PT85524B - Processo para a preparacao de oxirano-pseudooligossacaridos e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents
Processo para a preparacao de oxirano-pseudooligossacaridos e de composicoes farmaceuticas que os contem Download PDFInfo
- Publication number
- PT85524B PT85524B PT85524A PT8552487A PT85524B PT 85524 B PT85524 B PT 85524B PT 85524 A PT85524 A PT 85524A PT 8552487 A PT8552487 A PT 8552487A PT 85524 B PT85524 B PT 85524B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- formula
- inhibitors
- inhibitor
- preparation
- salts
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Description
MEMÓRIA DESCRITIVA
A invenção refere-se a oxirano-pseudooligosacaridos biologicamente activos e aos seus sais fisiològicamen te assimiláveis. Possuem propriedades inibitórias de íX-glucosidases, isto é, por exemplo da Λ-amilase e da disacaridase e podem por isso aplicar-se na medicina humana e veterinária, na alimentação animal, bem como na biotecnologia animal, bem como na biotecnologia dos amidos.
No pedido de patente europeia com o n- de publicação 0 173 9^8 (EP-A2-0 173 9^8 correspondente à patente US-4 632 917) reivindicam-se pseudooligosacáridos, de efeito inibitório da fc-glucosidase, correspondentes à fórmula III
N.
III
na qual
- 1 ou 2 m = 1, 2 ou 3 e n significa um número inteiro dela 20.
Os compostos descritos são inibidores poderosos, designados no que se segue também como inibidores do tipo W-46, que devido ao seu efeito sobre as hidrolases de glucósidos do extracto digestivo, se podem empregar como retarda dores da resorpção da glucose no tratamento, entre outros, da diabetes, e da adiposidade. Estes compostos formam-se nos cal dos de cultura de organismos que sintetizam os inibidores 1/-46, como por exemplo o est reptomic es galbus, superfície FH 1716 (dsm 3007). So após um processo dispendioso se obtêm substâncias isoladas, normalmente obtém-se uma mistura de vários ini bidores, que se distinguem pelo comprimento das cadeias contendo glucose. Esta falta de unicidade impede uma dosagem e padronização seguras, constituindo uma desvantagem na aplicação do preparado.
Descobriu-se então que por hidrólise ácida ou por cisão enzimática da glucose da mistura nativa de inibidores, de acordo com o registo EP-A2-0 173 9^8, se podem obter novos produtos de cisão, de elevada actividade, que se podem facilmente separar uns dos zutros por métodos apropriados e obter assim numa forma pura.
A invenção refere-se por isso a oxirano-pseudooligosacáridos de fórmula I
I em que Z é igual a zero ou 1, bem como aos seus sais com ácidos, fisiològicamente assimiláveis.
Os dois inibidores correspondentes à fórmula
I podem apresentar as seguintes fórmulas Ia e lb.
HO HO HO (la)
pseudooligosacarido de fórmula Ia e os seus sais designam-se daqui em diante também por inibidor W-46-H e o pseudooligosacarido de fórmula lb bem como os seus sais por inibidor W-46-P.
A invenção refere-se ainda a um processo para a preparação dos inibidores 17-46-11 e -P, de composições farsa cêuticas que contém estes compostos e à sua aplicação como me dicamentos, meios de diagnóstico e reagentes.
processo para a preparação dos inibidores
- 3 W-46-H e W-46-P, caracteriza-se por
a) se separar o açúcar de um inibidor de pi-glucosidade de fór mula II
na qual m = 2 ou 3 e n significa um número inteiro de 1 a 20, ou de uma mistura destes inibidores, por meio de métodos químicos ou bioquímicos, formando-se um composto de fórmula I, ou
b) se cultivar um estreptomicetes produtor de pseudooligosaca ridos de fórmula I, num meio de fermentação por processos de submersão adequados, se isolar e purificar os inibidores a par tir do micélio ou do filtrado de cultura por métodos de si co nhecidos, e se transformar os compostos de fórmula I obtidos, conforme o caso, nos seus sais fisiologicamente assimiláveis.
De entre os estreptomicetes, o estreptomices galbus subespécie FH 1716 é especialmente apropriado para a condução do processo. Esta estirpe encontra-se inscrita no Registo alemão de Microorganismos (DMS) com o número de registo DSM 3007 e descreve-se na EP-A2-0 173 948. Podem no entanto utilizar-se também as variantes e os mutantes desta estirpe para a preparação dos inibidores V-46-H W-46-P.
