PT78492B

PT78492B - Process for the preparation of a pharmaceutical composition for controlling seizures specifically epilepsy

Info

Publication number: PT78492B
Application number: PT78492A
Authority: PT
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1983-04-29
Filing date: 1984-04-26
Publication date: 1986-06-11
Also published as: DK213484A; GB8410504D0; DK160805B; JPH0527606B2; GR81966B; ZA843032B; IL71650A; JPS59206309A; EP0124091B1; EP0124091A2; US4540582A; ATE48759T1; AU563291B2; GB2138680B; GB2138680A; DE3480764D1; DK213484D0; AU2644384A; PT78492A; EP0124091A3

Description

Descrição do objecto do invento que

MERRELL DOW PHARMACEUTICALS INC, norte-americana (Estado de Dela vare) industrial, com sede em 2110 East Galbraith Road,Cincin nati, Ohio 45215» Estados Unidos da América, pretende obter em Portugal, para: "PROCESSO PA RA A PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA CONSTITUÍDA,DE SIGNADAMENTE POR, ÃCIDO 4-AMINO -HEX-5-ENOICO (γ -VINIL-GABA) DESTINADA A CONTROLAR ATAQUES, ESPECIALMENTE EPILÉPTICOS"

0 presente invento refere-se a um processo para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a controlar ataques, especialmente epilépticos.

O ácido -aminobutxrico (GABA) é um neurotransmissor inibidor fundamental do SNC. Desenvolveram-se vá rias teorias para explicar várias deficiências na inibição neuronal mediada por GABA como um factor que contribui paraa patogénese de ataques, tais como a epilepsia.Em animais de laboratório,uma redução na actividade GABA-érgica sobre o SNC conduz a convulsões, enquanto que um incremento nas concentm ções de GABA do SNC os protege dos ataques (B.Meldrum, Lancet) 1978:11: 304-306,e L.Spero,Lancet 1982: 1319-1322).0 mecanis mo de acção de muitos agen es contra os ataques pode-se explicar pela casualidade de efeitos que, em última análise, produzem uma função GABA-érgica aumentada (L.Spero, supra; P. Schechter e col. em Enzyme-activated Irreversible Inhibitors, N. Seiler, M. Jung, e J. Koch-Weses, Eds., Elsevier/ North-Holland Biomedical Press, Amsterdam, New York, Osford 1978, pág.s 148-162; S.Sarhan e col., J.Neurosci, Res., h, 399-421 (1979); K.Gale e col., Science, 208. 288-291 (1980);

55.383 Ref: 384047

e N. Seiler e col., em Neurochemistry and Clinicai Neurology,

L. Battistin, G, Hashim e A. Lajtha eds,, Alan R. Liss, New York, 1989, pág.s 425-439).

0 Gaba e os seus precursores não cruzam com facilidade a barreira sangue-cérebro. Não obstante, uma via para aumentar as concentrações de GABA no SNC é bloquear o seu catabolismo. Sabe-se que o y -vinil GABA (ácido 4-amlnohex-5-enoico), adiante designado por GVG, é um inibidor irreversível, activado por enzimas selectivas, de GABA-transamina sa (GABA-T) (B. Metcalf, Biochem, Pharmacol., 28, 1705-1712 (1979) β B. Lippert e col., Eur. J. Biochem., ,£4» 441 (1977), a enzima responsável pelo catabolismo de GABA. A administração de GVG a animais de laboratório produz incrementos relacionados com a dose de concentrações de GABA no cérebro (M. Jung e col., J, Neurochem., 29. 797-802 (l977)í P. Schechter e col., Europ. J. Pharmacol., 41, 319-328 (1977)f e M. Jung, em Enzyme-avtivated Irreversible Inhibitors, N. Seiler, M. Jung e J. KochVeser, eds., Elesevier/North-Holland Bioraedical Press, Amsterdam, New York, Oxford, 1978, pág.s 135-148) e no fluido cérebro-espinal cisternal (CSP) (P, Bohlen e col., Brain Res·, 167. 297-305 (1979)· No homem, o tratamento com

GVG oral produz incrementos nas concentrações de GABA do CSP, obtido por punção lombar (j. Grove e col,, Life Sei., 28. 2431-2438 (1981). Além disso, o GVG apresenta actividade anticonvulsiva numa variedade de modelos anti-ataque em animais (P. Schechter e col,, em GABA-Biochemistry and CNS Punctions, P. Mandei e F, De-Feudis, Eds., Plenum, New York, 1979, pág.s 43-57í M. Palfreyman e col., Biochem. Pharmacol., 8, 817-824 (1981)1 P. Schechter e col», em Enzyme-activated Irreversible Inhibitors, N. Seiler, M, Jung e J, Koch-Veser, eds., Elsevier/North Ho11and Biomedical Press, Amsterdam, New York, Oxford, 1978, pág.s 148-162} e B. Meldrum, Clln. Neuropharmacol,, 5.» 293-316 (1982). Por outro lado, estudos clínicos re alizados no homem demonstram que doses diárias de 1 a 4 gr.de GVG era doses fraccionadas (habitualmente duas vezes ao dia) administradas em pacientes epilépticos que não reagem aos meRef: 384047

dicamentos contra ataques convercionais, produzem uma redução na frequência e na gravidade dos ataques.

