PT94537A

PT94537A - Processo para a preparacao de novos derivados peptididos

Info

Publication number: PT94537A
Application number: PT94537A
Authority: PT
Inventors: Jean Lepagnol; Michel Vincent; Georges Remond; Bernard Portevin; Yolande Herve; Catherine Biton
Original assignee: Adir
Priority date: 1989-06-29
Filing date: 1990-06-28
Publication date: 1991-02-08
Also published as: EP0406119A1; NZ233908A; US5098888A; ES2062443T3; DK0406119T3; ZA904495B; EP0406119B1; JPH0348695A; CA2019633A1; ATE100464T1; IE902103L; AU627898B2; AU5791190A; FR2649110A1; IE902103A1; DE69006116T2; OA09454A; FR2649110B1; IE65156B1; DE69006116D1

Description

ADIR ET COMPAGIIE "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE IO VOS DERIVADOS PEPTIDICOS" A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos derivados peptídicos.

Entre os tripeptidos naturais, certos tri-peptidos com estrutura cicloamídica exercem efeitos centrais interessantes particularmente em relação â neurotransmissão colinêrgica. Ê o caso, em particular, da TRH ("Thyrotropin--Releasing-Hormone") de estrutura piroglutamil-^iiiistidil -prolinamida, que ê capaz de se opor à diminuição da síntese de acetilcolina induzida experimentalmente por narcose. Ê igualmente capaz de potenciar os sintomas colinérgicos centrais induzidos pelos agonistas colinérgicos.

Contudo, a TRH é pelo seu metabolismo rapidamente inactivada no organismo. E, igualmente, inactiva- · por via oral devido à sua degradação quase instantânea ao nível gástrico. foram descritos outros tripeptidos (patentes de invenção francesas Eis 2.187.155, 2.287.916, 2.266.515 e 2.345.448) em que o resto piroglutamilo é substituído por um outro resto de ácido heterocíclico carboxílico e que possuem propriedades anti-convulsivantes e anti-depressivas. finalmente, a patente de invenção francesa I^ 2.585,709 des- - 2

creve pêptidos em que o resto prolinamida está substituído por uma estrutura bicíclica saturada e que são capazes de estimular a síntese de AMP cíclico ao nível do tecido cerebral. Contudo, estes derivados não tem praticamente nenhuma actividade quando administrados por via oral.

Os compostos de acordo com a presente invenção, em que o resto prolinamida está substituído por uma nova estrutura bicíclica saturada, demonstram ser muito interessantes partieularmente pelas suas propriedades para mimar e exacerbar as actividades da TRH constituindo, por conseguinte, análogos como o demonstra um estudo efectuado em auto-radiografia. Contudo, o nível da actividade dos derivados de acordo com a presente invenção é nitidamente superior ao da própria TRH.

Além disso e de modo surpreendente a nova estrutura bicíclica saturada característica dos compostos de acordo com a presente invenção torna estes derivados ac-tivos por via oral contrariamente aos derivados de estrutura semelhante anteriormente conhecidos. Esta característica torna os derivados de acordo com a presente invenção mais aptos a uma utilização terapêutica que os de estrutura próxima descritos na técnica anterior. A presente invenção diz mais particularmente respeito a um processo para a preparação de novos derivados com estrutura cicloamidica reh#t^ehdo: â -fórmula geral /A\ HI - OH - 00 - NH - OH - 00 - H - OH - 00 - MH, i v y (I) - 3 - na qual: A considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado, representa: - um grupo 2-oxo-5-pirrolidinilo, - um grupo 2-oxo-6-piperidinilo, - um grupo 2,6-dioxo-I,2,3,6-tetra-hidro--4-pirimidinilo, - um grupo 2-oxo-4-tiazolidinilo, - um grupo 2-oxo-4-azetidinilo, - um grupo l-oxo-l,2,3,4-tetra-hidro-3-isô-quinolilo, B considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado, representa uma estrutura policiclica saturada escolhida entre 2-aza-bicíclo/2.2.l7heptano ou os 1,4-( dialquilos inferiores de cadeia linear ou ramifieada)-2-aza-bicíclo /"2.2.27 oetano, R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior de cadeia linear ou ramificada, um grupo (4-imidazolil)-metilo eventualmente substituído sobre um dos átomos de azoto por um radical alquilo inferior, de cadeia linear ou ramificada, indicando o termo inferior que os grupos assim qualificados comportam 1 a 6 átomos de carbono, dos seus enantiómeros, diastereoisémeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, entendendo-se que entre os ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico se pode citar a título não limitativo, os ácidos clorídrico, sulfúrico, tartárico, maleico, fúmá-rico, oxálico, metano-sulfónico, canfôrico, etc., caracterizado pelo facto de se proteger a função amina de um aminoácido de fórmula geral

ΗΚΓ - CH - C02H

(II) na qual B tem o significado definido antes, do qual se separaram eventualmente os isômeros por uma técnica clássica de separação, com um radical protector (P) tal como o butoxi terc.-carbonilo (tBOC) ou o benziloxicarbonilo (Z) sob a acção de um reagente apropriado para se obter um derivado de fórmula geral

P - ϋΓ - CH - C02H

(III) na qual B e P têm os significados definidos antes, com o qual se faz reagir, a uma temperatura eompreendida entre -15 e 0°C, na presença de trietilamina, o cloroformato de etilo e depois amoníaco, para se obter um derivado de fórmula geral

P - Έ - GH - CO - IH2 na qual B e P tem os significados definidos antes (IV) - 5 - .¾ que se desprotege mediante um processo apropriado como por exemplo a acção do ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro tal como o dioxano ou o acetato de etilo no caso em que o símbolo £ representa um grupo tBOC ou mediante hidrogenaçio catalítica no caso em que o símbolo P representa um grupo Z, para se obter um derivado de fórmula geral M - CH - CO - BHp • v na qual B tem o significado definido antes, de que, eventualmente, se separam os isômeros mediante uma técnica clássica de separação, que se liga com um segundo aminoácido protegido de fórmula geral VI, de acordo com a técnica de ligação peptídica descrita por W. KOIIG e R. GEIGER ("Ber." 103, 788, 1970).

tBOC -EH - CH - COgH

(VI) na qual R tem os significados definidos antes, para se obter um derivado de fórmula geral

(vxO na qual R e B têm os significados definidos antes, de que, eventualmente/se separaram os diastereoisómeros ou enantiómeros mediante uma técnica clássica de separação, que se desprotege, em seguida, mediante acção do ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro como por - 6 -

exemplo o dioxano ou o acetato de etilo para se obter um derivado de fórmula geral HJST - CH - CO - N - CH - CO - Ffí9

I [ J R XB' (¥111) na qual R e B tem os significados definidos antes, que se liga com um terceiro aminoácido, eventualmente protegido, de fórmula geral IX, de acordo com a técnica de ligação peptidica descrita anteriormente Λ R' - I - CH - CQ2H (IX) na qual R1 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector tal como por exemplo um benziloxicarbonilo (Z), ou com um éster deste aminoácido eventualmente protegMo, para se obter; - quer um derivado de fórmula geral I no caso em que o simbolo R* representa um átomo de hidrogénio, que, eventualmente, se transforma no seu sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, - quer um derivado de fórmula geral Λ R - H - CH - CO - RH - CH - CO - 1 - CH - 00 - !H9 i [ ) R XB' (X) no caso em que R1 representa um grupo protector e R e B têm os significados definidos antes, - 7 - que se desprotege mediante uma técnica de desprotecção como por exemplo uma hidrogenação catalítica para se obter mm derivado de fórmula geral I, que, eventualmente, se transforma nos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, ou se separa nos seus isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação que, depois, eventualmente, se salifica com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Os compostos de fórmula geral II na qual o símbolo R representa com os átomos de carbono e de azoto aos quais está ligado uma estrutura 1,4-( dialquil)-2-aza--bicíclo /*2.2.27 octano assim como os compostos de fórmulas gerais III, IV, V, VII ;e VIII são novos e fazem parte da presente invenção ao mesmo título que os compostos de fórmula geral I, constituindo, por conseguinte, os intermediários da sintese.

