PT86652B

PT86652B - Processo de preparacao de inibidores do esteroide 5-alfa-reductase e dos seus intermediarios

Info

Publication number: PT86652B
Application number: PT86652A
Authority: PT
Inventors: Dennis Alan Holt; Mark Alan Levy; Brian Walter Metcalf
Original assignee: Smithkline Beckman Corp
Priority date: 1987-01-28
Filing date: 1988-01-28
Publication date: 1992-02-28
Also published as: DK37388A; DK196691A; PT86652A; US4888336A; DK169438B1; ES2042725T3; ATE77388T1; DE3871965D1; DK168525B1; ZA88549B; JPS63192800A; IE61594B1; EP0277002B1; AU1077888A; IE880189L; DK169840B1; CA1325006C; DE3871965T2; EP0277002A3; DK196691D0

Description

MEMORIA DESCRITIVA

CAMPO DO INVENTO

O presente invento refere-se ao processo de preparação de 4-aza-5-alfa-17^-androsten-3-onas, substituídas na posição 17, possuidoras de uma ligação dupla 8(14), 7(8) ou 16(17) e opcionalmente possuidoras também de uma ligação dupla 1(2), de composições farmacêuticas contendo esses compostos e a métodos de utilização desses compostos para inibir o esteróide 5-alfa-reductass de mamíferos.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

A classe das hormonas esteróides, conhecidas como androgéneos, é responsável pelas características físicas que diferenciam os machos das fêmeas. De entre os vários órgãos que produzem androgéneos, os testículos são aqueles que produzem estas hormonas em maiores quantidades. Os centros localizados no cérebro exercem um controlo principal sobre o nível de prodjj ção de androgéneos. Numerosas manifestações físicas e estados de doença surgem quando o controlo ineficaz da produção resulta numa produção excessiva de hormona androgéneo. Por exemplo o acne vulgar, a seborreia, o hirsutismo feminino e a hipertro fia benigna da próstata estão correlacionados com níveis de ajn drogéneos elevados. Adicionalmente, a incidência da calvice típica masculina tem sido associada a níveis elevados de andro géneos.

A testosterona é o principal androgéneo secretado pelos testículos e é o esteróide androgénico principal no plasma dos machos. Sabe-se agora que os androgéneos 5-alfa-reduzidos são as hormonas activas nalguns tecidos como a próstata e a glându. la sebácea. A testosterona circulante serve assim como pró-hormona para a di-hidrotestosterona (DHT), o seu análogo 5-al^ fa-reduzido nestes tecidos mas não noutros como os músculos e os testículos. 0 esteróide 5-alfa-reductase é uma enzima NADPH-dependente que converte a testosterona em DHT. A importância desta enzima no desenvolvimento masculino foi profundamente re

291

SKB CASE 14342 alçada pela descoberta de uma deficiência genética em esteróide 5-alfa-reductase em pseudo-hermafroditas masculinos. Imperato-McGinley, 3., e col., (1979), J. Steroid Biochem. 11:637-648.

reconhecimento da importância dos níveis de DHT elevados em vários estados de doença estimulou diversos esforços no sentido de sintetizar inibidores desta enzima. Apresentam-se na tabela 1 as estruturas de diversos inibidores conhecidos do esteróide 5-alfa-reductase.

Tabela 1

Inibidores do esteróide 5-alfa-reductase

K|=1,1x10“⁶M Hsia e Voight (Reversível) 1973

1x10~⁶M (Irreversível)

Robaire, je col.,

1977

(3)

3,5xl0⁸ (Irreversível)

Blohm, £ col.,

1980

291

SKB CASE 14342

5xlO“⁹M (Reversível)

Liang, e. col. ,

1983

l,25xl0“⁶M (irreversível)

Petroiu, £ col,,

1981 primeiro inibidor a ser descrito foi o ácido 17-^3-carboxílico (1), por Hsia e Voight em 1973, 0. Invest, Dermat,

62:224-227, 0 secosteroide (2) foi o inibidor descrito a seguir e reconheceu-se também a sua utilidade como um produto com afi nidade vincada para o 5-alfa-reductase. Robaire, B., e col. , (1977), J, Steroid Biochem, 8:307-310. A diazocetona (3) foi referida como um inibidor potente, tempo-dependente, do esteréide 5-alfa-reductase. Blohm, T.R., e col. (1980), Biochem. Biophys. Res. Comm, 95:273-280; Patente Norte-Americana 4 317 817, 2 Março, 1982. 0 composto (4) é o exemplar de um grupo de esteróides 4-aza, inibidores do esteróide 5-alfa-reductase, descrito na Patente Norte-Americana 4 377 584, publica da em 22 de Março de 1983 e em Liang, T. e. col. (1983), 3. Steroid Biochem. 19, 385-390. 0 6-metileno esteróide (5) mostrou também ser um inactivador tempo-dependente do esteróide 5-alfa-reductase. Petrou/, V., e col. (1981), Steroids 38:121-140.

Encontram-se também descritos outros inibidores do esteróide 5-alfa-reductase. A Patente Norte-Americana 4 361 578, publicada em 2 de Junho de 1986, descreve uma classe de inibidores de enzimas homoesteróides. As patentes Japonesas

291

SKB CASE 14342

-5J60146855-A e J60116657-A revelam diversos derivados da anilina possuidores de numerosas actividades, incluindo actividade inibidora da 5-alfa-reductase. A Patente Japonesa J60142941-A, refere cetonas substituídas com fenilo, possuidoras de actividade inibidora da 5-alfa-reductase e a Patente Europeia EP173516-A refere várias amidas substituídas com fenilo» possui doras de actividade semelhante. Shiseido referenciou derivados do terpeno que são inibidores activos do esteróide 5-alfa-reductase, na patente Japonesa N5. J59053417-A.

SUMARIO DO INVENTO presente invento assenta na descoberta de que o esteróide 5-alfa-reductase ê inibido por compostos 4-aza-5-alfa-androsten-3-onas substituídos na posição 17, possuindo uma M gação dupla 8(14), 7(8) ou 16(17) e possuindo também, opcional, mente, uma ligação dupla 1(2). Os compostos referidos são ini bidores potentes de enzimas.

Os compostos do invento, os compostos utilizados nas conj posições farmacêuticas do invento e nos métodos do invento prje sentemente preferidos incluem:

ácido 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona-(20R)-20-carboxílico,

20(R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona, e

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17^-N,N-diis£ propilcarboxamida.

Segundo um outro aspecto do presente invento, são também proporcionados novos intermediários e novos processos, úteis para a preparação dos compostos inibidores do esteróide 5-alfja -reductase, do presente invento.

invento proporciona também um método para inibir a acti vidade do esteróide 5-alfa-reductase em mamíferos, incluindo hu manos, método esse que compreende a administração interna a um sujeito que o necessite, de uma quantidade eficaz de um compos. to inibidor da 5-alfa-reductase do presente invento.

291

SKB CASE 14342

é.

-6Incluídas no presente invento encontram-se composições farmacêuticas copreendendo um veículo farmacêutico e compostos úteis para os métodos do invento.

descriçAo detalhada do invento

Os compostos do presente invento, que inibem a 5-alfa-

em que:

á1, Δ^, _{e s}g₀ _CH₉-CH₉- ou -CH=CH-, desde que

16 Z Z um de entre Δ f Δ ^e Δ seja -CH=CH;

Rji é H ou alquilo Cj__g5

R₂ é H ou alquilo C^_g;

I R₃ é (1) hidrogénio-alfa? hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e (a) 0 ¹¹ 4

-Alq-C-R⁴ em que Alq está ausente ou presente na fo_r ma de uma cadeia de hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada com 1 a 12 áto4 mos de carbono, e R é (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo C ,

291

SKB CASE 14342 (iv) hidroxi-alquilo ^cj_g» (v) alcoxilo C^ θ, (vi) NR⁵r6, em que R⁵ e R⁶ são independentemente seleccionados entre hidrogénio, alquilo C^-θ de cadeia li. near ou ramificada, cicloalquilo

C, ,, fenilo; ou Fp e R^ em conjun y-o to com o átomo de azoto a que se eri contram ligados representam um anel saturado de 5 a 6 membros, compreeri dendo até, no máximo, um outro hete roátomo seleccionado de entre azoto e oxigénio, ou

7 (vii) OR , em que R é hidrogénio, metal alcalino, alquilo C^ de cadeia li near ou ramificada, benzilo, ou (b) -Alq-OR , em que Alq está sempre presente e tem o significado dado acima, e R é (2)

(i)	fenil-(alquilcarbonilo C^ ^),
(ii)	cicloalquilcarbonil C₅__iQ,
(iii)	benzoílo,
(iv)	alcoxicarbonilo
(v)	amino ou amino substituído por	al-
	quilo C^_g, carbonilo, ou
(vi)	hidrogénio, desde que Alq seja	uma
	cadeia ramificada C^-Cg,
=CH-Alq-CO-	R^ ou =CH-Alq-OR^, em que Alq está
presente ou	ausente e tem o significado dado
. _4 acima, e R	O e R têm os significados dados	aci

ma podendo ainda R ser também hidrogénio ou al^ quilcarbonilo ^Cl-20^; (3)

291

SKB CASE 14342

-8em que a ligação a tracejado substitui o hidrogénio 17-alfa,

9 (4) hidrogénio-alfa e NHCOR , em que R é alquilo

6 5 6

12 ^ou NR R onde R e R têm os significados dados acima, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazolilo, ou (7) ceto;

ou um seu sal, farmaceuticamente aceitável.