0 presente invento proporciona um método melhorado e composições farmacêuticas para tratar ataques, tais como os associados à epilepsia.

Quanto ao aspecto do método de tratamento, o invento compreende um método para controlar ataques num paciente que o necessita, que consiste em administrar ao paciente uma combinação de:

(a) uma quantidade eficaz de y-vinil GABA, ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, e

(b) tuna quantidade eficaz de gliclna, s arco sina (N-metilglicina), ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino al quílico θ destas, ou um sal farmaceuticamente aceitável das mesmas.

0 termo "ataque", tal como é aqui utilizado, inclui tanto ataques convulsivos como não convulsivos associados a, por exemplo, epilepsia, traumatismos, retirada de dr<> gas (por exemplo, retirada de álcool, retirada de barbitúricos e retirada de benzodiazepina)tétanos, doenças metabólicas, temperatura corporal elevada, indução de drogas (por exemplo, teofilina) e porfíria, 0 tratamento de ataques associados á £ pilepsia é uma realização preferida do presente invento. 0 termo "controlar" representa diminuir a gravidade e/ou a frequência dos transtornos.

0 termo "alquilo g" representa um resto alquilo linear ou ramificado que tem de 1 a 8 átomos de carbo no, por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo, hexilo ou oetilo. Os grupos alquilo prefe ridos são aqueles que têm de 1 a 4 átomos de carbono, especialmente metilo ou etilo. Os éteres salinos de alquilo C, _Q de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou são compostos co nhecidos, ou se podem preparar por métodos conhecidos.

Exemplos ilustrativos de sais farmacêutica55.383 Ref: 384047

mente aceitáveis dos compostos empregados neste invento são:

(a) sais de adição de ácido nâo tóxicos formados com ácidos inorgânicos, como o ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico; ou com ácidos orgânicos, tais como ácidos carboxílicos orgânicos, por exemplo, ácido salicílico, maleico, malónico, tartárico, cítrico, e ascérbico, e ácidos sulfónicos orgânicos, por exemplo, ácido metanosulfónico, e

(b) sais nâo tóxicos formados com bases inorgânicas ou orgânicas, tais como hidróxidos de metais alcalinos, por e xemplo, sódio, potássio e litio, metais alcalinotérreos, por exemplo, cálcio e magnésio, metais ligeiros do Grupo ΙΙΙΑ,ροΓ exemplo, alumínio, aminas orgânicas, tais como aminas primári as, secundárias ou terciárias, por exemplo, ciclohexilamina, etilamina, raetilarainoetanolamina e piperidina.

Os sais preparam-se por métodos convencionais.

0 termo " / -vinil GABA” (GVG), empregado na memória e nas reivindicações refere-se a S-^ -vinil GABA (S-GVG) ou a misturas de S-y-vinil GABA com R-^ -vinil GABA,co mo o racemato, (R,S)-Y-vinil GABA (r,S-GVG), 0 R-GVG nâo inibe irreversivelmente GABA-T. Portanto, o R-GVG numa forma i senta de S-GVG não é útil para os fins aqui descritos. Se não se indicar de outro modo, as doses representadas expressamente em vários sítios da memória são aplicáveis a R,S-GVG. Será evidente para os peritos neste campo, que as doses aplicáveis a S-GVG serão aproximadamente metade das doses aplicáveis a R,S-GVG.

0 efeito da administração de GVG em combinação com gllcina, sarcosina, ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino alquílico ou um sal das mesmas, para controlar os ataques é sinérgico já que a administração da combinação dá um maior controle dos ataques do que é possível com a administra ção doa compostos individuais. O efeito sinérgico de gliclna, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um étef salino ou um sal das mesmas, com GVG no tratamento de ataques permite adminia55.383 Refi 384047

trar GVG em geral a nivele de dosagem significativamente mais baixos que os necessários com GVG em solitário. Por outro la do, a administração de glicina, sarcosina ou N,N-dimetilglici na, ou éter salino ou um sal das mesmas, em combinação com GVG produz uma maior insidência do controlo de ataque que a que se pode obter com GVG em solitário para o mesmo nível de dosagem·

A dose adequada de GVG, glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas será qualquer quantidade que seja eficaz para reduzir a gravi dade e/ou a frequência dos ataques no paciente que os sofre. A dose eficaz varia conforme o estado geral do paciente e a natureza específica, a gravidade e/ou a frequência do ataque.

Em geral, quando se emprega uma terapêutica de combinação para controlar os ataques, a dose eficaz de GVG pode reduzir-se num factor de 2 a 5. Portanto, a dose eficaz de GVG, por exemplo no tratamento de ataques epilépticos, variará entre umas 0,2 e 2 gramas por dia, de preferência em do ses fraccionadas, por via oral.

