PT791006E

PT791006E - Benzilglicosidos polianionicos como inibidores da proliferacao das celulas de musculo liso

Info

Publication number: PT791006E
Application number: PT95939897T
Authority: PT
Inventors: John Watson Ellingboe; Richard Michael Soll; Thomas Nguyen; Sarah Tobin Allen Novak
Original assignee: American Home Prod
Priority date: 1994-11-07
Filing date: 1995-11-03
Publication date: 2000-06-30
Also published as: NZ296828A; ES2141395T3; FI971935A0; IL115746A0; GR3032629T3; US5498775A; JPH10508606A; ZA959444B; IL115746A; WO1996014323A1; AU4154996A; DE69514823D1; BR9509606A; EP0791006A2; EP0791006B1; MX9703282A; KR970707139A; DE69514823T2; FI971935A; DK0791006T3

Description

DESCRIÇÃO "BENZILGLICÓSIDOS POLIANIÓNICOS COMO INIBIDORES DA PROLIFERAÇÃO DAS CÉLULAS DE MÚSCULO LISO”

Esta invenção relaciona-se com benzilglicósidos polianiónicos e sua utilização como inibidores da proliferação das células do músculo liso e como composições terapêuticas para o tratamento de doenças e condições que são caracterizadas por proliferação excessiva de músculo liso, tal como restenose.

Antecedentes da Invenção

Todas as formas de reconstrução vascular tais como a angioplastia e "bypass" venoso acarretam uma resposta à lesão que conduz por fím à proliferação das células dos músculo liso (SMC) e, subsequentemente, deposição de quantidades profusas de matriz extracelular (Cloves, A. W.; Reidy, Μ. A. J. Vasc. Surg. 1991, 13, 885). Estes acontecimentos são também processos centrais na patogénese da ateroesclerose (Raines E. W.; Ross R. Br. Heart J. 1993, 69 (Suplemento), S 30) assim como na arterioesclerose do transplante (Isik, F. F.; McDonald, T. O.; Ferguson, M.; Yamanaka, E.; Gondon Am. J. Pathol. 1992, 141, 1139). No caso de restenose consequente a angioplastia, soluções clínicamente relevantes para controlar a proliferação das SMC por intervenção farmacológica, têm até à data sido elusivas (Herrman, J. P. R.; Hermans, W. R. M.; Vos, J.; Serruys P. W. Drugs 1993, 4, 18 e 249). Qualquer perspectiva bem sucedida para inibir a proliferação das SMC não deve interferir com a reparação das células endoteliais ou com a função normal de qualquer outro tipo de células (Weissberg, P. L.; Grainger, D. J.; Shanahan, C. M.; Metcalfe, J. C. Cardio- -2-

vascular Res. 1993, 27, 1191). De facto, uma importante consideração terapêutica é promover a a reendotelização da área afectada concorrente com a inibição da proliferação de células do músculo liso (Casscells, W. Circulation 1992, 86, 722; Reidy, Μ. A.; Lidner, V. in Endotelial Cell Dysíunctions, Simionescu N. e Simionescu M., Ed. Plenum Press, NY, (1992,31).

As glicosaminoglicanos de heparina e sulfato de heparan são inibidores endógenos da proliferaçãos das SMC, assim são capazes de promover o crescimento de células endoteliais (Castellot, J. J. Jr.; Wright, T. C.; Kamovsky, M. J. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1987, 13, 489; Wright, T. N. Arteriosclerosis 1989, 9, 1). Contudo, o máximo de benefícios clínicos da heparina, fragmentos de heparina, heparina quimicamente modificada, heparinas de baixo peso molecular e outras heparinas que mimetizam os polissacarídeos aniónicos podem ser comprometidos devido a outras incompatibilidades farmacológicas (hemorragia excessiva devido aos efeitos anticoagulantes, em particular) associado com a heterogeneidade das várias preparações (Borman, S. Chemical and Engineering News, 1993, 28 de Junho, 27); Schmid, K. M.; Preisack, M.; Voelker, W.; Sujatta, M.; Karsch, V. R. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1993, 19 (Supl. 1), 155; Amann, F. W.; Neuenschwander, C.; Meyer, B.; Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1993, 19 (Supl. 1), 160; Radhakrishnamurthy, B.; Sharma, C.; Bhandaru, R. R.; Berenson, G. S.; Stanzani, L.; Mastacchi, R. Atherosclerosis, 1986, 60, 141; Maffrand, J. P.; Hervert, Μ. M.; Bemat, A.; Deffeyn, G.; Delevassee, D.; Savi, P.; Pinot, J. J.; Sampol, J. Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 1991, 17 (Supl. 2), 186). Porque os efeitos anticoagulantes de muitos destes agentes são independentes da actividade antiproliferante das SMC, seria de esperar que agentes polianiónicos que são mais homogéneos na composição e com uma estrutura molecular mais definida exibiriam um perfil mais desejável com menos efeitos colaterais associados com os acima mencionados polissacarídeos anionicos. Técnica Anterior A WO 92/18546 revela sequências específicas de heparina, obtíveis em forma pura através de síntese ou isolamento de fragmentos de heparina que exibem actividade antiproliferatória das SMC. O tetradecasulfato de beta-ciclodextrina foi descrito como inibidor de proliferação das células do músculo liso e como um eficaz inibidor da restenose (Weisz, P. B.; Hermann, H. C.; Joullie, Μ. M.; Kumor, K.; Levine, E. M.; Macarak, E. J.; Weiner, D. B. Angiogenesis: Key Principie - Science - Technology - Medicine - Steiner, R.; Weisz, P. B.; Langer, R. Eds. Birkhauser Verlag, Basel Switzerland, 1992, pág. 107; Hermann, H. C.; Okada, S. S.; Hozakowska, E.; Le Veen, R. F.; Golden, M. A.; Tomaszewski, J. E.; Weisz, P. B.; Bamathan, E. S. Arteriosclerosis and Thrombosis 1993, 13, 924; Reilly, C. F.; Fujita, T.; McFall, R. C.;Stabilito, I. I.; Wai-si, E.; Johnson, R. G. Drug Development Research 1993, 29, 137). A Patente dos U.S. N°. 5,019,562 revela derivados aniónicos de ciclodextrinas para o tratamento de condições patológicas associadas com crescimento não desejado de células ou tecido. A WO 93/09790 revela derivados polianiónicos de ciclodextrinas anti proliferantes possuindo pelo menos 2 resíduos aniónicos por cada resíduo de carbohidrato. A EP 312087 A2 e a EP 312086 A2 revelam propriedades antitrombóticas e anticoagulantes de amidas de ácido bis-aldónico sulfatado.

As Patentes dos U.S. N°s. 4,431,636, 4,431,637, 4,431,638 e 4,435,387 descrevem derivados glicosídicos polisulfatados, thio e oxi-arilo como moduladores do sistema complemento.

Os compostos da presente invenção diferem de todos os antecedentes porque os compostos (a) são benzilglicósidos que não possuem semelhança estrutural com heparina, ciclodextrinas sulfatadas ou dímeros de ácidos lactobiónicos sulfatados, (b) não contêm mais que três resíduos de açúcar -4- contíguos (trisacarídeos) e (c) têm uma estrutura definida.

Descrição da Invenção

Esta invenção descreve a composição e utilidade de bnzilglicósidos sulfatados de fórmula I

em que cada R1, R2, R3 e R4 são, independentemente, H, S03M ou um grupo açúcar com a estrutura:

e cada grupo oligossacarídico com a estrutura

contém de 1 a 3 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxí inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é um grupo de fórmula -(CH2)P-, em que p é um inteiro de 1 a 12; XQ-

X

2 x NN^5Ís

e X é como definido acima; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Compreenda-se que cada uma das diversas ocorrências de R1 em qualquer molécula dada de Fórmula I pode ser igual ou diferente. De igual modo, cada uma das diversas ocorrências de R2, R3 ou R4 podem ser iguais ou diferentes de outras ocorrências de R2, R3 ou R4, respectivamente. De igual modo, cada uma das diversas ocorrências de Y em qualquer molécula dada e cada uma das ocorrências de n em qualquer molécula dada podem ser iguais ou diferentes de outras ocorrências de Y ou n, respectivamente.

Compreenda-se também que os grupos alquilo inferiores podem possuir cadeias lineares ou ramificadas e podem ser, por exemplo, grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo ou butilo. De igual modo, os grupos alcoxi inferiores podem possuir cadeias lineares ou ramificadas e podem ser, por exemplo, grupos metoxi, propoxi, isopropoxi ou butoxi.

Um aspecto mais preferido ou realização desta invenção são os compostos de fórmula I:

X

n o X j-N_Y_z_Y_

OR2 n

I em que cada R1, R2, R3 e R4 são, independentemente, H, SO3M ou:

OR2 e cada grupo oligossacarídico com a estrutura

-7- contém 1 ou 2 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é um alquilo com 1 a 12 átomos de carbono,

Η H

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Os compostos mais preferidos desta invenção são:

Sal tetradecassódico da bis{[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-fenil]amida} do ácido dodecanodióico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico da N,N'-bis[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenilj-tereftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; -8-

Sal tetradecassódico do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico bis{[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]amida} ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico de N,N'-bis[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]-isoftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fe-niljamida} do ácido decanodióico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil) fe-nil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-lactosiloximetil)fenil]-amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da bis{[3,5-(bis-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloximetil)fe-nil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal hexadecassódico do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico bis{[3,5-bis-(tetra-0-sulfato-P-D-glucosiloximetil)fenil]amida} ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico bis{[2-cloro-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; -9-

Sal tetradecassódico do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico bis{[4-cloro-2-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da N,N'-bis [3,5 -bis-(hepta-0-sulfato- β-D-celobiosiloxime-til)-fenil]succinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octacosassódico da N,N'-bis[3,5-bis-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloxime-til)-fenil]tereftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico da bis{[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-p-D-celobiosiloximetil)-fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-disulfónico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal octassódico da N,N'-bis[2-metil-5-(2,3,4,6-tetra-0-sulfato-P-D-glucopirano-siloximetil)fenil]succinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico da 3,3'-[N,N'-ureido]-bis{N-[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloximetil)fenil]}benzamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico de 3,3'-(N,N'-ureido)-bis-({N-[2-cloro-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]}benzamida) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

Sal tetradecassódico de N,N'-bis{3-[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloxi-metil)fenilcarbamoíl]fenil}isoftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Processo da Invenção

Os compostos da presente invenção são preparados de acordo com a sequência geral de reacções delineada no Esquema abaixo:

OR2

Assim, um brometo de glicosilo 1 é acoplado com um álcool benzílico 2 na presença de um catalisador tal como brometo de mercúrio, cianeto de mercúrio, tri flato de prata ou perclorato de prata num solvente aprótico tal como diclorometano, éter, tolueno ou nitrometano a temperaturas variando desde -40°C até à temperatura ambiente para dar o glicósido 3. A redução do grupo - 11 - nitro de 3 pode ser efectuada com uma agente redutor tal como cloreto de estanho é efectuado num solvente aprótico polar tal como acetato de etilo, desde a temperatura ambiente até à de refluxo, ou por hidrogenação catalítica em presença de um catalisador tal como paládio sobre carbono, dá um composto anilino 4. O acoplamento de 4 com um cloreto de ácido bis ou cloreto de sulfonilo C1Y-Z-YC1 pode ser efectuado na presença de uma amina base tal como trietilamina ou diisopropiletilamina num solvente aprótico tal como diclorometano ou tetrahidrofurano. A hidrólise de quaisquer grupos acetato presentes nos açúcares com uma base tal como metóxido de sódio em metanol ou hidróxido de sódio aquoso em metanol a temperatura ambiente até à temperatura de refluxo, e a sulfatação de alguns ou todos os grupos hidroxilo livres nos açúcares pode ser completada com um reagente tal como o complexo trióxido de enxofre-trimetilamina ou o complexo trióxido de enxofre-trimetilamina ou trióxido de enxofre-piridina num solvente aprótico polar tal como dimetilforma-mida ou sulfóxido de dimetilo a temperaturas variando desde 0°C até 100°C dá os compostos alvo I.

Altemativamente, os grupos sulfato podem ser introduzidos no composto 3 (depois da hidrólise de quaisquer grupos acetato). O composto sulfatado 3 é então reduzido para dar o sulfatado 4 e ligado com C1Y-Z-YC1 para dar I. A invenção também é dirigida a composições farmacêuticas, e à sua manufactura, compreendendo benzilglicósidos sulfatados sós ou em combinação com excipientes (i.e. materiais farmaceuticamente aceitáveis sem efeito farmacológico). Tais composições são úteis para doenças e condições que são caracterizadas pela excessiva proliferação de células do músculo liso, tal como restenose, frequentemente causada por cimrgia vascular reconstrutiva e transplante, por exemplo, angioplastia de balão, enxerto vascular cirúrgico, "bypass" cirúrgico da artéria coronária e transplante cardíaco. Outros estados de doença nos quais existe uma não desejada proliferação vascular incluem hipertensão, - 12- asma e falha cardíaca congestiva. Os compostos da invenção são assim úteis para tratamento desta doenças e estados.

Os compostos desta invenção podem ser administrados sistemicamente, por exemplo por injecção intravenosa, tipicamente variando desde 0,1 até 10 mg/kg/h durante 5 a 30 dias, ou por injecção subcutânea numa dose mais baixa, por administração oral com uma dose mais elevada do que a injecção intravenosa. A aplicação localizada dos compostos desta invenção também pode ser conseguida transmembranarmente, transdérmicamente ou outras vias de administração tópica utilizando dispositivos de libertação contínua apropriados, tal como matriz suportante, onde aplicável. As composições da invenção podem ser formuladas com excipientes convencionais, tais como agentes de enchimento, agentes desintegrantes, ligantes, lubrificantes, agentes aromatizantes e outros semelhantes. Estes são formulados de uma forma convencional. Entenda-se que os compostos desta invenção podem ser administrados de qualquer forma e em qualquer concentração que seja eficaz para o receptor particular. A forma de aplicação e composição e concentração da dose será determinada numa base individual pelo médico ou outro profissional médico treinado que trata o receptor.

Efeitos na proliferação celular A. Fonte das Células A capacidade dos compostos da presente invenção para inibir a proliferação de células do músculo liso e modular o crescimento das células endoteliais foi estabelecida usando células isoladas da aorta de origem comercial ou, para algumas espécies, preparadas no local. As linhas de células utilizadas neste estudo incluem células de músculo liso da aorta humana e de porco e células endoteliais de aorta humana. As linhas de células de aorta humana foram obtidas da Clonetics Corporation (San Diego).

