PT882138E

PT882138E - Preparacao estereosselectiva de derivados succinicos substituidos em 2

Info

Publication number: PT882138E
Application number: PT96941546T
Authority: PT
Inventors: Murray Douglas Bailey
Original assignee: Boehringer Ingelheim Ca Ltd
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-17
Publication date: 2000-10-31
Also published as: JP4030583B2; MX9805061A; DK0882138T3; JP2000502259A; GR3034465T3; EP0882138B1; WO1997023641A1; US5808085A; ATE194388T1; CA2165996A1; EP0882138A1; ES2147944T3; DE69609202T2; CA2165996C; DE69609202D1

Description

-Λ

Z I2>s Γ u,

DESCRIÇÃO

"PREPARAÇÃO ESTEREOSSELECTIVA DE DERIVADOS SUCCÍNICOS SUBSTITUÍDOS EM 2"

Domínio da invenção A presente invenção refere-se a compostos inibidores da renina. Mais especificamente, a presente invenção refere-se a um processo para a preparação de compostos com uma elevada pureza enantiomérica que são intermediários úteis na síntese de compostos inibidores da renina e a compostos com uma elevada pureza enantiomérica preparados por esse processo.

Antecedentes da invenção

Em anos recentes, têm sido objecto de um grande interesse por parte da investigação compostos que inibem a enzima renina, uma protease de aspartilo que cinde o agiotensinogénio dando origem a AI, e tem sido feito um grande esforço para desenvolver inibidores de renina que imitem o angio-tensinogénio, o substrato natural da renina. Muito deste esforço tem sido focado no desenvolvimento de substratos análogos que incorporem em si um equivalente mimético não cindível (isto é, um análogo do estado de transição) do local de cisão da renina (isto é, Leu-Val) do angiotensinogénio humano. Como resultado, foram identificados no laboratório vários inibidores potentes da renina e foi agora demonstrada na clínica a capacidade dos inibidores da renina para baixarem a pressão sanguínea e para reduzirem a actividade de renina do plasma (para uma revisão recente sobre os inibidores da renina, ver W. J. Greenlee, Medicai Research Reviews 1990, 10, 173). Verificou-se serem de interesse particular como compostos que inibem a renina os compostos da fórmula I: 1 1.

em que Rla é A-NRJ, em que A é R4R5NC (0) CH2 em que, por exemplo, R4 é hidrogénio ou alquilo e R5 é hidrogénio, alquilo ou um alquilo substituído tal como 2-(2-piridinil)-etilo, ou R4 e R5 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam uma pirrolidina, piperidina, morfolina ou tiomorfolina; R3 é, por exemplo, benzilo, alquilo ou um alquilo substituído tal como ciclo-hexilmetilo; R2a é, por exemplo, alquilo, ciclo-alquilo, lH-imidazol-4-ilo, 4-tiazolilo ou 2-amino-4-tiazolilo; e Q é um análogo de estado de transição de substrato de renina, por exemplo, 1(5) -(2-metilpropil)-2(5)-hidroxi-5-metil- -hexilamina, 1 (5) - (ciclo-hexilmetil)-2(5)-hidroxi-5-metil- -hexilamina, 1 (5) -((4-metoxilfenil)metil)-2(5)-hidroxi-5-metil--hexilamina, 1(5)-(ciclo-hexilmetil)-2(5)-hidroxi-4-metil- pentilamina, 1(5)-(ciclo-hexilmetil)-2(S)-hidroxi-3-ciclo- propilpropilamina, 1 (5) - (2-metilpropil)-2(R),3(5)-di-hidroxi-5--metil-hexilamina, 1 (5) - (ciclo-hexilmetil)-2(R) ,3(5) -di- -hidroxi-5-metil-hexilamina, 1(5)—{(4-metoxifenil)metil)--2(R),3(5)-di-hidroxi-5-metil-hexilamina, 1(5)-(2-metilpropil)--2(R),3(5)-di-hidroxi-3-ciclopropilpropilamina, 1(5)-(ciclo--hexilmetil)-2(R),3(5)-di-hidroxi-3-ciclopropilpropilamina, 1(5)-(fenilmetil)-2(R),3(5)-di-hidroxi-3-ciclopropil-propilamina, 1(5)-((4-metoxifenil)metil)-2(R),3(5)-di-hidroxi--3-ciclopropilpropilamina, 1(5)-(ciclo-hexilmetil)-2(R)- -hidroxi-3-(1-metiletoxi)-3-oxopropilamina ou l(5)-(ciclo--hexilmetil)-2(5)-hidroxi-2-(1,5,5-trimetil-2-oxopirrolidina--3 (5)-il) etilamina; ou um seu sal de adição de ácido terapeuticamente aceitável. É de interesse fundamental um composto inibidor da renina da fórmula Ia: 2 1;

A porção central destes compostos inibidores da renina é um derivado quiral de succinoilo com uma configuração (R) . A síntese original dos compostos da fórmula I e Ia empregava intermediários de succinoilo derivados de uma síntese assimétrica que utilizava a química quiral auxiliar de Evans para introduzir o centro quiral com a configuração requerida (Lavallée et al., pedido de Patente Europeia EP 589445, publicado em 30 de Março de 1994). Esta metodologia emprega auxiliares quirais caros bem como várias fases criogénicas, o que torna este último procedimento difícil para as preparações em grande escala destes compostos. Por conseguinte, são necessários métodos eficazes e de baixo custo que sejam apropriados para um aumento de escala para a preparação de intermediários úteis para a preparação de compostos da fórmula I e Ia. A preparação de compostos com elevada pureza enantiomérica foi anteriormente relatada, por exemplo em: R.W. Dugger, pedido de patente PCT WO 95/04043, publicado em 9 de Fevereiro de 1995 D.A. Dickman et al., Patente US 5.275.950, concedida em 4 de Janeiro de 1995 P. Zaderenko et al., Tetrahedron: Asymmetry 1995, 6, 381 3

L. Blanco et al., Tetrahedron: Asynunetry 1993, 4, 783 H. Jendralla et al., SYNLETT 1993, 155 M. R. Leanna et al., Tetrahedron Letters 1993, 34, 4485 H. Mazdiyasni et al., Tetrahedron Letters 1993, 34, 435 L. Shao et al., J. CHEM. SOC. PERKIN TRANS. 1 1990, 1441 S.G. Cohen et al., J. Am. Chem. Soc. 1968, 90, 3495 O presente processo e os compostos preparados pelo presente processo podem facilmente distinguir-se da técnica anterior. Os compostos preparados pelo presente processo possuem uma estrutura química diferente dos da técnica anterior e podem ser utilizados como intermediários para a preparação de compostos inibidores da renina das fórmulas I e Ia.

Sumário da invenção

De acordo com a presente invenção, dá-se a conhecer um processo para a preparação de compostos inibidores de renina das fórmulas I e Ia bem como intermediários úteis para a preparação de compostos inibidores de renina das fórmulas I e

Ia.

Em particular, a presente invenção refere-se a um processo para a preparação de compostos com uma elevada pureza enantiomérica da fórmula II:

O (II) em que R~ é um alcoxilo inferior, alquilamina inferior, di (alquilo inferior) amina ou R1 é A-NR3, em que A é R4R°NC (0) 0¾ 4 ç Lz ^ em que, (a) R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R5 é hidrogénio, alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituído com cicloalquilo inferior, fenilo ou um anel heterociclico (em seguida designado por "Het") que é um anel pentagonal ou hexagonal não substituído, monossubstituído ou dissubstituído que contém um ou dois heteroátomos seleccionados do grupo constituído por N, 0 e S e em que cada substituinte é seleccionado independentemente do grupo constituído por alquilo inferior, alcoxilo inferior, halo, amina ou alquilamina inferior; ou (b) R4 é alquilo inferior e R5 é R6R'N-Alq, em que R° e R7 são cada um hidrogénio ou alquilo inferior e Alq é um radical alquilo divalente de cadeia linear ou ramificada que contém de um a seis átomos de carbono; ou (c) R4 é alquilo inferior e R° é alcoxilo inferior; ou (d) R4 e R5 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam uma pirrolidina, piperidina, 4-{(alcoxilo inferior)-alcoxilo inferior)}-1-piperidinilo, morfolina ou tio-morfolina; R3 é alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituído com cicloalquilo inferior, fenilo, 4-(alquilo inferior)fenilo, 4-(alcoxilo inferior)fenilo, 4-halofenilo, 3,4-metilenodioxi-fenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, ou Het, em que Het possui o significado anteriormente definido; e R2 é alquilo inferior, CC1=CH2, CBr=CH2, cicloalquilo inferior, 2-amino-4-tiazolilo, 2-(grupo protector de amina)amino-4--tiazolilo ou Het, em que Het possui o significado anteriormente definido, compreendendo o referido processo: (i) a hidrólise selectiva de um enantiómero de uma mistura racémica de um éster da fórmula III: 5

V Γ

em que R1 possui o significado anteriormente definido, R2 possui o significado anteriormente definido e B é um alquilo inferior, com uma quantidade eficaz de uma esterase seleccionada de Subtilisina Carlsberg ou α-quimotripsina, num meio reaccional que compreende H20 ou numa mistura de H20 e de um solvente orgânico inerte miscivel com H20, na presença de um hidróxido de um metal alcalino para manter ο ·ρΗ do meio entre 7,0 e 8,5, de modo a dar origem a uma mistura reaccional que contém compostos da fórmula II (sob a forma de um sal de um metal alcalino) e Illa:

e (ii) a separação a partir da mistura resultante da fase (i) do composto da fórmula II.

