PT86572B - Processo para a preparacao de complexos polimericos e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

MEMÓRIA DESCRITIVA

A presente invenção refere-se aos objectivos especificados nas reivindicações, isto é, aos novos complexos poliméricos, a composições farmacêuticas contendo estes compostos, à sua utilização no diagnóstico e terapia, bem como ao processo para a preparação destes compostos e composições.

A utilização de complexantes e ou complexos , ou dos seus sais, em medicina, já é conhecida há muito tempo.

. Como exemplos citam-se:

N complexantes como estabilizadores de composições farmacêuticas, complexos e os seus sais como agentes auxiliares para administração de iões dificilmente solúveis (por exemplo ferro) complexantes e complexos (de preferência de cálcio ou de zinco) eventualmente utilizados como sais com bases orgânicas e/ou inorgânicas, como antídotos para intoxicações no caso da previsão de incorporações de metais pesados ou dos seus isóto pos radioactivos, e complexantes como agentes auxiliares na medicina nuclear mediante a utilização de isótopos radioactivos, tais como para a sintigrafia.

Na Patente DE-OS 3 401 052 são propostos novos sais complexos paramagnéticos como meios de diagnóstico , predominantemente como meios para diagnóstico por NMR.

Estes complexos e sais complexos são muito bem tolerados e garantem uma eliminação o mais completa possível dos iões, paramagnéticos. 0 seu maior inconveniente é sobretu do o facto de eles se distribuírem no espaço extracelular ape nas de forma não específica e, por conseguinte, só em casos excepcionais se prestam para um reconhecimento de tecidos patolõgicament e modificados.

A possibilidade de solucionar, pelo menos em parte, este problema por utilização de complexantes que, por um lado, estão ligados por ligação iónica ao metal adequado para cada caso (ver adiante), bem como, por outro lado, por ligação a um grupo funcional ou a uma molécula não tóxica e o mais organoespecífica possível, que serve de molécula transportadora, foi até agora conseguida de forma muito lumitada.

Assim, por exemplo, o número de centros paramagnéticos nos complexos que são descritos nos pedidos de Patente Europeia nS 88695 e n- 150884, são insuficientes para uma ligação organo-específica.

Se se aumentar o número de iões metálicos ne cessários por incorporação múltipla de unidades complexantes na macromolécula, este facto está sempre associado a uma influência intolerável sobre a afinidade e/ou a especificidade desta macromolécula /J. Nucl. Med. 24. 1158 (1983)7.

Subsiste pois uma necessidade, para diversas finalidades, de se obterem compostos complexos estáveis, bastante solúveis mas também mais inócuos, os quais contenham um número o maior possível de iúes metálicos necessários no complexo, sem que a sua afinidade e/ou a sua especificidade fiquem prejudicadas. A invenção deriva pois do problema de se porem à disposição estes compostos e agentes, bem como um pro cesso o mais simples possível para a sua preparação. Estes objectivos são solucionados pela presente invenção.

Descobriu-se que complexos poliméricos, que consistem num ligante contendo grupos ácido carboxílico, ácido fosfónico e/ou grupos fenólicos, com unidades aminoalquila das, pelo menos um ião de um elemento de número atómico 21-29, 31, 32, 38, 39, 42-44, 49 ou 57-83, bem como eventualmente ca tiães de bases inorgânicas e/ou orgânicas ou de aminoácidos ou de amidas de aminoácidos, se prestam, surpreendentemente, de forma excelente para a preparação de meios para diagnóstico por NMR, raios X e radiodiagnóstico, bem como meios radioterapêuticos, visto que contêm ligados de forma estável o número de iSes metálicos no complexo que são necessários sobretudo para esta utilização.

Como ligantes utilizam-se por exemplo compostos de fórmula geral I

(I) em que n representa números inteiros de 7 até 20.000,

X 2 3

X representa um átomo de hidrogénio, um radical CR R R^J ou um

2 radical CR R -U, em que tem o significado de um em que

A' representa OH ou fcem o significado de em

um

representa hidrogénio ou A’, em que grupo (NH)_u-/B-(NH)_v_/_v-Vou O?, que u e v representam os número números 0 ou 1, (CH„) Z, ' 2'm de hidrogénio de hidrogénio s O, 1 ou

2, w

R¹

R²

R³

R²* representa representa representa representa representa um radical os um um um grupo átomo átomo grupo benzilo, um alquilo com 1 ou um grupo (CH₂)^Z ou um grupo (ΟΗ,,)^Ζ e a 6 átomos de carbono ou em m,

Z que e k representam os números 0 a 10 e representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 1 a 20 átomos de carbono, um grupo COOH, PO^H^ ou em um um um

átomo de hidrogénio ou o radical OH, alquileno com 0 a 20 átomos de carbono e grupo átomo de hidrogénio, uma macromolécula, um que representa representa representa grupo funcional eventualmente ligado por um grupo alquileno com 1 a 20 átomos de carbono, saturado ou insaturado,de cadeia linear ou ramificada, ou uma macromolécula ou biomo lécula ligadas por este grupo funcional, contendo eventual mente o grupo alquileno, grupos imino, fenileno oxi, fenil enoimino, amido, éster, átomos de oxigénio, enxofre e/ou azoto, e estando eventualmente substituído por grupos hidroxi, mercapto e/ou amino,

podendo os substituintes X nos membros individuais e nas extremidades dos compostos, assim como os substituintes Z em r\ 2 3 ~

R e R , ser iguais ou diferentes, com a condição de que nem todos os X representem simultaneamente hidrogénio, que pelo menos um Z não represente hidrogénio ou alquilo com 1 a 20 átomos de carbono, que no caso de m, 1 e k serem iguais a 0 nem todos os substituintes Z representem -COOH, -PO^H^ ou

que eventualmente uma parte dos grupos

-COOH, -PO„H„ ou

estejam presentes na forma de éster ou amida, e de fórmula II γ Q ii Q0 x i II , io.

N - CH - C - (NH - CH - C)- OH

X em que

Q represente o radical de um aminoácido natural que contém um ou mais grupos NX e/ou NX^» ^e n e X têm os significados indicados acima.

O elemento com o número atómico indicado acima, que forma o ião central do sal complexo fisiològicamente aceitável, pode evidentemente, para os fins de utilização enu merados do agente de diagnóstico de acordo com a invenção,ser também radioactivo.

Se o agente de acordo com a invenção for previsto para utilização no diagnóstico por NMR, o ião central do sal complexo tem que ser paramagnético. Ê o caso, em parti cular, de iões bivalentes e trivalentes dos elementos de núme ro atómico 21-29» 42, 44 e 57~7θ· Os iões apropriados são por

por exemplo os iões crómio (ill), manganês(II), ferro(li), co balto(ll), níquel(li), cobre(li), prazeodímio(ill), neodímio(ill), samário(lll) e itérbio(ill). Devido aos seus momentos magnéticos muito fortes são especialmente preferidos os iões gadolínio(ill), térbio(lll), disprózio(ill), hólmio(lll), érbio (ill) e ferro(III).

^ara a utilização dos agentes de acordo com a invenção em medicina nuclear o ião central tem que ser radioactivo. São adequados por exemplo isótopos radioactivos dos elementos cobre, cobalto, gálio, germânio, ítrio, estrôncio , tecnécio, índio, itérbio, gadolínio, samário e irídio.

Se os agentes de acordo com a invenção forem destinados & utilização no diagnóstico por raios X, o ião cen trai tem que ser derivado de um elemento de nútnero atómico su perior para se conseguir uma absorção suficiente da radiação X Descobriu-se que são apropriados para esta finalidade os agen tes de diagnóstico que contêm um sal complexo fisiològicamente aceitável cujo ião central e derivado de elementos de núme ro atómico 21-29, 42, 44, 57-83? é o caso por exemplo do ião lantânio(ill) e dos iões já referidos acima da série dos lantanídeos.

Os complexos poliméricos de acordo com a invenção contêm pelo menos um ião de um elemento de número atómico indicado acima. São preferidos complexos que possuem um ião para cada 5 até 50, e em particular 8 a 20 grupos COOH, PO^Hg ou fenol.

grupo alquileno contido em W, bem como defi nido em B, pode ser de cadeia linear, ramificada, cíclica, alifática, aromática ou aralifática, e possuir até 20 átomos de carbono. São preferidos os grupos alquileno de cadeia linear metileno até hexametileno, bem como grupos alquilenofeni lo com 1 a 4 átomos de carbono na parte alquileno.

Os grupos alquilo contidos em Z ou R podem possuir cadeia linear, ramificada ou cíclica e até 20 átomos de carbono ou, respectivamente, 6 átomos de carbono. São preferidos os radicais de cadeia linear com 1 a 6 ou respectivamente 1 a 4 átomos de carbono. Se o complexo polimérico de 1 2 acordo com a invenção contiver o radical CR R -U, existem então por molécula 1 até n/10 de preferência 1 até n/50 destes radicais.

Os grupos funcionais que figuram na definição do substituinte W e preferidos são por exemplo os grupos maleimidobenzoilo, 3-sulfomaleimidobenzoilo, 4-(maleimidometil)-ciclohexilcarbonilo, 4-/3-sulfo-(maleimidometil)-ciclohexil-carbonilo, 4-(p-maleimidofenil)-butirilo, 3-(2-piridilditio)-propionilo, metacriloil-(pentametileno)-amido, bromoacetilo, iodoacetilo, 3-iodopropilo, 2-bromoetilo, 3-mercapropropilo, 2-mercaptoetilo, fenilenoisotiacianato, 3-aminipropilo, benzi lato, etilato, t-butilato, amino, alquilamino com 1 a 6 átomos de carbono, aminocarbonilo, hidrazino, hidrazinocarbonilo, maleimido, metacrilamido, me tacriloilhidrazinocarbonilo, maleimidoamidocarbonilo, halogéneo, mercapto, hidrazinotrimetil enohidrazinocarbonilo, aminodimetilenoamidocarbonilo, bromocarbonilo, fenilenodiazonio, isotiocianato, semicarbazido e tio semicarbazido.

