PT93807A

PT93807A - Processo para a preparacao de novos derivados macrolidos

Info

Publication number: PT93807A
Application number: PT93807A
Authority: PT
Inventors: Gabor Lukacs; Catherine Duchatelle-Ruggeri; Alain Olesker; Sylvie Bobillot; Ton Thatthang; Li Ming
Original assignee: Adir
Priority date: 1989-04-20
Filing date: 1990-04-19
Publication date: 1990-11-20
Also published as: AU5362890A; OA09447A; AU625201B2; FR2646081A1; NZ233378A; US5043324A; ZA903008B; CA2014925A1; JPH02292296A; EP0394135A1

Description

ADIR__ET COMPAGNIE "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS MACRQLIDOS 11 A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos antibióticos da família dos macrÓlidos,

As necessidades da terapêutica exigem o desenvolvimento constante de novos antibióticos não sÓ em virtude da possibilidade do aparecimento de novas estirpes resistentes, mas igualmente com o objectivo de criar novas moléculas possuindo uma actividade melhorada tanto ao nível do seu limiar de eficácia como da amplitude do seu espectro de acção.

Numerosas modificações do núcleo da tilosina foram já rea lizadas com o objectivo de se produzir novos antibióticos interes^ santes. Entre os mais recentes, citam-se as patentes de invenção norte-americanas N9 4 528 369, N9 4 581 346 e N9 4 629 786 e os pedidos de patente de invenção europeia N9 0 103 465, N9 0 104 028, N9 0 154 495, N9 Q 2Q3 621 e N9 0 292 852, Contudo, nenhuma destas modificações permitiu obter um derivado da tilosina utilizado em terapêutica humana,

Mais particularmente, a presente invenção tem por objecto um processo para a preparação de compostos derivados da tilosina de fórmula geral -2 -2 R20

CH3 (I) na qual: R-j representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de formula

- R2 representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo de formula 00¾ OCH3 e no caso em que R2 representa um átomo de hidrogénio, R-| representa igualmente um átomo de hidrogénio, - B representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo i nferior, - A representa: - um grupo metanol e no caso em que B representa um grupo acilo inferior, quer: - um grupo de formula geral (CH2)nCN, - ou um grupo de formula geral ~(CH2)nCH0, - ou um grupo de formula geral -(CH^)^n+l’ em que n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, entendendo-se por grupo acilo inferior, um grupo comportando 1 a 5 átomos de carbono, e neste caso dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar como composto inicial um derivado de fórmula

/ / o

. que se faz reagir, quando no derivado de fórmula geral I que se pretende obter o símbolo R·^ representa um átomo de hidr£ génio, com ácido clorídrico diluído de normalidade compreendida entre 0,05 e 0,4, preferencialmente compreendida entre 0,05 e 0,4, preferencialmente compreendida entre 0,1 e 0,30, de preferên cia compreendida entre 0,15 e 0,25, à temperatura ambiente, para se obter, após lavagem com um dissolvente orgânico apropriado, a!l calinização e extracção com um dissolvente orgânico apropriado, um derivado de fórmula geral

(ΙΙ/Α) Ο

derivado de formula II/A que se faz reagir, quando no derivado de fórmula geral I que se pretende obter o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio, com ácido clorídrico de normalidade compreeji dida entre 0,25 e 0,75, preferencialmente entre 0,3 e 0,7, de preferencia entre 0,4 e 0,6, a uma temperatura compreendida prefe rencialmente entre 30 e 100°C; de Dreferência compreendida entre 50 e 90°C, com vantagem entre 70 e 8Q°C, para se obter, apÕs lava gem com um dissolvente orgânico apropriado, al cal inização e extrac^ ção com um dissolvente orgânico apropriado, um derivado de formula

V f ;-ρθΜ^ .¾ Ο

(ΙΙ/Β) derivado de formula II, II/A ou II/B, de acordo com o derivado de formula geral I que se pretende obter, que se submete quer: 1/ a acção de um hidreto misto de metal alcalino no seio de um álcool alífãtico inferior para se obter um derivado de formula geral

na qual R-j e tem os significados definidos antes e n representa o numero 1, que se faz reagir com um anidrido de acido carboxTlico inferior de formula geral Ac-OH, na qual Ac representa um grupo acilo infe rior, a temperatura preferencialmente ambiente e de preferencia sob atmosfera inerte, para se obter um derivado de formula geral

ο

na qual Ac representa um grupo acílo inferior, n represeji ta o numero 1 e R-j e R2 ^g^ os significados definidos antes , caso particular de derivados de formula geral I na qual 0 sTmbolo B representa um grupo acilo inferior e 0 sTmbolo A representa um grupo CH20H, que se trata com cloreto de tosilo, que se adiciona em pequenas fracçoes, na presença de 4-di.metilamino-piridina para se obter, após purifi cação eventual, extracção e cromatografia eventual, um derivado de fórmula geral ο r2o

ch3 na qual n, Ac, R-j e R^ tem os significados definidos antes , que se faz reagir com um cianeto de metal alcalino na presença de um agente cortante para se obter um derivado de formula geral

na qual n, Ac, R.| e tem os significados definidos an-. tes, caso particular dos derivados de formula geral I na qual o símbolo B representa um grupo acilo inferior e o símbolo A representa um grupo CH2CN, que se faz reagir com metanol, para se obter um derivado de formula geral