Num processo preferido para a preparação de compostos da fórmula II, o éster da fórmula II é seleccionado do grupo de compostos representado pela fórmula III em que R1 é alcoxilo inferior, alquilamina inferior, di(alquilo inferior)amina ou R1 é A-NR3, em que A é R4R5NC(0)CH2 em que R4 é metilo e R5 é metilo, 2-(2-piridinil)etilo ou 2-(3-piridinil)etilo; R3 é 1-etilpropilo, ciclopentilmetilo, ciclo-hexilmetilo, 1(S)- 6

-ciclo-hexiletilo, ciclo-heptilmetilo, fenilmetilo, 1(S)--feniletilo, (l-metilciclo-hexil)metilo; R2 é CC1=CH2, CBr=CH2, 2-amino-4-tiazolilo, 2-(grupo protector de amina)-amino-4--tiazolilo ou um anel heterocíclico pentagonal que contém um ou dois heteroátomos seleccionados do grupo constituído por N, 0 e S; e B é metilo ou etilo. De modo especialmente preferido, R1 é 1,1-dimetiletoxilo ou o radical monovalente: h3c

R2 é CC1=CH2, CBr=CH2 ou 2-amino-4-tiazolilo e B é metilo. 0 processo da presente invenção é de preferência levado a efeito a uma temperatura entre 20 e 55 °C, de modo especialmente preferido a uma temperatura entre 20 e 37 °C. 0 hidróxido de metal alcalino utilizado no presente processo é de preferência seleccionado de NaOH, KOH e LiOH e é adicionado à mistura reaccional numa quantidade suficiente para manter o pH da mistura reaccional a cerca de 7,0 a 8,5, de modo especialmente preferido de 7,0 a 8,0. O processo da presente invenção é levado a efeito em H20 ou numa mistura de H20 e 0 a 30 % (v/v) de um solvente orgânico inerte miscível com H20. O solvente orgânico inerte é de preferência seleccionado de acetona ou acetonitrilo. A presente invenção também se refere a compostos da fórmula II em que R- e R2 possuem os significados anteriormente definidos. Os compostos da fórmula II preparados pelo presente processo podem ser submetidos a transformações normais conforme dado a conhecer por Lavallée et al., pedido de Patente Europeia 7 ΕΡ 589445, publicado em 30 de Março de 1994, a fim de preparar compostos inibidores da renina da fórmula I e Ia.

Descrição pormenorizada da invenção

Geral

Com referência aos casos em que (R) ou (S) é utilizado para designar a configuração de um radical, p. ex. R2 do composto da fórmula I, a designação é feita no contexto do composto e não no contexto do radical apenas. O termo "halo" conforme utilizado na presente descrição significa um radical de halogénio seleccionado de bromo, cloro, flúor ou iodo. O termo "alquilo inferior" conforme utilizado na presente descrição, quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa radicais alquilo de cadeia linear que contêm um a quatro átomos de carbono e radicais alquilo de cadeia ramificada que contêm três a quatro átomos de carbono e inclui metilo, etilo, propilo, butilo, 1-metiletilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo e 1,1-dimetiletilo. 0 termo "alcoxilo inferior" conforme utilizado na presente descrição significa radicais alcoxilo de cadeia linear que contêm um a quatro átomos de carbono e radicais alcoxilo de cadeia ramificada que contêm três a quatro átomos de carbono e inclui metoxilo, etoxilo, propoxilo, 1-metiletoxilo, butoxilo e 1,1-dimetiletoxilo. O termo "cicloalquilo inferior" conforme utilizado na presente descrição, quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa radicais de hidrocarbonetos cíclicos saturados que contêm três a sete átomos de carbono e inclui ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e ciclo--heptilo. Γ

Lc. Ο termo "Het" conforme utilizado na presente descrição significa um radical monovalente derivado pela remoção do hidrogénio de um heterociclo pentagonal ou hexagonal que contém desde um até dois heteroátomos seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre. Opcionalmente, o heterociclo pode conter um ou dois substituintes; por exemplo, N-óxido, alquilo inferior, alcoxilo inferior, halo, amina ou alquilamina inferior. Os exemplos de heterociclos adequados e de heterociclos opcionalmente substituídos incluem pirrolidina, tetra-hidrofurano, tiazolidina, pirrolo, lfí-imidazolo, 1-metil-lH-imidazolo, pirazolo, furano, tiofeno, oxazolo, isoxazolo, tiazolo, 2-metiltiazolo, 2-aminotiazolo, 2-(metilamino)tiazolo, piperidina, 1-metilpiperidina, 1,4-dioxano, morfolina, piridina, N-óxido de piridina, pirimidina e 2,4-dimetil-pirimidina. 0 termo "amina" conforme utilizado na presente descrição significa um radical da fórmula -NH2. 0 termo "alquilamina inferior" conforme utilizado na presente descrição significa radicais de alquilamina que contêm um a seis átomos de carbono e inclui metilamina, propilamina, (1-metiletil)amina e (2-metilbutil)amina. 0 termo "di(alquilo inferior)amina" significa um radical amina que possui dois substituintes alquilo inferior cada um dos quais contém um a seis átomos de carbono e inclui dimetilamina, dietilamina, etilmetilamina e semelhantes. 0 termo "grupo protector de amina" conforme utilizado na presente descrição significa um grupo destinado a proteger um grupo amina ou o terminal N de um ácido aminado contra reacções indesejadas durante procedimentos de síntese. São descritos grupos protectores de amina habitualmente utilizados em livros de texto gerais da química dos peptídeos; por exemplo, "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", E. Gross et al., Eds., Academic Press, Nova Iorque, NY, EUA, 1979-1987, Volumes 1 a 9, e M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2.a ed. rev., Springer--Verlag, Berlim, Alemanha, 1983. Entre os exemplos de grupos 9 L-Ι - protectores de amina incluem-se benziloxicarbonilo, 4-metoxi-benziloxicarbonilo ou 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo e 1,1-di-metiletoxicarbonilo. 0 termo "elevada pureza enantiomérica" conforme utilizado na presente descrição refere-se a um composto que apresenta pelo menos um excesso enantiomérico (ee) de 75 % de um enantiómero, de preferência pelo menos 85 % de ee, de modo mais preferido pelo menos 95 % de ee e de modo especialmente preferido pelo menos 99 % de ee.

Processo para a preparação dos compostos da fórmula 1

Podem preparar-se misturas racémicas de compostos da fórmula III, que são utilizados na síntese de compostos da fórmula II, por vários processos que envolvem métodos conhecidos. A descrição dos métodos pode ser encontrada em livros de texto usuais tais como "Annual Reports In Organic Synthesis-1994", P.M. Weintraub et al., Eds., Academic Press, Inc., San Diego, CA, EUA, 1994 (e os relatórios anuais anteriores), "Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry" B.S. Furniss et al., Eds., Longman Group Limited, Essex, RU, 1986, e "Comprehensive Organic Synthesis", B.M. Trost e I. Fleming, Eds., Pergaman Press, Oxford, RU, 1991, Volumes 1 a 8.

Um procedimento geral para a preparação de compostos com elevada pureza enantiomérica da fórmula II, que são intermediários úteis na síntese de compostos inibidores de renina da fórmula I e Ia, é representado no esquema 1. 10

De acordo com o esquema 1, trata-se uma mistura de malonato (1), em que B é alquilo inferior, e de propeno substituído em 2,3 (2), em que X1 e X2 são seleccionados de Br,

Cl e I, num solvente inerte (por exemplo MeOH, THF e solventes semelhantes) a uma temperatura desde cerca de 0 °C a 100 °C, com uma base (por exemplo NaOMe quando o solvente é MeOH, ou

NaH, NaHMDS ou terc-butóxido de potássio quando o solvente é THF, e semelhantes), de modo a obter o derivado malonato mono- alquilado correspondente da fórmula 3. O derivado malonato 11 ' L-ij ^ monoalquilado correspondente da fórmula 3 é feito reagir com o composto da fórmula 4, em que X3 é seleccionado de Br, Cl ou I, e R1 possui o significado anteriormente definido, na presença de uma base (por exemplo NaOH, NaH, KOtBu e semelhantes) de modo a obter o derivado malonato dialquilado correspondente da fórmula 5. Por monossaponificação selectiva do malonato dialquilado da fórmula 5 por tratamento com uma base aquosa (por exemplo KOH, LiOH, NaOH e semelhantes) numa mistura de H20 e de um solvente inerte miscivel com H20 (por exemplo THF/H20/Me0H, Me0H/H20 e semelhantes), seguida de acidificação e de refluxo subsequente em tolueno ou solventes semelhantes para induzir a descarboxilação, obtém-se o derivado de succinilo racémico correspondente da fórmula 6. Por tratamento do derivado de succinilo racémico correspondente da fórmula 6 com uma esterase (por exemplo, Subtilisina de Carlsberg ou α-quimotripsina) em H20 ou então numa mistura de H20 com um solvente miscivel em H20 (por exemplo, acetona ou um solvente semelhante) na presença de um hidróxido de metal alcalino (por exemplo, NaOH, KOH, LiOH e semelhantes) para manter o pH em cerca de 7 a 8,5, obtém-se uma mistura dos enantiómeros correspondentes das fórmulas 7 e 8. O éster (R) da fórmula 7 que não reagiu é extraído da mistura de enantiómeros das fórmulas 7 e 8 com um solvente orgânico (por exemplo, EtOAc ou um solvente semelhante). 0 éster (R) da fórmula 7 pode ser reciclado por racemização sob condições básicas, de modo a dar origem ao derivado de succinilo racémico correspondente da fórmula 6. 0 ácido (S) da fórmula 8 é recuperado por acidificação da fase aquosa seguida de extracção com um solvente orgânico (por exemplo, EtOAc ou um solvente semelhante). Por utilização de procedimentos dados a conhecer por Lavallée et al., (EP 589445 publicado em 30 de Março de 1994), o ácido (S) da fórmula 8, que é um composto da fórmula II, preparado deste modo pode ser utilizado directamente na preparação de compostos inibidores da renina das fórmulas I e Ia.

Outro procedimento geral para a preparação de compostos da fórmula II é apresentado no esquema 2. 12

Esquema 2

De acordo com o esquema 2, converte-se o derivado de succinilo da fórmula 6 preparado conforme o esquema 1 no derivado de 2-aminotiazolilo correspondente da fórmula 10 em que RZD é 2-amino-4-tiazolilo, 2-(1,1-dimetiletiloxicarbonil)-amino-4-tiazolilo ou 2-(grupo protector de amina)amino-4--tiazolilo de acordo com o método de Hsaio et al. (Synthetic Comm. 1990, 20, 33507) e Morton et al. (Tetrahedron Letters 1993, 34, 4481) . Resumidamente, a fracção halogeneto de vinilo do composto 6 é convertida numa fracção α-halocetona por reacção do composto da fórmula 6 com W-bromossuccinimida ou N-clorossuccinimida ou semelhante numa mistura de H20 com um solvente inerte (por exemplo, Et0Ac/H20, acetonitrilo/H20 ou um solvente semelhante). Por tratamento deste último derivado de α-halocetona com tio-ureia obtém-se o derivado de 2-aminotiazolilo correspondente, o qual pode ser anda elaborado por meio de técnicas normais para dar origem a 2-(grupo protector de amina)amino-4-tiazolilo. Por tratamento do derivado de 13 (Ρ ^ ^-Ç* 2-aminotiazolo da fórmula 10 com uma esterase (por exemplo Subtilisina Carlsberg ou α-quimotripsina) em H20 ou numa mistura de H20 com um solvente miscível com H20 (por exemplo, acetona ou um solvente semelhante) a um pH de cerca de 7 a 8,5 dá origem a uma mistura do ácido (R) da fórmula 12 com o éster (S) da fórmula 11, a qual pode ser separada conforme descrito no esquema 1. O éster (5) da fórmula 11 pode ser reciclado por racemização sob condições básicas, dando origem ao derivado de aminotiazolo da fórmula 10. Por utilização de procedimentos dados a conhecer por Lavallée et al. (EP 589445, publicado em 30 de Março de 1994) , o do ácido (R) da fórmula 12, que é um composto da fórmula II, preparado deste modo, pode ser utilizado directamente para a preparação de compostos inibidores de renina da fórmula I e Ia.

