PT91017A - Processo para a preparacao de rodomicinas modificadas - Google Patents

Description

tas compostos especiais n&o S n© ®mtant®e tipi©nm©nte# igual pa ra todos os pacient©s9 e as taxas úe skc©©ss® para algumas espécies particulares de tumore@9 com® o caacr® d® intestino grosso e melanomas, é reduzido e As acções colaterais do tratamento com 1 -

doxurubiclua e daunorubicina sãa* entre outras* unia lesão do sistema circulatório © as eompli@ago©s ©araeterístieas daquela·

Sabe-se* ao tocante a® grupo da doxorubicina e daunorubicina* que a substituição ©o® 4-0=m©til® nas amtraeieli nas e necessária para a aeçã© anii-tuiaóriea θ seloctiva de tumores* Os correspondentes derivados em 4-liidrosi* como a eanni-nomicina, são citotóxicas e pouco seleetivas·

Partindo—se deste estado da técnica* o objectivo da presente invenção & obter* a partir de β —rodoraicinona como composto de partida* novas 4«0®&lquil<=>rod@m±ciaas que se earac— terizem por um novo espectro de acçõss o uma baixa toxicidade·

Surpreendentemente provou-se* na alquilação de 7*10-bis-0-(trimetilsilil)- β-rodoraieinoaa* que dos grupos hi-droxi presentes na molécula (grupos hidroxi nas posiçãos 4*6*9 e 11) é alquilado preferivelmente o grupo bidroxi na posição 4. Abre—se assim uma via para a preparação © utilização de novos derivados de rodomicina·

Com base nestas resultados* a presente invenção fundamenta—se na preparação* a partir d© 4-O-alquil— f^-rodomi— cinona* de produtos d© 7-0-glicosil©* © a investigação d© seu espectro de acçã© e a ©ua possibilidade de utilização como agen tes terapêuticos de tumores·

Este problema © solucionado cosa os novos derivados de antraeiclina com ©ficácia ©itoestática que correspondera à seguinte fórmula geral 1 0 HO OR2

s 2 s

na qual os radicais têm os seguintes significadoss representa um grup© alquil© com la 4 átomos d© carbono , representa um átomo d® hidrogénio, um grupo d© bloqueio tri-alquilsililo com 1 a 4 átomos de carbono ©ss cada parto alqui lo, um grupo acetil® ou um grupo naonohalogenoacetilo, dibaloj genoacetilo ou trihalogonoacetilo θει que halogenxo representa flúor ©« cloro, um grupo bensoil© ©u p-nitrobenzoilo, representa um átomo de hidrogénio, e em conjunto representam um radical de ácido fenilboroni co PhB=,

representa um átomo d© hidrogénio, usa grupo d© bloqueio tri-alquilsililo com 1 a 4 átomos de carbono em cada parto alqui lo, ou um radical glioosilo de formula II

II na qual representa um grupo hidroxi, um grupo aeetiloxi, um grupo amino, um grupo trifluoraeetamido 9 um grupo dialquilamino com 1 a 4 átomos de carbono em cada parte alquilo, um grupo 4-morofolinilo ou um grupo cianometilamino e R^ representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo hidroxi, um grupo aeetiloxi, trifluoracetiloxi ou p—nitrob©nzoiloxie

SS© preferidos os compostos de fórmula I nos quais R^ representa metilo, 2 R representa trimetilsiXil© ou F^CCO—, . R^ representa hidrogénio, a 3 s ή 1

3 4 R β R era conjunto representam PSa«Bs:9 4 , R representa hidrogénio9 trimetilsiXil® ou vm radical glieosi-lo de fórmula 11 em que representa OH, GH^COO-, MH2=, F^CCOEB-, dimetilasain©, 4-mor-folinilo ou NCCH^NH © 6 R representa Hg OH, CH^CQQ-, F^CGOO= ®u pNOg-PliOOO-e 0® compostos de fórmula I pode® eventualiaente existir como sais de amónio* O processo d© acordo ©ora a invenção para. a prepa ração de um dos novos compostos d© fórmula I © ©araeterizado pe lo facto de Γ

a) se fazer reagir B-rodoraicinoaa d© formula I, aa qual os ra-dieais R , R , R** o R representam um átomo de hidrogénio, com cloreto de trialquilsilil© com 1 a 4 átomos de carbono em cada parte alquilo, na presença de uma base como piridina e de um dissolvente orgânico c®m© dielorometano, a uma tempcã ratura compreendida entre «20® 0 e -5-25® C, obtendo-se 7 »10-—bis-0—trialquilsilil— p«rodomiciaoaa cora 1 a h átomos de carbono em cada parte alquilo, ©m seguida s© alquilar o composto obtido com brometo ou iodeto de alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, aa presença d© um carbonate alcalino, obtendo—se 4—0—alquil—7,10—bis—0—(trialquilsilil)- -rodomicinona com 1 a 4 átomos d© carbono ©m cada part© alquilo, e final-mente se dissociarem os grupos d© bloqueio trialquilsilil® por hidrólise ácida, formando-s© ura composto d© 4-0-alquil-- -rodomicinona cora 1 a 4 átomos de carbono aa parte alquilo, de fórmula 11X