As aortas de porco foram recebidas de um matadouro local. O material foi transportado em gelo. A aorta foi escrupulosamente limpa de tecido gordo e lavada com solução salina estéril tamponada com fosfato e 2% de antibiótico/antimicótico (catálogo Gibco # 600 - 5240 AG). O tecido foi então digerido em 10 - 15 mL de "Mistura de Enzimas" contendo 165 U/mL de colagenase tipo I; 15 U/mL de elastase tipo III; 2 mg/mL de BSA; e 0, 375 mg/mL de inibidor de tripsina de soja seguido de incubação a 37°C sob 5% de C02 durante 10-15 min. Após este tratamento, a superfície exterior adventícia foi fácilmente removida desprendendo-a com uma pinça. A aorta foi então cortada longitudinalmente, aberta e a camada endotelial removida por raspagem. A camada média das células foi lavada em solução de enzimas e colocada numa nova placa de 100 mm com 10 mL de solução de enzimas. A aorta foi cortada utilizando uma tesoura afiada e digerida durante 2-3 horas a 37°C em 30 mL de solução de enzimas fresca. Depois da digestão, o tecido foi homogeneizado utilizando uma pipeta de Pasteur com a ponta passada pelo fogo ou um pipetador eppendorf com uma ponta de pipetagem de 200 - 1000 mL estéril. A suspensão foi então centrifugada durante 10 mim. A 8000 rpm e o depósito ressuspenso em 4 - 6 mL de meio fresco e colocado em 4 - 6 frascos de 100 mL com cápsulas ventiladas. Deixou-se as células crescerem à confluência e separaram-se usando 0,25% de tripsina. As células foram avaliadas quanto à pureza e qualidade geral utilizando anticorpos para a actina das SMC. B. Efeitos dos compostos na proliferação das células utilizando incorporação de 3H Thimidina.

As células foram ensaiadas em passagens precoces (geralmente - 14- passagem 3-7) em condições de sub-confluência. As culturas foram cultivadas em placas de cultura de multi-cavidades de 16 mm (24 cavidades) em meio 199 suplementado com 10% de soro fetal bovino e 2% de antibiótico/antimicótico. À sub-confluência as células foram colocadas num meio definido sem soro (AIM-V; Gibco) durante 24-48 h antes do início do protocolo experimental.

Apesar de se ter verificado que os compostos eram mais eficazes com pré-incubações mais longas, em geral, as experiências foram iniciadas com a o adição do composto H timidina e soro/factor de crescimento às células sincronizadas privadas de soro e os resultados são relatados nesta invenção em conformidade. Os estímulos causados pelo factor de crescimento e soro foram optimizados para cada tipo de célula.

Os compostos foram adicionados a cada cavidade a uma diluição de 50 vezes (20 pL/cavidade) e as placas foram incubadas durante 24-36 h a 37°C com 5% de CO2. Verificou-se que nestas séries todos os compostos eram solúveis em H20 e assim os compostos testados foram inicialmente diluídos em H20 e diluídos em série nos meios. Os compostos foram rotineiramente ensaiados a 1, 10 e 100 μΜ. Como controlo, heparira da mucosa intestinal de porco, grau II (sal sódico) de Sigma (H-7005) foi rotineiramente ensaiada em todas as preparações de células a concentrações de 0,1 a 100 pg/mL.

No fim da experiência , as placas foram colocadas em gelo, lavadas três vezes com PBS gelado e incubadas em ácido tricloroacético (TCA) a 10% gelado durante 30 min. para remover as proteínas solúveis em ácido. A solução foi transferida para frascos de cintilação contendo HC1 0,4 N (500 pL/frasco para neutralizar o NaOH) e cada cavidade foi lavada duas vezes com água (500 pL) perfazendo um volume total de 2 mL/frasco. - 15-

Os dados foram obtidos, em triplicado, para ambos o controlo e amostras experimentais. Os dados de controlo (100%) foram obtidos de células máximamente estimuladas, como resultado da estimulação do factor de crescimento ou soro. Os dados experimentais foram obtidos de células máximamente estimuladas com factor de crescimento ou soro e tratadas com composto. Os dados foram expressos como percentagem de controlo a partir da qual as IC50 puderam ser determinadas. Os compostos da presente invenção são inibidores eficazes da proliferação das células do músculo liso como sumariado na Tabela I. Além disso, os compostos da presente invenção exibem actividade antiproliferatória das células do músculo liso humano (HAOSMC) no caso em que a proliferação é motivada seja por 10% de soro fetal bovino (FBS) ou factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF; PDGF-AB recombinante humano adquirido a Upstate Biotechnology Inc., Lake Placid, NY). Por exemplo, o composto sulfatado do exemplo 18 inibe a proliferação do HAOSMC induzida por FBS (IC50 200 nM) assim como por 5 ng/mL de PDGF (IC50 380 nM). C. Efeito no Crescimento de Células Endoteliais vs. Proliferação de Células do Músculo Liso. A promoção da proliferação das células endoteliais concorrente com a inibição da proliferação das células do músculo liso é uma consideração importante para inibição da resposta exagerada aos danos causados pela reconstrução vascular. Os compostos da presente invenção aumentam o crescimento das células endoteliais humanas induzido por 2 % de FBS a doses inibitórias para as células do músculo liso humano induzido por 10 % de FBS como representado pelo composto sulfatado do Exemplo 18 como mostrado na Figura 1. D.

Citotoxicidade:

Visualmente verificou-se que as células toleravam muito bem níveis elevados de todos os compostos, contudo para assegurar que não havia toxicidade, a citotoxicidade dos compostos foi examinada utilizando uma modificação comercial do ensaio MTT (brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio). Em resumo, as células foram novamente cultivadas em placas de 24 cavidades até uma confluência de 70-80% e, como antes, privadas de soro durante 24-48 horas antes do início do protocolo experimental. Para assegurar que o ensaio MTT monitorizava a toxicidade em vez da proliferação, as células foram incubadas com 250 μΜ de fármaco em meio fresco sem soro durante 24 h. a 37°C num incubador humidificado e com C02. Após consumo do composto de tratamento, adicionou-se o corante indicador MTT (brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio) durante 4 horas a 37°C. As células foram então lisadas e transferiram-se aliquotas de cada cavidade para uma placa de 96 cavidades para análise. Registou-se a absorvância no comprimento de onda de 570 nm com um comprimento de onda de referência de 630 nm usando um leitor de placas ELISA. Os resultados são apresentados como percentagem dos padrões viável sem utilização de fármaco (100% viável) e pré-solubilização (0% viável). Não se observou toxicidade até 250 μΜ com os compostos sulfatados dos Exemplos 10-25 e Exemplo 26 (Passo 5).

Actividade Anticoagulante A actividade anticoagulante dos compostos desta invenção foi avaliada num ensaio de tempo de tromboplastina parcial (APTT) utilizando plasma humano normal recolhido de 5 dadores utilizando o processo de Fenichel et. al. (Clin. Chem. 1964, 10, 69). Foi empregue um fibrómetro BBL com precessão automática do temporizador de coagulação, utilizando uma sonda de 0,3 mL Uma tromboplastina ou parcialmente activada por um ácido elágico foi utilizada nestas experiências. Este reagente é adicionado ao plasma humano citrado equilibrado a 37°C na cavidade de plástico do temporizador de coagulação. Adiciona-se cálcio a 37°C, inicia-se o temporizador de coagulação e o tempo de formação do coágulo de fíbrina (em segundos) é registado. O efeito dos compostos, adicionados aos plasma, em concentrações de 12,5 - 200 pg/mL foi determinado. Aos plasmas que não coagularam após 240 segundos foi atribuído um tempo de coagulação de 240 segundos. Um comparador de heparina não ffaccionada foi utilizado no intervalo de concentrações entre 1,25 - 10 pg/mL. Os testes de coagulação em todas as concentrações foram efectuados em triplicado. A análise de variância de um bloco designado ao acaso foi utilizado para determinar a signifícância das diferenças observadas nos tempos de coagulação. A potência é reportada em relação à heparina em que a relação > 1 indica actividade mais fraca em relação à heparina numa comparação em pg/mL.

Tabela I COMPOSTOS SULFATADOS DE EXEMPLO Antiproliferação de Células de Músculo Liso Porcino IC50 ou (% de Inibição à concentração x) Actividade Anticoagulatória (APTT) em Relação à Heparina EXEMPLO 26, PASSO 5 118 pM nt EXEMPLO 25 (8% de inibição a 50 pg/mL) nt EXEMPLO 10 161 pM nt - 18-

Continuação da Tabela I COMPOSTOS SULFATADOS DE EXEMPLO Antiproliferação de Células de Músculo Liso Porcino IC50 ou (% de Inibição à concentração x) Actividade Anticoagulatória (ΑΡΤΤ) em Relação à Heparina EXEMPLO 24 58 μΜ nt EXEMPLO 11 117 μΜ nt EXEMPLO 12 72 μΜ nt EXEMPLO 13 40,5 - 80 μΜ nt EXEMPLO 14 3 μΜ 6,7 EXEMPLO 15 4,7 μΜ 2,0 - 2,3 EXEMPLO 20 45 μΜ nt EXEMPLO 21 43 μΜ nt EXEMPLO 22 5,2 - 22 μΜ 2,0 EXEMPLO 16 3,6 μΜ 2,2

Continuação da Tabela I COMPOSTOS SULFATADOS DE EXEMPLO Antiproliferação de Células de Músculo Liso Porcino IC50 ou (% de Inibição à concentração x) Actividade Anticoagulatória (APTT) em Relação à Heparina EXEMPLO 17 23 - 50,8 μΜ actividade insignificante a 50 pg/mL EXEMPLO 18 0,85 μΜ 2,1 EXEMPLO 19 (10 - 50% de inibição a 20 μΜ) nt EXEMPLO 23 9,5 - 40 μΜ 2,0 heparina (H-7005) (45 - 83% de inibição a 50 μg/mL) 1 nt = não testado

Procedimentos específicos são descritos nos exemplos que se seguem. Esses exemplos são fornecidos para ilustrar a invenção e não devem ser interpretados como limitantes da invenção apresentada nas reivindicações anexas. Os termos "Sephadex G-10", "Dowex", "Amberlite IR-20", "Sephadex LH-20-100" e "Sephadex SP-C25" tal como aqui utilizados são Marcas Registadas. -20- EXEMPLO 1

Passo 1 5-(hepta-Q-acetil-B-D-maltosiIoximetil)-2-metil-l-nitrobenzeno A 4,0 g (24 mmol) de álcool 4-metil-3-nitrobenzílico e 20,0 g (29 mmol) de acetobromo-a-maltose em 60 mL de CH3N02 adicionaram-se 6,15 g (24 mmol) de Hg(CN)2 e 6,91 g (19 mmol) de HgBr2. Depois de agitada à temperatura ambiente durante a noite, a reacção foi parada com NaCl sat. e agitada durante 20 min. A mistura reaccional foi extraída em CH2C12. A fase orgânica foi lavada com NaCl sat., seca (MgS04) e cromatografada por cromatografia "flash" (1:2 e 1:1 EtOAc/éter de petróleo). Recromatografada utilizando éter/ éter de petroleo (3:1, depois 4:1, depois 100:0) deu 7,97 g do composto em epígrafe como um sólido incolor: 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,92 (s, 1 H), 7,41 (d, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 5,42 (d, 1 H), 5,36 (t, 1 H), 5,25 (t, 1 H), 5,06 (t,l H), 4,8-5,0 (m, 3 H), 4,65 (d, 1 H), 4,62 (d, 1 H), 4,54 (dd, 1 H), 4,2-4,3 (m, 2 H), 3,9-4,1 (m, 3 H), 3,65-3,71 (m, 1 H), 2,60 (s, 3 H), 2,16 (s, 3 H), 2,11 (s, 3 H), 2,04 (s, 3 H), 2,03 (s, 6 H), 2,01 (s, 3 H) e 2,00 ppm (s, 3 H).

Passo 2 5-(hepta-Q-acetil-B-D-maltosiloximetill-2-metilfenilamina

Procedimento A: Uma mistura de 4,0 g (5,09 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-maltosiloximetil)-2-metil-l-nitrobenzeno preparado no Exemplo 1 e 8,00 g (35 mmol) de SnCl2.H20 em 100 mL de EtOAc foi aquecido em refluxo durante 2 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e parada com NaHC03 sat. Após agitação durante 15 min., a mistura foi diluída -21- com CH2C12 (200 mL) e filtrada através de "solka floc" (CH2C12). A fase orgânica foi seca (MgS04) e concentrada. A cromatografia "flash" (EtOAc/CH2Cl2, 1:5, depois 1:4, depois 1:2, depois 1:1) deu 3,42 g (89% de rendimento) do composto em epígrafe como uma espuma incolor: ]H-RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,01 (d, 1 H), 6,63 (s, 1 H), 6,62 (d, 1 H), 5,41 (d, 1 H), 5,39 (t, 1 H), 5,20 (t, 1 H), 5,05 (t, 1 H), 4,82-4,90 (m, 2 H), 4,75 (d, 1 H), 4,54 (d, 1 H), 4,51 (d, 1 H), 4,26 (dd, 2 H), 3,95-4,01 (m, 3 H), 3,63-3,67 (m, 1 H), 2,17 (s, 6 H), 2,11 (s, 3 H), 2,03 (s, 6 H), 2,00 (s, 3 H) e 1,99 ppm (s, 6 H).

