JPS62169730A - トリプトフアンを含有するオリゴペプチドを用いる神経障害の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の技術的背１ｉｉ］ 不眠症およびうつ症は日常的に多くの人がかかるよく知
られた問題である。確実な作用薬は確かに豊富に存在す
るが、その様々な副作用のためにこれらの全てをためら
いなく使用することはできない。時として不可欠である
長期的な治療、とりわけベンゾジアゼピンを用いる治療
では、習慣作用に注意することが必要である。しかし、
バルビッール化合物や他の通常の睡眠薬もまた、依存を
起こし、自殺目的に利用される恐れがあり、更に、多数
の副作用を有している。

最近睡眠の生理学について得られている基礎的な知見か
ら、睡眠経過の複雑性が確認され、また、睡眠を引起こ
し、個々の睡眠相の秩序正しい経過を保証する生理学的
および生化学的機構がいかに複雑であるかが示された。

そのような機構には、大部分がアミノ酸から合成される
異なる伝達物質いわゆる神経伝達物質を伴って種々の脳
野が関与している。

そのような神経伝達物質として、ノルアドレナリンとド
ーパミン（チロシンから合成される）およびトリプトフ
ァンから合成されるセロトニンがよく知られている。

研究の結果、特定の神経伝達物質またはその前駆体の欠
乏状態では、刺激伝達が妨げられ、その結果としてしば
しば、例えば睡眠障害やうつ症などの精神疾患となるこ
とが示された。睡眠は中脳と菱形脳の境稈範囲のいわゆ
るラフエ（Ｒａｐｈｅ）系中のセロトニン効果ニューロ
ンにより引起こされる。脳内でのトリプトファンからの
セロトニンの生合成が抑制され、その結果として不眠症
が起こる。セロトニン欠乏は直接の置換えによっては解
消されない。というのは、望ましくない副作用と無関係
のセロトニンは、それ自身いわゆる血液脳関門を通過で
きないからで゛ある。従って、セロトニン効果ニューロ
ン中で必須アミノ酸のトリプトファンから形成されなけ
ればならない。この合成は２段階で成され、まずトリプ
トファンヒドロキシラーゼを用いる水酸化によって５−
ヒドロキシトリプトファンが形成され、これから芳香族
アミノ酸デカルボキシラーゼを用いる脱炭酸によって５
−ヒドロキシトリプタミン、即ちセロトニンが形成され
る。

トリプトファン欠乏は中でも不眠症とうつ症を生じる。

それで、トリプトファン欠乏とその結果は、血液脳関門
を通過できる遊離形のトリプトファンの投与によって治
療されてきた。そのような治療は、セロトニンなどの主
要な伝達物質の不活性化を抑制する古典的な抗うつ薬と
、活性化された網状神経組織を非特異的に弱める従来の
催眠薬に比較して、一定の利点を有して□い゛る。つま
りこの治療の利点は、直接的であり、しかも副作用がな
く、依存または嗜癖を起こさない点である。また、自殺
薬となる恐れもなく、更に、活性な向精神薬を用いる治
療を必要とする重い障害の際にその薬量をトリプトファ
ンの投与によって減少できる可能性がある（「ドイツの
薬剤師 （Ｄｅｒ　　［）ｅｕｔｓｃｈｅ　　Ａｐｏｔｈｅｋｅ
ｒ）　Ｊ　、３５巻、４号（１９８３年）、１〜７頁を
参照）。

′ｆｌｌｌｌｔ形でのみ血液脳関門を通過できるトリプ
トファンを用いるこの治療の欠点は、胃腸経路からのト
リプトファンの吸収または吸収度が比較的低レベルであ
ることと、組織膜を通るトリプトファンの輸送がかなり
制限されていることである。そのために、トリプトファ
ンは高い薬量と高い頻度で投与されなければならない。

神経障害の治療に対しては、セロトニン濃度が脳内では
高く、血中では低く保たれることが重要である。という
のは、そうでなければ血中の高セロトニン濃度が抹消で
の障害を起こすからである。

また、セロトニンまたはトリプトファンの代わりに、セ
ロトニン前駆体　５−ヒドロキシ１〜リプトフアンを用
いる試みも既に行われている。この方法の問題点は、５
−ヒドロキシトリプトファンがデカルボキシラーゼによ
り血中で既にセロトニンに変換され、そのために血中の
セロトニン前駆体が不都合に高められるということであ
る。

その際には、吐き気や下痢などの望ましくない胃腸の副
作用が観察される。そのような副作用を避けるためには
、５−ヒドロキシトリプトファンを、ペンセラシト（Ｉ
ＮＮ）即ち　Ｎ−（ＤＬ−セリル）　−Ｎ’　−（２，
３，４−トリヒドロキシ−ベンジル）−ヒドラジン、ま
たはカルビドーパ（ＩＮＮ）即ち　（−）−Ｌ−α−ヒ
ドラジニル−３，４−ジヒドロキシ−α−メチル−ハイ
ドロ桂皮酸などのデカルボキシラーゼ阻害剤と共に投与
しなければならない。しかし、これらのデカルボキシラ
ーゼ阻害剤は、不都合でかつ場合によっては重大な副作
用を生じるという欠点を有している。