4

na qual representa » grtip© alquil© ©om 1 a h atemos de carbono,

b) se esterificar selectivasaenie ao gnspo Mdrosi ©m posição 7 e 9» de forma conhecida por si, o composto de fórmula 111 com ácido fenilborónico na presença de um ácido, tal como acido p—toluenosulfónie© ou ácido acético, © de um dissolven te orgânico anidro como tolueao, ©m seguida se acilar no gru po Mdroxi em posição 10 o composto obtidos com um anidrido ou cloreto dos ácidos trifluoracétioo, acético* benzóico ou p—nitrobenzóico, na presença d© uma base como trietilamina ou piridina, e seguidamente se dissociar hidroliticamente em meio ácido o grupo de bloqueio fonilboronilo , ou por meio de um diol como 2—metil—pentano—2,Í6-=>d±©X, forasando—se um compoai to de fórmula IV O HO OS2

IV, na qual R"*· representa um grupo alquilo com 1 a k átomos d© carbono e R representa um grupo de bloqueio aeile que deriva dos ácidos acético* trifluoraeótieo, benzóico ou p-nitrobenzóico,

c) se fazer reagir o composto de fórmula IV, de forma conhecida por ei, com um desoxi—açúcar funcionalizado, de fórmula V ou VI

nas quais os radicais 5 R representa um grupo aeetiloxi ou trifluo^aoetamido» 6 · * R° representa um átomo de hidrogénio t um grupo aeetiloni» tri- fluoraoetilosi ®u p-aiirobena©Lloxij © Y representa um grupo as©tilosi9 p-nitrobeaaoiloxi ou um clore to» na presença de um catalisador tal com© «a éster trial-quilsilílico com 1 a % átomos d© carbono ©m cada parte alqut lo de um ácido trifluormetanosulfónic©» ou o sal d© prata do ácido triíluorraetanosulfonico5 obtendo—se ura derivado de 7“*

—0—glicosil— p -rodoraicinona» @ ®m seguida s© dissociar hidro, liticamente em meio alcalino o grupo d® bloqueio a©ilos formando—se ura composto de fórmula VII

representa um grup© alquilo com 1 a h átomos de carbono,

K R representa um grupo hidroxi ou amino © 6 9 r R° representa uta átomo d© hidrogénio ou © grup© hidroxi 9 d) se fazer reagir9 d© modo conhecido por si» um composto contendo um grup© amino—açúcar» d© fórmula VII» ©ventualmente nas condiçSes de usaa alquilaçã®» com um halogenoacetonitrilo» ou nas condiçSes d© uma alquilaçS© redutiva com um aldeí do cora 1 a h átomos de carbono ou ©ora diglicolaldeído» na presença de ura ciaaoborohidret© alcalino$ ©bt©nd©-se um outro composto de formula VII n@ qual os radicais sós

R1 representa iam grupo alquilo eom 1 a h átomos <^Q car^oao 5 R representa um grup© ©iam©m©tilaraiía®9 ua gnsp© i2ialquiiaaii.no com 1 a átomos de ©arfeon© em cada part© &lquix0> ©u um grupo 4-morf o 1 inll© , © representa um atoas© d© hidrogénio ©sa ima gnap® feidroxi * A invenção ref©re-oc ainda a composições farma— eeuticas que contem usa antraeieliaeglieésid© de formula I* ©u a um seu sal farma©©ntAcameste aceitável, ©©ajuataaente com um diluente ou substância de suporte farajaeeutioamemte aceitável. Estas composições contêm uma quantidade terapeutâeamente eficaz do antraciclinoglico sido ©u de uss seu sal. A invenção refere-se também ao processo para a utiliaaça© d® antra©l@iin©giieós±do de formula I, ou dos seus sais, mo tratamento de determinados tumores de mamíferos por administração ã® uma quantidade tera-peuticamente eficaz a um pacientoe  determinação da eficácia eitoestática dos compostos aqui descritos foi realizada iat vitr© ®m células de leu eémia L1210 do rato, ©u ia viv© em leueémia L12lOy melanoma Bló e adenocarcinoma pulmonar d© LswiSo A tonicidade aguda dos compostos foi determinada ©m ratos E3MRXe Os métodos, bem como os resultados destas investigações, ©stã© descritos na parto experimental.

Exemplos

Nos exemplos seguintes descreve-s© mais p®yia©2a©rissdam©nt© a presente invenção, sem contudo a limitar aos ai©sebos.