Os compostos de fórmula geral I possuem propriedades farmacológicas muito interessantes. Estes efeitos, sendo da mesma natureza que os da TRH, exercem-se com uma intensidade nitidamente superior. Into ê confirmado: pela sua interacção com os receptores TRHérgicos observada em auto-radiografia quantificada.

Por um lado, em relação ao sistema colinêr-gico central, os derivados de acordo com a presente invenção são capazes de restaurar as capacidades neuronais de captura de alta afinidad© da colina quando esta captura, que ê o factor limitativo da síntese da acetilcolina, é quebrada experimentalmente por narcose barbitúrica.

Por outro lado, em relação ao sistema nora- drenérgico central, são capazes de se opor â acção sedativa e hipotensiva de um agente a clonidina, quando da is- quêmia aguda.

Assim, facilitam eonjuntamente a neurotrans-missão colinérgica implieadana memória e no despertar e a neurotransmissio noradrenêrgica implieaâaua atenção e na motivação .

Estas propriedades apresentam a vantagem de se manterem depois da administração oral o que torna os de -rivados de acordo com a presente invenção muito mais aptos a uma utilização terapêutica. !m particular, esta última característica em conjunto com um alto nível de actividade torna os còmpos-tos de acordo com a presente invenção utilizáveis no tratamento dos distúrbios neurocomportamentais associados ao envelhecimento normal ou patológico e às doenças degenerativas agudas ou crónicas do sistema nervoso central, como a doença de Alzheimer, as desordens da consciência e da fala, esquizofrenia, depressão, demência, senil, traumatismo espinal, esclerose amiotrópica lateral, ou o acidente vascular cerebral. A presente invenção tem igualmente por ob-jectivo um processo para a preparação de composições farmacêuticas comportando como ingrediente activo pelo menos um composto de fórmula geral I ou um dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico sàô ou em associação com um ou vários excipientes ou veículos inertes, não tóxicos.

Entre as composições farmacêuticas prepara- - 9 - das pelo processo de acordo com a presente invenção, pode--se citar mais particularmente as que convim para a adminis tração oral, parenteral, nasal, os comprimidos simples ou drageifiçados, os comprimidos sublinguais, os saquinhos, os papelinhos, as gêlulas, os trociscos, as pastilhas, os supositórios, os cremes, pomadas, geles dérmicos, etc,. A posologia útil varia de acordo com a idade e o peso do paciente, a natureza e a gravidade da afecção assim como a via de administração. Esta última pode ser oral , nasal rectal ou parenteral. De uma maneira geral, a posologia unitária está compreendida entre 0,05 e 300 mg para um tratamento em 1 a 3 tomas por 24 horas.

Os exemplos seguintes ilustram o processo de acordo com a presente invenção sem a limitarem de modo algum,

As abreviaturas utilizadas nos exemplos sao as seguintes: - Piro^lu em vez do radical 2-pirrolidona--5-carbonilo, - (IT^-l/[e)His em vez de 1-metil-histidilo cuja fórmula desenvolvida é a seguinte:

- (In-Me)His em vez de 3-metil-histidilo - 10 cujja fórmula desenvolvida ê a seguinte; - 10

CO. Η. ^0Ηο--0ηΓ

- ABH em vez de 2-aza-3-carbonil~bicíclo i~2,2.XJ iieptano, - tBOG em vez de butoxi-terc.-carbonilo, - Z em vez de benziloxicarbonilo, - Leu em vez de leucilo, - HomoPiroGlu em vez de 2-piperidinona-6--carbonilo, - His em vez de iiistidilo, - OTh em vez de 2-oxo-tiazolidina-4-carbo-nilo, - dOPir em vez de 2,6-dioxo-l,2,3,6-tetra--hidro-pirimidina-4-carbonilo, - OAz em vez de 2-oxo-azetidina-4-carbonilo - OiQ em vez de 1-oxo-l,2,3,4-tetra-=Mdro--isoquinoleina-3-carbonilo, - MIABO em vez de 4-metil-l-isopropil-2-aza “3-carbonil-bioielo /2.2.27 octano, - cÉLABO em vez de l,4-dimetil-2-aza-3-car-bonil-biciclo /£.2.27 octano, - 11

As preparações indicadas a seguir não permitem a obtenção dos compostos de acordo com a presente invenção. Pelo contrário, levam à obtenção de intermediários úteis na síntese dos compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção. PREPARAÇÁO A: MI ABO-OH "isômeros <*$) " ESTÁDIO Aí 5-IS0PR0PIL-8-MEIIL-5,8-ETAHO--2-( 4-CLORO -FEEIL ) -1,3,5,8,8a --PEETA-HIDRO-l,3-Dl 0X0 -2H-IMEDAZ0 biridima. A uma solução de 98 g (0,72 mole) de l-meti*l--4-isopropil-l,3-ciclo-iiexadieno em 220 ml de tolueno anidro, adicionam-se 43 g (0,18 mole) de 3-p-clorofenil-5-metoxi--Mdantoina (preparada pelo processo descrito por D. BENI-, SHAI e E. GOLDSTEII, "IETRAHEDROU", 1971, 2£, 3119 - 3127).

Leva-se esta mistura a 160° - 170°C em au-toclave durante 3 dias.

Isola-se o precipitado formado e recrista-liza-se, depois, em óxido de isopropilo.

Rendimentoí 35%

Ponto de fusão: 120°C

Microanâlise elementar; C% H % 1% Cl% calculada 66,18 6,14 8,12 10,28 encontrada 65,93 6,02 8,11 10,22

ESTÁDIO B: 1-ISOPROPIL-4-METIL-3-CARBOXI--2-A2ABICICL0 /2.2.27 5-OCTEIO

Hidrolisam-se 6,9 g (0,02 mole) do composto preparado no estádio A, mediante aquecimento a refluxo em 60 ml de hidróxido de sódio 41· Após acidificação com ácido clorídrico 61, fixa-se 0 composto sobre uma resina permuta-dora de iões e elui-se, depois, com uma solução amonia&al II.

0 composto pretendido obtém-se após concentração dos dissolventes.