01 .¾ ο r2o

CH3 na qual R-j e tem os significados definidos antes e n representa o numero 1 , caso particular dos derivados de formula geral I na qual o símbolo B representa um átomo de hidrogénio e o símbolo A representa um grupo de formula CH2CN, que se faz reagir com hidreto de alumínio e diisobutilo preferencialmente sob atmosfera inerte, para se obter um derivado de formula geral

/ r2o

CH3 na qual R-j e.R^ timos significados definidos antes e n representa 0 numero 1 , caso particular dos derivados de formula geral I na qual 0 símbolo B representa um átomo de hidrogénio e 0 símbolo A representa um grupo CH2CHQ, 2/ quer a acção de cloreto de Cpara-tolueno-sulfoni1)-me-tilo na presença de n-buti 1 ato4;erc. de metal alcalino no seio de um álcool alifático inferior, para se obter, apos purificação everi tual mediante cromatografta, um derivado de formula geral -13-

. Ο

CH3 na qual R-j e R,, têm os significados definidos antes e n representa o numero 1, que se faz reagir com um hidreto misto de metal alcalino no seio de dirneti1formamida preferencial mente sob ligeiro aquecimento, pa ra se obter, apos purificação eventual mediante cromatografia, um derivado de formula geral

na qual Re R2 tem os significados definidos antes e n representa o numero 15 caso particular dos derivdados de formula geral I na qual o sTmb£ lo A representa um grupo (CH^^-OH e o símbolo B representa um átomo de hidrogénio, que se faz reagir com clorocromato de piridTnio para se obter, apos purificação eventual mediante cromatografia, um composto de fõrnuj la geral VIII, o qual, por seu lado, se submete, eventualmente, como se indicou antes, em função do derivado de formula geral I que se pretende obter,

•J *> - quer 3/ a acçao sucessiva de um hidreto misto de metal alcalino do anidrido de acido carboxTlico inferior, de cloreto de tosilo na presença de 4-dimeti1amino-piridina, de cianeto de me tal alcalino na presença de um agente cortante, de metanol e por ultimo de hidreto de alumínio e diisobutilo, para se obter sucessivamente os derivados de formula geral ΓΙΙ/Α,ΐν/Α, V//V, Vl//\s VII/A e VIII/A, caso particular dos derivados de formula geral III, IV, V, VI, VII e VIII, em que o símbolo n representa o numero 2, o símbolo R-j e o símbolo R,, tem os significados definidos antes e o símbolo Ac representa neste ultimo caso um grupo acilo inferior, - quer 4/ a acçao sucessiva de cloreto de (para-tolueno-sul-foni1}-meti 1 o na presença de butilato terc. de metal alcalino, depois hidreto misto de metal alcalino na presença de dimetil-formamida e por ΰ 1 timo clorocromato de piridinio, para se obter sij cessivamente os derivados de formula geral IX/A, X/A e VIII/A, caso particular dos derivados de formula geral IX, X e VIII, em que o símbolo n representa o numero 2 e os símbolos R-j e tem os significados definidos antes, derivado de formula geral VIII/A que, por seu lado, se submete eveii tualmente uma ou duas, tris ou quatro vezes a um tratamento igual aos indicados em 3/ ou 4/, para se obter um derivado de formula ge ral III/B, IV/B, V/B, VI/B, VII/B, VIII/B, IX/B, X/B, caso particular dos derivados de formulas gerais III, IV, V, VI, VII, VIII, IX e X, em que o símbolo n representa o numero 3, 4, 5 ou 6, conforme se efectua o tratamento indicado em 3/ ou 4/ com 1,2,3 ou 4

tomas, tendo os simholos R-| e R^ os significados definidos antes e o símbolo Ac representa, eventualmente, um grupo acilo inferior, derivado que, eventualmente, se purifica mediante cromatografia em coluna de sílica com uma mistura dissolvente apropriada, e que, eventualmente, se pode salificar com um acido aceitável sob 0 ponto de vista farmacêutico.

Entre os ácidos que se podem adicionar aos compostos de fórmula geral I para se obter um sal de adiçáo, podem-se citar, a titulo de exemplo, os ácidos clorídrico, bromidrico, iodidrico, sulfúrico, acético, propriónico, trif1uoroacêtico, maleico, tartã rico, metano-sulfÓnico, etano-sulfÓnico, benzeno-sulfõnico, p-to- 1 ueno-sulfónico, fosfórico, fumârico, cítrico, canfõrico, esteãri_ co, eti1-succTnico, etc.

Os compostos de formula geral I possuem propriedades farmacológicas interessantes.

Em particular, estes compostos, preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, são activos sobre cocos gram+ e cocos gram- , os bacilos gram+ (clostrTdios), certos bacilos gram- , hemophilus (ex: "hemopliilus influenzae"), "Nesseiria gonorrhoeae", brucela, bordetela, os anaerõbicos, os micoplasmas, as rickettsias e os myagaranel 1 es CCblamTdia), as espiroquetas, os protozoários e certos dermofungos. ,y /

Mais parti cul armente, os compostos de formula geral I pos^ suem uma actividade antibiótica muito boa sobre os pneumococos, os estafi 1 ococos e os estreptococos, Este espectro de actividade torna os compostos de formula geral I particularmente interessantes no tratamento de um grande numero de afecçóes, entre as quais e possível citar, como exemplo, as pneumococcias tais como as bron quites, a brucelose, a difteria, a gonococcia, as pneumonias, as estreptococcias tais como as anginas agudas, as otites, a escarla_ tina, as sinusites, as estafilococcias tais como as septicemias provocadas por estafi1ococos, o antraz, eresipela, piodermites, C- estafilococcias agudas, bronco-pneumonias e supurações pulmonares.