それで、神経障害、特に不眠症とうつ症の治療に適した
薬物が依然として必要とされている。従って、本発明の
課題は、従来の薬物の欠点を持たず、デカルボキシラー
ゼ阻害剤の使用を必要とせず、かつ、毒性でなく、実質
的に副作用を持たず、依存または嗜癖を招かず、自殺に
使用される恐れがなく、更に身体から良好に吸収される
、即ちより少ない量の使用を可能にし、組織膜を通る良
好な輸送を示す、不眠症およびうつ症などの神経障害の
治療に対する新規な薬物を捏供ザることである。

［発明の概要］ 結合したアミノ酸の少なくとも一つがトリプトファンま
たはトリプトファンから誘導されたアミノ酸である一定
のオリゴペプチドを神経障害、特に不眠症およびうつ症
の治療に使用できること、および上記のオリゴペプチド
またはそのようなオリゴペプチドの混合物を含有する神
経障害、特に不眠症およびうつ症の治療に対する薬剤が
見出された。

そのような物質が、単独で投与された場合またはトリプ
トファンと組合せて投与された場合に効渠内であること
が発見されたことは驚くべきことである。本発明のオリ
ゴペプチドは、少なくとも一つがし一トリプトファンま
たはその誘導体である全部で１０を越えないアミノ酸、
好ましくは９のアミノ酸の組合わせを包含する。

［好ましい具体的の説明］ 現在全ての天然のアミノ酸はＬ形で存在すると考えられ
ている。従って本明ＩＩＩＩ書中で、特に断わりのない
ものはＬ形で存在することが仮定されている。

使用する名称はＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの生化学命名委員会
に従った（　Ｅ　ｔｌｒｏＩ）ｅａｎ　　Ｊ　、　Ｂ　
ｉｏｃｈｅｍ、。

（１９８４）　、１３虹９−３７）。

また特に断わらない限り、オリゴペプチド鎖の左端のア
ミノ酸が遊離のアミノ基を有し、右端のアミノ酸が遊離
のカルボキシル基を有する。

本発明で好ましく使用できるオリゴペプチドは、式、 （Ｒ１）ｒＬ−（Ｒ２）ｎ　−（Ｒ３１ｒＬ−（Ｒ４）
ｎ　−（Ｒｓ　）ｎ　−（Ｒｓ　）ｎ　−−１０＝ （Ｒ７）ｎ　−（Ｒｅ　　）ｒＬ−（Ｒ９）１１［式中
、ｎは１またはＯであり、Ｒ１ないしＲ９はアミノ酸で
ある］ で表される。アミノＩ！［Ｒｔ〜Ｒａは、これらの群の
少なくとも一つがトリプトフアンまたはその誘導体、好
ましくは５−ヒドロキシトリプトファンであることを条
件として、同一であってもよく、また異なっていてもよ
い。ペプチド鎖中にトリプトファンおよび５−ヒドロキ
シトリプトファン以外に２ないし５のアミノ酸が存在す
ることが特に好ましい。アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、
Ｓｅｒ。

Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｐ、Ｇ　ｌ　ｕ、Ｐｈｅ
、Ｈｉ　５ＳＬｙｓＳＰｒｏ、Ｔｙｒ。

Ｖａｔ、Ｉｓｏおよび１−ｅｕからなる群から選ぶこと
ができ、Ｑ　ｌ　ｙ、Ａ　Ｉ　ａ、３ｅｒＳＴｈｒ。

Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、　Ｇ−＋　ｕ。

Ｇ　ｌ　ｎ、Ｈｉ　５ＳＬｙｓおよびＰｒｏが好ましく
、特にＧｌｙが好ましい。

本発明は単一のオリゴペプチドの使用に制限されず、オ
リゴペプチド相互のまたはトリプトファンまたはトリプ
トファン誘導体との混合物を使用できる。同様に、例え
ば塩酸または酢酸、好ましくは酢酸などの薬剤的に受容
できる酸または塩基との付加塩も使用できる。

本発明に特に適するオリゴペプチドには、Ｔｒｐ−Ｔｒ
ｐ、Ａ　ｌ　ａ−Ｔｒｐｓ　Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ、Ｇ　
Ｉ　ｙ−Ｔｒｉ）、Ｔｒｐ−Ｇ　Ｉ　Ｖ、５−ＯＨ−Ｔ
　ｒ　ｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ、　５−ＯＨ−Ｔ　ｒ−ｐ−Ａ　
ｌ　ａ、　Ｇ　Ｉ　Ｖ−５−ＯＨ−Ｔｒｐ、　Ａ　Ｉ　
ａ−５−ＯＨ−ＴｒｐＳ”ｒｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ。

Ａ　ｌ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ
−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ　−Ｔｒｐ
−Ａｌａ、５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ、５ｅｒ−
Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｇ　Ｉ　ｙ。

５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＧｌｙおよびＴｒｐ
−８ｅｒ−Ａｌａ−ＧＩＶ−Ｔｒｉ）がある。