Preparação -rodomle inona. s 7.10-bis—0—(trimetilsilil)= B -rodomicinona (composto,.!.),. A usa solução de 1000 mg (2,59 nnaol©8) β —ro-domicinona em 10 ml d© piridina e 20 ml d© dicloromctano adicio naram—se gota a gota, mediante agitação, a 0° Cf 10 (79*0

mmoles) d© trimetilei®rosilano, © prosseguiu-s© depois a agitação da mistura reaetiva à temperatura ambiente durante 1 b. A ^ 7 * KJ^S£51S3®*S®M®aiMa( mistura reaetiva foi tomada ®ia diclorometazao e foi ©sstraíds. com água geladas a fas© orgânica foi soca com sulfato d© sodio e evaporada. 0 resíduo foi seco era vácuo (0,1 Torr) a 50 C. 0 produto bruto foi purificado por cromafcografia ®m coluna através de silica-gel usando-so como ©Xuent© diclor©metano. Rendimento d© composto d© títulog 1130 mg» pf. 185-186° C. (Decomposição). 0 composto d© título foi caracterizado por analise de ^H-íiMR, MS, beta c©ffi© análise elementar. 1H-NMR (400 MBsb, CBCl^, delta (ppa))s 13»75 », 12,90 B e 1?24 S (PhOH), 7,92 dd (H—l), 7,72 t (H-2), 7,33 dd (H-3). 5,3¾ t» (H-7), 2,12 e 1,97 m (B-8a), 4,88 s (H-iO), 2,68 ia (H-13 a,b), 1,07 t (H-l4), 0,25 e (MeSi) 7.10—'bis-Q-C trimatilailil)—4—Q-metil- 1%-rodoralcinona (Compoa*»

*l£L

Uma mistura d© 1,13 S (2,13 railimolea) do cosiposi to 1, 20 ml de diclorometano, 100 ml d© acetona, 20 g (l45 mili moles) d© carbonato de potássio © 50 ml (800 miliraoles) d© iode to de metilo foram agitados á temperatura ambiente durante 12 horas» A mistura reactiva foi ©vaporada ©m vácu® Q © resíduo, depois de tomado era didororaetano foi lavado com água gelada e seguidamente com áçido clorídrico 1®, A fase orgânica foi seca com sulfate de sodi©. 0 resíduo obtid© peia evaporação do dissolvente foi purificado croraatograficamente em coluna com sílica —gel utilizando-se diclorometano como ©luente.

Rendimento do composto d© título? 490 mg. Pont© d© fusão: 202°C (decomposição). 0 composto de título foi caracterizado por análise *Ή—NMR, MS, bem como análise elementar. *Ή—HMR (400 MHz, CDCl^, delta (ppm))s 13,92 s © 13,55 3 (PHOH), 8.05 dd (H—l), 7,77 t (H—2), 7,3® dd (H-3), 5,35 bs (H-7), 2,15 dd (H-8a), 1,98 dd (H-8b), 4,8? s (H-IO), 1,68 m (H-13a, b), 1.05 t (H-14), 4,08 s (OHe), 0,25 s (SiMe), 4,50 s (9-OH). 4-0-saetil- g-rodomioinona. (composto 3)

Uma solução d© 490 (0,9 milim©l©s) do compos to 2 dissolvido ©m 50 ml d© diclorometano e 50 ml de metanol, S s

foi misturada a 0° 0 com 10 ml d© áeid© clorídrico 09SM © agitou-se 13 minutos a 0° Ge A soluçã© reactiva foi misturada com 500 ml de dielorometan© o foi extraída com 100 sal d© água gelada· A fase orgânica foi seca coh sulfato d© sodi© © ©vaporada em vácuo· 0 resíduo cristalizou eoaa dielorometan©/éter· Rendimento do composto d© títulos 346 (9&fa) Pont© d® fusão? l4l° C (decomposloSes) - + 73° (©^0,2 @® clorof©rmio/me tanol 9sl) 1H-NMR (400 MHz, CRCl^, delta (ppm))s 13,38 s (6-0H), 13,86 a (11—OH), 8,02 dd (H-l, j(l,2) b 8,0 Hb, J(l,3) « 1 Hz), 7,90 t (2-íl), 7tk0 úú (H-3* J(2®3) » ®,5 Hs, J(l#3) * 1 Hz), 5,25 bs (H-7), 2,15 ddd (H-8e, J(8a98e) * 14,0 Hz, j(7,8e) = 5 Hz, J(8e,10) s 2 Hz), 2,21 dd (H-8a, J(8a, 8e) * 14 Hz, J(7*8a) a = 1 Hz), 4,88 d (H-10, J(l0,10-0H) * I Hg), 1,77 « (H-13a, J(13a,13b) = 14,2 Hz, J(l3a,l%) e 7 3z), 1,87 ei (H-13b, J(l3a, 13b) e 14,2 Hz, J(l3b,l4 = 7 Hz), 1,12 t (B-l4, J(l3,l4) * 7,0 Hz), 3,50 d (7-OH, Ja 3,0 Hz), 3,47 s (9-OH), 2,66 d (10-0H, J = 4 Hz), 4,10 s (4-OMe) I>:ò (i6o° c)s m/z ($) * 400 (8,M+), 382 (100), 3^4 (35), 328 (98), 326 (8l), 325 (53), 311 (52), 310 (40), 297 (23)