Outro procedimento geral para a preparação de compostos da fórmula II é representado no esquema 3. 14 r \l

Esquema 3

0 material de partida no esquema 3 á o composto racémico 6a, em que Rlb e B são alquilo inferior, o qual é preparado de acordo com o esquema 1 (em que R1 do esquema 1 é alcoxilo inferior) . Os substituintes Rlb e B são seleccionados de tal modo que Rlb pode ser removido selectivamente do composto 6a. Por exemplo, quando RlD é 1,1-dimetiletilo e B é metilo, por hidrólise ácida de 6a (por exemplo com HC1, TFA ou semelhantes) o substituinte Rlb é removido selectivamente e obtém-se o derivado com o ácido carboxilico livre da fórmula 20. O derivado com o ácido carboxilico livre da fórmula 20 é acoplado com o composto da fórmula 21 em que Rlc é seleccionado de alquilamina inferior, di(alquilo inferior)amina ou o radical monovalente A-NRJ em que A e R3 possuem os significados anteriormente definidos, de modo a dar origem ao derivado com a 15 í amida livre racémico da fórmula 22. 0 acoplamento do derivado com o ácido carboxilico livre da fórmula 20 com o derivado de amina da fórmula 21 é efectuado pelo acoplamento clássico por desidratação de um carboxilo livre de um reagente com o grupo amina livre do outro reagente na presença de agentes de acoplamento de modo a formar uma ligação de amida. Encontra-se uma descrição de agentes de acoplamento apropriados em livros de texto gerais sobre a química de peptídeos; por exemplo em M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2.a ed. revista, Springer--Verlag, Berlim, Alemanha, 1993. São exemplos de agentes de acoplamento adequados Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodiimida, 1-hidroxibenzotriazolo na presença de N,N'~diciclo-hexil-carbodiimida, N-etil-N' -[(3-dimetilamino)propil]-carbodiimida ou semelhantes. Por tratamento do derivado de amida racémico da fórmula 22 com uma esterase conforme se apresenta nos esquemas 1 ou 2 obtém-se uma mistura do ácido (S) da fórmula 24 com o éster (R) da fórmula 23, a qual pode ser separada conforme se descreve no esquema 1. O éster (R) da fórmula 23 pode ser reciclado por racemização sob condições básicas de modo a dar origem ao derivado de amida da fórmula 22. Por utilização de procedimentos dados a conhecer por Lavallée et al. (EP 589445, publicado em 30 de Março de 1994), o ácido (S) da fórmula 24, que é um composto da fórmula II, preparado deste modo, pode ser utilizado directamente na preparação de compostos inibidores de renina da fórmula I e Ia.

Outros materiais de partida para os processos anteriores são conhecidos ou podem ser facilmente preparados a partir de matérias primas conhecidas. As reacções químicas descritas anteriormente são dadas a conhecer em geral em termos da sua aplicação mais ampla para a preparação dos compostos da presente invenção. Ocasionalmente, as reacções podem não ser aplicáveis conforme descritas a cada composto incluído no âmbito da presente invenção. Os compostos para os quais isto ocorre serão facilmente reconhecidos pelos especialistas na técnica. Em todos estes casos, a reacção pode ser efectuada com êxito por uma modificação convencional do conhecimento dos 16

L-Cj especialistas na técnica, p. ex. por protecção apropriada de grupos que interferem, por alteração para reagentes convencionais alternativos, por uma modificação de rotina das condições reaccionais ou por uma modificação ilustrada nos exemplos apresentados.

Os exemplos que se seguem destinam-se a ilustrar a invenção mais em pormenor. As temperaturas são dadas em graus Celsius. As percentagens ou as proporções das soluções exprimem uma relação de volume para volume. Os espectros de ressonância magnética nuclear foram registados num espectrómetro Bruker a 200 ou 400 MHz; os desvios químicos (δ) são dados em partes por milhão. As concentrações para as rotações ópticas são expressas em gramas do composto por 100 mL da solução. As purezas enantioméricas foram determinadas utilizando colunas de HPLC quirais e são indicadas como Condição A: coluna Chiralpak® AS de 25 cm, etanol a 0,25 % em hexano, 0,5 mL/min, isocrática; ou Condição B: colunas Chiralcel® OD-H de 15 cm + 25 cm, etanol a 2 % em hexano, 0,5 mL/min, isocrática. As abreviaturas e os símbolos utilizados nos exemplos incluem: DBU: 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undeceno-7; DCC: diciclo-hexilcarbodiimida; DCU: diciclo-hexilureia; DMF: dimetilformamida, EtOH: etanol; EtOAc: acetato de etilo; Et20: éter dietílico; Hex: hexano; HOBt: 1-hidroxibenzo-triazolo; MeOH: metanol; NMM; N-metilmorfolina; THF: tetra-hidrofurano. 17 u Γ

Exemplo 1 Éster 4-(1,1-dimetiletílico) do ácido 2(S) -(2-bromo-2--propenil)-1,4-butanodióico

Exemplo IA Éster dimetílico do ácido 2-(2-bromo-2-propenil)-1,3-propano-dióico A um balão sob atmosfera de azoto adicionou-se MeOH (67 mL) e adicionou-se sódio metálico (1,15 g, 0,05 g átomo) em porções durante um período de 30 min. À solução resultante adicionou-se a partir de uma ampola de decantação malonato de dimetilo (13,2 g, 0,1 mol) em MeOH (10 mL) durante 30 min.

Arrefeceu-se a solução a 0 °C e adicionou-se 2,3-dibromopropeno (12 g, 0,05 mol) em MeOH (15 mL) durante um período de 40 min. Após mais 45 min a 0 °C, o pH da mistura estava neutro ao papel de tornassol. 0 meio reaccional foi então concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL). A solução resultante foi lavada com H20 destilada (100 mL) . A fase aquosa foi reextraída com Et20 (100 mL e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (MgS04) , concentradas sob pressão reduzida e purificadas por destilação (82-84 °C / 133 Pa (1 Torr) ), tendo-se obtido o composto em epígrafe sob a forma de um líquido incolor (8,3 g, rendimento 66 %): RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 5,69 (m, 1H, olefínico), 5,48 (d, J = 1,9 Hz, 1H, olefínico), 3,81 (t, J = 7,63 Hz, 1H), 3,75 (s, 6H) , 3,02 (dd, J = 0,95, 7, 63 Hz, 2H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) Ô 168, 30, 129, 18, 119, 68, 52,59, 50,28, 40,36. 18 Γ u

Exemplo 1B Éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2-(2-bromo--2-propenil)-2-(metoxicarbonil)-1,4-butanodióico 0 composto em epígrafe do Exemplo IA (0,5 g, 2 mmol) dissolvido em THF (20 mL) foi arrefecido a 0 °C sob atmosfera de azoto. Adicionou-se numa única porção terc-butóxido de potássio (0,25 g, 2,2 mmol). Após um período adicional de 20 min, adicionou-se gota a gota bromoacetato de terc-butilo (0,39 g, 2,2 mmol) com uma seringa. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 h à temperatura ambiente. Destruiu-se o excesso de base por adição de THF húmido (2 ml) seguida da adição de H20 (40 mL) e de EtOAc (40 mL) . Secou-se a fase orgânica (MgSC>4) e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o óleo bruto por cromatografia em coluna (S1O2), tendo-se obtido o composto em epígrafe (0,619 g, rendimento 85%) sob a forma de um óleo incolor: RMN. 1H (400 MHz, CDCI3) δ 5,64 (s largo, 1H) , 5,59 (s largo, 1H,) , 3 ,75 (s, 6H) , 3 ,35 (s, 2H), 3,07 (s, 2H), 1,43 (s, 9H) ; RMN 13C (100 MHz, ' CDC13) δ 169, 42, 168,43, 127, 16, 122, 35, 81,29, 54, 64, 52, 91, 43, 53, 37,25, 27, 92.

Exemplo 1C Éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-(2--bromo-2-propenil)-1,4-butanodióico A uma solução de LiBr (12,51 g, 0,144 mmol) dissolvido em H20 (5,2 mL) e DMF (20 mL), adicionou-se o composto em epígrafe do Exemplo 1B (52,6 g, 0,144 mmol) em DMF (20 mL). Aqueceu-se esta solução até 135 °C durante 6 h. Removeu-se a DMF sob pressão reduzida e diluiu-se o resíduo resultante com H20 (60 mL) , extraiu-se duas vezes com EtOAc (2x 60 mL) e duas vezes com Et20 (2x 50 mL) . Lavaram-se as fases orgânicas combinadas com salmoura, secaram-se (MgSO-j) e concentraram-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido um óleo amarelo pálido (27,6 g, rendimento 62 %) . Purificou-se ainda uma amostra deste material 19

V

(9,55 g) por cromatografia relâmpago (SÍO2), eluente: EtOAc a 5 %/Hex), tendo-se obtido o composto em epígrafe sob a forma de um óleo incolor transparente (6, 00 , 0 qual foi utilizado nos Exemplos 1D e 1E seguintes. Por análise de HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A: isómero (R) , tR 9,2 min, isómero (S) , tR 9,9 min) verificou- -se que esta amostra possuía uma proporção 1:1 dos enantiómeros (R) e (S) : RMN *H (400 MHz, CDCI3) δ 5,64 (s, 1H) , 5,48 (d, J = 1,6 Hz, 1H, ) , 3,71 (s, 3H) , 3,14 (m, 1H), 2,85 (dd, J = 6,4, 14,6 Hz, 1H) , 2,61 (dd, J = 8,3, 14,6 Hz, 1H) , 2,57 (dd, J = 8,6, 16,5 Hz, 1H) , 2,48 (dd, J = 5,4, 16,5 Hz, 1H) , 1,44 (s, 9H) ; RMN 13C (100 MHz, CDC13) δ 173, 90, 170,38, 130, 46, 119,55, 80,91, 51,87, 42,75, 39,75, 35,82, 27,96.