好ましいペプチドとしては、Ｔｒｐ−Ｔｒｌ）。

Ａ　Ｉ　ａ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ、Ｇ　ｌ　ｙ
−ＴｒｐＳＴｒｐ−Ｇ　Ｉ　Ｖ、５−ＯＨ−Ｔｒｐ−Ｇ
　Ｉ　Ｖ、　５−ＯＨ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａ、　Ｇ　ｌ
　ｙ　−５−ＯＨ−Ｔｒｐｓ　　Ａ　ｌ　　ａ−５−０
）１−ＴｒｐｌＴｒｐ−Ｔｒｐ−”ｒｒｐ、Ａ　ｌ　　
ａ−Ｇ　Ｉ　　Ｖ−Ｔｒｌ）、　　Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　　
ａ−Ｇ　Ｉ　　Ｖ、Ａ　ｌ　　ａ　−Ｔｒｐ−Ｇ　Ｉ　
Ｖ、　Ｇ　Ｉ　Ｖ−Ｔｒｐ−Ａ　ｌ　ａおよび３ｅｒ−
Ｔｒｐ−Ａ　Ｉ　ａ−ｙ’ｒｒｐがあり、特に本発明の
目的に適するのは、Ｔｒｐ−Ｔ、ｒｌ）。

Ａ　ｌ　ａ−Ｔｒｉ）、　Ｔｒｉ）−Ａ　ｌ　ａ、　Ｇ
　Ｉ　Ｖ　−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｇ　Ｉ　Ｖであり、中で
もＧｌｙ−Ｔｒｐが最も好ましい。

本発明で使用されるオリゴペプチドは、例えばいわゆる
遺伝子的方法も含めた通常の方法で製造できる。精製さ
れたオリゴペプチドまたはその混合物の代わりに、これ
らのオリゴペプチドを含む加水分解物も使用できる。好
ましい方法は、末端アミノ酸、好ましくはカルボキシル
末端酸がアミノ部分で保護され、好ましくは不安定なア
ミノ部分を有する基質とカップリングされるメリフィー
ルド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ　）法である。末端アミノ
基を保護基脱離し、望ましいオリゴペプチドが得られる
まで合成を続け、開裂する。

特に好ましいのは、トリプトファンとグリシル−トリプ
トファンの混合物である。オリゴペプチドと共に使用し
てそれの塩を形成することができる薬剤的に受容できる
酸および塩基は、これに限られるわけではないが、酢酸
およびリンゴ酸を含む。リジン酸塩、アルギン゛酸塩お
よびオルニチン酸塩などのアミンＩ！塩を使用できる。

トリプトファンと組合せて使用する場合は、オリゴペプ
チド／トリプトファン　重Ｉ／重−比は、１：１０から
１０；１まで、好ましくは１：５がら５：１まで、特に
１：２から２：１までであり、最も好ましいのは１：１
の比である。本発明のオリゴペプチドは、睡眠障害とう
つ症の通常の治療薬に比較して大きな利点を有している
。つまりこれらのオリゴペプチドは、毒性でなく、副作
用がなく、依存または嗜癖を導かず、自殺薬として使用
される可能性がなく、身体から容易に吸収され、優れた
薬物動力学的挙動とトリプトファン自身より良好な生体
膜を通る輸送とを示し、更に、デカルボキシラーゼ阻害
剤の使用を不必要にする。従って、これらの薬剤を比較
的少量かつ低温度で使用できる。驚くべきことに、トリ
プトファンと上に述べたオリゴペプチドとの混合物が、
不眠症およびうつ症などの神経障害の治療に優れた結果
を導くことが更に見出された。本発明の利点は実験結果
によって確認された。

本発明で使用される組成物、すなわちオリゴペプチド、
またはオリゴペプチドとトリプトファンまたはその誘導
体との組合せは、経口投与に適するように処方すること
ができる。そのためには、通常の希釈剤と混合し、それ
から、カプセル、懸濁液、乳剤、分散粉末、シロップお
よびエリキシルなどの通常の投与形に形成する。

オリゴペプチドまたはそれのトリプトファンとの組合せ
は、比較的に水に不溶であるが、十分な量の乳化剤また
は懸濁助剤が添加された場合には、高比率で水を含むソ
ルビトール溶液またはグリセリン溶液中に懸濁すること
ができる。また、必要な場合には、香味料または着色料
を添加することができる。

液体または固体の処方を経口投与のためにカプセルに詰
めることができる。活性な成分を、ヒマワリ油、ダイズ
油、トウモロコシ油またはタラ肝油などの動物油または
植物油中に懸濁または溶解させることができる。例えば
抗酸化剤などの通常の添加物を使用することができる。

カプセル中で使用される固体の処方は通常の担体物質と
共に形成することができる。錠剤は常法に従って製造で
き、炭酸マグネシウムまたはラクトースを不活性な弄釈
剤または担体として、トウモロコシデンプンまたはアル
ギン酸などの通常の崩壊剤、および／または、ステアリ
ン酸マグネシウムなどの滑剤と共に使用することができ
る。