Os inibidores de fórmula XI e o processo para a sua preparação encontrara-se descritos na EP-A2-0 173 948. Por remoção do açúcar como por exemplo glucose, obtêm-se inibidores, de cadeia de sacáridos encurtada, segundo o processo de acordo com a invenção.
Os inibidores V-46 H e W-46 P preparai-se de
- 4 1'· ' .#»· ϊ1'!
preferência de acordo com o método a.
Na preparação procede-se de preferência como se seguei
Como material de partida utilizam-se inibidores de fórmula II (vide EP-A2-0 173 9^8) quer na forma enriquecida quer em mistura de formas purificadas. Podem no entan to também utilizar-se as soluções de fermentação de organismos produtores de W-46, na forma bruta, não purificada. A cisão das cadeias de glucose de diferentes comprimentos, dos inibidores, efectua-se por exemplo por hidrólise ácida com ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ácido trifluoroacético, en tre outros, na gama de temperaturas entre 0 e 120°C, de prefe rência de 8O-1O5°C. 0 tempo de hidrólise varia, conforme a temperatura, de alguns minutos a vários dias. De preferência trabalha-se na gama de 20-200 minutos.
Uma outra possibilidade para a cisão de açúca res neutros, como por exemplo maltose e glucose, dos inibidores da mistura de acordo com a EP-A2-0 173 9^8, consiste na aplicação de enzimas que removem {Χ,-glucósido s. Descobriu-se que, ao contrário dos enzimas de sangue quente, algumas ίχ-ami lases microbianas são capazes de encurtar e assim unificar os inibidores do tipo W-46, como por exemplo 7-4ÓA, ’,t-46D ou W-46C, entre outros, (vidéEP-A2-0 173 9^·θ)» por cisão de açúca res neutros. Tais enzimas são por exemplo a (X.-amilase do Baci llus subtilis ou do Bacillus licheniformis (ambos especialmen te apropriados para a obtenção de V-46 H), mas podem também utilizar-se amilases de outros microorganismos apropriados. Empregam-se de preferência ^-amilases de microorganismos terrnófilos ou t ermotol eráveis, cujos enzimas possuem também um óptimo de temperatura. Tais amilases conduzem, a temperaturas elevadas, a altas velocidades de reacção, isto é, a tempos de reacção mais curtos e vantajosos. Por intermédio desses enzimas apropriados podem fazer-se reagir soluções de inibidor de • 0,01 a 20%, de preferência de 0,5 a 5%> cosi bons rendimentos.
, 0 valor de pH e a temperatura escolhem-se, neste caso, de acordo com as propriedades do enzima. Pode trabalhar-se entre 0 e 100°C, mas prefere-se a gama entre 30 e 80°C .
Regulando o tempo de fermentação na preparação microbiana (de acordo com o processo b) ou por variação da cisão da glucose ou do tempo de hidrólise (de acordo com o processo a) pode obter-se de preferência ou o inibidor lí ou o inibidor W-46 Ρ. A partir das soluções de fermantação ou de reacção podem isolar-se e purificar-se os inibidores por processos de si conhecidos.
Para tal fim, são adequados um grande número de processos, como por exemplo cromatografia em permutadores iónicos, peneiros moleculares ou resinas de adsorpção, e ainda precipitação com solventes, ultrafiltração, extração de Craig, entre outros.
Um processo preferencial para o isolamento e purificação dos inibidores W-46 II ou W-46 P consiste em adsor Ver numa resina apropriada, por exemplo sobre uma base de poliestireno, os inibidores formados, a partir de — por exemplo como descrito acima — um filtrado de cultura tratado ou de uma solução reaccional, remover a resina carregada e isolar os inibidores mencionados por meio de eluição com soluções tampão adequadas, como por exemplo com tampões de fosfato ou acetato de sódio ou, conforme o caso, com solventes orgânicos com água, como por exemplo metanol, etanol, acetona, inas de preferência com isopropanol aquoso. Os eluidos contendo os inibidores concentrara-se por ultrafiltração, de um modo por si conhecido, procedendo-se simultaneamente a uma desalinização. A solução aquosa, pobre em iões, dos inibidores menciona dos separa-se depois cromatograficamente numa coluna de per mu ta iónica, por um processo de si conhecido. Utilizam-se de preferência como permutadores iónicos, permutadores catiónicos ácidos, fortes ou fracos, por exemplo à base de copolimerizados de estireno-divinilbenzeno, que contêm como grupos funcionais grupos . ou 000H (^Dowex 50 T-'T, ^Amberlite GG120) ou â. base de sulfopropilcelulose modificada (SP- Sephadex), mas também se podem utilizar um grande número de outros permu tadores catiónicos disponíveis no mercado. 0 último passo do isolamento é a utilização de um peneiro molecular, por exemplo à base de gel de poliacrilamida (^iogel P-6) ou à base de ce lulose modificada ( Sephadex). As soluções aquosas do material purificado obtidas, secam-se depois, por exemplo por liofilização.