Como aqui utilizado, 0 termo alquilo C^_ , significa uma cadeia de hidrocarbonetos, linear ou ramificada, possuindo 1 a n átomos de carbono.

Os compostos preferidos de entre os compostos do presen-

(II) em que:

Z é H, alquilo, alcoxilo ou NR^^R^-*· onde e R^ são, independentemente, alquilo C^_g,

Alq está ausente ou presente na forma de uma cadeia de hidrocarbonetos linear ou ramificada, com 1 a 4 átomos de carbono, e

2

R e R são definidos como na reivindicação 1; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Presentemente, os compostos mais preferidos do presente

291

SKB CASE 14342 invento são:

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17p>-N,N-diiso propilcarboxamida;

ácido 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona-(20R)-20-carboxilico; e (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona.

Também preferidos de entre os compostos do presente inveji to são os compostos de fórmula (X):

R³⁰

(X) em que

Alq	está ausente	ou	presente na	forma	de	uma cadeia	de
hidrocarbonetos linear	ou	ramificada,	com 1	a 4	átomos de	car-
bono,
_r30	é hidroxilo,	halo, alcoxilo	^Cl-4’	ou	^C02^Ca^H2a+l	onde

a é 1-5, e

2

R e R têm os significados descritos para a Fórmula (I)

Os compostos de Fórmula (I) em que â ou Δ são

-CH=CH-, são preparados de acordo com qualquer uma das sínteses, igualmente preferidas, apresentadas nos Esquemas I e II.

123

Nos Esquemas I e II, R , R e R são definidos como para Fórmu

Π la (I) e R^z é definido como para a Fórmula (II)

291

SKB CASE 14342

-10Esquema I

(I) (I)

291

SKB CASE 14342

(A) (N)

(0) (P)

(I)

291

SKB CASE 14342

-12De acordo com o esquema I, o composto A é dissolvido num solvente orgânico adequado como um di-haleto de alquilo num alcanol preferivelmente cloreto de metileno em metanol, arrefecido até aproximadamente -lOOec a 30°C, preferivelmente -785C e tratado com dióxido de ruténio/per-iodato de sódio, permanganato de potássio, ou, preferivelmente, com um excesso de ozono. A solução resultante é purgada com um gás inejr te como argon à medida que é aquecida até aproximadamente 252C a 502C, preferivelmente 402C. A solução é então concentrada, o ácido carboxilico (composto (B)) em que R é hidrogénio é tomado num solvente orgânico adequado como dimetilacetamida, e na presença de uma base como bicarbonato de sódio ou 1,8-diazja biciclo/~5,40_Tundec-7-eno (DBU), é feito reagir com um haleto de alquilo como cloreto de metilo, cloreto de etilo, brometo de metilo ou, preferivelmente, iodeto de metilo, para ori. ginar um composto de fórmula (B). Alternativamente, o composto de fórmula (B) é preparado por reacção do ácido carboxilico com diazometano.

ceto-éster (B), num solvente orgânico adequado como acetato de etilo é então feito reagir com cloreto de fenilsele nilo sob um gás inerte como argon. A solução resultante é arrefecida a aproximadamente 02C - 302C, preferivelmente 152C e tratada com um agente oxidante como ozono, ácido meta-clorope£ benzóico ou, preferivelmente, peróxido de hidrogénio mantendo-se a temperatura abaixo de aproximadamente 30SC para originar um composto de fórmula C.

Os compostos de fórmula C são então combinados com amónia ou com uma alquilamina seleccionada de forma a possju ir o substituinte desejado, e aquecidos a aproximadamente 1505C - 2002C, preferivelmente 1803C, para preparar os compostos de fórmula D. Os compostos de fórmula (I) em que é -CH=CH- são então preparados por hidrogenação convencional dos compostos de fórmula D, usando agentes de hidrogenação como dióxido de platina, paládio em carbono, níquel Raney, preferivelmente paládio em carbono e solventes de hidrogenação como solventes orgânicos adequados. Os compostos de fórmula (i) em

291

SKB CASE 14342

-13*7 que & é -CH=CH- são preparados por hidrogenação dos compostos de fórmula D usando níquel Raney efectuando um controlo rigoro so da reacção de forma a minimizar ou evitar a formação de com postos de fórmula (I) em que /1 seja -CH=CH-.

A preparação dos compostos de fórmula (I), de acordo com o Esquema II inicia-se com os mesmos materiais de partida que no Esquema I. Os compostos de fórmula N são preparados por reacção dos compostos de fórmula A com uma quinona oxidante co mo cloranil num solvente orgânico adequado como t-butanol. Os compostos de fórmula N são então feitos reagir com um composto tiol nucleofílico como tiofenol, butilmercaptano, ou preferivelmente ácido tiolacético para produzir compostos de fórmula 0.

A tioacetilenona de fórmula 0 é então dissolvida num sol. vente orgânico adequado como um di-haleto de alquilo num alcanol C^ preferivelmente cloreto de metileno em metanol, arrefecida a aproximadamente -1002C - 09C, preferivelmente -782C e tratada com um excesso de ozono. Depois de purgada com um gás inerte como argon, a solução é concentrada e tratada com uma base forte, como hidróxido de sódio, para produzir um resíduo. 0 resíduo é então dissolvido num solvente orgânico adequado, arrefecido a aproximadamente -302C - 302C, preferivelmente 02C e, na presença de uma base como bicarbonato de sódio ou DBU, é tratado com um haleto de alquilo como cio.

reto de metilo, cloreto de etilo, iodeto de metilo ou preferivelmente diazometano, para originar um composto de fórmula P.

Os compostos de fórmula P são então combinados com amónia ou com uma alquilamina seleccionada de forma a possuir o substituinte R¹ desejado, e aquecidos a aproximadamente 1502C - 2002C, preferivelmente 1802C, para originar compostos de fórmula Q. Os compostos de fórmula (l) são então preparados por hidrogenação dos compostos de fórmula P, usando agentes de hidrogenação como paládio em carbono, ou níquel Raney, preferivelmente dióxido de platina e solventes de hidrogenação tais como solventes orgânicos adequados. Tal como no Esquema

I, os compostos de fórmula (l) em que 4 é -CH=CH- são prepa67 291

SKB CASE 14342

-14rados por hidrogenação dos compostos de fórmula Q usando níquel Raney e efectuando um controlo rigoroso da reacção de forma a minimizar ou evitar a formação de compostos de Fórmula (i) em que seja -CH-CH-.

Os compostos de fórmula (I) em que 4^ é -CH=CH-, são pre parados a partir dos compostos de fórmula (i) sintetizados de acordo com os Esquemas I ou II, por meio de reacçães de oxidação e eliminação conhecidas como descrito, por exemplo, no Exeni pio 7. Os compostos de fórmula (I) em que é -CH=CH-, são preparados por reacções de desidrogenação conhecidas como descrito, por exemplo, no Exemplo 10, a partir de compostos 17-ce to de fórmula I, sintetizados de acordo com os Esquemas I ou II.

