PT98558A - Processo para a preparacao de peptidos sinteticos que antagonizam neuroquinina ae de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

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CAMPO DA INVENÇÃO 2. ftSO.19

A presente invenção refere-se a peptidos lineares e cíclicos que antagonizam neuroquinina A. A invenção refere-se também a sais dos citados peptidos e aos processos para a preparação dos mencionados pejp tidos e respectivos sais. As abreviaturas utilizadas constam de uma lista no fim da presente memória descritiva. ENQUADRAMENTO GERAL DA INVENÇÃO As taquiquininas são um grupo de peptidos que têm a mesma sequência na extremidade de C Phe -X-Sly-le u-Me t -NH ^ Nos mamíferos, foram identificados, pelo menos, três peptidos pertencentes a este grupo, nomeadamente a substância P (SP), a neuroquinina A (MA) e a neuroquinina B (MB),

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Verificou-se que estes peptidos actuam como neurotransmis-sores, tanto perifericamente como centralmente. Veja-se J. E. Maggio, Peptides 1985, 6, 237 - 245 e P.C. Emson e eol., em Neuropeptides and their Peptidases, Ed. A. J. Turner, El*· lis Horwood, Inglaterra, 1987, páginas 87 - 106. Os resultados farmacológicos e bioquímicos referidos na literatura mostram que a actividade biológica das ta·· quiquininas e mediada, no tecido dos mamíferos, por, pelo menos, três receptores separados, conhecidos como M-l, M2 e NK-3. Veja-se S.H. Buck e eol., Science 1984, 226, 987 -989; R. laufer e col., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1985, 82, 7444 - 7449 e C. M. Lee e col., Eur. J. Pharmaeol., 1986, 13©, 209 - 216. As taquiquininas naturais mostram uma afinidade variável para estes três receptores: SP, NKA e MB são os agonistas mais poderosos dos receptores M-l, M-2 e M-3, respectivamente. No entanto, em elevadas concentrações, as três taquiquininas naturais podem estimular cada um destes três receptores em grau idêntico, em virtude da sua sequência de extremidade C comum, ϋ desenvolvimento de antagonistas capazes de bloquear selectivamente um dos três -1- 35 1 I 5

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30 63.732 Case 44.717 \M^fj i2 A00.ÍS91 receptores para as taquiquininas parece ser, portanto, da maior importância. A primeira geração de antagonistas de ta-quiquinina, como se descreve, por exemplo, na Patente de Invenção Norte-Americana Numero 4 481 139, apresentava, de faç to, uma pequena selectividade (S. H. Buck e S. A. Sbatzer, Life Sei., 1988, 42, 2701 - 2708). Fazendo substituições de aminoácidos do mesmo tipo, mas na sequência da extremidade C de NKA, que é, em si própria, mais selectiva do que SP, descobriram-se já (veja-se Patente de Invenção Italiana Número 9432 A/89) antagonistas de peptidos da segunda geração, com boa selectividade para o receptor NK2. SUMÁRIO BA IMSSQlO 0 objecto da presente invenção é constituído por pej tidos sintéticos lineares e cíclicos com a fórmula geral I X-Asp-Tyr-DTrp-V al-DTrp-i)Trp-Y na qual Y = A-R, em que A é um dos seguintes aminoácidos : Lys, Orn, Glu, Gin, Asp, Asn, His, Ala,β Ala, Vai, Leu, Nle, Ile, Gly, Pro, Trp, Ser, Thr; R = NHg (carboxamida da extremidade 0); X = H (grupo amino livre da extremidade N); ou A é um dos seguintes aminoácidos : Arg, Lys, Orn, Glu, Gin, Asp, Asn, His, Ala,β Ala, Vai, Leu, Nle, Ile, Gly, Pro, Phe, Irp, DTrp, Tyr, Met, Ser, Diir; quando R e X, em conjunto, constituem uma ligação de amida que liga as duas extremidades da cadeia de peptido para for mar um peptido cíclico; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de á-cidos ou bases orgânicos e inorgânicos. Bstes peptidos possuem antagonismo competitivo de neuroquinina A e também têm um elevado grau de selectividade em relação ao receptor NK-2. Os aminoácidos seguintes, mais particularmente, fazem parte do âmbito da presente invenção -2- 35 1 5 10