Baemrolo 2

Preparação de 10-0-acil-4-0-alquil- P-rodomicinonas 4-0~metil-7.9-0»ferailboroiail^ p -rodomicinona ( composto 4) 800 mg (2 milimoles) d© composto 3, 4 g do crivo molecular 4A, 732 mg d© ácido feailfeoronic© © 1,6 ml de ácido acético foram postos em suspensão ©sa 70 ml do tolueno anidro9 seguidamente eliminou—s© por destilação um torço do dissolvente e adicionaram-se novamente 1,6 ml d© ácido acético· A mistura reactiva foi mantida durante cerca d© 50 à a 87° C e eontrolou--se a evolução da reacçã® por eromatografia ©m ©amada delgada (tolueno/metanol/ácido acético lOslsl)· A mistura reactiva foi filtrada à temperatura ambiente para separação dos solidos © a fas© orgânica foi extraída com solução diluída do hidrogenocarbonat© de sódio © se— . guidamente cora agua, © secou—s© com sulfato d© sodi©· Depois da 9

evaporação do dissolvent© © resíduo foi preoipitad© ©® cloro— fórmio/^er d© p©trólo©„ 0 produto bruto resultante foi alada pg, rificado cromatografisaaent© era eoluaa através do sflica-S©! (eluente: toluoao/metanol/áeàâo acetie© 10 s 1 s 1) o

Rendimento: 6Uo rag, pfes 2 30® C £ °LJ-q s + (©SQ»2 @sa olo- rofórmio ) <> hl~wm (300 HHs, CDCl^, delta (ppm)): 7,79 d (H-l, J(l#2) * 8 Hz), 7.58 t (H-2, J(l,2) b J(2,3) - 8 Ha), 7,28 â (B-3, J(ã»3> 8), 5#6l t (H-7), 2,24 dd (B-8a, J(8,8) 0 14 Hz, J(7»8) s * 2,5 Hz), 2,10 dd (H-8b, J(8,8) * 1¾ Hz, J(8,10) « 2,3 Hz), 2,10 dd (H-8b, j(8,8) a 14 Hz, J(8, 10) a 2,3 Hz), 2,07 » (H“ -13a, J(13, 13) « 12 Hz, J(l3, 14) a 7,3 Ha), 1,78 m (H-131», J(l3, 13) = 12 Hz, J(13, 14) a 795 Hz), 1,1? t (H-l4, J(13S 14) a 7,5 Hz), 13,62 s © 13*23 s (phOH), 8,16 m9 7,17 m © 7,21 m (PbB), 3,97 s (OMe)· 4—0—metil—7«9—0—fenilboronil—10—O—triflnoracetil— B °ro do mi e ino-na (composto 5) 300 mg (6i7 sumole) d® composto 4 foram dissolvidos ora 20 sal d© diolorometaao anidro ©, a 0Θ C, misturaram—se coia 1,7 Eli (20 equivalentes) âo amidrido do ácido trifluoraeé— tico dissolvidos era 10 ml de diclorometan© anidro« Mediante agi tação adicionaram-se 0?1 ml de tri©t±lam±mae A© fim de 18 h da agitação a 4° C (controle por placas de cromat®grafia em ©amada delgada ©ora tolueno/raetanol/ácld© acético 10:1:0,1) a mistura reaotiva foi ©vaporada ©m vácuo @ foi destilada por 2 vezes cota toluono, 0 resíduo foi precipitado com clorofórmio © éter do po troloo. 0 composto d© título foi utilizado, sem qualquer outra purificação, no passo seguinte»

Rendimento : 360 mg, eroraatograma d© ©amada delgada: Rf*0,72 em tolueno/motanol/áeido acético 10sls0,lo 4-0»raetil-10-Q-trifluoraeétil- B-rodomicinona (composto 6) 3éQ mg d© produt® brut© d© composto 5 foram dissolvidos era 10 ml d© diclorometaa® anidr® ® misturados ©om 3 ml de 2-motll—poatano-2,4—diole Após 18 b de agitação à temperatura ambiento a mistura reaotiva foi diluída com 10 ml d© dicloro 10 s «swwgaspjSiS;

metano © foi lavada 3 vezes com ácido clorídrico Ο,ΟΙΜο A fasa orgânica foi seca coe sulfato de sodi© e ©vaporada em vaeuo* 0 resíduo foi purificado cromatograficament© ρ®ϊ“ m®0· coluna de sx lica-gel com cloro forjai©/acetosa/ áeid© acltie©/água/trietllami-na 95s5ílsO,25sO»l como eluent©e Rendimento $ 167 mg ^H-NMR (400 MHz, CDCl^, dolta (ppra))g 7,94 <dd (H-l, J(l93) s *7,5 Hz, j(l,3) a 1,5 Ha), 7,78 t (H-2), 7,3© àá (H-3, J(2,3) - * 8 Hz, J(l,3) = 1,5 Hz), 5,31 dd (B-7, J(7,®a) * 4,7 Hz, J(7»8 b) a 1,5 Hz), 2,00 dd (H-8a, J(8 a, Sb) s 15 Hz, j(7,S a) “ = 4,7 Hz), 2,37 ddd (B»8b, J(8a, 8b) a 15 Hs, J(8b, 10) * 1,5 Hz), 5,29 d (H-10, J(3b, 10) a 1,5 Hz), 1,71 » (B-I3a, J(l3,13) * 13,8 Hz, J(l3, 14) a 7,4 Hz), 1,53 (B-13b, J(l3,13) * 13,8 Hz, J(13,14) * 7,4 Hz), 1,09 t (H-14, J(l3,l4) * 7,4 Hz), 13,69 s e 13,03 s (PhOH), 4,08 s (ΜθΟ)o g^emplo 3

