PT86457B

PT86457B - Processo para a preparacao de glicopeptidos glicosilados e de composicoes que os contem

Info

Publication number: PT86457B
Application number: PT86457A
Authority: PT
Inventors: Siegfried Benjamin Christen Iv; Peter Walter Jeffs; Sung Kee Chung
Original assignee: Smithkline Beecham Corp
Priority date: 1986-12-30
Filing date: 1987-12-23
Publication date: 1990-11-20
Also published as: EP0273727A3; EP0273727A2; KR880007566A; JPH01175997A; AU8305687A; PT86457A; ZA879693B; DK691787A; DK691787D0; IE873523L

Description

MEMORIA descritiva

Campo da Invenção

Este invento refere-se a antibióticos de glicopeptídeos glicosiladps selectivamente e ao seu processo de preparação.

Bases da Invenção

A classe dos antibióticos glicopeptídicos da vancomicina/ /ristocetina caracteriza-se por compostos amorfos, anfotéricos, fortemente levo-rotatórios e de peso molecular relativamente al. to. Estruturalmente, compreendem um núcleo de aglícona heptapeptídica com aminoácidos fenólicos e, normalmente, um ou mais grupos periféricos de hidratos de carbono. Ver, Williams et al., Topics in Antibiotic Chemistry, Volume 5, pág. 119-158. Os mem bros conhecidos desta classe incluem a vancomicina (McCormick et al., Patente dos E. U. 3 067 099, ristocetina (Philip et al., Patente dos E. U. 2 990 329), A35512 (Michel et al., Patente dos E.U. 4 083 964), avoparcina (Kunstmann et al«, Patente dos E. 0. 3 338 786 e Debono, Patente dos E. U. 4 322 343), teicoplanina (Bardone et al,, □. Antibiot., Volume 31, pág. 170, 1978), actaplanina (Raun, Patente dos E. U. 3 816 618, Boeck et al., Patente dos E. U. NB. 4 537 715), AAD-216 (ardacina) (Bou/ie et al., Patente dos E. U. NB. 4 548 974), A477 (Raun et al., Patente dos E. U. 3 928 571), 0A7653 (Nishida et al., Patente dos E. U. 4 378 348), AM 374 (Kunstmann et al., Patente dos E. U. 3 803 306), K288 (J. Antibiotics, Series A, Volume 14, pág. 141 (1961), também conhecido por actinoidina), teicomicina (Borghi et al., Patente dos E. U. 4 542 018, Malabarba et al., The Oournal of Antibiotics, Vol. XXXVII, NB. 9, p. 988-999, Barna et al., The Oournal of Antibiotics, Vol. XXX011, NB. 9, p 1204-1208), desvancpsaminil e des(vancosaminil-0-glucosil) glicopeptidos (Nagarajan, Patente dos E. U.

552 701), AAJ-271, (Carr et al. pedido EPA N°. 87306193.1 copendente,incorporado aqui como referência), A 33512B (Patente dos E. U. NB. 4 029 769), A 41030 factores a-g (Patente dos E. U. NB. 4 537 770) e CWI-785 (EPA NB. 87306558.5 copendente in corporado aqui como referência), A51568 factores A e B (Hoehn

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-4et al., Patente dos E. U. N2. 4 495 179), e M43D (Merkel, Patente dos E. U. N°. 4 547 488).

Os antibióticos glicopeptidicos possuem actividade antihacteriana, tendo alguns utilidade terapêutica contra organismos gram-positivos incluindo estirpes resistentes à meticilina. Estas estirpes não podem ser tratadas com antibióticos da classe das yâ-lactamas, incluindo as novas cefalosporinas /5-lactamase resistentes. As infecçães causadas por estes organismos patogénicos constituem um problema grave. Os compostos deste invento podem ser usados para tratar, por exemplo, a endocardite estafilocócica, a osteomielite, a pneumonia, a septi cémia, as infecçães dos tecidos moles, a enterocolite estafilo cócica e a colite pseudomembranosa associada aos antibióticos causada pelo C. difficile. Podem também ser usados como profilácticos na cirúrgia da anca e do coração, como profilácticos contra a endocardite bacteriana e infecções por S. aureus em doentes sujeitos a hemodiálise.

Tem sido demonstrado que muitos glicopéptidos aumentam a eficiência da assimilação dos alimentos pelos animais, e portanto podem ser óteis para promover o crescimento animal, melhorar a produção leiteira dos ruminantes e para tratar e prevenir a cetose nos ruminantes. Por exemplo, Reynolds et al., GB2137087A revelam que o uso da avoparcina aumenta a produção de leite; Raun et al», Patente dos E. U. 3 928 571 revelam que o uso de actaplanina avoparcina (A477), vancomicina e ristocetina promove o crescimento e previne e trata a cetose; Hamill et al., Patente dos E. U. 3 952 095 revelam que o uso da actaplanina promove o crescimento; e Ingle et al., Patente dos E. U. 4 206 203, revelam que o uso da avoparcina previne e trata a cetose.

A procura de antibióticos novos e melhorados para o tratamento das doenças humanas não cessa de aumentar. Alguns objectivos destes melhoramentos dos antibióticos são aumentar a sua potência, expandir o seu espectro de inibição bacteriana, aumentar a sua eficácia ”in vivo e melhorar as suas propriedades farmacológicas tais como, aumentar a absorção oral,

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-5as concentrações na sangue e nos tecidos, a semi-vida ¹¹ in vivo¹¹ , e tornar mais vantajosa a velocidade e via de excreção e a velocidade e tipo de metabolismo.

Para lá da procura destes novos compostos na natureza, tõm-se produzido derivados químicos dos compostos existentes. Um dos primeiros processos foi a hidrólise, de maneira a remover uma ou mais unidades de hidratos de carbono, (e.g. Chan et al., Patente dos E.U. 4 521 335 e Nagarajan et al., Patente dos E.U. N°. 4 552 701). Outro processo descrito por Debono, Patente dos E.U. 4 497 802 é a acilação da amina terminal do | núcleo glicopeptídico.

Sumário do invento invento refere-se ao processo de preparação de antibió ticos glicopeptídicos glicosilados selectivamente. Como repre sentativos deste tipo de compostos podem mencionar-se os seguintes: 0-(y2>-D-glucopiranosil)-HPB-4 ¹, 0-(2-acetamido-2-desoxi-yí>-D-glucopiranosil)-HPB-4 ’, 0-/~2-(metoxicarbonil)amino-2-desoxi-yj-D-glucopiranosil)_/-ΗΡΒ-4 ’, 0-/~2-(l-metiletoxicarbo nil)-amino-2-desoxi-yâ-D-glucopiranosil_7-HPB-4 ·, e 0-/~2-(etoxicarbonil )amino-2-desoxi-y5-D-glucopiranosil_7-HPB-4 ’. HPB-4 ¹é uma pseudo-aglícona de um antibiótico CWI-785 com configuração R no carbono (6-1’) do substituinte N-metil-p-hidroxifenilglicina terminal.

invento consiste no processo de preparação dos compostos acima mencionados, de uma composição anti-bacteriana compre endendo os antibióticos referidos, de compostos para uso como medicamentos, em particular para uso no tratamento e prevenção de infecções causadas por bactérias gram-positivas, em animais (incluindo o homem), de uma composição para alimentação animal que contém os referidos antibióticos e que aumenta a produção de propionato no rumen ou cego de um animal produtor de carne ou leite, de uma mistura para alimentação animal contendo os re feridas antibióticos, de um método para aumentar a velocidade de crescimento de um animal produtor de carne através da administração dos referidos antibióticos, de um método de melhora-

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-6mento da eficiência de utilização dos alimentos num animal pro dutor de carne ou leite por administração dos antibióticos referidos e de um método de melhoramento da produção leiteira num ruminante produtor de leite por administração dos referidos antibióticos.