Os compostos de fórmula A, que são os materiais de parti da nos Esquemas I e II, são preparados a partir dos compostos

17-ceto análogos por procedimentos conhecidos, tal como descri to em 2 3. Fried e J. Edwards, Organic Reactions in Steroid Chemistry, Pubí Van Nostrand Reinhold Company (1972). Os com postos 17-ceto encontram-se disponíveis e podem ser sintetizados por procedimentos conhecidos. Os materiais de partida são

3 seleccionados de forma a que os grupos R e R no composto de

3 fórmula A sejam idênticos aos grupos R e R no composto de fój?

mula (I) a ser sintetizado. Alternativamente, os grupos R e R³ do composto de fórmula A são seleccionados de forma a pode- rem ser convertidos por procedimentos conhecidos nos grupos R e R^ do composto de fórmula I pretendido, por meio de passos adicionais no processo de síntese. Por exemplo, os compostos de fórmula (I) em que R é um ácido carboxílico são convertidos nas amidas correspondentes por reacção com aminas ou aminas substituídas, via cloretos de ácido correspondentes. De forma idêntica, os compostos de fórmula (I) em que R é CH^CHCOOH são preparados por oxidação do álcool correspondente.

Os sais de adição de ácido, farmaceuticamente aceitáveis, dos compostos do invento são formados, quando tal for apropria do, com ácidos orgânicos ou inorgânicos fortes ou moderadamente fortes na presença de uma amina básica, por métodos conheci

291

SKB CASE 14342

-15dos na especialidade. Por exemplo, faz-se reagir a base com um ácido inorgânico ou orgânico num solvente aquoso-miscível, como etanol, com isolamento do sal por remoção do solvente ou num solvente aquoso-imiscível quando o ácido é nele solúvel, como éter etílico ou clorofórmio, com separação directa ou isolamento do sal desejado por remoção do solvente. Exemplos de sais de adição de ácido incluídos no presente invento são os sais maleato, fumarato, lactato, oxalato, metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, tartarato, citrato, cloridrato, bromidrato, sulfato, fosfato e nitrato. Os sais de adi. ção de base, farmaceuticamente aceitáveis, dos compostos do presente invento preparados por métodos conhecidos, incluem os sais de metais alcalinos e alcalino-terrosos não tóxicos, por exemplo sais de cálcio, sódio e potássio? sais de amónio e sais de bases orgânicas não tóxicas como trietilamina, butilamina, piperazina e (tri-hidroximetil)metilamina.

Na preparação dos compostos de fórmula I, do presente i_n vento, sintetizaram-se novos intermediários com as fórmulas III e IV seguintes

em que

R¹ é H ou alquilo 5

R é H ou alquilo θ;

hidrogénio-alfa, hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e

R é (D

291

SKB CASE 14342

-16(a) 0

II ₄

-Alq-C-R⁴ onde Alq está ausente ou presente na forma de uma cadeia de hidrocarbonetos, linear ou ramificada, com 1 a 12 átomos de carbo_d4 , no, e R e (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo C^__g, (iv) hidroxialquilo C^__g, (v) alcoxi C₁__g, (vi) NR^Rá, onde R^ e R^ são cada um independentemente, seleccionados de eri tre hidrogénio, alquilo C^ _g de cadeia linear ou ramificada, cicloal-

6 quilo C^ fenilo; ou R e R em conjunto com o átomo de azoto a que se encontram ligados representam um anel saturado de 5 a 6 membros compreendendo até, no máximo, um outro heteroátomo seleccionado entre oxigénio e azoto, ou

7 (vii) OR , onde R é hidrogénio, metal al.

calino, alquilo de cadeia near ou ramificada, benzilo, ou 8 -Alq-OR , onde Alq está sempre presente	li e
tem o	significado dado acima, e R é
(i)	fenil-(alquilcarbonilo C^ _g),
(ii)	cicloalquilcarbonilo C^^g,
(iii)	benzoílo,
(iv)	alcoxicarbonilo C^_g,
(v)	amino, ou amino substituído por quilo Cj__g, carbonilo, ou	al-

291

SKB CASE 14342

-17(ui) hidrogénio, desde que Alq seja uma cadeia ramificada C^-Cg, (2) =CH-Alq-C0-R^Zi ou =CH-Alq-0R®, onde Alq está pre sente ou ausente e tem 0 significado dado ante-

8 riormente, e R e R têm os significados dados 8 anteriormente e R pode também ser hidrogénio ou alquilcarbonilo Cj__20’ (3)

alquilo significaem que a ligação a tracejado substitui 0 hidrogénio 17-alfa, (4) hidrogénio-alfa e NHCDR^ em que R^ é ^1-12 ^ou NR^R^ em que R^ e R^ têm os dos dados anteriormente, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazolilo ou (7) 17-ceto.

(IV) em que

R₂ é H ou alquilo C^ θ;

R₃ é (1) hidrogénio-alfa, hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e

291

SKB CASE 14342

-18II 4

-Alq-C-R⁴ em que Alq está ausente ou presente na fo_r ma de uma cadeia de hidrocarbonetos, linear ou ramificada, com 1 a 12 átomos de carbo4 no, e R é (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo (iv) hidroxialquilo , (v) alcoxilo (vi) NR^R^, em que R^ e R^ são independeji temente seleccionados entre hidrogé. nio, alquilo Cj__g de cadeia linear ou ramificada, cicloalquilo C^, fe. nilo; ou R^ e r\ em conjunto com o átomo de azoto a que se encontram ligados, representam um anel satura do de 5-6 membros compreendendo até, no máximo, um outro heteroátomo seleccionado entre oxigénio e azoto, ou

7 (vii) OR , em que R é hidrogénio, metal alcalino, alquilo Cj_]_g de cadeia linear ou ramificada, benzilo, ou (b) -Alq-OR , em que Alq se encontra sempre presente e tem o significado dado anterioj?

mente, e R é (i) fenil-(alquilcarbonilo C^ ^), (ii) cicloalquilcarbonilo C₅_₁₀, (iii) benzoílo, (iv) alcoxicarbonilo

291

SKB CASE 14342 (v) amino, ou amino substituído por alquilo C^ g, carbonilo, ou (vi) hidrogénio, desde que Alq seja uma cadeia ramificada C^-Cg, (2) sCH-Alq-CO-R^ ou =CH-Alq-OR®, em que Alq se encontra presente ou ausente e tem 0 significado

8 dado acima, e R e R têm os significados dados acima e R é também hidrogénio ou alquilcarboni ^{10 C}l-2O⁵ (3)

em que a ligação a tracejado substitui 0 hidrogénio 7-alfa,

9 (4) hidrogénio-alfa e NHCOR em que R é alquilo

6 5 6 ^0U NR R em Al^ue R ^e R têm os significados dados anteriormente, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazolilo, (7) 17-ceto, e

R^Q é alquilo ^Cl-8*

Uma vez que os compostos de Fórmula (i) inibem a actividade do esteróide 5-alfa-reductase, apresentam utilidade tera pêutica no tratamento de doenças e condições em que diminuições na actividade da DHT produzem 0 efeito terapêutico desejado. Essas doenças e condições incluem acne vulgar, seborreia, hirsutismo feminino, doenças da próstata tais como hipertrofia prostática benigna e calvície masculina típica. A potência de diversos compostos foi testada na inibição do esteróide humano

5-alfa-reductase, usando tecidos de próstatas humanas hiperplás ticas. Na determinação da potência de inibição do enzima huma no, empregou-se 0 procedimento seguinte:

291

SKB CASE 14342

-2 0Próstatas humanas congeladas foram descongeladas e corta das em pequenos pedaços ( 45 mm³). 0 tecido foi homogeneizado em 3 a 5 volumes de tampão fosfato de potássio 20 mM, pH 6,5, contendo sacarose 0,33 M, ditiotreitol 1 mM e NADPH 50 UM, com um aparelho Brinkmann Polytron (Sybron Corporation, Westbu ry, Nem York). A solução foi sujeita a sonicação durante 3 a 5 minutos com um sonicador (Branson Sonic Potuer Co.) seguida de homogeneização manual num homogeneizador Dounce de vidro em vidro (Kontes Glass Company, Vineland, Nem Oersey).

As partículas prostáticas foram obtidas por centrifugação diferencial a 600 ou 1000 x g durante 20 minutos e 140 000 x g durante 60 minutos a 49C. A pelota obtida na centrifugação a 140 000 x g foi lavada com um volume de 5 a 10 vezes o volume de tecido, do tampão descrito acima e recentrifugado a 140 000 x g. A pelota resultante foi suspensa em tampão fosfato de po, tássio 20 mM, pH 6,5, contendo 20% de glicerol, ditiotreitol 1 mM, e NADPH 50 JaM. A solução de partículas em suspensão foi armazenada a -80SC.

