,82 | - | 45,2±1,3 |
| LS (n=12) | 190,08±4,93a | + 125,69 | 1596±80,33a | +181,48 | 36,9±2,1a |
| LSCBAT (n=12) | 170,16 ±728a b | +102,04 | 1218±29,54ac | +114,81 | 43,6±1,9b |
LM = lot martor normal;
LS - lot martor cu diabet indus cu streptozotocină 50 mg/100 g m.c;
LSCBAT= lot cu diabet tratat cu CBAT 50 mg/100 g m.c/zi, 10 zile.
ap < 0,001 vs martor normal;
bp < 0,05 și cp < 0,001 vs. martor cu diabet
Datele obținute și prezentate în tabelul 3 evidențiază efectul hipoglicemiant al complexului bioactiv de acizi triterpenici, manifestat atât prin scăderea cantității de glucoza circulantă, cât, mai ales, prin reducerea semnificativă a glicogenului hepatic la lotul de șobolani Wistar cu diabet indus și tratați cu complex bioactiv de acizi triterpenici (CBAT). Rezultatele investigațiilor histologice asupra pancreasului endocrin, tiroidei, splinei și timusului au demonstrat că în condițiile diabetului streptozotocinic, administrarea complexului bioactiv de acizi triterpenici determină o acțiune protectoare asupra morfofuncționalității acestor organe, concretizată prin contracararea efectelor toxice la nivel celular ale streptozotocinei și prevenirea alterărilor la nivelul acizilor nucleici.
b. Diabetul zaharat steroidic indus cu prednison în baza datelor studiilor experimentale care au demonstrat ca excesul endogen sau exogen de glucocorticosteroizi determină efecte diabetogene și antiinsulinice, manifestate prin hiperglicemie, gluconeogeneză hepatică crescută și insulinorezistentă tisulară, s-a studiat activitatea hipoglicemiantă a complexului bioactiv de acizi triterpenici prin aplicarea modelului experimental de inducere a diabetului zaharat la șobolani albi Wistar, prin administrare intragastrică de prednison-acetat, în doze de 3 mg/100 g m.c./zi, timp de 10 zile, comparativ cu un lot diabetizat în același condiții și tratat cu complexul bioactiv de acizi triterpenici, în doze de 50 mg/100 g m.c./zi, timp de 10 zile, după care s-au efectuat determinări biochimice ale glicemiei și colesterolului seric total, având în vedere efectul hipercolesterolemiant al glucocorticosteroizilor.
RO 120950 Β1
Rezultatele experimentale obținute sunt prezentate în tabelul 4.
Din tabelul 4 rezultă că la lotul de șobolani cu diabet experimental indus cu prednison, administrarea concomitentă a complexului bioactiv de acizi triterpenici determină scăderea semnificativă a glicemiei și o revenire la normal a valorilor colesterolului seric total, produsul bioactiv testat anihilând efectul hipercolesterolemiant al prednisonului.
Aceste rezultate, coroborate cu cele prezentate în tabelul 3 demonstrează că, complexul bioactiv de acizi triterpenici influențează favorabil metabolismul glucidic, având efecte hipoglicemianteîn condițiile diabetului experimental, precum și hipocolesterolemiante, ceea ce justifică aplicarea bioprodusului în terapia antidiabetică, asociată cu hiperlipidemie, în special în obezitatea diabetică.
Tabelul 4
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra glicemiei și colesterolului seric total la șobolani albi Wistar, cu diabet experimental indus cu prednison.
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t - Student la p < 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Glicemia (mg %) | Diferență fată de martor (%) | Colesterol seric (mg %) | Diferență fată de ! martor (%) | |
| LM (n=10) | 75± 3,86 | - | 119±3,02 | - |
| LP (n=10) | 140±3,18a | +86,66 | 160±2,30a | +34,45 |
| LPCBAT (n=10) | 105±4,42ab | +40,00 | 120±2,85ab | +0,84 |
LM = lot martor normal;
LP - lot martor cu diabet indus cu prednison 3 mg/100 g m.c/zi, 10 zile;
LPCBAT= lot cu diabet tratat cu CBAT 50 mg/100 g m.c/zi, 10 zile;
ap < 0,001 vs martor normal;
bp < 0,001 vs. martor cu diabet
III. Activitatea de bioreglare a metabolismului lipidic
Acțiunea hipolipidemiantă și antiateromatoasă a complexului bioactiv de acizi triterpenici s-a evidențiat pe un model experimental de ateromatoză la iepure, în care au fost asociați în dieta aterogenă, o parte din factorii de risc din patologia umană. Experimentul a fost efectuat pe iepuri adulți din rasa Chinchilla, repartizați în următoarele loturi:
LMr = lot martor - dieta standard 42 zile;
LMA = lot martor cu ateromatoză - dieta aterogenă 42 zile;
LF= lot administrare concomitentă dietă aterogenă + Fluvastatina 1,5 mg/kg m.c.p.o.; LCBAT= lot administrare concomitentă dietă aterogenă + 50 mg CBAT/kg m.c.p.o./zi. în cadrul experimentului s-a urmărit influența complexului bioactiv de acizi triterpenici comparativ cu cea a Fluvastatinei asupra dislipidemiei induse de administrarea dietei eterogene, prin evaluarea gradului de ateromatoză la nivelul aortei și măsurarea următorilor parametrii biochimici sanguini: trigliceride, colesterol total, lipoproteinele LDL și HDL, raportul colesterol/HDL, transaminazele (TGO.TGP), creatinfosfokinaza, obținându-se următoarele rezultate:
RO 120950 Β1
Tabelul 5
Efectul complexului bioactiv de acizi triterpenici comparativ cu Fluvastatina asupra procesului de ateromatoză la iepurii tratați cu dietă aterogenă
| Nr. animal/lot și sexul animalului | Punctajul de evaluare a gradului de ateromatoză la nivelul aortei | |||
| LMr | LMA | LF | LOBAT | |
| 1M | 1 | 2 | 0 | 0 |
| 2M | 1 | 4 | 1 | 3 |
| 3M | 0 | 4 | 2 | 2 |
| 4F | 1 | 2 | 1 | 0 |
| 5F | 0 | 1 | 1 | 3 |
| 6F | 0 | 3 | 0 | 0 |
| Punctaj/lot | 3 | 16 | 5 | 8 |
puncte = fără leziuni ale endarterei;
punct = una sau mai multe plăci mici (sub 1 mm);
puncte = 1 placă mare (peste 1 mm) și mai multe plăci mici;
puncte = mai multe plăci mari;
puncte = majoritatea aortei lezată.
Tabelul 6 Acțiunea hipolipidemiantă a complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) comparativ cu Fluvastatina, asupra unor fracțiuni lipidice la loturi de iepuri tratați cu dieta aterogenă
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t - Student la p<0,05
| Lot | Parametri | |||
| Colesterol (mg/dl) | TG (mg/dl) | Lipo LDL (mg/dl) | Colesterol/ HDL | |
| LMr (n=6) | 95,3314,72 | 145,00138,94 | 48,62+16,67 | 7,09+2,13 |
| LMA (n=6) | 948,50+180,75® | 222,83162,97b | 877,551180,51a | 29,92111,51® |
| LF (n=6) | 315,401225,50d | 147,53+60,53f | 255,63+218,90’ | 10,3114,78® |
| LOBAT (n=6) | 378,251191,319 | 100,00126,39d | 331,04+191,529 | 13,85+6,67® |
ap < 0,001 vs LMr, bp < 0,05 vs Lmr, cp = 0,01 vs LMr, dp< 0,003, ep< 0,001, fp< 0,002, sp < 0,004 vs LMA
Tabelul 7 Influența tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) și respectiv cu Fluvastatina, asupra unor parametri biochimici sanguini, la iepurii hrăniți cu dieta aterogenă timp de 42 de zile.
