PT91584B

PT91584B - Processo para a preparacao de uma composicao farmaceutica util para imunossupressao contendo um inibidor-activador de plasminogenio (pai-2)

Info

Publication number: PT91584B
Application number: PT91584A
Authority: PT
Inventors: Norbert Heimburger; Thomas Stief; Hans Ulrich Schorlemmer
Original assignee: Behringwerke Ag
Priority date: 1988-08-31
Filing date: 1989-08-30
Publication date: 1995-05-31
Also published as: DK428089D0; JPH02108633A; DE58906241D1; EP0356945A2; KR900002791A; DE3829523A1; EP0356945B1; DK428089A; ATE97576T1; PT91584A; ES2061842T3; EP0356945A3; AU616555B2; AU4090589A

Description

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 91 584

REQUERENTE: BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em D-3550 Marburg, República Federal Alemã.

EPIGRAFE:

“PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ÚTIL PARA IMUNOSSUPRESSÃO CONTENDO UM INIBIDOR-ACTIVADOR DE PLASMINOGÉNIO (PAI-2)”

INVENTORES:

Dr. Thomas Stief, Prof. Dr. Norbert Heimburger e Dr. Hans Ulrich Schorlemmer.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

República Federal Alemã em 31 de Agosto de 1988, sob o N°. P 38 29 523.7.

INPI. MOD. 113 B F 16732 t ·— κ - 7 ·< Λ e? ί-7

Descrição referente ã patente de invenção de BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT, alemão, industrial e comercial, com sede em D-3550 Marbury, República Federal Alema, (inventores: Dr. Thomas Stief , residente em Espanha e Prof. Dr. Norbert Heimburger e Dr. Hans Ulrich Schorlemmer, residentes na Alemanha Ocidental), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ÚTIL PARA IMUNOSSUPRESSÃO CONTENDO UM INIBIDOR-ACTIVADOR DE PLASMINOGÉNIO (PAI-2)

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se à utilização de inibidor-activador de plasminogénio (pai-2) como imunossupressor .

Os macrófr^os e os leucócitos neutrófilos de núcleo polimorfo (NPM) participam de modo fundamental na resposta imune do organismo. Dispõem de um sistema de ataque constituido por um lado por proteases e por outro por outros oxidantes potentes (N-cloramina e radicais de oxigénio). Através destas proteases e destes oxidantes influenciam e reforçam a resposta imune.

Por resposta imune deve entender-se a reacçao de células imunocompetentes como o sistema de monócitos/macrofagos sobre a inflamaçao, a infecção, a irritaçao provocada pela renovaçao de tecidos e pela reparaçao de tecidos. Ao sistema de monocitos/macrofagos incumbem numerosas missões em todo o organismo, uma vez que os monócitos do sangue migram para diferentes tecidos a fim de nestes assumir funções imunoló gicas especificas nao finais. Deste modo os monocitos diferenci am-se nos pulmões dando origem macrofagos alveolares,

BAD ORIGINz no

TF

nas cavidades corporais fígado a células em estrela de Kupffer, nos ossos a osteoclastos, no sistema nervoso central (SNC) a células microgliais, nos rins a macrófagos mesangiais, nas mucosas das articulações a células de protecção sinoviais e a macrófagos da pleura e peritoneais.

Os inibidores destes macrófagos e dos NPM são de alto interesse clínico, uma vez que numerosas doenças humanas estão relacionadas com uma actividade elevada dos macrof agos.

Podem ocorrer estados nos quais é desejável a supressão funcional de um ou de vários compartimentos do sistema imune. Estes estados podem consistir numa reacçac do sistema imune que ultrapassa os limites dos padrões normais (estado hiperactivo) ou numa reacçao do sistema imune contra tecidos do próprio corpo.

As substâncias que estão em condiçoes de inibir a actividade biologica dos macrófagos podem actuar como imunossupressores. Subsiste uma grande necessidade de imunossupressores a) destituídos de efeitos secundários e b) dotados de alta especificidade. Os derivados de corticoides de uso muito frequente em clínica nao preenchem as condiçoes a) nem b ) .