Rendimento.: 69 % ESTÁDIO Cs ÁCIDO 4-METIL-1-IS0PR0PIL-2-AZA--BICICLO /2.2.27 G0TAIO-3-CARBO-XILICO (MIABO-OH)

Submetem-se 10 g (0,047 mole) do composto preparado no estádio B a uma hidrogenaçao em 165 ml de-uma solução etanólica contendo carvão paladiado a 10% à prerssão normal. 0 composto pretendido obtém-se então sob a forma de dois ísómeros chamados arbitrariamente o(, com um rendimento de 96%. PRBPARAÇlO B: dMABO-OH "isómeros ESTÁDIO A: 5,8-DIIETIL-5,8-ETAI0-2-( 4-CLORO--PEIIL )-1,3,5,8,8 a -PEITA -HIDRO --1,3-Dl0X0-2H-IMIDAZ0 /l,5-a7 PIRIBIIA.

Procedendo de acordo com 0 processo descrito - 13

no estádio A da preparação A, mas substituindo o 1-metil--4-isopropil-l,3-cicloiiexadieno pelo 1,4-dimetil-l,3-eiclo-hexadieno (preparado pelo processo descrito por W. BRADY e S. J. NORTON, "S^nthesis*', 1985, 704 - 705), obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 56 %

Ponto de fusão: 178°C

Microanálise elementar: C % H % N % Cl% Calculada 64,46 5,41 8,84 11,19 Encontrada 64,56 5,42 8,64 10,99 ESTÁDIO B; l,4-DIMETIL-3-CARB0XI-2-AZA-BI-CICLO /2.2.27 5-0CTEN0.

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio B da preparação A, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento: 60 %

Microanálise elementar:

C % H % N % Calculada 66,27 8,34 7,73 Encontrada 66,22 7,98 7,89 ESTÁDIO C: ÁCIDO ' 1; 4-DIMETIL* -2-AZA-BICICLO /2,2.27 0CTAN0-3-CARB0XÍI.IC0 (dMABO-OH)

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio C da preparação A, obtém-se o composto pretendido sob a forma de dois isômeros arbitrariamente chamados - 14 - o(, jb com um rendimento de 80%. EXEMPLO 1: (S) PiroGlu-(S) (jKp-Me^is-CLS, 3S, 4R)iBH-EH2 ESTÁDIO A: tBOC-ABH-OH (mistura de quatro isômeros) 0 composto inicial utilizado ê o 2-aza-3--carboxi-bicíclo ^2.2.17 heptano, em abreviatura ABH-OH, preparado de acordo com o processo descrito na patente de invenção francesa is 2.525.604. Este processo permite a obtenção simultânea dos quatro isômeros para os quais a ligação do ciclo § eis.

Em uma mistura contendo 70 ml de dioxano e 30 ml de água, dissolve-se 0,039 mole de ABH-OH (mistura de quatro isômeros), arrefece-se a 0°0, adicionam-se 39 ml de hidróxido de sódio N e depois, gota a gota, uma solução de 0,039 mole de dicarbonato de dibutilo terc. em 100 ml de dioxano.

Deixa-se sob agitação durante 30 minutos a uma temperatura compreendida entre 0 e 5°C e depois durante 2 horas à temperatura ambiente. Evaporam-se os dissolventes sob pressão reduzida.

Retoma-se o residuo com água, acidifica-se com ácido cítrico até pH=4 e extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica com uma solução de cloreto de sódio a 10%, seca-se sobre sulfato de cálcio anidro, filtra-se e concentra-se sob pressão reduzida.

Recristaliza-se em n-pentano - 15 -

Rendimento: 71%

Infravermelho (nujol): OCO (ácido) : 1740 cm”·*· >700 (earbamato) : 1640' Microanálise elementar: G% H% Έ% Calculada : 59«73 7,94 5,80 Encontrada : 59,56 7,72 5,80 ESTÁDIO B : tB0C-IH2 (mistura de quatro isô-meros) A uma solução de 6,7 g (0,028 mole) de tBOC--ABH-OH, obtidas no estádio A, em 80 ml de tetra-hidrofurano arrefecido em uma mistura de gelo/sal (temperatura :-10°C), adicionam-se 4,27 ml de trietilamina e depois 2,97 ml de cloroformato de etilo, destilado recentemente, em solução em 20 ml de tetra-hidrofurano. Eorma-se um precipitado que se deixa sob agitaçãajdurante um quarto de hora a -10°C. Adicionam-se, então, 5,27 ml de solução de amoníaco concentrada e deixa-se o conjunto sob agitação durante 30 minutos a -10°C, Deixa-se voltar à temperatura ambiente· Apôs evaporação dos dissolventes sob pressão reduzida, retoma-se o resíduo com uma solução aquosa de ácido cítrico a pH=4.

Extrai-se a fase aquosa ácida com acetato de etilo. Lava-se, então, a fase orgânica com uma solução aquosa de hidrogenocarbonato de sÔdio, depois com água e, finalmente, seca-se sobre sulfato de cálcio anidro.

Eiltra-se e concentra-se sob pressão reduzida -16 - ι

Rendimento: 90%

Ressonância magnética nuclear do protão (CDC.1.J a entre 6,2 e 5,7 ipm (2H,m) b - 4,5 ppm (ll,m) c — 4,1 ppm (lH,m) i = 2,9 ppm (lH,m) e = 1,6 ppm (6H,m) I = 1,4 ppm (9H,s)

ESTÁDIO C: ABH-EHg, HC1 (mistura de quatro isómeros)

Satura-se de gás clorídrico uma^solução de 87,5 g (0,365 mole) de tBOC-ÂBH-Mg em 1 litro de dioxano anidro e deixa-se sob agitação durante 18 horas à temperatura ambiente.

Evapora-se o dioxano e retoma-se o resíduo com 300 ml de éter anidro. Escorre-se, lava-se e seca-se o produto assim obtido.

Rendimento; 86%

Ressonância magnética nuelear do protão (CDClO:

a = 4,4 ppm (lH,m) b = 4,1 ppm (lH,m) o = 3,0 ppm (lH,m) d entre 2 1,3 ppm (6H,m) ESTÁDIO D: tBOC (S)(Ir-Me)His-ÁBH-IH2 (mistura de isômeros)

Utilizando o método de ligação peptídica (DOC/HOBT) descrito por W. KOHIG e R. GEIGER (Ber, 10^, 788, 1970) e a dimetilformamida como dissolvente, prepara-se a partir de 0,0181 mole de ABH-UHg obtido no estádio anterior e 0,0181 mole de tB0C(S)(#-Me)His-0H, o tB0G(S)(N^-le)His--ABH-NHg.