Além disso, os compostos de acordo com a presente invenção, pela sua estrutura são susceptTveis de se revelar interessar^ tes devido ã sua ausência de toxicidade hepática ou gastrointestj^ nal, o que os distingue, com vantagem, das outras famílias de com postos antibióticos, A presente invenção tem igualmente por objecto um processo para a preparação de composiçóes farmacêuticas que contêm os compostos de fórmula geral I ou um dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, só ou em associação com um ou vários excipientes ou veículos inertes não: tóxicos acei taveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Entre as composiçóes farmacêuticas de acordo com a presen te invenção, podem-se citar mais particularmente as que convêm pa^ ra a administração oral, parental, nasal, perlingual, ocular ou / 18- respiratória, e particularmente as preparações injectaveis, os aerossois, as gotas oculares ou nasais, os comprimidos simples ou drageificados, os comprimidos sub-1inguais, os saquinhos, as pape linhos, as gêlulas, os trociscos, as pastilhas, os supositórios, os cremes, as pomadas, os geles dérmicos, etc,

As composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem apresentar-se, igualmente, sob a forma de um pÕ lio-filizado destinado a ser dissolvido no momento da utilização no seio de um dissolvente apropriado particularmente agua esteril api rogeni ca. A posologia varia de acordo com a idade e o peso do paciente, a via de administração, a natureza da indicação terapêutica e os tratamentos eventualmente associados e estS compreendida entre 1 centigrama e 4 gramas por toma ou aplicação.

Os exemplos seguintes ilustram o processo de acordo com a presente invenção sem a limitarem de modo algum. 13

Os espectros de ressonância magnética nuclear do C e do ^H foram registados utilizando o TMS como referência interna. 0 composto inicial utilizado na síntese dos compostos de fórmula geral I ê a tt1 osina conhecida na literatura, / / -19-

EXEMPLO 1: 21-ACETIL-2Q-DI-HIDR0-TIL0SINA, ESTADIO A: 2Q-DI-HIDR0-TIL0SINA.

Dissolve-se 0,916 g (0,01 mole) de tilosina em metanol. Adiciona-se, em pequenas porções sob agitação e a temperatura ambiente 0,037 g (0,014 mole) de boro-hidreto de sõdio no decurso de cerca de uma hora, Mantem-se a agitação durante três horas ã temperatura ambiente. Evapora-se ate ã secura, retoma-se o resíduo com agua e extrai-se 3 vezes com clorofórmio, Seca-se sobre cloreto de cálcio. Filtra-se e evapora-se o clorofórmio em banho--maria sob vazio. ESTÁDIO B; a^ACEm^O-DI-HIDRO-TILOSrNA.

Dissolve-se Q,29g (Q,3 x 10"^ mole) de 20-di-hidro-ti1o-sina obtida no estãdio A em 2Q ml de acetona anidra. Adiciona-se Q, Q 01 mole de anidrido acético e agita-se durante uma noite a tem peratura ambiente sob atmosfera de azoto. Evapora-se. Retoma-se o resíduo com agua saturada de cloreto de sódio e extrai-se com cljo reto de metileno. Retoma-se a fase orgânica, seca-se sobre sulfato de sódio e evapora-se em banho-maria sob vazio, Purifica-se me diante passagem em cromatografia de placa (mistura eluente: clore to de metileno, metanol, amoníaco a 20/1/0,05),

Rendimento; 5Q% ,í? / -20- l

CaracterTsticas espectrais:

Ressonancta magnética nuclear ^3C (&ppm): 204 : Cg 174 : C1 169 : (C=0) acetato

Massa: FAB £m-h] + : 961

EXEMPLO 2: 19-CIAN0METIL-19-DEF0RMIL-21-ACETIL-TILOSINA

ESTÁDIO A: 2Q-Q-PARAT0LUEN0-SULF0NIL-20-HIDR0-2’-0--ACETIL-TILOSINA

Dissolve-se 0,106 g (1,1 x 10”4 mole) de 20-di-hidro-2 1 --aceti1-ti 1 osina obtida no exemplo 1 na presença de vestígios de 4-dimetilamino-piridina em 3 ml de diclorometano e 0,3 ml de piri^ dina, Adiciona-se 0,03 g (.1,57 x IO"-4 mole) de cloreto de tosilo a temperatura ambiente sob atmosfera de ãrgon, Decorridas três ho ras de agitação, adiciona-se 0,018 g (1,1 x 10~4 mole) de cloreto de tosilo, ApÕs 17 boras de agitação, adicionam-se de novo 2 mg de cloreto de tosilo. Depois de 22 horas de agitação, adicionam--se Q.,2 ml de metanol. Extrai-se em seguida com uma mistura de ãgua-hidrogenocarbonato de sôdio/cloreto de metileno (50/50), seca-se sobre sulfato de sõdio e purifica-se mediante cromatografia rápida (eluente: cloreto de meti!eno/metanol/amoníaco a 20:1:0,05).