Uma quantidade constante de /^^^C^-testosterona (52 a 55 mCi/mmol, Neuí England Nuclear, Boston, MA) em etanol e quan. tidades variáveis do inibidor potencial em etanol, foram depositadas em tubos de ensaio e concentradas até à secura num apai relho SAVANT Speed Vac. A cada um dos tubos adicionou-se tampão, 20 J>1 de NADPH 10 mM e uma alíquota de solução com partículas prostáticas perfazendo a um volume final de 0,5 ml com citrato de sédio 50 mM, pH 5,0. Apés incubação da solução a 37QC durante 20 a 30 minutos a reacção foi interrompida pela adição de 4 ml de acetato de etilo e de 0,25 jUmol (de cada) de testosterona, di-hidrotestosterona, androstanodiol e androstanodiona, como veículos. A camada orgânica foi removida para um segundo tubo de ensaio e evaporada até à secura num Speed Vac. 0 resíduo foi dissolvido em 20 a 30 j^l de clorofórmio, espalhado numa faixa individual de uma placa de TLC, em silica gel, pré-canelada com 20 x 20 cm (Si 250F-PA, Baker Chemical) e revelada duas vezes com acetona-clorofórmio (1:9). 0 teor radioquímico nas bandas do substracto e dos produtos foi deter;

291

SKB CASE 14342

-21minado com um aparelho BIOSCAN Imaging Scanner (Bioscan, Inc., Washington, D.C.). Calculou-se a percentagem de radiomarcador recuperado convertido em produto, a partir do qual se determinou a actividade enzimática. Todas as incubações foram conduzidas de tal forma que não mais de 12% do substrato (testosterona) fosse consumido.

Os dados obtidos experimentalmente foram ajustados com o auxílio de um computador, a uma função linear representando o inverso da actividade enzimática (1/velocidade) contra a concentração variável de inibidor (Dixon, Fi. (1953), Biochem. 3., 55, 170). Assumindo que o inibidor de esteróide é um inibidor competitivo contra a testosterona, pode-se calcular um valor para a constante de inibição (IC) a partir da equação 1:

K_± = (B/A) /S /K_m + 1) Equação 1 em que B é a ordenada na origem, A é o coeficiente angular da recta, S é a concentração de substrato (testosterona) utilizada na experiência, e K é a constante de Michaelis-Menton do m

substrato (testosterona) determinada numa experiência separada e que se verificou ser 4,5

291

SKB CASE 14342

-22Tabeia II

Constantes de inibição do Esteróide 5-alfa-reductase, Proetático, Humano

Composto K_i (nFl)

450 + 20

291

SKB CASE 14342

-23A tabela II revela os resultados dos testes acima referi, dos e demonstra que os compostos do invento testados são inib_i dores potentes do esteróide humano 5-alfa-reductase humana.

Alguns compostos do invento foram também testados em relação à sua potência in vivo de inibição da actividade do este róide 5-alfa-reductase. Administraram-se a ratos macho Charles River CD, com 48 dias de idade e pesando aproximadamente 200 g, os compostos do invento apresentados na tabela III dissolvidos em propileno-glicol e diluídos em solução salina normal. Os compostos foram administrados oralments em dosagens de 5, 10 e 20 mg/kg. Seis horas após a administração dos compostos, sacrificaram-se os animais, excisaram-se as próstatas ventralmeri te e mediram-se os níveis de testosterona (T) e DHT, pelo procedimento seguinte.

tecido da próstata foi excisado, limpo, pesado, cortado e lavado com tampão fosfato. 0 tecido foi então homogeneizado em tampão fosfato e extractado por adição de acetato de etilo e mistura num misturador orbital durante quarenta e cinco minutos. 0 acetato de etilo foi evaporado, o resíduo foi reconstituído em etanol e filtrado numa centrífuga usando papel de filtro 0,45 j^M. Os componentes foram então separados por cromatografia HPLC de fase inversa, recolhendo fracçães T e DHT. As fracçães foram reduzidas até à secura e reconstituídas em tampão de ensaio T/DHT, padrão, posto à disposição por Amersham. Os níveis de T e de DHT foram então medidos usando técnicas padrão como radio-imunoensaio.

291

SKB CASE 14342

-24Tabela III

Composto	T*	DHT	T/DHT
Controlo	0,67 + 0,04	2,08 + 0,16	0,32
(20R)-hidroxime-	5 mg/kg 0,54 +. 0,27	0,72 + 0,21	0,72
til-4-metil-4-aza	10 mg/kg 0,44 +, 0,13	0,53 + 0,12	0,83
-5-alfa-8(14)-	20 mg/kg 0,45 +. 0,12	0,49 + 0,14	0,92
-pregnen-3-ona
z Acido 4-metil-4-	5 mg/kg 0,34 +. 0,11	0,43 + 0,12	0,79
-aza-5-alfa-8(14)-	10 mg/kg 0,26 +. 0,07	0,34 + 0,09	0,76
-pregnen-3-ona-	20 mg/kg 0,30 +. 0,04	0,34 + 0,06	0,88

-(20R)-2O-carboxíli co * Os níveis de T e de DHT são dados em ng/100 mg de tecido prostático ventral £ SEM

Na tabela III comparam-se os resultados obtidos nos animais tratados com compostos, com os obtidos com os animais controlo, tratados com o veículo. Tal como os resultados demonstram, cada um dos níveis de dosagem testado produziu diminuições significativas nos níveis de DHT prostáticos, aumentando assim as razões T/DHT. Assim sendo, os compostos do presente invento, são inibidores potentes in vivo do esteróide 5-alfa-reductase.

Foi também examinado o comportamento temporal, in vivo, da inibição do esteróide 5-alfa-reductase produzida pelos compostos do invento. Usando procedimentos semelhantes aos utili. zados na produção dos dados apresentados na tabela III, administrou-se aos ratos o composto 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17 -N,N-diisopropilcarboxamida e excisou-se o tecido prostático do ventre para efectuar determinações dos níveis de T e DHT em vários instantes posteriores à administração. Como demonstram os resultados apresentados na Tabela IV, quando com parados com os controlos, observaram-se diferenças segnificati vas nos níveis de DHT a 1, 2, 4 e 8 horas após a administração

291

SKB CASE 14342

-25do composto.

Tabela IV

T (ng/100 mg tecido)*	Controlo	1 hora	2 horas	4 horas	8 horas
0,436+0,12	0,533+0,15	0,481+.0,12	0,607^0,24	0,565+.0,16
DHT (ng/100 mg tecido)*	0,754+0,10	0,532+0,8**	0,496+0,05**	0,504+0,09**	0,498+0,04**
t/dht	0,58	1,00	0,97	1,20	1,13

Dados apresentados como média + SEM

P < 0,05

Os compostos de Fórmula I podem ser incorporados em formas de dosagem convenientes, tais como cápsulas, comprimidos ou preparações injectáveis. Podem empregar-se veículos farmacêuticos sólidos ou líquidos. Os veículos sólidos incluem, ami do, lactose, sulfato de cálcio di-hidratado, terra alba, sacarose, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio e ácido esteárico. Os veículos líquidos incluem xaro pe, óleo de amendoim, azeite, solução salina e água. Similarmente, o veículo ou diluente pode incluir qualquer material de libertação prolongada como monoestearato de glicerilo ou dieste arato de glicerilo, sozinho ou com uma cera. A quantidade de veículo sólido varia muito mas, preferivelmente, encontrar-se-á compreendida entre cerca de 25 mg a cerca de 1 g por unidade de dosagem. Quando se utiliza um veículo líquido, a preparação encontrar-se-á na forma de um xarope, elixir, emulsão, cápsula de gelatina mole, líquido injectável estéril, tal como uma ampola, ou suspensão líquida aquosa ou não aquosa.

As preparações farmacêuticas são elaboradas de acordo com técnicas convencionais de química farmacêutica, envolvendo mis. tura, granulação e compressão, quando necessário, para as formas em comprimidos ou mistura, enchimento e dissolução dos in-

291

SKB CASE 14342

-26gredientes, como apropriado, para originar os produtos orais ou parentéricos desejados.