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- um heptapeptido linear com a segunite fórmula de estrutura: H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-lys-HH^; - um heptapeptido linear com a seguinte fórmula de estrutura: H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Ala-NE^ > - um heptapeptido linear com a seguinte fórmula de estrutura: H-Asp-Tyr-DTrp-V al-DTrp-DTrp-Orn-MHg* - um heptapeptido linear com a seguinte fórmula de estrutura: H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Glu-KH ^; - um heptapeptido linear com a seguinte fórmula de estrutura: H-As p-Tyr-DT rp-Vai -DT r p -DT r p -L e u-IJH 2; - um heptapeptido linear com a seguinte fórmula de estrutura: H. Asp-SCyr-DTrp-Val-DSBrp-DTrp-Hle-HHg > - um heptapeptid© ciclico com a seguinte fórmula de estrutura: H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DCrp-DTrp-Gly-N^í - um heptapeptido cíclico com a seguinte fórmula de estrutura: ciclo [IspTyrDIrpValDTrpDTrpÁrgj; -um heptapeptido cíclico com a seguinte fórmula de estrutura: ciclo [ÃspTyrDTrpValDTrpDTrpLysjj. Os novos peptidos a que se refere o presente pedido de patente podem reduzir ou antagonizar os efeitos patológicos de um excesso de neuroquinina A; são, portanto, úteis no tratamento de artrite, asma, inflamação, desenvolvimento de tumores, hipermotilidade gastrointestinal, coreia de Huntin-gton, neurite, neuralgia, enxaqueca, hipertensão, incontinência urinária, urticária, sintomas do síndroma carcinóidej influenza e constipação vulgar. -3- 35 1 δ

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Os peptidos lineares e cíclicos que são oDjecto da presente invenção podem preparar-se pelos métodos conhecidos da síntese de peptidos, tanto em soldção como em fase sólida como se descreve, por exemplo, em M. BodansWyji^ie Çracti-ce of Peptide Synthesis", Springer-Yerlag, Berlim, Heidel-berg, 1984; J. Stewart e J. Young, «Solid Phase Peptide Syn-thesis", Pierce Chemical Co., Rochford, 1984; E. Atherton e R. C. Sheppara, «Solid Phase Peptide Synthesis», IRE Press, Oxford, 1989. A título de exemplo, não restritivo desereve--se o processo se síntese em fase sólida para a obtenção de peptidos lineares, e o processo de síntese e ciclização em fase solida para a obtenção de peptidos cíclicos. Para se obterem peptidos lineares, com o grupo car-boxilo na extremidade C sob a forma de carboxamida, pelo pro cesso em fase sólida, podem utilizar-se suportes sólidos, tais como a resina 4-metil-benz-hidrilamina (MBHA) ou a “resina para peptidos sob forma de amida. com estratégia Fmoc» (Dod), descrita por J. Knolle e col., Tetrahedron lett., 1987, 28, 5851. K'8 primeiro caso, a função alfa-amino dos aminoácidos é protegida pelo grupo t-butiloxi-carbonilo (BocJ, que pode ser selectivamente desprotegido com áeiao triflúor-acético, sendo a desprotecção final, com simultânea separação do peptido sob a forma de amida do polímero de suporte, realizada com ácido fluorídrico anidro. No caso da resina boa, a função ae alfa-amina dos aminoácidos I protegida pelo grupo 9-fluorenil-metoxi-carbonilo (Emoc), que pode ser desprotegido selectivamente com piperidina, sendo a desprotecção final, com simultânea separação do peptido sob a forma de amida do polímero de suporte, realizada com ácido trifluor-acético. Em ambos os casos, as cadeias laterais dos aminoácidos trifuncionais podem ser protegidas por métodos conhecidos descritos na literatura. Para construir a cadeia de peptido sobre o suporte de polímero insolúvel, cada ami-noácido é feito reagir, tal como se encontra, isto é, sob a forma de ácido livre, na presença de um agente de acopla- -4- 35 63.732 Oase 44.717

