DK169438B1

DK169438B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af 17 substituerede 4-aza-5alfa-androsten-3-on-derivater samt mellemprodukter til anvendelse ved fremgangsmåden

Info

Publication number: DK169438B1
Application number: DK196691A
Authority: DK
Inventors: Dennis Alan Holt; Mark Alan Levy; Brian Walter Metcalf
Original assignee: Smithkline Beckman Corp
Priority date: 1987-01-28
Filing date: 1991-12-05
Publication date: 1994-10-31
Also published as: DK37388A; DK196691A; PT86652A; US4888336A; ES2042725T3; ATE77388T1; DE3871965D1; DK168525B1; ZA88549B; JPS63192800A; IE61594B1; EP0277002B1; AU1077888A; IE880189L; PT86652B; DK169840B1; CA1325006C; DE3871965T2; EP0277002A3; DK196691D0

Description

i DK 16943S B1

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 17-substituerede 4-aza-5-a-17/3-androsten-3-on-derivater samt mellemprodukter til anvendelse ved fremgangsmåden.

Den klasse af steroide hormoner, der kendes som androgener, er 5 ansvarlige for de fysiske karakteristika, der adskiller mænd fra kvinder. Af de adskillige organer, der producerer androgener, producerer testes disse hormoner i de største mængder. Centre i hjernen udøver primær styring af androgenproduktions-10 niveauet. Talrige fysiske manifestationer og sygdomstilstande er et resultat, når ineffektiv produktionsstyring resulterer i for høj androgenhormonproduktion. F.eks. er acne vulgaris, seboré, hirsutisme hos kvinder og godartet prostatisk hyper-trofi forbundet med forøgede androgenniveauer. Desuden er 15 tilfælde af mandlig mønsterska1dethed blevet forbundet med høje androgenniveauer.

Testosteron er det hovedandrogen, der udskilles af testes, og det er det primære androgene steroid i plasma hos mænd. Det er nu kendt, at 5-a-reducerede androgener er de aktive hormoner i 20 nogle væv såsom prostata og fedtkirtler. Cirkulerende testosteron tjener således som et prohormon for dihydrotestosteron (DHT), dets 5-a-reducerede analog i disse væv, men ikke i andre såsom muskel og testes. Steroid-5-a-reduktase er et NADPH-afhængigt enzym, der omdanner testosteron til DHT. Dette en-25 zyms vigtighed ved udviklingen til mand blev dramatisk understreget ved opdagelse af en genetisk steroid-5-a-reduktase-mangel i mandlige pseudohermafroditter, J. Imperato-McGin1ey et al., 1979, J. Steroid Biochem. 11:637-648.

Erkendelse af vigtigheden af forøgede DHT-niveauer i mange 30 sygdomstilstande har stimuleret mange forsøg på at syntetisere inhibitorer af dette enzym. Strukturerne af flere kendte steroid-5-a-reduktaseinhibitorer er vist i tabel 1.

DK 169438 B1 2

Tabel 1 5-a-reduktaseinhibitorer 5 (1) cooh ’ Ki=l ,1x10'6M Hsia og Voight £&> ' ............

10 (2) 1x10"6M Robaire, et al., of 3T/ (Irreversib’el) 1977 15 JZj .

(3) °H 3,5xl0"8 Blohm, et al., 20 Γ T/ (Irreversibel) 1980

n2H

25 o / (4) /'N\_- 5x10"9M . .Liang, et al, (Reversibel) 1983

0 \H

30 ^ ^ r^jJ^0Ac Ii25xl0-8M Petrow, et al., J > (Irreversibel) 1981 , jzf DK 169438 Bl 3

Den første inhibitor, som blev beskrevet, var 17-j3-carboxy 1 -syren (1) af Hsia og Voight i 1973, J. Invest. Dermat. 62:224-227. Secosteroidet (2) var den næste inhibitor, der blev beskrevet og har også vist anvendelighed som et affinitetsmærke 5 for 5-a-reduktase, B. Robaire et al., (1977), J. Steroid Bio chem. 8:307-310. Diazoketonen (3) er blevet rapporteret som en kraftig, tidsafhængig inhibitor af steroid-5-a-reduktase, T. R. Biohm et al., (1980), Biochem. Biophys. Res. Comm. 95:273-280, US patentskrift nr. 4.317.817. Forbindelse (4) er et ek-10 sempel på en gruppe 4-azasteroidi nhi bi torer af steroid-5-α- reduktase, der er beskrevet i US patentskrift nr. 4.377.584 og i T. Liang et al., (1983) 0. Steroid Biochem. 19, 385-390. 6-methylensteroidet (5) har også vist sig at være en tidsafhængig inaktivator af steroid-5-a-reduktase, V. Petrow et al. 15 (1981), Steroids 38:121-140.

Der er også blevet beskrevet andre 5-a-reduktaseinhi bi torer. I US patentskrift nr. 4.361.578 beskrives en klasse homosteroid-enzyminhibitorer. I de japanske patentskrifter J60146855-A og 20 J60116657-A beskrives forskellige ani1inderivater, der har talrige aktiviteter, herunder 5-a-reduktasehæmmende aktivitet.

I japansk patentskrift nr. J60142941-A beskrives phenylsubsti-tuerede ketoner, der har 5-a-reduktasehæmmende aktivitet, og i europæisk patentskrift nr. EP173516-A beskrives forskellige 25 phenyl substituerede amider, der har til svarende aktivitet. Shiseido refererede til terpenderi vater, der er aktive inhibitorer af steroid-5-a-reduktase, japansk patentskrift nr. J59053417-A.

30 Den foreliggende opfindelse bygger på den opdagelse, at stero-id-5-a-reduktase inhiberes af 4-aza-5-a-17-substitueret-an-drosten-3-on-forbindelser, der har en (8(14)-, eller 7(8)-dobbeltbinding. Disse forbindelser er kraftige enzyminhibitorer .

For tiden foretrukne forbindelser der kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen omfatter: 35 4 DK 169438 B1 4-mathyl-4-aza-5-o:-8 (14)-pregnen-3-on-{20R)-20-carboxy1 syre (20R)-hydroxymethy)-4-methy)-4-aza-5-a-8(14)-pregnen-3-on og -uethyl-4-aza-5-o 8(14)-androsten-3-on-170-N,N-diisopropyl -carboxamid. Ky 5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 5 angivne.

I et yderligere aspekt af opfindelsen tilvejebringes hidtil 10 ukendte mellemprodukter, der er nyttige til fremstilling af de omhandlede 5-a-reduktaseinhiberende forbindelser.

Forbindelserne der kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, og som inhiberer 5-a-reduktase, har følgende 15 formel (I): R3 (i) R1 25 hvor de enkelte symboler har de i krav 5 angivne betydninger.

Foretrukne blandt forbindelserne er forbindelser med formlen ' II: 0

31 C-Z

(Alk") ’ S — /

k1 H

i 5 DK 169438 B1 hvori Z er C1_4alkoxy eller NR20R21, hvor R20 og R21 uafhængigt af hinanden er C1_8alkyl/ n er 0 eller 1,

Alk" er en ligekædet eller forgrenet hydrocarbonkæde med 1 til 5 4 carbonatomer, og R1 og R2 er som defineret i krav 1, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

For tiden er de mest foretrukne forbindelser: 10 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on-17/3-N/N-diisopropy]-carboxami d, 4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-pregnen-3-on-(2OR)-2 0-carboxylsyre og (20R)-hydroxymethyl-4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-pregnen-3-on.