| Semnifica | ia diferenței mediilor prin testul „t - Student la p< 0,05 | ||
| Lot | Parametru | ||
| TGO (U/l) | TGP (U/l) | Creatinfosfokinază (U/l) | |
| LMr (n=6) | 63,33119,86 | 86,57+37,43 | 1678,331274,04 |
| LMA (n=6) | 59,53130,06 | 86,69135,27 | 1760,00+1144,17 |
| LF (n=6) | 243,06+152,52® | 169,19138,77® | 7997,5014660,74® |
| LOBAT (n=6) | 64,4+12,41 | 71,53123,96 | 2556,51941,4 |
ap < 0,05 vs LMr
RO 120950 Β1
Din analiza datelor prezentate în tabelele 5,6,7 rezultă următoarele concluzii: 1
a. Dieta aterogenă administrată zilnic timp de 42 de zile la iepurii din lotul martor de ateromatoză induce un proces avansat de ateromatoză la nivelul aortei care este corelat cu 3 creșterea semnificativă a trigliceridelor, colesterolului, lipoproteinelor LDL și mărimea raportului colesterol/HDL; 5
b. Complexul bioactiv de acizi triterpenici administrat timp de 42 de zile la iepuri în doza de 50 mg/kg m.c. p.o. prezintă o acțiune antiateromatoasa semnificativă, evidențiată 7 prin mărimea scorului/lot comparativ cu valorile corespunzătoare lotului martor de ateromatoză LMA; 9
c. Fluvastatina administrată în doza de 1,5 mg/kg m.c.p.o. la iepure, deși are acțiune antiateromatoasa semnificativă, induce efecte adverse severe, manifestate prin: 11
- creșteri semnificative ale transaminazelorTGO, TGP și creatinfosfokinazei;
- scăderea continuă a masei corporale, în ultima săptămâna căpătând un aspect dis- 13 trofic, cu pierderea blănii pe zone întinse ale corpului;
- la examenul anatomopatologic microscopic, s-au evidențiat modificări de culoare, 15 consistentă și volum ale ficatului, însoțite și de formațiuni tumorale cu diametru de 4...6 mm.
d. în aceleași condiții experimentale, tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triter- 17 penici nu a determinat efectele adverse hepatotoxice ale Fluvastatinei.
e. Datele experimentale obținute si prezentate în tabelele nr. 5, 6, 7 demonstrează 19 activitatea hipolipidemiantă și antiaterogenă semnificativă a complexului bioactiv de acizi triterpenici, ceea ce justifică utilizarea sa terapeutică în tratamentul hiperlipidemiilor cu risc 21 ridicat de boală coronariană și al celor asociate cu diabet.
B. Activitatea imunoprotectoare a complexului bioactiv de acizi triterpenici în terapia 23 cu glucocorticosteroizi șl citostatice
I. Efectul imunoprotector in terapia cu glucocorticosteroizi 25
Având în vedere că atât terapia cu glucocorticosteroizi, cât și o serie de maladii grave (cancer, viroze) se caracterizează printr-o depresie limfocitară drastică, urmată de depresia 27 răspunsului imun al organismului, s-a urmărit influența administrării complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) pe un model experimental adecvat pentru studiile imunobiologice; 29 modelul constă în inducerea experimentală a depresiei limfocitare prin administrarea unei doze unice de cortizon, 6 mg/100g m.c, la șobolani albi Wistar. Ulterior, animalelor li s-a 31 administrat complexul bioactiv de acizi triterpenici în doze de 50 respectiv 100 mg/kg m.c, timp de 3 zile. Datele experimentale obținute sunt prezentate în tabelele nr. 8, 9,10 unde: 33
LM= lot martor; LC=lot tratat cu Cortizon-acetat; LCCBAT 50= lot tratat cu Cortizon-acetat + CBAT 50 mg/kg m.c; LCCBAT 100 = lot tratat cu Cortizon-acetat + CBAT 100 mg/kg m.c. 35
RO 120950 Β1
Tabelul 8
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra greutății absolute și relative a timusului la șobolani Wistar după administrarea de Cortizon-acetat Semnificația diferenței mediilor prin testul „t” - Student la p < 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Greutate absolută a timusului, (mg) | Diferența față de martor, % | Greutate relativă a timusului (mg/100 g corp) | Diferența 1 față de martor, % | |
| LM (n=16) | 198,25±4,98 | - | 145,60±6,75 | - |
| LC (n=20) | 79,30±6,45a | -60 | 57,96±6,03a | -60,10 |
| LCCBAT 50 (n=20) | 130,48±8,21ab | -34,18 | 89,93 ± 5,85ab | -40,15 |
| LCCBAT 100 (n=20) | 135,10±9,05ab | -31,85 | 93,60 ± 6,48ab | - 37,71 |
ap < 0,001 vs. Martor, bp < 0,001 vs. Cortizon-acetat.
Din tabel rezultă că, la nivelul timusului - organ de joncțiune între homeostazia neuroendrocrină și imunologică a organismului - tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici contracarează în mare parte involuția timică produsă de cortizon-acetat, manifestată prin scăderea drastica a limfocitelor.
Datele experimentale prezentate în tabelul 9 evidențiază scăderea proteinelor serice totale după administrarea Cortizon-acetatului, rezultatul obținut fiind în concordanță cu efectele adverse cunoscute ale corticosteroizilor asupra metabolismului proteic. Tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici determină refacerea conținutului de proteine serice totale la valoarea martorului.
De asemenea, administrarea Cortizonului-acetat determină și o scădere a proteinelor hepatice, care este redresată prin tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici, astfel încât, la ambele loturi se înregistrează o creștere a proteinelor hepatice cu peste 6% față de valoarea martorului și cu 11,6%, față de lotul tratat cu Cortizon-acetat.
Tabelul 9
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra conținutului de proteine serice totale și hepatice la șobolani Wistar, după administrarea de Cortizon-acetat
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t - Student la p< 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Proteine serice totale (g/100 ml ser) | Diferența față de martor (%) | Proteine hepatice (mg/g țesut) | Diferența față de martor (%) | |
| LM (n=10) | 8,67±0,15 | - | 122,78±2,8 | - |
| LC (n=10) | 7,73±0,11a | -10,84 | 117,65±2,32 | -4,18 |
| LCCBAT 50 (n=10) | 8,57+ 0,32 | -1,15 | 131,15±4,07c | +6,82 |
| LCCBAT 100 (n=10) | 9,02±0,14b | +4,04 | 131,31±3,26c | +6,95 |
ap < 0,05 vs. Martor, bp < 0,001 vs. Cortizon-acetat, cp < 0,01 vs. Cortizon-acetat.
RO 120950 Β1
Din tabelul 10 rezultă că tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici nu 1 numai că redresează scăderea numărului de leucocite produsă de administrarea Cortizon-acetatului, ci chiar stimulează creșterea numărului acestora peste valoarea martorului. 3
Tabelul 10
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra 5 numărului de leucocite și de gama-globuline serice, la șobolani Wistar, după administrare de Cortizon-acetat 7
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t - Student la p< 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Leucocite (celule/mm3 sânge) | Diferența față de martor (%) | Gama-globuli ne serice (g/100 ml ser) | Diferența, față de martor (%) | |
| LM (n=10) | 7907,5+256,3 | - | 1,6610,14 | - |
| LC (n=10) | 54641601 | -30,9 | 1,45+0,05 | -12,65 |
| LCCBAT50 (n=10) | 8484+929,5a | +7,3 | 1,75+0,06c | +5,42 |
| LCCBAT100 (n=10) | 9120+994,5b | +15,3 | 2,00+0,09c | +20,48 |
ap<0,01 vs. Cortizon-acetat, bp<0,001 vs. martor și Cortizon-acetat, cp<0,01 vs. Cortizon-acetat.
ap<0,01 vs. Cortizon-acetat, bp<0,001 vs. martor și Cortizon-acetat, cp<0,01 vs. Cortizon-acetat.
Din tabel rezultă și că scăderea gama-globulinelor serice după administrarea Corti- 21 zon-acetatului este redresată prin revenirea acestora peste valoarea martorului la ambele loturi tratate cu CBAT.Creșterea fracțiunii gamaglobulinice demonstrează rolul stimulator al 23 CBAT în procesele imunobiologice ale organismului, concomitent cu efectele antiimunosupresoare semnificative în terapia cu glucocorticosteroizi. 25
II. Efectul imunoprotector șl hepatoprotector în terapia cu citostatice
Studiile clinice oncologice au evidențiat că ciclofosfamida și alte citostatice prezintă 27 o multitudine de efecte adverse, dintre care se menționează:
- mielodepresie, deprimarea hematopoezei: leucopenie, trombocitopenie;29
- involuția timusului, atrofia glandelor suprarenale și a splinei;
- hepatotoxicitate, datorită metabolizării la nivel hepatic;31
- efecte imunosupresoare și citotoxice la nivelul țesuturilor și organelor sănătoase ale organismului;33
- ca si alți agenți alchilanți, ciclofosfamida are proprietăți carcinogene, cu riscul dezvoltării unor tumori secundare sau leucemii acute.35 în scopul evidențierii activității imunoprotectoare (antiimunosupresoare) a complexului bioactiv de acizi triterpenici, s-a utilizat un model experimental care preconizează inducerea 37 imunosupresiei prin tratament citostatic la șobolani Wistar cu ascită tumorală Walker 256 provocată prin administrarea intraperitoneală a unui inocul tumoral de 105 celule/animal. 39 Animalele au fost tratate după cum urmează:
LM = lot martor căruia i s-a administrat ser fiziologic; 41
LCf= lot cu inocul tumoral de 105 celule/animal căruia i s-a administrat ciclofosfamida în doză de 15 mg/kg m.c. p.o./zi; 43
LCfCBAT= lot cu inocul tumoral de 105 celule/animal căruia i s-a administrat ciclofosfamida în doză de 15 mg/kg m.c. p.o./zi și 100 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/kg 45 m.c.p.o./zi.