Os inibidores 7-46 II e 11-46 P puros são pseudooligosacáridos amorfos incolores. Contêm azoto e possuem um carácter fracamente básico. Deste modo, os inibidores 7-46 II e W-46 P,.na electroforese de alta tensão em tampões ácidos, como por exemplo misturas aquosas de ácido fórmico/ácido acético, deslocam-se como catiões na direcção do cátodo. As subs tâncias de acordo com a invenção possuem propriedades redutoras, que, como e habitual na química dos açúcares, podem ser identificadas por exemplo com cloreto de trifeniltetrazólio (TCC).
compostos puros, dosão ί 981 m/z ('.+ 38H64N2°27 r+ \ ___________
Os pesos moleculares dos terminados por esoectrometria de massa-FAB,
H+) correspondente à fórmula molecular para o ini.
bidor 77—46 H (base livre) e 819 m/z (M+H ) correspondente à fórmula molecular θ-^2^54^2θ22 Para ° iníbidor 7-46 P (base li vre). Por meio de estudos espectroscópicos, especialmente por espectroscopia de ressonância nuclear atribuiram-se as seguin tes estruturas aos composto s s
7-46 H - fórmula Ia e
7-46 P - fórmula Ib.
Na literatura encontrar-se já descritos vários inibidores de QÍ-glucosidase, mas só a série de compostos descrita por H. Takeda et al. (Japan KOKAI 83-172.400 (11 de Outubro, 1983)): Nd 1 a N3 17, contém anéis de epóxido (oxira nos) nas fórmulas de estrutura. As estruturas epóxido aparecem apenas uma vez em cada caso.
Pelas fórmula Ia e Ib, nas quais as estruturas de epoxi-pseudoaminoaçúcar se encontras presentes duas vezes, os compostos de acordo com a invenção distinguem-se dos inibidores da série N3 1 a NS 17· Em relação aos pseudooligo sacarido s com efeito inibitório de 0Ç-gluco sidases de acor do com a EP-A2-0 173 9^8, os inibidores ¥-46 II e ¥-46 P distinguem-se pela sua cadeia de sacaridos encurtada (menor peso molecular). Eles constituem assim novas substâncias que apresentam uma estrutura unitária.
Tanto o inibidor ¥-46 H como o inibidor ¥-46? inibem fortemente a Λ-amilase do pâncreas e as d1sacaridascs da mucosa do intestino delgado, em especial a sacarase que cinde o açúcar de cana. ;.s actividades específicas são de 4x t \ i unidades de inibição de X-amilase (AIS) por mg ou de 1x10 unidades de inibição de sacarase (SIE) por mg para o ¥-46h e
4 i z
1x10 AIE por mg ou 3^10 SIE por mg para o inibidor ¥-46P.
As actividades calcularam-se por intermédio do teste seguinte:
TESTE DA AMILASE:
Uma unidade de inibição de amilase (ATE) defi fe-se como a quantidade de inibidor que, nas condições do tes te, consegue reduzir a 50% duas unidades de amilase (AE). Uma unidade de amilase é, segundo a convenção Internacional, a quantidade de enzima que, num minuto, cinde 1 y. equivalente de ligação glucosídica no amido. Os pVal de ligação glucosídi da cindida determinam-se como uVal de açúcares reduzidos, poi1 um processo fotométrico com ácido dinitrosalicílico. Os resul tados calculam-se como jli Mole de maltose por meio de uma recta de calibraçao da maltose.
Os testes efectuaram-se do seguinte modo:
Incubam-se prèviamente a ^-amilase do pâncreas de porco e as soluções a testar, conjuntamente com 1,0 ml . de tampão de fosfato 20 mm, a pH 6,9 θ 10 mm de NaCl, durante
J- .-,.