Rendimento: 85%

Separa-se a mistura de diastereoisómeros assim obtida, mediante cromatografia em coluna de sílica eluindo com uma mistura de diclorometano/metanol/amoníaco nas proporções de $/1/0,1. A condensação de Diels-Alder utilizada para a preparação do ABE-01 (patente de invenção francesa RS. 2.525.604) implica a obtenção deste com ligações de ciclo cis, quer dizer sob a forma de dois pares de enantiômeros. A ligação com tBOC(S)(I^-Me)His-OH dá, por conseguinte, lugar a 4 diastereoisómeros que se separam nas condições descritas anteriormente e cujas configurações absolutas foram determinadas por raios X. ESTÁDIO E: (S)(ir-Ie)His-(lS,3S,4R)ÁBl-m2 dicloridrato

Desprotege-se o isómero tBOC(S) (l/^-4iIe)His-(IS,3S,4R)ABH-EHg de acordo com 0 processo descrito no estádio G *

Rendimento: 95%

- 18 J

Pode-se obter este composto igualmente mediante substituição no estádio D do ABH-!H2 (mistura de isô meros) pelo isômero (IS, 3S, 4R) ΑΒΗ-ΚΉ2 obtido no estádio E do exemplo 5, (neste caso* a separação dos diastereoisomeros des crita n© estádio anterior é inútil). ES5ÁDI0 P: Z ( S)P iroGlu-C S ) QST^-Me) Hi s--(1S,3S,4R)ABI-HH2

Utilizando o método de ligação peptídica descrito por G.W. Anderson e J.E. Zimmerman ("JACS" 85, 3039, 1963), faz-se reagir 0,033 mole de (SUl^-Me^is--(IS,3S,4R)ΑΒΠ-Μ2 obtido no estádio anterior com 0,033 mole do éster activado da I-hidroxi-sueeinimida de Z-(S)Piro-Glu-OH em 100 ml de dimetilformamida e 0,066 mole de tri-etilamina.

Obtêm-se, deste modo, apôs tratamento usual e cromatografia em coluna de sílica utilizando, como eluente, a mistura de acetona/água nas proporções de 95/5, o composto pretendido.

Rendimento: 57% ESTÁDIO G: (S)PiroGlu-( S) (N^-iíe)His-(1S,3S,4R)ABH-EH2

Desprotege-se o composto obtido no estádio anterior mediante hidrogenação catalítica em etanol na presença de paládio sobre carvão utilizado como catalisador.

Apôs filtração do catalisador e evaporação do dissolvente, submete-se o composto a uma cromatografia sobre sílica utilizando como eluente uma mistura de diclo-rometano/metanol/amoníaco nas proporções de 80:20:1. - 19 -

Microanâlise elementar: Θ % H % ff % Calculada: 56,70 6,51 20,88 Encontrada: 56,35 6,08 20,80

Ressonância magnética nuclear do protão (DgQ):

c h

a = 7,6 ppm (lH,s) b = 7,0 ppm (lH,s) c =3,7 ppm (3H,s) d = 5 ppm (lH,t) e =3,1 ppm (2H,d) í+g entre 2,3 e 2,9 PP® (4H,m) ; h entre 1,1 e 2,1 ppm (7H,m) EXEMPLO 2: (S)PiroGlm-(S)(lr-Ie)His*-(lI,3S,4S)ABH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1 mas substituindo no estádio E o isômero tBOC--(S)(Nr4ae)bis-(lS,3S,4R)ABMH2 pelo isômero tBOC-(S) (Λβθ)-His-(lR,3S,4S)iBH-M2 obtido no estádio D, obtêm-se o composto pretendido. - 20

Ressonância magnética nuclear âo protão (D^O):

e = 3,3 ppm (2H,d) d = entre 4,2 e 5,3 ppa (lH,m) f+g entre 2,5 e 3,7 ppm (4H,m) h entre 1,4 e 2,3 ppm (7H,m) EXEMPLO 3: (S)Pir<&Ln;-(S)(í*)His-(IS, 3R, 4E)ABH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo no estádio E o isómero tBOC--(S)(ir-Me)His-(lS,3S,4R)ABH-IH2 pelo isômero tBOC-(S)--(E7-Me)His-(lS,3R,4R)ABH-WH2 obtido no estádio D, obtém-se o composto pretendido. - 21

Ressonância magnética nuclear do protão (Β^Ο): - 21

I' ο f*tr f s. 0no I d H í, j ll w a h2nc

CONH - CH - GO - E

a = 7,6 ppm (1H, s) oh3 b - 6,9 ppm (lH,s) c - ç = 3,7 ppm (3H,s) d = 4,9 ppm (lH,m) J3 = 3,0 ppm (2H,m) f+g entre 2, ,3 e 2; b entre 1,3 e 2,1 ppm. (4H, m) „r EXEMPLO 4: (S)PiroGlu-(S)(F-Me)His-(lR, 31,4S)43H-]!TH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo no estádio Ξ o isômero tBOC--(S)(I^e)His-(lS,3S,4R)ABI-IH2 pelo isómero tBOC-CSKr^le)-His-(1R,3R»4S)ABH-ITH2 obtido no estádio D, obtêm-se o composto pretendido.

Ressonância magnética nuclear do protão (D^O):

e =3,0 ppm (2H,d) d entre 4,1 e 5 ppm (lH,m) f+g entre 2,3 e 2,9 ppm (4H,m) b entre 1,5 e 2,2 ppm (7H,m) - 22 EXEMPLO 5: (S)PiroGlu-(S)Leu-(IS,3S,4R)ABH-IH2 ESTÁDIO 1: ABH-OH /Mistura de isômeros (1S,3S,4R)/(1R,3R,4S17

Dissolvem-se a quente, 100 g da mistura raeé-mica dos quatro isômeros ABH-OH obtida de acordo com o processo descrito na patente de invenção francesa HS 2525604, em 1400 ml de metanol anidro. Deixa-se esta solução arrefecer lentamente e sob agitação durante 20 horas. Filtra-se, então, o precipitado formado, lava-se com 50 ml de metanol anidro e seca-se depois; obtêm-se deste modo 31»5 g de ABH-OH /mistura de isômeros (1S,3S,4R)/(1R,3R»4S17. Leva-se então o filtrado até à secura; recristaliza-se o residuo assim obtido em etanol anidro e depois em metanol anidro para se obter 15 g suplementares do composto pretendido.

Segue-se a pureza desta mistura de isômeros mediante cromatografia liquida nas seguintes condições:

Coluna: comprimento : 25 cm diâmetro interior : 4,5 mm Fase estacionária: Ultra Base (tamanho das partículas: 5 ;am)

Fase móvel: fase aquosa contendo 1,25% de ácido trifluoroácético: 200 volumes aeetoni trilo : 5 volumes Débito: 1 ml/minuto Temperatura: 20°C Tempo de retenção: ABH-OH /mistura de isômeros (lS,3S,4Ry (1R,3R,4S)7* : 5,5 min ABH-OH /mistura de isômeros (1R,3S,4S)/ (1S,3R,4R)7* : 6,1 min - 23 -

* / „ Definição: A primeira mistura de isóme- ros (tempo de retenção 5,5 minutos) assim obtida, quando ê utilizada como composto inicial qo estádio A do exemplo 1, (em vez da mistura dos quatro isómeros obtidos pelo processo de acordo com a patente de invenção francesa 2525604) permite;, procedendo de acordo, os protocolos descritos nos estádios È, B, 0, D do exemplo 1, obter os dois isómeros (1S,3S,4R) e (1R,3R,4S) da tBOC(S)(ΕΓ^-Me)His-ABH-M2.