Em geral, a dose eficaz de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino, ou um sal das mesmas, varia entre umas 2 a 12 gramas por dia, de preferência em doses fraccionadas, por via oral. Um intervalo de dose preferida é de 3 a 4 gramas por dia. Uma vez que a glicina é atéxica, o limite superior da dose diária eficaz sé depende de consideraçães práticas.

Será evidente que a glicina, a sarcosina,ou a Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas, pode-se administrar em combinação com GVG de vários modos. De preferencia, a glicina, a sarcosina, ou a Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas, também se pode administrar simultaneamente com GVG. Nâo obstante, a glicina, a sarcosina, ou a Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas, também se pode administrar antes do momento da administração de GVG ou entre os momentos da administração de GVG.

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Para o tratamento de ataques epilépticos, o GVG administra-se preferentemente em doses fraccionadas duas vezes por dia. Não obstante, também se pode administrar uma vez por dia, ou inclusivamente uma vez cada dois dias, dependendo de cada paciente.

Do mesmo modo, será evidente que o método desta invenção se pode empregar com pacientes que recebam outros medicamentos contra os ataques, quando estes não são con trolados por completo por tais medicamentos, sempre que não se produzam interacções adversas entre os fármacos, naturalmente ,

Os compostos activos, aqui descritos para a terapêutica de combinação de ataques, podem-se administrar de várias formas para conseguir o efeito desejado. Os compostos activos podem-se administrar por separado ou misturados entre si. De preferência os compostos activos administram-se com ve ículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, cuja propor ção e natureza virá determinada pela solubilidade e proprieda des químicas dos compostos, a via escolhida para a administra ção e as práticas farmacêuticas normalizadas. Os compostos activos, quer sejam sós ou misturados, podem-se administrar o ralmente em formas de dosagem sólidas, por exemplo, cápsulas, pastilhas, pós, ou em formas líquidas, por exemplo, soluções ou suspensões. Do mesmo modo, os compostos activos podem-se injectar parenteralmente em forma de soluções ou suspensões estéreis. As formas orais sólidas podem conter excipientes convencionais, por exemplo; lactose, sacarose, estearato de magnésio, resinas e matérias similares. As formas orais liqui das podem conter vários agentes saboreantes, corantes, preser vativos, estabilizantes, solubilizantes ou suspensores. Os preparados parenterais são soluções ou suspensões aquosas estéreis que podem conter diversos agentes preservativos, estabilizantes, taponantes, solubilizantes ou suspensores. Se se desejar, podem-se juntar aditivos, tais como solução salina ou glucose, para tornar isotónicas as soluções. Também se podem empregar formas de dosagem de libertação controlada.

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0 termo "forma de dosagem unitária" que aqui é utilizado, representa uma forma de dosagem simples ou muiti pia que contém uma quantidade de ingrediente activo misturado ou associado de outra forma, com o diluente ou veículo e a di ta quantidade é tal que normalmente ae precisam uma ou mais unidades pré-determinadas para uma só administração terapêuti ca. No caso de formas de dosagem múltiplas tais como líquidos ou pastilhas com estrias, a dita quantidade pré-determinada será uma fracção tal como 5 ml (uma colherzinha) de um líquido ou metade ou um quarto de pastilha Com estrias, da forma de dosagem múltipla.

No primeiro aspecto da composição do invento proporcionam-se formulações farmacêuticas para utilizá-las no método que se descreveu anteriormente nesta memória, em cuja forma se utilizam preferentemente os compostos activos. Estas formulações preparam-se de maneira bem conhecida nas técnicas farmacêuticas e contêm: (a) uma quantidade eficaz de GVG ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, e (b) uma quanti dade eficaz de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino alquílico ^^-8 ^^{as mesmas}» ^{ou eal} farmaceuticamente aceitável das mesmas, quer sejam sós ou misturados, ou associados de outro modo, com um veículo ou diluente farma ceuticamente aceitável. 0 veículo ou diluente pode ser sólido semi-sólido ou líquido, servindo como veículo, excipiente, ou meio para o ingrediente activo. Os diluentes ou veículos adequados são bem conhecidos. As formulações farmacêuticas poden; -se adaptar para uso oral ou parenteral e podem-se administrar ao paciente era forma de pastilhas, cápsulas, supositórios, soluções, suspensões, ou similares. Também se podem empre gar formas de libertação controlada de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal dae mesmas*

A relação de GVG para a glicina, sarcosina, ou Ν,Ν-dimetilglicina ou um éter salino ou um sal das mesmas, varia de 1:1 a 1:60. De preferência, varia de 1:3 a 1:10.

A quantidade de composto activo presente naa composições farmacêuticas varia e pode ser qualquer quantida55.383

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de eficaz. As doses unitárias destes compostos podem conter, por exemplo, de uns 5θ mg a 100 mg de GVG e de uns 250 mg a 500 mg de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal dos mesmos e podem-se administrar, por e xemplo, uma ou mais vezes por dia, conforme ae necessite.