• ΧΓν z
10-20 minutos, a 37°θ· A reacção enzimática inicia-se por adi ção de 1,0 ml de amido solúvel (0,25% no tampao mencionado), de acordo com o método de Zulkowski. Após exactamente 10 minu tos interrompe-se a reacção com 2,0 ml do reagente corado áci do dinitrosalicílico (de Boehringer iTannheim: Biochemica-Information II), e aquece-se durante 5 minutos em banho-maria, à ebulição, para desenvolvimento da cor. Após arrefecimento mede-se a extinção a 5^6 nm em relação à do ensaio em branco. A inibição a 50% calcula-se graficamente em comparação com a reacção enzimática não inibida, aplicando várias quantidades de inibidor, pelo processo da representação de probabilidades.
TESTE DA SACARASE5
Uma unidade de inibição de sacarase (SIE ) define-se como a quantidade de inibidor que, nas condições do teste, permite reduzir a 50% duas unidades de sacarase (SB). Uma SE é, de acordo com a convenção internacional, a quantida de de enzima que, num minuto, cinde 1 yo. equivalente de ligação glucosádica da sacarose. Os yuVal de ligação glucosídica cindida exprimem-se como 2 jiVal, por um processo fotométrico segundo o método da deshidrogenase de hexoquinase/glucose-6-fosfato. Os resultados calculam-se como ^ι'-Iole de hexoses,por intermédio de uma recta de calibração da glucose.
Os testes efectuaram-se segundo o método descrito por H. U. Bergmeyer em Methods of Enzymatic Analysis, 3- edição Verlag Chemie, Weinheim, 1984, pag. 96-IO3.
As propriedades dos inibidores de acordo com a invenção são interessantes do ponto de vista da sua aplicação como terapêuticos contra a diabetes e pré-diabetes bem co :uo da adiposidade e da manutenção de dietas. Devido às suas propriedades são também úteis como reagentes para fins de dia gnóstico. A invenção refere-se, nor isso, também a medicamentos, especialmente aos destinados ao tratamento das doenças • mencionadas, bem como à utilização como medicamentos, especial *
- 9 mente como antidiabetes, e ainda como reagentes.
Os alimentos e guloseimas contendo amidos e açúcar de cana conduzem, em animais e seres humanos, a uma su bida do açúcar no sangue e através disso a um aumento da secreção de insulina pelo pâncreas. A hiperglicémia resulta da cisão do amido e do açúcar de cana no extracto digestivo.sob a acção da amilase e da sacarase sobre a glucose.
Nos diabéticos a hiperglicémia é particularmente grave e mantém-se durante longo tempo.
A hiperglicémia alimentar bem como a hiperinsulinemia após a ingestão de amidas e açúcar pode reduzir-se por,meio dos inibidores W-46 H e W-46 P de acordo com a inven ção. Esta acção depende da dose. Os inibidores de ^Q-glucosida se, de acordo com a invenção, podem assim aplicar-se como terapêuticos na diabetes, pré-diabetes e adiposidade, bem como no apoio a dietas. Para este fim aconselha-se uma administração, especialmente às refeiçães. A dosagem, que deve ser calculada de acordo com o peso do paciente e com a situação particular, é de 5-500 mg por dose, que deve ser tomada, por con veniência, a cada refeição. A dosagem pode, contudo, em casos isolados justificados, ser superior ou inferior à mencionada.
Os inibidores de ^(-glucosidase, de acordo com a invenção, são apropriados em especial para administração oral. Podem aplicar-se como substâncias isoladas, como sais com ácidos, fisiològicamente assimiláveis, e ainda na forma de uma composição farmacêutica utilizando veículos e suportes habituais. Pode também ser vantajosa uma aplicação combinada com outros medicamentos, como substâncias hipoglicémicas ou hipolipídicas, Uma vez que os sacaridos de alto peso molecular não são resorvidos nessa forma, ou são-no muito pouco, a partir do extracto digestivo, não são de esperar efeitos secundários graves tóxicos, das substâncias de acordo com a invenção .
a
Do mesmo modo, não se verificaram quaisquer sintomas estranhos em animais de laboratório, após administra ção oral de elevadas doses dos inibidores W-46 H e W-46 P.
Para testar o efeito farmacológico dos inibidores de p(-glucosidase, administrou-se por via oral, a ratos de Wistar machos, em jejum, com um peso entre 200 e 250 g, um inibidor W-46 H ou W-46 P, de acordo com a invenção, conjunta mente com 2g de amido ou de açúcar de cana por Kg de peso cor poral, na forma de uma suspensão em^?ylose (metilhidroxietil celulose). Através da determinação da concentração de açúcar no sangue em amostras de sangue, recolhidas antes, durante e depois da administração oral dos inibidores de Λ-glucosidase, verificou-se a eficácia dos preparados.