Rendimento; 6Q% 1115 21- f

CaracterTsticas espectrais: Espectrometria de massa: FAB H+ Ressonância magnética nuclear: h b b = 1,75 ppm, singuleto 3H -CH^ = 7,05-7,28 ppm 4H aromáticos

RMN 13C b . b- b- ppm 174 ppm C.| 169 ppm CCOO} acetato 29,3 ppm ÇH.3~C6H4

ESTÁDIO B: 19-CIAN0METIL-19-DEF0RMIL-21-ACETIL-TILOSINA _ 3

Dissolve-se Q,Q35 g (0,53 x 10 mole) de cianeto de po- _3 tãssio e 0,217 g (.0,57 x 10 mole) de éter coroa (18-coroa-6-di-ciclo-h.exilo) mediante sonicaçâo (acção de ultra-sons) em 5 ml de acetonttrilo anidro-sob atmosfera de argon, Adiciona-se, em segui_ - ~ -3 da, gota a gota a sob agitaçao, uma solução de 0,5 g (0,45 x 10 mole) de 0-par atol ueno-20-sulfonil -20-Fvidro-2 1 -0-aceti 1 - ti 1 osi na obtida no estádio A em 4 ml de acetonitri1 o. Mantém-se a agitação durante uma noite â temperatura ambiente, Evapora-se o meio reac- cional e purifica-se o resíduo em coluna de sílica (eluente:cl ore to de meti 1eno/metanol/hidroxido de amonio a 30/1/0,05). OL D: -62,4°

Caracteristicas espectrais:

Espectroroetria de massa: FAb£ M-hJ + : 970

13

Ressonância magnética nuclear C RMN 1H

o = 2,1 ppm, singuleto 3H CO-CH^ RMN 13C b = 203 ppm, Cg

EXEMPLO 3: 19-CIΑΝΟΜΕΤIL-19-DEF0RMIL-TIL0SINA

Dissolve-se Q,97 g (1 milimole) de 19-cianometil-19-defor mi 1-2'-aceti1-tilosina obtida no exemplo 2 em 15 ml de metanol. Agita-se durante 4 horas a temperatura ambiente. Evapora-se o meio reaccional e extrai-se o resíduo duas vezes com 10 ml de clorofÕ£ mio. Reune-se as fases orgânicas. Seca-se sobre sulfato de sódio, filtra-se e evapora-se.

Rendimento: 90%

Caracteristicas espectrais:

Espectrometria de massa: FAb£ M-Hj[ + : 928 Ressonância magnética nuclear ^3C (Sppm): RMN 13C

EXEMPLO 4; 19-F0RMILMETIL-19-DEF0RMIL-TIL0SINA.

Dissolve-se sob atmosfera de argon em uma mistura de cio reto de metileno/tolueno anidro (1:1 V/V) 0,93 g (1 milimole) de ciano-19-metil-19-deformil-tilosina obtida no exemplo 3. Adicionei ram-se lentamente, mantendo a temperatura a -20°C, 2 milimoles de hidreto de diisobutil-alumTnio.

Deixa-se voltar a temperatura ambiente e mantem-se a agitação durante 3 horas. Adiciona-se uma solução saturada de cloreto de amonio e extrai-se 3 vezes com 10 ml de cloreto de metileno, Seca-se sobre sulfato de sodio. Filtra-se e evapora-se o meio rea£ cional. Purifica-se mediante cromatografia rãpida (eluente: meta-nol/cloreto de meti 1eno/amoniaco a 9,5/90/0,5],

Rendimento; 7Q%

CaracterTsticas espectrais:

Espectrometria de massa: FAB £>-h] + : 925 Ressonância magnética nuclear:

RMN 13C = 203 ppm, Cg

EXEMPLO 5: 19-DEF0RMIL-19-(2-HIDR0XI-ETIL)-TILOSINA

ESTÁDIO A: (PARAT0LUEN0-3-SULF0NIL-2,3-EP0XI)-6-PR0PIL--6-DEF0RMILMETIL-TIL0SINA

Dissolvem-se 3,36 g (4 mmoles) de tilosina e 820 mg (4 mmoles) de cloreto de (paratoli1 sulfoni1)-meti 1 o em 32 ml de te-tra-hidrofurano anidro e 2,3 ml de butanol-terc. sob atmosfera de azoto. Arrefece-se com um banho de gelo, Adicionam-se 448 mg (4 mmoles) de butilato terc, de potássio. Agita-se a mistura reaccio

nal à temperatura ambiente durante 2 horas. Adiciona-se êter, filtra-se e evapora-se atê a secura. Purifica-se o produto bruto mediante cromatografia rapida em coluna de silica Teluente: l I ** cloreto de metileno/metanol/amoníaco (20:1:0,05)7,

Rendimento: 70%

Caracteristicas espectrais: Espectrometria de massa: FAB &-H]+ : Ressonância magnética nuclear 2,5 ppm, singuleto, 3H, Ο,-Η,-- 1 085 «3

ESTSDIO B: 19-DEF0RHIL-19-C2-HIDR0XI-ETILÍ-TIL0SINA

Dissolvem-se 2,4 g de (paratol ueno-3-sul fontl-2,3-epoxiJi^ -6-propll-6-deformtlmetn-tilostna obtida no estádio anterior em 40 ml de dimeti1formamida, Adiciona-se 60 mg de boro-hidreto de sodio. Agita-se a mistura reaccional a uma temperatura de 80 C durante 90 minutos, Evapora-se o meio reaccional ate a secura e purifica-se o resíduo mediante cromatografia rapida (eluente: cloreto de metileno/metanol/amoniaco a 20:1:0,05),