Preparação d® derivados de 7-0—glicosil® 4-0-me til-=7”»0“ (4* «=Q*=»p<=®itr©fe©mz©ii~3 * -M-trifluoracetiX-L-dauno— saminil )-10-0-° triflaeracotil- f> -rodomàeinoaar ( composto ui_ 1,67 g (3,36 amole) d© compost® 6, 3,64 g (6,72 mmole) de 1,4-di—0-p—nitrohenzoil-S^N—trifluoracetil-O? , ^ —L-—daunosamina e 5 S d© crivo molecular 4& foram postos em suspen sSo em 300 ml de ucna. mistura d© dissolventes formada por diclo— r 01a et ano e acetona 10 sl, ©m completa ausência d© Humidade β A mistura reactiva depois d© arrefecida a -jf©° C foi misturada com 3 ml de ester trimetilsilílieo do ácido trifluormetanosul-fonico e agitou—se continuamente 4 Sa a 44° O» A evolução da roacçã© foi controlada cromatograficament© ©eb camada delgada (eluent©: diclorometano/acetosa 2081, composto d© títulos Sfa *0,74).  mistura reactiva foi neutralizada com tr±©til— amina (pH-7) θ filtrou-s®0 Depois da evaporação da solução resultante o resíduo foi purificado por cromatografia ©m coluna (sílica—gel9 eluente diclorometano/acetona 20gl)o 11 s

J(l3,l4) a 7,5 Hz), 13,8¾ s e 13,22 s (PhOH)t 4,10 b (MgO), 5»Ó9 s (li-l*), 2,08 rn (H-2»a), 2,11 m (H~2»e), 4,44 m (H-3S J(3*»4») « 2,5 Hz), 5,49 d (h-4«), 4,45 q (H-5S J(5'6·) = B 6*5 Hz), 1,27 d (h-6·, j(5*6·) = 6,5 Hz), 6,29 d (MH, J(MH, 3·) * 7 Ha) 8,34 - 8,28 a (p-Mitrobenzoil) 7-0-(4*-desoxi«38 -N—trifluoracetil- -L-dauno saminil) -4-Q-m©— til-10-Q-trifluoracetil- B-rodomicinona (composto 8)

Partindo—s© d© 376 mg (l mmoXe) d© 4—desoxi—1—0— -p-nitrobenz©±X-3-M-tri£luorac©til- 0{ , p -L-daunosamina e 496 mg (l mmol©) de 4-O-metil-lO-O-trifluoracetil·» P-rodomicinona (com posto 6) preparou-s© o composto de titulo por analogia com a preparação do composto J0

Rendimento do composto d© títulos 537 ®g(64$) 4-0-raet±l-7-0-( 4* -Q-p-nitrobenzoil-311 -N-trif luoracetil-Of—L— -acosaminil)-10-0-trifluoracetll° g-rodomicinona (composto 9) 260 mg (0,524 mraole) do composto 6 foram dissolvidos em 2q ml de dielorometano anidro ® misturados com 300 mg de crivo molecular e 294 mg (0,786 mmole) de l95“anldro-4-0—p-—nitrobenzoil-2,3,6-trid®sos±~3—trifluoracetamido—L-arabino-—hexa-l-enitee Adicionaram-se depois 34,9 mg (0,157 mmol©) d© trifluormetanosulfonato de trimetilsililo à mistura reactiva, previamento arrefecida a -40° C, sob atmosfera de um gás d© pro tecção (argoa). Depois do aquecimento até -20° C agitou-se ainda durante 4 h © seguidament© neutralisou-se com trietilaminae Δ mistura reactiva foi filtrada e evaporada em vácuo* 0 produto bruto foi purificado cromatografieamente ea coluna (sílica-gel, 12 s * V;

eluent® δ diclororaetano/acetona 20sl)o Rendimento s 392 mg (86$ referido ao aglicoao) 4—0—m©til—7—Q— ( 3 * —M<=> trif Xuorac e til«=> c( <=L—dana© saminiX )«· p «=rodo—

200 iag (0923 mmolo) d© composto 7 foram dissolvidos ©m 5 sal de aia mis tiara d© dissolventos formada por meta.— nol/clorofórmio 3s29 m±©turando«s© depois mediante agitação cora 5 ml d© soda cáustica aquosa OtlM# © ©m seguida cora metanol ate à separação das fase®. Passados 30 raln« n©utralis©u-se cora 5 ml d© ácido clorídrico aquoso 0S1 Μ © ©v&por@u-s© ©ra váeio« 0 produto bruto foi purificado cromat©graficamente ©ra coluna (sili-ca-gel, eluent®s cloroformio/acetona/ácido ac©tio©/água/tri©til amina 93*7*l*Oe25s09l).