Do mesmo modo, se se utilizar a mistura de 2 isómeros tendo um tempo de retenção de 6,1 minutos como composto inicial no estádio A do exemplo 1, obtém-se no estádio D do exemplo 1, os isómeros (1R,3S,4S) e (1S,3R,4R) da tBOC(S)(ir-Ie)His-ABMH2. ESTÁDIO B: tBOC-ABH-0H /mistura de isómeros (1S,3S,4R)/ (1R,3R,4S*7

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio A do exemplo 1, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: Infravermelho ^GO (áeido) : 1740 cm"*^ V> GO (carbamato) : 1640 cm ESTÁDIO C: tBOC-ABH-EHg /mistura de isómeros (1S,3S,4R)/ (1R,3R,4S17

Procedendo de acordo com 0 processo descrito no estádio B do exemplo 1, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento; 97%

Ressonância magnética nuclear do protão (CDClO: a = 4,5 ppm (lH,m) b 11 ·** ppm (lH,m) c = 2,9 ppm (lH,m) d = 1,6 ppm (6H, m) 1 = 1,4 ppm (9H,s)

e ESTÁDIO D: ÂBH-HHg, HG1 /mistura de isômeros (1S,3S,4R)/ (1R,3R,4S)7

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio C do exemplo 1, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento; 86%

Microanâlise elementar: t G % H % Έ % Cl% Calculada : 47,60 7,42 15,86 20,07 Encontrada; 47,90 7,40 15,83 19,82 ESTÁDIO E; (1S,3S,4R)ABH-EH2

Dissolvem-se 25,5 g (0,155 mole) de ABH-UH2, HC1 /mistura de isômeros (1S,3S,4R)/(1R,3R,4S)7 obtidos no estádio anterior, em 250 ml de água. leutraliza-se esta solução com hidróxido de sódio 10 N e leva-se até à secura. Agita-se o resíduo em 200 ml de isopropanol anidro e filtra--se. Evapora-se então, o filtrado, retoma-se com 250 ml de cloreto de metileno, filtra-se para eliminar os vestígios de cloreto de sódio e evapora-se, depois, até à secura.

Após dissolução em 400 ml de metanol ani- - 25 -ι f .¾ dro, adicionam-se 20,8 g (0,139 mole) de ácido D(-) tartá-rico a esta solução e leva-se depois o conjunto a refluxo sob agitação até â dissolução completa. Arrefeee-se o conjunto lentamente e sob agitação durante 18 horas, filtra-se o precipitado formado e lava-se com 25 ml de metanol.

Repete-se esta operação de purificação até à obtenção de um isômero opticamente puro. Segue-se a pureza enantiomêriea mediante cromatografia líquida nas seguintes condições após derivação com o reagente de MOSHER.

Coluna: comprimento. : 15 cm diâmetro interior : 6,0 mm fase estacionária: ASAHI PAE QDP-50 (tamanho das partículas : 5 jum) fase móvel: acetonitrilo : 65 volumes água : 35 volumes H2S04 5 0»5 volume Débito: 1 ml/minuto Tempo de retenção:

(1S,3S,4R)ABH-NH2 : 6,4 min. (1R,3R,4S)ABH-RH2 : 6,8 min.

Dissolve-se, então, o tartarato de (1S,3S,4R)ABH-HH2 em água, fixa-se sobre uma resina permu-tadora de iões e elui-se depois com uma solução amoniacal a 10%.

Após evaporação, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento: 60% - 26 - ESTÁDIO F: tBOC-(S)Leu-(lS,3S,4a)ABH-HH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio D do exemplo 1, mas substituindo o tBOC--(S)(F^-Me)His-OH pela tBOC-(S)Leu-OH, obtém-se o composto pretendido. ESTÁDIO G: (S)Lea-(lS,3S,4R)ABH-BH2, eloridrato

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio E do exemplo 1, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 87% ESTÁDIO H: Z(S)PiroGlu-(S)Leu-(lS,3S,4R)iBH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descri-to no estádio F do exemplo ,l,mas substituindo a (S)(I -Me)-His-(1S,3S,4R)ABH-EH2 pela (S)Leu-(lS,3S,4R)ÁBH-ra2 obtida no estádio anterior, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento: 72% ESTÁDIO I: (S)PiroGlu-(S)Leu-(lS,3S,4R)ABH-MH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio G do exemplo 1, mas substituindo a Z(S)-Piro-Glu-(S)(I^-Íe)His-(lS,3S,4R)ÁBH-RH2 pelo Z(S)-PiroGlu-(S)-Leu-(1S,3S,4R)ÁBH-EH2 obtido no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 37% licroanâlise elementar: G % H % I % Calculada : 59,32 7,74 15, 37 Encontrada: 59,11 7,93 15, 66 EXEMPLO 6 : (S)PiroGlu-(S)(N^-Me)His-(lS,3S,4íOABMH2

Eos estádios A a E procede-se de acordo com os processos descritos nos estádios A a E do exemplo 5. ESTÁDIO E: tBOC(S)(l^e)His-(lS,3S,4R)-AM-]5íH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio E do exemplo 5» mas substituindo o tBOC-(S)- rrf

Leu-OH pelo tB0C-(S)(N -Me)His-0H, obtém-se o composto pre- Ί tendido.

Rendimento: 83$ ESTÁDIO G: (S)(#-Me)His-(lS,3S,4R)ABH-m2, dicloridrato.

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio G do exemplo 5, mas substituindo a tBOC-(S)-Leu-(1S,3S,4R)ABH-M2 pela tBOC-(S)(Afle)His-(1S,3S,4R)-ABH-IH2 obtida no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 81% Ί i ESTÁDIO H: Z(S)PiroGlu-(S)U^e)His-(lS,3S,4R)ABH-IJH2

Procedendo de acordo com o proeesso descrito no estádio H do exemplo 5» mas substituindo a (S)Leu--(IS,3S,4R)ABH-IHg pelo (S)(A\ie)His-(lS,3S,4R)ABH-1H2, dicloridrato obtido no estádio, anterior, obtém-se o composto pretendido. ι - 28

Tf' ESTÁDIO I: (S)PiroGlu-(S)(H -Jíe)His-(lS,3S,4R)ABH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descri to no estádio I do exemplo 5, mas substituindo a Z(S)Piro-Glu-(S)Leu-(lS,3S,4R)ÁBH-IH2 pela Z(S)PiroGlu-(S)-(H*-Me)-His-(1S,3S,4R)ABH-M2 obtida no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 66%

Ressonância magnética nuclear do protão (P20): k

i

c d M - GH | 1 o 0 1 1 GH, > H^clj Í Έ - CHo a *=/ 3 — f a ± b c d 7.5 ppm (lH,s) 6,8 ppm (lH,s) 5,0 ppm (lH,m) 4.5 ppm (lH,m) e =4,3 ppm (lH,m) f =3,6 ppm (3H,s) g = 3,0 ppm (2H,m) h =2,5 ppm (4H,m) i =2,7 ppm (lH,m) k =1,6 ppm (6H,m) EXEMPLO 7: (S)HomoPiroGlu-(S)(NXlIe)His-(lS,3S,4R)ABH-IH2

Os estádios A a G são idênticos aos estádios Â a G· do exemplo 6. ESTÁDIO Hí (S)EomoPiroGlu-(S)(I1f-Me)His-(lS,3S,4R)ABH-M2

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio H do exemplo 6, mas substituindo o éster activado da I-hidroxi-succinimida de Z(S)PiroGlu-OH pelo éster activado da hidroxi-suceinimida do (S)HomoPiroGlu-OH, obtêm--se o composto pretendido.