mento apropriado, tal como diciclo-hexil-carbodiimida (DCG), e, se necessário, com adição de aditivos apropriados, tais como hidroxi-benzotriazol (H03T) ou hexafluorfosfato de ben-zotriazolil-N-oxi-tris-dimetilaminofosfónio (BOP); como variante, pode fazer-se reagir o aminoácido sob a forma de a-nidrido simétrico, ou éster activo, ou de acordo com qualquer um dos outros métodos descritos na literatura, 0 com-pletamento das reacções de acoplamento dos aminoácidos pode ser verificado pelo teste com nin-hidrina, tal como é descrito por E.T. Kaier e col., Anal. Bioehem., 1970, 34, 595. Depois de o peptido bruto, apropriadamente liofilizado, ter sido separado da resina, é purificado para se tornar homogéneo, por exemplo, por métodos cromatográficos, tais como cro matográfia preparativa sob alta pressão em fase inversa.

Para sintetizar os peptidos cíclicos, pode empregar--se o método de ciclização em solução, sendo o precursor linear do peptido cíclico pretendido preparado, primeiramente, por um dos métodos acima descritos, ou em solução, ou em fa se solida. A ciclizaçao realiza-se com o auxilio de agentes de condesação apropriados e, caso seja necessário, activan-do o grupo carboxilo da extremidade 0 do precursor linear, por exemplo, sob a forma de azida. Gomo variante, pode utiln zar-se, adequadamente um método de ciclização em fase sólida graças ã presença, na sequencia a sintetizar, de um res_í duo de ácido aspártico que pode ser ligado covalentemente a uma resina apropriada, como por exemplo, resina de fenilaqe tamidometilo (PAM), pela função carboxilo na posição beta. Subsequentemente, quando a função carboxilo na posição alfa tiver sido protegida sob a forma de éster de fluorenilmeti-lo, pode c >::. .. . :.1-- - 3 efectuar-se o alongamento da cadeia pela estratégia normal Boc, acima esquematizada para a síntese dos peptidos lineares. Tendo-se obtido o precursor linear, novamente acoplado à resina pela cadeia laterar de acido aspártico, é, então possível desproteger selectiva-mente o grupo carboxilo na posição alfa do ácido aspár- -5- 63.752 Case 44.717

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25 tico propriamente dito, e realizar a ciclização por condensação intramolecular entre o grupo carboxilo na posição alfa do ácido aspártico eo prupo amino na posição alfa do amino-ácido na extremidade R da mesma cadeia. Esta condensação rea liza-se convenientemente na presença de hexafluorfosfato de benzotriazolil-H-oxi-tris-dimetilaminofosfónio (BOP). 0 pe-ptido cíclico á, depois, desprotegido e separado do suporte sólido com o auxílio de ácido fluorídrico anidro, 0 peptido cíclico bruto assim obtido pode ser facilmente purificado por processos cromatográficos preparativos sob alta pressão em fase inversa.