１〜１０ｑ／日、好ましくは１．５〜３Ｑ／日のトリプ
トファン含有量を（約６０〜７０ｋｑ体重のヒトに対し
て）投与することが好ましい。

Ｌ ＢＯＣ−トリプトファンの合成 硫酸トリプトファン（２，２８Ｑ、１０ミリモル）を水
（１０ｍ）中に懸濁し、トリエチルアミン（２，８ｄ、
２０ミリモル）を加えた。その後、このようにして得た
溶液をジオキサン＜１０ｍｆりを用いて希釈し、この混
合物に水浴上で（氷で冷却して〉攪拌しながらジターシ
ャリブチル　ジカーボネート（２，４ｍ、１０ミリモル
）、を加えた。

それから、混合物を放置して室温にした。５時間後、ト
リエチルアミンの２度目の部分（１，４ｔｄ、１０ミリ
モル）とジターシャリブチル　ジカーボネート（１，２
１ｄ、５ミリモル）を加えた。一方、攪拌は室温で一晩
続けた。混合物をろ過し、減圧下で蒸発させた。残渣を
クロロホルム（５０ｍ）に溶解し、溶液を硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、油を得た。これを
クロロホルム／アセトンから結晶させた。３ｏｃ−ｔ−
リプトファンはトリエチルアミン硫酸塩として分離した
。

Ｌ ＢＯＣ−トリプトファンの　　　　Ｓ　　へのカス７’
　１，１ンクー ＤＭＦ５０ｒｄ、中の３．１１　Ｑ　（７ｍＭ）の＝１
７− Ｂｏｃ−ｔ−リプトファンを１．８９ａ　（１４ｍＭ＞
のＨＯＢｔと１．１１ｄｌ（７ｍＭ）のＤＩＣと室温で
３０分間反応させ、このようにして得られた活性エステ
ル溶液を５０のジクロロメタン中のアミノエチル樹脂［
ＳＰ］に加え、１０％ジイソプロピル　エチルアミン　
クロロホルム混合物中で脱プロトン化し、ＤＭＦを用い
て２度洗浄した。反応を９０分間で完了させ、ニンヒド
リン反応により試験した。最後に、カップリングした樹
脂をＤＭＦ、ジクロロメタン、再びＤＭＦを用いて洗浄
した。

式、Ｈ−ＡＳｐｔ　−８ｅｒ２−Ｔｙｒａ　−ＡｒＱ４
−ＬＶＳｓ−Ｔｒｌ）ｓで表されるオリゴペプチドを、
適当なりｏｃ−Ｔｒｐ−［ＳＰ］かう出発シテ、ヘツク
ｖン（Ｂｅｃｋｍａｎ）　９９０シンセサイザで次に述
べる方法に従い段階的に合成した。

ａ）　脱ブロツク化およびビルドアップ脱ブロツク化は
次の計画Ａに従って行った。

計画Ａ 混合時間（分） １、ＴＦＡ／Ｉ−ルエン　１：２＊　　　　　　２２、
ＴＦＡ／トルエン　１：２＊　　　　　２８３、ＣＨ２
Ｃｌ２２ ４、ＭｅＯＨ２ ５、ＣＨ２ＣＩ！、２　　　　　　　　　２と２６．Ｏ
Ｈ２Ｃβ２中ＤＩＥＡ（１０％）２と８ ７、ＭｅＯＨ２ ８、ＣＨ２Ｃβ２２ ９Ａ、ＤＩＣ（２等量） 十ＨＯＢｔ　（４等問）　　　　　　　−１０Ａ、ＢＯ
Ｃ７ミ／酸（２等量）＃　　　６０−９０または ９Ｂ、ＤＩＣ（２等−）十− １０Ａ、Ｂｏｃアミノ酸（４等量）＠　　　６Ｏ−９０
１１Ａ、ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　　　２また
は １１Ｂ、　ＣＨ２Ｃｌ２２２ １２、　ＣＨ２Ｃｌ２２　　　　　　　　　　２と２＃
　９Ａと１０Ａの混合の３０分前にＤＭＦ中に調製。

■　９ＢとＩＯＡの混合の３０分前に ＣＨ２Ｃｌ２２中に調製。

簡単には、樹脂１０当り１〜２ミリモルのＢｏｃ−保護
アミノ！Ｉｌ（ＤＭＦ中）を用いる。

Ｂｏｃ−ＡｒＧ　（Ｔｏｍ）がカップリングされる場合
には、５０％ＤＭＦと塩化メチレンの混合物が使用され
る。ベンジルエーテルが、ＳｅｒおよびＴｈｙに対する
水酸基側鎖保護基として使用される。２−クロロベンジ
ロキシカルボキル（２（１−Ｃｂｚ）がＬＶＳ側鎖に対
する保護基として使用される。Ｔａ５はＡｒ’ｇのグア
ニジノ基の保護に使用され、ＧｌｕおよびＡＳり側鎖カ
ルボキシル基は０ＢＺｆｆｉまたはＱＣｈＸを用いて保
護される。ＴＶｒのフェノール性水酸基は２゜６−ジク
ロロベンジル（ＤＣＢ＞を用いて保護される。