Surpreendentemente verificou-se que em sistemas de ensaio in vitro com macrófagos e com os respectivos produtos de secreção o inibidor-activador de plasminogénio (PAI-2) apresenta uma actividade de inibição da secreção de radiciais de oxigénio.

De acordo com Thrombosis and Haemostasis (1986) o PAI-2 possui entre outras as seguintes peso molecular 47 000 (nao glicosilado ) e

000 (glicosilado); ponto isoeléctrico 5 (4,4); constante de inibição para a uriquinase

Ê surpreendente que o PAI-2 seja capaz de inibir a uroquinase num ambiente oxidante, isto é, o PAI-2 e um PAI resistente a oxidaçao, ao contrario do PAI do tipo endotelial (PAI-1).

56, 415-416 propriedades

9. 10⁵M ¹

- 2 ass^es^

Verificou-se surpreendentemente que o PAI-2 em concentrações fisiológicas activa fortemente como inibidor sobre a reacçao de quimioluminescencia dependente da libertação de radicais de oxigénio dos macrofagos. Relacionado com este facto verificou-se que o PAI-2 actua in vivo como iminossupressor em modelos de transplantaçao.

objectivo da presente invenção é por conseguinte a utilização do inibidor-activador de plasminogénio de origem placentária (Pai-2) num processo para a preparaçao de um medicamento para a imunossupressao.

As doenças nas quais pode ser usado um medicamento como o descrito sao por exemplo doenças autoimunes como psoriase, glomerulonefrite , de preferência do domínio mesangial, esclerose múltipla, síndrome de Guillan-Barre, colagenose, doenças alérgicas, sindrome de Schonlein-Henloch , doenças degenerativas como a doença de Parkinson, arteriosclerose, perturbações na cicatrizaçao e na reparaçao de feridas e de ossos ou sindromes de shock como a Sdra (síndrome da Dificuldade Respiratória do Adulto), queimaduras ou coagulopatias . Um medicamento como descrito também pode ter interesse para doenças infecciosas como a SIDA.

Também apóa transplantaçao de tecidos estranhos ao corpo ocorre uma reacçao imunologica contra o órgão transplantaçao reconhecido como estranho ou contra o organismo receptor no sentido de uma reacçao de enxerto contra hospedeiro, conduzindo a uma rejeição. Estas crises de rejeição podem também dar-se com tecido placentário, o qual em certas ocasioes também é reconhecido como estranho pelo organismo maternal, resultando perturbações no trofoblasto placentário e dissolução prematura da placenta. Ê por conseguinte necessário reduzir a actividade do sistema imune do receptor de órgão ou de transplantações a fim de garantir a sobrevivência da transplantaçao ou do receptor, respectivamente.

Complicações (hemorragias secundárias) apos hemorragias subaracnoidais sao igualmente condicionadas pela actividade aumentada dos glóbulos brancos.

Em oposição à superoxidodismutase utilizada em clínica em doenças como a doença de Crohn, a colite ulcerosa, colegenoses ou esclerose múltipla, a qual é capaz de neutralizar os redicais de oxigénio, o PAI-2 reduz a formaçao destes radicais. 0 PAI-2 apresenta também actividade na encefalomielite alérgica (EA). A EA pode servir de modelo para a doença humana esclerose múltipla.

As reacçoes do sistema imune que ultrapassam a normalidade e a libertação de radicais de oxigénio patologicamente elevada que está relacionada com estas reacçoes também se encontram em estados de reperfusao, isto é, de passagem súbita de sangue através de um tecido anteriormente com perfusão reduzida, por respiração de oxigénio em alta percentagem, na utilização clínica ou em envenenamento por exemplo com paraquat, utilização de cis-platina, adriamicina, nitrofurantoína, bleomicina, estreptozotocina e de outras substâncias d iabetogénicas, na terapia por radiações e nas lesões dos tecidos consequentes.

Nas medidas conhecidas que sao apropriadas para a supressão do sistema imune incluem-se o tratamento com anticorpos contra tecido linfático, radiações ionizantes e substâncias quimicas. Os tratamentos agressivos como os referidos apresentam efeitos secundários consideráveis: organotoxicidade, esterilidade para os citostáticos e radiações ionizantes, edema cerebral para o ácido tranexâmico, formaçao de anti-anticorpos com o perigo de uma doença sérica no tratamento com anticorpos .

