PT779271E

PT779271E - Naftilacetamidas como inibidores da spla2

Info

Publication number: PT779271E
Application number: PT96308915T
Authority: PT
Inventors: Theodore Goodson; David Kent Herron; Richard Waltz Harper
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1995-12-13
Filing date: 1996-12-09
Publication date: 2001-11-30
Also published as: HUP9901984A3; MX9804751A; US6160175A; ES2159347T3; IL124866A0; EP0779271A1; AU1289797A; JP2000501739A; EP0779271B1; WO1997021664A1; DE69614232T2; KR19990072110A; HUP9901984A2; GR3036988T3; CA2240395A1; BR9612347A; IL124866A; DE69614232D1; DK0779271T3; ATE203744T1

Description

f¥<ÍZ9-f - 1 - (/Mj / DESCRIÇÃO "NAFTILACETAMIDAS COMO INIBIDORES DA sPLA2"

Esta invenção relaciona-se com naftilacetamidas para inibição da libertação mediada por sPLA2 de ácidos gordos em condições como o choque séptico. A estrutura e propriedades físicas da fosfolipase secretora não pancreática humana A2 (daqui em diante referida como "sPLA2") foram detalhadamente descritas em dois artigos, nomeadamente "Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A2 Present in Rheumatoid Synovial Fluid" por Seilhamer, Jeffrey J.; Pruzanski, Waldemar; Vadas, Peter; Plant, Shelley; Miller, Judy A.; Kloss, Jean; e Johnson, Loin K.; The Journal of Biological Chemistrv. Vol. 264, N°. 10, Número de 5 de Abril, pp. 5335-5338, 1989; e "Structure and Properties of a Human Non-pancreatic Phospholipase A2", por Kramer, Ruth M.; Hession, Catherine; Johansen, Berit; Hayes, Gretchen; McGray, Paula; Chow, E. Pingchang; Tizard, Richard; e Pepinsky, R. Blake; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, N° 10, Número de 5 de Abril, pp. 5768-5775,1989; cujas revelações são aqui incorporadas por referência.

Julga-se que a sPLA2 e uma enzima limitadora do ritmo na cascata do ácido araquidónico que hidrolisa os fosfolípidos da membrana. Assim, é importante desenvolver compostos que inibam a libertação mediada pela sPLA2 de ácidos gordos (e.g., ácido araquidónico). Tais compostos seriam valiosos no tratamento geral de estados induzidas e/ou mantidas pela sobreprodução de sPLA2, tais como choque séptico, síndroma da angustia respiratória no adulto, pancreatite, trauma, asma brônquica e etc. -2-

7 A Communication to the Editor por Hayden G. Beaton, et. al., Journal of Medicinal Chemistry, 1994, Vol. 37, N°. 5 descreve vários análogos inovadores de (naftiltio) metilo, inibidores de sPLA2 não fosfolipídica. É desejável desenvolver novos compostos e tratamentos para doenças induzidas pela sPLA2.

Esta invenção é uma utilização inovadora de compostos conhecidos como compostos de naftilacetamida de fórmula I.

O

(I) em que R1, R2, R3 e X são como abaixo definidos. Estes compostos de naftilacetamida são eficazes na inibição da libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 humana.

Esta invenção também é uma nova classe de compostos de naftilacetamida tendo eficácia potente e selectiva como inibidores de sPLA2 humana. -3-

Esta invenção também é uma composição farmacêutica contendo um composto de naffcilacetamida.

Esta invenção também é um método de prevenir e tratar choque séptico, síndroma da angustia respiratória no adulto, pancreatite, trauma, asma brônquica, rinite alérgica, artrite reumatóide, e doenças relacionadas por contacto com uma quantidade terapeuticamente eficaz de compostos de naftilacetamida da invenção.