Rendimento: 83%

Microanálise elementar: G % H % I % Calculada : 57,68 6,78 20,18 Encontrada: 57,60 6,75 19,88 EXEMPLO 8: (S)HomoPiroGlu-(S)Leu-(lS,3S,4R)ABH-IH2

Os estádios A a G são idênticos aos estádios A a G do exemplo 5. ESTÁDIO H: (S)HomoPiroGlu-(S)Leu-(lS, 3S, 4R)ABH-M2

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio H do exemplo 5, mas substituindo o éster activado da hidroxi-succinimida do Z(S)PiroGlu-OH pelo éster activado da I-hidroxi-succinimida do (S)HomoPiroGlu-OH, obtêm—se o composto pretendido.

Rendimento: 64/> Ressonância magnética nuclear do protão (DMSQ dg)

c GH / Λ H^G GH^ d d a entre 4 e 4,6 ppm (4H,m) b =2,6 ppm (2H,m) c entre 2,2 e 1,4 ppm (14Hm) d =0,9 ppm (6H,d) EXEMPLO 9í (S)PiroGlu-(S)His-(IS,3S,4R)ABH-NH2

Proeedendo de acordo com o processo descrito elo exemplo 5, mas substituindo no estádio P a tBOC-(S)-Leu-OH pelo tBOC(S)His-OH, obtém-se o composto pretendido.

Ressonância magnética nuclear do protão Λ CO - IH - CH - GO - N b < CH2 f d

M a

H a = 7,65 ppm (lH,s) b = 6,95 ppm (lH,s) 0 =4,75 ppm (lH,m) d = 4,55 ppm (lH,m) e = 4,05 ppm (2H,m) f entre 3,2 e 2,8 ppm (2H,m) Eu =2»7 ppm (lH,m) 1 entre 2,4 e 1,7 ppm (4H,m) k entre 1,7 e 1,3 ppm (6H,m) EXEMPLO 10: (S)HomoPiroGlu-(S)His-( IS, 3S, 4R)ABH-m2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 9, mas substituindo no estádio Η o Z(S)Piro-Glu-OH pelo (S)HomoPiroGlu-OH, obtêm-se o composto pretendido. - 31 - - 31 - Ressonância magnética nuclear do protão (DMSO d/-): k

a = 7,7 ppm (lH,s) b =6,95 ppm (lH,s) c =4,75 ppm (lH,m) d =4,55 ppm (lH,m) e = 4,00 ppm (lH,d) f =3,90 ppm (lH,m) g entre 3,1 e 2,8 ppm (2H,m) h =2,75 ppm (lH,m) i =2,1 ppm (2H,t) k entre 2,0 e 1,2 ppm (]0H,m) EXEMPLO 11: (S)HomoPiroGlu-(S.)(E^e)His-(lS,3S,4R)ABH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 7, mas substituindo no estádio F o tB0C-(S)(lísí'-Me)-

His-OH pelo tB0G-(S)(I^-Me)His-OH, obtêm-se o composto pretendido.

g =3,6 ppm h. entre 3,3 (1H,s) (lH,s) (lH,m) (lH,m) (lH,m) (lH,m) (3H,s) e 1,5 ppm (15H,m - 32 -

EXEMPLO 12i (S)PiroGlu-(S)His-(m,3R,4S)ABH-lJH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 9, mas substituindo no estádio P, a (IS,3S,4R)-ABH-IHg pela (IR, 3R, 4S)ABH-EHg obtida no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido. EXEMPLO,13i OTh-(S)(I -Me)His-(lS,3S,4R)ABH-IH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio f o tBOC-(S)-Leu-OH pelo tBOC-(S)(l -Me)His-OH e no estádio Η o Z(S)-PiroGlu-OH pelo Z-OTh-OH, obtém-se o composto pretendido. Rendimento: 66$

Mlcrioanálise elementar: C % H % ET % S % Calculada : 51,42 5,75 19,99 7,63 Encontrada: 51,33 5,76 20,09 7,98 EXEMPLO 14: dOPir-(S)(Έ 41íe)His-( IS, 3S, 4R)ABMH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 13, mas substituindo no estádio Η o Z-OTh-OH pelo Z-dOPir-OS, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento:53% - 33 -

Ressonância magnética nuclear do protão (DMSO dg):

H 0

ti' I H

f = 4,0 ppm (lH,d) £ = 3,6 ppm (3H,s) h =2,9 ppm (2H,m) i =2,7 ppm (lH,m) I =1,5 ppm (6H,m) EXEMPLO 15: OAz-(S)Leu-(lS,3S,4R)ABH-lH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio Η o Z(S)PiroGlu pelo Z-OAz-OH preparado de acordo com o processo descrito por K. TANAKA, S. YOSHIPUZI e Y. HITTA, "Hétéroeycles", 1986, 24. (9), 2539, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento; 43%

Ressonância magnética nuclear do protão (DMSO dg):

c entre 3,1 e 2,6ppn(2H,m) d = 2,7 ppm (lH,m) e =1,6 ppm (9H,m) f = 0,9 ppm (6H,m) 0 - 34 -

EXEMPLO 16: OiQ-(S)Leu-(lS,3S,4R)ABH-UH2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio Η o Z(S)Piro-Glu-OH pelo Z-OiQ-OH preparado pelo processo descrito por H. MAEDA e M.SUZUKI, "Chem. Piiarm. Buli.", 1988, 36 (1), 190, obtêm-se o composto pretendido. EXEMPLO 17: (S)IomoPiroÊHu-(S)Leu-IIABO-M2 "isómero * "

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 8, mas substituindo no estádio A o ABH-OH "isômeros pelo ΜΙΔΒ0-0Η "isômeros °<í^" obtido na pre paração A, obtêm-se o composto pretendido. EXEMPLO 18: (S)PiroGlu-(S)(N -Me)His-dMAB0-IH2 "isómero < "

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo no estádio A o ABH-OH "isômeros pelo dlAB0-0H "isômeros obtido na pre paração B, obtém-se o composto pretendido. EXEMPLO 19: (S)PiroGlu-(S)Leu-dMAB0-M2 "isómero o< »

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio A o ABH-OH "isômeros pelo dMABO-OH "isômeros obtido na pre paração B, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 5%

Microanálise elementar: C % H % I % Calculada : 62,05 8,43 13,78 Encontrada: 62,20 8,66 13,33 EXEMPLO 20: (S)PiroGlu-(SjLeu-ffilABO-EHg "isômero "