DESCRIÇãO PORMENORIZADA DAS POMAS DE REALIZAÇÃO PREFERIDAS

Exemplo 1 Síntese do Peptido linear com a Seguinte Sequencia : H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Lys-RHg. Coloca-se 1,0 grama de resina DOD ('Sachem, Suiça), equivalente a 0,50 milimole de grupos amino, na câmara de reacção de um sintetizador de peptidos semi-automático Labor tee SP 640. Em seguida, lava-se a resina de acordo com o pre tocolo apresentado na tabela 1 abaixo indicada, ciclos 7 - £ é, depois, desprotegida (ciclos 1-3), e de novo lavada (ciclos 4-8). Para acoplar o aminoácido da extremidade E â resina, adiciona-se uma solução de H03't (0,306 grama) e Fmoc-lys(Boc)-OH (0,702 grama) em 10 ml de DCM/DMP (2/1 em volume/volume) à resina desprotegida. Agita-se a resina du-ranta dois minutos (ciclo 9), em seguida adiciona-se uma solução 1 M de DCC (1,5 ml) em DCM/DMF (2/1 volume/volume) e ssen 30 continua-se a agitação ã temperatura ambiente durànte maisse i minutos (ciclo 10). Realizam-se então os procedimentos de lavagem (ciclos 11 - 14) e verifica-se se a reacção está completa pelo ensaio de ninhidrina, tal como é descrito por Kaiser. Se o resultado for negativo, hidrolisa-se o grupo Fmoc com PIP (ciclos 1-8) antes de se proceder ao acoplamento do aminoácido seguinte, que se efectua da mesma manei ra. Pazem-se reagir os resíduos seguintes pela ordem e nas -6- 35 63.732 Case 44.717

1 quantidades mencionadas : Fmoc-DTrp-OH (0,639 gramas), Fmoe--DTrp-OH (0,639 gramas), Fmoc-Yal-OH (0,509 gramas), Fmoc--DTrp-OH (0,639 gramas), Fmo c-Tyr(tBu)-OH (0,689 gramas) e Fmo c-As p(01Bu)-OH (0,617 gramas)* Depois do último acopla 5 10 i 15 mento, desprotegeu-se 0 grupo amino da extremidadel.F'da^.ép-t do ligado à resina (ciclos 1-3), lava-se 0 peptido (ciclos 4 - 8) e seca-se soB vácuo, oBtendo-se 1,60 gramas de produ-to seco. Para a desprotecção final, coloca-se o peptido ligado à resina num Balão de 250 ml que contém 27 ml de TFA,

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30 1,5 ml de p-cresol e 1,5 ml de etanoditiol. Agita-se a suspensão resultante a 372 c, durante duas horas, separa-se, depois a resina por filtração e lava-se com três volumes de 5 ml de TFA.. Dilui-se a solução resultante com 250 ml de éter etílico frio mais 150 ml de éter de petróleo frio, o que provoca a precipitação de um sólido Branco. Arrefece-se a suspensão a -782 c e filtra-se o peptido Bruto, lava-se com éter frio por três vezes, dissolve-se em água e liofili-· za-se para se oBter 0,375 gramas de produto Bruto. Finalmente, purifica-se 0 peptido por cromatografia líquida em fase inversa e analisa-se por HPLC analítica numa coluna Waters C-^g Deltapak, de 3,9 x 150 milímetros, com um gradiente de acetonitrilo contendo 0,1% (voiume/volume) de áci” do trifluor-acético (fase B) contra 0,1% (voiume/volume) de ácido trifluor-acético aquoso (fase A), entre 20 e 80% de B, durante vinte minutos, com um caudal de 1 ml/minuto, utilizando detecçao por UV a 210 nm. Tempo de retenção (at) =9,6 minutos; pureza croma-tográfica ^99%. Exemplo 2 Síntese do Peptido linear com a Seguinte Sequência : H-Asp-Tyr-DTrp-V al-DTrp-DTrp-Ala-HH^· Ooloca-se 1,0 grama de resina de M3HA ( ETova-Biochem, Suiça] equivalente a 0,45 milimole de grupos amino, na câmara de reacçao de um sintetizador de peptidos semi-automático La-Bortec SP 640. Heutraliza-se a resina com Et^N numa solução -7- 35 63.732 Case 44.717