Pelo contrário a utilização do PAI fisiologico humano nao apresenta qualquer efeito secundáric e actua mesmo em doses reduzidas de modo bastante eficaz. Forarr mesmo descritas concentrações elevadas de PAI-2 no plasma de por exemplo grávidas saudáveis. Deste modo verifica-se um amplc espectro de utilidade terapêutica desta proteína com pelo menos ate um máximo de 30 unidades de inibição de uroquinase por ml de plasma (22 a 300 ng/ml).

A quantidade de PAI-2 dotada de actividade para a imunossupressão e a inibição da libertação de radi-

cais de oxigénio, por exemplo para a inibição das lesões em tecidos em perigo durante a reperfusao, hemorragias subaracnoidais, doenças autoimunes, esclerose múltipla, colagenoses, doenças alérgicas, sindrome de Schonlein-Henoch, doenças degenerativas, arteriosclerose,, perturbações na cicatrizaçao e na reparaçao de feridas e de ossos, queimaduras, incompatibilidade em transplantações dissolução prematura da placenta, pre-eclampsia e sindrome de shock depende de uma serie de factores, por exemplo de idade e do peso do paciente e do estado clinico.

Uma dose activa situa-se em geral na gama de 0,7 a 30 000 unidades de inibição de uroquinase/Kg/24 h e de preferência de 7 a 3000 unidades, isto e, 525 a 22 225 000 unidades por aplicaçao 1. v. ou com um solvente i.m. para um paciente de 75 Kg de peso. 0 PAI-2 pode ser estabilizado por adiçao de estabilizadores, como albumina, poligelina ou glicina.

PAI-2 pode também ser administrado por via tópica para a terapia e a profilaxia local de perturbações na cicatrizaçao de feridas, em queimaduras, na rejeição de transplantações, em doenças respiratórias alérgicas e em 'outras doenças que estejam associadas com uma actividade elevada dos macrófagos.

Sao indicados medicamente combinações de PAI-2 e de um fibrinolítico, como zctivador de plasminogénio de tecido (t-PA), uroquinase, estreptoquinase ou complexo activador de plasminogénio-estreptoquinase para a terpia lítica de preferência em obstruções nas artérias como no infarto do miocardio ou na apoplexia. Uma utilização combinada de PAI2 e de um fibrinolítico possibilita a inibição imediata de lesões nos tecidos, como por exemplo necroses, durante e após reperfusao aguda condicionada por glóbulos sanguíneos hiperactivos. Quando se utiliza como fibrinolítico em combinação com PAI-2 um dos activadores de plasminogénio t-PA naturais ou uroquinase, é preferível usar as formas de cadeia simples destas substâncias, uma vez que estas formas, ao contrário do que ocorre com as formas de cadeia dupla, nao formam, pelo menos de forma apreciável, quaisquer complexos inactivos com o pAI2 .

A dose activa do fibrinolítico em combinação com o PAI-2 situa-se entre 1 e 200 mg de t-PA ou de uroquinase ou entre 100 000 e 3 milhões unidades de estreproquinase ou de complexo activador para a aplicaçao sistémica num paciente de 75 Kg de peso.

Para além disso, sao indicadas para uso médico combinações de PAI-2 e de um inibidor de ornitinadescarboxilase de baixo peso molecular como um derivado de uma poliamina ou de alto peso molecular como um inibidor do tipo da transglutaminase. Ê especialmente preferida a combinação de PAI-2 com uma transglutaminase como o F XIII, de origem placentária, plasmática ou obtido por manipulaçao genética para utilização como imunodepressivo. Quando se utiliza o F XIII numa combinação com PAI-2, uma dose activa de F XIII situa-se em geral entre 0,7 e 300 U/KG/24 h para a aplicaçao sistémica num paciente com 75 Kg de peso.

Ema seguida elucida-se a título exemplificativo a actividade das substâncias da presente invenção sobre a resposta imune do rato e do homem em metódos de ensaio padrao seleccionados in vivo e in vitro, cuja utilização é conhecida para a avaliaçao de imunossupressores .