Rendimento: 75%

Caracteristfcas espectrais: Ressonância magnética nuclear:

RMN 13C

2Q3 ppm, Cg 174 ppm, C.j 129 ppm, CH204 EXEMPLO 6: 19-DEFORMIL-l9-FORMILMETIL-TILOSINA, ' 0 A uma solução de 100 mg de peneiro molecular de 3A em cloreto de meti leno, adictonamr.se. 35 mg de clorocromato de piridí nio. ApÕs 3 minutos adicionam-se,.. 100 mg de 19-deformil-1 9-(2--hidroxi-etil]-tilosina obtida no exemplo 5. Agita-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Adiciona-se eter etílico e filtra-se. Evapora-se ate a secura e purifica-se em placa preparativa (eluente: cloreto de metileno/metanol/amoníaco) .

+ 931

Espectrometria de massa: FAB £ Caracteristicas espectrais; Ressonância magnética nuclear;

RMN 13C

203,5 ppm, Cg 202,8 ppm, C2-j 174 ppm, C.j

EXEMPLO 7: 19-D EFORM t L-19-tLI DRO XI ^ETIL I-$ EM TC AROS IL-T Γ LOS IN A

ESTÁDIO A; SEMICAROSIL-TILOSINA

Agitam-se 4 g [0,004 molej de tilosina base em 80 ml de ãcido clorídrico Q,2N durante 4 horas a temperatura ambiente, La va-se o meio reaccional obtido com diclorometano, separa-se a ftí se aquosa e ajusta-se a pK 8,0, Extrai-se com duas tomas de 120 ml de diclorometano, reune-se as fases orgânicas, secam-se sobre sulfato de sodio e evapora-se. 0 resíduo e constituído por semi-carosi1-tilosina.

Rendimento; 94¾

ESTÁDIO B: 1 9-DEF0RMIL-1 9-[2-HIDR0XI-Emi-SEMICAR0SrL--TILOSINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo no estádio A a tilosina pela semicarosil-ti-losina, obtem-seo composto pretendido.

Rendimento: 65¾

Características espectrais;

Espectrometria de massa: FAB {m-hJ+ : 789

EXEMPLO 8: 19-DEF0RMIL-19-F0RMILMETIL-SEMICAR0SIL-TIL0SINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo a 19-deformi 1 -19-(2-hidroxt-eti1]-ti 1osina pela 19~deformi 1 -19-C2-h.ídroxi-eti 1I-semicarosi 1- tilosina, obtém -se o composto pretendido.

Características espectrais;

Espectrometria de massa; FAB £μ-η/+ ; 787

Ressonância magnética nuclear:

RMN 13C

-27

rse**e** 0=174 ppm, b = 203 ppm, C2-j

EXEMPLO 9: 19-DEF0RMIL-1 9-(2-HIDR0XI-ETIL]-SEMICAROSIL-SEMICl NO

SIL-TILOSINA

ESTÁDIO A: SEMICAROSIL-S EMX Cl NOSIL-TILOSXNA

Dissolvem-se 5' g (0,0065 mmole) de semicarostl-tilosina obtida no estádio A do exemplo 7, em 110 ml de acido clorídrico 0,5N e agtta-se durante 27 horas a cerca de 75°C,« Lava-se o meto reaccional com diclorometano, Recupera-se a fase aquosa, ajusta--se a pH 8 e extrai-se com duas tomas de 120 ml de dtclorometano, Seca-se a fase orgânica sobre sulfato de sõdio e evapora-se, Sub mete-se o resíduo a uma cromatografia sobre gel de sílica (elueji te: diclorometano/metanol/hidrõxtdo de amónio a 10:1:0,05), para se obter o composto pretendido.

Rendimento: 2Q%

ESTÁDIO B: 19-DEF0RMIL-19-(2-HIDR0XI-ETIL)-SEMICAR0SIL--SEMICINOSIL-TILOSINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo a tilosina pela semicarosil-semicinosil-ttlo_ sina, obtem-se o composto pretendido. -28- *

Rendimento; 50¾

CaracterTsticas espectrais:

Espectrometria de massa: FAb£m-h] + : 614 EXEMPLO 1Q: 19— DEFORMIL-19-FORMILMETIL—SE MIC A RO S X L-S E Μ Γ C X N OS IL -

-TILOSINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo a 19-deformil-19-(2-h.idroxí-etil )>ti:losina pela 19-deformi 1 -1 R-TE-hídroxí-etí1 I-semicarosíT~semícínosi 1 -ti -losina obtida no exemplo 9, obtem-se o composto pretendido,

CaracterTsticas espectrais:

Espectrometria de massa; FAb£"m-hJ + : 612

Ressonância magnettca nuclear;

RMN 13C ^ = 204 ppm, Cg ^ = 174 ppm, C-j ^ = 203 ppm, C21

EXEMPLO 11; 19.-DEF0RMIL-19-(3-81 DROXI-PRQPILI-TILOSINA

Procedendo de acordo com 0 processo descrito no exemplo 5, mas substituindo a tilosina pela 19-deformi’l -19-formilmetf1 --tilosina obtida no exemplo 6, obtêm-se 0 composto pretendido.