Estes e outros aspectos descritos abaixo são considerados variantes do mesmo invento e são aí totalmente revelados.

Descrição detalhada

Os antibióticos deste invento são derivados glicosilados | por via química de outros antibióticos glicopeptídicos da cias.

se da vancomicina/ristocetina. São representados pela fórmula I:

A (I)

R onde A é a porção restante de um antibiótico da classe da vancomicina/ristocetina ou de um seu derivado, 0 é o oxigénio fenólico central do anel central (B) da região éter triarílica do antibiótico glicopeptidico; e R é um monossacarídeo ou dis) sacarídeo ou um derivado desoxi ou amino destes; desde que R não seja o açúcar natural ligado na mesma posição dd núcleo glicopeptidico, e R não seja um grupo glucosilo quando A é a fracção restante da vancomicina, A 51568A, M 43D ou A 51568B.

Os sais dos compostos da fórmula 1 fazem também parte deste in vento.

A pode ser a fracção restante de qualquer antibiótico glicopeptidico da classe da vancomicina/ristocetina ou um seu derivado que tenha uma estrutura central substancialmente idên tica à da fórmula II, desde que se o substituinte hidrato de carbono (Sug), estiver presente no oxigénio fenólico do anel central (B), seja primeiro hidrolisado de maneira a que o fenol B-4 esteja livre antes de se efectuar a glicosilação.

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Sug è um hidrato de carbono ou H

R¹ é H ou Me

F é a cadeia lateral da asparagina, quando G é a cadeia lateral da N-metil-leucina (i.e., vancomicina); ou

F e G constituem em conjunto um fragmento éter difenílico (i.e., ristocetina A, actaplanina A 35512B e teicoplanina; ou

F e G são cada um, um substituinte aromático (i.e., actinoidina e avoparcina); ou

G é um resíduo aromático oxigenado como o fenol, quando F é a cadeia lateral da metionina (i.e., glicopéptidos CWI-785).

Por porção restante de um antibiótico glicopeptídico da classe da vancomicina/ristocetina ou um seu derivado químico referimo-nos à estrutura completa do antibiótico ou do seu derivado químico mas excluindo o oxigénio fenólico central do anel (B) central da região éster triarílica do mesmo e excluindo o substituinte do oxigénio fenólico, por exemplo, hidrogénio ou um hidrato de carbono. Por exemplo a fracção restante de um antibiótico glicopeptídico de fórmula (II) é:

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Sug

(Π) sendo R , Sug, F e G como definidos atrás.

Exemplos dos antibióticos glicopeptídicos da classe vancomicina/ristocetina incluídos na fórmula II são: vancomicina, ristocetina, actaplanina, A 35512B, teicoplanina, glicopeptidos AAO-271, factores A41030 a, b, c, d, e, f, g, glicopéptidos CWI-785, actinodina, glicopéptidos AAD-216, avoparcina M43A, B, C, D, A51568A e B, AM374, A477, 0A7653, as suas aglíconas, pseudoaglíconas, derivados N acil e éster desde que qualquer hi drato de carbono no oxigénio fenólico do anel central B seja hi drolisado antes de se efectuar a glicosilação.

Os derivados químicos incluem, por exemplo, os produtos de hidrólise como as aglíconas e pseudo-aglíconas e derivados sintéticos como os revelados na Patente dos E.U. 4 497 Θ02 (N-acilglicopeptidos), na Patente dos E.U. 4 552 701 (desvancosjs minil e des(vancosaminil-O-glucosil)-glicopeptidos ou na Pate_n te Europeia 182-157A (derivados éster da pseudo-aglícona teicoplanínica).

Um subgrupo dos compostos da fórmula I preferido é aquele onde A é a fracção restante da aglícona AAD-216, aglícona de manosil AAD-216, HPB-4’, aglícona CWI-785B’, HPB-3', aglícona

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-9de manosilo AAJ-271 e aglícona de vancomicina.

Preferência especial é dada aos compostos em que A é a fracção restante da HPB-4'.

R é qualquer açúcar, isto é, um monossacarídeo, ou um dis sacarideo ou as suas variantes desoxi ou amino.

Exemplos de R são os monossacarídeos piranosílicos ou fu ranosílicos incluindo o glucosilo, amino-descxi-glucosilo, diamino-didesoxy-glucosilo, N-acilamino-desoxi-glucosilo ou os compostos da fórmula III

em que

OH, NR³R⁴, ou NR³-(CH_o) -Wp-(CH_O) R⁵; z s z q

H ou um alquilo C^-C^

H,

-C-(C^H2Vp-(CH2)n-R⁵; ou

p é 0 ou 1;

m e n são inteiros de 0 a 4;

s é um inteiro de 2 a 4;

q é um inteiro de 1 a 4

R é H, alquilo C^-C^, cicloalquilo C^-Οθ, cicloalcenilo C^-Cg, ou fenilo;

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-10w é ch₂, -Csc-, -ch=ch-, -c(ch₃)=ch-, -ch=c(ch₃)- ou -C(CH₃)=C(CH₃);

Y é CH₂, 0, -N(alquil-C₁-C₄)-, -NH-, -C5C-, -CH=CH-, -C(CH₃)=CH-, -CH=C(CH₃)- ou -C(CH₃)=C(CH₃)-;

r \ e em que R e os grupos alquilo de ligação -(CH₂-(CH₂)_s- e “(£H₂)q— são opcionalmente substituídos po dois grupos halo, metilo, etilo, metoxi, amino, amino

-(CH₂)_n->

r um ou

N-protegido, metilamino, dimetilamino, acetamida, ou hidróxilo, desde que R não seja H quando Y ê 0, p é 1, m é 0 e n é 0; e desde 2 que pelo menos dois grupos R sejam 0H; ou

R é manosilo, 0-2-ot-L-(ristosaminil)-0-/3-D-glucose, 0-2-4-L-(acosaminil)-0-/l-D-glucose ou 0-2-o(.-L-(vancosaminil)-0-/1-D-glucose desde que o açúcar natural não reaja com o núcleo glicopeptídico de origem e R não seja glucosilo quando A for a fracção restante da vancomicina, Α5156ΘΑ , M43D ou A51568B.

São especialmente preferidos os compostos em que R é um glucosilo, 2-acetamido-2-desoxi-D-glucosilo, 2-(metoxi-carboni lo)amino-2-desoxi-D-glucosilo, 2-(l-metiletoxicarbonilo)amino-2-desoxi-D-glucosilo e 2-(etoxicarbonilo)amino-2-desoxi-D-glu cos ilo.