RO 120950 Β1
Administrarea a început la 24 h după inocularea celulelor tumorale și a fost efectuată pe toată perioada de supraviețuire a fiecărui animal din loturile astfel tratate; după 21 zile de tratament s-au efectuat determinări biochimice și hematologice, iar la sfârșitul experimentului s-au efectuat investigații histopatologice, înregistrându-se rezultatele prezentate în tabelul nr. 11.
Din tabel rezultă că tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici, pe fondul imunosupresiei severe determinată de ciclofosfamida are ca efect farmacologic creșterea semnificativă a numărului de leucocite la animalele supresate și tratate cu complex bioactiv de acizi triterpenici față de cele din lotul netratat.
Totodată, se constată și o creștere semnificativă a numărului de hematii, depășind valoarea martorului.
Tabelul 11
Efectul tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra numărului de leucocite și de hematii la șobolani Wistar cu ascită tumorală Walker 256, după administrare de ciclofosfamidă Semnificația diferenței mediilor prin testul „t - Student la p < 0,05
| Lot | Parametru | |||
| Nr. de leucocite (celule/mm3 sânge) | Diferența față de martor (%) | Nr. de hematii (mii.celule/ mm3 sânge) | Diferența față de martor (%) | |
| LM (n=11) | 8.977±432 | - | 7,586 + 0,169 | - |
| LCf (n=12) | 2.143±203a | -76,12 | 6,525 ±0,141a | -13,98 |
| LCfCBAT 100 (n=12) | 3.915 ±386a b | - 56,38 | 7,936 + 0,271c | + 4,6 |
ap<0,001 vs. martor, bp<0,01 vs. ciclofosfamidă, °p<0,001 vs. ciclofosfamidă
Datorită metabolizării la nivel hepatic, tratamentul cu ciclofosfamidă a indus și efecte hepatotoxice manifestate prin creșteri semnificative ale tuturor parametrilor biochimici plasmatici investigați, comparativ cu valorile lotului martor. Asocierea complexului bioactiv de acizi triterpenici, în doză de 100 mg/kg m.c. p.o., la tratamentul cu ciclofosfamidă 15 mg/kg m.c. p.o. în ascita tumorală Walker 256 menține parametrii biochimici investigați la valori apropiate de valorile medii ale lotului martor, după cum rezultă din tabelul nr. 12.
Activitatea hepatoprotectoare evidențiată prin datele experimentale biochimice din tabelul nr. 12 este în concordanță cu rezultatele investigațiilor histopatologice ultrastructurale obținute în cadrul evaluării influenței complexului bioactiv de acizi triterpenici asupra efectelor adverse hepatotoxice ale ciclofosfamidei și anume:
- în urma tratamentului șobolanilor Wistar cu ciclofosfamidă, hepatocitele prezintă o dereglare a metabolismului lipidic, nucleii celulelor hepatice suferind un proces de mărire la un volum dublu față de martor, iar ultrastructura nucleolilor este alterată, indicând afectarea sintezei acizilor nucleici și a biosintezei proteinelor celulare;
- tratamentul cu complexul bioactiv de acizi triterpenici reduce alterările produse de ciclofosfamidă în structura hepatocitelorși în activitatea lor metabolică, astfel efectul ciclofosfamidei de acumulare a lipidelor în hepatocite este anihilat, acțiunea protectoare a complexului bioactiv de acizi triterpenici determinând metabolizarea ciclofosfamidei fără producerea de alterări structurale;
- complexul bioactiv de acizi triterpenici contracarează și efectul ciclofosfamidei de inhibare a sintezei acizilor nucleici, prezenta poliribozomilor indicând o creștere a sintezei proteinelor structurale.
RO 120950 Β1
Tabelul 12 Efectul hepatoprotector al asocierii complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) cu ciclofosfamidă asupra unor parametri biochimici sanguini in a scita Walker 256 la șobolani, comparativ cu ciclofosfamidă
Semnificația diferenței mediilor prin testul “t” - Student la p <0,05
| Lot | Parametri biochimici | ||||
| GOT (U/l) | GPT (U/l) | Y-GT (U/l) | Fosfatază alcalină (U/l) | Bilirubinemia (mg/dl) | |
| LM (n=6) | 191,33±34,94 | 27,81 ±5,66 | 7,00±1,41 | 485,83±50,19 | 0,45±0,04 |
| LCf (n=6) | 269,58+91,77a | 37,50±4,23a | 25,72+7,30b | 828,17±155,17c | 0,63±0,07c |
| LCfCBAT (n=6) | 168,50±41,44d | 26,01±6,03c | 5,60±1,86f | 467,00+51,94e | 0,47±0,023 |
ap<0,05; bp< 0,002; cp< 0,003 vs. M dp<0,05; ap<0,01; fp<0,001; 9p<0,003 vs. Cf
Datele experimentale comparative obținute demonstrează că, complexul bioactiv de acizi triterpenici, în administrare concomitentă cu ciclofosfamidă, contracarează efectele adverse hepatotoxice și imunosupresoare ale acesteia, ceea ce justifică aplicarea bioprodusului ca hepatoprotector și antiimunosupresor în terapia oncologică cu citostatice.
C. Activitatea complexului bioactiv de acizi triterpenici de influențare a evoluției tumorilor în modelul experimental de tumoră canceroasă Walker 256 formă ascitică indusă la șobolani Wistar, s-a mai evidențiat că, complexul bioactiv de acizi triterpenici influențează favorabil evoluția tumorilor. Datele experimentale obținute sunt prezentate în tabelul nr. 13.
Tabelul 13 Influența tratamentului cu complexul bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) asupra perioadei de latență până la apariția tumorii canceroase și a timpului mediu de supraviețuire. Semnificația diferenței mediilor prin testul „t Student la p< 0,05
| Lotul testat | Parametri | |
| Perioada de latență până la apariția tumorii (zile/lot) | Timp mediu de supraviețuire (zile/lot) | |
| LMT (n=10) | 7,20±0,42 | 22,00±6,04 |
| LTCBAT (n= 10) | 8,90+1,66a | 24,60±5,83b |
ap = 0,002, bp < 0,001 vs. martor;
LMT = lot martor cu tumoră;
LTCBAT = lot cu tumoră + CBAT 100 mg/kg m.c.
Potențialul cancerigen al liniei tumorale Walker256, utilizată pentru realizarea tumorii canceroase ascitice, precum și mărimea inoculului tumoral au fost corespunzătoare, deoarece incidența tumorală la lotul utilizat ca martor de cancerizare inoculat cu 105 celule/animal este de 100%.
Din tabel se constată că, complexul bioactiv de acizi triterpenici, în doza de 100 mg/kg m.c., p.o., la șobolani Wistar inoculați cu 105 celule/animal a produs creșteri
RO 120950 Β1 semnificative ale perioadei de latență de la inoculare până la apariția tumorilor canceroase și timpului mediu de supraviețuire, comparativ cu perioada de latență de la inoculare până la apariția tumorii canceroase și timpul mediu de supraviețuire la lotul martor de cancerizare, inoculat în aceleași condiții.
D. Activitatea antiinflamatoare locală a complexului bioactiv de acizi triterpenici
Evaluarea activității antiinflamatoare locale a complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT), comparativ cu Indometacinul, s-a efectuat pe șoareci cărora li s-a indus o inflamație la nivelul urechii cu TPA (12-0-tetradecanoylphorbol acetat), în cadrul a două tipuri de experimente:
1. experiment acut: imediat după aplicarea unei doze de TPA (2,5 pg/ureche) pe ambele fețe ale urechilor, pe urechea dreaptă s-a aplicat CBAT (în diferite doze); după 4 ore animalele au fost sacrificate și s-au făcut biopsii circulare cu diametrul de 6 mm din fiecare ureche ce au fost cântărite imediat;
2. experiment cronic: s-a desfășurat pe o perioada de 10 zile; administrarea de TPA s-a efectuat în zilele 1,3, 5, 8, 9 și 10, iar CBAT a fost administrat în zilele 8,9,10 la ora 10 odată cu administrarea TPA și la ora 16; animalele au fost sacrificate la sfârșitul experimentului și s-au făcut biopsii circulare cu diametrul de 6 mm din fiecare ureche, care s-au cântărit.