次の式の化合物が得られた。

Ｂｏｃ−ＡＳｐｔ　　（Ｘ’　）−３ｅｒ２　　（Ｘ２
）−ＴＶｒ９　（Ｘ３）−ＡｒＱ＋　　（Ｘ’　）−Ｌ
”ｌ／８５　　（Ｘ’　）−Ｔｒｐ−［ＳＰ］［式中、
×１はＯ−シクロヘキシルエステル、×２はＯ−ベンジ
ルエーテル、Ｘ３は０−２゜２ｌ− ６−ＣｕＢＺエ−テ／Ｌ／、ｘ４はトシ′ル、Ｘ’は２
−Ｃｂｚである］ ｂ）　開裂および保護基脱離 （実質的に、Ｔａ１ｅｔ　　ａｌ、　Ｊ、Ａｍｅｒ。

ＣｈｅＩｌｌ、　　Ｓｏｃ、　１０５　、６４４２．　
　（１９８３）の方法に従った。） 上記のようにして製造された保護ペプチドを出発物質と
して使用する。

保護ペプチドを２つの処理（２＋２８分）を使用するＨ
Ｆ処理に先立って５０％ＴＦＡ−トルエン（１：２　　
ｖ／ｖｌを用いて処理し、それからＣＨ２Ｇ（２２を用
いて３度洗浄する。

ＨＦ試薬とペプチジル樹脂またはペプチドとの不完全な
混合は、次の順の試薬の添加によって簡単に緩和できる
。（ａ）ペプチドまたはペプチジル樹脂、（ｂ）ｐ−ク
レゾール、ｐ−チオクレゾール、または両方、溶融形、
暖かいペプチドによって注意深く樹脂の頂上に、（Ｃ）
冷却およびｐ−クレゾール混合物の同化後、磁気攪拌子
、および（ｄ）ジメチルスルフィド。

ａ）　低濃度１−ＩＦ工程 試薬（ジメチルスルフィド、６．５ｒｎ１：ｒ）−クレ
ゾール、０．７５ｒｄ：Ｄ−チオクレゾール、０．２５
＋＋＋ｆり、全量７．５ｄ、およびペプチド樹脂（１，
００）を反応容器中に置き、ＨＦラインに連結した。容
器を０．５時間（大容量の試薬に対してはより長い冷却
時間）−７８℃゛に冷却した。

ラインを０．５分間簡単に真空にし、１−ＩＦを真空に
した反応容器中に１１のマークまで（または任意の望ま
しい容量）素早く蒸溜した。反応を水浴によって０℃で
素早く平衡させ、２時間勢いよく攪拌した（攪拌を定期
的に調べる）。この点でのＨＦ−ジメチルスルフィド−
ｐ−クレゾール混合物は、無色から明るい黄色であった
。２時間後、混合物をまず水アスピレータ（注意：ポン
プ）を用いて、アスピレータに対する反応のバルブを部
分的に開けて真空にした。試薬の大部分が除去された後
、混合物を機械ポンプにより更に真空にし、明色の液体
を得たく通常、約０．５ｍｆ！マーク）。

ｂ）　高濃度１−ＩＦＩ程 前の低濃度工程からの蒸発させた反応容器を再び一７８
℃に冷却し、真空にし、再びＨＦを１０−威容量マーク
まで仕込んだ［注意：最初の段階の後のＨＦおよびジメ
チルスルフィドの除去が不完全であった場合には、ｌ−
Ｉ　Ｆを再び５ＩＩｄｌまで仕込むことで、９０％に満
たない最終ＨＦｌ１１度となる。

このような条件では、ベンズヒドリルアミン樹脂などの
より酸耐性樹脂、またはトシルや２．６−ジクロロベン
ジルなどの多くの酸耐性保護基を有するペプチドは完全
には保護基脱離されない。蒸発段階が完全であるかどう
かについて疑問がある場合には、ＨＦを全量７．５また
は１０ｍ１まで入れて最終のＨＦ１１度を確実に少なく
とも９０容聞％にしなければならない。９５％ＨＦと５
％クレゾール＋チオクレゾールの最終混合物は完全に満
足できるものであることが見出された。］それから、反
応を０℃で平衡させ、４５〜６０分間反応させた。その
後、先に述べた方法に従ってＨＦを除いた。

開裂工程の後、残った固体を数回エーテルと混合し、非
極性付加物と非極性副生成物を、混入している痕跡量の
ＨＦと共に除く。粗ペプチドを１０％の酢酸−水混合物
を用いて樹脂粒子床から抽出し、凍結乾燥させた。

半プレパラティブ（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　）または
プレパラティブ逆相クロマトグラフィーカラム（Ｖｙｄ
ａｃ　　Ｃ１８，１０１０Ｘ２５０．粒径５ミクロン、
または［）ｙｎａｍａｘ　　Ｃ１８マクロＨＰＬＣカラ
ム　２１．４ｘ２５０ｍｍ、粒径１２ミク′ロン）を使
用するＨＰＬＣ法によって、粗ペプチドを精製した。