Para melhor elucidação referem-se alguns dos grupos escolhidos:

-ch₂-c₆h₄-o(ch₂)₃-n .^1

P

0¾ , -ch₂-c₆h₄-o(ch₂)₃nh^; ,

, -ch₂-c₆h₄-o(ch₂)₅co₂ch₂c₆h₅,

-0Η₂-0₆Η^-Ο-0Η₂-0Ο₂0Η₂0₆Η₅ , -CH₂-C₆H_ít-O(CH₂)₃CONHNH₂, *

-CH₂-C₆H_Zt-CONHNH^V' ,

-ch₂-c₆h₄-o(ch₂)₃nhnh₂,

-ch₂-c₆h₄-o(ch₂)₄-sh ,

-CH₂-C₆H^-O(CH₂)₅-CONH-N

-CH₂-C₆H^-0(CH₂)₃Br, -CHg-C^-0(CH₂ ^CONHNH- (CH₂) ₃~NHNH₂,

-CH₂-NHNH₂, -CHg-âH,

-CH₂C0NHNH₂, -(CH₂)₃SH,

-CH₂-C₆Η^-O-CH₂COBr, ₍ ,

-ch₂-c₆h₄-och₂-c-nh-(ch₂)₂nh₂,

-C^NHCOCHgBr,

-ch₂-c₆h₄-nh₂,

-c₆h₄-n₂,

¹¹ /

-C₆H^NHCS, -CH₂-C_óH^-NH-C-(CH₂)₂-S-S

-NHCO-NH-NH ,

2’ /°\ -NHCS-NH-NH₂, -CH₂-C₆H_ít- O-CH₂-CH-CH₂,

0 ¹¹ / x ¹¹

-CHg-C^- O-CH₂-C-NH- (CH₂) _1o-C-NHNH₂ , o -CH₂-C₆H^-0-CH₂-CH0H-CH₂-NH(CH₂)_1o-Í!-NHNH o CH„ 0

II ^{1 3} / \ / X

-OCH-C-N-CH -(CHOH)^-CH OH, -CH-CH-CH

0-(CH_n)„-N

-CH₂-0-(CH₂)₄-SH, -CH₂-0-(CH₂)₃-NHNH₂,

-CH₂-O-CH₂-OH₂-NH₂, -CH_n-O-CH_n-NH-C-(CH_O)

-C=C-CaC-R

oso₂c₆ ^h4c^h3,

II ' , -CCH₂Br, ____XT

II

-C-N J .

-SO Cl, -soei,

-c-(ch₂)₃-c₆h , -C-CH_OJ, -(CH₂)₃SH,

-(ch₂)₃nh₂,

-C^SCN

-C=CRR^f, C₆H^CH₂Br, em que R e R’ são iguais ou diferentes e representam cada um átomo de hidrogénio, um radical alquilo com 1 a 20 átomos de carbono, saturado ou insaturado, eventualmente substituído por um grupo fenilo, ou um grupo fenilo.

Como exemplos de aminoácidos contidos na fórmula II indicam-se li sina, arginina, orai tina, ácido çt, ^-diaminobutírico e a histidina.

Os restantes átomos de hidrogénio das azidas, isto é, aqueles que não estão substituídos pelo ião central , podem eventualmente ser substituídos por radicais éster ou amido ou por catiões de bases orgânicas e/ou inorgânicas, ou de aminoácidos. Os catiões inorgânicos adequados são por exem pio o ião lítio, o ião potássio, o ião cálcio e em particular • o ião sodio. Os catiões apropriados de bases orgânicas são, . entre outros, os das aminas primárias, secundárias ou terciá-

rias, como por exemplo etanolamina e dietanolamina, morfolina, glucamina, N,N-dimetilglucamina e em particular a N-metilglucamina. Os catiões apropriados derivados de aminoácidos são por exemplo o da lisina, da arginina e da ornitina, bem como as amidas de outros aminoácidos ácidos ou neutros.

Os radicais alquilo apropriados são sobretudo os radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, como por exemplo os radicais metilo, etilo, propilo, butilo, bem como o radical benzilo.

Os radicais amido apropriados são sobretudo os radicais formados por reacção com mono e dialquilaminas possuindo 1 a 6 átomos de carbono em cada grupo alquilo, como por exemplo dimetilamina, dietilamina, dipropilamina, ciclopropilamina, N-metil-n-propilamina, N-etilciclohexilamina,por reacção com por exemplo benzilamina, anilina ou aminas hetero cíclicas como por exemplo morfolina, piperidina ou por reacção com aminas hidroxiladas, como por exemplo 2,3-dihidroxipropilamina, N-metil-2,3-dihidroxipropilamina, 2-hidroxi-l-(hidroximetil)-etilamina, Ν,Ν-bis-(2-hidroxietil)-amina, N-metil-2,3,9,5,6-pentahidroxi etilamina, 6-atnino -2,2-dime til-1,3-dioxepino-5-ol, 2-hidroxi etilamina, 2-amino-l,3-propanodiol, dietanolamina e etanolamina.

Os complexos poliméricos de acordo com a invenção contêm o grande número de iões metálicos necessários para a sua utilização, em ligação estável ao complexo.

Assim, por exemplo, ensaios de equilíbrio ou descomplexação realizados com o complexo de gadolínio do ácido dietilenotriaminopentacético DTPA (patente Europeia EPT1 569), considerado entre os especialistas como um bom agente de contraste de grande reputação na técnica, demonstram que , surpreendentemente, os complexos poliméricos de acordo com a invenção, em toda a gama de pesos moleculares definida pelos índices, são mais estáveis do que aquele.

Também a inocuidade dos complexos poliméricos excede, por exemplo, a de complexos monoméricos oraganoespecí ficos.

É surpreendentemente elevado o valor da grandeza da relaxividade, que é uma medida da ligação: para os complexos poliméricos de acordo cotn a invenção é superior segundo um factor 10 vezes mais elevado, do que o gadolínio-DTPA referido à quantidade do complexante. Se se tomar para comparação um complexo polimérico cuja grandeze seja determinada por um valor de por exemplo 5 000 para n, resulta por molécula do complexo polimérico uma relaxividade de cerca de 5 000 a 10 000 vezes maior do que a do gadolínio-DTPA. Deste modo , para se obter uma determinada intensidade de sinal na ligação, é necessário uma correspondentemente menor quantidade molar do complexo e, consequentemente, também uma menor quantidade absoluta de gadolínio, em comparação com os monómeros.

Como outra vantagem importante dos complexos poliméricos de acordo com a invenção refere-se o seu poder de separação. Deste modo, por exemplo, num complexo com um peso molecular médio de 60 000 D e uma percentagem em peso de gado línio de 15%» no decurso de 4 horas separam-se 8O'jó da quantidade total através da urina. A velocidade de eliminação pretendida consoante a finalidade da aplicação é neste caso esta belecida muito fácil e exactamente pelo peso molecular a esco lher.

Os complexos poliméricos de acordo com a invenção possuem uma especificidade aos tecidos extraordinariamente alta. Deste modo, por exemplo, logo após alguns minutos depois de uma injecção intravenosa de uma solução do sal de N-metilglucamina do complexo de gadolínio (ill) do ácido poli etilenoimino-poliacético, obtém-se no quadro da ressonância nuclear um reforço nítido do contraste em tecidos periféricos de tumores que perdura por bastante tempo e tem como resultado um diagnóstico mais perfeito.

Surpreendentemente, podem também ser represen tados in vivo, com auxílio dos complexos poliméricos de acordo com a invenção, os vasos sanguíneos, sem utilização de sequências pulsatótias especiais.

A preparação dos complexos poliméricos de acor do com a invenção é realizada partindo-se de eductos contendo grupos ácido carboxílico, ácido fodfónico e/ou fenol, os quais por sua vez são obtidos de forma conhecida por si por alquila çâo (J. March, Advanced Organic Chemistry, McGra-w-Hill, 2^5, edição, 1977 377-382) de ligantes que transportam grupos amino, por exemplo com ácido bromoacético.

Os passos de reacção seguintes sao igualmente realizados de acordo com métodos já conhecidos da literatura. São estes a complexação com pelo menos um ião de um elemento de número atómico referido anteriormente e, no caso dos compostos deverem ser sintetizados com 1 ou mais radicais CRÍ^R²!!. a transformação de pelo menos uma parte dos grupos ácido carboxílico, ácido fosfónico ou fenol, não necessários para a 1 2 complexação, no grupo ou grupos CR R U’, em que U’ tem o signi ficado indicado para U, mas em que em vez de W se tem o radical W’ com as definições de átomos de hidrogénio ou de um gru po funcional ligado através de um grupo alquileno com 1 a 20 átomos de carbono _ podendo os grupos CRR U' assim obtidos serem iguais ou diferentes (por exemplo grupos éster ou amido e hidrazida) — eventualmente a ligação de uma macromolécula, bem como eventualmente em seguida a substituição dos restantes átomos de hidrogénio das azidas ainda existentes por catiões de bases orgânicas e/ou inorgânicas, ou de aminoácidos.

Na síntese dos complexos poliméricos contendo 12 12 os grupos -CR R -U' ou -CR R U, os passos indicados anteriormente de complexação, funcionalisação e ligação a uma macro-molécula, podem ser permutados, tendo naturalmente a ligação a uma macromolécula que preceder a funcionalisação dos grupos ácido carboxílico, ácido fosfonico ou fenol.

A introdução de um radical A” nos grupos ácido carboxílico, ácido fosfónico ou fenol, isto é, de grupos amino, hidrazino e éster, assim como de grupos funcionais even tualmente ligados através de um grupo alquileno com 1 a 20 átomos de carbono e contidos em W ou W , realiza-se por processos conhecidos da literatura (Houben-Weyl, Methoden der or ganischen Chemie, vol VIII, editora Georg Thieme Verlag, Estugarda; J. Biochem. 92, 1413 (1982).