0s compostos a que se refere este invento são preparados por reacção de um halogeneto de «(.-glucosilo protegido com uma solução alcalina aquosa orgânica do antibiótico glicopeptídico de fórmula A-O-H em que A é a fracção restante de um antibióti co glicopeptídico da classe da vancomicina/ristocetina ou um seu derivado, e 0 é o oxigénio fenólico do anel central (B) da região éter triarílica do antibiótico glicopeptídico, de modo a gerar um glucosídeo protegido como intermediário. A desprotecção é atingida num segundo passo por métodos conhecidos dos especialistas deste processo. A reacção é adequada unicamente à produção de glucosídeos de arilo, e tem lugar com inversão da configuração no carbono anomérico do halogeneto deo(-glucosilo.

Uma característica surpreendente e inesperada do presente processo é o facto das aglíconas e pseudo-aglíconas dos gli copéptidos que possuam quatro a seis locais fenólicos potenci67 060

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......

z

-11almente glicosiláveis reagirem com reagentes em excesso de modo a produzir como produto principal um /3-glicosídeo com liga, ção na posição fenólica B^.

Pode usar-se uma série de bases nesta reacção. Os exemplos incluem o hidróxido de lftio, hidróxido de sódio, hidróxi. do de potássio, carbonato de potássio, hidróxido de amónia, trietilamina e hidróxido de bário. Prefere-se o hidróxido de potássio.

co-eolvente orgânico pode ser qualquer solvente em que os reagentes sejam solúveis. Alguns exemplos são: acetona, DMF, DMSO, isopropanol, acetonitrilo, metanol, tetra-hidrofura no ou dioxano. Prefere-se a acetona como co-solvente.

grupo protector dos oxigénios do halogeneto de glucosi. lo pode ser éster ou carbonato, os quais são suficientemente estáveis na solução básica para permitir a glicosilação inicial e a subsequente facilidade de remoção. Dois exemplos são o 0-acetilo e 0-benzoílo, 0 grupo protector preferido é o 0-ace tilo.

trifluoroacetilo e tricloroacetilo são exemplos de gru pos protectores do azoto adequados. Prefere-se o trifluoroace tilo.

Como exemplos de condições básicas de desprotecção que podem ser utilizados e são correntes nestes processos, contam-se (a) uma solução 25-50$ de hidróxido de amónio em metanol, (b) hidróxido de amónio concentrado, (c) metanol saturado em amónia (anidra), (d) metóxido de sódio metanólico, (e) piperidina aquosa e (f) carbonato de potássio aquoso. Prefere-se o uso de hidróxido de amónio 25-50/o em metanol uma vez que conduz a uma mais rápida e mais eficaz desprotecção dos grupos protectores 0-acetilo e N-trifluoroacetilo.

processo geral de preparação dos compostos da fórmula I preferido consiste em adicionar rapidamente uma solução em acetona de um halogeneto de glicosilo acetilado (cerca de 2 a 10 equivalentes, preferencialmente 2-5) a uma solução do glicopeptido em acetona aquosa contendo cerca de 2 a 10 equivalen.

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-12tes (preferencialmente 3-6) de hidróxido de potássio. Os melhores resultados obtêm-se quando a concentração final em gli copéptido é de cerca de 0,02-0,05 M, não sendo, no entanto, _t crítica esta concentração. A solução é agitada durante uma a duas horas à temperatura ambiente. Depois dos solventes serem removidos sob vácuo, o resíduo é tratado com hidróxido de amónio concentrado em metanol (1:1) durante cerca de 1 a 30 horas à temperatura ambiente de modo a cindir os grupos protectores.

A purificação é feita por cromatografia usando uma coluna de gel de afinidade D-Ala-D-Ala (como referido na Patente | dos E.U. N2. 4 667 024 incluída aqui como referência) e HPLC em fase inversa.

isolamento do produto principal de cada reacção foi efectuado inicialmente com base no perfil obtido por HPLC em fase inversa. Os dados de espectrofotometria de massa foram obtidos utilizando um espectrofotómetro de massa equipado com uma fonte FAB padrão numa matriz de monotioglicerol contendo ácido oxálico. Obtiveram-se medidas de massa precisas através da comparação dos picos do ião molecular protonado a uma resolução de 10 000 e um oligopéptido de estrutura e peso mole cular conhecido,introduzido simultaneamente,(1151,538). As de, terminações nominais de massa a partir do FAB MS de baixa res£ lução de cada um dos produtos principais revelaram a presença de apenas um açúcar adicional em relação ao composto de partida. As determinações exactas de massa a partir do FAB MS de alta resolução forneceram composições elementares consistentes com a estrutura proposta. Os pontos isoeléctricos (pi) d_e terminados experimentalmente foram também consistentes com o esperado. 0s dados de espectroscopia de massa, pi e E^⁰ são apresentados nos exemplos 2 e 5-25.

local e estereoquímica do açúcar adicionado foi determinado por análise dos dados de espectroscopia RMN H 500 mHz dos produtos representativos. A atribuição de desvios químicos às ressonâncias individuais foi feita com base na espectros, copia de correlação bidimensional (COSY) por analogia com o glicopéptido de origem e/ou a sua aglícona. Seguiu-se a es-

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-13pectroscopia nuclear bidimensional de Overhauser (NOSEY) como descrito por Oeffs et al., J.A.C.S. 1986, 3063-3075. Os espectros obtidos estabeleceram a estrutura de um açúcar ligada a B-4 por uma ligação /3.

Os antibióticos progenitores preferidos, usados como matéria prima no processo referente a este invento são todos menj bros do grupo dos antibióticos glicopeptídicos de vancomicina/ /ristocetina. Os antibióticos AAD-216 são descritos na Patente dos E.U. I\I2. 4 548 974. As aglíconas AAJ-271 são descritas na ΕΡΑ N2. 87306193.1 copendente, incorporada aqui como referência. Os HPB-4', HPB-4, HPB-3', HPB-3”, HPB-2M e CWI-785B-aglícona são descritos na EPA I\I2. 87306558.5 copendente, aqui incorporada como referência.

A aglícona da vancomicina é descrita por F. 0. Marshall no 0. Med. Chem., 1965, Vol. 8, p. 18-22.

0s antibióticos glicopeptídicos glicosilados podem servir como matéria prima a modificaçães químicas subsequentes. Por exemplo, os glicopéptidos glicosilados aos quais foi adicionado um amino-desoxi-açúcar podem ser novamente modificados por acilação ou aminação redutora do grupo amino do açúcar introduzido. Estes processos são descritos nas Patentes dos E.U. N2s. 4 497 802 e 4 482 481. A introdução do grupo acilo ou alquilo na amina livre do açúcar adicionado, em vez da glicosi lação directa do núcleo usando um haloaçúcar protegido contendo uma cadeia N-acilo ou N-alquilo, permite a produção destes compostos que são difíceis de preparar por glicosilação directa. Uma vez que todos os locais amino original mente presentes no núcleo do glicopéptido seriam também acilados ou alquilados, estes locais devem ser protegidos antes da glicosilação, preferencialmente com o grupo protector t-butiloxicarbonilo. Depois da glicosilação do glicopéptido N-protegido e da subsequente desprotecção dos grupos oxigénio e amina do açúcar adicionado, pode proceder-se à acilação e aminação redutora do grupo amino livre desse açúcar. Finalmente, podem remover-se os grupos N-protectores nas aminas nucleares.