Nestes ensaios obtiveram-se os valores apresentados na Tabela 1 (efeito sobre a concentração de glucose no sangue de ratos alimentados com amido) e na Tabela 2 (efei to sobre a concentração de glucose no sangue de ratos alimentados com açúcar de cana), para o inibidor W-46 H.
TABELA 1
| Tempo | Glucose no sangue em mmole/1 ( | X + SEM, n = 7) | |
| em horas / | Dose oral | Dose oral | Controle |
| apos o | |||
| tratamento | 0,3 mg/Kg | 1,0 mg/Kg | |
| 0 | 3,77 * 0,09 | 3,93 t 0,10 | 3,79 ± 0,14 |
| 0,5 | 5,53 i 0,17 | 5,04 ± 0,08 | 5,56 + 0,16 |
| 1 | 5,59 t 0,06 | 5,07 i 0,09 | 6,36 + 0,17 |
| 2 | 5,67 + 0,13 | 4,99 ± 0,14 | 5,18 ± 0,17 |
| 3 | 4,86 + 0,18 | 4,57 ± 0,10 | 4,94 + 0,16 |
| 5 | 4,39 t 0,13 | 4,13 ± 0,08 | 4,19 + 0,14 |
TABELA 2
Tempo em Glucose no sangue em mmole/1 (X i SEM, n = 7)
| minutos após o tratamento | Dose ©ral 1 mg/Kg | Dose oral 3 mg/Kg | Dose oral 10 mg /Kg | Controle |
| 0 | 3,99 i 0,10 | 3,94 + 0,14 | 4,01 + 0,15 | 4,08+0,12 |
| 15 | 6,07 ΐ 0,28 | 5,71 í 0,23 | 5,06 + 0,20 | 6,65+0,40 |
| 30 | 6,01 + 0,22 | 5,53 + 0,19 | 5,11 + 0,10 | 6,63+0,10 |
| 60 | 6,34 + 0,14 | 5,47 + 0,15 | 4,82 + 0,09 | 7,18+0,30 |
| 120 | 5,45 + 0,13 | 5,20 + 0,16 | 4,50 + 0,11 | 5,50+0,09 |
| 240 | 4,57 + 0,07 | 4,83 + 0,15 | 4,29 + 0,22 | 4,90+0,07 |
Dos valores apresentados na Tabela 1 resulta um valor limite de 0,27 mg/Kg de rato e da Tabela 2 um valor limite de 1,29 mg/Kg de rato (por valor limite da substância activa entende-se a quantidade por Kg de animal testado, cuja administração, após uma hora, ainda produz um efeito apreciável ) .
Para além da regulação da glucose no sangue podem também utilizar-se os oligosacaridos de acordo com a in venção para a inibição da ιχ-amilase da saliva. Este enzima actua sobre a digestão do amido na boca e o açúcar assim formado provoca o aparecimento de cárie nos dentes. Os compostos de acordo com a invenção podem por isso ser utilizados para a profilaxia ou para a redução da formação da cárie.
Além disso podem ser utilizados como reagentes bioquímicos e ainda como meios de diagnóstico.
Exemplo lt
Dissolvem-se 5,0 g da mistura de inibidores com os componentes 17-46 A, W-46 B e W-46 C, preparados deacor do com os dados da EP-A2-0 173 9^-θ (exemplos 1 e 2), em 80 ml de ácido trifluoroacético 2N e aquece-se durante 10 minutos a
100°C, em atmosfera isenta de oxigénio, decorrido este tempo, arrefece-se o recipiente da reacção rapidamente, sob agitação, e destila-se o ácido trifluoroacético aquoso, sob vácuo, até à secura·
Para se obterem os inibidores de cadeia mais curta, dissolve-se o resíduo sólido da destilação em água des tilada e aplica-se numa coluna de 3 1 de volume cheia com o permutador iónlco SP-Sephadex^ C-25 e equilibrada a pH 3· A eluição da substância activa efectua-se por aplicação de um gradiente ascendente de NaCl 5θ mM. Enquanto a concentração de cloreto de sódio remove da coluna o inibidor W-46 H com uma condutividade de 3 mS, a eluição do composto W-46 P ocorre com uma conditividade de 4 mS. Os eluidos separados recolhidos concentram-se para dessalinização por ultrafiltração a ^35 bar e liofilizam-se em seguida. Obtêm-se 0,7 g do inibidor W-46 H e 1,6 g do inibidor W-46 P (na forma dos respectivos cloridratos).