No seu segundo aspecto de composição, o invento considera um invólucro que contém uma quantidade de for mas de dosagem oral farmaceuticamente aceitáveis de GVG, ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, e, separadamente uma quantidade de formas de dosagem oral farmaceuticamente aceitáveis de glicina, sarcosina ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino alquílico g das mesmas, ou um sal farmacêutica mente aceitável das mesmas. As formas de dosagem podem ser uma pastilha, uma cápsula, pós ou um líquido adequado para sua administração oral. 0 emprego do invólucro mencionado facilita a administração de doses separadas de GVG e glicina, sarco sina, Ν,Ν-dimetilglicina. Embora os medicamentos se administrem ao paciente por separado, é evidente que a glicina, sarcosina, ou Ν,Ν-dimetilglicina se podem administrar, quer seja antes do momento de administração de GVG ou ao mesmo tempo que se administra GVG. Do mesmo modo, a glicina, sarcosina,

ou Ν,Ν-dimetilglicina podem-se administrar entre os tempos de administração de GVG. Prefere-se a administração simultânea dos medicamentos.

Os efeitos anti-ataque sinérgicos de GVG com binado com glicina, sarcosina, Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino alquílico das mesmas, podem-se demonstrar em ratos com ataques induzidos por administração de ácido 3-mercaptopropió nico (MPA), 0 MPA é um inibidor competitivo de glutamato descarboxilase, e cre-se que os seus efeitos de ataque produzidos pelo seu empioramento específicos do sistema GABA (B. Mel drum, Int. Rev. Neurobiol., 17. 1-36 (l975). θ procedimento u tilizado e os resultados obtidos no ensaio de GVG combinado com glicina, éter salino etílico de glicina, N,N-dimetilgllci na e sarcosina contra os ataques induzidos por MPA em ratos descrevem-se nos Exemplos 1 a 3 © nas tabelas 1, lfe, 2, 3 e

55.383

Ref: 384047

3a mais adiante.

Também se estudaram oe efeitos contra os ataques de GVG e glicina noutros modelos de ataque em ratos, mais especificamente, ataques induzidos por (+)-bicuculina, ataques induzidos por metrazol, ataques induzidos por picrotoxina e ataques induzidos por estricnina. Os procedimentos utilizados e os resultados obtidos nestes outros ensaios in· dicam-se no Exemplo 4 (ataques induzidos por bicuculina), Exemplo 5 (ataques induzidos por metrazol), Exemplo 6 (ataque induzido por picrotoxinina) e Exemplo 7 (ataques induzidos por estricnina)·

Seguidaraente, discutem-se os significados das experimentações de ataques em modelos animais descritos nos Exemplos 1 a 7»

a) Ataques induzidos por ácido mercaptoproplénico (Tabelas 1, la, 2. 3 e 3a): De acordo com os dados da Tabela 1, pode-se observar que uma dose de 200 mg/kg (i.p( de GVG protege a 60 % dos animais contra ataques induzidos por 40 mg/kg (i.p.) de MPA, ou seja, a ΒΕ^θ de GVG varia entre 150 e 200 mg/kg. Não obstante, inclusivamente com esta do se, obBervaram-se extensões tónicas das patas traseiras, em 1 de cada 10 animais. Doses de 300 mg/kg (i.p.) de GVG protegiam a 90 % dos animais contra os ataques induzidos por MPA, As doses mais altas não realçam os efeitos anti-ataque. Pelo con trário, se as doses de GVG eram superiores a 750 mg/kg, a pra tecção contra o ataque induzido por MPA via-se claramente diminuída (N, Seiler e col., em Neurochemistry and Clinicai Neu rology, L. Battistin, G. Hashim e A. Lajtha, eds,, Alan Lin, N.Y. (1980), pág.s 425-439). Como se observa na Tabela 1, uaa! dose subcutânea (s.c.) de glicina tão alta como 2,2 gr/kg pro tege só a 40 % dos animais e uma dose de 750 mg/kg (s.c.) de glicina protege sá a 20 % doa animais. Não obstante, quando

se administram 1,5 gr (s.c.) de glicina quatro horas depois de 50 tng/kg de GVG (uma dose ineficaz de GVG) , pode-se conseguir uma protecção completa contra os ataques produzidos por

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MPA

0 efeito anti-convulsivo da glicina

e de cui

ta duração» Obtém-se protecção máxima aproximadamente uma hora depois da sua administração. Duas horas depois da administração de glicina não se pode observar um efeito anti-ataque significativo, como se indica na Tabela la. Os dados da Tabe< la la obtem-se depois da administração de glicina por gavabem, A comparação dos dados indicados na Tabela 1 com os ind: cados na Tabela la demonstra que o modo de administração de glicina tem pouco efeito sobre a sua actividade anti-convulsiva.