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30 a 10¾ (volume/volume) em CtiCl^ (2 x 13 ml; 5 + 13 minutos) e lava-se repetidamente com DCM. Efectua-se então o acoplamento de 3oc-Ala-0H pelo método ao anidrido simétrico previ·· amente formado ; 0,540 gramas do aminoácida protegido sao dissolvidos em 3 ml de DCM, adicionando-se 2,32 ml de uma solução a Q% (peso/volume) de DCC em DCM, com agitação com agitador magnético, em "banho de gelo, que se mantém durante quinze minutos. Em seguiaa, filtra-se a mistura através de um xunil com uma placa filtrante porosa para eliminar o DCU formado, e a solução é adicionada à câmara de reacção do sintetizador, diluindo-se com mais 5 ml de DMP e começando em seguida o ciclo automático de acoplamento e lavagem descrito na Tabela 2, apresentada mais adiante (ciclos 8 - 12). Realiza-se então o ensaio de Kaiser numa parte alí-· quota da resina; se o resultado for negativo, efectua-se a desprotecçao automática do grupo amino (ciclos 1-7). Para os acoplamentos subsequentes, mais uma vez de acordo com o protocolo referido na Tabela 2, utilizam-se os seguintes aminoácidos pela ordem e nas quantidades referidas: Boc--DTrp-OH (0,545 gramas), Boc-DTrp-OH (0,545 gramas), Boc--Val-OH (0,390 gramas), Boc-x/Trp-OH (0,545 gramas), Boc-tyr (2-BrZ)-0H (0*890 gramas) e Boc-Asp(0cHx)-0H (0,560 gramas) Depois do acoplamento final, desprotege-se o grupo amino da extremidade R (ciclos 1 - 7) e retira-se a resina da câmara reaccional, secando-se sobre carbonato de potássio, sob vácuo, para se obterem 1,5 gramas de produto. Destaca-se então o peptido da resina e desprotegem-se as cadeias laterais com acido fluorídrico anidro. 0 peptido ligado à resina é colocado num reactor de "teflon” com 1,5 ml de anisol e 0,15 ml de sulfureto de dimetilo: arrefece-se depois esta mistura a -50s C e destilam-se 15 ml de ácido fluorídrico anidro, mantém-se a agitação com um agitador magnético, em banho de gelo, durante sessenta minutos. Remove-se o ácido fluorídrico com uma corrente de azoto, seca-se o produto bruto sob aspiração durante, aproximaaamente, duas horas, 8- 35 63.732 Case 44.717

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3C lava-se com éter etílico (2 x 15 ml) e extrai-se com ácido acético a 50% (3 x 15 ml), filtrando-se através de um funil com placa porosa para retirar a resina gasta. Dilui-se a solução resultante com água e liofiliza-se para se obterem 0,250 gramas de produto bruto. Finalmente purifica-se o pep-tido por cromatografia líquida em fase inversa e analisa-se por HPIC analítica, nas condições descritas no Exemplo anterior. RT = 11,1 minutos; pureza cromatográfica^99%. Exemplo 3 Síntese do Peptido OÍclico com a Seguinte Sequência: Ciclo- Asp-Tyr-DTrp-Yal-DTrp-DTrp-Arg Ha câmara de reacção de um sintetizador manual, colocam-se 2 gramas da acima referida resina PAM (Sachem, Suiça) que possui ácido aspártico esterifiçado no ligador de benzilo da re sina em virtude da função beta-carboxilo do ácido (grau de substituição:o,35 milimole/grama). 0 ácido aspártico é também protegido na função alfa-amino por Boc e na função alfa--carboxilo sob a forma de éster de fluorenil-metilo. Após a lavagem repetida da resina com DCM e DMF, o grupo alfa-amino do ácido aspártico é desprotegido com TEA nas condições normalmente utilizadas na estratégia de Boc, como se descreveu no Exemplo anterior. Em seguida, efectua-se a síntese de a-cordo com o protocolo de Boc usual(veja-se o Exemplo 2);uti-lizam-se os seguintes amino-ácidos pela ordem e nas quantidades indicadas: Boc-Arg(Tos)-OH (0,900 gramas), Boc-DTrp--0H (0,638 gramas), Boc-DTrp-OH (0,638 gramas), 3oc-7al-0H (0,456 gramas), Boc-DTrp-OH (0,638 gramas) e Boc-Tyr(2-Brz)--0H (1,038 gramas). Repete-se duas vezes cada acoplamento antes de se proceder á desproteeção com TEA. Uma vez construído 0 procursor linear protegido, desprotege-se 0 grupo amino da extremidade N com TFA e, em seguida, 0 grupo carbo-xilo da extremidade G com PIP. Realiza-se a ciclização tratando 0 precursor linear ligado á resina numa solução de DME com BOP (0,929 gramas) e DIEA (0,731 mis) durante tres -9- 35 1 63.732 Case 44.717 5 10