Rezultatele celor două experimente sunt prezentate în tabelul 14.
Datele experimentale obținute în cadrul celor două experimente aplicate și prezentate în tabelul 14 evidențiază că, complexul bioactiv de acizi triterpenici prezintă o activitate antiinflamatoare locală semnificativă statistic, acționând ca agent antiflogistic, care inhibă procesele inflamatorii exudative și proliferative.
Activitatea Complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT) în doză de 0,4 pmoli/cm2 este comparabilă cu cea a Indometacinei - utilizată ca medicament antiinflamator de referință și testată în aceleași condiții experimentale.
Tabelul 14
Activitatea antiinflamatoare locală a complexului bioactiv de acizi triterpenici (CBAT), comparativ cu Indometacina
Semnificația diferenței mediilor prin testul „t Student la p<0,05
| Lot | Experiment acut | Experiment cronic | ||||
| Masă fragment biopsie (mg) | Activitate antiinflamatoare (%) | Masă fragment biopsie (mg) | Activitate antiinflamatoare (%) | |||
| u.s. | u.d. | u.s. | u.d. | |||
| LM (n=10) | 8,3+0,5 | - | 8,3±0,5 | - | ||
| LTC (n=10) | 16,31+2,1 | 10,41±1,6a | 73,66 | 18,32±0,6 | 11,83±0,8a | 64,77 |
| LTC2 (n=10) | 14,76±1,5 | 10,63±1,3a | 63,93 | 17,47±1,9 | 12,44±0,7a | 54,85 |
| LTC3 (n=10) | 15,02+1,7 | 12,06±1,6b | 44,9 | 16,45+2,1 | 13,5+1,1° | 36,2 |
| LTI (n=10) | 17,79±1,9 | 11,11±0,8a | 70,35 | 16,6±1,1 | 10,8±0,4a | 69,8 |
u.s. = urechea stângă (martor inflamație); u.d. = urechea dreaptă;
LM = lot martor absolut; LTC1 = lot TPA + CBAT 0,4 pmoli/cm2 ureche;
LTC2 = lot TPA + CBAT 0,25 pmoli/cm2 ureche; LTC3 = lot TPA + CBAT 0,1 pmoli/cm2 ureche; LTI = lot TPA + Indometacin 0,4 pmoli/cm2 ureche;
ap < 0,00001, bp < 0,05, cp<0,005 vs. martori corespunzători
RO 120950 Β1
Rezultatele obținute justifică utilizarea terapeutică a complexului bioactiv de acizi tri- 1 terpenici în formule farmaceutice de uz extern destinate tratamentului local al diferitelor procese inflamatorii, ca: dermatoze inflamatorii și pruriginoase, escare, arsuri, psoriazis, stări 3 inflamatorii post-operatorii, post-traumatice și reumatismale.
Exemple de condiționare a complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de pro- 5 duse medicamentoase în baza rezultatelortestelorfarmacologice efectuate, complexul bioactiv de acizi triter- 7 penici ca atare, sau sub formă de săruri de Na, K sau NH4, se poate condiționa sub formă de produse medicamentoase de uz intern sau extern, destinate unor domenii clinice cu largă 9 incidență socială aparținând terapeuticii umane sau veterinare. Produsele medicamentoase descrise în continuare, conform invenției, se administrează în terapeutica umană sau veteri- 11 nară, pe cale injectabilă, orală sau locală, timp de 1 zi - 24 luni, în funcție de evoluția bolii, în doze zilnice de 10-1000 mg/kg, m.c, divizate în 1-6 prize. Exemplele de formulare pre- 13 zentate în continuare nu exclud posibilitatea realizării altor formule de condiționare, având în vedere diversitatea și multitudinea excipienților cunoscuți și utilizați în industria 15 farmaceutică.
Exemplul 8. Produs medicamentos condiționat ca soluție injectabilă conținând 2%17 complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:19
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na min. 90%............ 21g
- alcool benzilic...............................................100ml 21
- soluție apoasă tampon fosfat pH=8 ..............................100ml
- propilenglicol............................................ad. 1000 ml 23
Modul de preparare: pulberea de acizi triterpenici - sare de Na, se dizolvă la cald (60...70’0) în 200 ml amestec 1/1 v/v alcool benzilic: propilenglicol, se adaugă sub agitare 25 restul de propilenglicol și soluția apoasă de tampon fosfat cu pH = 8, iar soluția limpede rezultată se filtrează aseptic și se condiționează în fiole de 1 ml sau 2 ml, care conțin 20 mg/ml 27 complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na.
Produsul se administrează curativ, în doza 1...3 fiole/zi, timp de 1...6 luni, având 29 următoarele efecte farmacologice: antitumoral, imunoprotector, hepatoprotector, antiulceros, hipoglicemiant, hipolipidemiant, antiaterosclerotic, antiinflamator, tonifiant vascular, în special 31 la nivel coronarian în următoarele maladii: neoplasm, hepatite acute și cronice, ciroză hepatică, depleții ale sistemului imunitar survenite în urma tratamentului cu glucocorticosteroizi, 33 citostatice.
Exemplul 9. Produs medicamentos condiționat ca emulsie perfuzabilă conținând 1%35 complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:37
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na min. 90%...........10,5g
- ulei soia rafinat.............................................. 100g39
- fosfolipide din ou.............................................. 12g
- glicerina anhidră.............................................. 25 g41
- vitamina E.................................................... 1g
- natriumoleat ................................................0,3 g43
- apă distilată pentru preparate injectabile alcalinizată cu 0,003 g NaOH la pH = 8 .................................ad. 1000 ml 45
Modul de preparare: se încălzește uleiul de soia la 70°C, în care se dizolvă complexul bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na, în soluția rezultată adăugându-se fosfolipidele din 47 ou, vitamina E și oleatul de sodiu. în apa distilată pentru preparate injectabile, alcalinizată
RO 120950 Β1 cu 0,003 g NaOH la pH=8, se adaugă glicerina anhidră; cele doua faze - hidrofilă și lipofilă - se omogenizează într-un omogenizator, la temperatura de 80...90°C și la presiunea de
125.. .220 kg/cm2, în atmosfera de azot, până la dispersarea fazei lipofile, ale cărei picături trebuie să atingă un diametru mediu de 0,5 um. Viscozitatea emulsiei este cuprinsă intre
80.. .125 mPa x s și se condiționează, în condiții aseptice, în flacoane de sticlă sterilizate, în atmosfera de azot. Emulsia perfuzabilă astfel preparată conține 10 mg/ml complex bioactiv de acizi triterpenici și se administrează în doze de 60...100 ml/zi, având următoarele efecte farmacologice: antitumoral, imunoprotector, hepatoprotector, antiulceros, hipoglicemiant, hipolipidemiant, antiaterosclerotic, antiinflamator, tonifiant vascular, în special la nivel coronarian cu utilizări terapeutice, în special în cazurile clinice în care nu sunt posibile administrarea pe cale orală și absorbția enterică, după cum urmează: neoplasm, stadiile lll-IV, depleții severe ale sistemului imunitar, stări de șoc: arsuri grave pe suprafețe mari ale corpului, coma hepatică sau postoperatorie.
Exemplul 10. Produs medicamentos condiționat ca soluție buvabilă conținând 2% complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na min. 90%.............21g
- alcool etilic 95c.............................................. 200ml
-soluție apoasă tampon fosfat pH=8 .............................. 200ml
- p-hidroxibenzoat de metil.........................................1g
- p-hidroxibenzoat de propil........................................2g
- glicerina................................................... 300ml
-propilenglicol ........................................... ad. 1000 ml
Modul de preparare: se prepară un amestec din 200 ml alcool etilic 95c, 300 ml glicerina și 200 ml propilenglicol, în care se dizolvă sub agitare, la cald (6O...7O°C) 21 g complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na. Se adaugă 200 ml soluție apoasă tampon fosfat cu pH=8, restul de propilenglicol în care s-au dizolvat cei doi conservanți prevăzuți în formulă, se agită pentru omogenizare, se filtrează, iar soluția limpede rezultată se condiționează în flacoane de capacitate 100 ml.
Produsul conține 20 mg/ml complex bioactiv de acizi triterpenici sub formă de sare de Na și se administrează în doze de 15...20 ml/zi, timp de 1 ...6 luni, în scop preventiv sau curativ, mai ales în pediatrie, având următoarele efecte farmacologice: antitumoral, antiimunosupresor, hepatoprotector, antiulceros, hipoglicemiant, hipolipidemiant, antiaterosclerotic, antiinflamator, tonifiant vascular, în special la nivel coronarian cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: neoplasm, hepatite acute și cronice, depleții ale sistemului imunitar survenite în urma tratamentului cu glucocorticosteroizi și citostatice, stări inflamatorii post-operatorii și post-traumatice.