As doses dos compostos de Fórmula I nas unidades de dosa gem farmacêuticas de acordo com o descrito anteriormente, serão uma quantidade eficaz, não tóxica, seleccionada na gama de 0,1-1000 mg/kg, de composto activo, preferivelmente 1-100 mg/kg. A dose seleccionada é administrada, a um paciente humano neces. sitado de inibição do esteróide 5-alfa-reductase, 1 a 6 vezes por dia, oralmente, rectalmente, por injecção ou continuamente por infusão. As unidades de dosagem oral para administração humana contêm preferivelmente de 1 a 500 mg de composto activo. E preferível a administração parentérica, que utiliza dosagens inferiores. A administração oral em dosagens superiores, no entanto, pode também ser utilizada desde que seja conveniente e segura para o paciente, método do presente invento, de inibição da actividade do esteróide 5-alfa-reductase em mamíferos, incluindo humanos, compreende a administração interna a um sujeito necessitado dessa inibição de uma quantidade de composto de Fórmula I eficaz como inibidora do esteróide 5-alfa-reductase.

Também contemplados são os compostos equivalentes aos compostos de Fórmula I, mas aos quais foram adicionados substi tuintes a qualquer uma das posições não substituídas dos compostos de Fórmula I ou nos quais o grupo metil em C-13 está a_u sente ou substituído por alquilo Cl-4, desde que esses compostos tenham a utilidade farmacêutica dos compostos de Fórmula I.

0s exemplos seguintes ilustram a preparação dos compostos de Fórmula I e das composições farmacêuticas contendo esses compostos. Os exemplos não pretendem limitar o âmbito do invento tal como aqui anteriormente definido e reivindicado no final.

291

SKB CASE 14342

.. /

Vi’' .

-27EXEMPLO I (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona (i) (20R)-20-hidroxinietil-4-pregnen-3-ona

A uma solução de (20R)-3-oxopregnen-4-eno-20-carboxaldeí_ido (100 g, 305 mmol, comercializado pela Upjohn) em 1500 ml de etanol e 250 ml de tetra-hidrofurano, arrefecido a cerca de 59C, adicionou-se boro-hidreto de sódio (3,35 g, 89 mmol) em pequenas porções de forma a manter a temperatura abaixo de 1550. Após 20 minutos, adicionou-se ácido acético (100 ml) e concentrou-se a mistura a uma forma de lama num evaporador rotativo. 0 resíduo foi então tomado em clorofórmio, lavado sucessivamejn te com água e com solução de salmoura, seco então sobre carbonato de sódio e concentrado para originar (20R)-20-hidroximetil -4-pregnen-3-ona na forma de um sólido branco (100 g, 100%).

(ii) Metil (20R)-20-hidroximetil-5-oxo-3,5-secopregnan-3-oato

A enona acima referida (100 g, 303 mmol) foi dissolvida em 1000 ml de diclorometano e 500 ml de metanol, arrefecida a -789C e tratada com um excesso de ozono. A solução resultante foi purgada com argon e aquecida a 409C. A solução foi então concentrada a um óleo viscoso incolor, tomada em 500 ml de dimetilacetamida e agitada no escuro, sob atmosfera de argon, com 50 g de bicarbonato de sódio e 50 ml de iodeto de metilo duraji te 48 horas. A mistura reaccional foi então vertida em 4 yjl de solução de salmoura arrefecida e extractada com diclorometa no. Os extractos orgânicos foram cuidadosamente lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de sódio e concentrados a um óleo amarelo-avermelhado. Este óleo foi filtrado através de 1000 g de sílica gel com acetato de etilo a 25% em hexano para originar, após concentração, o ceto éster metil (20R)-20-hidroximetil-5-oxo-3,5-secopregnan-3-oato na forma de um óleo viscoso amarelo claro (71,8 g, 65%).

(iii) Metil (20R)-20-hidroximetil-5-oxo-3,5-seco-6-pregnen-3-oato

Ao ceto éster acima (71,8 g, 197 mmol) em 1500 ml de ace

291

SKB CASE 14342

-28tato de etilo, adicionou-se cloreto de fenilselenilo (45 g, 235 mmol) e a solução escura resultante foi agitada sob argon durajn te três horas. A solução foi então lauada com água, solução sa turada de bicarbonato de sódio, água, salmoura e seca sob carbonato de potássio. A solução de acetato de etilo foi então arrefecida a 15^0 e tratada com peróxido de hidrogénio a 30% (65 ml), mantendo a temperatura abaixo de 309C. Após 1,5 horas, a solução foi lavada com água, solução saturada de carbonato de sódio, água, salmoura, seca e concentrada a uma espuma amarela (65 g). A cromatografia em coluna (sílica, acetato de etilo a 25% em hexano) originou a éster-enona metil (20R)-20-hidroxime til-5-oxo-3,5-seco-6-pregnen-3-oato na forma de um óleo viscoso incolor (3 g, 32%).

(iv) (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5,7-pregnadien-3-ona

A éster-enona viscosa acima (1,67 g, 4,6 mmol) adicionaram-se 10 ml de etileno glicol. Fez-se então borbulhar metilamina (3,5 g) no glicol enquanto a éster-enona se dissolvia. A solução foi lentamente aquecida a 1809C durante 20 minutos antes de ser arrefecida à temperatura ambiente. A solução escura resultante foi diluída com água fria e completamente extracta da com clorofórmio. Os extractos combinados foram lavados com água, salmoura, secos e concentrados a uma espuma castanha (1,74 g), a qual foi submetida a cromatografia (silica, acetato de etilo a 20% em hexano) para originar a dienamida (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5,7-pregnadien-3-ona na forma de sólido branco (380 mg, 24%).

(v) (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-preqnen-3-ona

A dienamida acima (500 mg, 1,38 mmol) em 100 ml de aceta to de etilo contendo 1% de etanol foi hidrogenada a 25SC e 1 atm sobre 1,3 g de Pd a 10% em carbono, durante 3 horas. A s_o lução foi filtrada para remover o catalisador e concentrada à forma de um sólido branco. A recristalização em acetato de etilo originou 300 mg de (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)- pregnen-3-ona na forma de um sólido cristalino branco, de ponto de fusão (não corrigido) 219-2205C.

201

SKB CASE 14342

-29EXEMPLO 2

Acido 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona-(20R)-20-carboxílico

A uma solução de (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa -8(14)-pregnen-3-ona (200 mg, 0,56 mmol), preparada no Exemplo 1, em 15 ml de acetona e 1 ml de tetra-hidrofurano, adicionou-se reagente de Oones, gota a gota, até persistir uma cor vermelha. Adicionou-se então isopropanol para neutralizar o excesso de oxidante. Decantou-se a solução dos sais de crómio viscosos, e esta foi concentrada e dividida entre diclorometa¹ no e água. Os sais foram dissolvidos em água e extractados com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram então lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e concentradas à forma de um sólido branco. A recristalização em metanol/acetato de etilo/^o^criào 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona-(20R)-20-carboxílico (157 mg) (112 mg, 54%), na forma de cristais brancos de ponto de fusão (não corrigido) 310-3159C.

EXEMPLO 3

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17/3-N,l\l-diisopropilcarboxamida

I (i) flndrosta-4,6-dien-3-ona-17/3-carboxilato de metilo

Uma solução de androsta-4-en-3-ona-17^-carboxilato de me tilo (10 g, 30,3 mmol, preparado de acordo com Rasmusson, e, col., 3. Med. Chem. 27 1960 (1984)) em 700 ml de t-butanol foi aquecida em refluxo durante 3,5 horas e então arrefecida e fil trada. 0 filtrado foi concentrado e o resíduo tomado em 700 ml de clorofórmio e lavado sucessivamente com 4 x 150 ml de água, 3 x 150 ml de solução saturada de bicarbonato de sódio, 3 x 150 ml de hidróxido de sódio a 5%, 3 x 150 ml de salmoura, seco sobre sulfato de sódio e concentrado para originar andros. ta-4,6-dien-3-ona-17y3-carboxilato de metilo na forma de uma es puma escura (7,0 g, 70%).

291

SKB CASE 14342 (ii) 6-tioacetil-androsta-4-en-3-ona-17^-carbonato de metilo

A dienona acima (7,0 g, 21,3 mmol) e ácido tioacético (15 ml) foram aquecidos em refluxo durante 2,5 horas. 0 exces. so de ácido tioacético foi então removido in vacuo e o resíduo foi dissolvido em 100 ml de acetato de etilo e lavado com água, solução saturada de bicarbonato de sódio, salmoura, seco e cori centrado para originar 6-tioacetil-androsta-4-en-3-ona-17^-cajc boxilato de metilo na forma de um óleo escuro (8,46 g, 98%).