Os dados das Tabelas 2, 3 e 3a mostram qua oj éter salino etílico de glicina, a Ν,Ν-dimetilglicina e a aar-j cosina têm um efeito potenciador de GVG similar à glicina,mas o éter salino etílico de glicina e a sarcosina têm uma actua-4 ção mais prolongada que a glicina para doses equivalentes.

b) Ataques induzidos por bicuculina (Tabe-J la 4): Num trabalho prévio, o GVG injectado i.p. resultava ineficaz contra ataques induzidos por 3 mg/kg de bicuculina (s. c.) (p. Schechter e col., em Enzyme-activated Irreversible Inhibitors, N. Seller, M. Jung e J, Koch-Veser, eds,, El-j sevier/North Ho11and Biomedical Press, Amsterdam, Nev York,0x ford, 1978, pág.s 148-162). Os ataques induzidos por adminia tração intravenosa (i.v.) de 0,55 mg/kg de bicuculina podiam ser neutralizados por GVG (w. Buchett, J. Pharmacol. Meth., J 35, 4l (1981), sendo a ΏΕ^θ» 54 mg/kg. Um trabalho posterior não publicado indica que a DE^q é de uns 220 mg/kg.

As experimentações indicadas na Tabela 4,fazem-sè com injecções de 1,8 mg/kg de bicuculina. Nesta Tabela observa-se que, com 200 mg/kg de GVG em solitário, se pode conseguir um efeito protector significativo, e este pode-se melhorar com a administração de glicina. Não obstante, em cor junto, o ensaio de bicuculina não é suficientemente reproduzi vel, provavelmente devido a uma curva de resposta â dose muito escalonada,

c) Ataques induzidos por metrazol (Tabela 5

- 1Ό 55.383

Ref» 384047

De acordo com os dados não publicados, as doses i.v. de 3θ ⁸4θ mg/kg de metrazol podem ser neutralizados por GVG 4'

e 52 mg/kg, respectivamente) mas o GVG era ineficaz contra 60 mg/kg do convulsivo.

Na experimentação representada na Tabela 5* induziram-se ataques mediante injecção i.p. de 75 mg/kg de rnetrazol. Nestas condições, todos os animais apresentaram convulsões clónicas generalizadas. 0 tempo entre a administri ção de rnetrazol e o aparecimento dos ataques era de fQ segundos, aproximadamente. Uma dose i.p, de 75θ ®g/kg, de GVG, 5 horas antes da administração de rnetrazol nâo proporcionava protecção contra os ataques induzidos por rnetrazol e a glici na em solitário também era ineficaz, como se demonstrou ante< riormente. Não obstante, se a glicina se adminietravadepois de GVG, o número de animais com convulsões reduzia-se com do ses mais altas de glicina e o tempo até ao qual se produzia o ataque prolongava-se.

d) Ataques induzidos por picrotoxinina (Tabela 6)» Os ataques induzidos porpicrotoxinina não podiam ser influenciados significativamente mediante um pré-tratamex to com GVG ou glicina ou uma combinação dos dois compostos.

e) Ataques induzidos por estricnina (Tabela 7) » Uma dose de 750 mg/kg de GVG nâo impedia os ataques induzidos por estricnina, nem se prolongava significativamen* te o tempo que decorria entre a administração do convulsivo < o aparecimento de extensão tónica das patas traseiras. Não obstante, uma dose alta de glicina (2,2 gr/kg) prolongava o tempo entre a administração do convulsivo e o primeiro episó* dio de ataque, e, além disso, este tempo prolongava-ee pelo tratamento com GVG e glicina.

É evidente que a glicina, a saroosina ou a Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino alquílico θ ou um sal das mesmas farmaceuticamente aceitável, produz um efeito sinérgico com os inibidores de GABA-T diferente do GVG para < controlo de ataques. Portanto, em geral, qualquer inibidor d

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Ref: 384047

GABA-T pode combinar-se com glicina, sarcosina ou N,N-dimeti3 -glicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas, para o controle efectivo de ataques. Em particular, podem-se empregar os seguintes inibidores de GABA-T diferentes de GVG: ácido

(S) - ou (R,s)-4-arainohepta-5,6-dienóico, GABA y -acetllénico, ácido aminooxiacético, O-sulfato de etanolamina, gabaculina e isogabaculina. 0 ácido (S)- ou (R,S)-4-aminohepta-5,6-dienoico está descrito na petição de patente Britânica Νβ 8214290.

0 GABA^-acetilánico, o ácido aminooxiacético, o O-sulfato de etanolamina, a gabaculina e a isogabaculina são compostos conhecidos (ver, por exemplo, M, Palfreyman e col., Biochem. Pharmacol., jJO, 817 (l98l).