Exemplul 11. Produs medicamentos condiționat sub formă de capsule conținând
100 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/capsulă
Formula de condiționare/capsulă:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - min. 90%................... 105mg
- lactoză monohidrat.......................................... 150mg
- glicolat sodic de amidon.......................................9,0mg
- polivinilpirolidonă K30 ........................................6,5mg
- laurii sulfat de sodiu..........................................2,0mg
- aerosil ...................................................1,47mg
- talc......................................................7,25mg
- stearat de magneziu .........................................2,9mg
RO 120950 Β1
Modul de preparare: complexul bioactiv de acizi triterpenici se sitează cu excipienții: lactoză monohidrat și aerosil pe o sită de dimensiunea II. Peste amestecul obținut se toarnă o soluție realizată prin dizolvarea polivinilpirolidonei K 30 în alcool etilic, și se omogenizează. Se obțin granule care se usucă la o temperatură de 35...45’0 și care se mărunțesc apoi la dimensiunea conferită de sită V; se adaugă glicolatul sodic de amidon, lauriIsulfatuI de sodiu, talcul și stearatul de magneziu, se omogenizează, iar pulberea astfel obținută se încapsulează în capsule de mărimea 1. Produsul se administrează în doze de 3...6 capsule/zi, timp de 1 ...24 luni, având următoarele efecte farmacologice: antitumoral, imunoprotector, hepatoprotector, antiulceros, hipoglicemiant, hipolipidemiant, antiaterosclerotic, antiinflamator, tonifiant vascular, în special la nivel coronarian, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: neoplasm, depletii ale sistemului imunitar, hepatite acute și cronice, ciroză hepatică, boală ulceroasă, diabet, tulburări cardiovasculare cu etiologie aterosclerotica, degenerări ale colagenului vascular, tisular și dermic: psoriazis, neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și diferitele manifestări ale insuficienței venoase cronice, afecțiuni vasculare retiniene, aplicabil și în geriatrie pentru prevenirea și încetinirea proceselor de îmbătrânire.
Exemplul 12. Produs medicamentos condiționat sub formă de tablete conținând
100 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/tabletă
Formula de condiționare/tabletă:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - minimum 90% ............ 105,00mg
- lactoză monohidrat........................................ 81,20 mg
- celuloză microcristalină .................................... 74,00 mg
- amidon de porumb........................................ 16,20 mg
- glicolat sodic de amidon..................................... 5,00mg
- polividona................................................ 5,60mg
- stearat de magneziu........................................ 2,00mg
-aerosil................................................... 1,00mg
- talc ..................................................... 5,00mg
Modul de preparare: se aplică procedeele uzuale cunoscute de condiționare a produselor farmaceutice de uz intern sub formă de tablete pe instalații la nivel industrial, cu respectarea regulilor de buna practica de fabricație pentru medicamente prevăzute de legislația europeană.
Produsul se administrează în doze de 3...6 tablete/zi, timp de 1 ...24 luni, având următoarele efecte farmacologice: antitumoral, imunoprotector, hepatoprotector, antiulceros, hipoglicemiant, hipolipidemiant, antiaterosclerotic, antiinflamator, tonifiant vascular, în special la nivel coronarian, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: neoplasm, depleții ale sistemului imunitar, hepatite acute și cronice, ciroză hepatică, boală ulceroasă, diabet, tulburări cardiovasculare cu etiologie aterosclerotica, degenerări ale colagenului vascular, articular și dermic: psoriazis, neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și diferitele manifestări ale insuficienței venoase cronice, afecțiuni vasculare retiniene, aplicabil și în geriatrie pentru prevenirea și încetinirea proceselor de îmbătrânire.
Exemplul 13. Produs medicamentos condiționat sub forma de colir conținând 1% complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90%.......10,5 g
- clorură de benzalconiu.........................................0,1 g
- ulei de ricin rafinat .......................................ad. 1000 ml
Modul de preparare: se dizolvă aseptic în uleiul de ricin rafinat 0,1 g clorură de benzalconiu și 10,5 g complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na, prin încălzire la 70’C, rezultând o soluție limpede, care se filtrează aseptic și se condiționează în flacoane de 10 ml cu dispozitiv de picurare.
RO 120950 Β1
Produsul conține 10 mg/ml complex bioactiv de acizi triterpenici sub formă de sare de Na și se administrează în scop preventiv sau curativ, in doze de 0,2...0,5 ml/zi, timp de 1 ...6 luni, având următoarele efecte farmacologice: trofic și regenerator al colagenului vascular și tisular retinian, antiinflamator, cu utilizări terapeutice oftalmologice: retinopatie diabetică, cataractă, tratamentul post-operator de cataractă, glaucom și transplant de cornee.
Exem piui 14. Produs medicamentos condiționat sub formă de unguent oftalmic conținând 1% complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90% ...... 10,5 g
- alcool cetii stearilic emulsificant.................................. 300g
- vaselină albă ................................................ 350g
- clorură de benzalconiu......................................... 0,1g
- ulei de parafină ..........................................ad. 1000 g
Modul de preparare: se dizolvă aseptic în uleiul de parafină 0,1 g clorură de benzalconiu și 10,5 g complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na, prin încălzire la 70’C, rezultând o soluție slab opalescentă, care se încorporează în amestecul topit la 60°C, format din: 300 g alcool cetii stearilic emulsificant, 350 g vaselină albă cu restul de ulei de parafină și apoi se triturează până la răcire. Rezultă un unguent oftalmic sub formă de masă onctuoasă, omogenă, albă, conținând 1% complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na, care se condiționează aseptic în tuburi de 10 g.
Datorită efectelorfarmacologice de redresare a colagenului vascular și dermic se utilizează în terapia locală oftalmologică, în doze de 10...20 mg/zi, timp de 1...6 luni, având următoarele efecte farmacologice: trofic și regenerator al colagenului vascular și tisular retinian, antiinflamator, cu utilizări terapeutice oftalmologice: retinopatie diabetică, cataractă, tratamentul post-operator de cataractă, glaucom și transplant de cornee.
Exemplul 15. Produs medicamentos condiționat sub formă de gel-uz dermatologic conținând 1 % complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90%....... 10,5g
- Carbopol 940 ................................................. 20g
- glicerină.....................................................60g
- hidroxid de sodiu soluție 15% ....................................10g
- propilen glicol.................................................60g
- p-hidroxibenzoat de metil.........................................1g
- p-hidroxibenzoat de propil........................................2g
- apă structurată „I (pH = 1,8-2,7).............................ad. 1000 g
Modul de preparare: se prepară masa de gel prin dispersarea a 20 g Carbopol 940 în amestecul format din 60 g glicerina cu 837 g apă structurată „I”, în care se dizolvă în prealabil amestecul de conservanți menționat în formulă. Se agita ușor și se lasă în repaus la 15...25°C, după care se adaugă sub agitare lentă amestecul constituit din 10,5 g complex bioactiv de acizi triterpenici, 60 g propilenglicol și 10 g soluție 15% hidroxid de sodiu, reglându-se pH-ul în jur de 7,0 și continuându-se agitarea pentru o bună omogenizare timp de 30 min, după care se ambalează în tuburi conținând 50 g/tub.
Produsul conține 1 % complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na și se administrează în doze de 10...30 mg/zi, timp de 1 ...6 luni, având următoarele efecte farmacologice: trofic și regeneratoral colagenului vascular, tisular, articular și dermic, antiinflamator, antihialuranidazic și antielastazic, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: arsuri, cheloizi
RO 120950 Β1 post-arsuri și post-operatorii, escare, plăgi atone de diferite etiologii, degenerării ale colage-1 nului dermic, vascular, tisularși articular cum ar fi: afecțiuni benigne și maligne ale pielii, psoriazis, dermatoze inflamatorii și pruriginoase, neurodermite, radiodermite, sindrom varicos 3 și post trombotic, insuficiența venoasă cronică, fragilitate vasculară, stări inflamatorii reumatismale, precum și obezitate diabetică sau endocrină.5
Exemplul 16. Produs medicamentos condiționat sub forma de cremă conținând 1% complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na7
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90%.......10,5 g9
- alcool cetilic ................................................ 200g
- vaselină albă................................................ 200 g11
-glicerina 120g
-Tween 80 ................................................... 70 g13
- p-hidroxibenzoat de metil 1 g
-p-hidroxibenzoatde propil ....................................... 2g15
- apă structurată „I (pH = 1,8...2,6) ........................... ad. 1000 g
Modul de preparare: se dizolvă 10,5 g complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de 17 Na, în 120 g glicerina, iar soluția rezultată se incorporează în masa de unguent, obținută prin topirea la 60”C a alcoolului cetilic și vaselinei, urmat de emulsionare prin adăugarea a 70 g 19 Tween 80 și a minimum 400 g apă structurată „I în care s-au dizolvat în prealabil conservanții prevăzuți în formula. Masa de unguent se agită pentru emulsionare și omogenizare, 21 după care se ambalează în tuburi a 50 g.