Rendimento do ©orapost© d© t£ tolos 118 rag (82$) 7-0-( 6f-L-daunosaiminil)»^o~ia®tll-g-godoifeioinoBa ( coamos to ll) 250 mg (092@7 ramol©) do composto 7 foram dissolvidos em 5 ml d© metanol/clorofórmio 3?Z9 misturados com 5 ®1 de soda caustica aquosa IN © ©n seguida com raatanol ate a supressão das fases» Após 4 h. de tempo d© r©aeção a mistura foi neutralizada com 5 ml de ácid© clorídrico aquoso 1W © concentra da em vácuo» 0 produto brut© foi ainda purificado cromatografi— camente ©m coluna (siXica—geXsclorofórmio/acetona/aeid© ac©ti— co/água/trietilamina 90s9sl8O925sO9l)»

Rendimento do composto d© títulos 152 ©g (72$) MS—FAB M+E (m/s=530) 7—0—(4*—desoaci— d—1<—daunosaminil)—^i—O—raetil- $ — rodonaicinona (composto 12) --------

Partindo-se de 500 mg (09?0 naol) do composto 8 preparou—se o composto d® título d© aoord® cora o processo de preparação do composto 11«

Rendimentos 232 mg (64$) 7-0-(0/ -L-acosaminil)-4-0-m>e1

Partindo-s© d® 250 mg (09287 nmaol) do composto 9 preparou-se o composto d® título d® acordo com o processo para o 13 * a preparação do composto 11 Rendimento s 150 mg (70#)o

Exemplo k

SOffl"

Modificação de 7-0—glieo stí 1 3*—amir»»—k-Q-matil-7-Q-( oi -L-rodo sami: posto 1¾) 200 mg (09378 mmol) do composto 11 foram dissolvidos ©m 20 ral de metanol e misturados com 0,62 ml d© solução a 37# de formaldeído (20 equivalentes) mediante agitação, a temperatura ambiente» Depois da adição d© 1½ mg (2,27 saraol) de eianoborobidreto de sódio a mistura reaetiva foi agitada ainda durante 3 beras © depois, após controle crotaatográfic© em camada delgada (©luente % clorofórmio/metanol/acido ac© tic©/água/ /trietilamiaa 6828ls0,6g0905) foi ©vaporada em vácta©» 0 produto bruto resultante foi erwaatografad© numa coluna d© sílica-gel para purificação»

Rendimento s 155 mg (3’4#) » 4—O—met 38 =(4t3=-ímorfolii2il) =>2 · s3® , 6'-trxdesasi- e(-L·—Xixo-

st® 15) 200 mg (0,37S mmol©) do composto 11 foram dissolvidos em 20 ml d© metanol/clorofórmio 10ãl © misturados com 77*2 sag (0*75^ mmol©) d© 2,25 —osi—bis—acetaldeido qu© timba sido recentemoaie preparado a partir d© 1,4-anidroeritritol por oxidação com periodato» Após a adição d© 2k mg (0*378 miaole) de cianoborobidreto d© sódio a mistura rsaetiva foi agitada 2 h à temperatura ambiente e seguidamente concentrada ©aa vácuo» 0 resíduo foi purificado cromatograficament© em coluna (sílica—gel, ©luente % clorofórmio/acetona/áeid® acóti©o/água/tr±©tilasaàna 9059«lsOt25sO,l).

Rendimentos l6h mg (73#)o 7-0-(3* -N— cianometil- ¢( -L-dauno3aminil)=4-0-met±l= p -rodomicinol aa (composto 16) 200 mg (0,378 mmol©) do composto 11 foram dissol vidos ©m 20 ml de dimetilforraamida a misturados ©om 115 mg (l|134 nunole s 3 equivalentes) d© tri®tllaaina © 631 mg (3*78 8 14 *

mmole) de iodoacetonitrilo* Depois de 5 b de agitação a tempera tura ambiente adicionaram—s© mais 230 mg (2g26S maiole) de trie— tilamina. Â mistura reactiva foi agitada ainda 1% h. e em seguida evaporada» A purificação cromat®gráfica ©ra coluna foi realizada através de sílica—gel com o eluentes clorofórmio/acetona/ /ácido aeétieo/água/trietilamina 90s9sl8094sO9le Rendimento s 137 {&*$)

Exemplo 5

Determinação da aetividad© citoestátioa A determinação daeefieácia citoestática dos compostos aqui descritos foi realizada ©ora células d® leucemia L1210 do rato* Em particular utilizaram—ss® ©s seguintes sistemas de ensaios a) formação de colónias de células de leucemia L1210 em agar mole

Est© método serviu para eoiaprovar a influencia da substância ensaiada sobre o comportamento de crescimento das células através de várias gerações (para um p@r£od© d© ciclo ce lular de 10 a 12 h observaram-se ao longo do período d© ensaio de 7 dias cerca de 1% gerações sucessivas. A© substâncias com eficácia citoestática causam neste ensaie uma redução d© número de colonias a observars rela tivamente a um controle não traiad©* Em particular realizou-se o ensaio do seguinte modos 500 células de leucemia por placa foram incubadas com diversas concentrações da substância ensaiada durante uma hora a 37° C*