Uma vez que os inibidores de GABA-T são luta dores de GABA indirectos, é evidente que os lutadores de GABA que actuam directamente, ou seja, os compostos que activaa os receptores de GABA directamente para tirar os seus efeitos an ti-convulsivos, também podem ver melhorados os seus efeitos anti-convulsivos mediante a administração em combinação com glicina, sarcosina, ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mesmas,

0 efeito sinérgico de glicina, sarcosina,ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal destas, com 0 inibidor de GABA-T ou um lutador de GABA que actua dlrectamen te no tratamento de ataques, permite que os inibidores de GABA-T de acção directa sejam administrados geralmente a níveis de dosagem significativaraente menores que os requeridos cora o inibidor de GABA-T ou o lutador de GABA de acção directa. Por outro lado, a administração de glicina, sarcosina ou N,N-diraetilgllcina, ou um éter salino, ou um sal das mesmas, em combinação com ura inibidor de GABA-T ou um lutador de GABA de acção directa proporciona uma incidência de controle de ataques maior que a que se pode obter utilizando um inibidor de GABA-T ou um lutador de acção directa em solitário para o mesmo nível de dosagem. As doses adequadas de inibidor de GABA-T ou o lutador de GABA de acção directa e glicina, sarcosi na ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino ou um sal das mes

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nas, será qualquer quantidade que seja eficaz para reduzir a gravidade e/ou a frequência de ataques num paciente que o necessita.

Nos exemplos seguintes descreve-se o ensaio de GVG combinado com glicina, éter etílico de glicina, N,N-di metilglicina ou sarcosina para observar a capacidade que têm os compostos de neutralizar ou inibir os ataques induzidos por MPA (Exemplo 1, 2, 3 β 3a), (+)-bicuculina (Exemplo 4), metrazol (Exemplo 5), picrotoxinina (Exemplo 6) e estricnina (Exemplo 7).

Depois das doses intraperitoneais (i.p.) de GVG entre 100 mg/kg e 1500 mg/kg, o GABA no cérebro de ratos alcança níveis dependentes da dose decorridas 5 horas, e mar tém-se, pelo menos, durante as 19 horas seguintes. Portanto, a protecção com GVG contra ataques induzidos quimicamente ensaia-se sempre 5 horas depois da sua administração.

Em todas as experimentações, utilizam-se ratos CD1 machos (Charles River, Saint-Aubin-les-Elbeuf, France) que pesam 4oÍ4gr. Agrupam-se de 10 em 10 em jaulas de plástico normalizadas a 32°C e a uma humidade relativa de 6065$, com 12 horas de luz e 12 horas de escuridão e têm acesso a uma dieta e água ad libitum.

Antes de empregar os ratos nas experimentações de ataque, adaptaram-se ao seu meio durante 6 dias no ml nimo. Os ataques foram induzidos entre as 2 e a 5 p.m. e os fármacos administraram-se nos momentos indicados no texto e nas tabelas.

Em todos os modelos de ataques, utilizaram-se grupos de 10 ratos para cada tratamento ou dose.

Exemplo 1

A. Efeito do tratamento com (R,S)-vinil GABA (GVG) e glicina sobre contorções induzidas por ácido 3-mercapto propiónico·

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG, Quatro horas mais tarde, injectou-se glicina s.c. (7,51 mg/

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/0,1 ml, água destilada). Uma hora depois da administração de glicina, injectou-se ácido 3-mercaptopropiónico (40 mg/kg) pa. ra induzir ataques. Registou-se o número de ataques mioclónicos e miotónicos durante os 30 minutos seguintes. Os resultados indicam-se na Tabela lj

Tabela 1

Percentagem de aniTratamento(mg/kg)

GVG	glicina	NI	N2	N2	N4	mais com ataques
0	0	10	3	23	2	100	(a)
50	0	10	4	23	2	100	(b)
100	0	8	2	11	0	80	(c)
125	0	6	4	13	3	60
150	0	6	1	8	1	60
200	. O	4	1	6	1	40	(c)
250	0	4	1	5	0	40
300	0	1	0	1	0	10
0	750	8	2	10	0	80
0	2250	6	1	8	1	60
25	I5OO	4	0	4	0	40
25	2250	5	0	6	0	50
50	750	5	0	5	0	50	(c)
50	I5OO	0	0	0	0	0
5°	2250	0	0	0	0	0
100	750	1	0	1	0	10	(b)
200	750	0	0	0	0	0	(b)

•14,

55.383

Ref: 384047

Nl « número de animais com ataques clónicos

N2 “ número de animais com extensões tónicas das patas traseiras

N3 « número total de episódios de ataque

N4 · animais mortos ao fira do período de observação de 30 minutos

(a) valores médios de quatro experimentações

(b) valores médios de duas experimentações

(c) valores médios de três experimentações

B. Dependência do tempo do efeito anti-ataque de glicina exógena.

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG. Quatro horas mais tarde, administraram-se soluções de glicina em água corrente por meio de gavagem* Induziram-se ataques no momento apropriado para injecções i.p. de ácido 3mercaptopropiónico (40 mg/kg, 0,40 mg/θ,Ι ml, salino fisiológico) , Registou-se o número de ataques mioclónicos e miotónicos no momento indicado depois da injecção de ácido 3-merca ptopropiónico. Os resultados recolhem-se na Tabela la:

Tabela la

Tratamento (mg/kg) GVG glicina	Tempo depois da administra ção de glicina (minutos)	Nl	N2	N2	N4	Percentagem de animais com ataques
0	0		10	1	16	0	100
50	0	-	9	1	11	1	90
50	750	30	7	1	7	1	70
50	750	60	6	0	6	0	60
50	750	120	ô	1	9	1	80
50	750	240	10	2	13	1	100
50	1500	15	7	0	7	0	70
50	1500	30	4	1	4	0	40

- 15

55.383

Ref: 384047

NI “ número de animais com ataques clónicos

N2 « número de animais com extensões tónicas das patas traseiras

N3 » número total de episódios de ataque

N4 “ animais mortos ao fim de 30 minutos de observação.