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-14As estruturas da HPB-4’, HPB-3’ e da aglícona CWI-785B* e dos seus deriuados glicosilados são apresentadas nas fórmulas 2a a 2q.

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060

SKB CASE 14334

-16As estruturas da aglícona AAD-216 (HP-3), aglicona de manosilo AAD-216 (HP-4), aglícona de manosilo AAO-271 e dos seus derivados glicosilados são apresentadas nas fórmulas 3a - 3k.

Composto	Z	R	0
3a HP-3	H	H	Cl
3b HP-4	D-manose	H	Cl
3c 0-(^-D-glucopiranosil)-HP-3	H	D-glucose	Cl
3d 0-(/3-D-manopiranosil)-HP-3	H	D-manose	Cl
3e 0-(2-acetamido-2-desoxi-y5-D-glucopiranosil)-HP-3	H	2-acetamido-2-desoxi- -D-glucose	Cl
3f 0-(2-amino-2-desoxi-^-D-glucopiranosil)-HP-3	H	2-amino-2-desoxi-D- -glucose	Cl
3g 0-(6-amino-6-desoxi-/3-D-glucopiranosil)-HP-3	H	6-amino-6-desoxi-D- -glucose	Cl
3h 0-(5-acetamido-6-desoxi-/3-D-glucopiranosil)-HPB-3’	H	6-acetamido-6-deso- xi-D-glucose	Cl
3i 0-(^-D-maltosil)-HP-3	H	D-maltose	Cl
3j 0-(2-acetamido-2-desoxi-/3-D-glucopiranosil)-HP-4	D-manose	2-acetamido-2-desoxi. -D-glucose ™	Cl
3k aglícona 0-(6-amino-6-desox.i - /2>-D-glucopiranosil)-A A 0-2 71 manosil	D-manose	6-amino-6-desoxi-D- -glucose	H

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060

ΞΚΒ CASE 14334

-17As estruturas da aglicona de vancomicina e dos seus deri vados são apresentadas nas fórmulas 4a - 4c.

Composto	R
4a aglicona de vancomicina	H
4b aglicona de 0-(2-amino-2-desoxi-^-D-	2-amino-2-desoxi-D-glucose
-glucopiranosil)vancomicina
4c aglicona de 0-(6-amino-6-desoxi-/S-D-	6-amino-6-desoxi-D-glucose
-glucopiranosil)vancomicina '

Os antibióticos a que se refere este invento podem ser convertidos em sais fisiologicamente aceitáveis atravós de técnicas bem conhecidas nesta área. Esses sais são formados com ácidos orgânicos ou inorgânicos fortes ou moderadamente fortes. Por exemplo, faz-se reagir o antibiótico com um tal ácido, num solvente miscível na água como o etanol, com separa ção do sal por precipitação com excesso de óter etílico ou cio rofórmio, separando-se o sal como descrito acima ou por remoção do solvente. Como exemplos de sais incluídos neste invento temos os seguintes: acetato, oxalato, metano-sulfonato, etano-sulfonato, sulfonato de benzeno, tartarato, citrato, salicilato, acetato, propionato, cloridrato, bromidrato, sulfato,

060

SKB CASE 14334

4^8·$

-18tolueno-sulfonico, fosfato e nitrato. Os sais proferidos são os fosfatos, metano-sulfonatos e acetatos.

Todos os antibióticos deste invento e todos os sais seus derivados, possuem uma actividade antibacteriana, em ensaios in vitro ou in vivo, contra organismos gram-positivos, podendo portanto ser usados para prevenir ou tratar infecções causadas por Staphylococcus (incluindo as espécies resistentes às beta-lactamas), Streptococcus e Ciostridium em animais ou no homem.

Na Tabela 1 apresentam-se as concentrações mínimas inibi tórias de antibiótico (g/ml) resultantes de ensaios padrão, por microtitulação.

Na Tabela 1, os organismos teste 1-5 eram estirpes diferentes de Staphylococcus aureus; 6, 8, 11, 13 e 14 eram estir pes diferentes de Staphylococcus epidermidis, 7 era um Staphylococcus haemolyticus, 9 e 10 eram estirpes diferentes de Streptococcus faecalis; e 12 era Staphylococcus saprophyticus .

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SKB CASE 14334

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SKB CASE 14334 _it.,

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060

SKB CASE 14334

-21A Tabela que se segue, Tabela 2, mostra valores de CIM para um grande número de estirpes. 0 número de estirpes testai das é apresentado em parêntesis abaixo de cada organismo. 0 valor de ΟΙΜ^θ é dado em yivg/ml.

Tabela 2

Organismo de teste

Antibiótico	S. Aureus (10)	S. Epidermidis (20)	St. faecalis (10)
2d
cim₅₀	1,6	6,3	1,6
GAMA	(1,6-6,3)	(3,1-12,5)	(0,8-1,6)
2m
CÍM₅₀	1,6	6,3	0,8
GAMA	(1,6-3,1)	(1,6-12,5)	(0,8-1,6)
2n
cim_5Q	3,1	6,3	1,6
GAMA	(3,1-6,3)	(3,1-25)	(0,8-3,1)
4b
cím₅₀	3,1	6,3	1,6
GAMA	(3,1-6,3)	(6,3-12,5)	(1,6-3,1)
2j
^CIM5D	3,1	6,3	1,6
GAMA	(3,1-6,3)	(3,1-12,5)	(0,8-1,6)
21
^CIW50	3,1	3,1	1,6
GAMA	(3,1-6,3)	(1,6-12,5)	(0,8-1,6)
2k
cim₅₀	3,1	6,3	0,8
GAMA	(1,6-6,3)	(3,1-25)	(0,8-1,6)
2h
cim₅₀	3,1	6,3	0,8
GAMA	(1,6-3,1)	(3,1-25)	(0,8-1,6)

060

SKB CASE 14334

Tabela 2 - cont. Organismo de teste	St. faecalis
	S. Aureus S. Epidermidis
A ntibiótico	(10) (20)	(10)

2i

cím₅o	3,1	6,3	0,8
GAMA	(1,6-6,3)	(3,1-12,5)	(0,8-1,6)
2o
* ΓΤ M 50	3,1	6,3	0,8
GAMA	(1,6-6,3)	(3,1-12,5)	(0,8-1,6)
2p
cim₅₀	6,3	12,5	3,1
GAMA	(3,1-12,5)	(6,3-25)	(3,1-6,3)
2q
^CIM50	3,1	3,1	3,1
GAMA	(1,6-3,1)	(3,1-6,3)	(1,6-3,1)
Vancomicina
cím₅₀	3,1	3,1	3,1
GAMA	(1,6-3,1)	(1,6-6,3)	(3,1-6,3)
} Teicoplanina
cim₅₀	1,6	6,3	0,4
GAMA	(0,8-3,1)	(3,1-12,5)	(0,4-0,8)
Na Tabela	3 mostram-se	dados de ensaios	padrão por micro.
titulação levados a cabo sem	soro humano e com	i 50$ de soro hu-

mano. Os organismos de teste foram □. aureus (1 e 2), S, epidermidis (3 e 4), S, hemolyticus (5), e S. faecalis (6-8). Es. tes resultados mostram que os antibióticos deste invento são activos em presença de soro humano.