15

Også foretrukket er forbindelser med formlen (X): B30 20 (Alk'" ) Οί3 1 n Γ^ΓΊ (x) I, R1 hvor n er O eller 1, Alk"' er en forgrenet hydrocarbonkæde med 3 til 4 carbonatomer, 3 0 R30 er hydroxy eller C02CaH2a+1, hvor a er 1-5 og R1 og R2 er som beskrevet i formel (I).

Forbindelserne med formlen (I), hvor Δ7 eller Δ8 er -CH=CH-, fremstilles i overensstemmelse med enten den ene eller den 3 5 anden af de lige foretrukne synteseveje, der er vist i skema I og II. I skema I og II er R1, R2 og R3 som defineret i formel (I), og R20 er C^galkyl.

6 DK 169438 B1

Skema I 3 yjkj * (A) (B) 3 . r3

ΓΗ H

Xp rfCT>

Jfeoac 0 \$.

. (Q / 'X ®> r3 \£ <χι

X5 rfX

ΓΫ'Ύ -LXJ

-Χν·/\Χ 0 i1 h .0 ? ^ 30 IT , Η (I) (I) 35 7 DK 169438 B1

Skema II

' r3 rJ

(A) · W

·· R3 R3 o (P) (O) 3 . r3 2 H \ ** (i) . (Q) 30 r3 oi3 11 o f (I)

Ri 8 DK 169438 B1

Ifølge skema I opløses forbindelse A i et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom et Cj^alkyldihalogenid i en Ci_4alka-nol, fortrinsvis methylenchlorid i methanol, afkøles til ca. minus 100°C til 30eC, fortrinsvis minus 78°C og behandles med 5 rutheniumdioxid/natriumperjodat, ka1 iumpermanganat eller fortrinsvis et overskud af ozon. Den resulterende opløsning renses med en inaktiv gas, såsom argon, idet den opvarmes til ca. 25°C til 50eC, fortrinsvis 40°C. Opløsningen koncentreres der-efter, carboxylsyren (forbindelse (B), men hvor R er hydrogen) r 10 optages i et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom dimethyl-acetamid, og i nærværelse af en base, såsom natriumbicarbonat eller l,4-diazabicyklo-[5.4.0]undec-7-en (DBU), omsættes med et Ci_4alkylhalogenid, såsom methylchlorid, ethylchlorid, me-thylbromid eller fortrinsvis methyljod id til opnåelse af en 15 forbindelse med formlen (B). Alternativt fremstilles forbindelsen med formlen (B) ved omsætning af carboxylsyren med di-azomethan.

Ketoesteren (B) i et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom 20 ethylacetat, omsættes derefter med phenylselenyIchlorid under en inaktiv gas, såsom argon. Den resulterende opløsning afkøles til ca. 0°C til 30“C, fortrinsvis 15°C, og behandles med et oxidationsmiddel, såsom ozon, metachlorperbenzoesyre eller fortrinsvis hydrogenperoxid, medens temperaturen holdes under 25 ca. 30°C, til opnåelse af en forbindelse med formlen (C).

Forbindelser med formlen (C) kombineres derefter med ammoniak eller en C^.galkylamin, der er udvalgt til at have den ønskede R^-substituent og opvarmes til ca. 150°C til 200^0, for-30 trinsvis 180°C, til fremstilling af forbindelser med formlen (D). Forbindelser med formlen (I), hvor er -CH=CH-, fremstilles derefter ved standardhydrogenering af forbindelser med formlen (D) under anvendelse af hydrogeneringsmidler, såsom platindioxid, palladium på carbon, Raney-nikkel, fortrinsvis 35 palladium på carbon og hydrogeneringsopløsningsmidler, såsom egnede organiske opløsningsmidler. Forbindelser med formlen (I), hvor Δ? er -CH=CH-, fremstilles ved hydrogenering af for-__ bindeiser med formlen (D) under anvendelse af Raney-nikkel og 9 DK 169438 B1 omhyggelig overvågning af reaktionen for at minimere eller forhindre dannelse af forbindelser med formlen (I), hvori Δ8 er -CH = CH- .

5 Thioacetylenonen med formlen (0) opløses derefter i et egnet organisk opløsningsmiddel, såsom et C^_4alkyldihalogenid i en C^_4alknaol, fortrinsvis methylenchlorid i methanol, afkøles til ca. minus 100°C til 0°C, fortrinsvis minus 78eC, og behandles med et overskud af ozon. Efter rensning med en inaktiv 10 gas, såsom argon, opkoncentreres opløsningen og behandles med en stærk base, såsom natriumhydroxid, til fremstilling af en rest. Resten opløses derefter i et egnet organisk opløsningsmiddel, afkøles til ca. minus 30°C til 30°C, fortrinsvis 0°C, og behandles, i nærværelse af en base, såsom natriumbicarbo-15 nat eller DBU, med et Ci_4alky1 hal ogen id, såsom methylchlorid, ethylchlorid, methyl jod id eller fortrinsvis di azomethan ti 1 opnåelse af en forbindelse med formlen (P).

Forbindelser med formlen (P) kombineres derefter med ammoniak 20 eller en C^alky 1 amin, der er udvalgt til at have den ønskede Rl-substituent, og opvarmes til ca. 150°C til 200°C, fortrinsvis 180°C, til opnåelse af forbindelser med formlen (Q). Forbindelser med formlen (I) fremstilles derefter ved hydrogenering af forbindelser med formlen (P) under anvendelse af*hy-25 drogener ingsmidler, såsom palladium på carbon eller Raney-nik-kel, fortrinsvis p1 atand ioxid, og hydrogeneringsopløsningsmidler, såsom egnede organiske opløsningsmidler. Som i skema I fremstilles forbindelser med formlen (I), hvor Δ? er -CH=CH-, ved hydrogenering af forbindelser med formlen (Q) under an-30 vendelse af Raney-nikkel og omhyggelig overvågning af reaktionen for at minimere eller forhindre dannelse af forbindelser med formel (I), hvor Δ8 er -CH=CH~.

Forbindelser med formlen (I), hvor Δ* er -CH=CH-, fremstilles 35 ud fra forbindelser med formlen (I), der er syntetiseret i overensstemmelse med skema I eller II, ved kendte oxidations- 10 DK 169438 B1 eller eliminationsreaktioner som beskrevet f.eks. i eksempel 7. Forbindelser med formlen (I), hvor er -CH=CH-, frem stilles ved kendte dehydrogeneringsreaktioner som beskrevet i f.eks. eksempel 11, ud fra 17-keto-forbindel ser med formlen 5 (I), syntetiseret i overensstemmelse med skema I eller II.

Forbindelser med formlen (A), udgangsmaterialerne i skema I og II, fremstilles ud fra de analoge 17-ketoforbindel ser ved hjælp af kendte fremgangsmåder, såsom dem, der er beskrevet i 2o 3· Fried 09 J· Edwards, Organic Reactions in Steroids Chemistry, Pub: Van Nostrand og Reinhold Company (1972). 17-keto-forbindelserne er tilgængelige og kan syntetiseres ved hjælp af kendte procedurer. Udgangsmaterialerne vælges således, at R2- og R2-grupperne i forbindelsen med formlen (A) er de sam-15 me som R2- og R3-grupperne i forbindelsen med formel (I), der syntetiseres. Alternativt udvælges R2- og R3-grupperne i forbindelsen med formlen (A) således, at de kan omdannes ved kendte procedurer til R2- og R3-grupperne i mål forbindel sen med formlen (I) ved yderligere trin i synteseprocessen. F.eks. omdannes forbindelser med formel (I), hvor R3 er carboxylsyre, til de tilsvarende amider ved omsætning med aminer eller substituerede aminer via de tilsvarende syrechlorider. Tilsvarende fremstilles forbindelser med formlen (I), hvor R3 er CH3CHC00H, ved oxidation af den tilsvarende alkohol.