Exemplo 2

Efeito do tratamento com (R,S)-vinil GABA (GVG) e o éter salino etílico de glicina, sobre os ataques induzidos por ácidc

3-raercaptopropiónico.

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG. Depois de 1, 2, 3, e 4 horas, os animais recebem uma injecção s.c. de éter salino etílico de glicina em forma de hidrocloreto. Cinco horas depois do tratamento com GVG, indu ziram-se ataques por injecção i.p. de ácido 3-mercaptopropiónico (40 mg/kg; 0,4 mg/θ,Ι ml, salino fisiológico). Registov -se o número de ataques miotónicos e mioclónicos durante os 30 minutos seguintes. Os resultados indicam-se na Tabela 2:

Tabela 2

Tratamento (mg/kg) Tempo depois

GVG	éter salino etílico de glicina*	ção de éter sa lino etílico	N2	N3 N4	Percentagem de animais com ataques
de	glicina	Nl
0	0			10	3	17 2	100
0	1030		1	7	3	14 2	70
100	0		-	8	3	11 0	80
100	1030		1	3	1	5 1	30
100	1030		2	3	0	3 0	30
100	1030		3	7	2	10 0	70
100	1030		4	8	0	10 0	80

Nl β número de animais com ataques clónicos N2 a número de animais com ataques tónicos

55.383

Ref» 384047

N3 s número total de animais com episódios de ataque

N4 « animais mortos ao fim dos 30 minutos de observação.

* Administrado com o sal de hidrocloreto

Exemplo 3

Efeito do tratamento com (R,S)-vinil GABA (GVG) e N,N-dimetilglicina (DMGly) ou sarcosina sobre ataques induzidos por ácido 3-mercaptopropiónico (40 mg/kgj 0,4 mg/θ,Ι ml, salino fisiológico). Dois grupos de ratos receberam uma injecção i. p. de GVG. Duas. 3 ou 4 horas depois do tratamento com GVG,oi animais recebem uma injecção s.c. de DMGly ou sarcosina, em forma de hidrocloreto. Cinco horas depois da injecção de GVG (l ou 2 horas depois da administração do DMGly ou sarcosina) induziram-se ataques como anteriormente se indicou. Registou -se o número de ataques mioclónicos e miotónicos durante os 30 minutos seguintes. Os resultados com DMGly recolhem-se na Tabela 3»

Tabela 3

Tratamento (mg/kg) GVG DMGly*	Tempo depois da administração de DMGly (horas)	Nl	N2	N2	N4	Percentagem de animais com ataques
0 0	0	10	3	17	2	100
o 1030	1	8	3	17	0	80
100 1030	1	6	4	14	0	60
100 1030	2	8	5	26	2	80
100 0	-	8	2	11	0	80
Nl « número	de animais com ataques	clónicos
N2 β número	de animais com ataques	tónicos
N3 « número	total de episódios de	ataque

N4 « animais mortos ao fim dos 30 minutos de observação. * Administrado como sal de hidrocloreto.

- 17 55.383

Ref» 384047

-4Oe resultados com sarcosina

Tabela 3a.

indicam-se na

Tabela 3a

Tratamento (mg/kg)	Tempo depois da administração					Percentagem de animais com
GVG	sarcosina	de sarcosina (h)	Nl	N2	£2	N4	contorções
0	0	—	10	3	17	2	100
0	890	1	10	2	15	0	100
100	890	1	4	1	5	0	40
100	890	2	6	3	9	0	60
100	890	3	10	7	11	2	100

NI número de animais com ataques clónicos

N2 « número de animais com ataques tónicos

N3 ^e número total de episódios de ataque

N4 animais mortos ao fim do período de observação de 30 minutos.

* Administrado como sal de hidrocloreto.

Exemplo 4

Efeito de tratamento com (R, s)-vinil GABA (GVG) e glicina sobre ataques induzidos por bicuculina.

Administrou-se aos ratos uma injecção de GVG i.p. Quatro horas mais tarde, injectou-se glicina i.p.

Uma hora depois da administração de glicina, induziram-se ataques mediante uma injecção s.c. de bicuculina (l,8 mg/kg; 0,018 mg/θ,Ι ml, salino fisiológico). Registou-se o número de ataques clónicos e miotónicos durante os 30 minutos seguintes. Os resultados recolhem-se na Tabela 4.