(iii) 3_? 5-secq-6-androsten-5-ona-3-17/3-dicarboxilato de dime- tilo durante 3 horas. A solução clorídrico, concentrada e divi. A camada aquosa foi novamente camadas orgânicas combinadas 0 resíduo

A tioacetil-enona acima (17,0 g, 42,1 mmol) em 100 ml de diclorometano e 50 ml de metanol a -789C, foi tratada com excesso de ozono. A solução resultante foi purgada com argon, aquecido até à temperatura ambiente, e concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em 100 ml de metanol e 20 ml de hidróxido de s.ó dio a 10% e aquecido em refluxo foi então acidificada com ácido dida entre clorofórmio e água, extractada com clorofórmio e as foram lavadas com salmoura, secas e concentradas.

foi tomado em éter dietílico, com uma quantidade suficiente de diclorometano para efectivar a dissolução completa, arrefecido a 09C e tratado com uma solução éterea com excesso de diazometano. A concentração da solução resultante originou 10,5 g de um óleo amarelo o qual foi submetido a cromatografia (silica, acetato de etilo a 30% em hexano) para originar o composto 3.5-seco-6-androsten-5-ona-3-17^-dicarboxilato de dimetilo (5,0 g, 33%) na forma de um óleo incolor.

(iv)

4-metil-4-aza-5_t7-androstadien-3-ona-17/3-carboxilato de hidroxietilo

Ao enona-éster acima (5,0 g, 13,8 mmol) e 50 ml de etiglicol, adicionou-se metilamina (10 g) após o que o enona A solução resultante foi então aquecida, até 1809C e foi mantida a es.

leno

-éster se dissolveu.

durante um período de 90 minutos, sa temperatura durante 20 minutos antes de ser arrefecida até

291

SKB CASE 14342

X ✓2·

-31à temperatura ambiente. A solução escura resultante foi diluí da com água fria e completamente extractada com clorofórmio. Os extractos orgânicos combinados foram então lavados com água e salmoura, secos e concentrados à forma de um óleo castanho escuro. A cromotografia (sílica, acetato de etilo/hexano 1:1) originou a dienamida 4-metil-4-aza-5,7-androstadien-3-ona-17y3-carboxilato de hidroxietilo (1,5 g, 29%) na forma de um sólido esbranquiçado.

(v) 4-metil-4-aza-8(14 )-andros ten-3-ona-17^3-carboxilato de hidroxietilo

A dienamida acima (1,5 g, 4,02 mmol) em 20 ml de etanol a 10% em acetato de etilo, foi hidrogenada sobre 1,5 g de dióxi. do de paládio à temperatura ambiente e a 1 atm, durante 3 horas. 0 catalisador foi então removido por filtração e a solução foi concentrada para originar 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3~ona-17^-carboxilato de hidroxietilo na forma de um sóli, do branco (1,5 g).

z (vi) Acido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17y3-carboxílico 0 éster de hidroxietilo acima (1,5 g, 4,0 mmol) e carbonato de potássio (3 g), em 150 ml de uma mistura 10:1 de metanol-água, foram aquecidos em refluxo durante 12 horas. A mistura resultante foi concentrada, diluída com água, acidificada e completamente extractada com clorofórmio. 0 clorofórmio foi evaporado e o resíduo foi submetido a cromatografia (silica, metanol a 5% em diclcrometano) para originar ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17y3-carboxilico (0,75 g, 57%) na forma de um sólido branco.

(vii) cloreto de ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17^-carboxílico

Uma solução do ácido acima (250 mg, 0,75 mmol) em tolueno (8 ml) foi tratada com 0,5 ml de cloreto de oxalilo. Após 2 horas,os materiais voláteis foram removidos a 1 mmHg deixando um resíduo de cloreto de ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-carboxílico.

291

SKB CASE 14342

-32(v i i i) 4-metil-4-aza-5-alfa-8 (14)-androsten-3-ona-17/3-N, N-diisopropilcarboxamida

Uma solução do cloreto de ácido acima (283 mg, 0,75 mmol) em 8 ml de tetra-hidrofurano foi tratada com 1 ml de diisopropilamina, durante a noite, fl solução foi diluída com água e extractada cuidadosamente com diclorometano. Os extractos foram secos e concentrados à forma de um sólido branco. A croma tografia líquida de alta eficiência (HPLC) preparativa (sílica, álcool isopropílico a 10/ em hexano) seguida de recristalização em éter dietilico originou a 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-andro£ ten-3-ona-17^-N,N-diisopropilcarboxamida (100 mg), de ponto de fusão (não corrigido) 185-1909C.

EXEMPLO 4

4-metil-4-aza-8( 14 )-andros te n-3-ona-17/3-carbox aldeído

Uma solução de cloreto de ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17^-carboxílico (378 mg, 1 mmol) preparado de acordo com o Exemplo 3, em 10 ml de tetra-hidrofurano é tratada com hidreto de tri-t-butoxialuminio e lítio (254 mg, 1 mmol) a OSC, durante uma hora, para originar, após remoção da fase aquosa, 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17/3-carboxaldeído.

EXEMPLO 5

4-metil-4-aza-17/3-(l-oxobutil )-8(14 )-andros te n-3-o na

Uma solução de cloreto de ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17/3-carboxílico (378 mg, 1 mmol) em 10 ml de tetra-hidrofurano é tratada com di-n-butil cobre-lítio a -789C. A reacção é terminada com cloreto de amóni aquoso. A extracção com diclorometano seguida de concentração do extracto orgânico origina 4-metil-4-aza-17^-(1-oxobutil)-8(14)-androsten-3-ona.

EXEMPLO 6 (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-7-preqnen-3-ona catalisador de níquel Raney W-2, activo (500 mg) que ti nha sido previamente lavado com água, etanol e acetato de etilo, foi suspendido numa solução de (20R)-hidroximetil-4-metil-

291

SKB CASE 14342

-33-4-aza-5,7-pregnadien-3-ona (115 mg, 0,33 mmol) preparada de acordo com o exemplo 1, em 15 ml de acetato de etilo e agitado sob 1 atm de hidrogénio durante vinte horas. 0 catalisador foi então removido por filtração e o filtrado foi concentrado à forma de um sólido branco. A cromatografia (silica, 6:3:1 ci clo-hexano-acetona-acetato de etilo) originou 56 mg do material de partida (20R-hidroximetil-4-metil-4-aza-5,7-pregnandien-3-ona e 46 mg de (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-7-pregnen-3-ona na forma de agulhas brancas (recristalizadas em ace tato de etilo), de ponto de fusão 196-1993C.

EXEMPLO 7 4-metil-4-aza-5-alfa-l,8(14)-androstadien-3-ona-17^-N,l\l-diisopropilcarboxamida

Uma solução de 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17y5-N, N-diisopropilcarboxamida (345 mg, 1 mmol) em 5 ml de tetra-hidrofurano a -709C é tratada com uma solução de diisopropilamideto de lítio em hexano-pentano (2 ml de solução 1,5 M, 3 mmol) e deixada aquecer até 09C. Esta solução é então adicionada a uma solução de dissulfeto de difenilo (300 mg, 1,38 mmol) em 2 ml de tetra-hidrofurano e seguidamente deixada em repouso durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura é então dividida entre água e acetato de etilo. A camada orgânica é lavada com hidróxido de sódio diluído, água, ácido clorídrico diluído, água e salmoura e concentrada à forma de resíduo. 0 rei síduo é dissolvido em 10 ml de metanol e tratado a OQC com uma solução aquosa de per-iodato de sódio (400 mg, 1,87 mmol, 2 ml de água) durante 2,5 horas. A mistura é diluída com água e o precipitado é filtrado e seco. 0 precipitado é dissolvido em tolueno, aquecido em refluxo durante 3 horas e então concentra do. A recristalização em acetato de etilo origina 4-metil-4-aza-5-alfa-l,8(14)-androstadien-3-ona-17^-N,N-diisopropilcarboxamida.

EXEMPLO 8 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17^-ol composto em título é preparado de acordo com o processo

291

SKB CASE 14342

-34do Exemplo 1, substituindo por testosterona o (20R)-3-oxopregn -4-eno-20-carboxaldeído.

EXEMPLO 9

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-andro5Íeno-3.17-diona

Uma solução de 4-metil-4-aza-8(14)-androsteno-3-on -17/3-ol (301 mg, 1 mmol), preparado de acordo com o Exemplo 8, em 10 ml de acetona é tratada com Reagente de Oones até persistir uma coloração vermelha. 0 excesso de reagente é neutralizado por adição de isopropanol. A solução é decantada dos sais espes. sos e verdes de crómio e os sais são então dissolvidos em água e extractados com diclorometano. As camadas orgânicas combina das são filtradas através de um leito de sulfato de magnésio e concentradas para originar 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androste no-3,17-diona.