São exemplos da transformação de grupos amino ligados a radicais aromáticos ou alifáticos as reacçães, realizadas num dissolvente aprótico anidro, como tetrahidrofurano, dimetoxietano ou sulfóxido de dimetilo, na presença de um agente de fixação de ácidos, como por exemplo hidróxido de só dio, hidreto de sódio ou carbonatos alcalinos ou alcalinoterrosos, como por exemplo carbonato de sódio, carbonato de magnésio, carbonato de potássio ou carbonato de cálcio, a tempe raturas compreendidas entre 0°C e o ponto de ebulição do dissolvente utilizado em cada caso, mas preferivelmente entre 20 e 6O°C, com um substrato de formula geral III (ill) em que Nf representa um grupo nucleófugo, como por exemplo

L representa um radical de hidrocarboneto alifático, aromáti co, arilalifático, de cadeia ramificada ou linear ou cíclico, tendo até 20 átomos de carbono, e

Fu representa o grupo funcional em posição terminal pretendido, eventualmente numa forma protegida (DE-OS 3.^-17 413).

Como exemplos de compostos de fórmula geral

III citam-se

Br(CH₂)₂NH₂, Br(CH₂)₃0H, BrCHgCOOCH^, BrCHgCO^Bu,

BrCH, , Βγ(0Η₂)^0Ο₂0₂Η₅, BrCH₂COBr, BrCH^ONHg,

CLCH COOC_H , C1CH CONHNH

2 5 £

As transformações de grupo carboxi podem ser realizadas por exemplo de acordo com o método de carbodiimida (Fieser, Reagents for Organic Syntheses 10, 142) através de um composto de anidrido misto /Õrg. Prep. Proc. Int, 215 (1975)7 ^ou através de um éster activado (Adv. Org. Chem. parte B, 472).

Os ligantes complexantes assim obtidos (assim como os complexos) podem também ser acoplados a uma biomolécu la ou a uma macromolécula de que se saiba que elas próprias estão presentes no órgão ou parte do órgão a ensaiar. Estas moléculas são por exemplo enzimas, hormonas, dextrano, porfirina, bleomicina, insulina, prostaglandina, hormonas hesteroi des, aminoaçúcares, aminoácidos, peptídeos tais como polilisi na, proteínas (como por exemplo imunoglobulina, anticorpos mo noclonais, lectina) ou lípidos (também na forma de liposomas). Salientam-se em particular conjugados com albuminas, como a albumina de soro humano, com anticorpos como por exemplo anti corpos monoclonais específicos de antigenes associados a tumo res, ou antimiosina. Em vez de macro moléculas biológicas podem também ser acopladas a polímeros sintéticos apropriados, como polietilenoimina, poliamidas, poliureia e politioureia. Os agentes farmacêuticos formados deste modo prestam-se, por exemplo, para utilização no diagnóstico de tumores e de infar tes, bem como na terapia de tumores. Como anticorpos monoclonais (ver por exemplo Nature 256. 495» 1975) que relativamente aos anticorpos policlonais têm a vantagem de serem específicos para um determinante antigene, possuírem uma afinidade de ligação definida, serem homogéneos (e por conseguinte a sua obtenção em estado puro ser essencialmente mais fácil) e serem susceptíveis de preparação em grande quantidade em culturas celulares, interessam para a conjugação em particular aqueles que foram descritos contra antigenes presentes sobretudo nas membranas celulares. Entre estes enumeram-se como apropriados por exemplo para a representação de tumores anticorpos monoclonais ou os seus fragmentos Fab e ^(ab’)^, que são específicos por exemplo para tumores do tracto gastroin

- 14 testinal, do peito, do fígado, da bexiga, das glândulas repro dutoras e de melanomas (Câncer Treatment Repts. 68, 317, 1984, Bio Sei 34₁ 150» 19θ4) ou indicados contra antigenes carcinoembrionários (CEa), coriogonadotropina humana ( -HCGr) ou outros antigenes dos tumores, como glicoproteínas (New Engl. J. Med. 228, 1384, 1973» Patente americana 4 331 647). São apropriados também entre outros anti-miosina, e anticorpos anti-insulina e anti-fibrina (Patente americana 4 036 945·

Os carcinomas do colo são identificados no diagnóstico por NMR com auxílio de conjugados complexos com iÔes gadolínio (ill) de ácidos polietilenoimino-poliacético com o anticorpo 7B5DH·

Para ensaios relativos ao fígado ou para o dia gnóstico de tumores prestam-se, por exemplo, conjugados ou com postos de inclusão com liposomas, que são utilizados por exem pio como vesículas unilamelares ou multilamelares de fosfaxidilcolina-colesterol.

A ligação de metais à macromolécula ou à biomolécula pretendida realizava-se até ao presente por métodos como os que são descritos por exemplo em Rev. Routn. Morphol. Embryol. Phisio. Physiologie 1981, 18, 241 e J. Pharm. Sei. 68, 79 (1979), por exemplo por reacção dos grupos nucleófilos de uma macromolécula, tais como os grupos amino, fenol, sulfi drilo, aldeído ou imidazol, com um derivado activado do compLe xo polimérico ou ligante. Como derivados activados interessam por exemplo anidridos, cloretos de ácido, anidridos mistos (ver por exemplo G. E. Krejcarek e K. L. Tucker, Biochem.,Bio phys, Res. Commun. 1977, 581) ésteres activados, nitreno ou isotiocianatos. Pelo contrário, também é possível fazer reagir uma macromolécula activada com o complexo polimérico ou ligante. Rara a conjugação com proteínas recorre-se também a substituintes, por exemplo com as estruturas COCHg, C^H^NHCS ou C₆H^OCH₂CO.

Esta espécie de ligação está, contudo, associada ao inconveniente da falta de estabilidade do complexo dos conjugados, ou à falta de especificidade (ver por exemplo Diagnostic Imaging 84, 56; Science 220, 613, 1983í Câncer Drug Delivery 1, 125, 1984).

A ligação de conjugados de acordo com a presente invenção realiza-se pelo contrário através da função amino ou hidrazino que se encontra no substituinte A, ou atra yés de outros grupos funcionais definidos acima no substituin te W. Podem neste caso ligar-se através de um ponto de ligação na macromolécula até várias centenas de iães metálicos.

No caso de conjugados de anticorpos a ligação do anticorpo ao complexo ou ligante não deve conduzir à perda ou à redução da afinidade de ligação e da especificidade de ligação do anticorpo ao antigene. Isto pode ser realizado ou por ligação à fracção de hidrato de carbono na parte Fc da glicoproteína, ou nos fragmentos Fab ou F(ab*)£, ou por ligação ao átomo de enxofre do anticorpo, ou ao fragmento do anti corpo.

No primeiro caso tem que ser realizada primei ramente uma dissociação oxidativa das unidades açúcar para se gerarem grupos formilo aptos ao acoplamento. Esta oxidação po de também ser realizada por via química com oxidantes, tais como por exemplo ácido periódico, metaperiodato de sódio ou metaperiodato de potássio, segundo métodos já conhecidos da literatura (ver por exemplo J. Histochem and Cytochem. 22. 1084, 197^) em solução aquosa, em concentração desde 1 a 100 mas de preferência de 1 até 20 mg/ml, e com uma concentração do oxidante compreendida entre 0,001 até 10 mmoles, de preferência 1 até 10 mmoles, num intervalo de pH de cerca de 4 a 8. a uma temperatura compreendida desde 0 até 37°C e com uma duração de reacção compreendida entre 15 minutos e 24 horas. Também se pode realizar a oxidação por via enzimática, por exemplo com auxílio de galoctoseoxidase, numa concentração de

- 16 — — Μ.ΙΜΙ enzima de 10 a 100 unidades/ml, com uma concentração de substrato de 1 a 20 mg/ml, a um valor de pH compreendido desde 5 até 8, uma duração da reacção de 1 a 8 h e a uma temperatura compreendida entre 20 e 4θ³Ο (ver por exemplo J. Biol. Chem. 234, 445, 1959).

Ao aldeído gerado pela oxidação são ligados complexos ou ligantes com grupos funcionais apropriados, como por exemplo hidrazina, hidrazida, hidroxilamina, fenilhidrazi na, semicarbazida e tiosemicarbazida, por reacção entre 0-37° C, com uma duração da reacção de 1 a 65 h, um valor de pH entre cerca de 5,5 e 8, e uma concentração de anticorpos de 0,5 até 20 mg/ml e uma proporção molar do complexante para aldeídos de anticorpos de 1:1 até 1000:1. A consequente estabiliza ção do conjugado é realizada por redução da dupla ligação,por exemplo com borohidreto de sódio ou com cianoborohidreto de sódio; o redutor é utilizado neste caso num excesso de 10 a 100 vezes (ver por exemplo J. Biol. Chem. 254, 4359, 1979).

A 2- possibilidade da ligação de anticorpos conjugados parte de uma redução cuidadosa das pontes de disul furetó da molécula de imunoglobulina; neste caso são dissocia das as pontes de dissulfureto susceptfveis da cadeia H da molécula de anticorpo, enquanto que as ligações S-S da região de ligação ao antigene permanecem intactas, de modo que pràti camente não se dá qualquer redução da afinidade e da especifi cidade da ligação do anticorpo (Biochem. 18., 2226, 1979, Hand book of Experimental Immunology, vol 1, 2& edição, Blackwell Scientific Publications, Londres 1963, capítulo 10). Estes grupos sulfidrilo livres das regiões interiores à cadeia II são depois submetidos a reacção com grupos funcionais apropria / / O dos dos complexantes ou complexos metálicos, a 0 ate 37 C> a um valor de pH de cerca de 4 até 7 e com uma duração da reacção de 3 até 72 h, com formação de uma ligação covalente que não influencia a região de ligação do antigene ao anticorpo.

• Como grupos reactivos apropriados mencionam-se por exemplo: . grupos halogenoalquilo, halogenoacetilo, p-mercuribenzoato,

bem como grupos que possam ser submetidos a uma reacção de adi ção de Miohael, como por exemplo grupos maleinimida ou metacrilato (ver por exemplo J. Amer. Chem. Soc. 101, 3097» 19^9)Para acoplamento dos fragmentos de anticorpo com os complexos poliméricos ou os ligantes existe adicionalmente uma série de linker’¹ bifuncionais apropriados, frequen temente podendo também ser adquiridos comercialmente (ver por exemplo Pierce, Handbook and General Calalogue 1986) que são reactivos tanto face aos grupos EH dos fragmentos, como tambám face aos grupos amino ou hidrazino dos polímeros.