25

Farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af forbindelserne med formlen (I) dannes, hvor det er hensigtsmæssigt, med stærke eller moderat stærke organiske eller uorganiske syrer i nærværelse af en basisk amin ved inden for fagområdet kendte metoder. F.eks. omsættes basen med en uorganisk eller organisk syre i et vandblandbart opløsningsmiddel, såsom ethanol, med isolering af saltet ved fjernelse af opløsningsmidlet eller i et vandub 1 andbart opløsningsmiddel, når syren er opløselig deri, såsom ethylether eller chloroform, idet det ønskede salt udskilles direkte eller isoleres ved fjernelse af opløsnings-3 5 midlet. Eksempler på syreadditionssaltene, der er omfattet af denne opfindelse, er maleat, fumarat, lactat, oxalat, methan- DK 169438 ΒΊ 11 sulfonat, ethansul fonat, benzensu1 fonat, tartrat, citrat, hydrochloric!, hydrobromi d, sulfat, phosphat og nitrat. Farmaceutisk acceptable baseadditionssalte af forbindelser ifølge opfindelsen fremstilles ved kendte metoder, omfattende ikke-tok- 5 siske alkalimetal- og jordalkalimetalsalte, f.eks. calcium-, natrium- og kaliumsalte, ammoniumsalte og salte af ikke-tok-siske organiske baser såsom tri ethyl ami η , butylamin, piperazin og (trihydroxymethyl) methyl ami η.

Ved fremstilling af forbindelserne med formlen (I) syntetiseres hidtil ukendte mellemprodukter ifølge opfindelsen med følgende formel (III) og (IV) .

15 20 ^ i1 hvori R1, R2 og R3 har den i krav 1 angivne betydning.

25 R3 30 2 I / h20o2c 35 12 hvor DK 169438 B1 R2, R3 og R20 har den i krav 3 angivne betydning.

Fordi forbindelser med formlen (I) inhiberer steroid-5-a-re-dukt a s eakt i vi t et, har de terapeutisk anvendelighed til behand-

C

ling af sygdomme og tilstande, hvor formindskelser i DHT-ak-tivitet giver den ønskede terapeutiske virkning. Sådanne sygdomme og tilstande omfatter acne vulgaris, seboré, hirsutis-me hos kvinder, prostatasygdomme såsom godartet prostatisk hy-pertrofi og mønsterskaldethed hos mænd. Styrken hos flere for-bindeiser med formlen I blev undersøgt for styrke til at inhibere human steroid-5-a-reduktase under anvendelse af væv fra humane hyperplastiske prostata (hyperplastic human prostates). Til bestemmelse af styrke til at inhibere det humane enzym anvendtes følgende procedure: 15

Frosne humane prostata blev optøet og hakket i små stykker (<5 mm3). Vævet blev homogeniseret i 3 til 5 volumener 20 mM kali-umphosphat, pH-værdi 6,5, puffer indeholdende 0,33M saccharose, 1 mM dithiothreitol og 50 μΜ NADPH med en Brinkmann Poly-20 tron (Sybron Corporation, Westbury, New York). Opløsningen blev underkastet lydbehandling i 3 til 5 minutter med en Soni-fier (Branson Sonic Power Co.) efterfulgt af håndhomogenisering i en glas-ti 1-gias-Dounce-homogenisator (Kontes Glass

Company, Vineland, New Jersey).

25

Der opnåedes prostatapartikler ved differentiel centrifugering ved 600 eller 1000 x g i 20 minutter og 140.000 x g i 60 minutter ved 4°C. Den pellet, der opnåedes ved centrifugering ved 140.000 x g, blev vasket med 5 til 10 vævsvolumener af 30 pufferen beskrevet ovenfor og gencentrifugeret ved 140.000 x g. Den resulterende pellet blev suspenderet i 20 mM kalium-phosphatpuffer, pH-værdi 6,5, indeholdende 20% glycerol, 1 mM dithiothreitol og 50 μΜ NADPH. Den suspenderede partikelopløsning blev lagret ved minus 80eC.

En konstant mængde [l^C]-testosteron (52 til 55 mCi/mmol, New England Nuclear, Boston, MA) i ethanol og varierende mængder 35 13 DK 169438 B1 af den potentielle inhibitor i ethanol blev anbragt i prøverør og opkoncentreret til tørhed i en SAVANT Speed Vac. Til hvert rør blev sat puffer, 20 μΐ 10 mM NADPH og en portion prostata-partikelopløsning til et slutvolumen på 0,5 ml 50 mM natrium-5 citrat, pH-værdi 5,0. Efter inkubation af opløsningen ved 37°C i 20 til 30 minutter blev reaktionen standset ved tilsætning af 4 ml ethylacetat og 0,25 pmol af hver af testosteron, di-hydrotestosteron, androstandiol og androstandion som bærere. Det organiske lag blev fjernet til et andet prøverør og ind-dampet til tørhed i en Speed Vac. Resten blev opløst i 20 til 30 μΐ chloroform, anbragt i pletter på en individuel bane af en 20 x 20 cm i forvejen med kanaler forsynet si 1icagel-TLC-plade (Si 250R-PA, Baker Chemical) og fremkaldt to gange med acetone: chloroform (1:9). Det radiokemiske indhold i båndene af substratet og produkterne blev bestemt med BIOSCAN Imaging Scanner (Bioscan, Inc., Washington D.C.). Procentsatsen af udvundet radioaktivt mærke omdannet til produkt blev beregnet, hvor ud fra enzymakt i vi teten blev bestemt. Alle inkubationer blev udført således, at der ikke forbrugtes mere end 12% af substratet (testosteron).

De eksperimentelt opnåede data blev EDB-ti 1 passet til en lineær funktion ved at afsætte den reciprokke værdi af enzymaktiviteten (1/hastighed) mod den variable inhibitorkoncentration (M. Dixon, 1973), Biochem. J., 55, 170). Ved at antage, at den 2 5 steroide inhibitor er en kompetitiv inhibitor mod testosteron, kan en værdi for i nhi ber i ngskonstanten (K-j) beregnes ud fra 1igning 1: K-j « (B/A)/S/Km + l) ligning 1 30 hvor B er afskæringen på aksen 1/hastighed, A er liniens hældning, S er substratkoncentrationen (testosteron), der anvendtes i eksperimentet, og Kro er Michaelis-Menton-konstanten for substratet (testosteron), bestemt i et separat eksperiment til 35 at være 4,5 μΜ.

14

Tabel II

DK 169438 B1

Inhiben' nqskonstante.r for human prostata-steroid-5-a-reduktase

Forbindelse · (nM) 1) 450 + 20

CH3T

CH3H · 2) Njæ2H ' 100 + 10

rrS

—/ 0 3) C-tT^ 8 ± 2 J_/

Oi3 15 DK 169438 B1

Tabel II viser resultaterne af den ovenstående afprøvning og viser, at de testede forbindelser med formlen I er kraftige inhibitorer af human steroid-a-reduktase.

5 Visse forbindelser blev også testet for deres in vivo-styrke til at inhibere steroid-5-a-reduktaseakti-vitet. Charles River CD-hanrotter, der var 48 dage gamle og vejede ca. 200 g, fik indgivet forbindelserne med formlen I, vist i tabel III, opløst i propylenglycol og fortyndet i 10 normal saltopløsning. Forbindelserne blev indgivet oralt i doser på 5, 10 og 20 mg/kg. Seks timer efter indgift af forbindelsen blev dyrene aflivet, ventral prostata udskåret og testosteron (T)- og DHT-niveauer målt ved hjælp af følgende procedure .