060

SKB CASE 14334

-23Tabela 3

Orga-	0-(^-D-gluc_o sil)-HPB-4	l/ancomi cina	T eicopla nina
nismo	CondiçSes
1	Sem	soro		1,6	1,6	1,6
	50%	soro	humano	3,1	3,1	6,3
2	Sem	soro		3,1	3,1	1,6
	50%	soro	humano	3,1	6,3	6,3
3	Sem	soro		3,1	3,1	1,6
	50%	soro	humano	6,3	6,3	3,1
4	Sem	soro		6,3	3,1	3,1
	50%	soro	humano	12,5	6,3	3,1
5	Sem	soro		12,5	3,1	12,5
	50%	soro	humano	50,0	12,5	50,0
6	Sem	soro		1,6	3,1	0,8
	50%	soro	humano	3,1	12,5	6,3
7	Sem	soro		1,6	3,1	0,8
	50%	soro	humano	1,6	6,3	6,3
8	Sem	soro		1,6	6,3	0,8
	50%	soro	humano	1,6	12,5	3,1

A actividade in vivo dos antibióticos deste invento foi confirmada administrando antibióticos seleccionados a ratos infectados por vários microrganismos patogénicos gram-positivos. A Tabela 4 resume os resultados comparando o 0-(/3-D-glu cosil)-HPB-4’ com a vancomicina e a teicoplanina contra estirpes resistentes à meticilina (RM) e sensíveis à meticilina (SM). Infectaram-se intraperitonialmente ratos com o organismo indicado e depois por via intravenosa, 1 hora após infecção com o antibiótico indicado.

060

SKB CASE 14334

-24Tabela 4

Organismo	Sensibili	l/ancomi	mg/kg	0- Q2>-D-glju
Estirpe	da de a me	cina	teicoplani	cosil)
NS.	ticilina		na	HPB-4 ’
S. aureus	SM	0,8	0,8	0,8
HH 127
S. aureus	RM	4,4	1,6	3,8
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S. faecalis	RM	5,8	1,6	2,9
34358
S. epidermidis RM	13	26	23
2479
S. hemolyticus RM	10	46	>60
651
0 invento inclui no	seu âmbito	, composições	farmacêuti-
cas contendo	pelo menos um	dos compostos antibióticos acima re
feridos e um	transportador	farmacêutico aceitável.	As composi_

ções podem ainda conter outros agentes antibacterianos activos. As composições podem ter qualquer forma farmacológica aproprija da à via de administração em questão. Como exemplos destas composições mencionamos as composições sólidas para administra ção oral tais como, comprimidos, cápsulas, pílulas, pós e grânulos; composições líquidas para administração oral tais como, soluções, suspensões, xaropes e elixires; preparações para administração parenteral como soluções estéreis, suspensões ou emulsões; e preparações para administração tópica tais como geles, cremes, unguentos ou pomadas.

As composições injectáveis eficazes que contenham estes compostos podem estar em forma de solução ou suspensão. Constáta-se que na preparação de formulações adequadas a solubilidade em água dos sais da adição de ácidos e' maior que aquela das bases livres. Da mesma maneira, as bases são mais solú67 060

SKB CASE 14334

-25veis em ácidos diluídos ou em soluções acídicas que em soluções neutras ou básicas.

No que diz respeito à forma solução, o composto é dissol. vido num suporte fisiologicamente aceitável. Estes suportes compreendem um solvente adequado, conservantes como □ álcool benzílico, e se necessário, tampões. Solventes adequados são, por exemplo, água e álcoois aquosos, glicóis, ésteres de carb£ nato como o carbonato de dietilo. Estas soluções aquosas não contêm, geralmente, mais do que 50,□ do solvente orgânico, em vclume.

As suspensões injectáveis requerem um meio líquido de suspensão, com ou sem adjuvantes, como suporte. 0 meio de sus. pensão pode ser, por exemplo, polivinilpirrolidona aquosa, óleos inertes como os óleos vegetais ou óleos minerais altameri te refinados ou carboximetilcelulose aquosa.

Nas suspensões podem ser necessários adjuvantes adequados, fisiologicamente aceitáveis, para manter o composta em suspensão. Os adjuvantes podem ser escolhidos entre espessantes como carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona, gelatina e alginatos. Muitos agentes tensioactivos podem ser úteis como agentes de suspensão. Outros agentes de suspensão úteis são: lecitina, aductos de óxido de alquilfenclpolietileno, sulfonatos de naftaleno, sulfGnatos de alquilbenzeno e os ésteres de polioxietileno sorbitano.

Muitas substâncias que afectam a hidrofilicidade, densidade e tensão superficial do meio líquido de suspensão podem ser usadas para fazer suspensões injectáveis, em casos individuais. Por exemplo, as anti-espuira de silicone, o sorbitol e os açúcares podem ser agentes de suspensão úteis. Uma composi ção antibacteriana do invento preferida é o 0-(β-D-glucopiranosil)-HPB-4’ em soluções para administração intramuscular ou intravenosa.

Para o uso como agentes antibacterianos, as campsições são administradas de modo a que a concentração do ingrediente activo seja maior que a concentração mínima inibidora referen67 060

SKB CASE 14334

-26te ao organismo a tratar. Os compostos antibióticos do invento são eficazes na prevenção e tratamento de infecções em animais, incluindo o homem, por bactérias patogénicas Gram-positi vas. Uma dose parenteral típica através de injecções intramus. culares, para uma pessoa de 70 kg, é de cerca de 100 a 2000 mg, preferencialmente de 500 a 1000 mg, por dia, embora a dose óptima dependa obviamente de factores como a natureza e gravidade da infecção bacteriana, do animal e da via de administração. As doses óptimas podem ser determinadas facilmente por técnicas padrão. E mais vantajosa a administração diária, embora seja possível a administração b.i.d. ou t.i.d.. Alguns antibióticos deste invento mostraram também ter actividade como promotores de crescimento animal e da eficiência de utiliz£ ção alimentar. Para aumentar a eficiência de utilização alimentar e promover o crescimento, administra-se oralmente um composto com esta aplicação numa ração adequada numa quantidade de cerca de 1 a 200 gramas por tonelada de ração. Para aumentar a produção de leite nos ruminantes, sugere-se a administração oral diária de uma quantidade de cerca de 0,1 a 10 mg/kg de peso do animal.

As composições alimentares deste invento compreendem as rações alimentares normais dos animais produtores de carne ou leite com um suplemento de uma certa quantidade de um ingrediente activo seleccionado entre os antibióticos da fórmula I, e os seus sais, ou uma mistura dos ditos que seja eficiente no melhoramento da velocidade de crescimento e eficiência de alimentação dos animais mas que não seja tóxica ou nociva a ponto de os animais reduzirem a ingestão da ração. A quantidade de ingrediente activo variará, como é sabido, com factores tais co mo o custo do ingrediente, a espécie e tamanho do animal, a actividade relativa do antibiótico seleccionado ou o tipo de ração usado como base.