Exemplo 1

Influência de PAI-2 (inibidor de uroquinase) sobre a estimulação de fagócitos humanos in vitro

Obtiveram-se granulócitos de núcleo polimorfo e fagocitos mononucleares a partir de sangue periférico de dadores saudáveis e experimentarem-se em relaçao a diferentes funções após adiçao dos preparados. Para parâmetros da função fagocitária investigaram-se a reação de quimioluminescência (formaçao de radicais de oxigénio) e a secreção de enzimas lisossomais. Mediu-se tanto a actividade do PAI-2 sobre os fagocitos nao activados (-IC) como também sobre os fagocitos activados por meio do complexo imune (+IC). 0 PAI-2 foi obtido de acordo com J. Biol. Chen. 262, 3646-3653 (1987).

Em comparaçao com fagócitos dos correspondentes grupos de comparaçao (células não tratadas) a reacção

de quimioluminescência (geraçao de radicais de O₂) ^s8 ⁿ cativamente reduzida tanto em granulocitos humanos como também em monócitos (fagocitos) de modo dependente da dose.

Exemplo 2

Acção do PAI-2 sobre a actividade dos macrófagos peritoneais do rato in vivo.

Administrou-se a ratos NMRI fêmeas (18 a 20 g) inibidor de uroquinase (pai-2) em diferentes concentrações de 5 a 100 U/animal por via intraperitoneal . 0 grupo de comparaçao recebeu iguais volumes (0,5 ml) de solvente (solução salina fisiológica tamponizada, pH 7,2). Duas horas e 24 horas mais tarde mataram-se os ratos, retiraram-se os macrófagos da cavidade abdominal e levou-se a efeito uma determinaçac de actividade com o auxilio da quimioluminescência conforme descrito no Exemplo 1. Como se pode verificar a partir do Quadre 2, o PAI-2 reduziu a actividade dos macrófagos retirados dos ratos que previamente tinham sido tratados com o preparado. A supressão foi observada in vitro após a aplicaçao da substância com adiçao ou nao de imunocomplexo tanto 2 horas como 24 horas depois.

Exemplo 3

Influência da oxidaçao da cloramina T sobre a actividad do inibidor-activador de plasminogénic (PAI) no plasma

a) diferentes concentrações de cloramina T Incubaram-se 50 ul de plasma isento de PAI (BIOpool, Umea, Suécia), plasma rico em PAI-1 (15 unidades de inibição de uriquinase (U/ml) bem como plasma isento de PAI suplementado con 15 U de ΡΑΙ-2/ml com 50 ul de tris a 100 mmol/1, NaCl a 10C mmol/1, Haemaccel a 1% Triton a 0,1 % x 100 - tampao (TNHT), a pH 8,5 e 50 ul de cloramina T (CT) a diferentes concentrações em agua destilada durante 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida adicionaram-se 200 ul de tampão de TNHT com 5 Ul de uroquinase (u-PA) e para branco de comparaçao com 0 UI de u-PA/ml e em seguida incubou-se durante mais 10 minutos à temperatura ambiente a fim se obter complexos u-PA-PAI. Em seguidt

’.o ϊΓ« ϋ i»u..'Tt3SS3’Sfci2S*'.^,^35 —

determinou-se a actividade restante de u—PA com o processo descrito por von Stief et al. (Thromb. Res. 50: 559 — 573, 1988), para o que se adicionaram 200 ul de cloramina T a 10 mmol/1, acido tranexâmico a 3 mmol/l em água destilada, incubou-se durante 15 min a temperatura ambiente e deu-se inicio à reacçao de detecçao por adição de 500 ul de substrato cromogénico de plasmina HD-Nva-CHA-Lys-pNA a 0,6 mmol/1 (pNA = para-nitroanilídeos) em NaCl a 480 mmol/1.

Após 10 minutos de incubaçao a temperatura ambiente fez-se parar a reacçao por adiçao de 100 ul de ácido acético a 8,4 mol/1 e determinou-se a extinção a 405 nm. Os resultados sao apresentados no Quadro 3.