15

Prostatavæv blev udskåret, gjort parat, vejet, hakket og vasket med phosphatpuffer. Vævet blev derefter homogen i seret i phosphatpuffer og ekstraheret ved tilsætning af ethylacetat og blanding på en omløbsmixer i 45 minutter. Ethyl acetatet blev 20 afdampet, og resten blev genopløst i ethanol og blev centrifugefiltreret under avendelse af 0,45 μΜ filtrerpapir. Komponenterne blev derefter adskilt under anvendelse af HPLC med omvendt fase til opsamling af T- og DHT-fraktioner. Fraktionerne blev reduceret til tørhed og genopløst i standard-T/DHT-analy-25 sepuffer, der fås fra Amersham. T- og DHT-niveauer blev derefter målt under anvendelse af standardteknikker, såsom radio-immunanalyse.

30 35

Tabel III

16 DK 169438 B1

Forbi ndel se T* dht T/DHT* 5 Kontrol 0,57±0,04 2,0810,15 0,32 (20R)-hydroxymethyl- 5 mg/kg 0,5210,27 0,7210,21 0,72 4- methyl-4-aza- 10 mg/kg 0,44+0,13 0,53+0,12 0,83 5- a-8(14)-preg- 20 mg/kg 0,45+0,12 0,49+0,14 0,92 nen-3-on 4-methy1-4-aza- 5 mg/kg 0,34+0,11 0,43+0,12 0,79 10 5-a-8(14)-pregnen- 10 mg/kg 0,26+0,07 0,34+0,09 0,76 3-on-(20R)- 20 mg/kg 0,30+0,04 0,34+0,06 0,88 20-carboxylsyre * T- og DHT-niveauer er givet i ng/100 mg ventral prostatavæv i standardfejl på middelværdien (SEM).

15 I tabel III sammenlignes de resultater, der opnås i dyrene, der er behandlet med forbindelserne med formlen I med dem, der opnås i bærerbehandlede kontroldyr. San dataene viser, gav hvert af de undersøgte dosisniveauer væsentlige formindskelser i prostata-DHT- 20 niveauer og forøgede således T/DHT-forholdene. Forbindelserne med formlen I er derfor kraftige steroid-5-a-reduktasein- hibi torer in vivo.

Tidsforløbet for in vivo 5-a-reduktaseinhibering, der fremkal-2 5 des af forbindelserne ifølge opfindelsen, blev også undersøgt.

Under anvendelse af fremgangsmåder, som svarer til dem, der anvendes til opnåelse af de data, der er vist i tabel III, fik rotter indgivet 4-methyl-4-aza-8(14)-androsten-3-on-17|3-N,N- diisopropylcarboxamid, og ventra 1 prostatavæv blev udskåret til 30 T- og DHT-bestemmelser på flere tidspunkter efter indgift. Som dataene i tabel IV viser, observeredes ved sammenligning med kontroller signifikante forskelle i DHT-niveauer 1, 2, 4 og 8 timer efter indgift af forbindelsen.

35

Tabel IV

17 DK 169438 B1

Kontrol 1 time 2 timer 4 timer 8 timer T

5 (ng/100 0,436±0,12 0,533±0,15 0,481+0,12 0,607±0,24 0,565+0,16 mg væv)*

DHT

(ng/100 0,754±0,10 0,532+0,08 0,496±0,05 0,504±0,09 0,498+0,04 mg væv)* T/DHT 0,58 1,00 0,97 1,20 1,13 10 ___ * Data vist om middelværdi ± standardfejl på middelværdien ** P<0,05

Forbindelserne med formlen I inkorporeres i passende dosisfor-15 mer, såsom kapsler, tabletter eller injicerbare præparater. Der anvendes faste eller flydende farmaceutiske bærere. Faste bærere omfatter stivelse, lactose, calciumsulfatdihydrat, terra alba, saccharose, talkum, gelatine, agar, pektin, akacie, magnesiumstearat og stearinsyre. Flydende bærere omfatter si- 20 rup, jordnøddeo1 ie, olivenolie, saltopløsning og vand. Tilsvarende kan bæreren eller fortyndingsmidlet omfatte ethver materiale med forlænget frigivelse, såsom glycerylmonostearat eller glyceryldistearat, alene eller sammen med en voksart.

Mængden af fast bærer varierer meget, men vil fortrinsvis være 25 fra ca. 25 mg til ca. 1 g pr. dosisenhed. Når der anvendes en flydende bærer, vil præparatet foreligge i form af en sirup, eliksir, emulsion, blød gelatinekapsel, steril, injicerbar væske, såsom en ampul, eller en vandig eller ikke-vandig væskesuspension .

30

De farmaceutiske præparater fremstilles ved at følge konventionelle farmeceutiske metoder, der involverer blanding, granulering og komprimering, om nødvendigt, til tablet - former, eller blanding, fyldning og opløsning af bestanddele- ne, som det er passende, til opnåelse af de ønskede orale eller parenterale produkter.

3 5 18 DK 169438 B1

Ooser af de foreliggende forbindelser med formlen (I) i en farmaceutisk dosisenhed som beskrevet ovenfor vil være en effektiv, ikke-toksisk mængde valgt fra intervallet 0,1-1000 mg/kg aktiv forbindelse, fortrinsvis 1-100 mg/kg. Den valgte dosis indgives til et menneske med behov for steroid-5-a-re- 5 duktaseinhibering fra 1 til 6 gange dagligt oralt, rektalt, ved injektion eller kontinuerligt ved infusion. Orale dosisenheder til human indgift indeholder fortrinsvis fra 1 til 500 mg aktiv forbindelse. Der foretrækkes parenteral indgift, hvori anvendes 1avere doser. Oral indgift i højere doser kan 1 o A imidlertid også anvendes, når det er ufarligt og bekvemt for pati enten.

Metoden til hæmning af steroid-5-a-reduktaseaktivitet i pattedyr, herunder mennesker, omfatter intern indgift til et indi-15 vid med behov for en sådan inhibering af en effektiv steroid- 5-a-reduktaseinhiberende mængde af en forbindelse med formlen I.

20 De følgende eksempler illustrerer fremstilling af forbindelser med formlen (I) og farmaceutiske midler indeholdende disse forbindelser.

25 30 35

Eksempel 1 DK 169438 Bl 19 (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-g-8(14)-preqnen-3-on 5 (i ) (2OR)-20-hydroxymethyl-4-pregnen-3-on

Til en opløsning af (20R)-3-oxopregn-4-en-20-carboxaldehyd (100 g, 305 mmol, kommercielt tilgængeligt fra Upjhon) i 1500 ml ethanol og 250 ml tetrahydrofuran afkølet til ca. 5°C blev 10 portionsvis sat natriumborhydrid (3,35 g, 89 mmol) for at hol de temperaturen under 15°C. Efter 20 minutters forløb tilsattes eddikesyre (100 ml), og blandingen blev opkoncentreret til en sjappet masse (slush) på en rotationsfordamper. Remanensen blev derefter taget op i chloroform, successivt vasket med 15 vand og saltopløsning og derefter tørret over natriumcarbonat og opkoncentreret til opnåelse af (20R)-20-hydroxymethy 1-4-pregnen-3-on som et hvidt, fast stof (100 g, 100%).