Procedendo de acordo com o processo descri to no exemplo 5, mas substituindo no estádio A o ABH-OH “isômeros «í δ M pelo MIABQ-QH "isómeros <*$*" obtido na preparação A, obtém-se o composto pretendido. EXEMPLO 21: QiQ-(S)(I -Me)His-(IS,33,4R)ABH-NH2

Procedendo de acordo com o processo descri to no exemplo 5, mas substituindo no estádio F o tBOC-(S)-Leu-GH pelo Z-OiQ-OH preparado de acordo com o processo des crito por M. MAEDA e M. SUZUKI, "Chem. Pharm. Buli." 1986, 36. (1), 190, obtém-se o composto pretendido. licroanálise elementar: C % H % I % Calculada : 62,06 6,08 18,09 Encontrada: 61,71 6,55 18,44 EXEMPLO 22: (S)0Az-(S)(l -Me)His-(IS,3S,4R)ABH-NH2

Procedendo de acordo com o processo descri to no exemplo 5, mas substituindo no estádio F o tBOC-(S)-Leu-OH pelo tB0C-(S)(l -Me)His-0H e no estádio Η o Z(S)-PiroGlu-OH pelo Z-OAz-OH preparado de acordo com o processo descrito por K. ΤΑΪΓΑΚΑ, S. YOSHIFUZI e Υ.ΗΊΡΤΑ, "Hétérocy-cles", 1986, (9), 2539, obtêm-se o composto pretendido.

Rendimento: 51%

Microanâlise elementar; C % Η % Έ %

Calculada : 55,66 6,23 21,64

Encontrada: 56,03 6,51 21,61 EXEMPLO 23; (S)OAz-(S)His-(lS,3S,4R)ABH-M2

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio F o tBOC-(S)-Leu-OH pelo tB0C-(S)His-0H e no estádio Η o Z(S)PiroGlu-OH pelo Z-OAz-OH preparado de acordo com o processo descrito por K. ΜΑΚΑ, S. YOSHIFUZI e Y. IITTA, "Hêtérocycles", 1986, 24, (9), 2539, obtêm-se o composto pretendido. Rendimento: 61%

d =4,0 ppm (2H,m) e entre 3,1 e 2,5 ppm (5H,m) f - 1,5 PPm (6H,m)

ESTUDO FARMACOLOGICO DOS DERIVADOS PREPARADOS PELO PROCESSO DE ACORDO COI A PRESEITE IUVEEÇlO EXEMPLO 24; Défice colinérgico devido a barbitúricos no rato

Do rato, a nareose causada pelo pentobarbi-tal (60 mg/Kg ip) conduz a um bipofuncionamento acentuado da neutrotransmissão colinérgica que se manifesta particularmente pela diminuição (-48%) da captura sinaptossomal da

colina com alta afinidade (HACU) determinada 20 minutos depois da narcose. Esta captura sódio-dependente constitui normalmente o factor limitativo da síntese da aoetileolina. A administração de TRH (10 mg/kg ip.) simultaneamente com a do pentobarbital não inibe a narcose mas opõe-se (-35%) à diminuição da HACU induzida pelo barbitúrico.

Ias mesmas condições e na dose de 10 mg/kg por via intraperitoneal, o composto do exemplo 1 inibe de 66% a diminuição da HACU. EXEMPLO 25í Tremores causados pela oxotremorina no murganiio Λ../· A administração de oxotremorina (0,5 mg/kg por via intraperitoneal) no murganho leva ao aparecimento de sintomas neurológicos muscarínicos de origem central cujos tremores são a expressão rnais marcada. Estes atingem o máximo da sua intensidade após 15 minutos e desaparecem depois de uma hora. A administração de TRH (10 mg/kg por via intraperitoneal) 30 minutos antes da oxotremorina conduz a uma potenciação (+90%) dos tremores determinados no auge da acção do agonista muscarínico. Mas este efeito não aparece na dose de 3 mg/kg por via intraperitoneal.

Ias mesmas condições, o composto do exemplo 1 exerce a mesma potenciação (+90%) na dose de 10 mg/kg por via intraperitoneal sem induzir tremores por si próprio.

Este efeito ê ainda marcado (+60%) e significativo na dose de 3 mg/kg por via intraperitoneal. ffia-nifesta-se ainda durante 60 minutos depois da administração da oxotremorina enquanto os animais testemunhas deixam de apresentar tremores. - 38 -

Por via oral, na dose de 10 mg/kg, o composto do exemplo 1 exerce um efeito idêntico ao observado por via intraperitoneal na dose de 3 mg/kg. A $RH administrada por via oral não exerce nenhum efeito potencializador.

A origem deste efeito potencializador das acções centrais da oxotremorina parece diferente nas condições experimentais, entre a TRH e o composto tomado como exemplo. Com efeito, na presença de uma dose muito pequena (0,01 mg/kg) de scopolamina que não se opõe aos tremores nos animais testemunhas, o efeito potencializador do com- rf* ·'·· . * posto do exemplo 1 desaparece enquanto o da TRH subsiste. Θ composto do exemplo 1 aparece, por conseguinte, como um agente facilitador colinérgico enquanto a ÍERH poderá exercer este efeito potencializador mediante agonismo dopaminérgico. EXEMPLO 26í Interacção com a clonidina

No murganho, a clonidina, agonista 2 central conduz a um efeito sedativo hipometabòlizante cerebral que leva a um aumento (+60%) do tempo de sobrevivência cerebral quando da paragem cardíaca brutal provocada pela injeeçao intravenosa de uma dose massiva de MgClg.

Administrada simultaneamente com a clonidina, a TRH antagoniza o efeito do agonista o<? (1 mg/kg por via intraperitoneal : -80%) sem ter efeito próprio no en saio utilizado.

Nas me suas condições, o composto do exemplo 1 antagoniza o efeito sedativo da clonidina (0,3 mg/kg - 39 - - 39 -

por via intraperitoneal: -20%; 1 mg/kg intraperitoneal: -70%). 0 composto do exemplo 1 facilita, por conseguinte, a :neúrotransmissão noradrenêrgiea e opõe-se à sedução provocada pela inibição desta neurotransmissão.

Claims

REIVINDICA Ç Õ E S 1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

HN-CN-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO-NH, (I) na qual A considerado em conjunto com os átomos de azoto e de Carbono a que está ligado representa: - Um grupo 2-oxo-5-p.irrolidinilo, - um grupo 2-oxo-6-piperidinilo, - um grupo 2,6-dioxo, 1,2,3,é-tetra-hidro-4-pirimidini lo, - um grupo 2-oxo-4-tiazolidinilo, - um grupo 2-oxo-4-azetidinilo , - um grupo l-Oxo-1,2,3,4-tetra-hidro-3-isoquinolilo , -41-

B considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado representa uma estrutura policíclica saturada escolhida entre 2-aza-biciclo ΖΓ 2.2.1 J heptano, 1,4-(dialquil inferior de cadeia linear ou ramificada)-2-aza-biciclo ΖΓ2.2.2 _7~octano, R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior de cadeia linear ou ramificada ou (4-imidaz£ lil)-metilo eventualmente substituído num dos átomos de azoto por um radical alquilo inferior de cadeia li_ near.ou ramificada,

indicando o termo inferior que os grupos assim qualificados comportam 1 a 6 átomos de carbono, dos seus enantiómeros, diastereoisó-meros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se proteger a função amina de um aminoácido de fórmula geral II do qual, eventualmente, se separam os isómeros mediante uma técnica clássica de separação: (II) HN-CH-C0oH \ I na qual B tem o significado definido antes, com um radical protector (P) tal como o butoxi terc.-carbonilo (tBOC), ou o benziloxicarbonilo (Z) sob a acção de um reagente apropriado para se obter o derivado de fórmula geral \ P-N-CH-CCLH t \ 2 (III) •B' na qual B e P têm os significados definidos antes, com o qual se faz reagir, a uma temperatura compreendida entre -15° e 0°C, na presença de trietilamina, o cloroformato de etilo e depois amoníaco, para se obter um composto de fórmula geral P-N-CH-CO-NH» (IV) l ' L

na qual B e P têm os significados definidos antes, que se desprotege por um processo apropriado como por exemplo mediante reacção com ácido clorídrico gasoso no seio de um dissol vente anidro tal como o dioxano ou o acetato de etilo no caso em que o símbolo P representa t.BOC ou mediante hidrogenação catalítica no caso em que o símbolo P representa o grupo Z, para se obter um composto de fórmula geral (V) hn-ch-co-nh2 XB'' na qual B tem o significado definido antes, do qual, eventualmente, se separam, os isómeros mediante uma técnica clássica de separação, que se liga com um segundo aminoácído protegido de fórmula geral tB0C-NH-CH-C02H (VI) R na qual R tem o significado definido antes, para se obter um composto de fórmula geral

(VII) tBOC—NH—CH—CO—N—CH—CO — ΝΗ0 R VB' na qual R e B têm os significados definidos antes, do qual, eventualmente se separam os diastereoisómeros ou enan-tiómeros mediante uma técnica clássica de separação, que se desprotege, em seguida, mediante reacção com ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro como por exemplo o dioxano ou o acetato de etilo para se obter um composto de fórmula geral H9NrCH-CO-N-CH-CO-NH_ \ 2 (VIII) R 'B/ na qual R e B têm os significados definidos antes, que se liga com um terceiro aminoácido eventualmente protegido de fórmula geral Λ R'_'N-CH-C02H (IX) na qual R’ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector tal como por exemplo um benziloxicarbonilo (Z) ou com um éster activado deste aminoácido eventualmente protegido, para se obter: - quer um composto de fórmula geral I, no caso em que o símbolo R1 representa um átomo de hidrogénio, que, eventualmente se transforma no seu sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, - quer um composto de fórmula geral ,'N I I R ’ -N-CH-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO-NH., (X) í ( 2 I \ / R 'B'' no caso em que o símbolo R’ representa um grupo pro-tector, tendo R e B os significados definidos antes, que se desprotege de acordo com uma técnica de desprotecção como por exemplo uma hidrogenaçio catalítica para se obter um composto de fórmula geral I, que, eventualmente, se transforma no seu sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, ou se separa nos seus isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação, que, eventualmente, se salifica com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo B considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado representa um ciclo 2-aza-biciclo Z2.2.1_7 heptano, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre- paração de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo B consi derado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado representa um ciclo 1,4-dialquil-2-aza-biciclo / 2.1.2 J octano, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4.- Processo de acordo com as reivindicações 1 e 3, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo B considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado representa um ciclo 1,4-dimetil~2-aza-biciclo /2.2 2_7 octano, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5·- Processo de acordo com as reivindicações 1 e 3, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo B considerado em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado representa um ciclo 4-metil-l-isopropil-2-aza-biciclo /2.2.2 J octano, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. -46-
6.- Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral PiroGlu-(N^-Me)His-ABH-dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, na qual PiroGlu representa o radical T 2-pirrolidona-5-carbonilo, (N -Me)His representa o radicalΐ-^-ρ - -histidilo e ABH representa o radical 2-aza-3-carbonil-bicicio/"2.2.1. J/heptano,caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
7. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral PiroGlu-Leu-ABH-N^, na qual PiroGlu representa um radical 2—pirolidona-5-carbonilo, Leu representa um radical leucilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo Cl.l.lJ heptano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a Z preparação do composto de fórmula geral PiroGlu-N -Me)His-ABH--NH^, na qual PiroGlu representa um radical 2-pirrolidona-5-carbo- X nilo, (N -Me)His representa um radical 3-metil-histidilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo /2.2.1_7-heptano, -47- \ dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9. -. Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral HomoPiroGlu-(N*1* -Me)His--ABH-NH2, na qual HomoPiroGlu representa um radical 2-piperidino- na-6-carbonilo, (N*1' -Me)His representa um radical 3-metil.-histidilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo /2.2.1,7 hep-tano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob 0 ponto de vista' farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
10. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação de composto de fórmula geral HomoPiroGlu-Leu-ABH-NH^, na qual HomoPiroGlu representa um radical 2-piperidinona-6-carbo-nilo, Leu representa um radical leucilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo /2.2.1J heptano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros, e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
11.- Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral PiroGlu-His-ABH-Nl·^, na qual PiroGlu representa um radical 2-pirrolidona-5-carbonilo, His representa um radical histidilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo Z,2.2.1_7 heptano, dos seus diastereoi-sómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
12. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral HomoPiroGlu-His-ABH--NH2, na qual HomoPiroGlu representa um radical 2-piperidinona-6--carbonilo, His representa um radical histidilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo JJL.2.1J heptano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
13. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, para a preparação do composto de fórmula geral HomoPiroGlu (N*1· -Me)His-—ABH-NH^j na qual HomoPiroGlu representa um radical 2-piperidino-na-6-carbonilo, (N -Me)His representa um radical 1-metil-histidi lo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonil-biciclo C2.1.1J

-heptano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. P
14. - Processo de acordo com as reivindicações 1, 3 e 5, para a preparação do composto de fórmula geral HomoPiroGlu-Leu--MIABO-NI-^, na qual HomoPiroGlu representa um radical 2-piperidi-nona-6-carbonilo, Leu representa um radical leucilo, MIABO representa um radical 4:-metil-l-isopropil-2-aza-3-carbonil-biciclo L 2.2.2_7 octano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de asição com um ácido aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. P
15. - Processo de acordo com as reivindicações 1,3 e 4, para a preparação do composto de fórmula geral Piro-Glu-(N -Me)His-dMABO--NH2, na qual PiroGlu representa um radical 2-pirrolidinona-5-car-bonilo, (Ντ -Me)His representa um radical 1-metil-histidilo e dMABO representa um radical 1,4-dimetil-2-aza-3-carbonil-biciclo £ 2.2.2 JJ octano, dos seus diastereoisómeros, enantiómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos inciciais correspondentemente substituídos.
16.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral II úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
17.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geralm,úteis.para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
18. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral IV úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
19. - Processo de acordo com a'reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral V úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
20.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral VII úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. -51- -51-
21.- Processo de acordo com a reivindciação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral VIII úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos, Lisboa, 28 de Junho de 1990 G Aceite Ofidal da Propriedade Industrial

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