Como exemplos mencionam-se: m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidato (MBS) m-maleimidobenzoil-N-sulfosuccinimidato (sulfo-MBS) N-succinimidil-/5-(iodoacetil)-amino7-benzoato (SIAB) succinimidil-4(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato (SMCC) succinimidil-4(p-maleimidof enil)-butirato (SMPB) N-succinimidil-3-(2-piridilditio)-propionato (SDPD)

4-/3-(2,5-di οχο-3-ρ1ι·Γθ11η11)-ρΓορίοηί1οχί7-3-οχο-2,5-dif enil -2,3-dihidrotiofeno-1,1-dióxido.

Podem também ser utilizadas ligações de natureza não covaiente para acoplamento, podendo tomar parte na ligação tanto ligações iónicas como também ligações de van der Waals e pontes de hidrogénio, em proporções e intensidades variáveis (princípio chave-fechadura) (por exemplo avidina-biotina, anticorpo-antigene). Também são possíveis compostos de inclusão (hóspede-hospedeiro) de pequenos complexos em grandes cavidades de macromoléculas.

princípio de acoplamento consiste em se pre parar primeiro uma macromolécula bifuncional, ou fundindo-se um anticorpo-hibridoma indicado para um antigene de tumor coei um 2® anticorpo-hibridoma indicado contra um complexo de acor do com a invenção, ou acoplando entre si os 2 anticorpos qui18

micamente através de um linker (por exemplo da forma indica da em J. Amr. Chem. Soc. 101, 3θ97 (1979)) ou ligando à avidi da (ou biotina) o anticorpo apropriado contra o antigene do tumor, eventualmente através de um linker /D. J. Hnatowich et al, J. Nucl. Med. 28, 1294 (1987)/. Em vez dos anticorpos podem também ser utilizados os seus correspondentes fragmentos F(ab) ou F(ab’)₂· Para a aplicação farmacêutica injecta-se primeiro a macromol écula bifuncional que se fixa no ponto pretendido, e seguidamente, com um determinado intervalo de tempo, o composto complexo de acordo com a invenção (eventual mente ligado à biotina (ou avitina) que é acoplado in vivo no ponto pretendido e pode desenvolver ali a sua acção de diagnóstico ou terapêutica. Além disso podem ter aplicação também outros métodos de acoplamento, como por exemplo o Reversible Radiolabeling (radiomarcação reversível) descrito em Protein Tailoring Food Med. Uses /Ãm. Chem. Soc. Symp/ (1985) 349.

Com o chamado acoplamento em fase sólida dispõe-se dé um método bastante simples para a preparação de con jugados de anticorpo ou de conjugados com fragmentos de anticorpos: o anticorpo é acoplado a uma fase estacionária (por exemplo um permutador de iões) que se encontra por exemplo nu ma coluna de vidro. Por lavagens sucessivas da coluna com uma solução apropriada para regeneração dos grupos aldeído, lavagem, passagem com uma solução do complexo funcionalisado (ou 0 ligante), lavagem (no caso de ser utilizado o ligante reali za-se ainda uma passagem com uma solução contendo o sal metálico, seguida pela passagem normal de lavagem) e finalmente eluiçao do conjugado, são obtidos rendimentos muito elevados do conjugado.

Este processo permite a produção contínua e automática de qualquer quantidade do conjugado.

Também podem ser realizados desta forma outros * passos de acoplamento.

Assim, por exemplo, podem ser preparados conjugados de fragmento pela sequência redução com papaina/linker bifuncional — complexo ou ligante bifuncionalisados.

Os compostos assim formados são em seguida pu rifiçados, de preferência cromatogràficamente, através de per mutadores iónicos, numa instalação de cromatografia líquida rápida de proteínas (fast-protein-liquid-chromatography).

A preparação dos complexos metálicos de acordo com a invenção é realizada da forma que já foi descrita na Patente DE-OS 3 401 052, dissolvendo-se ou pondo-se em suspen são o óxido metálico ou um sal metálico (preferivelmente o ni trato, acetato, carbonato, cloreto ou sulfato) do elemento de número atómico 21-29» 31» 32, 38, 39, 42-44, 49, 57-83, em água e/ou um alcanol inferior, (como metanol, etanol ou isopropanol) e fazendo reagir com a solução ou a suspensão a quan tidade equivalente do ligante que forma o complexo, e em seguida, se desejado, substituindo-se os átomos de hidrogénio das azidas existentes, dos grupos ácido ou fenol, por catiões de bases orgânicas e/ou inorgânicas ou de aminoácidos.

A neutralização é realizada neste caso com au xílio de bases inorgânicas (por exemplo hidróxidos, carbonatos ou bicarbonatos) por exemplo de sódio, potássio ou lítio e/ou bases orgânicas, como entre outras aminas primárias, secundárias e terciárias, como por exemplo etanolamina, morfoli na, glucamina, N-metil- e Ν,Ν-dimetilglucamina, bem como de aminoácidos básicos, por exemplo lisina, arginina e ornitina, ou de amidas derivadas de aminoácidos neutros ou ácidos.

*ara a preparação dos compostos complexos neu tros pode por exemplo dissolver-se ou por-se em suspensão em água o sal complexo ácido, adicionando-se a base pretendida de modo a obter-se um ponto neutro. A solução obtida pode em seguida ser concentrada em vácuo até à secura. Frequentemente é vantajoso fazer precipitar o sal neutro obtido por adição de dissolventes miscíveis com água, como por exemplo álcoois inferiores (metanol, etanol, isopropanol e outros) cetonas in feriores (acetona e outras), éteres polares (tetrahidrofurano, dioxano, 1,2-dimetoxietano e outros) e obter deste modo produ tos cristalinos fáceis de isolar e de purificar. Revelou-se bastante vantajoso adicionar a base pretendida logo durante a complexaçao da mistura reactiva e economisar deste modo um passo do processo.

Se os compostos complexos ácidos contiverem vários grupos azida livres é frequentemente conveniente prepa rar sais mistos neutros que contêm como contra-ião tanto catiões orgânicos como também inorgânicos.

Isto pode conseguir-se, por exemplo, fazendo-se reagir os ligantes complexantes em solução ou suspensão aquosa, com o óxido ou sal do elemento que fornece o ião central e com metade da quantidade necessária para a neutralização de uma base orgânica, isolando-se o sal complexo formado, eventualmente purificando-o e em seguida fazendo reagir com a quantidade necessária de uma base inorgânica para se completar a neutralização. A sequência de adição das bases também pode ser invertida.

Os conjugados obtidos do anticorpo e do complexo, antes da sua aplicação in vivo após a incubação são dialisados com um complexante fraco, como por exemplo citrato de sódio ou etileno-diaminotetracetato de sódio, para se eliminarem átomos metálicos cujas ligações sejam fracas.

No caso da utilização de compostos complexos contendo radioisotópos a sua preparação pode ser executada de acordo com os métodos descritos em ”Radiotracers for Medicai Applications”, vol 1, CRC-PRBSS, Boca Raton, Florida.

A preparação dos agentes farmacêuticos de acor do com a invenção realiza-se igualmente de forma já conhecida por si, pondo em suspensão ou dissolvendo em meio aquoso os compostos complexos de acordo com a invenção — eventualmente com a adição dos aditivos correntes na técnica galénica — e eventualmente esterilisando em seguida a suspensão ou a solução. Os aditivos apropriados são por exemplo tampões fisiològicamente inócuos (como por exemplo trometamina), pequenas adições de complexantes (como por exemplo ácido dietilenotriaminopentacético) ou se necessário, electrólitos como por exem pio cloreto de sódio ou, caso seja conveniente, antioxidantes como por exemplo ácido ascórbico.

Se se pretender, para administração entérica ou para outros fins, obter soluções ou suspensões dos agentes de acordo com a invenção em água ou em soro fisiológico, aque les são então misturados com uma ou mais substâncias auxiliares correntes na tácnica galénica (como por exemplo metilcelu lose, lactose, manite) e/ou meios tensioactivos (por exemplo lecitina, Tween^^R\ Myrj^^R^) e/ou aromatizantes para correcção do paladar (por exemplo óleos essenciais).

Em princípio e também possível prepararem-se os agentes farmacêuticos de acordo com a invenção sem o isola mento dos sais complexos. Em cada caso deverá empregar-se um cuidado especial ao proceder à ligação de quelato, de modo que os sais e as soluções salinas de acordo com a invenção es tejam praticamente isentas de iões metálicos com acção tóxica

Λ não complexados.

Isto pode ser garantido, por exemplo, com auxílio de indicadores corados, tais como alaranjado de xileno, por titulação controlada durante o processo da preparação. A invenção refere-se pois, também, ao processo para a preparação dos compostos complexos e dos seus sais. Como medida últi ma de segurança permanece a purificação do sal complexo isola do.

Os agentes farmacêuticos de acordo com a invenção contêm de preferência 1 ^.mole - 1 mole/litro do metal

na forma do seu sal complexo e são em regra doseados em quantidades de 0,001 até 5 mmole de metal/kg. São destinados à aplicação entérica e parentérica.

Os compostos complexos de acordo com a invenção estão previstos para utilização l⁸) para o diagnóstico por NMR, raios X e ultrassons, na forma dos seus complexos com os iões dos elementos de número atómico 21-29» 42, 44 e 57-83;

2⁹) para o radiodiagnóstico e a radioterapia, na forma dos seus complexos com os radioisótopos dos elementos de núme ro atómico 27, 29» 31» 32, 38, 39, 43, 49, 62, 64, 70 e 77Os agent es de acordo com a invenção satisfazem a múltiplas exigências para o seu emprego como contrastan tes para a tomografia de spin nuclear. Deste modo são excelen temente apropriados para aplicação oral ou parentérica, devido ao aumento da intensidade do sinal do quadro obtido por meio da tomografia de spin nuclear, para o melhoramento da sua definição. Além disso manifestam a elevada eficácia que é necessária para sobrecarregar o corpo com quantidades o mais re duzido possíveis de substâncias estranhas, e boa inocuidade que é necessária para garantir o carácter não invasivo dos en saio s.