(i i) Methyl-(20R)-20-hvdroxymethy1-5-oxo-3,5-secopreqnan-3-20 oat

Den ovennævnte enon (100 g, 303 mmol) blev opløst i 1000 ml dichlormethan og 500 ml methanol, afkølet til minus 78®C og behandlet med et overskud af ozon. Den resulterende opløsning 25 blev renset med argon, idet den blev opvarmet til 40eC. Opløsningen blev derefter opkoncentreret til en viskos, farveløs olie, taget op i 500 ml dimethylacetamid og omrørt i mørke under argon med 50 g natriumbicarbonat og 50 ml methyl jod id i 48 timer. Reaktionsblandingen blev derefter hældt i 4 μΐ kold 30 saltopløsning og ekstraheret med dichlormethan. De organiske ekstrakter blev omhygge1igt vasket med vand og saltopløsning og derefter tørret over natriumsulfat og opkoncentreret til en gul-rød-olie. Denne olie blev filtreret gennem 1000 g silica- .· gel med 25% ethylacetat i hexan til efter opkoncentrering at 35 give ketoesteren methyl-(20R)-20-hydroxymethy1-5-oxo-3,5-seco-pregnan-3-oat som en let gul, viskos olie (71,8 g, 65%).

20 DK 169438 B1 (i i i ) Methyl-(20R)-20-hydroxymethyl-5-oxo-3,5-seco-6-preqnen-3 -oat

Til ketoesteren ovenfor (71,8 g, 197 mmol) i 1500 ml ethylace-5 tat blev sat pheny1seleny1ch1 or id (45 g, 235 mmol), og den resulterende mørke opløsning blev omrørt under argon i 3 timer. Opløsningen blev derefter vasket med vand, mættet natriumbi-carbonat, vand og saltopløsning og tørret over kaliumcarbonat. Ethyl acetatopløsningen blev derefter afkølet til 15eC og be-10 handlet med 30% hydrogenperoxid (65 ml), idet temperaturen blev holdt under 30 ° C. Efter 1,5 times forløb blev opløsningen vasket med vand, mættet natriumcarbonat, vand og saltopløsning og tørret og opkoncentreret til et gult skum (65 g). Søjlekro-matografi (silica, 25% ethylacetat i hexan) gav esterenonen 15 methyl -(20R)-20-hydroxymethyl-5-oxo-3,5-seco-6-pregnen-3-oat som en farveløs, viskos olie (3 g, 32%).

(iv) (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5,7-preqnadien-3-on 20 Til den viskose esterenon ovenfor (1,67 g, 4,6 mmol) blev sat 10 ml ethylenglycol. Methylamin (3,5 g) blev derefter boblet ind i glycolen, i hvilket tidsrum esterenonen opløstes. Opløsningen blev langsomt opvarmet til 180eC i 20 minutter før afkøling til omgivelsernes temperatur. Den resulterende mørke 25 opløsning blev fortyndet med koldt vand og omhyggeligt ekstra heret med chloroform. De kombinerede ekstrakter blev vasket med vand og saltopløsning og tørret og opkoncentretet til et brunt skum (1,74 g), der blev kromatograf eret (silica, 20% ethylacetat i hexan) til opnåelse af dienamidet (20R)-hydroxy-30 methyl-4-methyl-4-aza-5,7-pregnadien-3-on som et hvidt, fast stof (380 mg, 24%).

(v) (2OR)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-preqnen-3-on 35 Dienamidet ovenfor (500 mg, 1,38 mmol) i 100 ml ethylacetat indeholdende 1% ethanol blev hydrogeneret ved 25°C og 1 atmosfære over 1,3 g 10% Pd på carbon i 3 timer. Opløsningen blev filtreret for at fjerne katalysator og opkoncentreret til et '21 DK 169438 B1 hvidt, fast stof. OmkrystaΠi sat i on fra ethylacetat gav 300 mg (2OR)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-α-δ(14)-pregnen-3-on som et hvidt, krystallinsk, fast stof, smeltepunkt (ukorrigeret) 219-220°C.

5

Eksempel 2 4-methyl-4-aza-5-g-8(14)-pregnen-3-on-(2OR)-20-carboxylsyre 10 Til en opløsning (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-pregnen-3-on (200 mg, 0,56 mmol), fremstillet i eksempel 1, i 15 ml acetone og 1 ml tetrahydrofuran blev dråbevis sat Jones reagens, indtil en rød farve varede ved. Der tilsattes derefter isopropanol for at standse overskud af oxidationsmiddel. 15 Opløsningen blev dekanteret fra de gummiagtige chromsalte, op-koncentreret og delt mellem dichlormethan og vand. Saltene blev opløst i vand og ekstraheret med dichlormethan. De kombinerede organiske lag blev derefter vasket med saltopløsning, tørret over natriumsulfat og opkoncentreret til et hvidt, fast 20 stof. Omkrystallisation fra methanol/ethylacetat gav som hvide krystaller 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-pregnen-3-on-(20R)-20-car-boxylsyre (157 mg) (112 mg, 54%), smeltepunkt (ukorri geret) 310-315°C.

25 Eksempel 3 4-methyl- 4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on-176-N,N-di isopropyl-carboxami d.

3 0 (i) Methylandrost-4,6-dien-3-on-17g-carboxy1at

Methyl-androst-4-en-3-on-17|S-carboxylat (10 g, 30,3 mmol, fremstillet i overensstemmelse med Rasmusson et al., J. Med.

JK

Chem. 17, 1960 (1984) og chloranil (8,95 g, 36,4 mmol) i 700 35 ml t-butanol blev opvarmet under tilbagesvaling 3,5 timer og derefter afkølet og filtreret. Filtratet blev opkoncentreret, og remanensen taget op i 700 ml chloroform og vasket succes-’ _ sivt med 4 x 150 ml vand, 3 x 150 ml mættet natriumbicarbonat, 22 DK 169438 B1 3 x 150 ml 5¾ natriumhydroxid og 3 x 150 ml saltopløsning, tørret over natriumsulfat og opkoncentreret til opnåelse af methy 1 androst-4,6-dien-3-on-17j3-carboxy 1 at som et mørkt skum (7,0 g, 70¾).

5 (i i) Methyl-7-thioacetyl-androst-4-en-3-on-17g-carboxvlat

Dienonen ovenfor (7,0 g, 21,3 mmol) og thioeddikesyre (15 ml) blev opvarmet ved tilbagesvaling i 2,5 timer. Overskud af thi -10 oeddikesyre blev derefter fjernet i vakuum, og remanensen blev opløst i 100 ml ethylacetat og vasket med vand, mættet natri-umbicarbonat og saltopløsning, tørret og opkoncentreret til opnåelse af methyl-7-thioacetylandrost-4-en-3-on-170-carboxy-lat som en mørk olie (8,46 g, 98¾).

15 (iii) Dimethyl-3,5-seco-6-androsten-5-on-3i178-di carboxyl at

Thi oacetylenonen ovenfor (17,0 g, 42,1 mmol) i 100 ml dichlor-methan og 50 ml methanol ved minus 78°C blev behandlet med 20 overskud af ozon. Den resulterende opløsning blev renset med argon, opvarmet til omgivelsernes temperatur og opkoncentreret. Remanensen blev opløst i 100 ml methanol og 20 ml 10¾ natriumhydroxid og opvarmet til tilbagesvaling i 3 timer. Opløsningen blev derefter syrnet med saltsyre, opkoncentreret og 25 delt mellem chloroform og vand. Det vandige lag blev yderligere ekstraheret med chloroform, og de kombinerede organiske lag blev vasket med saltopløsning, tørret og opkoncentreret. Remanensen blev taget i diethylether med nok dichlormethan til at bevirke opløsning, afkølet til 0°C og behandlet med en æterisk 30 opløsning af overskud af diazomethan. Opkoncentrering af den resulterende opløsning gav 10,5 g af en gul olie, der blev kromatograferet (silica, 30¾ ethylacetat i hexan) til opnåelse af forbindelsen di methyl-3, S-seco-S-androsten-S-on-S^ 17/3-dicarboxylat (5,0 g, 33¾) som en farveløs olie.