Produsul se prezintă sub formă de cremă onctuoasă, omogenă, albă, cu absorbție 23 rapidă, conținând 1 % complex bioactiv de acizi triterpenici ca sare de Na, și se administrează în doze de 10...30 mg/zi, timp de 1 ...6 luni, având următoarele efecte farmacologice: trofic 25 și regenerator al colagenului vascular, tisular, articular și dermic, antiinflamator, antihialuronidazic și antielastazic, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: arsuri, cheloizi 27 post-arsuri și post-operatorii, escare, plăgi atone de diferite etiologii, degenerări ale colagenului dermic, vascular, tisularși articular cum ar fi: afecțiuni benigne și maligne ale pielii, pso- 29 riazis, dermatoze inflamatorii și pruriginoase, neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și post trombotic, insuficiența venoasă cronică, fragilitate vasculară, stări inflamatorii reuma- 31 tismale, precum și obezitate diabetică sau endocrină.
Exemplul 17. Produs medicamentos condiționat sub forma de unguent conținând 1%33 complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:35
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90%.......10,5g
-propilenglicol................................................100g37
- clorură de benzalconiu0,1 g
- polietilen glicol 4000 .......................................... 300g 39
- polietilen glicol 400 ....................................... ad. 1000 g
Modul de preparare:se dizolvă prin încălzire la 6O...7O'C 10,5 g complex bioactiv de 41 acizi triterpenici - sare de Na și 0,1 g clorură de benzalconiu în 100 g propilenglicol, iar soluția obținută se încorporează după răcire în masa de unguent rezultată prin topirea la 43
65...70°C a amestecului de 300 g polietilenglicol 4000, cu 590 g polietilenglicol 400. Se amestecă prin agitare ușoară, rezultând o masă onctuoasă, omogenă, albă, care conține 1 % 45 complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na și care se condiționează în tuburi de 50 g.
Produsul se administrează în doze de 10...30 mg/zi, timp de 1...6 luni, având urmă- 47 toarele efecte farmacologice: trofic și regenerator al colagenului vascular, articular și dermic,
RO 120950 Β1 antiinflamator, antihialuronidazicși antielastazic, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: arsuri, cheloizi post-arsuri și post-operatorii, escare, plăgi atone de diferite etiologii, degenerări ale colagenului dermic, vascular, tisular și articular cum ar fi: afecțiuni benigne și maligne ale pielii, psoriazis, dermatoze inflamatorii și pruriginoase, neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și post trombotic, insuficiența venoasă cronică, fragilitate vasculară, stări inflamatorii reumatismale, precum și obezitate diabetică sau endocrină.
Exemplul 18. Produs medicamentos condiționat sub forma de soluție uz extern sau spray conținând 1% complex bioactiv de acizi triterpenici - Sare de Na
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici - sare de Na minimum 90% ...... 1,05 g
- alcool izopropilic ..............................................50 g
-propilenglicol .............................................ad. 100g
Modul de preparare: se prepară amestecul de alcool izopropilic și propilen glicol în care se dizolvă prin încălzire la 7O...8O°C, complexul bioactiv de acizi triterpenici, iar soluția obținută se ambalează în flacoane cu pulverizator de 100 ml sau în flacoane presurizate cu freon.
Produsul se administrează în doze de 1 ...2 g/zi, timp de 1 ...3 luni, având următoarele efecte farmacologice: trofic și regenerator al colagenului dermic, vascular și tisular, antiinflamator, modulator al fluidității membranare, cu utilizări terapeutice în următoarele afecțiuni: arsuri, escare, plăgi atone de diferite etiologii, dermatoze alergice, inflamatorii si pruriginoase, inclusiv psoriazis si radiodermite.
Exemplul 19. Produs medicamentos condiționat sub formă de supozitoare conținând
1% complex bioactiv de acizi triterpenici
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici minimum 90% ................. 1,05 g
- polietilenglicol 400 .............................................. 5g
- para-hidroxibenzoat de metil.................................... 0,1g
- para-hidroxibenzoat de propil .................................. 0,03g
- Suppocire (amestec de trigliceride de semisinteza) ...............ad.100 g
Modul de preparare: se dizolvă complexul bioactiv de acizi triterpenici în polietilenglicol, prin încălzire la 80°C. Soluția obținută se răcește la 40°C și se adaugă peste masa de Suppocire care a fost încălzită în prealabil la 40°C. Se adaugă amestecul de conservanți, se omogenizează și se toarnă în formele de supozitoare care cântăresc fiecare 2,5 g.
Produsul conține 25 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/supozitor și se poate administra în doze de 50...100 mg/zi, timp de 1 ...6 luni, având următoarele efecte farmacologice:antitumoral, imunoprotector, antiinflamator, trofic și regenerator al colagenului vascular, tisular și articular, cu utilizări în următoarele maladii: neoplasm, în special al colonului, stări imunosupresive, mai ales hepatotoxice, survenite după tratamentul cu glucocorticosteroizi, citostatice, afecțiuni inflamatorii reumatismale, sindrom hemoroidal.
Exemplul 20. Produs medicamentos condiționat sub formă de ovule conținând 1 % complex bioactiv de acizi triterpenici
Formula de condiționare:
- complex bioactiv de acizi triterpenici minimum 90% ................. 1,05 g
- polietilenglicol 400 .............................................. 5g
- para-hidroxibenzoat de metil 0,1 g
- para-hidroxibenzoat de propil .................................. 0,03g
- Ovucire (amestec de trigliceride de semisinteză) .................ad.100 g
RO 120950 Β1
Modul de preparare: se dizolvă complexul bioactiv de acizi triterpenici în polietilen- 1 glicol, prin încălzire la 80°C. Soluția obținută se răcește la 40°C și se adaugă peste masa de Ovucire care a fost încălzită în prealabil la 40’C. Se adaugă amestecul de conservanți, se 3 omogenizează și se toarnă în formele de ovule care cântăresc fiecare 2,5 g.
Produsul conține 25 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/ovul și se poate admi- 5 nistra în doze de 25...100 mg/zi, timp de 1 ...6 luni, având următoarele efecte farmacologice: antitumoral, antiinflamator, trofic și regenerator al colagenului dermic și tisular, cu urmă- 7 toarele utilizări terapeutice: afecțiuni tumorale benigne sau maligne la nivelul vaginului și colului uterin, tulburări trofice vulvo-vaginale și cervicite, mai ales în menopauză. 9
Apele structurate I - activată inhibitor și „S activată stimulator se obțin prin introducerea unei ape demineralizate sau distilate, îmbogățită, controlat, cu săruri minerale, pentru 11 a atinge valori ale conductivității între 300...500 pS, într-o coloană paralelipipedică, chimic neutră, cu mai multe celule de structurare compuse din activatoare cu câte doi electrozi 13 lamelari, unul negativ și altul pozitiv, din plasă inox, dispuși de o parte și de alta a unui sandwich de membrane poroase, inerte chimic și în urma proceselor de interacție dintre structurile 15 moleculare dipolare ale apei cu câmpul electrostatic generat între electrozi are loc un proces prin care se asigură ordonări, polarizări și energia necesară de legare prin punți de hidrogen 17 cu radicali negativi [R”J, rezultând apă structurată „I - activată inhibitor cu pH=1,8...2,6 și conductivitate între 1200...2500 pS, care se evacuează din spațiile din stânga, respectiv 19 dreapta electrozilor pozitivi ai fiecărui activator, iar în spațiile dintre electrozii negativi, de generare a apei structurate S - activată stimulator se asigură ordonări, polarizări și energia 21 necesară de legare prin punți de H și HO a moleculelor de apă în agregate polimoleculare cu radicali pozitivi [R+] rezultând apa structurată S - activată stimulator cu pH-ul între 23
10...12 și conductivitatea cuprinsă între 800...1300 pS.