ポンプ：ベックマン　１１４Ｍ 溶媒デリバリ−モジュール 検出器：ベックマン　１６０Ａ　吸収検出器勾配制御器
：ベックマン　４２０　　勾配制御器注入器：アルテッ
クス（Ａｌｔｅｘ）　　２１ＯＡ検出波長：　２１４ｍ
ｍ 溶出液： Ａ、０．１％ＴＦＡ水溶液（高純度） Ｂ、０．１％ＴＦＡ水−アセトニトリル３ニア（容量比
）混合溶液 Ｔ）Ｌｔ クロロホルム性　シアノターシャリブチル　エステルを
、約−４０℃でジクロロメタン（１５０蔵）中のシアノ
ターシャリブタノール（１０Ｑ、１００ミリモル）とピ
リジン（１０ｃｘ、１２５ミリモル）を液体ホスゲン（
−７０℃、４０ｔｄ、６００ミリモル）と反応させて、
調製した。混合物を放置して室温にし、−晩攪拌した。

その後、これを水冷塩酸水溶液（１Ｎ）を用いて抽出し
、氷水を用いて２度洗浄し、新鮮な無水硫酸ナトリウム
と共に数回振ることによって速やかに乾燥させ、水相と
硫酸ナトリウムを少囚のジクロロメタンを用いて２度再
抽出し、合わせた有機相を減圧下（２０℃浴）で蒸発さ
せ、生成物（１７ｑ、１００％収率）を得た。

九！ Ｎ−シアノターシャリブチロキシ力ルポニル一リシン　
ＣＱＣ−Ｇｌ　　−ＯＨ 上述のようにして製造した粗エステルをテトラヒドロフ
ラン（１００ｄ）に取り、これをグリシン（１５ｑ、２
００ミリモル）の氷冷水酸化ナトリウム水溶液（ＩＮ、
２００ｔｄ）に約１５分以上に亙って滴加した。室温で
１時間攪拌した後、反応混合物のｐＨは約８であった。

硫酸水溶液（２Ｎ）を添加してｐＨを約４〜５にした。

溶媒を減圧にして除き、全て“が溶解するまで残渣を酢
酸エチル／水混合物を用いて抽出した。水相を除き、ｐ
Ｈ１，５〜２の酸性にし、更に酢酸エチルを用いて２度
抽出した。合わせた有機抽出物を水を用いて抽出してサ
ルフェートを除き、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、
減圧下で溶媒を除いた。

残漬をエーテル／石油エーテルから再結晶して生成物（
１６，５Ｑ、８２％）を得た。真空乾燥後、融点１４７
〜１４８．５℃。

−Ｔｒｐ−ＯＨ） １０１５ミリモルのＮ−シアノターシャリブチロキシカ
ルボニル−グリシン（ＣＶＯＣ−Ｇ　Ｉ　Ｖ−ＯＨ）（
上記で製造）をテトラヒドロフラン（３０ＩＲＩりにと
り、ジシクロへキシルカルボジイミド（１，５Ｇ、５ミ
リモール）とＮ−ヒドロキシスクシンイミド（６ｍａ１
５ミリモル）と共に０℃で一晩攪拌した。このようにし
て製造したＮ。

Ｎ′−ジシクロヘキシル尿素をろ過して除き、ろ過物を
減圧下で蒸発させた。結晶性の残渣、ＣｙＯＣ−Ｇ　ｌ
　ｙ−０−８ＬＪを更に精製または同定することなく利
用した。これを、トリプトファン（１，０２０１５ミリ
モル）とＮ−メチルモルフォリン（ＩＧ、１０ミリモル
）を含むジメチルホルムアミド（５Ｃ）ｄりに取り、ト
リプトファンが溶解するまで（約３〜４時間）０℃で攪
拌した。

反応混合物を冷蔵庫に一晩放置し、硫酸水素カリウム（
１，４ａ１１０ミリモル）の水（２０ｔｅ）溶液を用い
て処理し、減圧下で溶媒を除いた。残渣を定法に従って
処理した（酢酸エチルと水への分配、洗浄、酢酸エチル
相の乾燥）。酢酸エチル相の蒸発の後、粘性のある油を
定量的収率で得た（２．５ｑ）。これを酢酸エチル／エ
ーテルに溶解し、ジシクロヘキシルアミン（９００ｒｒ
＋ｃ＋、　５ミリモル）を用いて処理し、ジシクロヘキ
シルアミン塩（不定形粉末）として生成物を得た（２．
５Ｑ、８５％）。

上記に従って製造したＣＶ’０Ｃ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｏ
Ｈ−ＤＣＨＡ塩（２００ｍｇ１０．３５ミリモル）を炭
酸カルシウム（１５０ｍｏ、３−水）の水溶液に取り、
室温で６時間放置した。この放置後には、薄層り９マド
グラフイー（溶出液、ブタノール／氷酢酸／水　３：１
：１）はＮ−保護ペプチドの存在を示さなかった。

薄黄色の溶液を、イオン交換器からろ過したドーエック
ス（［）ｏｗｅｘ）　５０　（Ｈ＋形）樹脂を加えるこ
とによってｐＨ５にし、溶媒を減圧下で除いた。

残渣を少量のメタノール／エーテルを用いて処理した。

溶媒を減圧下で除き、グリシル−し−トリプトファン（
８５ｍａ、９０％）を得た。

上述の方法により、他のアミノ酸部分を使用してこれま
でに述べたオリゴペプチドを製造することができる。

しかし、ペプチド鎖中に３またはそれ以上の単位を有す
るオリゴペプチドを製造する場合には、例Ｉないし例■
に例示したようにメリフィールド法を利用するほうが都
合がよい。この方法を特定のペプチドについて説明した
が、上述した特別の方法を考慮することによって、この
方法を上に開示した全てのオリゴペプチドの合成に同様
に適用することができる。