CaracterTsticas espectrais;

Espectrometria de massa; FAB^M~hJ+ ; 947 /

EXEMPLO 12: 19-DEF0RMiL-19-(2-F0RMIL-ETIL)~TIL0SINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo a 19~deformil-19-<(.2-Eiidroxi-etil )-tilosina pela 19-deformil-19-(3-bidroxi-propil }-tilo$ina obtida no exemplo anterior, obtem-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais:

Espectrometria de massa: FAB £m-h] + : 945

Ressonância magnética nuclear:

RMN 13C 8 = 203 ppm, Cg b = 174 ppm, C]

EXEMPLO 13: 19-DEF0RMIL-19~(4-HIDR0XI-n-BUTIL}~TIL0$iNA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo a tilosina pela 19-deformil-(2-formil -etil)--tilosina obtida no exemplo 12p obtem-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais:

Espectrometria de massa: FAb£*M-hJ+ *, 961

EXEMPLO 14: 19-DEF0R.MIL-l 9-C3-FORM Γ L-n-PRO P X LI-TIL OS I NA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo a 19-deformi 1-19-(2-Fiidroxi-etil)-til osina pela 19-deformil-19-(4-hidroxí-n-buti1}-tilosina obtida no exem pio anterior, obtem-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais;

Espectrometria de massa: FAB ; 959

Ressonância magnética nuclear;

RMN 13C õ = 203 ppm, Cg & = 174 ppm, C,

EXEMPLO 15; 19-DEF0RMIL-19~C5-HIDR0XI-n-PENTIL;bTILQ$INA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 5, mas substituindo a tilostna pela 19-deformil-19-(3-formil-n--propil)-tilosina, obtem-se o composto pretendido.

Caracterfsticas espectrais;

Espectrometría de massa; FAB ["μ-H“j+ ; 9.75

EXEMPLO 15: 19-DEFORMTL-19-C4-F0RMIL-n-BUTILJ-TIL0SINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 6, mas substituindo a 19-deformíl-19-[2~hidroxt-e.tí l J-tíl osína pela 19-deformi 1 -19-(5-fndroxi-n-penti 1J-ti 1 osina, obte.m-se o composto pretendido,

EXEMPLO 17: 2'-ACETIL-19-DEFORMIL-l9~(2-HIDR0XI-ETIL}-TILOSINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo a ttlostna, no estádio A, pela 19-formilme-ti 1-19-deformi1-tilosina obtida no exemplo 4 ou 6, obtem-se o composto pretendido.

Caracteristicas esp.ectrais:

Espectrometria de massa: FAB [ m~h] + : 975

Ressonância magnética nuclear; 13

RMN C (!) = 1 74 ppm, C b= 2Q4 ppm, Cg

EXEMPLO 18: 19-C2-CIANO-ETIL)-19-DEF0RMIL-21-ACETILTILOSINA

Procedendo de. acordo com o processo descrito no exemplo 2, mas substituindo a 2Q-di-tiidro-2'~acetil-tilosina pela 2'-ace ti 1-19-deformi1-19^(2-hidroxi-etilJ-tilosina obtida no exemplo 17, obtém-se o composto pretendido.

CaracterTsticas espectrais:

Espectrometria de massa: FAB £m-hJ+ : 984

EXEMPLO 19: 1 9-( 2-CIAN.0-ETIL1-1 O.-DEFQRMIL-TILOS INA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 3, mas substituindo a 19-cianometi1-19-deformil-21~acetil~ti1osi

na pela 19-(2-ciano-etil)-19-deformil-21-acetíl-ti 1osina obtida no exemplo 18, obtêm-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais:

EXEMPLO 20: 2'-ACETIL-19-DEF0RMIL-19-(3-HIDR0Xr-n-PR0PIL]-TILO-

SINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo a tilosina no estádio A pela 19~(2-formil--etil}-19-deformi1-tilosina obtida no exemplo 12, obtem-se o com posto pretendido.

Caracteristicas espectrais:

Espectrometria de massa: FAB £Vh/ + ; 989

Ressonância magnética nuclear:

RMN 13C

EXEMPLO 21: 19-(3-CrAN0-n-PR0PIL)-19.-DEF0RMIL-21-ACETIL-TILOSINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 2, mas substituindo a 2Q-di-bidro-2J-acetil-tilosina pela 2J-ace ti 1-19-deformil-19-C3"liidroxt"n-proptl) "til osina obtida no exemj) lo 2Q, obtem-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais:

Espectrometría de massa; FAB £m-hJ+ : 1129 .