Exemplo 1D

Resolução cinética do éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-(2-bromo-2-propenil)-1,4-butanodióico utilizando a-quimotripsina

Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 1C (0,513 g, 1,67 mmol) em acetona (2 mL) e diluiu-se com H2O destilada (5 mL). A esta solução sob agitação rápida adicionou-se a-quimotripsina (5 mg) (tipo I-S de Pâncreas Bovino, cristalizada 3x, obtida de Sigma Chemical Co.). Utilizou-se NaOH aquosa (0,1 N) adicionada gota a gota de uma bureta para manter a mistura reaccional a um pH entre 8 e 9. O consumo da solução de NaOH foi extremamente lento (< 2 gotas de NaOH num período de 1 h) e após 1 h adicionou-se KC1 (500 mg) bem como uma nova quantidade de 15 mg de α-quimotripsina. Nesta reacção específica, o pH foi mantido entre 8 e 9 e após 4 dias a reacção já não prosseguia (pH estável a pH 8). Diluiu-se então a mistura reaccional com H20 destilada (15 mL) e com solução saturada de NaHC03 (2 mL), extraiu-se duas vezes com cloreto de metileno (2x 25 mL) , secou-se (MgS04) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido o éster por reagir (300 mg) , o qual foi analisado por HPLC utilizando uma coluna quiral 20 Γ (Condição A) , tendo-se verificado que era constituído por uma mistura dos enantiómeros {R) e (5) numa proporção de 1,4:1. A fase aquosa básica foi acidificada (pH 5) por adição de ácido cítrico aquoso a 10 % (p/v) e extraiu-se três vezes com cloreto de metileno (3x 30 mL) . Secou-se a fase de cloreto de metileno (MgS04) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido o éster 4-(1,1-dimetiletilico) do ácido 2(S)-(2-bromo-2--propenil)-1,4-butanodióico (66 mg, rendimento 28 %). Fez-se reagir uma alíquota deste material com diazometano, tendo-se obtido o éster metílico correspondente, o qual foi analisado por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) , tendo-se verificado uma proporção de 8,4’:1 entre os enantiómeros (R) e (S) (79 % ee) .

Exemplo 1E

Resolução cinética do éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-(2-bromo-2-propenil)-1,4-butanodióico utilizando Subtilisina Carlsberg

Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 1C (5,01 g, 16,3 mmol) em acetona (10 mL) e H20 desionizada (30 mL) . O sistema estava equipado com um titulador de pH automático e uma bomba peristáltica ligada a uma solução aquosa de NaOH 0,4 M. Ajustou-se o pH da suspensão a 7,8. Adicionou-se um preparado bruto de Subtilisina Carlsberg (preparado enzimático de Alcalase® 2.4L de "grau alimentar", Novo Nordisk Bio-industrials, EUA) (0,2 g) e deu-se início ao sistema de titulação automática com valor do pH ajustado para 7,2. Após 12 h a pH 7,2, reajustou-se o valor do pH no titulador automático para 7,5 e continuou-se a reacção até que o pH se estabilizou. Removeu-se a acetona sob pressão reduzida e adicionou-se NaHCC>3 aquosa saturada (10 mL) à fase aquosa. Extraiu-se a fase aquosa duas vezes com EtOAc (2x 80 mL) . As fases orgânicas combinadas foram secas (MgS04) e concentradas sob pressão reduzida, tendo--se obtido o éster por reagir (2,67 g) , o qual foi submetido a 21 Γ u HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A), tendo-se verificado que era constituído por uma mistura dos enantiómeros (R) e (S) numa proporção de 68:1 (>97 % de ee) . Este material foi recuperado e utilizado para racemização e reciclagem (Exemplo 1F). A fase aquosa da extracção anterior foi acidificada por adição de HC1 aquoso a 10% (20 mL) eem seguida extraída duas vezes com uma mistura 1:1 de EtOAc / Et20 (2x 80 mL) . Os extractos anteriores foram lavados com salmoura e secos (MgSCt) . Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se o resíduo sob vácuo, tendo-se obtido o éster 4-(l,l-di-metiletílico) do ácido 2 (5) -(2-bromo-2-propenil)-1,4-butano-dióico (2,246 g, rendimento 47 %) . Fez-se reagir uma alíquota deste material com diazometano, tendo-se obtido o éster metílico correspondente, o qual foi submetido a análise por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) , tendo-se verificado possuir uma proporção de 214:1 entre os enantiómeros (S) e (R) (> 99 % de ee).

Exemplo 1F

Racemização do éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2 (J?) - (2-bromo-2-propenil) -1,4-butanodióico

Ao éster por reagir do Exemplo 1E (1,64 g, 5,34 mmol), que é uma mistura dos enantiómeros {R) e (S) numa proporção de 68:1, adicionou-se tolueno (15 mL) e DBU (0,85 mL) . Aqueceu-se esta mistura a refluxo durante 18 h e em seguida diluiu-se com H20 e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a fase orgânica sequencialmente com HC1 aquoso a 5 % e com salmoura, secou-se (MgS0<j) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido material (1,57 g, rendimento 96 %) idêntico ao obtido no

Exemplo 1C, tendo-se verificado por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) que era constituído por uma mistura dos enantiómeros (R) e (S) numa proporção de 1,1:1. 22 * * t p Lr

Exemplo 2 R4- (Ciclo-hexilmetil) -2?4-{2-{metil {2- (2-piridinil)etil}amino}-2--oxoetil (S) - (ciclo-hexilmetil) -2 (R) ,3 (S) -di-hidroxi-5- -metil-hexil}-2(R)-{(2-amino-4-tiazolil)metil}butanodiamida

Exemplo 2A Éster dimetilico do ácido 2-(2-cloro-2-propenil)-1,3-propano-dióico

Adicionou-se uma solução de malonato de dimetilo (2381 g, 18,02 mol) em MeOH (500 mL) a uma solução sob agitação de NaOMe a 25 % (p/p) em MeOH (1071 g, 4,95 mol) e MeOH (500 mL) . Aqueceu-se a mistura até uma temperatura interna de 70 °C. Adicionou-se gota a gota 2,3-dicloropropeno (511 g, 4,60 mol) em MeOH (500 mL) no decurso de um período de 12 h. Em seguida agitou-se a mistura a 70 °C durante 8 h. Removeu-se o MeOH sob pressão reduzida. Partilhou-se o resíduo entre Et20 (2 L) e H20 (2 L) . A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com duas porções adicionais de Et20 (2x 1 L). Lavaram--se as fases orgânicas reunidas sequencialmente com HCl aquoso 1 N (500 mL) , H20 (2x 1 L) e salmoura (2x 500 mL) , secaram-se (MgS04) e concentraram-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido um óleo alaranjado escuro constituído por malonato por reagir, o produto monoalquilado pretendido e algum material correspondente dialquilado. A maior parte do malonato de dimetilo por reagir foi removida por evaporação rotativa sob vácuo elevado (133 Pa (1 Torr)) com uma temperatura de banho de 70 °C. Recuperou-se malonato de dimetilo (1381 g) contaminado com 6 % de produto monoalquilado (por RMN 1H) , tendo-se reciclado em lotes subsequentes. O material residual (800 g) foi submetido a destilação fraccionada sob vácuo, tendo-se obtido várias fracções, conforme se indica no quadro seguinte: 23 t P. Eb. °C/Pa (Torr) Peso % de % Mono- % Di- Malonato alquilado alquilado 80-90/266 (2) 25 g 37 63 0 90-100/266 (2) 39 g 16 84 0 100/266 (2) 651 g 1 97, 5 1,5 105-110/33 (0,25) 44 g 0 12,5 87 0 rendimento do composto em epígrafe foi de 651 g (com uma pureza de 97 % por HPLC; 68 % de rendimento com base em 2,3-di-cloropropeno): RMN 2H (400 MHz, CDC13) δ 5,24 (m, 2H), 3,81 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 3,76 (s, 6H) , 2,95 (m, 2H) ; IR (nítido) v 1740, 1635 cm"1.

Exemplo 2B Éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2-(2-cloro--2-propenil)-2-(metoxi)-1,4-butanodióico

Adicionou-se gota a gota uma mistura do composto em epígrafe do Exemplo 2A (519,6 g, 2,564 mol) e bromoacetato de terc-butilo (500 g, 2,564 mol) no decurso de um período de 30 min a uma mistura sob agitação de NaOH aquoso 10 N (2,56 L, 25,6 mol) e de cloreto de benziltrietilamónio (2,56 g, 11,2 mmol) a 10 °C. Agitou-se a mistura reaccíonal à temperatura ambiente durante 2 h e em seguida diluiu-se com Hex (750 mL) . Separou-se a fase orgânica e lavou-se sequencialmente com H20 (loo mL) e salmoura (2x 100 mL) , secou-se (MgSO/J e concentrou--se sob pressão reduzida, tendo-se obtido o composto em epígrafe (822 g, rendimento 100 %), o qual foi utilizado sem qualquer purificação adicional para a fase seguinte (Exemplo 2C) , XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,32 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 5,20 (s largo, 1H) , 3,75 (s, 6H) , 3,25 (s largo, 2H) , 3,06 (s, 2H) , 1,43 (s, 9H), EM (FAB) m/z 321 (MH+) . 24 r

t

Exemplo 2C Éster 4-(1,1-dimetiletilico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-(2--cloro-2-propenil)-1,4-butanodióico

Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 2B (1502 g, 4,18 mol) em MeOH (2650 mL). Enquanto se mantinha a temperatura em 30 °C ou inferior na mistura resultante, adicionou-se gota a gota uma solução fria de KOH (329 g, 5,85 mol) em H20 (1335 mL) no decurso de 20 min. Agitou-se vigorosamente a mistura durante 24 h. Em seguida, evaporou-se o MeOH sob pressão reduzida. A fase aquosa resultante foi extraída com Hex (3x 750 mL) , acidificada (pH 1) por adição de HC1 concentrado (~500 mL) e em seguida extraída com tolueno (3x 1 L) . O extracto anterior foi seco (MgSOJ e em seguida aquecido a refluxo durante 24 h para efectuar a descarboxilação. Ao fim deste período, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi destilado sob pressão reduzida (128-132 °C/100 Pa (0,75 Torr)), tendo-se obtido o composto racémico em epígrafe (867 g, rendimento 79 %) sob a forma de um líquido incolor: RMN 1H (400 MHz, CDC13) δ 5,25 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 5,20 (s largo, 1H) , 3,71 (s, 3H) , 3,14 (m, 1H) , 2,76 (ddd, J = 14,3, 6,4, 1,0 Hz, 1H), 2,59 (dd, J = 16,5, 8,3 Hz, 1H) , 2,53 (dd, J = 14,9, 8,4

Hz, 1H) , 2 ,48 (dd, J = 16,5, 5,1 Hz, 1H) , 1,44 (s, 9H) ; RMN 15C (100 MHz, CDCI3) δ 173, 9, 170, 4, 139, 1, 114,9, 80, 8, 51,8, 40, 6, 39, 1, 35, 9, 27, 9. EM (FAB) m/z 263 (MH+) .