Exemplo 2:
Dissolvem-se 65 g de uma mistura de inibidores, preparada de acordo com a EP-A2-0 173 948 (exemplos 1, 2) em 6,5 1 de água e ajusta-se o pH a 7»5» Adiciona-se em segui da 1 g de (X.-amilase do Bacillus subtilis 130 U/mg e agita-se durante 18 horas a 60°C. Durante este tempo deve garantir-se que o valor de pH se mantenha constante. Decorrido o tempo de reacção filtra-se a mistura resultante, a temperatura ambiente, sobre 4 1 de resina de adsorpção de poliestireno 20 (^Diaion HP-20). Enquanto que a referida eluição arrasta as impurezas indesejadas, os açúcares neutros e os sais, obtém-se o inibidor W-46 H por lavagem da coluna com 20 1 de uma solução de isopropanol a 10%. A secagem conduz ao inibidor de sejado. No caso de não se conseguir obter o composto W-46 H suficientemente puro, pode efectuar-se uma purificação posterior com permutadores iónicos, como se descreve no exemplo 1.
Exemplo 3:
Dissolvem-se 10 g do inibidor W-46 H preparado de acordo com o exemplo 1, em 200 ml de água e filtram-se através de 200 ml de permutador iónico IRA-68, forma-se-OH, contido numa coluna de vidro. Lava-se em seguida com 200 ml de água. Reúnem-se os eluídos, que contêm o inibidor na forma de base livre. Divide-se então a solução em 4 partes iguais. Cada um dos quartos lava-se a pH 6 com ácido glucurónico, com ácido sulfúrico e com ácido clorídrico, respectivamente, e liofiliza-se bem como o quarto restante, que não se neutralisa. A última solução dá, após secagem, 2,3 g de W-46 H (base livre) com 4x10^ AIE/mg e 1x10^ SlE/mg, as outras soluções dão 2,5 g de W-46 H/ácido glucurónico de actividade específica 3*6x10 AIE/mg e 9x1SIE/mg, 2,4 g de W-46 H/ácido sulfú rico de actividade específica 3,8x10^ AIE e 9»6xlO3 SIE/mg e 2,3^ g de W-46 H/ácido clorídrico de actividade específica 3,9x10 AIE/mg e 1x10 SIE/mg, respectivamente.
Exemplo 4t
Tratam-se 10 g do inibidor de OÇ-glucosidase W-46 P, de acordo com o exemplo 1, pelo processo descrito no exemplo 3 para o inibidor W-46 H. Obtêm-se 2,4 g de W-46 P na forma de base livre com actividade específica de 1x10^ AIE/mg e 3x1O4 SIE/mg, e
2,6 g de glucuronato de W-46 P,
2,3 g de sulfato de W-46 P e 2,3 g de cloreto de W-46 P,
Claims (1)
- Processo para a preparação de oxirano-pseudooligosacáridos de fórmula II na qual z é igual a zero ou 1, bem como dos seus sais com ácidos, fisiològicamente assimiláveis, caracterizado pora) se separar o açúcar de um inibidor de (K-gluco sidase de fór mula II na qual m = 2 ou 3 e n significa um número inteiro dela 20, ou de uma mistura destes inibidores, por meio de métodos químicos ou bioquímicos, formando-se um composto de fórmula I, oub) se cultivar um estreptomicetes produtor de pseudooligosa• cáridos de fórmula I, num meio de fermentação, por processos . de submersão adequados, se isolar e purificar os inibidores a- 15 partir do micélio ou do filtrado de cultura, por métodos de si conhecidos e se transformar os compostos de fórmula I obtidos, conforme o caso, num dos seus sais fisiològicamente assimiláveis.- 2ê Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, utilizável como meio de diagnóstico, como reagente ou como profilático contra a cárie, bem como medicamento no tratamento da diabetes e da adiposidade, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um oxirano-pseudooligosacárido de fórmula I, quando preparado de acordo com o processo descrito na reivindicação 1, ou dos seus sais fisiològi camente assimiláveis, com veículos e suportes farmacêuticos habituais apropriados e farmacològicamente inofensivos, numa forma de administração adequada.A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na Republica Federal Alemã em 13 de Agosto de 1986, sob o nS P 36 27 421.6.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3627421 | 1986-08-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT85524A PT85524A (de) | 1987-09-01 |