EXEMPLO 22: 19~(3-CIAN0-n-PR0PIL]~19~DEF0RMIL-TIL0SINA

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 3, mas substituindo a 1 9-cianometil-19-deformil-21-acetil-ti 1osi na pela 19-(3-ciano-n-propil)— 19-deformi 1 -2'-acetil-tilosina obti da no exemplo 21, obtem-se o composto pretendido,

Caracteristicas espectrais:

Espectrometría de massa: FAB £m-hJ+ : 956

EXEMPLO 23: ESTUDO DA ACTÍVIDADE DOS COMPOSTOS DE FORMULA GERAL I SOBRE DIVERSAS ESTIRPES BACTERIANAS A determinação das concentrações inibidoras mínimas (CIN} efectuou-se: - para os Estafi1ococos e os Enterococos (Estreptococos D) em meio gelosado ou liquido de MUELLER HINTON; - para os Hemofilus, Estreptococos nao D e "Neisseria gonorrhoeae", a determinação das CIN efectua-se de acordo com o método da diluição em meio gelosado com . * sangue cozido enriquecido com mistura Polyvitex , A cultura realiza-se em atmosfera rica em C02» A leitura das CIN efectua-se apôs 18 horas, de incuba- / -34- ção a 37°C,

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção são testados na gama de concentraçoesccompre-endidas entre 0,125 e 256 mg/1 [diluições sucessivas de razão 2),

As concentrações fnibidoras mínimas são da ordem de: 0,25 mg.ml ^ para o Estafilococos dourado; 1 mg.ml""^ para os Enterococos, 0 conjunto destes estudos demonstra a actividade antibiÕ tica interessante do composto de acordo com a presente invenção quer pela intensidade da sua actividade assim como pelo alcance do seu espectro de acção,

EXEMPLO 24: COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA: COMPRIMIDO

Comprimidos doseados com 75 mg de 19~deformil-19-formil-meti!-ti 1osina,

Formula para a preparação de 1000 comprimidos: 75 g 70 g 60 g 75 g 1 9-deformi 1 -19.-formi'lmeti 1 - til osi na • t m I i U i t i m π t u » M * * l I, M í M t M u u u

Amido de trigo Amido de milho

Lactose

Estearato de magnésio , I t M » * M t Μ. » « l t *. « I t « Μ I M · t 1 M t. 9 9 -35- STlica ...............

Hi droxi-propi1celulo se para 1000 comprimidos, 4 g 7 g

Claims

-36- REIVINDICAÇÕES 1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula ge ral 10 II CH3 11 H3C/ 7k\i.'''H2C"A ^ 19 (I) R20 ^ CH2 . /3 H3C ·. 14 '<''0 B0 15 0 ^ 1 CH2 2 OH

H3C CH3 \/ N

0R1 CH3 CH3 na qual: representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula -37-

*

OH - R2 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula

OCH3 HO e quando R2 representa um átomo de hidrogénio R^ representa igualmente um átomo de hidrogénio/ - B representa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo inferior, - A representa: - um grupo de fórmula CH2OH e neste caso B representa um grupo acilo inferior, ou então: um grupo de fórmula geral -(CH2)nCN, - ou um grupo de fórmula geral -(CH9) CHO, - ou um grupo de fórmula geral — (CH2) jn+^OH, em que n representa um numero inteiro compreendido entre 1 e 6, entendendo-se por grupo acilo inferior um grupo que comporta entre 1 e 5 átomos de carbono, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o -38-

ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fõr-

o

quando no derivado de fórmula geral I que se pretende obter o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, com ácido clorídrico diluído de normalidade compreendida entre 0,05 e 0,4, preferencialmente compreendida entre 0,1 e 0,30, de preferência com preendida entre 0,15 e 0,25, â temperatura ambiente, para se obter, apôs lavagem com um dissolvente orgânico apropriado, alcali nização e extracção com um dissolvente orgânico apropriado, um composto de fórmula ο II

HO

' OH OCH3 CH2 2 CH3 ^ . .-H2C-CH0 (11/k) H3C CH3

OH CH3 composto de fórmula II/A que se faz reagir, quando no composto de fórmula geral I que se pretende obter o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio, com ácido clorídrico de normalidade compreen dida entre 0,25 e 0,75, preferencialmente entre 0,30 e 0,7, de preferência entre 0,4 e 0,6, a uma temperatura compreendida com vantagem entre 30 e 100°C, preferencialmente compreendida entre 50 e 90°C, de preferência compreendida entre 70 e 80°C, para se obter, apôs lavagem com um dissolvente orgânico apropriado, alca-linização e extracção com um dissolvente orgânico apropriado, um composto de fórmula ο HO

(ΙΙ/Β) composto de fórmula II, II/A ou II/B, consoante o composto de fórmula geral I que se pretende obter, que se submete: 1) ou a uma reacção com um hidreto misto de metal alcalino no seio de um álcool alifãtico inferior para se obter um composto de fórmula geral R2O

na qual R^ e R2 têm os significados definidos antes e n representa o número 1, que se faz reagir com um anidrido de ácido carboxílico inferior de / -41- .¾ fórmula geral Ac-OHr na qual Ac representa um grupo acilo inferior, de preferência â temperatura ambiente e com vantagem sob atmosfera inerte para se obter um composto de fórmula geral 0

na qual Ac representa um grupo acilo inferior, n representa o número 1 e e R2 têm os significados definidos antes, caso particular dos compostos de fórmula geral I na qual o símbolo B representa um grupo acilo inferior e o símbolo A representa um grupo metanol, que se trata com cloreto de tosilo, que se adiciona em pequenas fracções, na presença de 4-dimetilamino-piridina para se obter, após purificação eventual, extracção e cromatografia eventual, vim composto de formula geral (V)

fk,. ^H2C-(CH2)n0S02

CH2. 2 CH3 H3C CH3 \/

0R1 CH3 na qual n, Ac, e Rj têm os significados definidos antes, que se faz reagir com um cianeto de metal alcalino na presença de um agente de criptação para se obter um composto de formula geral 0 ,ch3 II 10