35 23 DK 169438 B1 (iv) Hvdroxvethv1-4-methv1-4-aza-5,7-androstadien-3-on-17g-carboxyl at

Til enonesteren ovenfor (5,0 g, 13,8 mmol) og 50 ml ethylen-5 glycol blev sat methylamin (10 g), hvorefter enonesteren blev opløst. Den resulterende opløsning blev derefter opvarmet over en 90 minutters periode til 180°C og holdt på denne temperatur i 20 minutter før afkøling til omgivelsernes temperatur. Den resulterende mørke opløsning blev fortyndet med koldt vand og 10 omhyggeligt ekstraheret med chloroform. De kombinerede organiske ekstrakter blev derefter vasket med vand og saltopløsning, tørret og opkoncentreret til en mørkebrun olie. Kromatografi (silica, 1:1 ethylacetat/hexan) gav dienamidet hydroxyethyl- 4-methy 1 -4-aza-5,7-androstad i en-3-on-l 7/3-carboxy 1 at (1,5 g, 15 29%) som et offwhite, fast stof.

(v) Hydroxyethyl-4-methyl-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on-17B~ carboxylat 20 Dienamidet ovenfor (1,5 g, 4,02 mmol) i 20 ml 10% ethanol i ethylacetat blev hydrogeneret over 1,5 g palladiumdioxid ved omgivelsernes temperatur og 1 atmosfære i 3 timer. Katalysatoren blev derefter fjernet ved filtrering, og opløsningen blev opkoncentreret til opnåelse af hydroxyethyl-4-methyl-4-25 aza-5a-8(14)-androsten-3-on-17(3-carboxylat som et hvidt, fast stof (1,5 g).

(vi) 4-methvl-4-aza-5a-8(14)-andfosten-3-on-17B-carboxylsyre 30 Hydroxyethylesteren ovenfor (1,5 g, 4,0 mmol) og kaliumcarbo-nat (3 g) i 150 ml 10:1 methanol-vand blev opvarmet til tilbagesvaling i 12 timer. Den resulterende blanding blev opkoncentreret, fortyndet med vand, syrnet og omhyggeigt ekstrahe-ret med chloroform. Chloroformen blev afdampet, og remanensen 35 blev kromatograferet (silica, 5% methanol i dichlormethan) til opnåelse af 4-methyl-4-aza-5a-8( 14 )-androsten-3-on-17(3-carb-oxylsyre (0,75 g, 57%) som et hvidt, fast stof.

24 DK 169438 B1 (vi i) 4-methyl-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on-17B-carboxylsyre-c h 1 o r i d

En opløsning af syren ovenfor (250 mg, 0,75 mmol) i toluen (8 5 ml) blev behandlet med 0,5 ml oxalylchlorid. Efter 2 timers forløb blev de flygtige materialer fjernet ved 1 mm Hg og efterlod en remanens af 4-methy 1-4-aza-8_Sg-8(14)-andrc>sten-3-on-car-boxylsyrechlorid.

10 (vi i i) 4-methvl-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on-17B- N,N-di isopropylcarboxamid

En opløsning af ovennævnte syrechlorid (283 mg, 0,75 mmol) i 8 ml tetrahydrofuran blev behandlet med 1 ml diisopropylamin 15 natten over. Opløsningen blev fortyndet med vand og ekstraheret omhyggeligt med dichlormethan. Ekstrakterne blev tørret og opkoncentreret til et hvidt, fast stof. Præparativ HPLC (silica, 10¾ isopropylalkohol i hexan) efterfulgt af omkrystallisation i diethylether gav 4-methyl-4-aza-5a-8(14)-androsten-3-20 on-17/3-N, N-di isopropylcarboxamid (100 mg), smeltepunkt (ukor- ri geret) 185-190eC.

Eksempel 4 25 4-methy1-4-aza-5a-8(14)-androsten-3-on-17B-carboxaldehyd

En opløsning af 4-methy1-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on-178-carbo-xylsyrechlorid (378 mg, 1 mmol), fremstillet som i eksempel 3, i 10 ml tetrahydrofuran, behandledes med 1 ithium-tri-t-butoxy-30 aluminiumhydrid (254 mg, 1 mmol) ved 0°C i 1 time til efter vandig oparbejdelse at give 4-methyl-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on-17|3-carboxaldehyd.

35

Eksempel 5 25 DK 169438 B1 4-methv1-4-aza-17g-(l-oxobutv1) - 5ot-8(14 )-androsten-3-on 5 En opløsning af 4-methy1-4-aza-5a-8(14)-androsten-3-on-176-carbo-xylsyrechlorid (378 mg, 1 mmol) i 10 ml tetrahydrofuran behandledes med di-n-buty1-kobber 1 ithium ved minus 78°C. Reaktionen blev standset med vandigt ammoniumchlorid. Ekstraktion med dichlormethan efterfulgt af opkoncentrering af den orga-10 niske ekstrakt gav 4-methyl-4-aza-17£-(1-oxobutyl)-5a-8(14)-an-drosten-3-on.

Eksempel 6 15 (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-a-7-preqnen-3-on

Aktiv Raney-nikkel-W-2-katalysator (500 mg), som var blevet vasket med vand, ethanol og ethylacetat, blev suspenderet i en opløsning af (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5,7-pregnadi-20 en-3-on (115 mg, 0,33 mmol), fremstillet som i eksempel 1, i 15 ml ethylacetat og omrørt under 1 atmosfære hydrogen i 20 timer. Katalysatoren blev derefter fjernet ved filtrering, og filtratet blev opkoncentreret til et hvidt, fast stof. Kromatografi (silica, 6:3:1 cyklohexan-acetone-ethy1 acetat) gav 56 25 mg af udgangsmaterialet, (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza- 5,7-pregnadien-3-on, og 46 mg (20R)-hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5-a-7-pregnen-3-on som hvide nåle (omkrystalliseret fra ethylacetat), smeltepunkt 196-199°C.

30 Eksempel 7 4-methvl-4-aza-5-g-l,8(14)-androstadien-3-on-17g-N,N-di isopropyl carboxamid 35 En opløsning af 4-methyl-4-aza-5a-8(14)-androsten-3-on-176-N,N- diisopropylcarboxamid (345 mg, 1 mmol) i 5 ml tetrahydrofuran ved minus 70°C behandles med en opløsning af lithiumdiisopro-_ pylamid i hexan-pentan (2 ml 1,5M, 3 mmol) og får lov til at 26 DK 169438 B1 blive opvarmet til 0°C. Denne opløsning sættes derefter til en opløsning af diphenyldisulfid (300 mg, 1,38 mmol) i 2 ml te-trahydrofuran og får derefter lov til at henstå i 2 timer ved stuetemperatur. Blandingen deles derefter mellem vand og eth-5 y1 acetat. Det organiske lag vaskes med fortyndet natriumhydro xid, vand, fortyndet saltsyre, vand og saltopløsning og opkon-centreret til en remanens. Remanensen opløses i 10 ml methanol og behandles ved 0°C med en vandig opløsning af natriumperjo-dat (400 mg, 1,87 mmol, 2 ml vand) i 2,5 timer. Blandingen 10 fortyndes med vand, og bundfaldet filtreres og tørres. Bundfaldet opløses i toluen, opvarmes til tilbagesvaling i 3 timer og opkoncentreres derefter. Omkrystallisation fra ethylacetat giver 4-methy 1 -4-aza-5-a-l, 8(14)-androstadien-3-on-17/3-N,N-di-isopropylcarboxamid.

15

Eksempel 8 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on-17g-ol 20 Titelforbinde1 sen fremstilles i overensstemmelse med eksempel 1 ved at erstatte (20R)-3-oxopregn-4-en-20-carboxaldehyd med testosteron.