Procedimento B: Uma solução de 31,1 g (39,6 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-maltosiloximetil)-2-metil-1 -nitrobenzeno preparado no passo 1 do Exemplo 1 foi hidrogenado a 50 psi sobre 10% Pd/C (10,0 g) durante 1 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado para dar uma espuma branca. A trituração com água deu 28,0 g (94%) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 154-156°C. EXEMPLO 2

Passo 1 5-(Hepta-Q-acetil-B-D-celobiosiloximetin-2-metil-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado com um rendimento de 47% pelo procedimento do passo 1 do Exemplo 1 usando álcool 4-metil-3-nitrobenzíli-co e acetobromocelobiose. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (EtOAc/éter de petróleo, 1:2 para 1:1 para 2:1): 'H-RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,91 (s, 1 H), 7,40 (d, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 4,80-5,20 (m, 6 H), 4,40-4,80 (m, 4 H), 4,36 (dd, 1 H), 4,02-4,13 (m, 2 H), 3,81 (t, 1 H), 3,60-3,68 (m, 2 H), 2,60 (s, 3 H), 2,14 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 2,06 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H), 2,01 (s, 3 H) e 1,98 ppm (s, 3 H). -22-

Passo 2 5-fHepta-Q-acetil-B-D-celobiosiloximetiO-2-metilfenilamina O composto em epígrafe., p.f. 180-182°C, foi preparado com 62% de rendimento a partir de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-metil-l-nitrobenzeno usando o Procedimento A do passo 2 do Exemplo 1. A purificação foi conseguida por cromatografía "flash" (EtOAc/éter de petróleo, 1:1 para 2:1): 'H-RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 6,86 (d, 1 H), 6, 48 (d, 1 H), 6,36 (dd, 1 H), 5,24 (t, 1 H), 5,10 (m, 1 H), 4,80-4,90 (m, 3 H), 4,61-4,72 (m, 2 H), 4,56 (d, 1 H), 4,30-4,31 (m, 2 H), 4,22 (dd, 1 H), 4,08 (dd, 1 H), 3,99-4,03 (m, 1 H), 3,94 (dd, 1 H), 3,73-3,81 (m, 2 H), 2,10 (s, 3 H), 2,10 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H), 1,98 (s, 3 H), 1,96 (s, 3 H), 1,95 (s, 3 H), 1,94 (s, 3 H) e 1,91 ppm (s, 1 H); espectro de massa (+FAB) m/z 778. Anál. Cale. para C34H46NO,8: C, 53,97; H, 6,13; N, 1,85. Encontrada: C, 53,67; H, 5,92; N, 1,62. EXEMPLO 3

Passo 1 5-(Hepta-0-acetil-B-D-celobiosiloximetiO-2-cloro-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado com um rendimento de 45% pelo Procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 usando álcool 4-cloro-3-nitrobenzílico e acetobromocelobiose: 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,82 (d, 1 H), 7,53 (d, 1 H), 7,42 (dd, 1 H), 4,80-5,20 (m, 5 H), 4,73 (d, 1 H), 4,51-4,66 (m, 4 H), 4,30-4,40 (m, 1 H), 4,03-4,11 (m, 2 H), 3,81 (t, 1 H), 3,60-3,68 (m, 2 H), 2,13 (s, 3 H), 2,09 (s, 3 H), 2,06 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 2,01 (s, 3 H), 2,01 (s, 3 H), 1,99 (s, 3 H) e 1,57 ppm (s, 3 H). -23-

Passo 2 5-(Hepta-0-acetil-B-D-celobiosiloximetil)-2-clorofenilamina O compostos em epígrafe foi preparado a partir de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-cloro-l-nitrobenzeno com 61% de rendimento como um sólido por trituração com éter utilizando o Procedimento A do passo 1 do Exemplo 1: 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,20 (d, 1 H), 6,75 (s, 1 H), 6,60 (d, 1 H), 4,89-5,19 (m, 5 H), 4,73 (d, 1 H), 4,47-4,60 (m, 4 H), 4,36 (dd, 1 H), 4,02-4,13 (m, 2 H), 3,80 (t, 1 H), 3,55-3,67 (m, 2 H), 2,14 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 2,02 (s, 6 H), 2,01 (s, 3 H) e 2,00 ppm (s, 3 H). EXEMPLO 4

Passo 1 2-(Hepta-0-acetil-B-D-celobiosiloximetil)-4-cloro-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado com 47% de rendimento pelo Procedimento do passo 1 do Exemplo 1 usando álcool 5-cloro-2-nitroben-zílico e acetobromocelobiose. Uma purificação parcial foi conseguida usando cromatografia "flash" (ClUCVEtOAc, 6:1) e o produto foi utilizado assim na reacção seguinte: 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 8,09 (d, 1 H), 7,71 (d, 1 H), 7,43 (dd, 1 H), 4,90-5,25 (m, 8 H), 4,63 (d, 1 H), 4,52 (d, 1 H), 4,49 (d, 1 H), 4,38 (dd, 1 H), 4,03-4,16 (m, 3 H), 3,79 (t, 1 H), 3,60-3,68 (m, 2 H), 2,13 (s,3 H), 2,10 (s, 6 H), 2,04 (s, 6 H), 2,01 (s, 3 H) e 1,98 ppm (s, 3 H). 2-(Hepta-0-acetil-B-D-celobiosiloximetiD-4-clorofenilamina O composto em epígrafe foi preparado com 55% de rendimento a partir de 2-(Hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-5-cloro-l-nitrobenzeno pelo Procedimento A do passo 2 do Exemplo 1. A purificação foi conseguida por trituração com éter: ’Η-RMN (CDC13j 300 MHz) δ 7,11 (dd, 1 H), 7,04 (d, 1 H), 6,65 (d, 1 H), 5,03-5,18 (m, 3 H), 4,88-4,97 (m, 2 H), 4,45-4,80 (m, 5 H), 4,36 (dd, 1 H), 4,02-4,13 (m, 2 H), 3,60-3,81 (m, 3 H), 2,16 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 2,04 (s, 3 H), 2,01 (s, 6 H), 2,00 (s, 3 H) e 1,98 ppm (s, 3 H). EXEMPLO 5

Passo 1 5-fTetra-0-acetil-B-D-glucopiranosiloximetil)-2-metil-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado com um rendimento de 54% pelo procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 usando tetraacetato de brometo de α-D-glucopiranosilo e álcool 4-metil-3-nitrobenzílico: 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,92 (d, 1 H), 7,43 (dd, 1 H), 7,33 (d, 1 H), 5,06-5,24 (m, 3 H), 4,92 (d, 1 H), 4,66 (d, 1 H), 4,59 (d, 1 H), 4,28 (dd, 1 H), 4,18 (dd, 1 H), 3,68-3,72 (m, 1 H), 2,60 (s, 3 H), 2,11 (s, 3 H), 2,07 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H) e 2,01 ppm (s, 3 H).

Passo 2 5-(Tetra-0-acetil-B-D-glucopiranosiloximetiD-2-metilfenilamina O composto em epígrafe foi preparado com 63% de rendimento -25- pelo Procedimento A do passo 2 do Exemplo 1 a partir de 5-(tetra-0-acetil-P-D-glucopiranosiloximetil)-2-metil-l-nitrobenzeno e purificado por trituração da mistura reaccional crúa com éter: *H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 7,02 (d, 1 H), 6,64 (s, 1 H), 6,63 (d, 1 H), 5,02-5,17 (m, 3 H), 4,79 (d, 1 H), 4,50-4,55 (m, 2 H), 4,29 (dd, 1 H), 4,17 (dd, 1 H), 3,64-3,68 (m, 1 H), 2,18 (s, 3 H), 2,11 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H), 2,01 (s, 3 H) e 2,00 ppm (s, 3 H). EXEMPLO 6

Passo 1 3,5-Bis(hepta-0-acetil-B-D-celobiosiIoximetiD-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado com um rendimento de 42% pelo procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 usando um equivalente de 5-nitro-m-xileno-a,a'-diol, dois equivalentes de acetobromocelulose e dois equivalentes de todos os outros reagentes. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (EtOAC/CH2Cl2, 3:1) e trituração com éter: 'H-RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 8,10 (s, 2 H), 7,48 (s, 1 H), 4,88-5,30 (m 12 H), 4,68 (d, 2 H), 4,52-4,59 (m, 6 H), 4,38 (dd, 2 H), 4,00-4,13 (m, 4 H), 3,82 (t, 2 H), 3,58-3,68 (m, 4 H), 2,13 (s, 6 H), 2,08 (s, 6 H), 2,07 (s, 6 H), 2,03 (s, 12 H), 2,01 (s, 6 H) e 1,98 ppm (s, 6 H).

Passo 2 3,5-Bis(hepta-0-acetil-B-D-celobiosiloximetil)fenilamina O composto em epígrafe foi preparado com um rendimento de 54% pelo Procedimento A do passo 2 do Exemplo 1 usando 3,5-bis(hepta-0-acetil-p-D-celobiosiloximetil)-l-nitrobenzeno. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (EtOAc/éter de petróleo, 1:1): 'H-RMN (CDC13, 300 MHz) δ 6,73 (s largo, 2 H), 6,67 (s largo, 1 H), 5,03-5,30 (m, 6 H), 4,97 (d, 2 H), 4,91 (d, 2 H), 4,75 (d, 2 H), 4,49-4,61 (m, 6 H), 4,37 (dd, 2 H), 4,02-4,13 (m, 6 H), 3,81 (t, 2 H), 3,57-3,69 (m, 4 H), 2,15 (s, 6 H), 2,08 (s, 6 H), 2,03 (s, 6 H), 2,01 (s, 18 H) e 1,98 ppm (s, 6 H). EXEMPLO 7

Passo 1 3,5-Bis(hepta-0-acetil-B-D-!actosiloximetiD-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado pelo procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 usando usando um equivalente de 5-nitro-m-xileno-α,α'-diol, dois equivalentes de acetobromolactose e dois equivalentes de todos os outros reagentes. A purificação foi conseguida inicialmente por cromatografia "flash" (EtOAC/CH2Cl2, (3:1)) e depois recromatografia primeiro com tolueno/EtOAc (1:1) e depois com EtOAc/CH2Cl2 (1:4 para 1:2) para dar o produto parcialmente purificado que foi usado directamente na reacção seguinte

Passo 2 3.5-Bis(hepta-0-acetil-B-D-lactosiloximetiDfenilamina O composto em epígrafe foi preparado pelo procedimento A do passo 2 do Exemplo 1 usando 3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-l-nitrobenzeno. A purificação parcial foi conseguida por cromatografia "flash" (CH2Cl2/EtOAc 2:1 para 1:2)) e depois recromatografado (CH2Cl2/EtOAc 3:1 para 1:1)) para dar o composto em epígrafe. -27- EXEMPLO 8

Passo 1 3,5-Bis(tetra-0-acetil-B-D-glucosiloximetilM-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado pelo procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 usando um equivalente de 5-nitro-m-xileno-a,a'-diol, dois equivalentes de acetobroglucose e dois equivalentes de todos os outros reagentes. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (EtOAc/CH2Cl2, (1:4 para 1:2)) para dar 29% de rendimento do composto em epígrafe quase puro que foi utilizado sem purificação adicional.

Passo 2 3.5-Bis(tetra-0-acetil-B-D-glucosiloximetil)fenilamina O composto em epígrafe foi praparado pelo procedimento A do passo 2 do Exemplo 1 usando 6,27 g de 3,5-Bis(tetra-0-acetil-B-D-glucosi1oxi-metil)-l-nitrobenzeno. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (CH2Cl2/EtOAc (3:2)) para dar 2,00 g (39% de rendimento) do composto em epígrafe como um óleo amarelo: ’Η-ΙΙΜΝ parcial (CDCI3, 300 MHz) δ 6,56 (s, 3 H), 5,0-5,2 (m, 6 H), 4,8 (d, 2 H), 4,4-4,6 (m, 4 H), 3,7 ppm (d largo , 2 H).

Exemplo 9 Passo 1 3.5-Bis(hepta-Q-acetil-B-D-maltosiloximetilt-l-nitrobenzeno O composto em epígrafe foi preparado pelo procedimento descrito no passo 1 do Exemplo 1 utilizando 2,57 g (14,02 mmol; 1 equivalente) de 5-nitro-m-xileno-a,a'-diol, dois equivalentes de acetobromomaltose e dois equivalentes de todos os outros reagentes, todos em CH3NO2 (200 mL). A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (EtOAc/CH2Cl2, (1:2 para 1:1). A recromatografia (Et20) deu 11,4 g (57% de rendimento) do composto em epígrafe que foi utilizado na reacção seguinte: *H-RMN parcial (CDC13, 300 MHz) Ô 8,11 (s, 2 H), 7,49 (s, 1H), 5,42 (d 2 H), 5,36 (t, 2 H), 5,26 (t, 2 H), 5,06 (t, 2 H), 4,21-4,29 (m, 4 H) e 3,69-3,72 ppm (m, 2 H).

Passo 2 3.5-Bis(hepta-0-acetil-B-D-maltosiloximetillfenilamina O composto em epígrafe foi preparado pelo procedimento A do passo 2 do Exemplo 1 usando 3,5-bis(hepta-0-acetil-β-D-maltosiloximetil)-1 -nitrobenzeno. A purificação foi conseguida por cromatografia "flash" (CH2Cl2/EtOAc, (1:1)) para dar 4,43 g (40% de rendimento) do composto em epígrafe: 'H-RMN parcial (CDC13, 300 MHz) δ 6,57 (s, 3 H), 5,41 (d, 2 H), 5,36 (t, 2 H), 5,23 (t, 2 H), 5,50 (t, 2 H), 4,75 (d, 2 H), 4,26 (m, 4 H) e 3,65-3,69 ppm (m, 2 H). EXEMPLO 10

Passo 1

Bisf r5-(B-D-celobiosiloximetiD-2-metilfeninamida} do ácido dodecanodióico

A uma solução de 5-(Hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenilamina (1,03 g, 1,36 mmol) e trietilamina (189 μι, 1,36 mmol) em THF

I -29- (15 mL) adicionou-se dicloreto de dodecanodioílo (170 pL, 0,681 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2CI2 e depois lavada com água. A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada para dar 1,157 g de um sólido incolor. Este produto foi dissolvido em MeOH (25 mL) e foi tratado com 11,9 mL (11,9 mmol) de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 5 h, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e tratada com 9,5 mL (9,5 mmol) de HC1 1 N. A recolha do sólido incolor deu o composto em epígrafe (566 mg, 75% de rendimento), p.f. > 200°C: *H-RMN parcial (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,25 (s, 2 H), 7,32 (s, 2 H), 7,16 (d, 2 H), 7,10 (d, 1 H), 4,77 (d, 2 H), 4,50 (d, 2 H), 4,24-4,30 (dois dubletos, 2 H), 3,78 (d, 2 H), 3,69 (d, 2 H), 3,63 (d largo, 2 H), 2,99 (t, 2 H), 2,30 (t, 4 H), 1,58 (t largo, 4 H) e 1,29 ppm (s largo, 12 H); 13C RMN (DMSO-d6, 100 MHz) δ 171,1, 136,2, 135,5, 131,1, 130,0, 124,8, 103,2, 101,7, 80,6, 76,8, 76,4, 75,0, 74,9, 73,3, 73,1, 70,0, 69,5, 61,0, 60,4, 35,7, 28,9, 28,8, 28,7, 25,3 e 17,6 ppm; espectro de massa (-FAB) m/z 1115 (M-H); IV (KBr) 3430 e 1660 cm'1. Anál. Cale. para C52H8oN2024*4 H20: C, 52,51; H, 7,46; N, 2,36. Encontrada: C, 52,53; H, 7,28; N, 2,27.