Definições:

As naftilacetamidas da invenção empregam certos termos definidores que se seguem: O termo "alquilo" por si só ou como parte de outro substituinte significa, a menos que definido de outro modo, um radical hidrocarbonado monovalente em cadeia linear ou ramificada tal como metilo, etilo, «-propilo, isopropilo, «-butilo, butil terciário, isobutilo, sec-butilo, «-pentilo e n-hexilo. O termo "alcenilo" empregue só ou em combinação com outros termos significa um grupo hidrocarbonado monovalente em cadeia linear ou ramificada com indicação dos limites do número de átomos de carbono, e tipificado por grupos tais como vinilo, propenilo, crotonilo, isopentenilo e vários isómeros de butenilo. O termo "alcinilo" empregue só ou em combinação com outros termos significa uma cadeia hidrocarbonada linear ou ramificada com indicação dos limites do número de átomos de carbono, e possuindo uma ligação tripla. O termo incluí grupos tais como acetileno, propino e vários isómeros de butinilo. -4-

O termo "halo" significa flúor, cloro, bromo ou iodo. O termo "substituinte não interferente", refere-se a radicais adequados para substituição nas posições 2 e 3 do anel fenilo. Radicais não interferentes ilustrativos são Ci-C6 alquilo, CrC6 alcenilo, CrC6 alcinilo, C7-Ci2 aralquilo, C7-Ci2 alcarilo, C3-C8 cicloalquilo, C3-C8 cicloalcenilo, fenilo, toluilo, xilenilo, bifenilo, Q-Cô alcoxi, Ci-C6 alceniloxi, Ci-C6 alciniloxi, C2-Ci2 alcoxialquilo, C2-Ci2 alcoxialquiloxi, C2-Ci2 alquilcarbonilo, C2-Ci2 alquilcarbo-nilamino, C2-Ci2 alcoxiamino, C2-Ci2 alcoxiaminocarbonilo, Ci-Ci2 alquilamino, CpQ alquiltio, C2-Ci2 alquiltiocarbonilo, Ci-Cô alquilsulfinilo, Q-Cô haloalcoxi, Ci-Cg haloalquilsulfonilo, Cj-Cô haloalquilo, Ci-C6 hidroxialquilo, -C(0)0Ci~C6 alquilo, -(CH2)n-0-(CrC6 alquilo), benziloxi, fenoxi, feniltio, -(C0NHS02R), -CHO, amino, amidino, bromo, carbamilo, carboxilo, etoxicarbonilo, -(CH2)n-C02H, cloro, ciano, cianoguanidinilo, flúor, guanidino, hidrazida, hidrazino, hidrazido, hidroxilo, hidroxiamino, iodo, nitro, fosfono, -S03H, tioacetal, tiocarbonilo e CrC6 carbonilo; em que n é de 1 a 8.

Compostos da invenção que são ilustrativos incluem os seguintes:

O

(X) -5- l/Uv< em que: 1 2 R e R são cada um independentemente hidrogénio ou um substituinte não interferente, tal como aqui definido, com a salvaguarda que pelo 1 2 menos um de R ou R deve ser hidrogénio; cn, em que n

R3 é hidrogénio, -0(CH2)nY, '°(/x , '°(A é um número de 2 a 4 e Y é -CO2H, -PO3H2 ou -SO3H; e X é -O- ou -CH2-,

Uma subclasse preferida de compostos de fórmula I são aqueles em que R1 e R2 são cada um independentemente hidrogénio ou fenilo.

Outra subclasse preferida de compostos de fórmula I são aqueles em que R3 é -0(CH2)nY, em que né3ou4eYé -C02H, -P03H2 ou -SO3H.

Compostos da invenção particularmente preferidos são aqueles em que R1 e R2 são hidrogénio e R3 é hidrogénio ou -0(CH2)3C02H.

Compostos específicos preferidos e todos os seus sais e solvatos que são ilustrativos dos compostos da invenção incluem os compostos A-C como detalhado nos Exemplos aqui incluídos, e misturas dos referidos compostos em qualquer combinação.

Os sais das naftilacetamidas acima são um aspecto adicional da invenção. Nos casos em que os compostos da invenção possuem grupos funcionais acídicos ou básicos podem ser formados vários sais que são mais -6-

solúveis em água e fisiológicamente mais adequados que os compostos precursores. Sais farmaceuticamente aceitáveis representativos incluem, mas não se limitam a, sais alcalino ou alcalino-terrosos tais como os de lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio. Os sais são convenientemente preparados a partir do ácido livre por tratamento do ácido em solução com uma base ou por exposição do ácido a uma resina de troca iónica.