Logo a partir de 0,1 umol de CT verificam-se perdas de actividade do PAI-1, enquanto que o PAI-2 é cerca de 5 vezes mais resistente frente a oxidaçao por CT.

0,5 umol de CT já provoca em 50 ul de plasma uma perda superior a 50% sobre PAI-1 activo, enquanto que a mesma dose de CT deixa ainda 77% da actividade de PAI2 intacta.

b) Influência de diferentes concentra- R çoes de PAI-2 , Fibrogammin e acido ascorbico sobre a perda de controlo de origem oxidativa do plasma sobre a actividade do activador de plasminogénio.

Incubaram-se durante 60 min a 37°C

100 ul de plasma humano normal, contendo citrato como anticoagu_ R lante, com 50 ul de soluçoes de a) PAI-2, b) Fibrogammin,

c) acido ascorbico a diferentes concentrações em água destilada com 250 ul de tampao de TNHT com 1,25 UI de u-PA, 100 ul de CT a 10 mmol/l e 100 ul de HD-Nva-CHA-Ly s-pNA a 3 mmol/1. Em seguida fez-se parar a transformaçao do substrato por adição de 500 ul de acido acético a 3,4 mol/1/ e determinou-se a extinção resultante a 405 nm. Os resultados sao apresentados no Quadro 4.

Reconhece-se que o PAI-2 (10 U) bem

JJ como a Fibrogammin (0,5 unidades de Fibrogammin) e a vitamina C (20 umol) provocam um restabelecimento da perda de controlo sobre o sistema u-PA/-plasmina. As extinções inicialmente eleva8 drfóH** das reduzem—se por suplementaçao do plasma com as substancias a 0 %>. A vitamina C pode ser substituída por N-acetilcisteína ou por N-acetilmetionina.

Exemplo 4

Efeito de diferentes concentrações de CT sobre o sistema u-PA/-plasminogenio/plasmina, neutralização do efeito pelo PAI-2 e/ou Antagosan em combinação com vitamina C (ácido ascórbico).

Trataram-se 100 ul de plasma humano padrao, contendo EDTA como anticoagulante, com 250 ul de tampao de TNHT, contendo 1,25 UI de u-PA e 100 ul de água destilada, contendo a) 10 mmol/1 de ácido ascórbico, b) 2,5 U de PAI-2, c)10 mmol/1 de ácido ascórbico e 2,5 U de PAI-2, d) 2,5 KUI de ^Antagosan, e) 2,5 KUI de ^Antagosan e 2,5 U de PAI-2, f)

2,5 KUI de Antagosan, 10 mmol/1 de ácido ascorbico e 2,5 U de PAI-2 e h) (comparaçao sem reagente). Adicionaram-se a estas preparações 100 ul de CT com diferentes concentrações em água destilada e incubou-se durante 45 min a 37°C. A adiçao de 500 ul de HD-Nva-CHA-Lys-pNA a 0,6 mmol/1 em NaCl a 480 mmol/1 fez iniciar-se a reacçao sobre o substrato. Após 6 min (37°C) fez-se para a transformaçao do substrato por adiçao de 500 ul de acido acético a 20 % . Os resultados sao apresentados no Quadro 5.

Reconhece-se que quantidades crescentes de CT provocam uma elevaçao proporcional da medida da extinção a 405 nm. 0 controlo de plasma fisiológico sobre a actividade de protease de serina de plasmina e uroquinase deixou de existir. Por suplementaçao de plasma humano com Antagosan e/ou PAI-2 é possível restabelecer o controlo e tetecta-se uma actividade no plasma consideravelmente menor. A adiçao de vitamina C fortalece o efeito de PAI-2/-Antagosan de modo sinergístico.

Exemplo 5

Influência da PAI-2 sobre o tempo de sobrevivência de pele de cauda de ratos transplantada.