Passo 2

Sal tetradecassódico da bisf r2-metil-5-(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetil) fenillamida do ácido dodecanodióicol

Uma solução da bis{[5-(P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]ami-da} do ácido dodecanóico (391 mg, 0,350 mmol) e de complexo trióxido de enxofre trietilamina (3,66 g, 26,3 mmol) em DMF (40 mL) foi aquecida a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e passada através de uma coluna Sephadex G-10 (duas vezes). A troca de catiões foi efectuada utilizando uma coluna Dowex 50 x 8 fortemente acídica (forma Na) para dar 433 -30- mg do composto em epígrafe: lH-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2 H), 7,36 (d, 2 H), 7,29 (s, 2 H), 4,94 (d, 2 H), 4,80-4,90 (m, 4 H), 4,59 (dd, 2 H), 2,49 (t, 4 H), 2,23 (s, 3 H), 2,30-2,40 (m, 4 H) e 1,30-1,50 ppm (m, 12 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 176,8, 135,2, 134,9, 134,4, 130,9, 127,8, 127,1, 100,0, 99,1, 77,7, 77,4, 77,1, 74,4, 73,7, 73,5, 73,1, 70,7, 67,7, 66,6, 35,8, 28,5, 28,3, 25,5 e 16,9 ppm; espectro de massa ("electrospray" negativo) (m-zNa)z 825,6 (M-3Na)3' , 613,5 (M-4Na)4'e 486,2 (M-5Na)5'. Anál. Cale. para C52H66N2066Si4Na14.14 H20: C, 18,83; H, 2,70; N, 0,80; S, 17,40. Encontrada: C, 17,96; H, 2,57; N, 0,72; S, 17,11. EXEMPLO 11

Passo 1 N.N’-bisr5-(B-celobiosiloximetiO-2-metilfenilltereftalamida A 813 mg (1,08 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloxime-til)-2-metilfenilamina em THF (20 mL) contendo trietilamina (148 pL, 1,08 mmol) adicionou-se cloreto de tereftaloílo (109 mg, 0,538 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h., a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com água. A secagem (MgS04) e a concentração deram o produto crú, que foi diluído com MeOH (25 mL) e tratado com 8,7 mL (8,7 mmol) de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 3 h., a suspensão foi filtrada para dar 512 mg (89%) de rendimento do composto em epígrafe como um sólido incolor, p.f. > 210°C: 'H-RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,07 (s, 2 H), 8,10 (s, 4 H), 7,35 (s, 2 H), 7,26 (d, 2 H), 7,22 (d, 2 H), 5,22-5,24 (m, 4 H), 5,01 (d, 2 H), 4,99 (d, 2 H), 4,82 (d, 2 H), 4,68 (d, 2 H), 4,54-4,64 (m, 6 H), 4,32 (d, 2 H), 4,25 (d, 2 H), 3,75-3,80 (d, 2 H), 3,63-3,77 (m, 4 H), 3,37-3,41 (m, 2 H), -31 - 2,97-3,19 (m, 10 H) e 2,23 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 164,6, 137,0, 136,0, 135,9, 133,0, 130,1, 127,7, 126,0, 125,6, 103,2, 101,S, 80,6, 76,8, 76,4, 75,1, 74,9, 73,3, 73,2, 70,0, 69,3, 61,0, 60,4 e 17,7 ppm; espectro de massa m/z 1052, 889 e 725. Anál. Cale. para C48H64N2024: C, 54,75; H, 6,13; N, 2,66. Encontrada: C, 55,54; H, 6,33; N, 2,57.

Passo 2

Sal tetradecassódico da NoN^bisíS-diepta-O-sulfato-B-D-celobiosiloxiiiietiD- 2-metiÍfenilltereftalamida

Uma mistura de N,N'-bis[5-(P-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]te-reftalamida (321 mg, 0,305 mmol) e de complexo trióxido de enxofre trime-tilamina (3,06 g, 22,0 mmol) em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 4 dias. A mistura reaccional foi concentrada e passada por uma coluna Sephadex G-10. A análise por 'H-RMN mostrou sulfatação incompleta. O produto foi re-subme-tido a sulfatação com 3,06 g (22,0 mmol) de complexo trióxido de enxofre trimetilamina em 25 mL de DMF a 70°C durante 5 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, concentrada in vacuo e passada por uma coluna Sephadex G-10. A troca de catiões utilizando uma coluna Dowex (50 x 8; fortemente acídica; forma Na) forneceu 469 mg (62% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. 178°C (dec.): ]H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 8,11 (s, 4 H), 7,40-7,50 (m, 6 H), 4,98 (d, 2 H), 4,95 (d, 2 H) e 2,32 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,5, 136,9, 135,4, 135,2, 134,3, 131,0, 128,1, 128,0, 127,0, 100,0, 99,1, 77,7, 77,4, 77,3, 77,1, 74,4, 73,7, 73,4, 73,1, 70,7, 67,7, 66,7 e 16,8 ppm. Anál. Cale. para C4gH5oN2066Si4Nai4.10 H20: C, 20,58; H, 2,51; N, 1,00; S, 17,17. Encontrada: C, 20,21; H, 2,84; N, 0,96; S, 17,34. -32- EXEMPLO 12

Passo 1

Bis(r5-(P-D-celobiosiloximetin-2-metilfenil1amida> do ácido bifeniM.^-dicarboxíIico A uma solução de 887 mg (1,18 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenilamina e 162 pL (1,18 mmol) de trietilamina em THF (20 mL) adicionou-se 164 mg (0,588 mmol) de cloreto do ácido bifenil-4,4'-carboxílico. Após agitação à temperatura ambiente durante 4 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2CI2 e lavada com água. A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada até um sólido incolor (1,01 g). Uma solução do material crú (985 mg, 0,574 mmol) em MeOH (25 mL) contendo 9,18 mL (9,18 mmol) de NaOH 1 N foi agitada durante 3 h a 50°C. A mistura reaccional foi arrefecida, e o composto em epígrafe foi recolhido como um pó branco (444 mg, 69% de rendimento): ’Η-RMN parcial (DMSO-d6, 300 MHz) δ 10,01 (s, 2 H), 8,13 (d, 4 H), 7,94 (d, 4 H), 7,37 (s, 2 H), 7,28 (d, 2 H), 7,23 (d, 2 H), 5,24 (d, 2 H), 5,00 (q, 2 H), 4,84 (d, 2 H), 4,56-4,69 (m, 4 H), 4,33 (d, 2 H), 4,27 (d, 2 H) e 2,25 ppm (s, 3 H).

Passo 2

Sal tetradecassódico da bisf í5-(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetin-2-metilfenillamidal do ácido bifenil-4,4'-dicarboxíIico

Uma solução de 437 mg (0,387 mmol) da bis{[5-(P-D-celobiosilo-ximetil)-2-metilfenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 3,85 g (27,7 mmol) de complexo de trióxido de enxofre trimetilamina em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 5 dias. A mistura reaccional foi parada com água e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa pequena quantidade de água e passado por um coluna Sephadex G-10. A troca de catiões foi conseguida utilizando resina fortemente acídica (forma Na) Dowex 50 x 8 para dar, após secagem azeotrópica com tolueno, 742 mg (75% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. 170°C (dec.): ^-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 8,09 (d, 4 H), 7,97 (d, 4 H), 7,40 (m, 6 H), 4,98 (d, 2 H), 4,94 (d, 2 H), 4,63-4,68 (m, 4 H), 4,56 (dd, 2 H), 4,41 (dd, 2 H), 4,30-4,37 (m, 6 H), 4,17-4,23 (m, 4 H), 3,99-4,05 (m, 4 H) e 2,31 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,7, 143,2, 135,3, 135,2, 134,4, 132,8, 130,9, 128,1, 128,0, 127,4, 127,0, 99,9, 98,9, 77,6, 77,3, 77,2, 77,0, 74,2, 73,6, 73,3, 73,0, 70,6, 67,6, 66,6 e 16,7 ppm. Anál. Cale. para C59H54N2066Si4Na14.14 H20: C, 21,97; H, 2,80; N, 0,95; S, 16,29. Encontrada: C, 21,77; H, 2,90; N, 0,95; S, 13,66. EXEMPLO 13

Passo 1 N.N *-bis Γ5-( B-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenillisoftalamida A uma solução de 887 mg (1,18 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenilamina em THF (20 mL) contendo trietilamina (162 pL, 1,18 mmol) adicionou-se dicloreto de isoftaloílo (119 mg, 0,587 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com água. A fase orgânica foi seca (MgS04) e concentrada para dar 1,00 g de um sólido incolor. Uma solução do produto crú em MeOH (25 mL) contendo 9,76 mL (9,76 mmol) de NaOH 1 N foi agitada a 50°C durante 3 h. O sólido resultante foi recolhido e seco azeotrópicamente sobre tolueno para dar 355 mg (55% de rendimento) do -34- composto em epígrafe como um pó incolor, p.f. 200-203°C: ’Η-RMN (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,09 (s, 2 H), 8,54 (s, 1 H), 8,15 (d, 2 H), 7,68 (t, 1 H), 7,34 (s, 2 H), 7,26 (d, 2 H), 7,21 (d, 2 H), 5,24 (t, 4 H), 5,01 (dd, 2 H), 4,82 (d, 2 H), 4,69 (s, 2 H), 4,54-4,69 (m, 4 H), 4,32 (d, 2 H), 4,25 (d, 2 H), 3,76-3,80 (m, 2 H), 3,63-3,69 (m, 4 H) e 2,24 ppm (s, 6 H); 13C RMN (DMSO-d*, 100 MHz) δ 164,9, 136,1, 135,9, 134,8,133,0, 130,5, 130,1, 128,6, 127,1, 125,9, 125,6, 103,2, 101,8, 80,6, 76,8, 76,4, 75,1, 74,9, 73,3, 73,2, 70,0, 69,4, 61,0, 60,4 e 17,7 ppm; espectro de massa (-FAB) m/z 1051, 727 e 889. Anál. Cale. para C48H64N2O243 H20: C, 52,08; H, 6,37; N, 2,53. Encontrada: C, 51,89; H, 6,31; N, 2,26.

Passo 2

Sal tetradecassódico da N.N^bisrS-fhepta-O-suifato-S-D-celobiosiloximetill- 2-metilfenillisoftalamida

Uma solução de N,N'-bis[5-(P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]-isoftalamida (180 mg, 0,171 mmol) e 1,79 g (11,98 mmol) de complexo de trióxido de enxofre trimetilamina em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 4 dias. A mistura reaccional foi concentrada e depois purificada utilizando uma coluna Sephadex G-10 eluíndo com água. A troca de catiões foi efectuada com uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) eluíndo com água. A remoção da água in vacuo e a secagem azeotrópica com tolueno deram 358 mg (84% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido incolor, p.f. 171°C (dec.): ’H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 8,43 (s, 2 H), 8,21 (dd, 2 H), 7,78 (t, 1 H), 7,40-7,50 (m, 6 H), 4,97 (d, 2 H), 4,94 (d, 2 H), 4,56 (dd, 2 H) e 2,30 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,2, 135,3, 135,1, 134,3, 134,0, 131,0, 130,9, 129,3, 128,0, 126,9, 126,5, 99,9, 99,0, 135,5, 77,3, 77,2, 77,0, 74,3, 73,6, 73,3, 73,0, 70,6, 67,6, 66,6 e 16,7 ppm. Anál. Cale. para -35- C48H5oN2066Si4Na1414 H20Na2S04: C, 19,12; H, 2,61; N, 0,93; S, 17,01. Encontrada: C, 18,97; H, 2,45; N, 0,94; S, 15,68. EXEMPLO 14

Passo 1

Bis(r3,5-bis(B-D-celobiosiloximetiDfenil1amida) do ácido decanodióico A uma solução de 3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-fenilamina (817 mg, 0,588 mmol) e trietilamina (82 pL, 0,59 mmol) em THF (25 mL) adicionou-se 74 μι (0,295 mmol) de dicloreto de dodecanodioílo. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 90 min., parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com água. A fase orgânica foi seca (MgS04) e concentrada até um sólido incolor (834 mg, 95% de rendimento). O produto crú foi dissolvido em MeOH (25 mL) e foi tratado com 8,4 mL (8,4 mmol) de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 2 h, a mistura reaccional foi parada à temperatura ambiente com 7,84 mL de HC1 1 N, concentrada e purificada por cromatografia em coluna de fase reversa (sílica RP 60) utilizando MeOH/H20 (1:1) para eluir. A recromatografia utilizando MeOH/H20 (2:3) deu 438 mg (87% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido incolor: 'H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,45 (s, 4 H), 7,26 (s, 2 H), 4,64 (d, 4 H), 4,47 (t, 8 H), 3,80 (dd, 4 H), 3,71 (dd, 4 H), 2,30 (t largo, 4 H), 1,55 (t, 4 H) e 1,17 ppm (m largo, 12 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 175,1, 138,1, 137,7, 124,4, 120,3, 102,5, 101,3, 78,7, 75,9, 75,5, 74,7, 74,3, 73,1, 72,8, 70,8, 69,4, 60,5, 60,0, 36,6, 28,7, 28,6, 28,5 e 25,3 ppm. Anál. Cale. para C76Hi20H2O46 10 H20: C, 46,15; H, 7,13; N, 1,42. Encontrada: C, 45,91; H, 6,82; N, 1,41. -36- ^ggfBSSSSS^

Passo 2

Sal octacosassódico da bis {r3<5-bis(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetil) fendiam ida) do ácido decanodióico

Uma solução da bis{[3,5-bis(B-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} do ácido decanodióico (177 mg, 98,4 mmol) e de complexo trióxido de enxofre trimetilamina (1,97 g, 14,2 mmol) em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 25 h. A mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia com Sephadex G-10 utilizando água para eluir. A troca de catiões utilizando uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) forneceu 292 mg (64% de rendimento) depois de secagem azeotrópica com tolueno: 'H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,55 (s, 4 H), 7,35 (s, 2 H), 4,96-4,98 (m, 8 H), 2,45 (t largo, 4 H), 1,40-1,60 (t largo, 4 H) e 1,36-1,41 ppm (m largo, 12 H); ,3C RMN (D20, 100 MHz) δ 176,1, 138,0, 137,1, 124,5, 121,0, 99,9, 99,6, 77,6, 77,43, 77,39, 77,0, 74,3, 73,4, 72,9, 70,9, 67,6, 66,3, 36,5, 28,7, 28,5 e 25,3 ppm. Anál. Cale. para C76H92H203o3Na2S04-28 H20: C, 16,34; H, 2,67; N, 0,50; S, 17,8. Encontrada: C, 16,25; H, 2,63; N, 0,59; S, 17,07. EXEMPLO 15

Passo 1

Bisfr3.5-bis(B-D-celobiosiloximetinfenillamida> do ácido bifeniM^-dicarboxílico A uma solução de 3,5-Bis(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloxime-til)fenilamina (817 mg, 0,588 mmol) e trietilamina (86 pL, 0,62 mmol) em THF (25 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (86 mg, 0,309 -37- mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A mistura reaccional foi seca (MgS04) e concentrada para dar 921 mg do produto crú, que foi dissolvido em MeOH (20 mL) e tratado com 9,3 mL de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 4 h, adicionou-se 8,6 mL (8,6 mmol) de HC1 1 N à mistura reaccional fria. A recolha do sólido forneceu 482 mg (86% de rendimento) do composto em epígrafe: lH-RMN parcial (DMSO-dé, 400 MHz) δ 10,40 (s, 2 H), 8,11 (d, 4 H), 7,93 (d, 4 H), 7,74 (s, 4 H), 7,18 (s, 2 H), 4,86 (d, 4 H), 4,56 (d, 4 H), 4,35 (d, 4 H), 4,27 (d, 4 H), 3,80 (d, 4 H) e 2,97-3,07 ppm (m, 4 H); I3C RMN (DMSO-d6, 100 MHz) δ 165,0, 142,0, 138,9, 138,2, 134,1, 128,5, 126,9, 122,8, 119,3, 103,2, 102,0, 80,5, 76,8, 76,5, 75,1, 75,0, 73,3, 73,2, 70,02, 69,96, 61,0 e 60,4 ppm; IV (KBr) 1650 cm'1. Anál. Cale. para C78Hio8N204610 H20: C, 47,08; H, 6,48; N, 1,41. Encontrada: C, 46,64; H, 6,22; N, 1,62.