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horas, à temperatura ambiente. Repete-se o processo duas vezes ate que o ensaio Kaiser dê resultado negativo. Einal-mente, destaca-se o peptido ciclizado da resina e, ao mesmo tempo, desprotegem-se as cadeias laterais com ácido fluorí-drico anidro, pelo procedimento descrito no Exemplo 2, para se obterem 0,545 gramas de produto bruto. Purifica-se o peptido por cromatografia líquida de fase inversa e analisa--se por HPLC analítica nas condições descritas no Exemplo anterior. Rt = 13,1 minutos; pureza cromatográfica^ 99%. Alem disso, são exemplos não restritivos de compostos de acordo com a fórmula geral I que são incluídos na presente invenção os seguintes: H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DPrp-DTrp-Glu-RH^, Rt=10,5 min; H-Asp-Tyr-DTrp-Yal-DTrp-DTrp-Leu-M,,» Rt=12,2 min; H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-0rn-NH2, Rt* 8,9 min; H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-ITle-IH^ Rt=12,2 min; H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-Dlrp-Gly-NH2, Rt=10,5 min; ciclo[IspTyrDTrpValDTrpDTrppysj, RtâlO,8 min; em que Rt é o tempo de retenção em HPLC analítica, nas condições descritas no Exemplo 1.

ACTIYIMDE BIOLÓSICA

30 A capacidade dos peptidos descritos na presente invenção para interactuarem com o receptor de neuroquinina A como agonistas ou antagonistas foi avaliada num estudo in vitro, usando uma preparação em que se determina a resposta biológica provocada por taquiquininas e peptidos relacionados exclusivamente a partir do receptor de neuroquinina A (receptor NE!-2). Esta preparação ê. de uma artéria isolada pulmonar de coelho, em que as taquiquininas provocam uma contracção dependente da dose (Rovero e col., Neu-ropeptides, 1989, 13» 263 - 270). A actividade dos peptidos nesta preparação foi determinada usando uma concentração de KKA (3 nM) que origina uma resposta equivalente a 45% do -10- 35 1 63.732 Case 44.717

5 máximo. Adicionaram-se então os peptidos abrangidos pela presente invenção á preparação, em concentrações crescentes, e avaliou-se a sua actividade em termos da inibição da resposta a NKA. A Tabela 3 subsequente indica os resultados obtidos com uma concentração 10-^ M de cada um dos compostos Seguem-se as Tabelas 1, 2 e 3 acima referidas: TABELA 1

Protocolo para a Síntese Automática de Acordo com a Estratégia de Fmoc

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Oiclo Reagente Tempo 1 DMF 1 X 1 min 2 20 % P1P / DMF 1 X 3 min 3 20 % PIP / DMF 1 X 7 min 4 DOM 2 X 1 min 5 DMF 2 X 1 min 6 iPrOH 2 X 1 min 7 DMF 3 X 1 min 8 DCM 3 X 1 min 9 Fmoc-AA + HOBt / DMF / DOM 1 X 2 min 10 DCC 1 M DMF / DCM 1 X 90 min 11 iPrOH 1 X 1 min 12 DMF 1 X 1 min 13 DCM 1 X 1 min 14. Repetir duas vezes a partir do ciclo

Volume de dissolventes : 10-20 ml/grama de resina. 30 TABELA 2

Protocolo para a Síntese Automática de Acordo com a Estratégia de Boc 35 -11- i !