Nesta experiência transplataram-se pedaços de pele de cauda de ratos Lewis com uma dimensão de

cerca de 0,5 x 1,0 cm sobre a cauda de ratos Fischer. Os pedaços de pele transplantada foram reconhecidos como estranhos pelo sistema imunológico do animal receptor e rejeitados. Conforme se pode observar no Quadro 6, o tempo de sobrevivência das

transplantações	no	modelo	dos ratos	Lewi s-Fischer	no grupo
de comparaçao,	que	apenas	tinha sido	tratado com o	solvente,
foi de entre 16	a	18 dias.	Administrou	-se o PAI-2 (50	U/animal

por injecção) por via intraperitoneal em 7 dias consecutivos quer com início no dia 1 quer no dia 10 após a transplantaçao. Nesta experiência verificou-se surpreendentemente que o PAI2 nas concentrações usadas causa uma elevaçao do tempo de sobrevivência das transplantações de 17,0 + 1,4 para 26,0 + 2,0 a 23,0 + 2,4.

QUADRO 1

Influência do PAI-2 sobre o metabolismo oxidativo (quimioluminescência) com e sem estimulação pelo complexo imune (50 ug/ml) in vitro

Quimioluminescência

Tipo de célula PAI-2 (U/ml) integral do RLU/15 min (xlO ) -IC +IC

Monócitos	0.07	1321	+	92	9347	4;	709
humanos	0	2478	+	354	18516	+	1571
(fagócitos)	0.15	1061	+	35	4825	+	403
1 x 10 células	0.7	811	+	68	2640	+	235
	1.5	633	+	49	1580	+	221
	6.0	452	+	31	1040	+	163
	25.0	247	+	75	695	+	125

Granulocitos	0.05	1656	+	252	28633	+	4394
humanos	0	3110	+	127	48547	+	2372
2x10^ células	0.1	1172	+	131	15567	+	1762
	0.5	1018	+	94	12267	+	709
	2.5	422	+	48	6587	+	604
	5.0	135	+	22	4550	+	665

QUADRO 2

Influência do PAI-2 (inibidor de uroquinase) sobre a actividade dos macrófagos (1 x 10 células) in vivo.

PAI - 2 Quimioluminescência

U/animal integral do RLU/15 min (x 10 ) x i . p .

-IC +IC h 24 h 2 h 24 h

0	2775 + 375 4480	+ 453	51800 + 1286	72500 +	1556
5	1655 +	106 3440	+ 142	27175 + 1859	23950 +	1625
25	1145 +	70 1467	± ⁸⁵	19267 + 1550	17200 +	1407
50	600 +	118 915	+ 19	13833 + 2346	8953 +	287
100	466 +_	75 488	+ 166	9783 + 2188	4960 +	392
			QUADRO 3
Dose de	CT	Extinção		Inibição	de u-PA *
(umol/50	ul)	MPL-PAI PAI	-1 PAI-2 PAI-1	PAI-	2 PAI-1 PAI-
		(A405 nm	x 1000)	(%)	W	**
0	1011	350	485	65	52	100	100
0,01	1016	377	498	63	51	97	98
0,05	1033	351	503	66	51	101	98
0,1	1050	459	509	56	52	86	100
0,175	1063	541	528	49	50	75	96
0,25	1099	596	549	43	47	66	90
0,375	1060	668	593	37	44	57	85
0,5	1049	735	626	30	40	46	77
0,75	1001	777	696	22	31	34	60
1,0	982	807	716	18	27	27	52
1,5	921	792	718	14	22	21	42
2,0	834	738	667	11	20	17	38
			-	12 -

(1 -

Extinção plasma com PAI ) x 100

Extinção plasma com carência de PAI ** em % de 0 umol de CT = ensaio de comparaçao com água destilada

QUADRO 4

Adição de u-PA U inib.