| PT85524B true PT85524B (pt) | 1990-06-29 |
Family
ID=6307284
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT85524A PT85524B (pt) | 1986-08-13 | 1987-08-12 | Processo para a preparacao de oxirano-pseudooligossacaridos e de composicoes farmaceuticas que os contem |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4990500A (pt) |
| EP (1) | EP0257418B1 (pt) |
| JP (1) | JPS6348302A (pt) |
| KR (1) | KR880002536A (pt) |
| AT (1) | ATE89563T1 (pt) |
| AU (1) | AU7680187A (pt) |
| DE (1) | DE3785895D1 (pt) |
| DK (1) | DK420187A (pt) |
| ES (1) | ES2056801T3 (pt) |
| FI (1) | FI873483A (pt) |
| HU (1) | HUT44802A (pt) |
| IL (1) | IL83495A0 (pt) |
| NO (1) | NO873385L (pt) |
| PT (1) | PT85524B (pt) |
| ZA (1) | ZA875954B (pt) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR960022566A (ko) * | 1994-12-30 | 1996-07-18 | 김충환 | 신규한 아미노올리고당 유도체 및 그의 제조방법 |
| DE19631288A1 (de) * | 1996-08-02 | 1998-02-05 | Hoechst Ag | Neue Inhibitoren der ß-Glucuronidase |
| TWI318202B (en) * | 2003-01-30 | 2009-12-11 | Sankyo Co | Oligo acid derivatives |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2064092C2 (de) * | 1970-12-28 | 1983-06-01 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Inhibitoren für Glykosidhydrolasen aus Actinomyceten |
| US4013510A (en) * | 1970-12-28 | 1977-03-22 | Farbenfabriken Bayer Aktiengesellschaft | Glycoside-hydrolase enzyme inhibitors |
| DE2719912C3 (de) * | 1977-05-04 | 1979-12-06 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Verfahren zur Isolierung von 0- |4,6-Dideoxy-4- [JJl S-O,4,6/5)-4,5,6-trihydroxy-3-hydroxymethyl-2cyclohexen-1-yl] -amino] - a -D-glucopyranosyl} -(I Pfeil nach rechts 4)-0- a D-glucopyranosyl-(l Pfeil nach rechts 4)-D-glucopyranose aus Kulturbrühen |
| CH648326A5 (en) * | 1981-11-03 | 1985-03-15 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Maltotriose derivatives, processes for their preparation |
| US4595678A (en) * | 1982-03-19 | 1986-06-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | N-substituted pseudo-aminosugars and pharmaceutical compositions containing same |
| JPS58172400A (ja) * | 1982-04-05 | 1983-10-11 | Tokyo Tanabe Co Ltd | 新規なアミノオリゴ糖誘導体 |
| EP0173950A3 (de) * | 1984-09-04 | 1987-10-28 | Hoechst Aktiengesellschaft | Neuer alpha-Glukosidase Inhibitor, Verfahren zur seiner Herstellung, seine Verwendung und pharmazeutische Präparate |
| EP0173948A3 (de) * | 1984-09-04 | 1987-11-04 | Hoechst Aktiengesellschaft | Neue Pseudooligosaccharide mit alpha-Glukosidase-hemmender Wirkung, Verfahren zur deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate |
-
1987
- 1987-08-08 EP EP87111510A patent/EP0257418B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-08 ES ES87111510T patent/ES2056801T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-08 DE DE8787111510T patent/DE3785895D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-08 AT AT87111510T patent/ATE89563T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-08-11 US US07/083,807 patent/US4990500A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-11 IL IL83495A patent/IL83495A0/xx unknown
- 1987-08-11 FI FI873483A patent/FI873483A/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-08-12 KR KR1019870008816A patent/KR880002536A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-08-12 JP JP62200102A patent/JPS6348302A/ja active Pending
- 1987-08-12 DK DK420187A patent/DK420187A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-08-12 PT PT85524A patent/PT85524B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-08-12 ZA ZA875954A patent/ZA875954B/xx unknown