As quantidades de ração representativas para porcos e aves domésticas são as seguintes:

Uma ração para porcos para alimentar animais de 18-45 kilos de peso é preparada da seguinte forma:

060

SKB CASE 14334

Milho, moído	78,15/
Preparado de óleo de soja (44/)	17,0/
Pedaços de carne (50/)	3,0/
Aroma de concha de ostra	0,4/
Farinha de ossos	0,5/
Oxido de zinco	0,1/
Suplemento de vitamina A, B, B^^ θ D	opcional

Uma ração para frangos é preparada a partir da seguinte fórmula:

Farinha de milho amarelo	67,35/
Preparado de óleo de soja	24,00/
Farinha de peixe savelha	6,00/
Farinha de ossos fervidos	1,0 0/
Cal moída	1,00/
Sal iodizado	0,34/
Cloreto de colina a 25/	0,13/
Vitamina B^^	0,10/
Sulfato de manganês	0,02/
Mistura vitamínica	0,06/

As rações para porcos desde o desmame à engorda podem ser suplementadas. Os porcos comem cerca de 0,9 kg de ração por dia (para um porco de 11 kg) até 4 kilogramas por dia (para um porco de 68 kilogramas). A maior parte das rações é constituída por uma base de milho, suplementada por ensilagens de legumes, farelo de trigo, aveia, cevada, melaço e um suplemento proteico.

A alimentação de aves de capoeira compreende rações para o início do crescimento, rações para frangos, e rações para aves poedeiras, fis rações são normalmente baseadas em milho moído, farinha de milho ou farinha de soja. As rações para frangos contêm muitas vezes suplementos de alta energia como gorduras, proteínas e vitaminas. As rações para perus são semelhantes mas compreendem apenas uma ração para o início do crescimento e uma ração para o crescimento. As galinhas ou faisões comem 13,5-135 gramas de ração por dia, os perus o do67 060

SKB CASE 14334

-28bro dessa quantidade. A quantidade estimada de consumo de ração está dependente do peso e idade do animal produtor de carne.

’ Os ingredientes activos seleccionados de entre os antibióticos da fórmula I ou uma mistura daí resultante são unifoj? memente misturados com as rações para dar rações suplementadas que depois são dadas como de costume, isto é, normalmente, ad libitum. Para proceder convenientemente o fabricante prepara uma pré-mistura do promotor de crescimento suplementar referejn te a este invento, opcionalmente combinado com ou sem outros I suplementos conhecidos no ramo tais como um antelmíntico, uma fonte de azoto ou um antibiótico, por exemplo, a virginiamicina ou a oxitetraciclina, para venda pelo fabricante aos formuladores ou operadores de rações. As concentrações de ingredientes activos, seleccionadas de entre os antibióticos da fórmu la I, ou de uma mistura dos mesmos, na prá-mistura vai normalmente de 5 a 75/í> em peso ou á 100-2000 vezes maior que a concentração na ração completa final. A prá-mistura pode ter a forma líquida ou sólida. Como suporte da pré-mistura pode ter. -se óleo de milho, óleo de sementes de algodão, melaço ou subprodutos de destilaria de modo a formar uma preparação líquida da pré-mistura. Para preparações sólidas da pré-mistura usam. -se frequentemente bases como a sacarose, lactose, farinha de “ milho, milho moído, farinha, carbonato de cálcio ou farinha de soja. A pré-mistura é depois misturada uniformemente com a ra, ção alimentando-se depois o animal em questão. Estas composições pré-misturadas estão incluídas no termo composições alimentares usado no texto.

A concentração dos ingredientes activos seleccionados de entre os antibióticos da fórmula I, ou de uma mistura dos mesmos, na ração final, é escolhida de modo a não ser tóxica mas activa, por exemplo, de uma gama de cerca de 1-1000 partes de ingrediente activo em peso por um milhão de partes da ração fi nal (ppm) ou cerca de 2-115 gramas por tonelada métrica. Há vantagem em escolher uma quantidade não tóxica de ingrediente activo da gama de 10-50 ppm.

06 0

SKB CASE 14334 .....

-290 método a que se refere este invento compreende a alimentação de animais monogástricos ou ruminantes, produtores de carne ou leite, especialmente de gado produtor de carne ou lei te, carneiros, porcos ou aves de criação, com uma quantidade não tóxica e promotora de crescimento, eficaz, de um ingrediente seleccionado de entre os antibióticos da fórmula I. Outros animais monogástricos que possuem um tracto digestivo onde se efectua fermentação num cego ou numa câmara tipo cego são os cavalos e os coelhos.

As rações alimentares suplementadas, descritas atrás,

I são apresentadas ao animal, pelos métodos correntes neste campo. 0 método mais conveniente para aumentar o crescimento e a produção de leite do animal e para aumentar a eficiência da operação de alimentação é a pastagem em liberdade, em redil ou estábulo de crescimento.

Os exemplos a seguir são ilustrativos, e não limitativos deste invento.

EXEMPLO 1

Preparação de 0-(2,3,4,6-tetra-O-acetil-yG-D-glucopiranosil )-HPB-4'

Adicionaram-se rapidamente 740 mg (l,8mmoles) de brometo | de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-D-glucopiranosilo (o(-acetobromogluco se) em 1,4 ml de acetona a uma solução de 545 mg de HPB-4’ (p_u rificada a 91% por HPLC) om 2,8 ml de acetona, 1,8 ml de água e

2,5 ml de uma solução de hidróxido de potássio (0,703M, 1,76 mmoles). A solução foi agitada durante duas horas à temperatura ambiente. A acetona foi removida por vácuo. A solução residual continha 0-(2,3,4,6-tetra-O-acetil-^-D-glucopiranosil)-HPB-4’.

EXEMPLO 2

Preparação de 0-(ys-D-glucopiranosil)-HPB-4'

Uma mistura bruta de 0-(2,3,4,6-tetra-0-acetil-/3-D-acetilglucopiranosil)-HPB-4' preparada como descrito no exemplo 1 foi tratada com 10 ml de metanol/hidróxido de amónio concen

060

SKB CASE 14334 .1

-30trado (1:1) durante três horas à temperatura ambiente de modo a remover os grupos açúcar protectores. Os solventes foram re movidos por vácuo. A mistura bruta obtida contendo 0-(^3-D-glLi copiranosil)-HPB-4' foi suspensa em fosfato sôdico aquoso (0,04M, pH 7,0); o pH foi ajustado para aproximadamente 8 com hidróxido de amónio de modo a promover a homogeneidade. A solução filtrada foi colocada numa coluna de gel de afinidade D-Ala-D-Ala. 0 glicopeptido ligado à coluna foi lavado com fos. fato sódico (0,D4M e 0,02M, pH 7,0); e água, e o material ligado eluído com acetonitrilo em amónia aquosa (O,1M).

material assim isolado foi purificado por HPLC semipreparativa em fase inversa numa coluna de aço com enchimeri (r) to Whatman Partisil ^w-10 ODS usando um sistema isocrático de acetonitrilo (12%) em fosfato de potássio (0,01M, pH 6,0). As fracçBes idênticas foram misturadas, diluídas a 5-10p num solvente orgânico e carregadas numa coluna de resina HP-20 (DIAION ^ ). 0 produto foi lavado com um volume igual a 10 v£ zes o volume da coluna de água e depois eluído com 50% de acetonitrilo aquoso. 0 acetonitrilo foi removido sob vácuo e a água por liofilização de modo a dar 230 mg do composto em que.s tão (rendimento de 41%); tendo uma massa +1 de 1453, 53 de E¹^ e pi de 7,9.