Exemplo 2D

Resolução cinética do éster 4-(1,1-dimetiletilico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-(2-cloro-2-propenil)-1,4-butanodióico utilizando Subtilisina Carlsberg

Carregou-se o composto em epígrafe do Exemplo 2C (860,00 g, 3,273 mol) num balão de 5 L e suspendeu-se em acetona (15 mL) e H20 desionizada (1,5 L). O sistema estava equipado com um titulador de pH automático e uma bomba peristáltica ligada a 25 t. p ^^ uma solução aquosa de NaOH 3 N (550 mL, ± 0,5 equivalentes) . Ajustou-se o pH da suspensão a 7,5. Adicionou-se um preparado bruto de Subtilisina Carlsberg (preparado enzimático de Alcalase® 2.4L de "grau alimentar", Novo Nordisk Bio- industrials, EUA) (10 g) e deu-se inicio ao sistema de titulação automática com valor do pH ajustado para 7,5. Após 22 h a pH 7,5, reajustou-se o valor do pH no titulador automático para 8,0 e continuou-se a reacção durante mais 96 h. Extraiu-se o éster (R) que não reagiu com EtOAc (3x 700 mL), lavou-se sequencialmente com H20 e salmoura, secou-se (MgSO,j) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido um óleo incolor (442 g), o qual foi submetido a HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A), tendo-se verificado ser constituído por uma mistura dos enantiómeros (R) e (S) numa proporção de 21:1. Este material foi recolhido para racemização e reciclagem. A fase aquosa da extracção anterior foi acidificada (pH 1) por adição de HC1 aquoso 6 N (~800 mL) e em seguida extraída com EtOAc (3x 1 L) . Lavaram-se os extractos anteriores sequencialmente com H20 e salmoura e em seguida secaram-se (MgSOi) . 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi seco sob vácuo, tendo-se obtido o éster 4-(l,l-di-metiletílico) do ácido 2 (S) -(2-cloro-2-propenil)-1,4-butano-dióico (390 g, 96 % da quantidade teórica), o qual era homogéneo a >96 % por HPLC. Fez-se reagir uma alíquota deste material com diazometano, tendo-se obtido o éster metílico correspondente e efectuou-se uma análise por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) , que indicou uma proporção de 109:1 entre os enantiómeros (S) e (R) (99 % ee) : [a]D25 -4,58° (c 1, MeOH) , [a] Hg43S25 -6,11° (c 1, Me OH) ; RMN XH (400 MHz, CDC13) δ 11,5 (s largo, 1H) , 5,27 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 5,22 (s largo, 1H) , 3,16 (m, 1H) , 2,81 (dd, J = 14,3, 6,0 Hz, 1H) , 2,63-2,49 (m, 3H) , 1,47 (s, 9H) ; RMN 13C (100 MHz, CDC13) δ

179, 9, 170, 4, 138, 9, 115, 3, 81,2, 40, 2, 39, 1, 35, 5, 27,9; EM (FAB) m/z 249 (MH+) . Este material bruto é de pureza suficiente 26 p U, ^ para ser utilizado nas reacções de acoplamento dos Exemplos 2E e 2F sem qualquer purificação adicional.

Exemplo 2E

Resolução cinética alternativa do éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2<R,S)-(2-cloro-2-propenil)-1,4--butanodióico utilizando Subtilisina Carlsberg

Neste exemplo, a hidrólise enzimática do composto em epígrafe do Exemplo 2C é levada a efeito sem acetona como co--solvénte.

Suspendeu-se o composto em epígrafe do Exemplo 2C (0,505 g, 1,92 mmol) em H20 (6 mL) e agitou-se rapidamente. O sistema estava equipado com um titulador de pH automático e uma bomba peristáltica ligada a uma solução aquosa de NaOH 0,1 N. Ajustou-se o pH da solução bifásica a 7,6, adicionou-se um preparado bruto de Subtilisina Carlsberg (preparado enzimático de Alcalase® 2.4L de "grau alimentar", Novo Nordisk Bio-industrials, EUA) (0,112 g) e deu-se início ao sistema de titulação automática com valor do pH ajustado para 7,5. Após 3 h, diluiu-se a mistura reaccional com 5 mL de NaHCCb aquoso saturado, EtOAc (40 mL) e H20 (20 mL) . Separou-se a fase orgânica, secou-se (MgSCu) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido o éster (R) por reagir (0,25 g, rendimento 50 %). Por análise de HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) verificou-se que a pureza óptica do enantiómero (R) era > 99 % ee. A fase aquosa da extracção anterior foi acidificada (pH 3) por adição de HC1 aquoso a 5 % e foi extraída com EtOAc (50 mL) . Secou-se a fase orgânica (MgS04) e concentrou-se sob pressão reduzida, tendo-se obtido o éster 4-(1,1--dimetiletílico) do ácido 2 (S) - (2-cloro-2-propenil)-1, 4-butano-dióico (0,215 g, rendimento 45 %) . Fez-se reagir uma alíquota deste material com diazometano, tendo-se obtido o éster 27

r“ II L-ϋ )===^*- metilico correspondente, e analisou-se por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A). A pureza óptica do enantiómero (S) era de 97,5 % ee.

Exemplo 2F Éster (1,1-dimetiletílico) do ácido 4-{{1(S)-(ciclo-hexil-metil)-2(R),3(S)-di-hidroxi-5-metil-hexil}-amino}-3(S)-(2--cloro-2-propenil)-4-oxo-butanóico

Dissolveram-se em THF (450 mL) o composto em epígrafe do Exemplo 2D (41,69 g, 167,6 mmol), 2(S)-2-amino-l-ciclo-hexil-6--metil-3 (i?) , 4 (S) -heptanodiol (40, 00 g, 164,4 mmol) (J.R. Luly et al., J. Org. Chem. 1988, 53, 6109), HOBt (25, 92 g, 169,3 mmol) e N-metilmorfolina (16,29 g, 161,1 mmol) e arrefeceu-se a solução num banho de gelo e água. Adicionou-se DCC (34,59 g, 167,6 mmol) em THF (50 mL) e agitou-se a mistura durante 30 min a 5 °C e em seguida durante mais 17 h à temperatura ambiente. O sólido que precipitou foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc (1 L), filtrou-se a suspensão para remover a DCU precipitada e lavou-se o filtrado sequencialmente com HC1 aquoso 1 N (3x 300 mL) , H2O (250 mL) , NaOH aquoso 3 N (3x 300 mL) e salmoura. Após secagem (MgS04) , o solvente foi removido sob pressão reduzida, tendo-se obtido um sólido branco. Por recristalização a partir de EtOAc / Hex obteve-se o composto em epígrafe (99,3 % de homogeneidade por HPLC) sob a forma de um sólido branco (77,91 g, rendimento 71 %) : p.f. 144-146°; [a] d2° -41,39° (c 1, MeOH) ; RMN LH (400 MHz, CDC13) δ 5,91 (d largo, J = 8,6 Hz, 1H), 5,27 (m, 2H) , 4,29 (dt, J = 9,0, 4,7 Hz, 1H) , 4,19 (m, 1H) , 3,21 (m, 2H) , 3,04 (m, 1H) , 2,73 (dd, J = 14,0, 8,9 Hz, 1H) , 2,63 (dd, J = 17,2, 9,4 Hz, 1H) , 2,43 (dd, J = 14,3, 6,0 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 17,1, 4,2 Hz, 1H) , 1,89 (m, 1H), 1,8-1,1 (m, 15H), 1,46 (s, 9H), 1,0-0,77 (m, 2H), 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,87 (d, 7 = 6, 4 Hz, 3H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCI3) δ 175, 0, 171,4, 139, 4, 115, 6, 81,5, 77,7, 69, 8, 47,5, 42, 8, 41,7, 40, 8, 39, 7, 37,2, 34, 1, 33, 9, 32, 8, 28,3, 26, 6, 28 26, 3, 26,2, 24,8, 24, 1, 22,0. EM (FAB) m/z 474 (MH+) , Anál.

Cale. para C25H44CINO5: C, 63, 34; H, 9,35; N, 2,95, Determinado: C, 63,50; H, 9,62; N, 3,00.

Exemplo 2G Ácido 4-{ {1 (S) -(ciclo-hexilmetil)-2(R),3(S)-di-hidroxi-5-metil--hexil}amino)-3(S)-(2-cloro-2-propenil)-4-oxobutanóico

Adicionou-se o composto em epígrafe do Exemplo 2F (34,20 g, 72,1 mmol) a TFA (loo mL) e agitou-se a mistura durante 24 h à temperatura ambiente. Removeram-se as substâncias voláteis sob pressão reduzida e coevaporou-se o resíduo duas vezes com MeOH (100 mL) . Dissolveu-se o resíduo em MeOH (100 mL) e adicionou-se NaOH aquoso 3 N (100 mL) . Agitou-se a mistura durante 4 h à temperatura ambiente. O MeOH foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi acidificado (pH 1) com HC1 concentrado. O produto precipitado foi recolhido por filtração, lavado com H20 e seco, tendo-se obtido o composto em epígrafe (29, 36 g, rendimento 97 %): p.f. 193-196°; [a] D25 -49, 2° (c 1,

MeOH); RMN ΧΗ (400 MHz , DMS 0- de) δ 7, 83 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 5, 34 (s , 1H) , 5, 20 (s, 1H) , 4,61 (d largo, J = 5,7 Hz, 1H) , 4, 48 (s largo, 1H) , 4, 09 (m, 1H) , 3,07 (t, J = = 7,2 Hz, 2H) , 2,90 (m largo, 1H) , 2, 65 (dd, J = 14,7, 7, 6 Hz, 1H), 2,48 > (dd, J = 15, 4, 7,0 Hz, 1H) , 2, 42 (dd, J = 14 ,7, 6, < 5 Hz, 1H) , 2,28 (dd, J « = 16,6, 5, 8 Hz, 1H) , 1, 77 (m, 1H), 1,' 7-1, 5 (m, 6H), 1,45 (m, 1H) , 1,38- 1,03 (m, 6H) , 0, r 96- 0,7 (m, 2H) , 0 ,87 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 0,70 (d, J = : 6, 6 Hz, 3H) ; EM (FAB) m/z 418 (MH+) .