Mod. 71 - 20.000 e*.

63.732 Case 44.717 tU 'f 1 Ciclo Reagente Tempo 1 DCM 1x1 min 5 2 50 % TPA/DCM 1x5 min 3 50 % TPA/DCM 1 x 13 min 4 DCM 3x1 min 5 5 % DIEA/DCM 2x1 min 6 DCM 2x1 min 10 7 DMF 2x1 min 8 Anidrido Boc-AA em DCM/DMF 1 x 60 min 9 DMF lxl min 10 DCM lxl min 11 Repetir os ciclos 8 e 9 15 12 DCM 3x1 min Volume de dissolventes : 10-20 ml/g de resina. TABELA 3 20 Actividade Biológica Antagonista sobre o Receptor de 2 em Artéria Pulmonar de Coelho Isolada dos Peptidos Descritos Peptido % de inibição H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Lys-RHp 100 25 H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp.. DTrp-Ala-HH? 100 H-Asp- •Tyr-DTrp-Y al-BTrp-DTrp-Orn-HHp 100 H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DIrp-Grlu-Mp 100 H-Asp-Tyr-DTrp-Yal-DTrp-DTrp-leu-HHp 100 H-Asp- Tyr-DTrp-Yal-DTrp-D!Drp-Ule-IHp 100 30 H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-G-ly-Mp Ciclo [AspTyrI)Tr pYalDTrpDTr ply sj Ciclo [AspTyrDTr pYalDTr pDTr p Ar g] 100 95 95 Lista das Abreviaturas Utilizadas 35 Para a nomenclatura e abreviaturas dos aminoácidos, utili- -12-

Claims (3)

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15 Mod. 71 - 20.000 βχ. 20 25 30 seio de dissolventes orgânicos polares; - se efectuar os acoplamentos seguintes usando o aminoácido apropriado, adequadamente protegido, igualmente sob a forma activada, procedendo da mesma maneira; e -se destacar então o peptido. 2ã- Processo de acordo com a reivindicação 1, cara£ terizado por se preparar um peptido linear, se destacar o peptido do suporte e se desproteger apropriadamente. 3-- processo de acordo com a reivindicação 1, cara£ terizado por se preparar um peptido cíclico, se destacar o peptido do suporte num meio apropriado e, em seguida , se ciclizar usando agentes de activação e de condensação apropriados e, em seguida , se removerem apropriadamente os gru pos de protecção. 4a- Processo de acordo com a reivindicação 1, carac terizado por para se obterem peptidos que contêm pelo menos um aminoácido com dois resíduos carboxílicos, quando o resí duo carboxílico não está na posição alfa mas está ligado â resina, se desproteger o carboxilo na posição alfa e depois se ciclizar usando os agentes de activação e de condensação apropriados e depois se destacar o peptido do suporte e se removerem os grupos de protecção. 3-~ processo de acordo com a reivindicação 4 carac-terizado por se preparar um heptapeptido sintético com a S£ guinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp- val-DTrp-DTrp-L 1 s-NH2 e os seus sais· farmacâuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos. 6^- processo de acordo com a reivindicação 1 carac-terizado por se preparar um heptapeptido sintético preparar um com a seguinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Ala-NH 2 e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos -14- 35 63.732 Gase 44.717