0s desvios químicos no espectro RMN 500 MHz^H foram atri. buídos com base nos observados para o composto de origem, HPB-4, e foram confirmados por vários ensaios de homodesacopla mento. Seguiram-se os ensaies de diferença de NOE. A irradia ção de Sgl produziu NOE às outras ressonâncias da glucose e em C-, o que é consistente com a glicosilação em 8^ apenas. A grande constante de acoplamento em Sgl (5 5,49, 3 = 8,6 Hz) confirma a ligação em /3.

EXEMPLO 3

Separação analítica por HPLC do 0-(2,3,4,6-tetra-O-acetil-jS-D-glucopiranosil)-HPB-4’

0-(2,3,4,6-tetra-0 - acetil-β- D - glucopiranosil)-HPB-4' preparado de acordo com o exemplo 1 foi separado uti67 060

SKB CASE 14334

-31 ......

r··:''' lizando as seguintes condições:

Coluna:

Fase móvel:

4,6 x 150 mm

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Tampão FosFato 0,01M (pH 3,2); aceto nitrilo 14,J com gradiente até 37% em 8 minutos

1,5 ml por minuto

Detecção:

220 nm, 0,05 AUFS

0-(2,3,4,6-tetra-O-acetilglucopiranosil)-HPB-4' tinha um tempo de retenção de 4,9 min.

EXEMPLO 4

Separação analítica por HPLC do 0-(/3-D-glucopiranosilo)~HPB-4 '

0-(^>-D-glucopiranosilo)-HPB-4' preparado de acordo com o exemplo 2 Foi separado usando as seguintes condições:

Coluna:	4,6 x 150 mm Altex ODS 5 yun
Fase móvel:	Tampão FosFato 0,01M (pH 3,2), aceto nitrilo 7/í com um gradiente até 34% em 12 minutos 1,5 ml por minuto
Detecção:	220 nm, 0,05 AUFS

0-(y3-D-glucopiranosilo)HPB-4* tinha um tempo de retenção de 8,4 min.

EXEMPLOS 5-28

Os compostos dos exemplos 5 a 28 Foram obtidos através dos processos dos exemplos 1 e 2, usando o glicopéptido e o o<-halo-açúcar apropriados como matéria prima. Os grupos protectores, a base e as condições reaccicnais mantiveram-se subs. tancialmente as mesmas, apenas com a alteração do tempo necessário à remoção do grupo protectcr como indicado na tabela.

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SKB CASE 14334

-34EXEMPLOS 29-39

- Os compostos dos exemplos 29 a 39 podem ser preparados através do processo que se segue com o gliccpéptido apropriado ‘ e o o( -halo-açúcar protegido como matérias primas. Adiciona-se rapidamente uma solução de um halogeneto de glucosilo 0-acetilado (2 a 10 equivalentes) em acetona a uma solução de um glicopéptido (0,02-0,05M) em acetona aquosa contendo 2 a 10 equivalentes de hidróxido de potássio. A solução resultante é agi. tada durante uma a duas horas à temperatura ambiente. Os solventes são removidos sob vácuo. 0 resíduo é tratado com hidró | xido de amónio concentrado em metanol (1:1) durante 1 a 30 horas à temperatura ambiente de modo a remover os grupos protecto res.

A purificação cromatográfica é conduzida usando uma colju na de gel de afinidade D-Ala-D-Ala e por HPLC em fase inversa.

Exemplo

N9. Composto

0-(y3-D-ribofuranosil)-HPB-4'

0-(/3-D-ribopiranQSÍl)-HPB-4'

0-(/5-L-ramnopiranosil )-HPB-4'

0-(2-desoxi-y3-D-glucopiranosil)-HPB-4 ’

0-/~ 2-(me tilsulf o nil)amino-2-des oxi-/5~D-glucop ira- nos il_/-HPB-4''

-(f enilsulf onil) amino-2-desoxi-/3-D-glucopiranosil_/-HPB-4 '

0-/”2-Z“( metil amino)carbonil_7amino-2-desoxi-/5-D-

-glucopiranosil_7 HPB-4''

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-glucopiranos il_7 HPB-4» ®-/~ 2-(aminocarbonil) amino-2-desoxi-/3-D-qlucopira nosil_/-HPB-4’' aglícona vancomicínica 0-(2-hexanamido-6-amino-2,6-didesoxi-/5-D-glucopiranosil)

0-/~2-(10 -metilundecanamido)-2-desoxi-/S-D-glucopi.

ranosi i_7/

060

SKB CASE 14334

-35EXEMPLO 40

Aglícona 0-/~2-(l-metilpenteno-4-amino)-2-desoxi-/3-D-glucopiranosil_y-AAD~216

Trata-se uma solução de aglícona AAD-216 (800 mg) em DMF seco (20 ml) com di-t-butildicarbonato (172 ^1) e trietilamina (285^1) durante uma hora à temperatura ambiente. 0 DMF é removido por vácuo e o resíduo tratado com 7,5 ml de hidróxido de amónio 7,5 N em 7,5 ml de metanol durante 3 horas. 0 líqui do é removido sob vácuo. 0 resíduo (645 mg) é dissolvido em hidróxido de potássio aquoso (4,5 ml, 0,62 M) e acetona (8 ml) e agitado à temperatura ambiente enquanto se adiciona rapidamente uma solução de brometo de 2-tri-fluoroacetamido-2-desox,i -3,4,6-tri-0-acetil-o(-D-glucopiranosilo (1,3 g) em acetona (4 ml). Depois de 2 horas, os líquidos são removidos. 0 resíduo é tratado com uma solução (1:1) de hidróxido de amónio concentrado/metanol (25 ml) durante 18 horas e os líquidos removidos sob vácuo. Suspende-se o resíduo numa solução de fosfato de sódio (0,04 M) e ajusta-se o pH a 8,5 com hidróxido de amónio para atingir a homogeneidade. A solução é filtrada e purifica da parcialmente usando gel de afinidade D-Ala-D-Ala.

Agita-se uma solução de aglícona 0-(2-amino-2-desoxi-/l-D-glucopiranosil)-N-(t-butiloxicarbonil)-AAD-216, parcial mente purificada, e 5-hexeno-2-ona em excesso em etanol absoluto à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto durante 24 horas. Adiciona-se um excesso de boro-hidreto de sódio e agita-se a mistura durante mais 5 horas. A mistura é diluída com água e concentrada até à secura. 0 resíduo é cuidadosamente tratado com TFA seco, durante 5 minutos. 0 TFA é removido sob vácuo. 0 resíduo é purificado usando um afigel”, HPLC e dessalinizado çom HP-20 de modo a dar aglícona 0-/~2-(l-metilpenteno-4-amino)-2-desoxi-/*-D-glucopiranosil_7-AAD-216.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 - Processo de preparação de um composto de fórmula I

A

O (I)

R ou de um seu derivado químico, ou de um seu sal farmaceuticamejn te aceitável, na qual fi é a porção restante de um antibiótico glicopeptídico da classe da vancomicina/ristocetina ou de um seu derivado químico, e 0 é o oxigénio fenólico do anel central (B) da região éter triarílica do antibiótico glicopeptídico e R é um sacarídeo seleccionado de entre: monossacarídeos, dissacarídeos e as suas variantes amino e desoxi, caracterizado por compreender a reacção de um halogensto de glucosilo protegido com uma solução alcalina de um antibiótico glicopeptídico de fórmula A-O-H ou de um seu dsrivado químico, onde A e 0 são como acima definidos, durante um período de tempo suficiente para produzir um antibiótico glicopeptídico glicosilado protegido, seguindo-se:

i) desprotecção dos grupos funcionais do grupo glicosilo adicionado ii) formação opcional de um seu derivado químico iii) formação opcional de um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por A ser a porção restante de um glicopéptido da classe da vancomicina/ristocetina seleccionado de entre vancomicina, ristocetina, actaplanina, A 35512B, teicoplanina, glicopéptidos AAJ-271, factores A41030 a, b, c, d, e, f, g, glicopéptidos CWI-785, AM 374, actinoidina, A 477, glicopéptidos AAD-216, 0A 7653, avoparcina ou seus produtos de hidrólise, derivados N-acilo ou ésteres.