Incluídos aqui na definição de sais farmaceuticamente aceitáveis estão os relativamente não tóxicos sais de adição de base inorgânica e orgânica de compostos da presente invenção, por exemplo, amónio, amónio quaternário, e catiões de aminas derivados de bases azotadas de basicidade suficiente para formar sais com os compostos desta invenção (ver, por exemplo, S. M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Phar. Sei.. 66: 1-19 (1977)). Além disso, podem-se fazer reagir os grupos básicos dos compostos da invenção com ácidos orgânicos ou inorgânicos adequados para formar sais tais como acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitartarato, borato, brometo, edetato, edisilato, estolato, esilato, fluoreto, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsenilato, hexilresorcinato, brometo, cloreto, hidroxinaftoato, iodeto, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, malseato, mandelato, mesilato, metilbrometo, metilnitrato, metilssulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pantotenato, fosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartarato, tosilato, trifluoroacetato, trifluorometano sulfonato e valerato. Métodos de Síntese

Os compostos em que X é oxigénio podem ser preparados segundo o Esquema I seguinte. r -7- /

(1) KOH (2) HCL

(4) (5) -8-

No primeiro passo do esquema reaccional acima, um l-bromo-4-metilnaftaleno apropriadamente substituído e um fenol apropriadamente substituído são dissolvidos num solvente polar aprótico como a piridina. A mistura é tratada com um excesso de carbonato de potássio e um excesso de cobre-bronze e aquecida em refluxo sob atmosfera de azoto para produzir (1). A brominação do composto (1) para produzir (2) é conseguida por aquecimento em refluxo de (1) com um agente brominante, tal como a N-bromo-succinamida, num halogeneto de alquilo não polar como solvente, como o tetracloreto de carbono, utilizando 2,2-azobisisobutironitrilo como catalisador. O tratamento de (2) com cianeto de sódio produz (3). Esta reacção é melhor efectuada num solvente polar aprótico, tal como o sulfóxido de dimetilo (DMSO), enquanto se aquece até uma temperatura de 60°C. A hidrólise do composto ciano (3) para produzir o ácido (4) é efectuada em dois passos. Utilizando um solvente polar prótico, como o dietileno glicol como cosolvente, o composto ciano (3) é tratado com uma base de metal alcalino, como o hidróxido de potássio, e a mistura é aquecida até 90-95°C. Faz-se então reagir o produto resultante com um ácido mineral forte como o ácido clorídrico. A conversão de (4) para o composto naftilacetamida desejado (5) é efectuada noutro processo em dois passos. Primeiro, o ácido (4) é dissolvido num solvente halogeneto de alquilo como o cloreto de metileno. A solução de ácido/halogeneto de alquilo é arrefecida num banho de gelo e depois tratada com -9-

χ'" /

cloreto de oxalilo, utilizando dimetilformamida (DMF) como catalisador, para produzir o cloreto do ácido. Deixa-se a solução aquecer até à temperatura ambiente e trata-se depois com amónia gasosa à temperatura ambiente para produzir (5). O produto (5) desejado pode ser purificado utilizando procedimentos de recristalização vulgares num solvente orgânico adequado, preferencialmente cloreto de metileno/hexano.

Os compostos em que X é metileno podem ser preparados pelo Esquema II que se segue.

Br

l)MgET20

3) ácido aquoso

-10-

>ι

(1) KCN (2) DMF

O composto (la) é preparado por uma reacção de Grignard. O reagente de Grignard material de partida é preparado por reacção de um brometo de fenilo apropriadamente substituído com magnésio e éter. Faz-se então reagir o reagente com um nitrilo de naftilo apropriadamente substituído e hidroliza-se o composto resultante com um ácido aquoso como o ácido clorídrico para formar o benzoilnaftilo (la). A redução de (la) é efectuada por tratamento com um excesso - 11 - l/Uu] molar de um agente redutor como o borohidreto de sódio. A reacção é iniciada num banho de gelo utilizando um solvente-catalisador como o ácido trifluoro-acético e deixa-se depois aquecer até à temperatura ambiente conforme se vai processando a redução. A clorometilação de (2a) é conseguida por tratamento com um excesso de formaldeído e de ácido clorídrico concentrado num solvente acídico polar como uma mistura de ácidos acético/fosfórico. A reacção é melhor conduzida a uma temperatura de 90°C. O nitrilo (4a) é preparado por deslocação nucleofilica do composto cloreto (3a) com cianeto. A reacção é conduzida por refluxo de (3a) com um ligeiro excesso molar de cianeto de sódio num solvente polar aprótico como a dimetilformamida (DMF) durante cerca de cinco horas, deixando depois a reacção continuar enquanto arrefece até à temperatura ambiente. A desejada naftilamida (5a) é depois preparada a partir do nitrilo (4a) dissolvido num solvente polar aprótico como a DMSO, adicionando-se carbonato de potássio para tomar a solução de nitrilo ligeiramente básica. Consegue-se então a hidrólise do nitrilo por tratamento com uma solução aquosa de peróxido de hidrogénio. A cristalização da naftilacetamida pode ser efectuada por adição de água à solução de peróxido.