例ｊ１ 症ｌ」ＤＬ Δ」Ｌ Ａｌａ−Ｔｒｐ　　　　　　　　　１５００部（融点　
２９３〜２９４℃、 ［α］ｏ”　　　＋１５．５±０．５°　）トウモロ」
シデンプン　　　　　　　　６０部ポリビニルピロリド
ン　　　　　　　１００部ポリビニルポリピロリドン　
　　　　　３０部３分散二酸化ケイ素　　　　　　　　
　　２部イソプロパツール　　　　　　　　　７５０部
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２１０部旦３Ｌ 高分散二酸化ケイ素　　　　　　　　　　２部ステアリ
ン酸マグネシウム　　　　　　３０部タルク　　　　　
　　　　　　　　　　　３部部ポリビニルポリピロリド
ン　　　　　　３０部トウモロコシデンプン　　　　　
　　２５０部Ａ群の物質を混合し、顆粒に加工した。こ
の顆粒を目の粗さが１．５ｍｍのふるいにかけた。

これにＢ群成分を加え、得られた混合物を圧縮して錠剤
とした。

ＩＸ 錠剤用組成物 Ａ　Ｉ　ａ−Ｔｒｐ　（１５００部）とトウモロコシデ
ンプン（１００部）とアルギン酸（１０部）とを、トウ
モロコシデンプン水性ペースト（１５％、全て重量に基
づく）と混合し、加工して顆粒化した。この顆粒を目の
粗さが１．５ｍｍのふるいにかけ、約６０℃で乾燥させ
た。この顆粒を再び同じ目の粗さのふるいにかけ、ふる
いを通過した物質をステアリン酸マグネシウム（１０部
）と混合した。このようにして得られた混合物を、経口
投与のための錠剤の錠剤用組成物として使用した。

九り 水性懸濁液 Ｇ　ｌ　ｙ−”ｒｒｐ　　　　　　　　　　６００部（
融点　３５℃、［α］ｏ”　　＋３４゜（５Ｎ　　８０
ｇ中）） 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　３００部ソルビトール　　　　　　　　　　
　７００部Ｇｌｙ−Ｔｒｐを水とソルビットの混合物に
懸濁した。必要ならば、通常量の香味料と着色料を加え
て、経口投与のための懸濁液を得る。

１１１１」１ Ａ　ｌ　ａ−Ｔｒｐ　（５０部）を水（９４１部）（Ｗ
／Ｗ＞に取り、塩化ナトリウム（３部）を加えて溶液を
等張にし、水酸化ナトリウムまたは塩酸を必要なだけ加
えてｐＨ５，５〜６にし、得られた混合物を０．１ミク
ロンのメンブレンフィルターによりろ過して全粒子物質
を除いた。ろ過物を注射アンプルに入れた。使用の前に
、この製剤中の全成分を蒸気オートクレーブ処理した。

同様の方法で、Ｇｌｙ−Ｔｒｐおよび他のこれまでに述
べたオリゴペプチドを注射用にを製造することができる
。

Ｗ 錠剤処方−混合ペプチド １５００部のＡｌａ−Ｔｒｐの代わりに、Ｇ＋ｙ−”ｒ
ｒｐとＴｒｐの等重量混合物の１５００部を使用する以
外は例１の方法に従って、経口投与のための錠剤に簡単
に変換できる錠剤用組成物を得た。

例ｘｍ ＡＩａ−Ｔｒｌ）の代わりに、ＧＩＶ−Ｔｒｉ）とＴｒ
ｐの１：１（重量比）混合物の同様の量を用い、それ以
外は例■の方法に従った。経口投与のための錠剤に製造
できる錠剤用組成物を得た。

九と駆 ５０部のＡ　Ｉ　ａ−Ｔｒｌ）の代わりに、Ａｌａ−Ｔ
ｒｐとＴｒｐの５：１（重量比）混合物の６０部を使用
する以外は例■の方法に従って、注射用組成物を得た。

Ａ　ｌ　ａ−Ｔｒｐの代わりに、Ｇ　ｌ　ｙ−”ｒｒｐ
または他の適当なオリゴペプチドをＴｒｐと共に使用す
ることができる。

例ＸＶＩ ６００部の０１７−Ｔｒｉ）の代わりに、Ｇｌｙ−Ｔｒ
ｐとＴｒｐの混合物（重量化　１：１）の６００部を使
用する以外は例■の方法に従って、経口投与のための同
様な懸濁液を得た。

この実験にはスブラーク　ドーレイ（Ｓ　ｐｒａｏｕｅ
−Ｄａｗｌｅｙ　）ラットを用いた。ラットを１８時時
間量させ、経口胃管により試験物質を投与した。

実験中は両方の物質を互いに試験した。適用量は実験動
物の体重に従って調節した。ラットに、体重１０００当
り、１３．３μモルのＴｒｐ　（水、４ｄ中）または６
．７μモルのＧｌｙ−Ｔｒｐ（水４ａｅ中）を適用した
。吸収試験のために、ラットの届先端から５０μりの血
液をヘパリン化したヘマトクリット毛細管へ採取した。