1 5 10 J 15 Mod. 7] - 20.000 ex. - 90/08 20 zam-se as recomendações da comissão conjunta IUPAC-IUB sobre Nomenclatura Bioquímica (Eur. J.Biochem., 1984, 138, 9) os aminoácidos estão na configuração L, a não ser que se indique outra configuração. As outras abreviaturas utilizadas são: 2-Br-Z: 2-bromobenziloxi-carbonilo; AAA : análise de aminoácidos (no peptido hidrolisado); Bc · ; tárcio-butiloxi-car-bonilo; BcP': hexafluorfosfato de benzotriazolil-N-oxi-tris--dimetilaminofosfónio; Bzl: benzilo; BCC: H,!!*-di ciclo-hexil -carbodiimida; DCM: diclorometano; DCU: Ν,Ν* -diciclo-hexil--ureia; DIEA: di-isopropil-etilamina; BMP: N,N-dimetil-for-mamida; Et^N: trietilamina; PAB-MS: espectrometria de massas por bombardeamento atómico rápido; Pmoc: 9-fluorenil--metóxi-carbonilo; HOBT: 1-bidróxi-benzotriazol; HP1C: cro-matografia líquida sob alta pressão; iPrOH; isopropanol HBHA 4-metil-benzidrihminâ.;EXA: neuroquinina A; MB: neuroquini-na B; OcHx: éster de ciclo-bexilo; PIP: piperidina; SP: substancia P; tBu: tercio butilo; TPA: ácido trifluor-acético; ToS ; tosilo (4-tolueno-sulfonilo). Η E I T IN Π C A Ç 0 B S-

l^-processo para a preparação de páptidos sintáticos lineares ou cíclicos com a fórmula geral I X-Asp-Tyr-DTrp-V al-DTrp-DTrp-Y caracterizado por: 30 -a síntese se efectuar em fase sólida com o prolongamento de cadeia do peptido a partir da extremidade <, em direcção à ex tremidade N num suporte polimárico insolúvel; -se fazer reagir 0 aminoácido subsequente, apropriadamente protegido tanto na função alfa-amina como na cadeia lateral sob a forma activada, com 0 aminoácido da extremidade C , apropriadamente protegido na cadeia lateral e fixado ao suporte de polímero por intermédio da função carboxilo, no -13- 35 63.732 Case 44.717

-2 AG0.Í89I Mod. 71 - 20.000 ex. - 90/08 7*.- Processo de acordo com a reivindicação 1 carac-· terizado por se preparar um heptapeptido sintético com a se-· guinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Yal-DTrp-DTrp-Orn-NH2 e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos. 8*.- Processo de acordo com a reivindicação 1 carac·· terizado por se preparar um heptapeptido sintático com a se-· guinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Yal-DTrp-Dtrp-Glu-M 2 > e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou V * · A . bases orgânicos e inorgânicos. 9â.- Processo.de acordo com a reivindicação 1, cara<^ terizado por se preparar um heptapeptido sintático com a se guinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Leu-HH 2, e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos. 10*- processo de acordo com a reivindicação 1 carac terizadopor se preparar um heptapeptido sintático com a seguinte estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Val-DTrp-DTrp-Nle-NH , e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos. 11*- -processo de acordo com a reivindicação 1 carac: terizado por se preparar um heptapeptido sintático com a se_ guinte formula de estrutura H-Asp-Tyr-DTrp-Val-Iffrp-DTrp-Gly-NH 2, e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou 30 bases orgânicos e inorgânicos. 12*- Processo de acordo com a reivindicação 1 carajc terizado por se preparar um heptapeptido cíclico sintático com a seguinte estrutura ciclo ^AspTyrDTrpV alDTrpDTrpArgj 35 e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou 10 15 20 25 -15- 63.732 Case 44.717 1 bases orgânicos e inorgânicos, 132— Processo de acordo com a reivindicação 1 carac-terizado por se preparar um heptapeptido cíclico sintético com a seguinte estrutura 5 ciclo [AspTyrDTrpValDTrpDTrpLys] e os seus sais farmacêuticamente aceitáveis com ácidos ou bases orgânicos e inorgânicos,

14â- Processo para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento da asma, inflamação ou artrite 3 caracterizado por se incorporar como composto activo um pep-tido preparado de acordo com as reivindicações anteriores* Declara que entrelinhou na página 4 a palavra"A Bodanszky" Lisboa, ~2.AG0.1891 15 Mod. 71 -20.000 ex. - 90/08 20

VASCO MARQUES WH Agente Ojiclal d. Propriedade Industrial Garfért© - Arc· da ConcelçS·,

3, U*··" -16- 30