Passo 2

Sal octacosassédico da bisir3.5-bis(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetiDfenillamidal do ácido bifeniM^-dicarboxflico

Uma solução de 338 mg (0,187 mmol) da bis{[3,5-bis(P-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 3,64 g (26,1 mmol) de complexo de trióxido de enxofre trietilamina em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 2 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com água e concentrada. A purificação foi conseguida com uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi efectuada por passagem de uma solução aquosa do produto por uma coluna Dowex 50 x 8 com resina fortemente acídica (forma Na). A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 765 mg (88% de rendimento) do composto como um sólido quase branco, p.f. 180°C (dec): 'H-RMN parcial -38- (D20, 400 MHz) δ 8,08 (d, 4 H), 7,97 (d, 4 H), 7,70 (s, 4 H), 7,39 (s, 2 H), 5,02 (d, 4 H), 4,98 (d, 4 H), 4,15-4,23 (m, 8 H) e 4,00 ppm (m, 8 H); ,3C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,2, 143,3, 138,2, 137,3, 133,5, 128,3, 127,5, 125,0, 121,8, 100,0, 99,7, 77,7, 77,54, 77,51, 77,1, 74,4, 73,5, 73,0, 71,0, 67,7 e 66,4 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 401,3 (m - 11 Na)11', 443,7 (m - lONa)10', 495,6 (m - 9 Na)9', 560,4 (m - 8 Na)8' e 643,7 (m - 7 Na)7'.

Anál. Cale. para C78H80N2Oi3oS28Na28'2Na2S04'28 H20: C, 17,17; H, 2,51; N, 0,51; S, 16,46. Encontrada: C, 17,06; H, 2,11; N, 0,55; S, 12,04. EXEMPLO 16

Passo 1

Bis(r3,5-bis(hepta-0-acetil-B-D-lactosiloxImetil)fenil1amidal do ácido bifenil-4.,4'-dicarboxflico A uma solução de 3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-lactosiloximetil)fenil-amina (1,05 g, 0,757 mmol) e trietilamina (105 pL, 0,757 mmol) em THF (20 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (106 mg, 0,378 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A mistura reaccional foi seca (MgS04), concentrada e purificada por trituração com CH2C12/Et20 para dar 984 mg (87% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido incolor, p.f.l63-167°C: ’Η-RMN (CDC13, 400 MHz) δ 8,62 (s, 2 H), 8,05 (d, 4 H), 7,74 (d, 4 H), 7,66 (s, 4 H), 6,93 (s, 2 H), 5,33 (d, 2 H), 5,17 (t, 2 H), 5,07-5,12 (m, 2 H), 4,91-4,97 (m, 4 H), 4,79 (d, 2 H), 4,62-4,66 (m, 4 H), 4,57 (d, 2 H), 4,51 (d, 2 H), 4,03-4,15 (m, 6 H), 3,80-3,88 (m, 4 H), 3,62 (dq, 2 H), 2,13 (s, 12 H), 2,10 (s, 12 H), 2,03 (s, 24 H), 2,02 (12 H) e 1,95 ppm (s, 12 H); espectro de massa ("electrospray", aduto Ca2+) m/z 1513,2 (m + Ca)2+. Anál. Cale. para C134H164N2O741 H2O; C, 53,56j H, 5,57; N, 0,93. Encontrada; C, 53,25; H, 5,55; N, 1,06.

Passo 2

Sal octacosassódico da bis I r3,5-bisfhepta-O-siilfato-B-D-lactosiloximetil)feninamida) do ácido bifeniM.^-dicarboxíIico

Uma solução de 871 mg (0,292 mmol) da bis{[3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-lactosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico em MeOH (15 mL) contendo 8,75 mL de NaOH 1 N (8,75 mmol) foi agitada a 50°C durante 3 h. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi parada com 8,16 mL (8,16 mmol) de HC1 1 N. O sólido resultante foi recolhido e seco azeotrópicamente com tolueno: 13C RMN (DMSO-de, 190 MHz) δ 164,9, 141,9, 138,9, 138,2, 134,1, 128,4, 126,8, 119,2, 103,8, 101,9, 80,7, 75,5, 74,99, 74,96, 73,3, 73,2, 70,6, 69,9, 68,0, 60,5 e 60,3 ppm.

Uma solução de 396 mg (0,219 mmol) da bis{[3,5-bis(hepta-0-acetil- β - D-lactosiloximetil) fenil] amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 4,26 g (30,6 mmol) de complexo trióxido de enxofre e trimetilamina em DMF (20 mL) foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com H20 destilada e concentrada. O resíduo foi purificado por passagem por uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi conseguida fazendo passar uma solução aquosa do produto por uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na). A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 664 mg (65%) de um sólido branco brilhante, p.f. 149°C (dec.): 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,1, -40- 75,8, 75,3, 75,05, 75,00, 73,0, 71,1 e 66,34 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 643,7 (m - 7 Na)7', 754,8 (m - 6 Na)6' e 910,4 (m - 5 Na)5'. Anál. Cale. para C78H8oN2013oS28Na28- 28 H20: C, 18,12; H, 2,65; N, 0,54; S, 17,36. Encontrada: C, 18,06; H, 2,67; N, 0,50; S, 14,75. (A RMN e a electroforese capilar mostraram um componente maioritário e vários outros componentes minoritários; a análise do espectro de massa indica produtos de 20 -28 sulfatos). EXEMPLO 17

Passo 1

Bis (r3,5-bis(tetra-O-acetil-B-D-glucosiloximeti0fenillamida) do ácido bifeniM^-dicarboxílico A uma solução de 3,5-bis(tetra-0-acetil-P-D-glucosiloximetil)fe-nilamina (996 mg, 1,22 mmol) e trietilamina (160 pL, 1,22 mmol) em THF (15 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (171 mg, 0,612 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A mistura reaccional foi seca (MgSO,*), concentrada e purificada por trituração com CH2C12/Et20 para dar 984 mg (87% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido incolor, p.f.l25-130°C: ’Η-RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 8,42 (s, 12 H), 8,04 (d, 4 H), 7,75 (d, 4 H), 7,66 (s, 4 H), 6,98 (s, 2 H), 5,03-5,22 (m, 12 H), 4,85 (d, 4 H), 4,67 (d, 4 H), 4,61 (d, 4 H), 4,22-4,32 (m, 8 H), 3,72 (dq, 4 H), 2,06 (s, 12 H), 2,024 (s, 12 H), 2,019 (s, 12 H) e 1,99 ppm (s, 12 H); espectro de massa ((-)-FAB), m/z 1159 (M-H). Anál. Cale. para C54H68N2026 6 H20: C, 51,10; H, 6,35; N, 2,21. Encontrada: C, 51,01; H, 6,09; N, 2,25. -41 -

Passo 2 Bís(r3,5-bis(B-D-glucosiloximetil)fenillamida) do ácido bifeniM^-dicarboxílico

Uma solução de 575 mg (0,495 mmol) da bis{[3,5-bis(tetra-0-acetil-B-D-glucosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 8,91 mL (8,9 mmol) de NaOH 1 N em MeOH (15 mL) foi agitada a 50°C durante 4 horas. A mistura reaccional foi parada com HC1 1 N (7,9, mL) e purificada por cromatografia em Saphadex G-10 (eluição com H20). A remoção da H20 in vacuo deu 144 mg (25% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. 160°C (dec.): ’Η-ΙΙΜΝ (D20, 400 MHz) δ 7,38 (d, 4 H), 7,20 (s, 4 H), 7,16 (d, 4 H), 7,07 (s, 2 H), 4,72 (d, 4 H), 4,47 (d, 4 H), 4,38 (d, 4 H), 3,88 (d, 4 H), 3,69 (dd, 4 H) e 3,27-3,44 ppm (m, 16 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 166,3, 141,6, 137,6, 137,2, 131,7, 127,5, 126,3, 124,0, 120,1, 101,5, 75,7, 75,6, 73,0, 70,7, 69,5 e 60,6 ppm; espectro de massa ((-)-FAB), m/z 1159,4 (M-H), 997,3, 981,3 e 699,2. Anál. Cale. para C54H68N2026' 6 H20: C, 51,10; H, 6,35; N, 2,21. Encontrada: C, 51,01; H, 6,09; N, 2,25.

Passo 3

Sal hexadecassódico da bisír3.5-bis(tetra-Q-sulfato-B-D-glucosiloximetinfenillamida) do ácido bifeniM^-dicarboxilico

Uma solução de 92 mg (0,079 mmol) da bis{[3,5-bis(p-D-glucosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 450 mg (6,83 mmol) de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina em DMF (15 mL) foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com H20, destilada e concentrada. O resíduo foi purificado por passagem por uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A -42- troca de catiões foi conseguida fazendo passar uma solução aquosa do produto por uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na). A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 161 mg (73%) de um sólido branco brilhante, p.f. 172°C (dec.): ^-RMN (D20, 400 MHz) δ 8,10 (dd, 4 H), 7,97 (dd, 4 H), 7,71, (s, 4 H), 7,40 (s, 2 H), 5,05 (d, 4 H), 5,01 (dd, 4 H), 4,89 (d, 4 H), 4,47-4,60 (m, 12 H), 4,28 (dt, 4 H) e 4,19-4,22 ppm (m, 4 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,1, 143,1, 138,0, 137,3, 133,4, 128,2, 127,3, 125,0, 121,8, 99,3, 76,0, 75,7, 73,4, 72,5, 70,8 e 67,7 ppm. Anál. Cale. para C54H52N2074Si6Na16 16 H2Or C, 21,01; H, 2,75; N, 0,91; S, 16,65. Encontrada: C, 20,93; H, 2,78; N, 0,77; S, 16,86. A electroforese capilar mostrou uma pureza superior a 91%. EXEMPLO 18

Passo 1

Bis í r3.5-bis(hepta-Q-acetil-B-D-maltosí loximetillfenillamida 1 do ácido bifeniM^-dicarboxílico A uma solução de 3,5-bis(hepta-0-acetil- β-D-maltosiloximetil) fe-nilamina (1,07 g, 0,769 mmol) e trietilamina (101 pL, 0,769 mmol) em THF (20 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (107 mg, 0,385 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A mistura reaccional foi seca (MgS04) e concentrada para dar 1,10 g (96% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido incolor, p.f. 139-144°C: Ή-RMN (CDC13, 400 MHz) δ 8,66 (s largo, 2 H), 8,03 (d, 4 H), 7,72 (d, 4 H), 7,67 (s, 4 H), 6,93 (s, 2 H), 5,39 (d, 4 H), 5,32 (t, 4 H), 5,20 (t, 4 H), 5,02 (t, 4 H), 4,76-4,86 (m, 12 H), 4,57-4,66 (m, 12 H), 4,20-4,25 (m, 8 H), 3,93-4,04 (m, 12 H), 3,6-3,7 (m, 4 H), 2,09 (s, 12 H), 2,06 (s, 12 H), 1,99 (s, 12 H), 1,98 (s, 12 H), 1,97 (s, 12 -43 - Η), 1,96 (s, 12 Η) e 1,95 ppm (s, 12 H); IV (KBr) 1745 cm'1. Anál. Cale. para C134H164N2O74: C, 53,89; H, 5,53; N, 0,94. Encontrada: C, 53,49; H, 5,55; N, 0,94.

Passo 2

Bis(í3,5-bis(B-D-maltosiloximetil)feninamida} do ácido bifeniM^-dicarboxílico

Uma solução de 973 mg (0,326 mmol) da bis{[3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-maltosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 9,77 mL (9,77 mmol) de NaOH 1 N em MeOH (15 mL) foi agitada a 50°C durante 4 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com HC1 1 N (9,12 mL), concentrada e purificada por cromatografia em Saphadex G-10 (eluição com H20). A remoção da H20 in vacuo deu 494 mg (75% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. >200°C (dec.): ’Η-RMN (D20, 400 MHz) δ 7,54 (s, 4 H), 7,33 (s, 4 H), 7,23-7,27 (s largo, 4 H), 7,15 (s, 2 H), 5,32 (s, 4 H), 4,51-4,20 (d largo, 4 H), 4,39 (d, 4 H), 3,50-3,90 (m, 36 H) e 3,30-3,45 ppm (m, 12 H); ,3C RMN (D20, 100 MHz) δ 166,3, 141,7, 137,8, 137,3, 132,0, 127,7, 126,5, 124,1, 120,1, 101,3, 99,9, 77,4, 75,9, 74,4, 72,8, 72,6, 71,6, 70,6, 69,1, 60,6 e 60,3 ppm. Anál. Cale. para C78H108N2O46 8 H20: C, 48,85; H, 6,31; N, 1,46. Encontrada: C, 48,48; H, 6,28; N, 1,58.

Passo 3

Sal octacosassódico da bisf r3,5-bis(hepta-Q-sulfato-P-D-maltosiloximetiDfenilIamidal do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico

Uma solução de 317 mg (0,174 mmol) da bis{[3,5-bis(p-D- -44- maltosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 3,58 g (25,7 mmol) de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina em DMF (15 mL) foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com H20 destilada e concentrada. O resíduo foi purificado por passagem por uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi conseguida fazendo passar uma solução aquosa do produto por uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na). A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 609 mg (75%) de um sólido quase branco, p.f. 178°C (dec.): 'H-RMN (D20, 400 MHz) δ 8,06 (d, 4 H), 7,94 (d, 4 H), 7,69 (s, 4 H), 7,36 (s, 2 H), 5,58 (d, 4 H), 5,06 (d, 4 H), 5,02 (d, 4 H), 4,7-4,9 (m, 12 H), 4,58-4,61 (m, 8 H), 4,49 (dd, 4 H), 4,12-4,46 ppm (m, 28 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,1, 143,1, 138,0, 137,3, 133,4, 128,2, 127,4, 124,9, 121,7, 99,3, 94,1, 77,1, 76,0, 74,8, 73,2, 73,1, 72,3, 71,8, 70,5, 69,9, 67,5 e 66,0 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 1143,7 (m - 4 Na)4', 910,4 (m - 5 Na5') 754,8 (m - 6 Na6') 643,7 (m - 7 Na7'), 560,4 (m - 8 Na)8'. Anál.