Eksempel 9 25 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3,17-dion

En opløsning af 4-methyl-4-aza-8(14)-androsten-3-on-17g-ol (301 mg, 1 mmol), fremstillet som i eksempel 8, i 10 ml ace-30 tone behandles med Jones reagens, indtil en rød farve varer ved. Overskud af reagens standses derefter ved tilsætning af isopropanol. Opløsningen dekanteres fra de tykke, grønne kromsalte, og saltene opløses derefter i vand og ekstraheres med dichlormethan. De kombinerede organiske lag filtreres gennem 35 et leje af magnesiumsulfat og opkoncentreres til opnåelse af 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3,l7-dion.

Eksempel 10 27 DK 169438 B1

Ethv1-4-methyl-3-oxo-4-aza-5-a-preqn-8(14),17(20)-dien-21-oat 5 En opløsning af natriumethoxid (2,8 g, 41 mmol) i 15 ml ethanol sættes til en blanding af 4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-andro-sten-3,17-dion (4,0 g, 13,3 mmol), fremstillet som i eksempel 9, og methyl di ethylphosphonoacetat (8,7 g, 41 mmol), og den resulterende blanding opvarmes til tilbagesvaling i 4 timer.

10 Blandingen afkøles og opkoncentreres, fortyndes med fortyndet vandig eddikesyre og ekstraheres med ether. De kombinerede etherekstrakter vaskes med vand, mættet vandigt natriumbicar-bonat og saltopløsning og opkoncentreres til opnåelse af ethyl -4-methyl-3-oxo-4-aza-5-a-pregn-8( 14 )-17( 20) -dien-21-oat.

15

Eksempel 11 4-methyl-4-aza-5-g-8(14),16-androstadien- 3-on-17-trifluormethylsulfonat 20

En opløsning af 4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3,17-dion (3 g, 10 mmol), fremstillet som i eksempel 9, trif1uormethy1 -su 1 fonsyreanhydrid (3,8 g, 15 mmol), og 2,6-di-t-buty1-4-me-thylpyridin (2,6 g, 12,5 mmol) i 100 ml dichlormethan omrøres 25 ved stuetemperatur i 4 timer. Den resulterende opløsning opkoncentreres. Remanensen tages op i ethylacetat-pentan, filtreres og vaskes med fortyndet HC1, vandigt natriumbicarbonat og saltopløsning og opkoncentreres derefter. Kromatografi (silica, 7:3 ethylacetat-hexan) giver 4-methyl-4-aza-5-a-8(14), 30 16-androstadien-3-on-17-trifluormethylsulfonat.

35

Eksempel 12 28 DK 169438 B1

Methyl-4-methvl-4-aza-5-g-8(14),16- androstadien-3-on-17-carboxylat 5

En blanding af 4-methyl-4-aza-5-g-8(14),16-androstadien-3-on- 17-trifluormethylsulfonat (436 mg, 1 mmo1), fremstillet som i eksempel 11, triethylamin (200 mg, 2 mmol), methanol (1,8 ml, 40 mmo!) og bi s(tri phenylphosphin)pal 1 adium(II)acetat (22 mg, 10 0,03 mmol) i 4 ml dimethyl formamid omrøres under en carbonmon- oxidatmosfære i 4 timer. Blandingen fortyndes derefter med vand og ekstraheres med methylenchlorid. Methylenchloridopløs-ningen opkoncentreres, og remanensen kromatograferes (silica, 5% methylenchlorid) til opnåelse af methyl-4-methyl-4-aza-5-15 a-8(14),16-androstadien-3-on-17-carboxylat.

Eksempel 13 4-methyl-4-aza-5-a-8(14),16-androstad i en-on-17-carboxyl syre 20 4-methyl-4-aza-5-a-8(14),16-androstadi en-on-17-carboxyl syre fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge eksempel 3 (VI) ved at erstatte hydroxyethyl-4-methyl-4-aza-5a-8(14)-androsten-3-on-17/3-carboxylat med methyl-4-methyl-4-aza-25 5-0-8(14)-androstadien-3-on-17-carboxylat.

Eksempel 14 4-methyl-4-aza-5-a-8(14),16-androstadien-3-on-17-30 N,N-diisopropv1carboxamid 4-methyl-4-aza-5-o-8(14),16-androstadien-3-on-17-N,N-diisopro-pylcarboxamid fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge eksempel 3 (VIII) ved at erstatte 4-methyl-4-aza-5a-35 8 (14)-androsten-3-on-17/3-carboxy 1 syre med 4-methyl-4-aza-5-a- 8(14),16-androstadien-3-on-17]S-carboxylsyre.

Eksempel 15 DK 169438 Bl 29 N,N-di i sopropy 1-4-methy1-3-oxo-4-aza-5-g-pregen~ 8(14),17(20)-dien-21-amid 5 N , N-di i sopropy1-4-methyl-3-oxo-4-aza-5-a-pregen-8(14),17(20) — dien-21-amid fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge eksempel 3 (VIII) ved at erstatte 4-methyl-4-aza-5a-8( 14)-androsten-3-on-17£-carboxy1 syre med 4-methy1-3-oxo-4-aza-5-a-10 pregen-8(14),17(20)-dien-21-carboxyl syre.

Eksempel 16 2 1 ,3 1 -cc-tetrahydrof uran-2 '-spiro-l?-15 (4-methyl-4-aza-5g-8(14)-androsten-3-on

Fremgangsmåden ifølge eksempel 1 med udgangspunkt i 2',3'-a-tetrahydrofuran-2'-spiro-l7-(4-androsten-3-on) giver 2',3'-a-tetrahydrofuran-2'-spiro-17-(4-methyl-4-aza-5a-8(14)-androsten-20 3-on).

Eksempel 17 178-acetamido-4-methv 1 - 4-aza-'5a-8( 14 )-androsten-3-on 25

Fremgangsmåden ifølge eksempel 1 med udgangspunkt i 17j3-acet-amido-4-androsten-3-on giver 17jp-acetamido-4-methyl-4-aza- 5a-8(14)-androsten-3-on.

30 Eksempel 18 178-carbomethoxy-- 4-methvl -4-aza-5-a-8 (14)-androsten-3-on-17-ol 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3,17-dion (303 mg) opløses 35 ved forsigtig opvarmning i 0,5 ml frisk fremstillet acetonecy-anohydrin. Efter 2 timers forløb ved stuetemperatur opsamles det udfældede faste stof til opnåelse af cyanohydri nerne som _ en blanding af epimerer ved C-17. Blandingen opløses i en op- 30 DK 169438 B1 løsning af pyridin (1 ml) og eddikesyreanhydrid (1 ml) og får lov til at henstå ved stuetemperatur i 48 timer. Fjernelse af opløsningsmidlerne under reduceret tryk giver en olie, som opløses i ether og vaskes i IN saltsyre efterfulgt af vandigt 5 natriumbicarbonat. Den organiske opløsning tørres og opkoncentreres til opnåelse af cyanohydri nacetaterne som en blanding af epimerer ved C-17.

Blandingen af cyanohydri nacetater opløses i vandfri methanol 10 og afkøles til 15°C. Tør saltsyre bobles ind i, og blandingen får lov til at henstå ved stuetemperatur i 2 timer. Opløsningsmidlet fjernes derefter under reduceret tryk. En blanding af tetrahydrofuran (2 ml) og vand (w ml) tilsættes efterfulgt af natriumhydroxidpellets (1 g), og blandingen omrøres i 2 ti-15 mer ved stuetemperatur og syrnes derefter og ekstraheres med dichlormethan. Blandingen af hydroxysyrer, der opnås ved op-koncentrer i ng, opløses i ether og behandles med diazomethan til opnåelse af hydroxymethylestrene. Kromatografi på silica-gel giver 17g-carbomethoxy-4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-androsten-20 3-on-17-ol.