Os compostos em que R3 é outro que não hidrogénio pode ser facilmente preparado por utilização de um l-bromo-4-metil-naftaleno com um fenol protegido, como um grupo metoxi, na posição 6 do anel de naftaleno como material de partida. O processo é efectuado, como descrito acima, para preparar - 12-

os compostos (1) - (3). A hidrólise ácida do grupo ciano (3) e a desprotecção do fenol protegido pode ser efectuada por tratamento de (3) com uma solução a 40% de brometo de hidrogénio em ácido acético. Pode então fazer-se reagir o fenol desprotegido para preparar o substituinte apropriado na posição 6 do anel naftilo. Por exemplo, a preparação de compostos em que R é -0(CH2)nCOOH pode ser efectuada por alquilação do fenol com um halogeneto de alquilo apropriado seguido por conversão para o ácido por tratamento com uma base como a hidróxido de sódio aquoso seguido por ácido clorídrico diluído.

Será facilmente entendido por alguém versado na arte que os materiais de partida fenol substituído e brometo de fenilo estão disponíveis comercialmente ou são facilmente preparados por técnicas conhecidas a partir de materiais de partida disponíveis comercialmente. Todos os outros reagentes utilizados para preparar os compostos da presente invenção estão disponíveis comercialmente.

Os exemplos que se seguem ilustram adicionalmente a preparação dos compostos desta invenção, assim como os compostos utilizados nos métodos desta invenção. Os exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a limitar de qualquer modo o alcance da invenção.

Exemplo 1

Preparação de 4-Benzil-l-naftilacetamida (Composto A) A. Preparação de 1-benzoilnaftaleno

Adicionaram-se a 10,3 g (65 mmol) de bromobenzeno em 50 mL de éter dietílico, espirais de magnésio. A reacção iniciou-se por adição de alguns - 13- (Μ cristais de iodo a cerca de 5 mL da solução de bromobenzeno e aquecimento suave. Adicionou-se depois o bromobenzeno restante a um ritmo tal que mantivesse um refluxo suave. Quando a reacção diminuiu adicionou-se lentamente 1-naftonitrilo em 50 mL de éter dietílico. Deixou-se a mistura com agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se água e acidificou-se a mistura até pH 1 com ácido clorídrico concentrado. Adicionou-se cloreto de metileno e aqueceu-se a mistura em refluxo de um dia para o outro. Separaram-se as camadas, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. O produto em epígrafe foi cristalizado a partir de cloreto de metileno/hexano e adicionalmente purificado por cromatografia em coluna de silica gel com pressão média, eluindo com acetato de etilo:hexano/5:95. O produto desejado foi obtido como um sólido cristalino branco (4,38 g; 29% de rendimento). P.f. = 72-74°C.

Análise elementar:

Calculada: C, 87,91; H,5,21;

Encontrada: C, 87,99; H, 5,36. B. Preparação de 1-benzilnaftaleno

Adicionou-se hidróxido de sódio em "pellets" (98% NaH; 3,5 g; 5,3 eq.) a 50 mL de ácido trifluoroacético à temperatura do banho de gelo, sob atmosfera de azoto. Adicionou-se gota a gota 1-benzoilnaftaleno (4,0 g; 17,2 mmol), preparado como acima, em 25 mL de cloreto de metileno. Deixou-se a mistura com agitação de um dia para o outro enquanto aquecia até à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura sobre gelo, separaram-se as camadas e a camada aquosa foi extraída com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com bicarbonato de sódio saturado e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; depois foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados '7/b^ % - 14- sob pressão reduzida. O resíduo foi sujeito a cromatografia em coluna de silica gel com pressão média, eluindo com acetato de etilo:hexano/5:95. O produto desejado foi obtido como um pó branco (3,0 g; 80% de rendimento).