Cale. para C78HgoN2Oi3oS28Na2g 28 H20: C, 18,12; H, 2,65; N, 0,54; S, 17,36. Encontrada: C, 18,33; H, 2,73; N, 0,46; S, 17,72. EXEMPLO 19

Passo 1 S^-fN-N^-UreidolbisíN-FS-thepta-O-acetil-B-D-celobiosiloximetir)^-

clorofenillbenzamida I A uma solução de 1,10 g (1,42 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-clorofenilamina em THF (20 mL) contendo 198 pL de trietilamina (1,42 mmol) adicionou-se cloreto de 3-nitrobenzoílo (316 mg, 1,70 -45-

mmol). Após 3 h., a mistura reaccional foi parada com MeOH e diluída com CH2C12. A mistura reaccional foi lavada com H20, seca (MgS04), filtrada e concentrada até 1,31 g (1,42 mmol) de produto crú que foi utilizado directamente na reacção seguinte. O material crú foi dissolvido em EtOAc e foi tratado com 2,32 g (10,28 mmol) de SnCl2.H20. Após agitação em refluxo durante 5 h, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi parada com NaHC03 sat. (300 mL). A mistura reaccional foi diluída com EtOAc e filtrada. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2C12. As fases orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) e concentradas para dar 1,18 g (93% de rendimento) de produto crú que foi directamente utilizado na reacção seguinte. Ao produto em THF (20 mL) contendo 108 pL (7,98 mmol) de piridina adicionou-se 66 mg (0,22 mmol) de trifosgeno. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi parada com H20 e agitada durante mais 30 min. A mistura reaccional foi filtrada. O sólido foi recolhido e dissolvido em CH2C12, seco (MgS04), concentrado e depois triturado com Et20 para dar 995 mg (82% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. 173-178°C: 'H-RMN (CDC13, 400 MHz) δ 8,47 (s, 2 H), 8,41 (d, 2 H), 7,45 (d, 2 H), 7,38 (t, 2 H), 7,33 (d, 2 H), 6,96 (dd, 2 H), 5,10-5,16 (m, 4 H), 5,03 (t, 2 H), 4,90-4,96 (m, 4 H), 4,79 (d, 2 H), 4,59 (t, 2 H), 4,51-4,56 (m, 4 H), 4,30 (dd, 1 H), 4,14 (dd, 1 H), 3,99 (dd, 2 H), 3,92 (t, 2 H), 3,65-3,70 (dq, 2 H), 2,09 (s, 6 H), 2,04 (s, 6 H), 2,02 (s, 12 H), 1,987 (s, 6 H), 1,985 (s, 6 H) e 1,96 ppm (s, 6 H); l3C RMN (CDC13, 100 MHz) δ 170,6, 170,49, 170,46, 169,83, 169,17, 169,14, 165,22, 152,47, 139,75, 136,78, 134,85, 134,43, 129,68, 129,13, 124,35, 123,08, 122,95, 121,18, 120,57, 117,99, 100,70, 98,92, 73,22, 72,64, 71,89, 71,74, 71,55, 71,49, 69,97, 67,90, 62,04, 61,53, 20,86, 20,72, 20,64, 20,58, 20,53 e 20,45 ppm; espectro de massa ((+)-FAB) m/z 1837,5 (M + Na). Anál. Cale. para C81H92N4039C12 H20: C, 53,03; H, 5,16; N, 3,05. Encontrada: C, 52,74; H, 5,09; N, 3,15.

Passo 2 3,3'-(I\jy'-Ureidolbis(N-r5-(B-D-celobiosiloximetin-2-clorofenillbenzamidal

Uma solução de 908 mg (0,50 mmol) de 3,3'-(N,N'-Ureido)bis{N-[5-(hepta-0-acetil-P-celobiosiloximetil)-2-clorofenil]benzamida} em MeOH (20 mL) contendo 7,5 mL (7,5 mmol) de NaOH 1 N foi agitada a 50°C sob N2 durante 4 h. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi parada com HC1 1 N (7,0 mL, 7,0 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 15 min. e filtrada. O sólido foi recolhido e seco azeotrópicamente com tolueno para dar 566 mg (92% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. 183°C: *H-RMN parcial (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,06 (s, 2 H), 9,28 (s, 2 H), (s, 1 H), 2 H), 7,75 (d, 1 H), 7,60 (d, 2 H), 7,59 (s, 2 H), 7,50-7,55 (q, 4 H), 7,44 (d, 2 H), 7,33 (dd, 2 H), 5,30 (s, 2 H), 5,25 (d, 2 H), 4,86 (d, 2 H), 4,70 (s, 2 H), 4,33 (d, 2 H), 4,25 (d, 2 H), 3,75-3,80 (dd, 2 H), 3,60-3,71 (m, 4 H) e 3,0-3,2 ppm (m, 8 H); 13C RMN (DMSO-dé, 100 MHz) δ 165,54, 152,70, 140,05, 137,74, 134,90, 134,78, 129,27, 128,95, 128,48, 127,36, 126,53, 121,58, 120,91, 117,80, 103,21, 101,99, 80,49, 76,79, 76,46, 75,01, 73,29, 73,19, 70,04, 68,82, 61,02 e 60,43 ppm; espectro de massa ((+)-FAB) m/z 1249,2 (M + Na). Anál. Cale. para CssHmN^sCI^HzO: C, 48,97; H, 5,58; N, 4,31. Encontrada: C, 49,25; H, 5,58; N, 4,28.

Passo 3

Sal tetradecassódico da 3.3t-(N.N,-ureidolbis((N-r2-cloro-5-(hepta-Q-sulfatO" 3-D-celobiosiloximetil)feniIUbenzamidal

Uma solução de 3,3'-(N,N'-ureido)bis{N-[5-(P-celobiosiloximetil)-2-clorofenil]benzamida} (475 mg, 0,387 mmol) em DMF (25 mL) contendo 3,77 -47- g (27,08 mmol) de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com H20 destilada e concentrada. O resíduo foi purificado por passagem por uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi conseguida fazendo passar uma solução aquosa do produto por uma coluna Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na). A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 926 mg (0,349 mmol) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. 168°C (dec.): 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,46, 155,29, 138,29, 136,85, 133,89, 133,06, 129,90, 129,63, 129,56, 128,43, 127,62, 124,74, 122,79, 119,59, 99,91, 99,14, 77,61, 77,32, 77,03, 74,28, 73,63, 73,34, 70,0, 67,60 e 66,60 ppm. Anál. Cale. para C53H5oN4067Si4Nai43Na2S0418H20: C, 19,08; H, 2,60; N, 1,68; S, 16,34. Encontrada: C, 19,01; H, 2,21; N, 1,74; S, 16,82. A electroforese capilar de zona mostrou pureza > 90%. EXEMPLO 20

Passo 1

Bis(r2-cloro-5-(B-D-celobiosiloximetiDfenillamida) do ácido bifeniM^-dicarboxílico A uma solução de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-2-clorofenilamina (995 mg, 1,28 mmol) e trietilamina (148 pL, 1,28 mmol) em THF (25 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (179 mg, 0,642 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A mistura reaccional foi seca (MgS04) e concentrada até um óleo que foi triturado com éter para dar 1,09 g do produto crú (99% de rendimento). O material foi -48- dissolvido em MeOH (20 mL) e tratado com 9,5 mL de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 4 h, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e tratada com 8,9 mL (8,9 mmol) de HC1 1 N. A recolha do sólido forneceu 670 mg (91% de rendimento) do composto em epígrafe, p.f. >200°C: ’Η-RMN parcial (DMSO-d*,, 400 MHz) δ 10,21 (s, 2 H), 8,13 (d, 4 H), 7,95 (d, 4 H), 7,61 (d, 2 H), 7,55 (d, 2 H), 7,35 (dd, 2 H), 5,29 (d, 2 H), 5,25-5,26 (largo, 2 H), 4,87 (d, 2 H), 4,71 (s; 2 H), 4,34 (d, 2 H), 4,26 (d, 2 H), 3,78 (dd, 2 H), 3,15 (d largo, 2 H) e 3,05 ppm (t largo, 2 H); 13C RMN (DMSO-dô, 100 MHz) δ 165,0, 128,5, 127,0, 103,2, 102,0, 80,5, 76,8, 76,4, 75,0, 73,3, 73,2, 70,0, 68,8, 61,0 e 60,4 ppm; espectro de massa (-FAB) m/z 1166,9, 1004,9 e 842,9. Anál. Cale. para C52H62N2O24CI2 5H20: C, 49,57; H, 5,76; N, 2,22. Encontrada: C, 49,81; H, 5,36; N, 2,14.

Passo 2

Sal tetradecassódico da bis(r2-cloro-5-(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetiDfeninamida) do ácido bifeniM^-dicarboxílico

Uma solução de 531 mg (0,454 mmol) da bis{[2-cloro-5-(P-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 4,42 g (31,8 mmol) de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 2 dias. A mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia por uma coluna Sephadex G-10 eluindo com H20. A troca de catiões foi efectuada utilizando uma coluna Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) eluindo com H20. A remoção da água in vacuo e secagem azeotrópica com tolueno deu 705 mg (60%) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 165°C (dec.): 'H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,10 (d, 4 H), 7,97 (d, 4 H), 7,66 (d, 2 H), 7,65 (d, 2 H), 7,52 (dd, 2 H), 4,99 (d, 2 H), 4,97 (d, 2 -49-

Η), 4,58 (d, 2 Η) e 4,00-4,06 ppm (m, 4 H); ,3C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,8, 143,5, 137,0, 133,2, 132,6, 130,04, 130,01, 128,7, 128,3, 128,0, 127,5, 99,9, 99,2, 77,7, 77,4, 77,1, 74,3, 73,6, 73,4, 73,2, 67,7, e 66,6 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 496,7 (m - 5 Na)5', 626,6 (m - 4 Na)4' e 843,2 (m - 3 Na)3'. Anál. Cale. para C52H48Cl2N2Na14066Si4l6 H20: C, 21,63; H, 2,79; N, 0,97; S, 15,55. Encontrada: C, 21,24; H, 2,31; N, 0,97; S, 12,25. EXEMPLO 21

Passo 1

Bis íΓ2-Γ B-D-celobiosiloximetil)-4-clorofenillamida ) do ácido bifeniM^-dicarboxflico A uma solução de 861 mg (1,11 mmol) de 2-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-4-clorofenilamina e trietilamina (155 pL, 1,11 mmol) em THF (20 mL) adicionou-se dicloreto do ácido 4,4.bifenildicarboxílico (155 mg, 0,555 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2C12 e lavada com H20. A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada para dar 975 mg do produto crú. O material foi dissolvido em MeOH (15 mL) e tratado com 8,3 mL (8,3 mmol) de NaOH 1 N. Após agitação durante 4 h. à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi parada com 7,8 mL de HC1 1 N e o sólido foi recolhido para fornecer 590 mg (91% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. >200°C: 'H-RMN parcial (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9,95 (s, 2 H), 8,11 (d, 4 H), 7,93 (d, 4 H), 7,67 (d, 2 H), 7,62 (d, 2 H), 7,42 (dd, 2 H), 5,45 (d, 2 H), 4,91 (d, 2 H), 4,34 (d, 2 H) e 4,25 ppm (d, 2 H); 13C RMN parcial -50- (DMSO-dô, 100 MHz) δ 164,9, 142,2, 134,6, 134,5, 133,4, 128,5, 127,0, 103,2, 101,7, 80,4, 80,2, 76,8, 76,4, 75,0, 74,9, 73,3, 70,0, 66,3, 61,0 e 60,3 ppm; IV (KBr) 1650 cm'1; espectro de massa (-FAB) m/z 1167,3, 843,3 e 704,2. Anál. Cale. para C52H62CI2N2O244 H2O: C, 50,29; H, 5,68; N, 2,26. Encontrada: C, 50,37; H, 5,38; N, 2,32.

Passo 2

Sal tetradecassódico da bisf r4-cloro-2-(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetiDfenillamidal do ácido bifeniM^-dicarboxflico

Uma solução de 447 mg (0,382 mmol) da bis{[2-(P-D-celobio-siloximetil)-4-clorofenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico e 3,85 g (27,7 mmol) de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina em DMF (25 mL) foi agitada a 70°C durante 6 dias. A mistura reaccional foi parada à temperatura ambiente com H20, concentrada e passada por uma coluna Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi efectuada por passagem de uma solução aquosa do composto através de uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) eluíndo com H20. A remoção do solvente e secagem azeotrópica com tolueno deu 666 mg (67% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. 172°C, que era ca. 70% puro como determinado por electroforese capilar: ’Η-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 8,10 (d, 4 H), 7,99 (d, 4 H), 7,74 (s, 2 H), 7,46-7,53 (largo, 4 H), 4,95 (d, 2 H) e 4,90 ppm (d, 2 H); ,3C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,9, 143,4, 134,5, 133,4, 132.4, 129,7, 129,0, 128,7, 128,3, 127,6, 99,9, 98,8, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,5, 73.4, 73,0, 67,6, 66,9 e 66,3 ppm; Anál. Cale. para C52H48Cl2N2Nai4066Si4'14 H20: C, 21,92; H, 2,69; N, 0,98; S, 15,75. Encontrada: C, 21,98; H, 2,63; N, 1,08; S, 16,05. -51 - EXEMPLO 22

Passo 1 N,N,-bisr3,5-bis(B-D-cclobiosiloximetil)feninsuccinamida A uma solução de 840 mg (0,604 mmol) de 3,5-bis(hepta-0-acetil-p-D-celobiosiloximetil)fenilamina e 86,4 μΐ. (0,31 mmol) de trietilamina em THF (20 mL) adicionou-se cloreto de succinilo (34,2 pL, 0,31 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 1 h, observou-se que a reacção não se tinha completado. Adicionaram-se outros 10 pL (0,09 mmol) de cloreto de succinilo. A reacção foi agitada durante mais 15 min., parada com MeOH, diluída com CH2C12, lavada com H20, seca (MgSC^), filtrada e concentrada. A trituração com Et20 deu um sólido verde que foi semi-purificado por cromatografia "flash" (EtOAc) para dar um sólido amarelo (633 mg, 75% de rendimento). O composto foi dissolvido em MeOH e foi tratado com 6,6 mL de NaOH 1 N (6,6 mmol). Após agitação a 50°C durante 4 h., a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e adicionou-se resina Amberlite fortemente acídica até se obter um pH neutro. Após agitação durante 5 min., a mistura reaccional foi filtrada e concentrada até um sólido amarelo. A purificação por cromatografia em fase inversa (silica gel RP-60) eluíndo com MeOH:H20 (3:7) e depois cromatografia com Sephadex G-10 (eluindo com H20) deu 278 mg (94%) do composto em epígrafe como um sólido amarelo: 'H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,48 (s, 4 H), 7,31 (s, 2 H), 4,91 (d, 4 H), 4,71 (d, 4 H), 4,52 (t, 8 H), 3,82 (dd, 4 H), 3,74 (dd, 4 H), 3,43 (d, 4 H) e 2,81 ppm (s, 4 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 173,3, 137,9, 137,3, 124,9, 120,9, 102,4, 101,0, 78,5, 75,8, 75,3, 74,6, 74,1, 73,0, 72,7, 70,7, 69,3, 60,4, 59,9 e 31,4 ppm.