Eksempel 19 17g-(5)-tetrazololvi-4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on.

25 17-carbomethoxy-4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on (303 mg), fremstillet som i eksempel 18) i tetrahydrof uran (5 ml) ved minus 78eC behandles langsomt med Redal (0,5 mmol), og opløsningen holdes ved minus 78°C i 2 timer og behandles deref-30 ter med vandigt ammoniumchlorid. Blandingen ekstraheres med ether, og den organiske opløsning vaskes med saltopløsning, tørres og opkoncentreres til opnåelse af l7-carboxyaldehyd-4-methyl-4-aza-5-a-8{14)-androsten-3-on.

35 Denne opløstes derefter i pyridin (0,5 ml) og behandles med hydroxylaminhydrochlorid (80 mg) ved stuetemperatur natten over. Blandingen fortyndes med ether og vaskes med vand og __ saltopløsning og tørres derpå og inddampes til opnåelse af 31 DK 169438 B1 oximet af 17-carboxaldehyd-4-methy1-4-aza-5-a-8(14)-androsten- 3- on.

Denne blev opløst i dichlormethan (2 ml) og blev behandlet med 5 1,11-carbonyl diimidazol (165 mg). Efter 1 times forløb ved stuetemperatur blev opløsningen fortyndet med dichlormethan og vasket med vand og derefter saltopløsning og blev derefter tørret og opkoncentreret til opnåelse af 17-carboni tri 1-4-me-thyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3-on.

10

Denne blev opløst i dimethyl formamid (2 ml) og behandlet med natriumazid (55 mg), 1 i thiumchlorid (50 mg) og benzyl aminhy-drochlorid (10 mg). Blandingen blev derefter opvarmet til 110eC i 24 timer. Efter afkøling blev opløsningen fortyndet 15 med vand og i saltsyre (1 ml), og den udfældede tetrazol blev frafiltreret og tørret.

Eksempel 20 20 En oral dosisform til indgift af forbindelserne ifølge opfindelsen fremstilles ved sigtning, blanding og fyldning i hårde gelatinekapsler af bestanddelene i de nedenfor i tabel V viste andele.

25 Tabel V

Bestanddele Mængder 4- methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten-3- 50 mg 30 on-17/3-N,N-diisopropylcarboxamid magnesiumstearat 5 mg lactose 75 mg

Eksempel 21 35

Saccharosen, calciumsulfatdi hydratet og 4-aza-5-a-8(14)-17-substitueret-androsten-3-onen vist i tabel VI nedenfor blan-des og granuleres i de viste andele med en 10% gelatineopløs-

Claims

5 Bestanddele Manqder 4-methyl-4-aza-5-a-8(14)-androsten- 100 mg 3- οη-17β-Ν,Ν^ή isopropylcarboxamid calciumsulfatdihydrat 150 mg saccharose 20 mg 10 stivelse 10 mg talkum 5 mg stearinsyre 3 mg Eksempel 22 15 4- methyl-3-oxo-4-aza-5-a-pregn-8(14),17(20)-di en-21-carboxyl -syre, 75 mg, dispergeres i 25 ml normal saltopløsning til fremstilling af et injicerbart præparat. 20 Patentkrav. 1. 17-substituerede 4-aza-5,7-andostadien-3-on-derivater, 25 kendetegnet ved, at de har formlen 30 -{ 111 XXj - *1 Λ 35 DK 169438 B1 hvori R1 er H eller C^galkyl, R2 er H eller C^galkyl, R3 er 5 α-hydrogen og (a) 0 1 4 - (Alk) n-C-R , hvor Alk er en ligekædet eller foj> 10 grenet hydrocarbonkæde med 1-12 carbonatomer, n er 0 eller 1 og R4 er (iii) C^alkyl, (vi) NR5R6, hvor R5 og R6 hver uafhængigt af hinanden er valgt blandt hydrogen, lige-15 kædet eller forgrenet Cj_galkyl, C3_6- cykloalkyl og phenyl, eller R5 og R6 taget sammen med det nitrogenatom, hvor til de er knyttet, danner en 5-6-leddet mættet ring eller 20 (vii) OR7, hvor R7 er hydrogen, alkalimetal, ligekædet eller forgrenet C-^galkyl eller benzyl eller (b) -Alk'-OH, hvor Alk' er en forgrenet C3_8 kæde.
2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 9 5 den er (2OR) -hydroxymethyl-4-methyl-4-aza-5,7-pregnandien-3-on eller hydroxyethyl-4-methyl-4-aza-5,7-androstadien-3-on-17/3-carboxylat. 3. 3,5—seco-6-androsten-5-on-3-carboxylat-derivater, k e n-30 detegnet ved, at de har formlen R3 0½ II _ r20q^C
35. IV DK 169438 B1 v hvori R2 er H eller Cj.galkyl, R3 er α-hydrogen og 5 (a) 0 i 4 -(Alk)n-C-R , hvor Alk er en ligekædet eller forgrenet hydrocarbonkæde med 1 til 12 car-bonatomer, n er 0 eller 1 og R4 er (iii) C^galkyl, (vi) NR5R6, hvor R5 og R6 hver uafhængigt af hinanden er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet C^galkyl, C3_6cykloalkyl og 15 r £ phenyl, eller R og R taget sammen med det nitrogenatom, hvortil de er knyttet, danner en 5-6-leddet ring, eller (vii) OR7, hvor R7 er hydrogen, alkalimetal, ligekædet eller forgrenet C-.-.oalkyl eller ben- 20 zyl, eller (b) -Alk'-OH, hvor Alk' er en forgrenet C3_8kæde, og R20 er C-j.galkyl.
4. Forbindelse ifølge krav 3, kendetegnet ved, at 25 den er methyl- (2OR) -20-hydroxymethyl-5-oxo-3,5-seco-6-pregnen-syre eller dimethy 1-3,5-seco-6-androsten-5-on-3-syre-l7j8-car-boxylat.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af 17-substituerede-4-aza- 3 0 5a-androsten-3-on-derivater med formlen R3 jjp ' m R 0 DK 169438 B1 hvori den ene af Δ7 og Δ8 er -CH2-CH2-, mens den anden er -CH=CH-, R1 er H eller C^alkyl, R2 er H eller C^^alkyl,
5 R1 er (a) α-hydrogen, og (a) 0 I 4 10 - (Alk) n-C-R , hvor Alk er en ligekædet eller for grenet hydrocarbonkæde med 1-12 carbonatomer, n er 0 eller 1 og R4 er (iii) q.galkyl, (vi) NRSR6, hvor R5 og R6 hver uafhængigt af 15 hinanden er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet C-^galkyl, C3_6-cykloalkyl og phenyl, eller R5 og R6 taget sammen med det nitrogenatom, hvor til de er knyttet, danner en 5-6-leddet o n mættet ring, eller (vii) OR7, hvor R7 er hydrogen, alkalimetal, ligekædet eller forgrenet C1_18alkyl, benzyl eller (b) Alkf-OH, hvor Alk' er en forgrenet C3_8 kæde, 25 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, kendetegnet ved hydrogenering af en forbindelse med formlen 30 1 7 111 J^ÅJ 5 hvor R1, R2 og R1 er som defineret ovenfor. DK 169438 B1
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den fremstillede forbindelse er 4-methyl-4-aza-5-o:-8 (14)- androsten-3-on-17j(?-N,N-diisopropylcarboxamid eller (20R)-hy- droxymethyl-4-methyl-4-aza-5-a- (7 (8) -pr egnen-3-on. 5 10 15 20 25 30 35