A elevada solubilidade em água dos agentes de acordo com a invenção permite preparar soluções de alta concentração de modo que a carga volumétrica da circulação se man tenha dentro de limites controláveis e equilibrem a diluição pelos fluidos corporais, isto é, os agentes para o diagnóstico por NMR têm de ser 100 a 1000 vezes mais solúveis em água do que para a espectroscopia por NMR. Adicionalmente, os agen tes, de acordo com a invenção não só possuem ula elevada esta bilidade in vitro, mas também uma estabilidade surpreendentemente alta in vivo, de modo que uma libertação ou uma permuta dos iões — por si sós tóxicos — ligados de forma não covalente nos complexos, dentro de período de tempo em que os novos

agentes de contraste são totalmente eliminados, é realizada de forma extraordinariamente lenta.

isotopos capazes de emitirem ⁴³Sc, ^4USc, ⁵²Fe, ⁵⁵Co, ⁶⁸Ga

Em geral os agentes de acordo com a invenção, quando empregues como meios de diagnostico para NMR, são doseados em quantidades de 0,001 até 5 mmoles de metal/kg,de pre ferência de 0,005 a 0,5 mmoles de metal/kg. Os pormenores para a sua utilização são discutidos por exemplo em H.J. Weinmann et al, Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984).

São utilizáveis dosagens especialmente reduzi das (inferiores a 1 mg/kg) de agentes de diagnóstico por NMR organoespecíficos, por exemplo para revelação de tumores e de infartes cardíacos.

Adicionalmente os compostos complexos de acor do com a invenção podem ser utilizados vantajosamente como re agentes de desvio (shift).

Os agentes de acordo com a invenção, devido às suas propriedades radioactivas favoráveis e à boa estabili dade dos compostos complexos neles contidos, são também apropriados como agentes para radiodiagnóstico. Os pormenores para a sua utilização e dosagem estão descritos por exemplo em Radiotracers for Medicai Applications”, CRC-Press, Boca Raton, Florida.

Um outro método produtor de imagens com radio isótopos é a tomografia de emissão de positroes que utiliza positrões, como por exemplo, e Rb.

de acordo com a invenção podem também ser utilizados na radioimunoterapia. Esta distingue-se do correspondente diagnostico apenas na quantidade e natureza do isótopo radioactivo utilizado. 0 objectivo é neste caso a • desagregação de células de tumores por radiação altamente ene_r

Os compostos

gética de ondas curtas com o alcance o mais reduzido possível. A especificidade do suporte utilizado (por exemplo quelato-an ticorpo) é neste caso de importância excepcional, visto que conjugados de anticorpos localizados de forma não específica conduzem a lesões de tecidos sãos.

Os anticorpos ou os fragmentos de anticorpo dos complexos anticorpo-metal de para transportar os complexos de correspondente antigene no órgão acordo com a invenção servem forma imunoespecífica para o visado, onde o ião metálico, escolhido devido às suas propriedades de exterminação celular, pode emitir radiação que atinjam letalmente as células. Os . _Λ . . - _n 46, 47-48,.

ioes emissores ft apropriados sao por exemplo bc, bc, bc, 72 73~

Ga, e Oa, Os iões emissores ¢( possuindo períodos de semi211 212

-vida reduzidos apropriados são por exemplo Bi, Bi,

213 214 , ,212

Bi e Bi, sendo preferido o Bi.

Na aplicação in vivo dos agentes terapêuticos de acordo com a invenção estes podem ser administrados conjun tamente com um suporte apropriado, como por exemplo soro ou soro flsiologico, e conjuntamente com uma outra proteína, como por exemplo albumina de soro humano. A dosagem é neste caso dependente da natureza da perturbação celular e do ião metálico utilizado.

Os agentes terapêuticos de acordo com a inven çao são aplicados por via parentérica, de preferência íntrave nosa.

Os pormenores da utilização dos agentes radio terapêuticos são discutidos por exemplo em R. W. Kozak et al, TIBTEC, Outubro de 1986, 262.

Os agentes de acordo com a invenção são igual mente apropriados como agentes de contraste para raios X, ten do-se salientado em especial que, em comparação com os agentes de contraste iodados correntemente empregues até ao pre- 25

sente, permitem também reconhecer uma farcocinética substancialmente mais útil para o diagnóstico. São ainda especialmen te vantajosos devido a propriedades de absorção favoráveis nas gamas das mais altas tensões nos tubos, por técnicas de subtracção digital.

Em geral os agentes de acordo com a invenção, para utilização como agentes de contraste para raios X, são doseados em analogia com, por exemplo, o diatrizoato de meglu mina, em quantidades de 0,1 até 5 mmoles de metal/kg, de preferência 0,25 mmol de metal/kg.

Os pormenores da utilização como agentes de contraste para raios X são discutidos por exemplo em Barke, Rõntgenkontrastmitt el, G. Thieme, Leipzig (1970) e P. Thurjjt, E. Búcheler — ” Einfíihrung in die RÕntgendiagnostik” , G.Thieme, Estugarda, Nova York, (1977).

Os agentes de acordo com a invenção — visto que a sua impedância acústica é mai elevada do que a dos flui dos e tecidos corporais — são também apropriados como agentes de contraste para o diagnóstico por ultrassons, especialmente na forma de suspensões. São geralmente doseados em quantidades desde 0,1 até 5 mmoles/kg, de preferência de 0,25 até 1 mmol/kg.

Os pormenores da utilização de agentes de dia gnóstico por ultrassons são descritos por exemplo em T. B. Ty ler et al, Ultrassonic Imaging 3, 323 (1981) J· I· Haft, Cli nical Echokardiograjihy , Futura, Mount Kisco, Nova York 1978, e G. Stefan Echokardiographie G. Thieme, Estugarda/Nova York, 1981.

Em resumo, conseguiu-se sintetisar novos complexos poliméricos que encerram novas possibilidades no diagnóstico e na terapêutica médica. Sobretudo o desenvolvimento de novos processos de formação de imagens no diagnóstico medi co é uma meta muito promissora deste desenvolvimento.

Os exemplos que se seguem servem para uma melhor elucidação dos objectivos da invenção.

Exemplo 1

a) Complexo de gadolínio do ácido polietilenoimino-poliacético 37,0 g de ácido polietilenoimino-poliacético, preparado de acordo com a especificação DE 2 303 081, são dissolvidos em 500 ml de agua bi-destilada e aquecidos a 80 C durante duas horas e mediante agitação com 10 g de carbonato de gadolínio (hidratado, 50% em peso de Gd).

Depois da ultrafiltração e liofilização obtêm -se 41,8 g de um produto branco volumoso que, de acordo com a análise elementar, contém 13,55% em peso de gadolínio.

Analogamente ao processo la) descrito obtêm-se, a partir de ácido polietilenoimino-poliacetico e de

b) carbonato de manganês(li), o complexo de manganês com 5U-9% em peso de manganês,

c) carbonato de cobalto, o complexo de cobalto com 5*45% em peso de cobalto,

d) carbonato básico de cobre, o complexo de cobre com 5,74% em peso de cobre,

e) o carbonato de disprósio, o complexo de disprósio com 15,17% em peso de disprósio,

f) carbonato de lantânio, o complexo de lantânio com 15,O8y> em peso de lantânio,

g) carbonato de ítrio, o complexo de ítrio com 8,14% em peso de ítrio,

h) carbonato de samário, o complexo de samário com 16,33% em peso de samário,

i) carbonato de hólmio, o complexo de hólmio com 14,12% em pe so de hólmio,

j) carbonato de itérbio, o complexo de itérbio com 17,03/» ^em peso de itérbio, ‘ k) óxido de bismuto, o complexo de bismuto com 17,39% em peso de bismuto,

l) óxido de ferro (ill), o complexo de ferro III com 5,27/ em peso de ferro,

m) carbonato de chumbo, o complexo de chumbo com 19,08/ em pe so de chumbo.

Exemplo 2

a) sal de sódio do complexo de gadolínio do ácido polietileno imino-poliac ético

12,36 g do complexo preparado como descrito em la) foram dissolvidos em 50 ml de água e misturados com

78,7 Ml de soda cáustica IN. Mediante agitação vigorosa incor pora-se em 2 1 de acetona, filtra-se para remoção do sedimento e seca-se em vácuo até peso constante. Obtêm-se 13,0 de um produto branco granulado que contém 11,83/ em peso de gadolínio e 12*84/ em peso de sódio.

b) Sal de cálcio do complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético

6,38 g do complexo preparado como descrito em la) são dissolvidos em 100 ml de água e agitados a 80°C duran te 5 h com 2,1 g de carbonato de cálcio. Depois da ultrafiltração e liofilização obtêm-se 7,03 g de um pó branco que con tem 12,08/ em peso de gadolínio e 10,81/ em peso de cálcio.

c) Sal de N-metil-D-glucamina do complexo de gadolínio do áci do polietilenoiminopoliacético

21,35 g do complexo preparado como descrito em la) são dissolvidos em 200 ml de água e misturados com uma solução que contém 1 mole de N-metil-D-glucamina por litro, mediante agitação contínua, a , até que o pH permaneça no valor 6,85. Depois da liofilização obtêm-se 47,48 g de um pó branco que contém 6,19/ em peso de gadolínio.

d) Sal de etanolamina do complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético

3,75 g do complexo de gadolínio, preparado co mo descrito em la), são dissolvidos em 50 ml de água e misturados com uma solução aquosa a 10% de etanolamina até o pH al cançar o valor 6,85» Depois da liofilização obtêm-se 5,2 g de uma substância branca que apresenta um teor em gadolínio de 9,84% em peso.

e) Sal de L-lisina do complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético

2,58 g do complexo de gadolínio, preparado co mo descrito em la), são dissolvidos em 50 ml de água e misturados com uma solução aquosa a 10% de L-lisina até o pH alcan çar o valor 6,85· Depois da liofilização o produto é recupera do na forma de um pá branco volumoso. 0 teor de gadolínio ascende a 7,16% em peso.

f) Sal de morfolina do complexo de gadolínio do ácido polieti lenoiminopoliac ético

A uma solução de 3,3 g do complexo de gadolínio preparado como descrito em la), adiciona-se uma solução aquosa a 10% de morfolina até que o pH alcance o valor 6,85» Depois da liofilização obtêm-se 5,1 g de uma substância solida branca levemente higroscopica, com 8,873° em peso de gadolí nio.