Esp. de massa (m/z): 218. P.f. = 57-59°C.

Análise elementar para CnHi:

Calculada: C, 93,54; H, 6,46;

Encontrada: C, 93,81; H, 6,65. C. Preparação de l-benzil-2-clorometilnaftaleno

Combinaram-se e aqueceram-se 1-benzilnaftaleno (3,0 g; 13,7 mmol), preparado como acima, formaldeído (1,0 g; 35,7 mmol), ácido acético glacial (4,3 g; 71,7 mmol), ácido clorídrico concentrado (6,5 mL) e ácido fosfórico a 85% (4,3 mL) num banho de óleo mantido a 90°C durante 4,5 h. A mistura reaccional foi arrefecida, adicionou-se uma pequena quantidade de água e a extracção foi efectuada com éter dietílico. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com carbonato de sódio (aquoso a 10%) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e depois secos sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi sujeito a cromatografia em coluna de silica gel com pressão média, eluindo com hexano. O produto (1,18 g; rendimento de 32%) foi isolado como um óleo incolor que cristalizou subsequentemente.

Esp. de massa (m/z): 266. P.f. = 57-59°C.

Análise elementar para Ci8Hi5C1:

Calculada: C, 81,04; H, 5,67;

Encontrada: C, 81,24; H, 5,70. -15 (Μη

U 1 D. 4-benzil-l-cianometnaftaleno

Combinou-se l-benzil-2-clorometilnaftaleno (1,14 g; 4,43 mmol) com cianeto de potássio (0,35 g; 1,2 eq.) em dimetil formamida (DMF, 40 mL) e deixou-se com agitação à temperatura ambiente durante três dias. Verteu-se a mistura em água e gelo e deixou-se agitar durante duas horas. A extracção foi efectuada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secos sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo sujeito a cromatografia em coluna de silica gel com pressão média, eluindo com acetato de etilo:hexano/10:90. O produto em epígrafe foi obtido como um sólido cristalino branco (0,23 g; 21% de rendimento).

Esp. de Massa (m/z): 257 P.f. = 124-128°C.

Análise elementar para Q9H15N: H, 5,88; N, 5,44 H, 6,12; N, 5,41

Calculada: C, 88,68;

Encontrada: C, 88,47; E. Preparação de 4-benzil-l-naftilacetamida

Combinaram-se 4-benzil-l-cianometilnaftaleno (0,19 g; 0,7 mmol), como preparado acima, carbonato de potássio (0,2 g; 1,4 mmol) e peróxido de hidrogénio a 30% (0,5 mL) em 3,0 mL de sulfóxido de dimetilo (DMSO) e deixou-se agitar à temperatura ambiente durante uma hora. Adicionou-se água e o produto em epígrafe foi isolado por filtração como um sólido cristalino branco (92 mg; 45% de rendimento). - 16- - 16- l/bU/l i J/lsó&n.

Esp. de Massa (m/z): 275. P.f. = 157-159°C.

Análise elementar para C19H17NO: N, 5,09 N, 4,98

Calculada: C, 82,88; H, 6,22;

Encontrada: C, 82,86; H, 6,30;

Exemplo 2

Preparação do ácido 4-fenoxinaft-l-il acético (Composto B) A. Preparação de l-metil-4-fenoxinaftaleno

Adicionaram-se a um balão de três entradas equipado com um agitador mecânico, 600 mL de piridina (seca sobre crivo molecular), 100 g de 4-bromo-l-metilnaftaleno, 55,6 g de fenol, 83,7 g de carbonato de potássio, 14,9 g de cloreto de cobre (I) e 2 g de cobre bronze. A mistura foi aquecida em refluxo sob atmosfera de azoto durante 72 horas com agitação vigorosa. A mistura reaccional foi arrefecida e vertida em ácido clorídrico diluído e a mistura resultante foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada duas vezes com ácido clorídrico diluído frio, seca sobre sulfato de sódio e filtrada. Após remoção do solvente sob vácuo, o produto foi cromatografado em silica gel com pressão de azoto eluindo com hexano. O produto foi adicionalmente purificado através de destilação fraccionada, obtendo-se 35 g (33%) do desejado intermediário l-metil-4-fenoxinaftaleno a 150°C e a 0,075 torr.