Passo 2

Sal octacosassódico da N,Nt-bisr3,5-bis(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetillfenillsuccinamida

Uma solução de 278 mg (0,208 mmol) de N,N'-bis[3,5-bis(p-D-celobiosiloximetil)fenil]succinamida e de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina (4,23 g, 29,0 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi parada à temperatura ambiente com H20 e depois concentrada. A purificação por cromatografía em Sephadex G-10 (eluição com H20) e depois troca de catiões utilizando uma coluna de Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) deu 606 mg (64% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido acastanhado, p.f. 168°C (dec.): lH-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,58 (s, 4 H), 7,36 (s, 2 H), 4,00-5,00 (m, 64 H) e 2,87 ppm (s, 4 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 173,3, 138,0, 137,1, 124,4, 99,9, 99,7, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,4, 72,9, 70,9, 67,6, 66,2 e 37,1 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 734,1 (m - 6Na)6', 885,5 (m - 5Na)5' e 1112,7 (m -4Na)4'. Anál. Cale. para C68H76N2013()S28Na2838 H2Or C, 15,62; H, 2,93; N, 0,54; S, 17,18. Encontrada: C, 15,24; H, 2,43; N, 0,75; S, 17,67. EXEMPLO 23

Passo 1 N.N’-bisr3,5-bis(B-D-celobiosiloximetinfenilltereftalamida A uma solução de 3,5-bis(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloximetil)-fenilamina (823 mg, 0,592 mmol) e trietilamina (82,5 pL, 0,592 mmol) em THF (15 mL), adicionou-se dicloreto de tereftaloílo (60,1 mg, 0,296 mmol). Após -53-

agitação à temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH, diluída com CH2CI2 e lavada com H20. A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada, concentrada e triturada com Et20 para dar 845 mg (98%) do produto crú. Este foi dissolvido em MeOH (20 mL) e tratado com 8,7 mL (8,7 mmol) de NaOH 1 N. Após agitação a 50°C durante 3 h., a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e adicionaram-se 8,1 mL (8,1 mmol) de HC1 1 N. O sólido foi recolhido e seco in vacuo para dar 295 mg (59% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 185°C (dec.): 'H-RMN parcial (DMSO-de com 5 gotas de D20; 400 MHz) δ 8,01 (s, 4 H), 7,64 (s, 4 H), 7,18 (s, 2 H), 4,81 (d, 2 H), 4,56 (d, 2 H), 4,33 (d, 2 H), 4,26 (d, 2 H), e 3,77 ppm (d, 2 H); 13C RMN. (DMSO-d6, 100 MHz) δ 164,7, 138,7, 138,2, 137,3, 127,7, 122,9, 119,3, 103,2, 101,9, 80,5, 76,8, 76,4, 75,1, 75,0, 73,3, 73,2, 70,0, 69,9, 61,0 e 60,4 ppm; IV (KBr) 1650 cm'1. Anál. Cale. para C72H104N6O46l2 H20: C, 44,35; H, 6,62; N, 1,44. Encontrada: C, 44,05; H, 6,30; N, 1,41.

Passo 2

Sal octacosassódico da N<N,-bisr3,5-bis(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetil)fenilltereftalamida

Uma solução de 178 mg (0,103 mmol) de N,N'-bis[3,5-bis(P-D-celobiosiloximetil)fenil]tereftalamida e de complexo de trióxido de enxofre e trimetilamina (2,0 g, 14,4 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 70°C durante 3 dias. A mistura reaccional foi arrefecida, parada com água e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em Sephadex G-10 (eluição com H20). A troca de catiões foi efectada utilizando uma coluna Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) deu 402 mg (85% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. 163°C (dec.): 'H-RMN parcial (D2O, 400 MHz) δ 8,09 (s, 4 H), 7,71 (s, 4 H), 7,43 (s, 2 H), 5,03 (d, 2 H) e 5,00 ppm -54- (d, 2 H); 13C RMN (DMSO-d6, 100 MHz) δ 168,7, 138,1, 137,2, 137,1, 127,8, 125,0, 121,7, 99,9, 99,7, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,4, 72,9, 70,9, 67,6 e 66,3 ppm; espectro de massa ("electrospray") (m-zNa)/z 632,8 (m - 7Na)7', 742,1 (m -6Na)6", 895,2 (m - 5Na)5' e 1124,7 (m - 4)4\ Anál. Cale. para C72H76N2

Na280,3oS28 28 H20: C, 16,97; H, 2,61; N, 0,55; S, 17,62. Encontrada: C, 16,77; H, 2,41; N, 0,59; S, 17,42. EXEMPLO 24

Passo 1

Bisir5-(B-D-celobiosiloximetil)-2-metilfeninamida> do ácido bifeniM^-disulfónico A 970 mg (1,28 mmol) de 5-(hepta-0-acetil-P-D-celobiosiloxi-metil)-2-metilfenilamina em CH2C12 (20 mL) contendo 1,0 mL (12,4 mmol) de piridina adicionou-se 225 mg (0,641 mmol) de cloreto de bifenil-4,4'-disulfonilo. Após agitação à temperatura ambiente durante 90 min., a mistura reaccional foi parada com NaHCOs sat. e extraída em EtOAc. A fase orgânica amarelo brilhante foi lavada com tampão pH 7, seca (MgSO^ e cromatografada por cromatografia "flash" Et0Ac/Et20/CH2Cl2, 1:1:1) para dar 504 mg (58% de rendimento) de um pó côr de laranja. Este material (num total de 675 mg (0,378 mmol) de dois procedimentos separados) foi dissolvido em MeOH (10 mL e THF(10 mL) e foi tratado com 6 mL de NaOH 1 N. Após agitação à temperatura ambiente durante 12 h, a mistura reaccional foi parada com 6 mL de HC1 1 N e foi concentrada até ca. 6-8-mL. O precipitado resultante foi recolhido e lavado com 15 mL de H20 e depois Et20. A secagem azeotrópica com tolueno deu 335 mg (74% de rendimento) de um pó amarelo claro, p.f. 230°C (dec.): 'H-RMN parcial (DMSO, 400 MHz) δ 9,69 (s, 2 H), 7,91 (d, 4 H), 7,75 (d, 4 H), 7,16 (d, 2 -55-

Η), 7,11 (s, 2 Η), 7,10 (d, 2 Η), 4,71 (d, 2 Η), 4,46 (d, 2 Η), 4,24-4,28, 3,77 (d, 2 Η), 3,70 (d, 2 Η), 3,58-3,64 (m, 2 Η), 2,97-3,43 (m, 18 Η) e 1,91 ppm (s, 6 H); 13C RMN (DMSO, 100 MHz) δ 142,2, 136,1, 134,4, 132,9, 130,5, 127,8, 127,2, 126,0, 103,2, 101,6, 80,5, 76,7, 76,4, 75,1, 74,9, 73,2, 73,1, 70,0, 69,1, 61,0, 60,4 e 17,2 ppm; espectro de massa ((-)-FAB), m/z 1199,3, 750,2, 514,2. Anál. Cale. para C52H68N2026S2H20: C, 51,23; H, 5,79; N, 2,30. Encontrada: C, 51,04; H, 5,64; N, 2,29.

Passo 2

Sal tetradecassódico da bis(r2-metil-5-(hepta-Q-sulfato-B-D-celobiosiloximetiDfenillamida) do ácido bifeniM^-disulfónico A 214 mg (0,178 mmol) da bis{[5-(p-D-celobiosiloximetil)-2-metilfenil]amida} do ácido bifenil-4,4'-disulfónico em DMF (10 mL) adicionou-se 1,8 g (12,9 mmol) de complexo de trióxido de enxofre trimetilamina. Após agitação durante 3 dias a 70°C, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, parada com 10 mL de água e agitada durante 20 min. Esta foi concentrada in vacuo e purificada por filtração em gel (Sephadex G-10) para dar 419 mg de flocos castanho claro. O composto foi dissolvido numa quantidade mínima de água e passado através de uma coluna de troca iónica (Dowex 50 x 8 fortemente acídica (forma Na)) para dar 350 mg de flocos castanho claro após secagem azeotrópica com tolueno: 'H-RMN (D20, 400 MHz) δ 7,89 (d, 4 H), 7,81 (d, 4 H), 7,39 (d, 2 H), 7,32 (s, 2 H), 7,25 (d, 2 H), 4,94 (d, 2 H), 4,65-4,87 (m, 8 H), 4,57 (dd, 2 H), 4,18-4,51 (m, 16 H), 3,98-4,05 (m, 4 H) e 1,90 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 143,8, 138,0, 135,4, 134,9, 131,1, 128,1, 128,0, 127,8, 127,3, 99,9,98,7, 77,6, 77,3, 77,2, 76,9, 74,3, 73,7, 73,3, 72,93, 70,3, 67,6, 66,6 e 16,4 ppm. Anál. Cale. para C52H54N2Nai4068Si6 18 H20: C, 21,14; H, 3,05; N, 0,95. Encontrada: C, 21,17; H, 2,71; N, 0,96. -56-

Exemplo 25

Passo 1 N.N,-bisr2-metil-5-(B-D-glucopiranosiloximetil)fenillsuccinamida A uma solução de 879 mg (1,88 mmol) de 5-(tetra-0-acetil-P-D-glucopiranosiloximetil)-2-metilfenilamina e 262 pL (1,88 mmol) de trietilamina em THF (10 mL) adicionou-se cloreto de succinilo (104 pL, 0,94 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 h, a mistura reaccional foi parada com MeOH (20 mL), diluida com CH2CI2, lavada com H20, seca (MgS04) e concentrada. A cristalização de Et20 deu 741 mg (78%) de um sólido verde que foi directamente utilizado na reacção seguinte. A uma solução de 360 mg (0,354 mmol) do produto crú em MeOH (7,5 mL) adicionou-se NaOH 1 N (3,54 mL, 3,54 mmol). Após agitação a 50°C durante 90 min., a mistura reaccional foi parada à temperatura ambiente com HC1 1 N (2,85 mL, 2,50 mmol). Após agitação durante 1 h. à temperatura ambiente, o sólido foi recolhido para dar 229 mg do composto em epígrafe: 'H-RMN parcial (DMSO-d6, 300 MHz) δ 9,41 (s, 2 H), 7,36 (s, 2 H), 7,17 (d, 2 H), 7,12 (d, 2 H), 4,78 (d, 2 H), 4,50 (d, 2 H), 4,22 (d, 2 H), 3,69 (d, 2 H), 2,67 (s, 4 H) e 2,18 ppm (s, 6 H).

Passo 2

Sal octassódico da N,N,-bisr2-metil-5-(2<3<4.6-tetra-Q-sulfato-B-D-glucopiranosiloximetiOfenillsuccinamida

Uma solução de 229 mg (0,337 mmol) de N,N'-bis[2-metil-5-(P-D-glucopiranosiloximetil)fenil]succinamida e de complexo de trióxido de enxofre trimetílamina (2,11 g, 15,2, mmol) em DMF (30 mL) foi agitada a 50°C durante a noite. A mistura reaccional foi parada com H20 (10 mL) e concentrada até um sólido oleoso. O sólido foi removido e lavado com uma muito pequena quantidade de H20. Os filtrados combinados foram concentrados e parcialmente purificados por repetidas cromatografias em Sephadex G-10 (eluição com H20) e depois por diálise utilizando um saco cortado de 500 MW. Uma pequena quantidade de sulfato de trimetilamónio foi ainda encontrada por RMN. A troca de catiões foi efectuada com uma coluna Dowex 50 x 8 de resina fortemente acídica (forma Na) (eluição com H20) para fornecer 249 mg (49% de rendimento) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. > 200°C: 'H-RMN parcial (D20, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2 H), 7,37 (d, 2 H) e 4,55 ppm (t, 2 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 173,9, 134,82, 134,80, 134,3, 130,8, 127,6, 98,8, 75,9, 75,5, 73,4, 72,4, 70,5, 67,8, 31,0 e 16,7 ppm; espectro de massa ((-)FAB) mz 1472,6 (M - Na)', 1370,7 (m-Na-NaS03+H)', 765,9, e 564,8. Anál. Cale. para C32H36N2Na8038S8'2 Na2S046 H20: C, 20,34; H, 2,54; N, 1,48. Encontrada: C, 20,19; H, 2,22; N, 1,39. EXEMPLO 26

Passo 1 N-r5-(Hepta-0-acetil-B-D-maltosiloximetiD-2-metilfenill-3-nitrobenzamida A uma mistura com agitação de 5-(Hepta-0-acetil-p-maltosiloxi-metil)-2-metilfenilamida (1,90 g, 2,52 mmol) e piridina (0,22 g, 2,77 mmol) em CH2C12 (10 mL) adicionou-se cloreto de 3-nitrobenzoílo (0,51 g, 2,77 mmol). Após 18 h, a mistura foi diluída com EtOAc, lavada com NaHC03 sat., solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e concentrada. A purificação por cromatografia "flash" (1:1 EtOAc/hexano) deu 2,00 g (88%) do composto em -58- epígrafe como uma espuma branca. 'H-RMN (DMSO-dô, 400 MHz) δ 10,28 (s, 1 H), 8,80 (s, 1 H), 8,45 (dd, 1 H), 8,42 (d, 1 H), 7,84 (m, 1 H), 7,28 (d, 1 H), 7,25 (s, 1 H), 7,10 (d, 1 H), 5,30 (m, 2 H), 5,20 (t, 1 H), 5,05 (t, 1 H), 4,85 (d, 1 H), 4,80 (m, 1 H), 4,75 (m, 2 H), 4,56 (d, 1 H), 4,40 (dd, 1 H), 4,19 (m, 2 H), 4,0 (m, 4 H), 2,20 (s, 3 H) e 2,00 ppm (m, 21 H). Anál. Cale. para C41H48N2O21: C, 54,42; H, 5,35; N, 3,10. Encontrada: C, 54,30; H, 5,27; N, 3,10.