PAI-2

A405 nm Unid. (x 1000) p

Fibrogammin A405 nm mmol/1 (x 1000)

Vitamina C A405 nm (x 1000)

	0	579	0	579		0	579
	1	467	0,1	325		5	363
	2,5-	343	0,25	168		10	219
	5	144	0,5	63		20	112
	10	61	1	20		30	75
	20	0,0	2	25		40	62
	40	0,0	4	9		60	50
	80	0,0	8	0,	0	80	36
		QUADRO 5
Adição de	CT Comparaçao	Actividade	de plasmina gerada
(mmol/l )	(A405	nm x 1000)		do	ensaio de	comparaçao)
	h)	a)	b)	c)	d)	e)	f) g)
0	0,0	—
5	32	56	53	65	40	36	37 22
10	121	30	48	60	26	22	26 9
20	456	33	50	64	16	21	32 11
30	870	54	43	62	10	35	29 15
40	837	100	48	60	47	62	27 29

QUADRO 6

Efeito do PAI-2 sobre a transplantaçao de pele em ratos Fischer

Substância

Dias da rejeição da transplantaçao

Valor médio (dias) (x + s)

Comparaçao
PAI	-2
50	U/animal
7 x	I.p.
dia	1 a 7
PAI	-2
50	U/animal
7 x	i.p.
dia	10 a 17

19, 18, 16, 16, 16

29, 27, 24, 26, 24

22,‘ 27, 24, 22, 21

17,0 + 1,4

26,0 + 2,0

23,2 + 2,4

Claims

REIVINDICAÇÕES

- I^a Processo para a preparaçao de uma composição farmacêutica com actividade imunossupressora caracterizado por se levar a uma forma de administraçao adequada um inibidor-activador de plasminogenio (PAI-2) eventualmente com adiçao de adjuvantes ou de estabilizantes, sendo o inibidor-activador de plasminogénio 2 incorporado numa quantidade de 52 a 2,25 milhões de unidades de inibição de uroquinase por dose (para um peso corporal de 75 Kg).

- 2^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se adicionar um estabilizante, de preferência albumina ou‘ os seus produtos de decomposição, gelatina com ligações cruzadas ou os seus produtos de decomposição, gelatina com ligações cruzadas ou os seus produtos de decomposição, gelatina dom ligações cruzadas ou os seus produtos de decomposição ou colagénio com ligações cruzadas.

- 3^a 1, caracterizado por util para a terapia e de transplantações ou versus hospedeiro.

1, caracterizado por util para a terapia de

Processo de acordo com a reivindicação a composição farmacêutica preparada ser para a profilaxia de crises de rejeição de placenta e de reacções de enxerto

- 4^a Processo de acordo com a a composição farmacêutica doenças autoimunes.

reivindicação preparada ser

- 5^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição farmacêutica preparada ser util para a terapia e para a profilaxia de pertubaçoes na cura de feridas e de afecções ósseas.

- 6^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição farmacêutica preparada ser útil para a terapia de processos patológicos que implicam uma elevaçao da formaçao de radicais de oxigénio.

- 7^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição farmacêutica preparada ser útil para a terapia e para a profilaxia de lesões nos tecidos durante e após reperfusao aguda.

- 8^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição farmacêutica preparada ser útil para a terapia de complicações hemorrágicas posteriores em hemorragias subaracnoidais.

- 9^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição farmacêutica preparada ser util para a utilização tópica, de preferência sob a forma de um pulverizador para o tratamento de feridas ou de um pulverizador para a utilização na asma ou de um pulverizador para tratamento de queimaduras ou para a terapia e para a profilaxia de doenças que implicam uma elevaçao da actividade leucocitária.

- 10^a Processo de

1, caracterizado por a composição util para a repressão do sistema de acordo com a reivindicação farmacêutica preparada ser monócitos-macrófagos.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alemao apresentado em 31 de Agosto de 1988, sob o n^Q. P 38 29 523.7.

Lisboa, 30 de Agosto de 1989

0 AGE5TE OFICIAL DA PEOPEEEDADE INDUSTEIAL

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ÚTIL PARA IMUNOSSUPRESSÃO CONTENDO UM INIBIDOR-ACTIVADOR DE PLASMINOGÉNIO (PAI-2)

A invenção refere-se a um processo para a preparaçao de uma composição farmacêutica com actividade imunossupressora que compreende levar-se a uma forma de administração adequada um inibidor-activador de plasminogénio (pai2) eventualmente com adiçao de adjuvantes ou de estabilizantes, sendo o inibidor-activador de plasmonogénio 2 incorporado numa quantidade de 52 a 2,25 milhões de unidades de inibição de uroquinase por dose (para um peso corporal de 75 Kg).