Claims (12)
- Revendicări1. Complex bioactiv de acizi triterpenici, caracterizat prin aceea că are un conținut de acizi de minimum 90%, format din: minimum 75% acid ursolic, 10...15% acid oleanolic și 294.. .10% acizi triterpenici cum arfi: acid hidroxiursolic, acid hidroxioleanolic, acid betulinic, acid dehidrobetulinic, obținut sub formă de acizi în stare liberă sau ca săruri de Na, K, NH4 31 prin extracție din următoarele specii de plante: Salvia species, Lavandula specis, Sambucus nigra și Crataegus species prezentând următoarele efecte farmacologice: 33- activitate de bioreglare a metabolismului proteic, glucidic și lipidic, în special asupra organismelorîmbătrânite, cu aplicații în terapia preventivă și curativă a maladiilor metabolice 35 și cardiovasculare cu etiologie aterosclerotică, în special în geriatrie;- activitate imunoprotectoare și hepatoprotectoare, de contracarare a efectelor adver-37 se imunosupresoare și hepatotoxice, survenite după tratamentul cu glucocorticosteroizi și citostatice;39- activitate de întârziere a evoluției tumorilor;- activitate antioxidantă;41- activitate antiinflamatoare locală.
- 2. Complex bioactiv de acizi triterpenici, conform revendicării 1, caracterizat prin 43 aceea că, în scopul creșterii biodisponibilității și solubilități produsului în solvenții de condiționare, acesta se obține și se utilizează și sub formă de săruri de Na, de K sau de NH4, de 45 puritate minimum 90%, constituite din: minimum 75% ursolat de Na sau de K sau de NH4,10.. .15% oleanolat de Na sau de K sau de NH4 și 4...10% săruri de Na, de K sau de NH4 ale 47 altor acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic. 49RO 120950 Β1
- 3. Complex bioactiv de acizi triterpenici, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se obține din următoarele materii prime vegetale:- herba Salvia species: Salvia officinalis, Salvia lavandulifolia, Salvia triloba, Salvia sclarea etc;- herba Lavandula species: Lavandula angustifolia, Lavandula vera, Lavandula spica, Lavandula fragrans, Lavandula latifolia etc;- deșeul de lavandă, rezultat la obținerea uleiului volatil, prin antrenare cu vapori de apă;- flori sau frunze de Sambucus nigra;- frunze și flori de herba Crataegus species: Crataegus monogyna și Crataegus oxyacantha.
- 4. Procedeu de obținere a complexului bioactiv de acizi triterpenici, definit în revendicarea 1, caracterizat prin aceea că materia primă vegetală uscată și pulverizată, cu 2...4% acizi triterpenici, constituită din Salvia species herba, Lavandula species herba - care poate fi rezultată și ca deșeu la obținerea uleiului volatil prin antrenare cu vapori de apă, Sambucus nigra - flori sau frunze sau Crataegus species herba, se extrage prin macerare dinamică în raportul 1/15...1/30 m/v, masă vegetală/solvent, cu unul dintre solvenții de extracție reprezentați de amestecurile constituite din: 5...15% apă structurată „I cu 85...95% acetonă sau cu 85...95% alcool etilic 95c, timp de 8...24 h, la 15...80’0, rezultând soluția extractivă, care, în scopul purificării, se trece pe o coloană cromatografică cu cărbune activ granulat cu pH acid, apoi se concentrează sub vid la temperatura de 35...40°C, până la 1/10... 1/20 din volumul inițial, obținându-se o suspensie care se menține timp de 12...24 h la 5...10°C, apoi se filtrează sub vid, substanța obținută după uscare la 105°C, timp de 3 h, constituind complexul bioactiv de acizi triterpenici brut cu un conținut de minimum 70%, care, în vederea purificării, se dizolvă la reflux - 80° C - în raportul 1/100 ...1/200 m/v în unul dintre solvenții reprezentați de amestecurile constituite din: 5... 10% apă structurată „I sau „S cu 90...95% alcool etilic 95c sau cu 90...95% acetonă; soluția obținută se purifică prin adsorbție pe cărbune activ cu pH acid, adăugat în raportul 0,1 ...0,3% m/v, se filtrează, se concentrează sub vid la 35...40°C până la 1/10... 1/20 din volumul inițial, suspensia microcristalină rezultată se lasă 12...24 h la 5...10°C pentru finalizarea cristalizării, se filtrează sub vid, precipitatul obținut se spală cu 0,3...0,5 I apă distilată, până la pH neutru, se usucă la 105°C minimum 3 h și se pulverizează, rezultând complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat obținut prin 1 ...2 cristalizări în funcție de tipul materiei prime vegetale prelucrate la aceiași parametri cu excepția celei de-a doua concentrări care se face la 1/5 din volumul inițial, cu un conținut de minimum 90% reprezentat de: minimum 75% acid ursolic, 10... 15% acid oleanolic și 4...10% alți acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic, betulinic, dehidrobetulinic.
- 5. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că, în vederea obținerii complexului bioactiv de acizi triterpenici sub formă de săruri de Na, de K și de NH4, definit în revendicarea 2, complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat cu un conținut de minimum 90% se dizolvă la reflux la 80°C în raportul 1/100... 1/200 m/v în amestecul de solvenți cu pH alcalin: 90...95% alcool etilic 95c cu 5...10% apă structurată S, cu pH=10...12, care conține și 1% NaOH sau 1% KOH sau 5% NH4OH 25%, soluția obținută se concentrează sub vid la 35...40°C până la 1/5...1/10 din volumul inițial, suspensia rezultată se menține12...24 h la 5...10°C pentru finalizarea cristalizării, urmată de filtrare sub vid, spălarea precipitatului cu 0,1...0,3 I apă distilată până la pH neutru, uscare la 105°C, timp de 3 h și pulverizare, rezultând complexul bioactiv de acizi triterpenici cristalizat, ca sare de Na sau de K sau de NH4, cu un conținut de minimum 90% constituit din: minimum 75 % ursolat de Na sauRO 120950 Β1 de K sau de NH4,10... 15% oleanolat de Na sau de K sau de NH4 și 4... 10% săruri de Na, 1 de K sau de NH4 ale altor acizi triterpenici constituiți din unul sau mai mulți dintre acizii: hidroxiursolic, hidroxioleanolic betulinic, dehidrobetulinic. 3
- 6. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar, caracterizat prin aceea că, conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în 5 revendicările 1 și 2, condiționat ca soluție injectabilă sau emulsie perfuzabilă sau soluție buvabilă de uz pediatric care conține 1 ...2% complex bioactiv de acizi triterpenici, ca atare 7 sau sub formă de săruri fiind aplicabil cu precădere în următoarele maladii: neoplasm, hepatite acute și cronice, ciroză hepatică, depleții ale sistemului imunitar, survenite în urma trata- 9 mentului cu glucocorticosteroizi, citostatice, afecțiuni reumatice inflamatorii sau degenerative.
- 7. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar, caracterizat prin aceea că, 11 conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de tablete sau capsule operculate tari și/sau 13 gelatinoase moi, ce conțin între 50 și 100 mg complex bioactiv de acizi triterpenici/capsulă, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: neoplasm, depleții ale sistemului imunitar, 15 hepatite acute și cronice, ciroză hepatică, boală ulceroasă, diabet, tulburări cardiovasculare cu etiologie aterosclerotică, degenerări ale colagenului vascular, tisular și dermic: psoriazis, 17 neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și diferitele manifestări ale insuficienței venoase cronice, afecțiuni vasculare retiniene, aplicabil și în geriatrie pentru prevenirea și încetinirea 19 proceselor de îmbătrânire.
- 8. Produs medicamentos caracterizat prin aceea că, conține ca substanță farma- 21 ceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de colir sau unguent oftalmic ce conține 0,5...1% complex bioactiv de acizi triter- 23 penici, ca atare sau sub formă de săruri, cu utilizări terapeutice oftalmologice: retinopatie diabetică, cataractă, în tratamentul post operatoriu de cataractă, glaucom și transplant de 25 cornee.
- 9. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar caracterizat prin aceea că, 27 conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de gel sau de cremă sau de unguent ce conține 29 0,1...1% complex bioactiv de acizi triterpenici, ca atare sau sub formă de săruri, cu utilizări terapeutice în următoarele maladii: arsuri, cheloizi post-arsuri și postoperatorii, escare, plăgi 31 atone de diferite etiologii, degenerări ale colagenului dermic, vascular, tisular și articular cum ar fi: afecțiuni benigne și maligne ale pielii, psoriazis, dermatoze inflamatorii și pruriginoase, 33 neurodermite, radiodermite, sindrom varicos și post trombotic, insuficiență venoasă cronică, fragilitate vasculară, stări inflamatorii reumatismale, precum și obezitate diabetică sau 35 endocrină.