Passo 2 N-r5-(B-D-MaltosiloximetiO-2-metilfenill-3-nitrobenzamfda A uma solução com agitação de N-[5-(hepta-0-acetil-P-D-malto-siloxi)-2-metilfenil]-3-nitrobenzamida (2,00 g, 2,21 mmol) em MeOH (20 mL) adicionou-se 25% em peso de NaOMe em MeOH (5,10 mL, 22,10 mmol). Após 3 h, adicionaram-se 10 g de resina de troca iónica Amberlite IR-120(H+). A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para dar 1,30 g (96%) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 166-168°C: 'H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz) δ 10,37 (s, 1 H), 8,80 (t, 1 H), 8,43 (m, 2 H), 7,85 (m, 1 H), 7,35 (s, 1 H), 7,25 (m, 2 H), 5,00 (d, 1 H), 4,85 (d, 1 H), 4,57 (d, 1 H), 4,30 (d, 1 H), 3,75 (m, 2 H), 3,60 (m, 2 H), 3,40 (m, 6 H), 3,10 (m, 2 H) e 2,21 ppm (s, 3 H); espectro de massa m/e 609 (M-H).

Passo 3

Sal heptassódico da N-r5-(Hepta-0-suIfato-B-D-maltosiloxi)-2-metilfenill-3- nitrobenzamida

Uma mistura de N-[5-(P-D-Maltosiloximetil)-2-metilfenil]-3-nitro-benzamida (1,27 g, 2,08 mmol) e de complexo trióxido de enxofre trimetilamina - 59- (10,13 g, 73,79 mmol) em DMF (10 mL) foi aquecida a 70-75°C durante 4 dias. A mistura foi arrefecida, adicionou-se MeOH e a mistura foi filtrada. O filtrado concentrado, retomado em MeOH e passado através de uma coluna Sephadex LH-20-100 (1:1 MeOH/CHCl3; 0,1% de Et3N). As fracções foram concentradas e passadas através de uma coluna de filtração em gel Sephadex G-10 (H20) para dar um óleo castanho. Purificação adicional por cromatografía em fase reversa (C-18; H20), cromatografía "flash" (5:0,1:0,5 CH3CN/H20/Et3N) e troca iónica em Sephadex SP C-25 (Na+) deu 1,10 g (40%) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 168-170°C: 'H-RMN (D20,400 MHz) δ 8,82 (t, 1 H), 8,52 (m, 1 H), 8,38 (m, 1 H), 7,86 (m, 1 H), 7,45 (s, 2 H), 5,57 (d, 1 H), 4,99 (d, 1 H), 4,80 (m, 2 H), 4,62 (t, 1 H), 4,55 (s, 1H), 4,46 (m, 1 H), 4,30 (m, 4 H), 4,18 (m, 1 H), 4,05 (m, 1 H) e 2,31 ppm (s, 3 H); espectro de massa m/z 1323. Anál. Cale. para C27H27N2Na7035S7 3H20: C, 23,52; H, 2,41; N, 2,03. Encontrada: C, 22,70; H, 2,69; N, 1,72.

Passo 4

Sal heptassódico da 3-N-r5-(hepta-0-sulfato-B-D-maltosiloxi)-2- metilfenillfenilamida

Uma solução de sal heptassódico da N-[5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloxi)-2-metilfenil]-3-nitrobenzamida (0,60 g, 0,45 mmol) em MeOH, H20 e piridina foi hidrogenada à pressão atmosférica sobre 10% Pd/C durante 6 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado e passado através de uma coluna de troca iónica Sephadex SP-C25 (Na+) para dar 0,40 g (68%) do composto em epígrafe como um sólido branco, p.f. 232-234°C (dec.): !H-RMN (D20, 300 MHz) δ 7,20 (m, 6 H), 6,93 (m, 1 H), 5,42 (d, 1 H), 4,75 (m, 2 H), 4,60 (m, 3 H), 4,48 (m, 2 H), 4,40 (dd, 2 H), 4,30 (t, 1 H), 4,15 (m, 2 H), 4,05 (m, 3 H), 3,95 (m, 2 H) e 2,15 ppm (s, 3 H). -60-

Passo 5

Sal tetradecassódico da 3.3,-(N.N,-ureido)bisr(N-(2-metil-5-(hepta-0-sulfato-B-D-maltosiloximetiDfeninibenzamida A uma mistura com agitação de sal heptassódico da 3-[N-[5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloxi)-2-metilfenil]fenilamida (440 mg, 0,34 mmol) e piridina (5 mL) adicionou-se trifosgeno (20 mg, 0,057 mmol). A agitação continuou à tmperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi concentrada, passada através de uma coluna de filtração em gel Sephadex G-10, e por uma coluna de troca iónica Sephadex SP-C25 (Na*). As fracções foram concentradas e trituradas com MeOH para dar 350 mg (795) do composto em epígrafe como um sólido quase branco, p.f. 220°C (dec.): 'H-RMN (D2Q, 400 MHz) δ 7,61 (d, 2 H), 7,59 (s, 2 H), 7,50 (m, 2 H), 7,43 (m, 8 H), 7,29 (d, 2 H), 5,54 (d, 2 H), 4,95 (t, 4 H9, 4,80 (m, 2 H), 4,61 (t, 2 H), 4,52 (dd, 2 H), 4,44 (t, 4 H), 4,30 (m, 12 H), 4,20 (m, 2 H), 3,98 (t, 2 H) e 2,28 (s, 6 H); I3C RMN (D20, 100 MHz) δ 169,8, 135,3, 135,1, 134,8, 134,4, 131,1, 130,0, 128,1, 126,9, 122,3, 121,7, 117,6, 94,7, 77,6, 76,6, 75,0, 73,7, 73,3, 73,1, 72,5, 69,8, 67,8, 6,0 e 16,8 ppm; espectro de massa m/z 1797. Anál. Cale. para CssHse^NanOôvSM 18H20: C, 22,47; H, 3,15; N, 1,91. Encontrada: C, 22,11; H, 2,81; N, 1,59. EXEMPLO 27

Passo 1 N,N,-bisf3-r2-metil-5-(hepta-Q-acetil-B-D-maltosiloximetiOfenilcarbamoín) benzoftalamida A uma solução com agitação de 3-amino[5-(hepta-0-acetil-P- -61 - maltosiloximetil)-2-metilfenil]benzamida (1,0 g, 1,143 mmol) e trietilamina (0,12 g, 1,143 mmol) em CH2C12 (5 mL) adicionou-se dicloreto de isoftaloílo (0,12 g, 0,572 mmol). Após 18 h, adicionou-se água e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de NaHC03 e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e concentrada. A purificação por cromatografía "flash" deu 0,57 g (53%) de produto como um sólido branco, p.f. 178-180°C: ’Η-ΙίΜΝ (DMSO-d^ 300 MHz) δ 10,60 (s, 2 H), 9,90 (s, 2 H), 8,60 (s, 1 H), 8,37 (s, 2 H), 8,21 (dd, J = 1,5, 7,7 Hz, 2 H), 8,05 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,75 (m, 3 H), 7,52 (t, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,25 (m, 4 H), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 2 H), 5,30 (m, 5 H), 5,03 (m, 3 H), 4,80 (m, 4 H), 4,70 (m, 4 H), 4,50 (d, J - 12,5 Hz,2 H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 2 H), 4,20 (m, 4 H), 3,95 (m, 8 H), 2,20 (s, 6 H) e 1,90-2,00 ppm (m, 42 H).

Passo 2 N.N,-bisf3-r2-metiÍ“5“(B-D-maltosiloximetil)fenilcarbamoín)isoftalamida A uma solução aquecida de N,N'-bis{3-[2-metil-5-(hepta-0-acetil-P-D-maltosiloximetil)fenilcarbamoí 1]fenil}isoftalamida (0,572 g, 0,304 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado 25% em peso de NaOMe em MeOH (0,5 mL, 2,13 mmol). Após 2 h, adicionou-se resina Amberlite IR-200 (H+). A mistura foi filtrada e concentrada para dar 0,300 g (77%) do produto como um sólido branco, p.f. 232-234°C: *H-RMN (DMSO-dó, 300 MHz) δ 10,65 (s, 2 H), 9,90 (s, 2 H), 8,60 (s, 1 H), 8,35 (s, 2 H), 8,21 (dd, J = 1,5, 7,7 Hz, 2 H), 8,05 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,70 (m, 2 H), 7,50 (t, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,35 (s, 2 H), 7,20 (m, 5 H), 5,01 (d, J = 3,9 Hz, 2 H), 4,80 (d, J = 12,5 Hz, 2 H), 4,50 (d, J = 12,5 Hz, 2 H), 4,30 (d, J = 7,9 Hz, 2 H), 3,20-3,75 (m, 26 H), 3,10 (m, 4 H), 2,20 (s, 6 H). -62-Passo 3

Sal tetradecassédico da N,iy-bis{3-r2-metil-5-(hepta-0-sulfato-3-D-maltosiloximetillfenilcarbamoílUisoftalamida

Uma mistura de N,N'-bis{3-[2-metil-5-(P-D-maltosiloximetil)fenil-carbamoíl]fenil}isoftalamida (0,30 g, 0,232 mmol) e de complexo de trióxido de enxofre e piridina (2,60 g, 16,267 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias. A mistura foi concentrada, purificada numa coluna Sephadex LH-20-100 (0,5% de EtsN/DMF) e convertida num sal sódico com resina de troca iónica Sephadex SP-C-25 para dar 0,200 mg de produto como um sólido quase branco, p.f. 222°C (dec.): 'H-RMN (D20, 400 MHz) δ 8,45 (s, 1 H), 8,35 (s largo, 2 H), 8,10 (s largo, 2 H), 7,95 (d, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,85 (d, 7,9 Hz, 2 H), 7,75 (s largo, 2 H), 7,57 (s largo, 2 H), 7,35 (s largo, 5 H), 4,75 (m, 4 H), 4,45 (m, 4 H), 4,30 (m, 4 H), 4,10 (m, 4 H), 3,80 (m, 4 H), 3,57 (m, 4 H), 3,28 (m, 8 H) e 2,20 ppm (s, 6 H); 13C RMN (D20, 100 MHz) δ 160, 137, 134, 130, 128, 120, 102, 96, 75, 74, 72, 62, 56, 49, 18 ppm.

Lisboa, 17 de Março de 2000

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I em que cada R1, R2, R3 e R4 são, independentemente, H, S03M ou um grupo açúcar com a estrutura: e cada grupo oligossacarídico com a estrutura contém de 1 a 3 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de 2- carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é alquilo com 1 a 12 átomos de carbono, ou X X X X H N H N X Η Μ X e X é como definido acima; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. em que cada R1, R1, R3 e R4 são, independentemente, H, SQ3M ou:

1 Composto de acordo com a reivindicação 1 de fórmula I -3- e cada grupo oligossacarídico com a estrutura

contém 1 ou 2 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou

2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é alquilo com 1 a 12 átomos de carbono,

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

3. Composto de acordo com á reivindicação 2 que é o sal -4- tetradecassódico da bis{[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fe-nil]amida} do ácido dodecanodióico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

4. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da N,N'-bis[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metil-fenil]-tereftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

5. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da bis{[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metilfe-nil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

6. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da N,N'-bis[5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)-2-metil-feniljisoftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

7. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico da bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]-amida} do ácido decanodióico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

8. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

9. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico da bis{[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-lactosiloximetil)fenil]ami-da} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

10. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico da bis{[3,5-(bis-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloximetil)fenil]-amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

11. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal hexadecassódico da bis{ [3,5-bis-(tetra-0-sulfato-p-D-glucosiloximetil)fenil]-amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

12. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da bis{ [2-cloro-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fe-niljamida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável;

13. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da bis{[4-cloro-2-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fe-nil]amida} do ácido bifenil-4,4'-dicarboxílico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

14. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico da N,N'-bis[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)- fe-nil]succinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

15. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octacosassódico da N,N'-bis[3,5-bis(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)- fe-nil]tereftalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

16. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da bifenil-4,4'-disulfónico bis{[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-p-D-celobiosiloximetil)fenil]amida} do ácido ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

17. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal octassódico da N,N'-bis[2-metil-5-(2,3,4,6-tetra-0-sulfato^-D-glucopiranosiloxi-metil)fenil]succinamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

18. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da 3,3'-[l,3-ureido]-bis{N-[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloximetil)fenil]}benzamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

19. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico da 3,3'-(N,N'-ureido)-bis-({N-[2-cloro-5-(hepta-0-sulfato-P-D-celobiosiloximetil)fenil]}benzamida) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

20. Composto de acordo com a reivindicação 2 que é o sal tetradecassódico de N,N'-bis{3-[2-metil-5-(hepta-0-sulfato-P-D-maltosiloxime-til)fenilcarbamoíl]fenil}isofitalamida ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

21. Composto de fórmula I

em que X

cada R1, R2, R3 e R4 são, independentemente, H, S03M ou um -7- grupo açúcar com a estrutura: -7-

e cada grupo oligossacarídico com a estrutura

contém de 1 a 3 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é alquilo com 1 a 12 átomos de carbono,

H H N X -8-

e X é como definido acima; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; para utilização no tratamento de um ser humano sofrendo de uma condição que é caracterizada por excessiva proliferação de músculo liso.

22. Composto para uma utilização como reivindicado na Reivindicação 21 em que a doença ou condição que é caracterizada por excessiva proliferação de músculo liso é a restenose.

23. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I

I em que cada R1, R2, R3 e R4 são, independentemente, H, SO3M ou um grupo açúcar com a estrutura:

e cada grupo oligossacarídico com a estrutura -9-

%*-ssszss*iám8* Λ XL Μ \ 0R2 contém de 1 a 3 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é alquilo com 1 a 12 átomos de carbono,

e X é como definido acima; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

24. Utilização de um composto de fórmula I

e cada grupo oligossacarídico com a estrutura

contém de 1 a 3 grupos açúcar; M é lítio, sódio, potássio ou amónio; n é 1 ou 2; X é hidrogénio, halogénio, alquilo inferior com 1 a 6 átomos de carbono ou alcoxi inferior com 1 a 6 átomos de carbono; Y é carbonilo ou sulfonilo; Z é alquilo com 1 a 12 átomos de carbono, - 11 - XKJ

X

Η H

e X é como definido acima; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; na manufactura de um medicamento para tratar um ser humano sofrendo de uma condição que é caracterizada por proliferação excessiva de músculo liso. Lisboa, 17 de Março de 2000

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