.'H2C-(CH2)nCN

0R1 CH3 ch3 (VI) na qual n, Ac, R^ e Rj têm os significados definidos antes, caso particular dos compostos de fórmula geral I na qual o sim- -43- bolo B representa um grupo acilo inferior e o símbolo A representa um grupo CH^CN, que se faz reagir com metanol, para se obter um composto de formula geral R20

(VII) na qual R^ e R2 têm os significados definidos antes e n representa o número 1, caso particular dos compostos de formula geral I na qual o símbolo B representa um ãtomo de hidrogénio e o símbolo A representa um grupo CH2CN, que se faz reagir com diisobutil-hidreto de alumínio, preferencial mente sob atmosfera inerte, para se obter um composto de fórmula geral -44-

CH3 na qual R^ e R2 têm os significados definidos antes e n representa o número 1, caso particular dos compostos de fórmula geral I na qual o símbolo B representa um átomo de hidrogénio e o símbolo A representa um grupo de fórmula CH2-CHO, 2) ou a uma reacção com cloreto de (paratolueno-sulfonil) --metilo na presença de n butóxido terc. de metal alcalino no seio de um álcool alifático inferior, para se obter, após purificação eventual mediante cromatografia, um composto de fórmula geral

RoO

CH3 (IX) na qual R^ e R2 têm os significados definidos antes e n representa o número 1, que se faz reagir com um hidreto misto de metal alcalino no seio de dimetilformamida preferencialmente sob ligeiro aquecimento para se obter, após purificação eventual mediante cromatografia, um composto de fórmula geral 0

na qual R-j^ e R2 tem os significados definidos antes e n representa o número 1, / " 46- C- jy* caso particular dos compostos de fórmula geral I na qual o símbolo A representa um grupo e o símbolo B representa um átomo de hidrogénio, que se faz reagir com clorocromato de piridínio para se obter, após purificação eventual mediante cromatografia, um composto de fórmula geral VIII, o qual, por seu lado, se submete, eventualmente, como indicado antes, em função do composto de fórmula geral I que se pretende obter, - quer 3) à acção sucessiva de um hidreto misto de metal alcalino de anidrido de ácido carboxílico inferior, de cloreto de tosilo na presença de 4--diraetilamino-piridina, de cianeto de metal alcalino, de metanol na presença de um agente de cri£ tação e depois com diisobutil-hidreto de alumínio, para se obter sucessivamente os compostos de fórmulas gerais III/A, IV/A, V/A, VI/A, VII/A e VIII/A caso particular dos compostos de fórmulas gerais III, IV, V, VI, VII e VIII, em que o símbolo n representa o número 2, os símbolos e R2 têm os significados definidos antes e o símbolo Ac representa, nesse caso um grupo acilo inferior, - quer 4) à acção sucessiva de cloreto de (parato-lueno-sulfonil)-metilo na presença de butõxido terc. de metal alcalino, depois de um hidreto misto de me- -47- tal alcalino na presença de dimetilformamida e por fim clorocromato de piridínio, para se obter sucessivamente os compostos de formulas gerais IX/A, X/A e VIII/A, caso particular dos compostos de fórmulas gerais IX, X e VIII, em que o símbolo n representa o numero 2 e os símbolos R^ e R2 têm os significados definidos antes, composto de fórmula geral VIII/A que, por seu lado, se submete, eventualmente, a uma, duas, três ou quatro vezes a um tratamento igual aos indicados em 3) ou 4), para se obter um derivado de fórmula geral III/B, IV/B, V/B, VI/B, VII/B, VIII/B, IX/B, X/B, caso par ticular dos compostos de fórmula geral III, IV, V, VI, VII, VIII, IX e X em que o símbolo n representa o número 3, 4, 5 ou 6, que, de acordo com o tratamento indicado em 3) ou 4) , ê realizado 1, 2, 3 ou 4 vezes, os símbolos R^ e R2 têm os significados definidos antes e o símbolo Ac representa nesse caso um grupo acilo inferior, compostos que, eventualmente, se purificam mediante cromatografia sobre coluna de sílica com uma mistura dissolvente apropriada, e que, eventualmente, se podem salificar com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo A representa um grupo C^OH e o símbolo B representa um grupo acilo in-

* ferior, e dos seus sais de adição com um acido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de formula geral I, na qual o símbolo A repre senta um grupo de fórmula geral (CK^^CN e o símbolo n represen ta um numero inteiro compreendido entre 1 e 6, e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo A repre senta um grupo de fórmula geral (CH2)nCHO e o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo A repre senta vim grupo de fórmula geral (CH2) (n+1)0H e 0 símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farma- -49- -49-

/ ciutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com uma das reivindicações 1 ou 3, para a preparação da 19-cianometil-19-desformil-2'-acetil--tilosina e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
7. - Processo de acordo com uma das reivindicações 1 ou 3, para a preparação da 19-cianometil-19-desformil-tilosina e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8.- Processo de acordo com umadas reivindicações 1 ou 4, • * para a preparação da 19-formilmetil-19-desformil-tilosina e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9.- Processo de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, para a preparação da 19-hidroximetil-19-disformil-2'-acetil--tilosina e dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se uti lizarem compostos iniciais correspondentemente sunstituídos. O Agente Oficiai da Propriedade Industrial Lisboa, 19 de Abril de 1990 Λ \