血液採取は、適用前と、適用後５．１０，２０．３０．
４５．６０．９０．１２０，１８０および２４０分に行
った。

毛細管中の血液を利用することによって、ヘマトクリッ
トの測定と、数回の血液採取による血液容量の変動を避
けることとが可能となった。

血液試験には面しようを用いた。２０μβの血液を２０
０μａの０．４Ｍ過塩素酸を用いて処理し、その後この
混合物を速やかに遠心分離した。

それから、上溝を分析した。その物質を、Ｃｌ８ＳＩＬ
−Ｘ１０ゲルを含む一対のシリカゲルカラム（２５ｘ０
．４＋５ｃｍｘ０．４）を通して溶出した。溶出液とし
て、０．５Ｍ酢酸ナトリウム１０．５ＭクエンＩＩ／１
７％メタノール（ｐＨ４，２）を用いた。２７６／３５
０ｎｍでの蛍光測定により検出した。

この実験から得られた結果を添附した図面に示す。図中
、ｎはラットの数である。

【図面の簡単な説明】

図はラットを用いたＴｒｐ−ＧｌｙとＴｒｐの吸収実験
の結果のグラフ図である。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）２ないし１０のアミノ酸からなり、そのアミノ酸
   の少なくとも一つがトリプトファンであるオリゴペプチ
   ド、またはそれの薬剤的に受容できる塩基または酸との
   付加塩の薬理学的有効量を投与することによる神経障害
   の治療方法。
2. （２）神経障害が不眠症である特許請求の範囲第１項記
   載の方法。
3. （３）神経障害がうつ症である特許請求の範囲第１項記
   載の方法。
4. （４）オリゴペプチドがＬ−トリプトファンと組合わせ
   て投与される特許請求の範囲第１項記載の方法。
5. （５）オリゴペプチドが、式、 （Ｒ＿１）ｎ−（Ｒ＿２）ｎ−（Ｒ＿３）ｎ−（Ｒ＿４
   ）ｎ−（Ｒ＿５）ｎ−（Ｒ＿６）ｎ−（Ｒ＿７）ｎ−（
   Ｒ＿８）ｎ−（Ｒ＿９）ｎ［式中、Ｒ＿１ないしＲ＿９
   は、Ｔｒｐ、５−ＯＨ一Ｔｒｐ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅ
   ｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ
   、ＰｈＡｌａ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｖａ
   ｌ、ＩｓｏおよびＬｅｕからなる群から選んだアミノ酸
   残基であり、ｎは１または０であり、Ｒ＿１からＲ＿９
   までの群は少なくともその群の一つがＴｒｐまたは５−
   ＯＨ−Ｔｒｐであることを条件として同一または異なっ
   ている］ で表される特許請求の範囲第１項記載の方法。
6. （６）オリゴペプチドが１ないし５のアミノ酸単位から
   なる特許請求の範囲第２項記載の方法。
7. （７）オリゴペプチドが２つのアミノ酸単位を包含する
   特許請求の範囲第６項記載の方法。
8. （８）オリゴペプチドがグリシル−トリプトファンであ
   る特許請求の範囲第７項記載の方法。
9. （９）トリプトファンの使用を更に包含する特許請求の
   範囲第２項記載の方法。
10. （１０）２ないし１０のアミノ酸からなり、そのアミノ
    酸の少なくとも一つがトリプトファンであるオリゴペプ
    チド、またはそれの薬剤的に受容できる塩基または酸と
    の付加塩の薬理学的有効量と、薬剤的に受容できる担体
    とを包含する治療を必要とする神経障害の治療のための
    組成物。
11. （１１）神経障害が不眠症である特許請求の範囲第１０
    項記載の組成物。
12. （１２）神経障害がうつ症である特許請求の範囲第１０
    項記載の組成物。
13. （１３）オリゴペプチド組成物が更にＬ−トリプトファ
    ンを包含する特許請求の範囲第１０項記載の組成物。
14. （１４）オリゴペプチドが、式、 （Ｒ＿１）ｎ−（Ｒ＿２）ｎ−（Ｒ＿３）ｎ−（Ｒ＿４
    ）ｎ−（Ｒ＿５）ｎ−（Ｒ＿６）ｎ−（Ｒ＿７）ｎ−（
    Ｒ＿８）ｎ−（Ｒ＿９）ｎ［式中、Ｒ＿１ないしＲ＿９
    は、Ｔｒｐ、５−ＯＨ−Ｔｒｐ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅ
    ｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ
    、ＰｈＡｌａ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｖａ
    ｌ、ＩｓｏおよびＬｅｕからなる群から選んだアミノ酸
    残基であり、ｎは１または０であり、Ｒ＿１からＲ＿９
    までの群は少なくともその群の一つがＴｒｐまたは５−
    ＯＨ−Ｔｒｐであることを条件として同一または異なっ
    ている］ で表される特許請求の範囲第１０項記載の組成物。