Anál. Cale. para C21H36CINO5: C, 60, 35; H, 8,68; N, 3,35, Determinado: C, 60,15; H, 8,79; N, 3,40.

V

U

Exemplo 2H N4- (Ciclo-hexilmetil) -274-{2-{metil{2- (2-piridinil)etil}amino}-2--oxoetil} -2^-(1 (S) - (ciclo-hexilmetil) -2 (R) ,3 (S) -di-hidroxi-5--metil-hexil}-2(R)-(2-cloro-2-propenil)butanodiamida

Suspenderam-se o composto em epígrafe do Exemplo 2G (10,00 g, 23,92 mmol) e N-metilmorfolina (5,8 mL, 52,6 mmol) em THF frio (5 °C) (75 mL) e agitou-se a mistura até que todos os sólidos se dissolveram. Adicionou-se cloreto de pivaloílo (2,94 mL, 23,92 mmol) e agitou-se a mistura durante 10 min num banho de gelo e água. Adicionou-se N- (2- (2-piridinil) etil}-iV-metil-2--{(ciclo-hexilmetil)amino}acetamida (8,00 g, 27,5 mmol) (Lavallée et al., EP 589445, publicado em 30 de Março de 1994) em THF (15 mL) e removeu-se o banho de arrefecimento. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 h. Fez-se parar a reacção com H20 (50 mL) e removeu-se o THF sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com EtOAc e lavou-se a fase orgânica sequencialmente com NaOH aquoso 1 N e H20, secou-se (MgS04), concentrou-se sob pressão reduzida e cristalizou-se o resíduo duas vezes a partir de EtOAc / Hex. O composto em epígrafe foi obtido sob a forma de um sólido branco (12,25 g, rendimento 74%, homogeneidade por HPLC de fase invertida >97%): Rf 0,49 (9:1 CHCl3/MeOH) ; p.f. 139, 5-140, 5°; [a] 323 - 32 , 3° (c 1,

MeOH) ; RMN *H (400 MHz, CDCI3) existe sob a forma de uma mistura de rotâmeros: δ 8, 60, 8, 57 e 8,52 (d largo, J = = 4,8 Hz, total 1H) , 7, 62 (m, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 7,16 (m, 1H) , 6,78, 6, 62 e 6, 57 (d, J = 8,3 Hz, total 1H) , 5,26 (m, 2H) , 4,33 (m, 2H) , 4,11 (m, 1H) , 4,05-3,6 (m, 3H) , 3, 3-2,8 (m, 9H) , 2,94 (s, 3H), 2, 69- •2,4 (m, 3H) , 1,90 (m, 1H) , 1,8-1,1 (m, 25H) , 10,8 (m, 10H) ; EM (FAB) m/z 689 (MH+) , Anál. Cale. para C38H6iClN405: C, 66,21; H, 8,92; N, 8,13, Determinado: C, 66,07; H, 9,06; N, 8,10. 30

V

L· t

Exemplo 21 N4- (Ciclo-hexilmetil) -N4-{2-{metil-{2- (2-piridinil) -etil}amino}--2-oxoetil1 (S) - (ciclo-hexilmetil) -2 (R) ,3 (S) -di-hidroxi-5--metil-hexil}-2(R)-{(2-amino-4-tiazolil)metil)butanodiamida

Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 2H (1,069 g, 1,55 mmol) em diclorometano (30 mL) e adicionou-se mono--hidrato de ácido para-toluenossulfónico (0,019 g, 0,1 mmol) seguido de 2-metoxipropeno (0,745 mL, 7,75 mmol). Agitou-se a mistura durante 60 h à temperatura ambiente. Removeram-se as substâncias voláteis sob pressão reduzida e dissolveu-se o resíduo numa mistura de EtOAc :H20 2:1 (60 mL) . Após arrefecimento num banho de gelo e água, adicionou-se N-bromos-succinimida (0,32 g, 1,8 mmol) e agitou-se a mistura durante 3 h a 5 °C e durante 3 h à temperatura ambiente. Adicionou-se tio-ureia (0,142 g, 1,86 mmol) e imergiu-se a mistura reaccional num banho de óleo pré-aquecido a 70 °C. Após 1 h verificou-se que a reacção estava completa por HPLC de fase inversa. Alcalinizou-se a suspensão (pH 11) por adição de NaOH aquoso 3 N e extraiu-se com EtOAc. A fase orgânica foi lavada sequencialmente com NaOH aquoso 1 N e com H20, seca (MgS04) e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido numa pequena quantidade de EtOAc e o produto foi precipitado por adição de Hex. O precipitado de cor creme foi recolhido, lavado com Hex e seco sob pressão reduzida (0,95 g, rendimento 84 %, homogeneidade 96 % por HPLC de FI). Obteve-se uma amostra analítica por uma segunda precipitação a partir de EtOAc / hexano, tendo-se obtido uma preparação homogénea a 97 % do composto em epígrafe idêntico em todos os aspectos ao material anteriormente preparado pela via auxiliar quiral (Lavallée et al., EP 589445): Rf 0,21 (9:1 CHCl3/MeOH) ; p.f. 84-90° (mal definido); amostra precipitada a partir de MeOH/H20: [a]D25 -21,6° (c 1 MeOH) ; RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) existe sob a forma de uma mistura de rotâmeros: δ 8,3 (m, 1H) , 7,69 (m, 1H), 7,52 (m, 1H) , 7,3-7,18 (m, 2H) , 6,73 (s largo, 1H) , 6,69 (s, 1H) , 6,16, 6,15, 6,09 e 6,04 (s, total 1H) , 4,62 (m, 1H) , 4,5 (m, 31 Γ u

1H) , 4,2-4,0 (m, 2H) , 3,85 (t, J = 17,4 Hz, 0,7H), 3,7-3,5 (m, 2,3H) , 3,12,6 (m, 11H) , 2,5-2,0 (m, 2,7H), 1,8-1,0 (m, 24H) , 0,9-0 , 7 (m, 4H) , 0,86 (d, J = 6, 6 Hz, 3H) , 0,78 (d, J = 6,3 Hz, 3H) ; EM (FAB) m/z 727 (MH+) , Anál. Cale. para CagHszNeOsS: C, 64,43; H, 8,60; N, 11,56, Determinado: C, 64,04; H, 8,76; N, 11,35.

Exemplo 3 Ácido 4-{(ciclo-hexilmetil)-{2-{metil-{2-(2-piridinil)-etil}-amino}-2-oxoetil}amino}-2(S)-(2-cloro-2-propenil)-4-oxo-butanóico

Exemplo 3A Éster 1-metílico do ácido 2(R,S) -(2-cloro-2-propenil)-1,4--bu tanodi ói co

Adicionou-se o composto em epígrafe do Exemplo 2C (607,76 g, 2,31 mol) a uma solução gelada de HC1 aquoso 4 N em dioxano (1600 mL). Deixou-se a mistura aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 40 h. Removeram-se as substâncias voláteis sob vácuo, tendo-se obtido um óleo amarelo que foi dissolvido em éter (250 mL). Adicionou-se Hex até que a solução se tornou turva (~650 mL) . Após inoculação, o produto cristalizou à temperatura ambiente. Após deixar arrefecer de um dia para o outro a 5 °C, recolheu-se o produto, lavou-se com éter a 10 % em Hex e em seguida com Hex. Após secagem sob vácuo, obteve-se o composto em epígrafe sob a forma de um sólido branco cristalino (407,4 g, rendimento 85 %) : p.f. 61--64°; RMN ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 11,5 (s largo, 1 H) , 5,27 (d, J = 1,3 Hz, 1 H) , 5,22 (s largo, 1 H) , 3,72 (s, 3 H) , 3,24-3,16 (m, 1 H) , 2,84-2,71 (m, 2 H) , 2, 65-2,54 (m, 2 H) ; RMN 13C (100 MHz, CDCls) δ 177,3, 173, 7, 138,6, 115,2, 52, 0, 40,3, 38,5, 33,9; EM (FAB) m/z 207 (MH+) , Anál. Cale. para C8HiiC104: C, 4 6,50; H, 5,37, Determinado: C, 46,12; H, 5,35. 32

π-' Li Γ

Exemplo 3Β Éster 1-metílico do ácido 4-{(ciclo-hexilmetil)-{2-{metil-{2--(2-pyridinil)etiljamino}-2-oxoetil}amino}-2(R,S)-(2-cloro-2--propenil)-4-oxobutanóico

Suspenderam-se em THF (150 mL) o composto em epígrafe do Exemplo 3A (20,00 g, 96,8 mmol), A/-{2-(2-piridinil) etil}-N- -metil-2-{(ciclo-hexilmetil)amino}acetamida (26,68 g, 92,2 mmol) (Lavallée et al., EP 589445, publicado em 30 de Março de 1994), HOBt (15,00g, 98,0 mmol) e NMM (17,00g, 168 mmol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente até todos os sólidos estarem dissolvidos. Adicionou-se DCC (20,00 g, 97 mmol) em THF (10 mL) e agitou-se a mistura de um dia para o outro à temperatura ambiente. Removeram-se as substâncias voláteis sob pressão reduzida e dissolveu-se o resíduo em EtOAc. Filtrou-se a solução para remover a DCU insolúvel, em seguida lavou-se sequencialmente com água (2x) , NaOH 3 N (3x) , água (2x) e salmoura (2x) . Após secagem sobre sulfato de sódio anidro, removeram-se as substâncias voláteis sob pressão reduzida, tendo-se obtido um resíduo oleoso alaranjado que foi seco sob vácuo dando origem ao composto em epígrafe (42,28 g, rendimento 96%, produto bruto): RMN 1H (400 MHz, CDCI3; existe sob a forma de uma mistura de rotâmeros) : δ 8,60-8,50 (m, 1H) , 7,60 (m, 1H) , 7,20-7,10 (m, 2H) , 5,30-5,15 (m, 2H) , 4,20-3,70 (m, 4H) , 3,70 e 3,68 (dois s, 3H) , 3,30-2,20 (m, 10H), 2,90 (s, 3H) , 1,80-1, 40 (m, 4H) , 1,25-1,10 (m, 2H) , 0, 98-0, 80 (m, 2H) .