- 1987-08-12 AU AU76801/87A patent/AU7680187A/en not_active Abandoned
- 1987-08-12 NO NO873385A patent/NO873385L/no unknown
- 1987-08-12 HU HU873640A patent/HUT44802A/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA875954B (en) | 1988-03-30 |
| EP0257418A2 (de) | 1988-03-02 |
| NO873385D0 (no) | 1987-08-12 |
| FI873483A0 (fi) | 1987-08-11 |
| DK420187A (da) | 1988-02-14 |
| EP0257418B1 (de) | 1993-05-19 |
| DK420187D0 (da) | 1987-08-12 |
| FI873483A (fi) | 1988-02-14 |
| EP0257418A3 (en) | 1989-12-20 |
| IL83495A0 (en) | 1988-01-31 |
| PT85524A (de) | 1987-09-01 |
| JPS6348302A (ja) | 1988-03-01 |
| US4990500A (en) | 1991-02-05 |
| HUT44802A (en) | 1988-04-28 |
| NO873385L (no) | 1988-02-15 |
| ATE89563T1 (de) | 1993-06-15 |
| KR880002536A (ko) | 1988-05-09 |
| DE3785895D1 (de) | 1993-06-24 |
| ES2056801T3 (es) | 1994-10-16 |
| AU7680187A (en) | 1988-02-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fox et al. | Pyrimidine nucleosides. I. A new route for the synthesis of thymine nucleosides1 | |
| PL204623B1 (pl) | Oligosacharydy, sposób ich wytwarzania, kompozycje farmaceutyczne zawierające je oraz ich zastosowanie | |
| Pozsgay | A Convergent Synthesis of a Hexadecasaccharide Fragment of the O-Polysaccharide of Shigella dysenteriae Type 1 | |
| EP0126043B1 (en) | Carbohydrate derivatives and compositions thereof for therapeutic or diagnostic use | |
| Baer et al. | Cyclizations of Dialdehydes with Nitromethane. III. 1 Preparation of 3-Amino-3-deoxy-D-mannose | |
| Vis et al. | 1, 5-Anhydro-β-D-ribofuranose and the “Monoacetone Anhydroriboses” of Levene and Stiller | |
| EP3303357B1 (en) | Vaccines against streptococcus pneumoniae serotype 5 | |
| PT85524B (pt) | Processo para a preparacao de oxirano-pseudooligossacaridos e de composicoes farmaceuticas que os contem | |
| PT91203B (pt) | Processo para a preparacao de novos derivados de antibioticos bu-3608 e de composicoes farmaceuticas que os contem | |
| Sakai et al. | Synthesis of Helicobacter pylori lipid A and its analogue using p-(trifluoromethyl) benzyl protecting group | |
| EP0262404B1 (en) | Glucosylmoranoline derivatives | |
| EP1156057B1 (en) | Malto-oligosaccharide derivatives and uses thereof | |
| FI71746B (fi) | Analogifoerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara maettade aminocyklitderivat | |
| JP4351314B2 (ja) | コレスタノール化合物及びこれを含有する医薬 | |
| Asselineau et al. | Chemical structure and biochemical activity of cord factor analogs: II. Relationships between activity and stereochemistry of the sugar moiety | |
| US4526784A (en) | Amino-cyclitol derivatives and medicaments containing them | |
| Pozsgay et al. | Convergent synthesis of an octasaccharide fragment of the O-specific polysaccharide of Shigella dysenteriae type 1 | |
| JPH075622B2 (ja) | 合成ｎ―連結複合糖質の製造方法 | |
| KR100204002B1 (ko) | 20(S)-진세노사이드 Rg₂의 제조방법 | |
| GB2181729A (en) | Glucosylmoranoline derivatives | |
| HU208834B (en) | Process for producing dilysoganglioside derivatives and pharmaceutical compositions comprising such active ingredient | |
| Derevitskaya et al. | 2-Acetamido-3, 6-anhydro-2-deoxy-D-hexoses: products of the alkaline degradation of 2-acetamido-2-deoxy-D-hexoses | |
| STEARNS et al. | 3, 6-Di-O-methyl-D-galactosamine Hydrochloride (2-Amino-2-deoxy-3, 6-di-O-methyl-D-galactose Hydrochloride) | |
| FR2970969A1 (fr) | Oligosaccharides 3-o-alkyles activateurs des recepteurs des fgfs, leur preparation et leur application en therapeutique | |
| Keller et al. | A Simplified Synthesis of 1-β-D-Arabinofuranosyl-5-fluorouracil1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM3A | Annulment or lapse |
Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES Effective date: 19920630 |