67 060

SKB CASE 14334
3 - Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracteri zado por A ser a porção restante de um antibiótico glicopeptídico da classe da vancomicina/ristocetina seleccionado de entre: aglícona AAD-216, aglícona de manosilo AAD-216, HPB-4', HPB-3', aglícona CWI-785B', aglícona de manosil AAB-271 e agll cona de vancomicina.
4 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por A ser a porção restante do HPB-4'.
5 - Processo, de acordo com qualquer das reivindicações

1 a 4, caracterizado por R ser um monossacarídeo ou a sua vari ante desoxi ou amino.
6 - Processo, de acordo com qualquer das reivindicações

1 a 4, caracterizado por R ser um dissacarídeo ou a sua variajn te desoxi ou amino.
7 - Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracteri. zado por R ser um monossacarídeo piranosílico ou a sua variante desoxi ou amino.
8 - Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracteri. zado por R ser um monossacarídeo furanosílico ou a sua variante desoxi ou amino.
9 - Processo, de acordo com qualquer das reivindicações

1 a 4, caracterizado por R ser seleccionado de entre glucósilo, amino-desoxi-glucósilo, diamino-didesoxiglucósilo, N-acilo, d.e soxiglucósilo ou compostos da fórmula

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SKB CfiSE 14334

-38na qual

R² é OH, NR³R⁴, ou NR⁵-(CH₂) -W -(CH₂) R⁵;

R³ é H ou alquilo C^-C^j

R⁴ é H;

II ₅

-ΜΟΗ,νρ-ίΟΗΡη-ίΛ ou í ₅

-S-R , ou

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p é 0 ou 1j m e n são inteiros de 0 a 4;

s é um inteiro de 2 a 4;

q é um inteiro de 1 a 4;

R é H, alquilo C^-C^, cicloalquilo C^-Cg, cicloalcenilo C^-Cg, ou fenilo w é ch₂, -c=c-, -ch=ch-, -c(ch₃)=ch-, -ch=c(ch₃)- ou -C(CH₃) = C(CH₃)-;

Y é CH₂, 0, -N(alquilo 0_χ-0₄)-, -NH-, -C=C-, -CH=CH-, -C(CH ) = CH-, -CH=C(CH₃)- ou -C(CH₃) = C(CH₃)-;

e na qual R^ e os grupos alquilo de ligação “‘^^2^n'*’

-(CH₂)_s- e -(CH₂)_c - são opcionalmente substituídos por um ou dois átomos de halogéneo ou um ou dois grupos metilo, etilo, metoxi, amino, amino N-protegido, metilamino, dimetilamino, acetamido ou hidróxilo desde que R não seja Η quando Y é 0, p él, méOenéO; e desde que pelo menos dois grupos R sejam 0Η.
10 - Processo,de acordo com qualquer das reivindicações

1 a 4, caracterizado por R ser glucósilo, 2-acetamido-2-desoxi-D-glucósilo, 2-(l-metiletoxicarbonil)amino-2-desoxi-D-glucósi_ilo, 2-(etoxicarbonil)-amino-2-desoxi-D-glucosilo ou 2-(metoxicarbonil)amino-2-desoxi-D-glucósilo,

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SKB CASE 14334 ííSIfi^
11 - Processo, de acordo com a reivindicação 1, de prepa ração de:

0-(^-D-glucopiranosil)-AAD-216 aglicona

0-(/3-D-manopiranosil)-AAD-216 aglícona 0-(2-acetamido-2-desoxi-/J-D-glucopiranosil)-AAD-216 aglícona 0-(2-amino-2-desoxi-y5-D~glucopiranosil)-AAD-216 aglícona 0-(6-amino-6-desoxi-^-D-glucopiranosil)-AAD-216 aglícona 0-(^-D-maltosil)-AAD-216 aglícona

0-(2-acetamido-2~desoxi-/3-D-glucopiranosil)-AAD-216-manosilaglícona

0-(2-amino-2-desoxi-^-D-glucopiranosil)-CWI-785B’ aglícona

0-(^-D-glucopiranosil)-HPB-3'

0- (2-amino-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil )-HPB-4 ’

0- (6-amino-6-desoxi-y6-D-glucopiranosil) -A A 3-2 71 manosilaglícona

0- (2-amino-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil) -vancomicinaglícona 0-(6-amino-6-desoxi-/3~D-glucopiranosil)-vancomicinaglícona

0- (6-acetamido-6-desoxi-yS-D-glucopiranosil) - AAD-216 aglícona 0-Λ2-(b enziloxicarbonil) amino-2-desoxi-y6-D-glucopiranosil_7-HPB-4’

0-(2-butanamido-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil)-HPB-4’ □<2-(3 -metilbutanamido)-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil_7-HPB-4 ’ 0-^2 - (2-metilpropoxicarbonil) amino-2-desoxi-.$-D-glucopiranosil_J-HPB-4'

0-(2-propanamido-2-desoxi-/3-D-glucopiranosil) -HPB-4 ’

0-(2-acetamido-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil)-HPB-4'

0-^2-(1 -metiletoxicarbonil) amino-2-desoxi-y3-D-glucopiranosil__7-HPB-4 ’

0<2-( metoxicarbor.il) ami no-2 - desoxi-/3-D-gluco pira nos il_7-HPB4 ' ou um sal destes, farmaceuticamente aceitável.
12 - Processo de acordo com a reivindicação 1, de preparação do 0-(^-D-glucopiranosil)~HPB-4'.
13 - Processo de acordo com a reivindicação 1 de prepara ção do 0-/~2-(etoxicarbonil)amino-2-desoxi-^-D-glucopiranosi 1J⁷-HPB-4'.

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SKB CASE 14334
14 - Processo de preparação de uma composição farmacêuti , ca, caracterizado por se associar um composto de fórmula I co-

I mo preparado na reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamen* te aceitável a um veículo farnaceuticamente aceitável, a qual é eficaz numa dosagem diária de cerca de 100 a cerca de 2 000 mg de preferência de cerca de 500 a 1 000 mg.
15 - Processo de preparação de uma composição para alimentação animal a qual tem actividade promotora de crescimento e melhora a eficiência de utilização de rações animais, compre endendo a mistura prévia de uma ração animal com um composto preparado de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 13, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável numa quantidade de cerca de 1 a cerca de 200 g de composto por tonelada de ração total, ou o fornecimento de cerca de 0,1 a cerca de 10 mg de composto por kg de peso corporal, diários, para melhorar a prg dução de leite dos ruminantes.