Exemplo 3C Ácido 4-{(ciclo-hexilmetil)-{2-{metil-{2-(2-pyridinil)-etil}-amino)-2-oxoetilJamino}-2(S)-(2-cloro-2-propenil)-4-oxobutanóico

Dissolveu-se o composto do Exemplo 3B (196,2 g, 0,41 mol) em acetona quente (150 mL) e diluiu-se com H2O (350 mL) . Ajustou-se o pH da solução a 7 por adição de KHSO4 aquoso e 33 ι

adicionou-se um preparado bruto de Subtilisina Carlsberg (preparado enzimático de Alcalase® 2.4L de "grau alimentar", Novo Nordisk Bioindustrials, EUA) (5 g) . A solução foi agitada vigorosamente e o pH foi mantido entre 7 e 8 utilizando um titulador de pH e uma bomba peristáltica ligada a uma solução aquosa de NaOH 1 N. Continuou-se a reacção até o pH estabilizar. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se com EtOAc (4x 200 mL) . A fase orgânica combinada foi lavada sequencialmente com H20 (2x 100 mL) e salmoura (100 mL) , seca (MgS04) e concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado parcialmente por passagem através de uma camada de 3 cm de gel de sílica utilizando EtOAc (1 L) como eluente. Por remoção do solvente obteve-se o éster (R) sob a forma de um óleo castanho escuro (103,69 g, rendimento 52 %), o qual foi recolhido para racemização e reciclagem (conforme descrito no Exemplo 3D) . Efectuou-se uma análise de HPLC sobre uma alíquota deste material utilizando uma coluna quiral (Condição B: isómero (R) , tR 154,1 min (98,8%); isómero (5), tR 170,8 min (1,2%)): RMN ΧΗ (éster metílico, mistura de rotâmeros; 400 MHz, CDCI3) δ 8,63-8,50 (m, 1H), 7, 67-7,57 (m, 1H) , 7,24-7,10 (m, 2H) , 5,27-5,15 (m, 2H) , 4,23-3, 67 (m, 6H) , 3,312,2 (m, 9H) , 1,8-1,1 (m, 9H) , 1,0-0,8 (m, 2H) ; EM (FAB) m/z 478 (MHr) . A fase aquosa da extracção anterior foi acidificada (pH 4) com KHSO4 aquoso a 20 % e extraída com EtOAc (4x 200 mL) . A fase orgânica combinada foi filtrada para remoção de algumas partículas insolúveis, lavada sequencialmente com Η20 (200 mL) e salmoura (2x 200 mL), seca (MgS04) e concentrada sob pressão reduzida, tendo-se obtido o composto em epígrafe sob a forma de uma espuma amarela acastanhada (67, 35 g, rendimento 34,3 %) : RMN XH (mistura de rotâmeros; 400 MHz, CDC13) δ 12-11 (s largo, 1H), 8,63-8,5 (m, 1H) , 7,70-7, 63 (m, 1H) , 7,307, 14 (m, 2H) , 5,32-5,18 (m, 2H), 4,08 e 4,0 (quartetos AB, rotâmeros principais, 2H) , 3,80-3,61 (m, 2H), 3,25-2,5 (m, 12H), 1,8-1,4 (m, 6H), 1,25-1,10 (m, 3H), 0,98-0,80 (m, 2H); EM(FAB) m/z 464 (MH+) . 34 A pureza enantiomérica do ácido (S) foi determinada por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição B: isómero (R) , tR 151,4 min (3 %); isómero {S), tR 166,8 min (97 %) ) após conversão de uma aliquota no éster metílico utilizando diazo-metano em Et20: RMN 1H (éster metílico, mistura de rotâmeros; 400 MHz, CDC13) δ 8,63-8,50 (m, 1H) , 7,67-7,57 (m, 1H) , 7,24--7,10 (m, 2H) , 5,27-5,15 (m, 2H) , 4,23-3, 67 (m, 6H) , 3,312,2 (m, 9H) , 1,8-1,1 (m, 9H) , 1,0-0,8 (m, 2H) .

Exemplo 3D

Racemização do éster 1-metílico do ácido 4-{(ciclo-hexilmetil)--{2-{metil-{2-(2-piridinil)etil}-amino}-2-oxoetil}amino}--2(R,S)-(2-cloro-2-propenil)-4-oxobutanóico O éster (R) obtido da primeira extracção do Exemplo 3C foi racemizado para reciclagem do modo seguinte. Dissolveu-se o éster (R) (3,19 g, 6,67 mmol) em MeOH (10 mL) e adicionou-se uma solução a 25 % (p/p) de NaOMe em MeOH (125 μL, 0,66 mmol). Agitou-se a mistura reaccional durante 17 h a 60 °C. Por análise de HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição B: isómero (R) , tR 163,2 min (50 %); isómero (5), t* 176,6 min (50 %)) verificou-se que a racemização tinha sido completa.

Exemplo 4 Éster 4-(1,1-dimetiletílico) do ácido 2(S)-(2-bromo-2--propen i1)-1,4-bu tanodi ói co O composto em epígrafe pode ser preparado seguindo os procedimentos descritos no Exemplo 1 com as seguintes modificações: Substituiu-se NaOMe/MeOH por NaHMDS (1 M em THF) e substituiu-se o malonato de dimetilo por malonato de dietilo.

Em alternativa, o composto em epígrafe foi também preparado do modo seguinte. O composto em epígrafe do Exemplo 1C (3,0 g, 9,77 mmol) foi dissolvido em THF (12 mL) e H20 (4 35

V

t mL) antes de ser tratado com LiOH (0,82 g, 19,5 mmol) . A mistura foi agitada rapidamente durante 15 h antes de ser diluída com EtOAc (100 mL) e solução saturada aquosa de NaHC03 (30 mL) . Separaram-se as fases e acidificou-se a fase aquosa por adição de HC1 aquoso 6 N. A fase aquosa foi em seguida extraída com EtOAc (2x 80 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura saturada (lx 60 mL) e secas (MgS04) . Por concentração sob pressão reduzida obteve-se o ácido carboxílico sob a forma de um óleo incolor que solidificou depois de ter sido deixado em repouso (2,34 g, rendimento 82%): RMN ΧΗ (200 MHz, CDC13) δ 5,7 (d largo, 1H) , 5,55 (dd, 1H) , 3,2 (m, 1H), 2,9 (m, 1H); EM (FAB) m/z 293, 295 (M+), Massa exacta; cálc. 293,0403, determinada 293,0388.

Dissolveu-se o ácido carboxílico da reacção anterior (1,0 9g, 3,72 mmol) em acetonitrilo (15 mL) e arrefeceu-se a 0 °C. Em seguida adicionou-se DBU (0,63 mL, 4,09 mmol) e incubou-se durante 10 min após o que se adicionou iodoetano (0,36 mL, 4,46 mmol). Deixou-se a mistura reaccional sob agitação durante 16 h antes de se concentrar. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc (80 mL) e lavou-se sequentemente com solução saturada aquoso de NaHC03 (lx 50 mL) , HC1 aquoso a 5 % (lx 40 mL) e salmoura saturada (lx 50 mL) . A fase orgânica foi seca (MgS04) e concentrada sob pressão reduzida. Por purificação por cromatografia em sílica com 10 % de EtOAc / Hex obtiveram-se 0,45 g (rendimento 40 %) de éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-etílico do ácido 2 (A, S) -(2-bromo-2-propenil)-1,4-butanodióico racémico: EM (FAB) m/z 322,8 (MT) , Anál. Cale. para Οι3Η2ι04Βγ: C, 48,61; H, 6,59, Determinado: C, 48,75; H, 6,68. O composto racémico da operação anterior foi submetido a uma resolução cinética utilizando Subtilisina Carlsberg seguindo o procedimento do Exemplo 2 E. Obteve-se o composto em epígrafe com 75 % de ee (análise efectuada por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) após derivatização de uma alíquota com diazometano para obter o éster metálico correspondente) e com um rendimento de 39,5 %. 36 r U, ^^

Exemplo 5 Éster 4-(1,1-dimetiletílico) do ácido 2 (R) -[(2-amino-4--tiazolil)metil]-1,4-butanodióico

Dissolveu-se o composto em epígrafe do Exemplo 2C (5,0 g, 16,3 mmol) em acetonitrilo (20 mL) e água desionizada (7 mL) . Adicionou-se N-bromossuccinimida (4,06 g, 23 mmol) numa única porção. Agitou-se a mistura durante 35 min antes de destruir o excesso de W-bromossuccinimida com 2-metoxipropeno (0,63 mL, 6,5 mmol). Após 3 min, tratou-se a mistura reaccional com tio--ureia (1,5 g, 19,6 mmol) numa única porção. Agitou-se a mistura reaccional durante uma hora antes de concentrar sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em EtOAc (150 mL) e lavou-se sequentemente com água (100 mL) e solução aquosa saturada de NaHC03 (30 mL) . A fase orgânica foi seca (MgSCL) e concentrada sob pressão reduzida. Purificou-se o extracto bruto por cromatografia relâmpago em sílica (5% MeOH/CHCl3) , tendo-se obtido 2,0 g (rendimento 41%) de éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2(R, S)-[(2-amino-4-tiazolil)metil]-l,4--butanodióico racémico: RMN ±H (400 MHz, CDCls) δ 6,17 (s, 1H), 4,89 (bs, 2H) , 3,68 (s, 3H) , 3,2 (m, 1H) , 2,95 (m, 1H) , 2,55- -2,8 (m, 2H) , 2,45 (m, 1H) , 1,43 (s, 9H) ; EM (FAB) m/z 301,4 (MH)+; HRMS (FAB) Cálc. para (MH)+, 301,12219. Determinado 301,12320. 0 composto racémico da reacção anterior foi submetido a uma resolução cinética utilizando Subtilisina Carlsberg

seguindo o procedimento do Exemplo 2E. 0 composto em epígrafe foi obtido com 97 % de ee (análise efectuada por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) após derivatização de uma alíquota com diazometano para obtenção do éster metílico correspondente) e um rendimento de 26,5 %. 37

Exemplo 6 Éster 4-(1,1-dimetiletilico) do ácido 2 (R)-{ (2-(1,1-di-metiletoxicarbonil)amino-4-tiazolil)metil}-1,4-butanodióico

Protegeu-se o grupo amina do éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2[R,S)-{(2-amino-4-tiazolil)metil}-l,4--butanodióico do Exemplo 5 sob a forma de um grupo t-butil--carbamato (Boc)?0 e de uma base adequada em THF. Por purificação por meio de cromatografia em sílica obteve-se o éster 4-(1,1-dimetiletílico) e 1-metílico do ácido 2(R,S)-{{2~ -(1,1-dimetiletiloxycarbonil)amino-4-tiazolil)-metil}-l,4--butanodióico racémico pretendido: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ 8,85 (bs, 1H) , 6,55 (s, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 3,17 (m, 1H) , 3,05 (m, 1H) , 2,84 (m, 1H) , 2,57 (m, 1H) , 2,41 (m, 1H) , 1,6 (s, 9H) , 1,4 (s, 9H); EM (FAB) m/z 401,1 (ΜΗΓ; HREM (FAB) Cálc. para (MH)*, 401,17462. Determinado 401,17570.