EXEMPLO 10

4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-preqno-8(14)-17(20)-dien-21-oato de etilo

Uma solução de etóxido de sódio (2,8 g, 41 mmol) em 15 ml de etanol é adicionada a uma mistura de 4-metil-4-aza-5-alfa -8(14)-androsteno-3,17-diona (4,0 g, 13,3 mmol), preparada de acordo com o Exemplo 9, e dietilfosfonato de metilo (8,7 g, 41 mmol) e a mistura resultante é aquecida em refluxo durante 4 horas. A mistura é arrefecida, concentrada, diluída com ácido acético aquoso diluído e extractada com éter. Os extractos etéreos combinados são lavados com água, solução aquosa saturja da de bicarbonato de sódio, salmoura e concentrados para origi nar 4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-pregno-8(14)-17(20)-dien-21-oato de etilo.

EXEMPLO 11

Sulfonato de 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadien-3-ona-17-trifluorometilo

Uma solução de 4-metil-4,5-alfa-8(14)-androsteno-3j17-diona (3 g, 10 mmol), preparada de acordo com o Exemplo 9, ani drido trifluorometilsulfónico (3,8 g, 15 mmol) e 2,6-di-t-bu67 291

SKB CASE 14342

-35til-4-metil-piridina (2,6 g, 12,5 mmol) em 100 ml de diclorometano é agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A s.g lução resultante é concentrada. 0 resídua é tomado em acetato de etilo-pentano, filtrado e lavado com ácido clorídrico diluí do, solução aquosa de bicarbonato de sódio, salmoura e então concentrado. A cromatografia (sílica, 7:3 acetato de etilo-he xano) origina sulfonato de 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadien-3-ona-17-trifluorometilo.

EXEMPLO 12

I 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadien-3-ona-17-carboxila- to de metilo

Uma mistura de sulfonato de 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),

16-androstadien-3-ona-17-trifluorometilo (436 mg, 1 mmol) preparado de acordo com o Exemplo 11, trietilamina (200 mg, 2 mmol), metanol (1,8 ml, 40 mmol) e acetato de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (22 mg, 0,03 mmol) em 4 ml de dimetilformami da é agitada sob uma atmosfera de monóxido de carbono durante 4 horas. A mistura ê então diluída com água e extractada com cloreto de metileno. A solução de cloreto de metileno ê concentrada e o resíduo sujeito a cromatografia (sílica, cloreto de metileno a 5%) para originar 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16 -androstadien-3-ona-17-carboxilato de metilo.

I

EXEMPLO 13 /

Acido 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadienona-17-carboxílico ácido 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadienona-17-carboxílico é preparado de acordo com o processo do Exemplo 3 (vi), substituindo o 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17/3-carboxilato de hidroxietilo por 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androstadien-3-ona-17-carboxilato de metilo.

EXEMPLO 14

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadien-3-ona-17-N,N-diiso propilcarboxamida

291

SKB CASE 14342

-36A 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14),16-androstadien-3-ona-17-Ν,Ν-diisopropilcarboxamida á preparada de acordo com o proces. so do Exemplo 3 (uii) substituindo o ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17/â-carboxílico pelo ácido 4-metil-4-aza-5-al. fa-8(14),16-androstadien-3-ona-17^-carboxílico.

EXEMPLO 15

N,N-diisopropil-4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-preqno-8(14),17(20)-dien-21-amida

A l\l, N-diisopropil-4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-pregno-8 (14), | 17(20)-dien-21-amida é preparada de acordo com o processo do

Exemplo 3 (vii) substituindo o ácido 4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona-17^>-carboxílico pelo ácido 4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-pregno-8(14),17(20)-dieno-21-carboxílico.

EXEMPLO 16

2¹,3^,alfa-tetra-hidrofurano-2^,-espiro-17-(4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona processo do Exemplo 1 iniciado com 2',3'alfa-tetra-hidrofurano-2^,-espiro-17-(4-androsten-3-ona), origina 2’,3’alfa-tetra-hidrofurano-2'-espiro-17-(4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona.

I EXEMPLO 17

17ft-acetamido-4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona processo do Exemplo 1, iniciado com 17y3-acetamido-4-androsten-3-ona origina 17yâ-acetamido-4-metil-4-aza-8(14)-androsten-3-ona.

EXEMPLO 18

17-carbometoxi-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-andros ten-3-on-17-ol

Dissolve-se 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3,17-diona (303 mg) por aquecimento suave em 0,5 ml de acetona cia nidrina preparada de fresco. Após duas horas à temperatura ani biente o sólido precipitado é recolhido para se obterem as cia. nidrinas como uma mistura de epímeros em C-17. A mistura á

291

SKB CASE 14342

dissolvida numa solução de piridina (1 ml) e anidrido acético (1 ml) e deixada em repouso à temperatura ambiente durante 4Θ horas. A remoção dos solventes sob pressão reduzida origina um óleo que é dissolvido em éter e lavado com ácido clorídrico IN seguido de solução aquosa de bicarbonato de sódio. A solução orgânica é seca e concentrada para originar os acetatos de cia nidrina na forma de uma mistura de epímeros em C-17.

A mistura de acetatos de cianidrina é dissolvida em meta nol anidro e arrefecida a 159C. Faz-se borbulhar ácido clorídrico na mistura e deixa-se esta em repouso durante 2 horas à temperatura ambiente. 0 solvente é então removido sob pressão reduzida. Adiciona-se uma mistura de tetra-hidrofurano (2 ml) e água (w ml) e em seguida pelotas de hidróxido de sódio (1 g) e a mistura é agitada durante 2 horas ã temperatura ambiente e então acidificada e extractada com diclorometano. A mistura de hidroxiácidos que se obtém por concentração é dissolvida em éter e tratada com diazometano para originar os ésteres de hidroxietilo . A cromatografia em sílica gel origina 17^-carbometoxi-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-on-17-ol.

EXEMPLO 19

17^-(5)tetrazolil-4-metil-4~aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona

A 17-carbometoxi-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona (303 mg), preparada de acordo com o processo do Exemplo 18, em tetra-hidrofurano (5 ml) a -78QC é tratada lentamente com Redal (0,5 mmol) e a solução é mantida a -78SC durante 2 horas e então tratada com cloreto de amónio aquoso. A mistura é extractada com éter, a solução orgânica é lavada com salmoura, seca e concentrada para originar 17-carboxialdeído-4-metil -4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona.

Este composto é então dissolvido em piridina (0,5 ml) e tratado com hidrocloreto de hidroxilamina (80 mg) à temperatura ambiente, durante a noite. A mistura é diluída com éter, lavada com água e salmoura e então seca e evaporada para oriqi nar a oxima de 17-carboxaldeído-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona.

291

SKB CASE 14342

-38Esta foi dissolvida em diclorometano (2 ml) e tratada com 1,1’-carbonildiimidazol (165 g). Depois de 1 hora à tempe. ratura ambiente a solução foi diluída com diclorometano e lava da com água, em seguida com salmoura e então seca e concentrada para originar 17-carbonitrilo-4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona.

Esta foi dissolvida em dimetilformamida (2 ml) e tratada com azeto (azida) de sódio (55 mg), cloreto de lítio (50 mg) e hidrocloreto de benzilamina (10 mg). A mistura foi então aque cida a 110SC durante 24 horas. Ao arrefecer, a solução foi d.i luída com água e ácido clorídrico (1 ml) e o tetrazol precipitado foi separado por filtração e seco.

EXEMPLO 20

Uma forma de dosagem para administração oral dos compostos do presente invento é produzida por crivagem, mistura e ejn chimento em cápsulas de gelatina dura, dos ingredientes nas proporções apresentadas na Tabela V, seguinte.

Tabela V

Ingredientes

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17ô-N,N-diisopropilcarboxamida estearato de magnésio lactose

Quantidades mg mg mg

EXEMPLO 21

A sacarose, o sulfato de cálcio di-hidratado e a 4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona, substituída na posição 17, apre sentados na tabela VI, seguinte, são misturados e granulados nas proporções apresentadas com uma solução de gelatina a 10%. Os grânulos húmidos são crivados, secos, misturados com o amido, talco e ácido esteárico, crivados e sujeitos a compressão para originar comprimidos.