- 10. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar caracterizat prin aceea că, 37 conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de soluție uz extern sau spray ce conține 0,5...1% 39 complex bioactiv de acizi triterpenici, ca atare sau sub formă de săruri, cu utilizări terapeutice în următoarele afecțiuni: arsuri, escare, plăgi atone de diferite etiologii, dermatoze alergice, 41 inflamatorii și pruriginoase, inclusiv psoriazis și radiodermite.
- 11. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar, caracterizat prin aceea că, 43 conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de supozitoare ce conțin 0,5...1% complex bioactiv 45RO 120950 Β11 de acizi triterpenici, cu utilizări în următoarele maladii: neoplasm, în special al colonului, stări imunosupresive, mai ales hepatotoxice survenite după tratamentul cu glucocorticosteroizi 3 și citostatice, afecțiuni inflamatorii reumatismale, sindromul hemoroidal.
- 12. Produs medicamentos de uz uman și/sau veterinar, caracterizat prin aceea că, 5 conține ca substanță farmaceutic activă complexul bioactiv de acizi triterpenici definit în revendicările 1 și 2, condiționat sub formă de ovule ce conțin 0,5...1% complex bioactiv de 7 acizi triterpenici, cu următoarele utilizări terapeutice: tulburări trofice vulvo-vaginale și cervicite, afecțiuni tumorale benigne sau maligne la nivelul vaginului și colului uterin.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200500117A RO120950B1 (ro) | 2005-02-18 | 2005-02-18 | Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice |
| EP06716833A EP1848449A2 (en) | 2005-02-18 | 2006-02-15 | Bioactive complex of triterpene acids, its production process and medicinal products with therapeutical uses |
| PCT/RO2006/000003 WO2006088385A2 (en) | 2005-02-18 | 2006-02-15 | Bioactive complex of triterpene acids, its production process and medicinal products with therapeutical uses |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200500117A RO120950B1 (ro) | 2005-02-18 | 2005-02-18 | Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO120950B1 true RO120950B1 (ro) | 2006-10-30 |
Family
ID=36608522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA200500117A RO120950B1 (ro) | 2005-02-18 | 2005-02-18 | Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1848449A2 (ro) |
| RO (1) | RO120950B1 (ro) |
| WO (1) | WO2006088385A2 (ro) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102006020582A1 (de) * | 2006-05-03 | 2007-11-15 | Gesellschaft zur Förderung der Krebstherapie e.V. | Verfahren zur Herstellung einer triterpensäurehaltigen wässrigen Lösung, triterpensäurehaltige wässrige Lösung und deren Verwendung |
| EP1925213A1 (en) * | 2006-11-24 | 2008-05-28 | DSMIP Assets B.V. | Dietary and pharmaceutical compositions comprising a sage extract comprising a mixture of tricyclic diterpenes and their derivatives and their uses |
| EP1925302A1 (en) | 2006-11-24 | 2008-05-28 | DSMIP Assets B.V. | Dietary or pharmaceutical compositions containing tricyclic diterpenes and derivatives thereof for the treatment of depression |
| WO2011144639A1 (en) * | 2010-05-18 | 2011-11-24 | Bionorica Se | Extract of parts of sambucus for use in the treatment of inflammatory processes, intimal hyperplasia and vein graft disease |
| CN102697901A (zh) * | 2010-06-23 | 2012-10-03 | 天津中医药大学 | 山楂叶及其提取物的新用途 |
| ITGE20110041A1 (it) * | 2011-04-12 | 2012-10-13 | Ct Di Sperimentazione Ed Assist Enza Agricola | Metodo di ottenimento di acido carnosico e triterpeni, come composti puri o come fitocomplessi arricchiti, da piante della famiglia delle lamiaceae |
| CN103596546B (zh) * | 2011-05-12 | 2016-10-26 | 荷兰联合利华有限公司 | 皮肤提亮组合物 |
| WO2013021258A1 (en) * | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Council Of Scientific & Industrial Research | Anti-tubercular compounds |
| PT106278B (pt) | 2012-04-26 | 2018-01-03 | Raiz Inst De Investigação Da Floresta E Papel | Método para a obtenção de um extrato rico em ácidos triterpénicos a partir da casca de eucalipto |
| PT106536A (pt) * | 2012-09-13 | 2014-03-13 | Ecbio Investigaç O E Desenvolvimento Em Biotecnologia S A | Composição de ácidos triterpenoides obtidos do extrato de thymus mastichina e suas utilizações medicinais |
| WO2014071506A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | Bioniche Life Sciences Inc. | Compounds for reducing glucocorticoids, and methods of treatment thereof |
| TWI535447B (zh) * | 2013-04-11 | 2016-06-01 | 馮文光 | 抑制腫瘤生長之草藥萃取物 |
| CN103285112A (zh) * | 2013-05-23 | 2013-09-11 | 山东省中医药研究院 | 一种从山楂中提取山楂三萜酸的方法 |
| RU2582297C1 (ru) * | 2014-10-30 | 2016-04-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия" Министерства Здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава России) | Лекарственное средство, обладающее гипохолестеринемическим, гиполипидемическим действием |
| CN112409440A (zh) * | 2021-01-04 | 2021-02-26 | 湖南德诺健康管理集团有限公司 | 一种以迷迭香油膏为原料生产熊果酸乳液的方法 |
| CN114159406B (zh) * | 2021-09-15 | 2022-08-30 | 山东农业大学 | 一种复合抗炎纳米颗粒及其制备方法与应用 |
| CN114609298B (zh) * | 2022-03-30 | 2024-05-10 | 湖南中医药大学 | 一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法及应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5731620A (en) * | 1980-07-30 | 1982-02-20 | Naotake Jiyuunishiyo | Candy enabling to give up smoking |
| CN100395258C (zh) * | 2003-03-28 | 2008-06-18 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 枇杷叶总三萜酸组分及其在制备抗炎、止咳药物中的应用 |
-
2005
- 2005-02-18 RO ROA200500117A patent/RO120950B1/ro unknown
-
2006
- 2006-02-15 EP EP06716833A patent/EP1848449A2/en not_active Withdrawn
- 2006-02-15 WO PCT/RO2006/000003 patent/WO2006088385A2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2006088385A3 (en) | 2006-12-28 |
| EP1848449A2 (en) | 2007-10-31 |
| WO2006088385A2 (en) | 2006-08-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2349337C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины, способ ее получения и ее применение | |
| RO120950B1 (ro) | Complex bioactiv de acizi triterpenici, procedeu de obţinere şi produse medicamentoase cu utilizări terapeutice | |
| Abo-elmatty et al. | Antioxidant and anti-inflammatory effects of Urtica pilulifera extracts in type2 diabetic rats | |
| JP2010500342A (ja) | Ｅｕｒｙｃｏｍａｌｏｎｇｉｆｏｌｉａの極性有機抽出物 | |
| WO2018058261A1 (zh) | 一种治疗银屑病的中药组合物及其制备方法 | |
| AU2017394430A1 (en) | Panax plant extract and pharmaceutical composition and use thereof | |
| ES2719958T3 (es) | Composición medicinal de extracto de semilla de Emblica officinalis y método para prepararla | |
| JPS6352013B2 (ro) | ||
| WO2005003145A1 (en) | Shanzhuyu extract and uses thereof | |
| CN106798762A (zh) | 一种植物提取物及其制备方法和应用 | |
| CN110251524A (zh) | 化合物党参炔苷(Lobetyolin)的制备方法及在药物和保健品中的新用途 | |
| KR102218823B1 (ko) | 지치 추출물을 포함하는 항알러지용 조성물 | |
| TW201943413A (zh) | 含薑黃酮醇a及／或薑黃酮醇b之組合物 | |
| US6440451B1 (en) | Use of crataegus formulations for prophylaxis and treatment of neoplastic diseases | |
| KR101893812B1 (ko) | 13가지 글리세리드를 포함한 의이인오일, 제제 및 그 응용 | |
| CN104873566A (zh) | 一种具有抗肝损伤活性的药物组合物及其应用 | |
| CN103118688B (zh) | 锁阳化学成分作为植物雌激素的新用途 | |
| CN107383150B (zh) | 一种具有抗肝损伤活性的化合物及其制备方法和用途 | |
| US9533019B1 (en) | Calotropis procera extracts as anti-ulcerative colitis agents | |
| CN104945525B (zh) | 黄刺果实多糖及其制备方法和用途 | |
| CN102462797B (zh) | 大蒜总皂苷的制备方法及其应用 | |
| CN114470101A (zh) | 中药组合物及其制备方法、含其的口服剂 | |
| CN105796637A (zh) | 一种抗乳腺癌的中药组合物及其制备方法与应用 | |
| CN103156870A (zh) | 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法 | |
| Delbo et al. | Assessment report on Centella asiatica (L.) Urban, herba |