O composto racémico da reacção anterior foi submetido a uma resolução cinética utilizando Subtilisina Carlsberg seguindo o procedimento do Exemplo 2E. O composto em epígrafe foi obtido com 82,5 % de ee (análise efectuada por HPLC utilizando uma coluna quiral (Condição A) após derivatização de uma alíquota com diazometano para obtenção do éster metílico correspondente) e um rendimento de 35,5 %. Caracterizou-se o derivado éster metílico: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) δ 8,85 (bs, 1H), 6,55 (s, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 3,17 (m, 1H) , 3,05 (m, 1H) , 2,84 (m, 1H), 2,57 (m, 1H) , 2,41 (m, 1H) , 1,6 (s, 9H) , 1,4 (s, 9H); EM (FAB) m/z 401,1 (MH)+.

Lisboa, 18 de Julho de 2000 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE !NL'Ui' Γ.\! '-Λ.

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Claims

Γ REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparação de compostos da fórmula II:

em que R1 é um alcoxilo inferior, alquilamina inferior, di (alquilo inferior) amina ou R1 é A-NR3, em que A é R4R5NC(0)CH2 em que, (a) R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R5 é hidrogénio, alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituido com cicloalquilo inferior, fenilo ou um anel heterociclico (em seguida designado por "Het") que é um anel pentagonal ou hexagonal não substituído, monossubstituido ou dis- substituído que contém um ou dois heteroátomos seleccionados do grupo constituído por N, 0 e S e em que cada substituinte é seleccionado independentemente do grupo constituído por alquilo inferior, alcoxilo inferior, halo, amina ou alquilamina inferior; ou (b) R4 é alquilo inferior e R5 é R6R7N-Alq, em que R6 e R7 são cada um hidrogénio ou alquilo inferior e Alq é um radical alquilo divalente de cadeia linear ou ramificada que contém de um a seis átomos de carbono; ou (c) R4 é alquilo inferior e Rs é alcoxilo inferior; ou (d) R4 e R5 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam uma pirrolidina, piperidina, 4-{(alcoxilo inferior)-alcoxilo inferior)}-l-piperidinilo, morfolina ou tiomorfolina; R3 é alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituido com cicloalquilo inferior, fenilo, 4-(alquilo inferior)-fenilo, 4-(alcoxilo inferior)fenilo, 4-halofenilo, 3,4--metilenodioxifenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, ou Het, em que 1 I L-Cj ^^ Het possui o significado definido na presente reivindicação; e R2 é alquilo inferior, CC1=CHZ, CBr=CH2/ cicloalquilo inferior, 2-amino-4-tiazolilo, 2-(grupo protector de amina)amino-4-tiazolilo ou Het, em que Het possui o significado anteriormente definido, em que o termo "alquilo inferior", quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa um radical alquilo de cadeia linear que contém um a quatro átomos de carbono ou um radical alquilo de cadeia ramificada que contém três a quatro átomos de carbono; o termo "cicloalquilo inferior", quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa um radical de um hidrocarboneto cíclico saturado que contém três a sete átomos de carbono; o termo "alcoxilo inferior" significa um radical alcoxilo de cadeia linear que contém um a quatro átomos de carbono ou um radical alcoxilo de cadeia ramificada que contém três a quatro átomos de carbono; o termo "alquilamina inferior" significa radicais de alquilamina que contêm um a seis átomos de carbono; o termo "di(alquilo inferior)amina" significa um radical amina que possui dois substituintes alquilo inferior cada um dos quais contém um a seis átomos de carbono; e o termo "grupo protector de amina" significa um grupo com capacidade de proteger um grupo amina contra reacções indesejadas durante procedimentos de síntese; compreendendo o referido processo: (i) a hidrólise selectiva de um enantiómero de uma mistura racémica de um éster da fórmula III:

em que R1 possui o significado definido na presente reivindicação, R2 possui o significado definido na presente 2 V

reivindicação e B é um alquilo inferior, com uma quantidade eficaz de uma esterase seleccionada de Subtilisina Carlsberg ou α-quimotripsina, num meio reaccional que compreende H20 ou numa mistura de H20 e de um solvente orgânico inerte miscivel com H20, na presença de um hidróxido de um metal alcalino para manter o pH do meio entre 7,0 e 8,5, de modo a dar origem a uma mistura reaccional que contém compostos da fórmula II (sob a forma de um sal de um metal alcalino) e Illa:

e (ii) a separação a partir da mistura resultante da fase (i) do composto da fórmula II.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser alcoxilo inferior, alquilamina inferior ou di-(alquilo inferior) amina ou R1 ser AS-NRJ, em que A é R1R°NC(0)CH2 em que R1 é metilo e R° é metilo, 2— (2— -piridinil)etilo ou 2-(3-piridinil)etilo; R2 ser CC1=CH2, CBr=CH2, 2-amino-4-tiazolilo, 2-(grupo protector de amina)-amino-4-tiazolilo ou um anel heterocíclico pentagonal que contém um ou dois heteroátomos seleccionados do grupo constituído por N, O e S; R2 é 1-etilpropilo, ciclopentil-metilo, ciclo-hexilmetilo, 1(S)-ciclo-hexilmetilo, ciclo--heptilmetilo, fenilmetilo, 1(S)-feniletilo, (1-metilciclo--hexil)metilo; e B ser metilo ou etilo.
3 1 R* ser 1,1-dimetiletoxilo ou o radical monovalente: 2 Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por

R2 ser CC1=CH2, CBr=CH2, 2-amino-4-tiazolilo ou 2-(l,l-di-metiletoxicarbonil) amino-4-tiazolilo e B ser metilo.
4. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R2 ser CCl=CH2, CBr=CH2 ou 2-amino-4-tiazolilo.
5. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por R2 ser CC1=CH2 ou CBr=CH2.
6. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a esterase ser Subtilisina de Carlsberg.
7. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o meio reaccional na fase (i) conter desde 0 a 30 % (v/v) de um solvente orgânico inerte miscivel com H20.
8. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por o solvente orgânico inerte miscivel com H20 ser seleccionado de acetona e acetonitrilo.
9. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o hidróxido de metal alcalino ser seleccionado de NaOH, KOH e LiOH.
10. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por na fase (i) se manter uma temperatura entre 20 e 55 °C.
11. Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por na fase (i) se manter uma temperatura entre 20 e 37 °C. 4 | .1. Λ r
12. Composto da fórmula II: R

OH O (II) em que R1 é um alcoxilo inferior, alquilamina inferior, di (alquilo inferior) amina ou R-1· é A-NR3, em que A é R4R5NC(0)CH2 em que, (a) R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R5 é hidrogénio, alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituido com cicloalquilo inferior, fenilo ou um anel heterocíclico (em seguida designado por "Het") que é um anel pentagonal ou hexagonal não substituído, monossubstituido ou dis- substituído que contém um ou dois heteroátomos seleccionados do grupo constituído por N, 0 e S e em que cada substituinte é seleccionado independentemente do grupo constituído por alquilo inferior, alcoxilo inferior, halo, amina ou alquilamina inferior; ou (b) R4 é alquilo inferior e R5 é R5R,N-Alq, em que R6 e R7 são cada um hidrogénio ou alquilo inferior e Alq é um radical alquilo divalente de cadeia linear ou ramificada que contém de um a seis átomos de carbono; ou (c) R4 é alquilo inferior e R5 é alcoxilo inferior; ou (d) R4 e R3 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam uma pirrolidina, piperidina, 4-{(alcoxilo inferior)-alcoxilo inferior)}-1-piperidinilo, morfolina ou tiomorfolina; R3 é alquilo inferior ou alquilo inferior monossubstituido com cicloalquilo inferior, fenilo, 4-(alquilo inferior)-fenilo, 4-(alcoxilo inferior)fenilo, 4-halofenilo, 3,4--metilenodioxifenilo, 1-naftilo, 2-naftilo, ou Het, em que Het possui o significado definido na presente reivindicação; e R2 é CC1=CH2 ou CBr=CH2; 5 p ^^ em que ο termo "alquilo inferior", quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa um radical alquilo de cadeia linear que contém um a quatro átomos de carbono ou um radical alquilo de cadeia ramificada que contém três a quatro átomos de carbono; o termo "ciclo-alquilo inferior", quer isoladamente quer em combinação com outro radical, significa um radical de um hidrocarboneto cíclico saturado que contém três a sete átomos de carbono; o termo "alcoxilo inferior" significa um radical alcoxilo de cadeia linear que contém um a quatro átomos de carbono ou um radical alcoxilo de cadeia ramificada que contém três ou quatro átomos de carbono; o termo "alquilamina inferior" significa radicais de alquilamina que contêm um a seis átomos de carbono; o termo "di(alquilo inferior)amina" significa um radical amina que possui dois substituintes alquilo inferior cada um dos quais contém um a seis átomos de carbono.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por R1 ser um alcoxilo inferior, alquilamina inferior, di-(alquilo inferior) amina ou R' ser A-NR3, em que A é R4R5NC (0) CH2 em que R4 é metilo e R° é metilo, 2— (2— -piridinil) etilo ou 2-(3-piridinil) etilo; e R'5 ser 1-etil-propilo, ciclopentilmetilo, ciclo-hexilmetilo, l(5)-ciclo--hexiletilo, ciclo-heptilmetilo, fenilmetilo, 1(5)--feniletilo ou (l-metilciclo-hexil)metilo.
14. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por R1 ser 1,1-dimetiletoxilo ou o radical monovalente:

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15. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o grupo protector de amina ser seleccionado do grupo constituído por benziloxicarbonilo, 4-metoxibenziloxi-carbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo e 1,1-dimetiletoxi-carbonilo. Lisboa, 18 de Julho de 2000 O AGEN TE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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