18 Ref: 384047

Tabela 4

Tratamento (mg/kg)

GVG glicina

0 0

200 0

200 750

NI N2 N£ N4

8 6 17 6

2 2 4 2

2 0 2 0

Percentagem de animals com ataques

80

20

NI *= número de animais com ataques clónicos

N2 β número de animais com extensões tónicas das patas traseiras

N3 « número total de episódios de ataque

N4 « animais mortos ao fim dos 30 minutos de observação

Exemplo 5

Efeito do tratamento com (R,S)-vinil GABA (GVG) e glicina β£ bre ataques induzidos por metrazol.

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG. Quatro horas mais tarde, injectou-se glicina s.c. Uma hora depois da administração de glicina, induziram-se contorções por injecção i.p. de metrazol (75 mg/kg; 0,75 mg/θΙ ml, salino fisiológico). Registou-se o tempo entre a administração de metrazol e os ataques clónicos. Os animais que não tinham ataques aos 5 minutos, consideraram-se isentos de ataques.Os resultados recolhem-se na Tabela 5.

- 19 55.383

Ref: 384047

Tabela 5

Tratamento (mg/kg)	Tempo entre a administração de metrazol e 0 aparecimento de ataques clónicos (s)	Percentagem de animais com ataques
GVG	glicina
0	0	60 ( 47-115)	100
0	750	57 ( 48-101)	100
0	1500	80 ( 47-115)	100
0	2250	125 ( 40-279)	100
750	0	188 (HO-738)	100
750	750	184 (130-300)	90
750	15OO	162 (138->3OO)	80
750	2250	262 (128->3OO)	60

Média: intervalo entre-parênteses

Exemplo 6

Efeito do tratamento com (R,S)-vinil GABA (GVG) e glicina em ataques induzidos por picrotoxinina.

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG. Quadro horas mais tarde injectou-se i.p. glicina. Uma hora depois da administração de glicina, introduziram-se contorções por injecção s.c, de picrotoxinina (5 mg/kg} 0,05 mg/ /0,1 ml salino fisiológico). Registou-se o número de episódios clónicos e tónicos durante os 30 minutos seguintes. Os resultados indicam-se na Tabela 6:

00 ·J°0 Ref: 384047

Tratamento

(m GVG	g/kg) glicina	NI	N2	N2	N4	Percentagem de animais com ataques
0	0	10	10	31	10	10
200	0	10	10	45	10	10
200	750	10	10	45	10	10
750	0	10	10	47	10	10
750	750	10	8	37	8	10

NI ss número de animais com ataques clónicos

N2 » número de animais com extensões tónicas das patas traseiras.

N3 * número total de episódios de ataque

N4 » animais mortos ao fim dos 30 minutos de observação.

Exemplo 7

Efeito do tratamento com (R,s)-vinil GABA e glicina sobre convulsões induzidas por estricnina.

Os ratos receberam uma injecção i.p. de GVG. Quatro horas mais tarde, injectou-se glicina s.c. Uma hora depois da administração de glicina, induziram-se contorções por injecção i.p. de estricnina (base; 2 mg/kg; 0,02 m g/0,1 ml, salino fisiológico). Determinou-se o tempo entre a admjL nistração de estricnina e a aparição das extensões tónicas das patas traseiras. Os resultados recolhem-se na Tabela 7;

- 21 Ref: 384047

Tratamento

(mg/kg)

Tabela 7

Tempo entre a administração de estricnina e o aparecimento de

Percentagem de animais

0	0	158- 23*	100
0	750	178Í 39*	100
0	2250	224 - 45*	100
750	0	189 £ 15*	100
750	2250	272 ΐ 61*	100
Calores médios +	E.T. (N » 10).
		0 depósito para 0 primeiro	pedido do in-

vento acima descrito foi efectuado na GRÃ-BRETANHA em 29 de Abril de 1983, sob o NS 8311804.

-

Claims

REIVINDICAÇÕES1* - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a controlar ataques num pa ciente que o necessite, caracterizado pelo facto de, na refe rida composição se incorporarem:

a) uma quantidade eficaz de y -vinil GABA, ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável,

b) uma quantidade eficaz de glicina, sarcosina,ou Ν,Ν-dimetilglicina, ou um éter salino etílico θ das mesmas, ou um sal das mesmas farmaceuticamente aceitável, e

c) um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
2« - Processo de acordo com a reivindica22 55.383 Ref: 384047

ção 1, caracterizado pelo facto de se incorporar na referida composição uma quantidade efectiva de glicina, ou um éter sa lino alquílico da mesma, ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer deles,
3* - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se incorporar na referida composição uma quantidade eficaz de sarcosina, ou um éter sa lino alquílico da mesma, ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer deles.
4* - Processo de acordo com a reivindicação. 1, caracterizado pelo facto de se incorporar na referida composição uma quantidade eficaz de Ν,Ν-dimetilglicina, ou um eter salino alquílico g da mesma, ou um sal farmacêuti camente aceitável de qualquer deles,
5* - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de ο γ -vinil GABA se apresentar na forma de isómero (s) essencialmente livre de isóme ro (R).