Analogamente obtêm-se os correspondentes sais dos complexos descritos nos exemplos lb) até lm).

Exemplo 3

a) Polihidrazida do ácido polietilenoiminopoliacético

10,37 g do ácido polietilenoiminopoliacético são aquecidos a 60° C durante 20 min., mediante agitação, com óOO mg de hidróxido de potássio finamente pulverizado, em 150 ml de sulfóxido de dimetilo anidro. Seguidamente mistura-se com 0,5 ml de sulfato de dimetilo e deixa-se arrefecer até à. temperatura ambiente num banho de gelo, mantendo-se sob agita ção . Passadas 3 h arrefece-se até 10°C e adiciona-se gota a gota 1 ml de monohidrato de hidrazina. Seguidamente aquece-se ainda 1 h em banho-maria. Dilui-se com o dobro do volume de água e promove-se a diálise até que no filtrado deixe de ser detectada hidrazina. Depois da liofilização obtêm-se 8,12 g de cristais incolores.

Hidrazina(colorimétrica)í 1,34% molar.

b) Complexo de gadolínio da polihidrazida do ácido polietilenoiminopoliacético

Dissolvem-se 3,98 g da hidrazida anteriormente descrita em 50 ml de água e mistura-se com ácido clorídrico semi-concentrado até que o sedimento que entretanto se for ma se dissolva de novo completamente. Adicionam-se então 4 ml de uma solução 1M de cloreto de gadolínio em ácido clorídrico IN.

Por adição de hidróxido de sodio sólido,e agi tando fortemente, o pH é elevado até ao valor 9 e a solução é dialisada. Depois da liofilização obtêm-se 4,51 g de uma subs tância branca com um teor de gadolínio de 13,3% θ® peso.

A substância foi separada, por meio de uma co luna cheia com Sephacryl S300, em fracções com diferentes pesos moleculares, mediram-se a partir delas as seguintes relaxividad es s

		PM	1ZIÃ	1ZT2
1)		500 kD	30,31	34,24
2)	300 -	500 kD	28,56	33,50
3)	160 -	250 kD	27,12	32,71
4)	90 -	140 kD	28,55	34,07
5)	50 -	80 kD	28,15	32,86

Obtenção de alternativa do complexo de gadolínio da polihidra zida do ácido polietilenoiminopoliacético

11»35 g do sal do complexo do gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético descrito no exemplo 2a) são misturados em 250 ml de metanol aquoso com 0,5 ml de sulfato de dimetilo, e agita-se durante 6 h. Em seguida adicionam-se 20 ml de hidrazina monohidratada, agita-se durante uma noite e por fim a solução é dialisada até deixar de se detectar hidrazina livre.

Depois da liofilização obtêm-se 10,3 g de uns cristais incolores com um teor de gadolínio de 11,7% em peso. Hidrazina (colorimétrico, depois da hidrólise): 1,28% molar.

Exemplo 4

a) Ácido polietilenoiminopolimalónico

Em 250 ml de água dissolvem-se 26,8 g (146,5 rnmoles) de ácido bromomalónico e misturam-se cuidadosamente e mediante arrefecimento, com 39,1 g (466 rnmoles) de hidrogenocarbonato de sódio. Adicionam-se-lhes gota a gota uma solução de 4,2 g de polietilenoimina em 110 ml de água, sendo a tempe ratura mantida a 4o-5O°C. Depois de 14 h de agitação a esta temperatura mistura-se, mediante arrefecimento, com 3θ ml de ácido clorídrico concentrado e verte-se em 3 litros de metanol. 0 sedimento é dissolvido de novo com soda cáustica dilui da e é dialisado contra água desionizada até que o produto dialisado já não origine qualquer precipitado por reacção com solução de nitrato de prata. Depois da liofilização fica como resíduo uma massa cristalina amarelada.

Rendimento: 9,63 g.

A determinação por titulação dos grupos ácido demonstra que 22% dos átomos de azoto estão alquilados.

b) 0 complexo de gadolínio é preparado de acordo com o proces

so descrito para o exemplo la) e contém 7,38$ em peso de gado línio.

Exemplo 5

Complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopolimalánicopo liac ético

a) 13,8 g do poliácido descrito no exemplo 4a) são submetidos a reacção com 20 g de de ácido bromoacético e 23 g de hi- drogenocarbonato de sódio, analogamente à via de trabalho des crita em 4a). Depois da diálise e liofilização obtêm-se 17,35 g de uma substância sólida incolor.

A titulação dos grupos ácido revela que 95$ dos átomos de azo to estão alquilados.

b) 0 complexo de gadolínio é obtido analogamente ao exemplo la). 0 teor de gadolínio ascende a 13,47$ em peso.

Exemplo 6

a) Ácido polilisinopoliacético

Uma solução de 13,9 g (100 mmoles) de ácido bromoacético em 150 ml de água é misturada âs porções, median te arrefecimento por gelo, com 26,8 g (319 mmoles) de hidroge nocarbonato de sódio. Seguidamente adiciona-se gota a gota uma solução de 2,5 g de polilisina (peso molecular médio 30 000) em 50 ml de água, mantendo-se a temperatura em 4o~5O°C. Mantém-se a agitação a esta temperatura ainda durante uma noite, mistura-se depois mediante arrefecimento por gelo com 12 ml de ácido clorídrico concentrado e verte-se, agitando sempre , em 1,5 litros de metanol. 0 sedimento que precipita é isolado por filtração, é dissolvido ainda húmido em soda cáustica di luida e é dialisado contra água desionizada até que o dializa do esteja isento de cloretos. Depois da liofilização obtêm-se

4,8 g de um pó branco. A análise elementar mostra que cerca

de 9θ% dos grupos amino livres estão alquilados.

b) Complexo de gadolínio do ácido polilisino-poliacético g do composto obtido em a) são aquecidos a 80°C sob agitação em 50 ml de água em 1,5 g de carbonato de gadolínio, Gd^CO^)^. Depois da filtração por membrana e liofilização da solução obtêm-se 3,θ g na forma de um po branco. 0 teor de gadolínio ascende a 10,5% referido à substância ani dra.

Exemplo 7

Complexo de gadolínio do conjugado do anticorpo monoclonal MARG11 com polihidrazida do ácido polietilenoimino-poliacético

a) 4 ml de uma solução 50 n molar do anticorpo monoclonal

MARG11 (subclase IgG/1; Camon Laborservice GmbH, Wiesbaden) em tampão de acetato 0,1 M (pH 4,5) são misturados com igual volume de uma solução tamponizada de 5θ milimoles de periodato de sodio e agita-se 30 minutos a temperatura ambiente e na ausência de luz. Seguidamente o excesso de periodato é decomposto com etilenoglicol e a solução é dialisada. Seguidamente adiciona-se uma solução de 216 g da polihidrazida do ácido po lietilenoimino-poliacético descrita no exemplo 3 em 8 ml de tampão de acetato e 6 mg de borohidreto de sodio e incuba-se durante 40 horas a 4°C mediante agitação. A solução é purificada através de um permutador de catiões, é dialisada contra um tampão de acetato de amónio 0,1 molar e é liofilizada. Obtêm-se 47 mg de um pó branco.

b) 0 conjugado pode também ser preparado do seguinte modo:

n moles do anticorpo são ligados a um permutador de catiões fortemente ácido, macroporoso, o qual anteriormente tinha sido equilibrado com um tampão 0,1 molar de acetato de só dio (pH 5). 0 permutador é então passado com uma solução 0,03 molar de metaperiodato de sódio em tampão de acetato. Com o aparecimento de periodato no eluido interrompe-se a passagem do líquido durante 30 minutos. Seguidamente a fase sólida é lavada com tampão de acetato e no passo seguinte incorpora-se uma solução 0,03 M de polihidrazida do ácido polietilenoimino poliacético em tampão de acetato. Depois do aparecimento do complexante no eluido o fluxo de líquido é interrompido duran te 2 horas. Seguidamente elui-se o complexante não acoplado com tampão de acetato. A eluição do conjugado de anticorpo da fase sólida é realizada por meio de um gradiente de soro fisiológico em tampão de acetato. 0 isolamento do conjugado é realizado por liofilização da solução isenta de sal.

c) A complexação do conjugado de anticorpo obtido de acordo com a) ou b) é realizada do seguinte modo:

mg do conjugado são dissolvidos em 4 ml de um tampão de 50 mmoles de acetato de sódio/150 mmole de cloreto de sodio (pll 6,o). A este adiciona-se uma solução de 6,7 ^imoles de cloreto de gadolínio(ill) no mesmo tampão e incuba-se 4 h a 2°C. Depois da adição de 6,7 jimoles de citrato de sódio agita-se durante 30 min. e dialisa-se completamente contra tampão de ace tato de sódio. Por liofilização da solução obtém-se, na forma de um pó branco, um conjugado do complexo que contém ligados 85 ± 3 iões gadolínio por conjugado do anticorpo.

Exemplo 8

Complexo de índio do conjugado obtido de ácido polietilenoimi nopoliacético e do anticorpo monoclonal MARG11 mg de ácido polietilenoiminopoliacético e 20 pl de trietilamina são dissolvidos em 0,5 ml de acetonitri lo e agitados durante 3 h com 2 mg de N-hidroxisuccinimida e

2,5 mg de diisopropilcarbodiimida.

Simultaneamente prepara-se uma solução de 2 mg do anticorpo monoclonal MARG11 em 1 ml de tampão aquoso

(0,1 moles) de hidrogenocarbonato de sódio e 0,2 moles de áci do etilenodiaminotetracético, pH 7). A este adicionam-se 100 jH da solução anterior do éster activado e deixa-se repousar 1 h agitando-se de vez em quando.