Seguidament© as células f©ra® lavadas 2 vezes com o mel© McCoySA e em seguida foram colocadas em placas de Pe trit depois da adiçã© d® Q93$ d® agar0 Os oontroles foram incubados apenas cota © meio fresco. Em vez da incubação d© uma hora,: em muitos cases mistararam®s© diversa© concentrações © substâncias de ensaio na camada de agar referida para dest® raod® se conseguir uma exposição contínua das células ao longo de todo o período de incubação* Depois da solidificação d® agar as placas . foram incubadas era estufa durante 7 dias a 37° C (5$ em volume - 15

d© (Χ>2s 95$ de humidade relativa do ar) o Seguidamente contou®·se o número de colónias formadas coai uai diâmetro superior a 6o p. Os resultados foram indicados como número d© colónias nas placas d© agar tratadass eia percentagem dos controles nã© tratadosj, A partir das curvas d© dose—acçã© assim obtidas determinaram—se os valeres IC_A como uma medida para a eficácia da substância. Foram determinados os resultados para os compostos aqui descri® tos9 em comparação com a adriamicina. b) Determinação da toxicidade aguda

Para a determinação da toxicidade aguda injeeta-ram-se, por via intraperitoneal0 ratos NMRI n© dia O com diversas doses da substância de ensaio dissolvida em 095 ml de uma solução a 5$ de glucose. Os grupos de controle receberam apenas 0,5 ml da solução de glucose a 5$o Por cada concentração da subs tancia de ensaio utilisaram-ss 5 ratos. Mo dia 1& determinou—se o número dos ratos sobreviventes © a partir deste resultado determinaram-se o© valor©© LD5, LB50 e LD95s de acordo com o meto do de Lichtfield Uilcoxon. Determinou-se a toxicidade LD50 (mg/kg) dos compostos aqui descritos era comparação com a adria-micina. c) Eficácia in vivo da rodomicina contra a leucemia L1210 d© rato

Metodologia g

Retirou—s© líquido d® ase±t©e era condiçoss ©ste— reis, de ratos DBA2 (femaas,, 18—20 g) 7 dia© depois da implantação. Á ascite foi lavada 3 veaas com PBSp contada ® ajustada »9 6 a um número de células de 10 ea 0,2 ml de PBS.

Injee taras®-s@ depois^ por via intraperitoneal, 10 células postas ©m suspensão ©m Q92 ml d© PBS* ©m ratos DBF1 (fêmeas0 18—20 g). Utilizaram—se 6 animais por grupo para cada concentração da substância3 ou como controle.

Determinação da eficácia anti—tuiaóricaa a) Os animais foram pesados nos dias 1 © 5 depois da injecção da substância de ensaio. Uma perda de peso de raais do que 20$ 16

Claims (1)

1. no dia 5 foi tomada como indicador d© uma aeção tóxica da substância. b) No termo da experiência (morte de todos o@ animais ou com animais sobreviventes no dia óo) determinaram-se os tempos médios d© sobrevivência dos animais em cada um dos grupos, desde que no dia 5 da experiência estivessem ainda vives pelo menos 65$ dos animais. 0 tempo médio d© sobrevivência foi determinado exclusivamente para os animais mortos no decurso da experiência. Os sobreviventes a longo praso (LTS) não foram considerados para este cálculo ® foram enumerados separadamente. A partir do tempo medi© de sobrevivência (MST^) dos grupos tratados, bem como dos grupos de controle (MST ) de-terrainou-se a eficácia anti-tumórica (τ/c) para cada uma das concentrações da substância, em percentagem dos controles não tratados, de forma correspondente à seguinte fórmula? MSTT T/C# - X 100 MST c Os valores T/C maiores d© que 125$ foram tomados como indicador d© uma eficácia anti-tumóriea significativa da substância ensaiada. Determinou-se a dose correspondente a© maior efeito antitumórleo (dose óptima) bera corao, era eada caso, um ponto de dos© superior e inferior a ©sta dose® Os animais que ainda sobreviviam ao fim dos 60 dias da experiência foram contados soparadament© como sobreviventes a loago praao® reivindicações - 10 - Processo para a preparação d© compostos interme- e 17 I diários d© 4«=0=alquil*= p -rodomicinona de fórmula I 0 HO OR2

   RJ'0 O HO OR" St OR3 na qual ®s radicais tem os seguintes significados? R“ representa um grupo alquilo com 1 a h átomos de carbono, R representa um átomo de hidrogénioD ura grupo de bloqueio trialquilsililo com 1 a k átomos d© carbono ©m cada part© alquilo, um grupo acetiio, monohalogenoacetil©, dihalogeno-acetilo ou triíialogenoacetilo em que halogeni© significa fluor ou cloro, um grupo benzoilo ou p=nitrobenzoilo, rt RJ representa um átomo de hidrogénio, R3 e R* em conjunto representam um radical ácido fenilborónie© PhBs, representa ura átomo d© hidrogénio, um grupo de bloquei© tri— alquilsilil© com 1 a k átomos de carbono ©m cada part© alquilo ou um radical glicosilo de fórmula II

   II na qual R3 representa um grupo hidroxi, um grupo acetilosi, um grup© arnino, um grupo trifluoraeetamido, um grup© dialquilamia© eom 1 a k átomos d© carbono ©m cada part© alquilo, um grupo s 18 3