291

SKB CASE 14342

-39Tabela VI

Quantidades

Ingredientes

4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-	100	mg
-ona-17p-N,N-diisopropilcarboxamida
sulfato de cálcio di-hidratado	150	mg
sacarose	20	mg
amido	10	mg
talco	5	mg
ácido esteárico	3	mg

EXEMPLO 22

Dispersam-se 75 mg de ácido 4-metil-3-oxo-4-aza-5-alfa-pregno-8 (14),17(20)di eno-21-carboxílico em 25 ml de solução salina normal para preparar uma preparação injectável.

Apesar de as concretizações preferidas do invento serem ilustradas pela descrição e exemplos acima, deverá entender-se que o invento não fica limitado às instruções precisas aqui re veladas e que se reserva o direito de todas as modificações que surjam no âmbito das reivindicações.

291

SKB CASE 14342

Claims

REIVINDICAÇÕES

1-20’ (3) (4) onde a ligação tracejada substitui o hidrogénio

17-alfa,

9 9 hidrogénio-alfa e NHCOR em que R é alquilo

5 6 5 6 ^1-12 ^{ou R} onde R e R têm os significados

67 291

SKB CASE 14342

-47dados acima, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazolilo; ou (7) cetoj e é alquilo C^ θ caracterizado por compreender a oxidação de um composto de fójc mula em que

R^G é alquilo C^g, θ

1 - Processo de preparação de compostos com a fórmula

R³ em que:

4I, , Δ& e são -CH₉-CH₉- ou -CH=CH-, desde que

7 8 16 um, de entre Δ , Δ ^θ A seja -CH=CH-;

R^ é H ou alquilo ^cj__g >

R₂ é H ou alquilo C^__g;

R₃ é (1) hidrogénio-alfa, hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e

(a) ₀ ¹¹ /,

-Alq-C-R⁴ em que Alq está ausente ou presente na fojr ma de uma cadeia de hidrocarbonetos linear □u ramificada com 1 a 12 átomos de carbono, e R^ é (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo ^Cj_g» (iv) hidroxialquilo C^ θ, (v) alcoxíloC₁_₈,

67 291

SKB CASE 14342

5 6 5 6 (vi) NFvR , em que R e R são independe^ temente seleccionados entre hidrogé nio, alquilo C^_g de cadeia linear ou ramificada, cicloalquilo C, fenilo; ou R^ e R , em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, representam um anel saturado de 5 a 6 membros compreendendo até um outro heteroátomo sele£ cionado de entre oxigénio e azoto, ou

7 7 (vii) OR , em que R é hidrogénio, metal alcalino, alquilo C^^g de cadeia linear ou ramificada, benzilo, ou 8 (b) -Alq-OR , em que Alq se encontra sempre pre

4 sente e tem o significado dado acima, e R é (i) fenil(alquilcarbonilo C^ ^), (ii) cicloalquilcarbonilo ^C5-10’ (iii) benzoílo, (iv) alcoxicarbonilo C₁__g, (v) amino ou amino substituído por alquilo carbonilo ou (vi) hidrogénio, desde que Alq seja uma cadeia C^-Cg ramificada, (2) =CH-Alq-CO-R^Zi ou =CH-Alq-OR®, em que Alq está presente ou ausente e tem 0 significado dado 4 8 acima e R e R têm os significados dados acima 8 e R pode também ser hidrogénio ou alquilcarbonilo Cj, 2q» (5) ,---------

67 291

ΞΚΒ CASE 14342

-42em que a ligação a tracejado, substitui o hidro génio 17-alfa,

9 9 (4) hidrogénio-alfa e NHCOR , em que R é alquilo

5 6 5 6 ^C1 12 ^{0U NR R em que R e R} têm os significados dados acima, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazoliloj ou (7) ceto;

ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por compreender a hidrogenação de um composto de fórmula em que são definidos como acima.

2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por 0 composto preparado ser a 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-pregnen-3-ona, a 4-metil-4-aza-5-alfa-8(14)-androsten-3-ona-17^-N,N-diisopropilcarboxamida, ou a (20R)-hidroximetil-4-metil-4-aza-5-alfa-7-pregnen-3-ona.

3 - Processo de preparação de um composto de fórmula

67 291

SKB CASE 14342 em que

R^ é H ou alquilo C^_g;

é H ou alquilo ^|_θ»

R₃ é (1) hidrogénio-alfa, hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e

¹¹ 4

-Alq-C-n em que Alq está ausente ou presente como uma cadeia de hidrocarbonetos, linear ou ramificada, com 1 a 12 átomos de carbono, e R⁴ é (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo C^_g, (iv) hidroxialquilo C-^g, (v) alcoxilo ^c^_g,

5 6 5 6 (vi) NR R , em que R e R são independer: temente seleccionados entre hidroqé nio, alquilo C₁__Q de cadeia linear ou ramificada, cicloalquilo C, ,, fe

5 6 niloí ou R e R , em conjunto com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, representam um anel s.a turado, com 5-6 membros, compreendejj do até um outro heteroátomo seleccio nado entre oxigénio e azoto, ou

7 7 (vii) OR , em que R é hidrogénio, metal alcalino ou alquilo ^Cl-18 de cadeia linear ou ramificada, benzilo, ou 8 (b) -Alq-OR em que Alq está sempre presente e tem o significado dado acima, e R é

67 291

SKB CASE 14342

(i) fenil(alquilcarbcnilo C^_₆), (ii) cicloalquilcarbonilo C^^g, (iii) benzoílo, (iu) alcoxicarbonilo C^_g, (v) amino ou amino substituído por alquilo ^C]__q, carbonilo, ou (vi) hidrogénio, desde que Alq seja uma cadeia ramificada C^-Cg,

(2) =CH-Alq-CO-R^ ou =CH-Alq-OR®, em que Alq está presente ou ausente e tem o significado dado

/. g acima e R e R têm os significados dados acima 8 e R pode também ser hidrogénio ou alquilcarbonilo ^c _1-20;

(3) ------- kx em que a ligação tracejada substitui 0 hidrogénio 17-alfa, , . □ □ (4) hidrogénio-alfa e NHCOR em que R é alquilo

5 6 5 6 *1-12 ^ou NR R , em que R*⁷ e R° têm os significa dos dados acima, (5) hidrogénio-alfa e ciano, (6) hidrogénio-alfa e tetrazolilo, ou (7) ceto, caracterizado por compreender a reacção com uma alquilamina ^1-4’ ds um composto de fórmula

67 291

SKB CASE 14342

2 3 em que R e R têm os significados dados acima.

4 - Processo de preparação de um composto de fórmula em que

R^ é H ou alquilo

Rj é H ou alquilo C^__g;

R_? é (1) hidrogénio-alfa, hidroxilo-alfa ou acetoxi-alfa e

(a) ₀

II ₄

-Alq-C-R⁴ em que Alq está ausente ou presente na for. ma de uma cadeia, linear ou ramificada de hidrocarbonetos com 1 a 12 átomos de carbo no e R^ é (i) hidrogénio, (ii) hidroxilo, (iii) alquilo C^ θ, (xv) hidroxialquilo , (v) alcoxilo (vi) NR^Ré, em que R^ e R^ são independentemente seleccionados entre hidrogénio, alquilo C^__g de cadeia li. near ou ramificada, cicloalquilo

67 291

SKB CASE 14342

I» (2)

5 6 _6> fenilo; ou R e R , em conjun to com o átomo de azoto ao qual se encontram ligados, representam um anel saturado de 5-6 membros compre, endendo até, no máximo, um outro he teroátomo seleccionado entre oxigénio e azoto, ou

7 7 (vii) OR , em que R é hidrogénio, metal alcalino, alquilo de cadeia linear ou ramificada, benzilo, ou 8 (b) -Alq-OR , em que Alq está sempre presente e tem o significado dado acima, e R é (i) fenil(alquilcarbonilo C^ ^), (ii) cicloalquilcarbonilo ^C5_iq>

(iii) benzoílo, (iv) alcoxicarbonilo C^ (v) amino ou amino substituído por alquilo Cj_g, carbonilo, ou (vi) hidrogénio, desde que Alq seja uma cadeia ramificada C^-Cg, =CH-Alq-CO-R^ ou =CH-Alq-OR^, em que Alq está presente ou ausente e tem o significado dado

Λ Q acima, e R^ e R têm os significados dados aci8 ma e R é também hidrogénio ou alquilcarbonilo r

2 3

R e R têm os significados dados acima.

|l Lisboa,

Por SMITHKLINE BECKMAN CORPORATION