Apos purificação catioes realiza-se a complexação lise e liofilização a actividade mCi/mg.

através de um permutador de com l^InCl^. Depois da diáespecífica ascende a 570

Exemplo 9

Conjugado do complexo de gadolínio da polihidrazida do ácido polietilenoimino-poliacético com fragmentos Fab do anticorpo monoclonal MARG11

a) Preparação de fragmentos F(ab')₂:

mg (100 n moles) do anticorpo MARG2b8 (sub classe IgG2b; Camon Laborservice GmbH, Wiesbaden) são dissolvidos em 1 ml de uma mistura de 0,1 moles de tampão de acetato (pH 4,5) e 0,1 M de soro fisiológico, e depois da adição de O»3 mg de pepsina incuba-se 20 horas a 37° C. Depois da purificação através de Ultragel AcA 44 (firma LKB) a pH 7,0 e depois da liofilização obtêm-se 6,3 mg (6,do rendimento teórico) dos fragmentos pretendidos.

b) Preparação e acoplamento de fragmentos Fabs mg (150 n moles) do fragmento obtido em a) são dissolvidos em 14,5 ml de tampão de fosfato 0,1 M (pH 6,0) e são dissolvidos com 0,15 ml de uma solução 0,1 M de mercaptoetilamina em 0,1 M de tampão de fosfato (pH 6,0) mediante adição de 15 mmoles de ácido etilenodiaminotetracético. Depois de incubação por duas horas a 37°C separa-se, sob protecção de argon, através de uma coluna com Sephadex G 25. Uma determinação dos grupos sulfidrilo revela 238 ⁿ moles de grupos SH no preparado reactivo.

236 mg do complexo de gadolínio descrito no exemplo 3 são dissolvidos em 10 ml de tampão de fosfato 0,1 m (pH 6,0). Adicionam-se-lhes a 10°C 0,5 ml. de uma solução O,1M de sulfonossuccinimidil-9-(9-maleimidofenil)-butirato (”Sulfo -SMPB, Firma Pierce Chemical) no mesmo tampão e agita-se 2 horas à temperatura ambiente.

Seguidamente purifica-se a solução dos fragmentos com a solução do complexo activado e deixa-se reagir uma noite mediante agitação moderada. 0 tratamento pós-reacti vo subsequente realiza-se através de um permutador de catiões da forma descrita no exemplo 7. Por liofilização da solução purificada obtêm-se 24,1 mg de um pó branco com um teor de 8,89$ em peso de gadolínio.

Exemplo 10

Complexo de gadolínio do ácido polietilenoimino-polimetilenofosfónico

21,17 g de ácido polietilenoimino-polimetilenofosfónico, preparado de acordo com a Patente Americana 2 599 807, são dissolvidos em 30θ ml de água bi-destilada e aquecidos a 80°C durante 2 horas, mediante agitação, com 9,3 g de carbonato de gadolínio (hidratado, 59/ó em peso de Gd).

Depois de ultrafiltração e liofilização obtêm -se 23,59 g de um produto branco volumoso que de acordo com a análise elementar contém 10,29$ em peso de gadolínio.

Exemplo 11

Complexo de gadolínio biotinilado da polihidrazida do ácido poli etilenoiminopoliac ético

1,31 g do complexo do gadolínio da polihidra- 36 -

zida do ácido polietilenoimino-poliacético, descrito no exemplo 3 b), são misturados em 20 ml de água com 133 mg de Sulfo -NHS-Biotina (Pierce Chemical Company) e mediante a adição de hidrogenocarbonato de sódio mantém-se o pH entre os valores 8 e 9· Depois de agitação por várias horas à temperatura ambien te dilui-se com água e dialisa-se, até que o filtrado deixe de conter biotina. Depois da liofilização obtêm-se 1,08 g de uma substância incolor.

Teor de biotina: 1,3$ molar.

Exemplo 12

Sal de sódio do ácido polietilenolminopolissuccínico

A uma solução de 36,15 g de polietilenoimina (poliimina P) em 320 ml de metanol adiciona-se, eventualmente mediante aquecimento cuidadoso, uma solução de 181,75 g de ma leato de dimetilo em 200 ml de metanol, de modo que a tempera tura não ultrapasse 4o°C .

Agita-se depois durante 4 h a 50-60°C e mistu ra-se finalmente com 53»8 g de plaquetas de hidróxido de sódio, mantendo-se a temperatura no valor máximo de 4o°C median te agitação. Verte-se em 200 ml de água gelada e concentra-se em evaporador rotativo. 0 resíduo e dissolvido em 500 ml de tampão 0,lm de acetato de amónio e é dialisado. Após a liofilização obtêm-se 116,39 g de cristais incolores volumosos que se decompõem acima de 300°C com aparecimento de uma coloração.

Complexo de gadolínio:

complexo de gadolínio é preparado como foi descrito para o exemplo la) e contém 12,49$ em peso de gadolí nio.

Exemplo 13

Complexo de gadolínio da polihidrazida do polietilenoiminopoliacetato de polimetilo

11,35 g do sal do complexo de gadolínio do áci do polietilenoiminopoliacético, descrito no exemplo 2 a), são misturados em 250 ml de metanol aquoso com 5»9 ml de sulfato de dimetilo, agita-se 6 h à temperatura ambiente e seguidamen te aquece-se a 60°C num banho de aquecimento. Seguidamente deixa-se arrefecer até à temperatura ambiente e adicionam-se-lhe 0,5 ml de hidrato de hidrazina e aquece-se depois durante mais 4 h em banho-maria. A solução assim obtida é dialisada e liofilizada. Obtêm-se 11,5 g de cristais incolores com um teor de gadolínio de 10,6% em peso. A determinação dos gru pos metilo do éster revela uma est erif icação de 65;o de todos os grupos carboxi.

Hidrazina (colorimétrica, após hidrólise): 1,17% molar.

Exemplos para a preparação de composições

Exemplo 14

Solução do complexo de gadolínio do ácido polilisinopoliacético

Q .

5,9θ g (correspondentes a 4 mmoles de Gd^J )do complexo de gadolínio preparado de acordo com o exemplo 6,são postos em solução em 800 ml de água para injecções (p.i.) mediante a adição de N-metilglucamina, a pH 7,2. Depois de se completar com água p.i. até 1000 ml a solução é filtrada este ril, é dividida em partes alíquotas de 10 ml que se embalam em frascos múltiplos e se liofilizam. 0 resíduo corresponde o .

em cada caso a uma dose unitária de 0,04 mmoles de Gd^J /kg de peso corporal.

Exemplo 15

Solução do sal de sódio do complexo de índio-111 do ácido polietilenoiminopoliacético

Uma solução de 100 yug de um ácido polietileno iminopoliacético com um peso molecular médio de 100 000 em 5

ml de uma mistura formada por 150 mmoles de soro fisiológico e 150 mmoles de solução de acetato de sódio (pH 5,8), é mistu rada com uma solução de 5 mCi de cloreto de índio-111 em 1 ml de ácido clorídrico normal. Mediante a adição de soda cáustica IN ajusta-se a pH 6 e dialisa-se contra solução de acetato de sódio, e depois contra soro fisiológico. Seguidamente, pela adição de soda cáustica 0,1 n ajusta-se o pH ao valor 7,2, embala-se a solução filtrada em estéril em frascos múltiplos e liofilizam-se.

resíduo é tomado em solução de soro fisioló gico e representa então um preparado apropriado para 0 radiodiagnóstico.

De modo idêntico, partindo-se de 5 mg de ácido polietilenoiminopoliacético e de uma solução de 500 mCi de cloreto de ítrio-90, obtém-se um preparado apropriado para ra dioterapia.

Exemplo 16

Solução de complexo de In-111 do conjugado da hidrazida do ácido polietilenoiminopoliacético com o anticorpo monoclonal MARG11

Uma solução de 200 pg do complexante descrito no exemplo 7 em 5 ml de uma mistura formada por 150 mmoles de solução de cloreto de sódio e 15θ mmoles de solução de acetato de sódio (pH 5,8), é misturada com uma solução, ajustada a pH 5, de 5 mCi de cloreto de índiolll em ácido clorídrico diluído. 0 tratamento pósreactivo correspondente ao exemplo 11 produz um preparado apropriado para radiodiagnóstico.

De modo idêntico, partindo-se de 10 mg de com plexante descrito no exemplo 7 e de uma solução de 500 mCi de cloreto de ítrio-90 (pH 5) obtém-se um preparado apropriado para a radioterapia.

Exemplo 17

Solução para injecção de um complexo de gadolínio do conjugado do anticorpo monoclonal MARG11 com polihidrazida do ácido poli etilenoiminopoliac ético

1,08 g do conjugado complexo de gadolínio-anticorpo descrito no exemplo 7c) são dissolvidos em 80 ml de água p.i., misturados com 50 mg do complexo de cálcio-dissódio do DTPA e completa-se a 100 ml. Depois de filtração estéril embala-se em frascos múltiplos de 5 ml e liofiliza-se.

Por dissolução em 5 ml de soro fisiológico ob tém-se um preparado para utilização parentérica.

Exemplo 18

Solução para injecçoes do sal de N-metil-D-glucamina do complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético , 3+ \

127 g (=5θ mmoles de Gd ) do complexo de gadolínio do sal de N-metil-D-glucamina do complexo de gadolfnio do ácido polietilenoiminopoliacético descrito no exemplo 2c) são dissolvidos em 800 ml de água p.i., misturados com 1,2 g do sal de cálcio-dissódio de DTPA e completa-se até 1 litro com água p.i.

A solução é filtrada estéril, é embalada em porções de 5 ml em frascos múltiplos e é liofilizada. Por dis solução em 5 ml de soro fisiológico obtém-se um preparado para aplicação parentérica.

Exemplo 19

Preparação de uma solução com complexo de gadolínio biotinila do da polihidrazida do ácido polietilenoiminopoliacético para • aplicação in vivo.

mg de um complexo de gadolínio biotinilado da polihidrazida do ácido polietilenopoliacético (teor de bio tina 1,3/0 molar) (exemplo 11) são dissolvidos em 10 ml de soro fisiológico.

pH é ajustado ao valor 7,2 com ácido acético e a solução é filtrada estéril com um filtro de 0,2 jim. 0,2 ml desta solução, com um teor de gadolínio de 0,9 /imoles, são aplicados por via intravenosa 48 h depois da aplicação de um conjugado anticorpo monoclonal-avidxna específico do tumor.