   4-morfolinil© ©u ura grupo claBometilaraino» e representa um átosão de hidrogénio» um grupo hidroxi» um gru- po acetiloxi, trifXuoracetil ou p—nitrobenzoilcxi» caracterlzado pelo facto d© s© faeer reagir p-rodosaicinona d© fórmula X na qual os radicais R » R » RJ © R representam um ato mo de hidrogénio com cloreto d© triaXquiXsiliX® com X a % ato-mos de carbono ©m ©ada parte alquilo» na presença de uma base como piridina © d© um dissolvente orgânico como diclorometano» a uma temperatura compreendida entre -20° C © +25° C» obtendo-—se 7,10-bis-0-trialqu±lsilil-β=rodomicinona com 1 a b átomos de carbono em cada part® alquilo» ®m seguida alquilar-se o composto resultante com brometo ou iodeto d© alquilo com 1 a k átomos de carbono na presença de um carbonato alcalino» obtendo—se uma ií-o-aXquil-7» 10-bi@-0(trialquilsilil)- p-r©doai®inona com 1 a k átomos d© carbono em cada grupo alquilo» © seguidamente dissociarem-se os grupos d© bloqueio tsiaXquilsiliX© hidroXitiea» mente em meio ácido» formando-se um composto de 4-0—alquil—^-—rodomicinona com 1 a 4 átomos de carbono oi cada parte alquilo» de fórmula XXX

   1 * na qual R representa um grup® alquilo som 1 a 4 átomos d® carbono· » 2^ e» Pr@©oss© para a preparaçií® do eoiapostos interme— diários de lo-o-aciX-4-Q-aXquil-β-rodomicinona de fórmula I» ca racterizado pelo facto de s© esterificar selectivamente no gnço hidroxi em posição 7 © 9e um composto de fórmula XXX» d© forma conhecida por si» com ácido f©nilborónic© na presença de um ácido» como ácido p—toluenosulfónic© ou ácido acético» e d® um dis— a 19 s f a

   solvente ©rgânic® anidr© cosa t©lu©n®0 ©m seguida a© aoilar a© grupo bidroxi em posigã© 10 o ©oEapost® ©btid© sou uni anidro ou cloreto dos ácidos trifluoroacetic®, acetic®, feenzoiso ®u p— —nitrobanzoieot na presença, d© uma bas© com® trietilaraina ou piridina, e seguidamente se dissociar © grap© d© bloquei© fenil-boronilo hidroliticamente em meio ácld®, ©u por meio d© um diol como 2—metil—pentan©—29^=>diol, formando=· s © um composto d© formula IV η 0 HO 0R

   IV, na R1 R2 qual representa um grupo alquilo com 1 a h átomos de carbono © representa um grupo de bloqueio aeilo que deriva dos ácidos acético, trifluoracltico, ber. aoico ou p-nitrobenzoico· Processo para a preparagS© d® 10—0-alquiX-7°0“ -glicosil- β-rodomicinona de formula Ie earacterisado pel® facto de s© fazer reagir, da forma conhecida por si, o composto d© for mula IV com um deeoKiaçúear funcionalizad® de formulas V ou VI

   na qual os radicais

   representa um grup® acetilossi ou trifluoraeetamido, representa um átomo de Mdrogémi®, usa grep® aeetiloxi, tri- S20§

   fluoracetiloxi ou p-nitrobenzoiloxi, © Y representa um grupo acetilosi, p-nitrobenzoiloxi ou um cloreto 9 na presença d© ura catalisador como ura estar trialquil-sililico com 1 a k átomos de carbono era cada part© alquilo do ácido trifluormetanosulfonicop ou o sal d© prata do ácido trifluormetanosulfónico, obtendo-se ura derivado de 7=O“ -glicosil» -rodomicinoaa, e ®m seguida se dissociar o grupo de bloqueio acilo hidroliticaraent© em meio alcalino, formando- se um composto de formula VII 0 HO OH

   na qual os radicais, R^1 representa ura grupo alquilo cora 1 a 4 átoraos de carbono, ς R representa um grupo hidrosi ou amino e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidrosie » - Processo para a preparação d© utn composto de 7-—O-glicosilo modificado de formula I, caracceriaado pelo facto d® se fazer reagir um composto contendo um amino—açúcar, d© formula VII, de forma conhecida jor si, eventualmente nas condições da alquilaçao com um halogenoacetonitrilo, cu da alquilação re-dutiva com aldeídos com 1 a h átomos de carbono ou diglicolaldeí do, na presença de um cianoborohidret© alcalino, obtendo-s© um outro composto d© fórmula VII no qual ©s radicais s 21 s »e b »e b R* representa um grupo 5 R representa um grupo com 1 a k átomos d© 4-marfolinilo» e alquilo com la k átomos d© carbono cianosetilaraino9 um grupo dialquilamino carfeoa© ©m cada parto alquilo ou um grupa Rô representa um átomo d© hidrogénio ©u usa grupo bidrosi, A roqueremt© reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 1 de Julho d© 198®5 sob o ns» P 3® 22 220.5» Lisboap 29 d© Junho de 1989

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