A realização de um ensaio de diagnóstico NMR com utilização de um complexo polimérico de acordo com a invenção é elucidada pormenorizadamente com base nos seguintes exemplosj

Representação de vasos sanguíneos no fígado após aplicação de 0,02 mmoles de gadolínio na forma de um complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético (exemplo 1)

Um rato (NMRI, SPF tíciiering) é narcotizado com Nembutal i.p. 0 animal e colocado num tomógrafo de spin nuclear 2 Tesla (General Electric). Fazem-se ao nível do fígado exposições (corte transversal) na sequência spin-eco com T^-400 msec e T^=30 msec (fig. 1).

Seguidamente aplicam-se por via intravenosa

0,02 mmoles de gadolínio na forma de um complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético (exemplo 1) dissolvido em soro fisiológico a 0,9> (200 /11). Passados 2 minutos depois da aplicação fazem-se de novo tomadas de absorção na sequência spin-eco (T =400 msec, T,,= 30 msec) nos mesmos planos de corte descritos acima (fig.2).

Legenda da fig. 1 ’ Exposição por tomografia de spin nuclear de um rato na zona * do fígado, em sequência spin-eco (τ^=4θθ msec, T^=30 msec). Os grandes vasos do fígado que correm perpendicularmente ao plano da figura podem reconhecer-se como pontos negros, Â esquer da em cima vê-se o corte do estômago.

Legenda da fig. 2

Tomada por tomografia de spin nuclear de um rato na zona do fígado, 2 minutos depois da aplicação intravenosa de 0,02 mmo les de gadolínio na forma do complexo de gadolínio do ácido polietilenoiminopoliacético, Os vasos que correm perpendicularmente ao plano da fig. são reconhecidos muito nitidamente pelo aumento da intensidade do sinal. 0 mesmo é válido também para os pequenos vasos do fígado em secção longitudinal.

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES

   Processo para a preparação de complexos poliméricos constituídos por um ligante com unidades amino alquiladas contendo grupos de ácido carboxilico, ácido fosfónico, e/ou fenol, pelo menos um ião de um elemento de número atómico, 21,29, 31, 32, 3θ, 39, 42-44, 4p ou 57-θ3, assim como even tualmente catioes de bases orgânicas e/ou inorgânicas, de ami noácidos ou de amidas de aminoácidos, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um ligante contendo grupos ácido carboxílico, ácido fosfónico e/ou fenol, obtido por N-alquilação, a) Com pelo menos um óxido metálico ou um sal metálico de um elemento de número atómico 21-29, 31» 32, 38, 39, 42-44, 49 ou 57-83, ou

   U'

   Com pelo menos um oxido metálico ou um sal metálico de um elemento de número atómico 21-29, 31» 32, 38, 39, 42-44,

   49 ou 57~83, se transformar pelo menos uma parte dos grupos ácido carboxilico, ácido fosfónico ou fenol, não nece sários para a complexação, do complexo metálico assim obt do, no grupo ou grupos crV-u· em que tem o significado de um dos radicais

   I -P-A”’

   L

   A⁴

   1 η· 1 ω em que

   4¹ 5¹ z 4 ’

   A representa OH ou A’ , e A representa hidrogénio ou A , em que

   A'” tem o significado de um grupo (NH)_u-/B-(nh)_v_7 -W ou OR¹, em que u e v representara os números 0, 1 ou 2, w representa os números O ou 1, rI representa um átomo de hidrogénio ou um grupo (CHg^-Z em que mel têm os significados dos números 0 a 13 e Z tem o signi ficado de um átomo de hidrogénio, de um grupo alquilo com

   1 a 20 átomos de carbono, um grupo COOH-, PO^Hg- ou em que

   Y representa um átomo de hidrogénio ou o radical OH,

   4 »

   R representa um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono ou um radical benzilo,

   B representa um grupo alquileno com 0 a 20 átomos de carbono , e

   W representa um átomo de hidrogénio ou um grupo funcional eventualmente ligado por um grupo alquileno com 1 a 20 áto mos de carbono, saturado ou insaturado, de cadeia linear ou ramificada, podendo o grupo alquileno conter eventualmente grupos imino, fenilenooxi, fenilenoimino, amido, éster, átomos de oxigénio, enxofre e/ou azoto, e estar eventualmente substituido por grupos hidroxi, mercapto e/ou and.

   no,

   1 2 podendo os grupos CR R U’ ser iguais ou diferentes, e em seguida, se desejado, se ligar a uma macromol écula ou a uma biomolécula, directamente ou através do grupo funcional con tido no radical acima mencionado, ou

   c) se transformar o ligante num derivado contendo pelo menos

   12 12 um grupo CR R -U', tendo R , R e U’ os significados anteriormente mencionados, se fazer reagir aquele em seguida com pelo menos um óxido metálico ou um sal metálico de um elemento de numero atómico 21, 29, 321, 32, 38, 39, 42-44, 49 ou 57-83 e seguidamente, se desejado, se ligar directamente a uma macromolécula ou a uma biomolécula, ou por meio do grupo funcional contido no radical anteriormente mencionado , ou

   d) Se transformar o ligante num derivado contendo pelo menos

   12 12 um grupo CR -R -U·, tendo R , R e U' os significados men cionados acima, se ligar este a uma macromolécula, caso W contenha uma macromolécula ou biomolécula, directamente ou através do grupo funcional contido no radical mancionado acima, e em seguida se fazer reagir com pelo menos um óxido metálico ou um sal metálico de um elemento de número atómico, 21-29, 31, 32, 38, 39, 42-44, 49 ou 57-83, e eventualmente se substituir em seguida, nos complexos po liméricos obtidos de acordo com a), b), c) ou d), os átomos de hidrogénio das azidas ainda existentes por catioes de bases orgânicas e/ou inorgânicas, de aminoácidos ou de amidas de aminoácidos.

   - 2& Processo para a preparação de complexos poliméricos de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto desse realizar o acoplamento da macromolécula ou da bio molécula ao complexo polimérico ou ligante funcionalizado, as sim como, no caso do acoplamento a ligantes, se realizar aconi plexação subsequente com o ou os iões metálicos pretendidos, numa fase estacionária.

   . ₃& •Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de obterem complexos poliméri cos que contém como ligante um composto de fórmula geral (l)

   X

   N- (CH_-CH -N) -X '2 2 'n (I) em que n representa números inteiros de 7 até 20.000

   X representa um átomo de hidrogénio, um radical CR'R R , ou um radical CrV-U, em que

   U tem o significado de um radical ou em que

   A’ representa OH ou A e A” representa hidrogénio ou A’, em que

   A em que u e v representam os números 0, 1 ou 2, w representa os números 0 ou 1,

   R¹ representa um grupo (CH₂) -Z,

   R² representa um átomo de hidrogénio ou um grupo

   R¹ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo (CH_O). -2 e

   R representa um radical alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou benzilo, em que m, 1 e k representam os números 0 a 10 e

   Z representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo com 1 a 20 átomos de carbono, um grupo -COOH, -PO^H^ em que

   Y representa um átomo de hidrogénio ou o radical OH,

   B representa um grupo alquileno com 0 a 20 átomos de carbono e

   W representa um átomo de hidrogénio, uma macro molécula, um grupo funcional eventualmente ligado por um grupo alquile no com 1 a 20 átomos de carbono, saturado ou insaturado , de cadeia linear ou ramificada, ou uma macro molécula ou biomolécula ligadas por este grupo funcional, contendo eventualmente o grupo alquileno grupos imino, fenilenoxi, fenilenoimino, amido, éster, átomos de oxigénio, enxofre e/ou azoto, estando eventualmente substituído por grupos hidroxi, mercapto e/ou amino, podendo os substituintes X nos membros individuais e nas extremidades dos compostos, 12 3 assim como os substituint es Z em R , R e R serem iguais ou diferentes, com a condição de que nem todos os X repre sentem simultaneamente hidrogénio, de que pelo menos um Z não represente hidrogénio ou alquilo com 1 a 20 átomos de carbono, de que no caso de m, 1 e k — 0 nem todos os subs tituintes Z representam -COOH, -PO3H2 ou e de que eventualmente uma parte dos grupos -COOH, POyi,, ou estejam presente na forma de éster ou amida.

   - 4- Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliX 2 méricos que contêm entre 1 e n/10 radicais CR R -U, em que n, 12

   R , R e U tem os significados citados anteriormente.

   Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliméricos que contêm como ligantes

   0 0

   I (XH - CH - c) - OH \ /_n (II), em que representa o radical de um aminoácido natural contendo o grupo ou grupos NX e/ou NX^, e

   Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliméricos que contêm pelo menos um iao de um elemento de número atómico 21-29, 42, 44 ou 57-83.

   _ ₇â _

   Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliméricos que contêm pelo menos um radionuclido de um elemento de número atómico 27, 29, 31, 32, 38, 39, 43, 49, 62, 64, ou 77.

   - 8& Processo de acordo com as reivindicações ante riores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliméricos em que 0 grupo funcional W representa

   O

   C-CH₂J, -(ch₂) j, -(ch₂)₃sh, -(CH₂)₃NH₂, -C_óH₄oCK,

   - 9^â Processo de acordo com as reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de se obterem complexos poliméricos em que a macro mol écula contida em é um anticorpo ou um fragmento de anticorpo.

   Processo de acordo com as reivindicações anteriores caracterizado pelo facto de se obter um complexo polimérico em que a macromol écula contida em V é um anticorpo avi dina ou um fragmento de anticorpo avidina-biotina.

   - 115 _

   Processo para a preparação de uma composição farmacêutica que contém como ingrediente activo pelo menos um complexo polimérico, quando preparado por um processo de acor do com as reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se incorporar o complexo polimérico dissolvido ou posto em suspensão em água ou em soro fisiológico, eventualmente em com binação com os aditivos galénicos correntes, e de se transfor mar a mistura numa forma apropriada para aplicação entérica ou parentérica.