Análise elementar para C17H14O:

Calculada: C, 87,15; H, 6,02

Encontrada: C, 87,13; H, 6,11 -17- I/Lmj B. Preparação de l-bromometil-4-fenoxinaftaleno

Adicionaram-se a 200 mL de tetracloreto de carbono, 20 g do fenoxinaftaleno preparado acima, 15,2 g de N-bromo-succinimida e 100 mg de 2,2’-azobisisobutironitrilo recém destilado. A mistura reaccional foi aquecida e mantida em refluxo com agitação mecânica durante 16 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional e filtrou-se a succinimida precipitada. Após remoção do solvente sob vácuo, o produto foi redissolvido em hexano e filtrado. Nesta nova remoção do solvente, obtiveram-se 17,2 g (72%) de l-bromometil-4-fenoxi-naftaleno como um óleo, que foi subsequentemente utilizado sem purificação adicional. Aplicou-se uma pequena amostra numa placa preparativa de sílica gel e eluíu-se com acetato de etilo e hexano 1:1 para proporcionar uma caracterização.

Análise elementar para CnH^BrO:

Calculada: C, 65,20; H,4,18

Encontrada: C, 64,92; H, 4,21 C. Preparação de l-cianometil-4-fenoxinaftaleno

Dissolveu-se cianeto de sódio (3,7 g; 75 mmol) em DMSO (50 mL, seco sobre crivo molecular). Aqueceu-se a mistura num banho de óleo mantido a 50°C, e adicionaram-se gota a gota 15,7 g (50 mmol) de l-bromometil-4-fenoxinaftaleno, preparado como descrito acima, em 75 mL de DMSO. Após ter-se completado a adição, continuou-se a agitação durante 0,5 h. Elevou-se a temperatura para 70°C e continuou-se a agitação durante 1,0 hora. Desligou-se o banho de óleo e deixou-se com agitação de um dia para o outro. A mistura foi vertida em gelo e extraída com éter. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas sobre sulfato de -18-

<L. ΊΑ/4' /is Ί magnésio. Obteve-se o produto como um sólido cristalino branco (6,24 g; rendimento de 49%). Massa 259. Purificou-se uma amostra para análise por cromatografia de média pressão em sílica gel, eluindo com acetato de etilo:hexano/l :9.

Análise elementar para C18Hi3NO: N, 5,40 N, 5,27

Calculada: C, 83,37; H, 5,05;

Encontrada: C, 83,32; H, 5,17; D. Preparação de ácido 4-fenoxinaftaleno-l-il-acético

Dissolveram-se em 25 mL de dietileno glicol, 500 mg do intermediário cianometilo acima. Após adição de 1 g de hidróxido de potássio dissolvido em 10 mL de água, a mistura foi agitada e aquecida a 85-90°C durante 16 horas. A mistura reaccional foi arrefecida e vertida em ácido clorídrico diluído frio. A mistura foi extraída com acetato de etilo, e a camada orgânica lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi vigorosamente agitada com carbonato de potássio diluído, e a camada aquosa resultante foi separada, acidificada com ácido clorídrico diluído e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada sob vácuo, dando 300 mg (56%) de ácido 4-fenioxinaft-l-il-acético como um sólido amorfo, que foi utilizado sem purificação adicional.

Esp. de massa (m/z): 278 RMN (CDC13) δ (ppm/TMS): 4,1 (s, 2H), 6,9 (d, 1H), 7,1 (d, 2H), 7,2 (t, 1H9, 7,3-7,4 (m, 3H), 7,5 (t, 1H), 7,6 (t, 1H), 8,0 (d, 1H), 8,3 (d, 1H). -19-

Exemplo 3

Preparação de 4-fenoxinaft-l-il-acetamida (Composto C)

Dissolveram-se em 20 mL de cloreto de metileno, 0,250 g do ácido naftilacético preparado como no Exemplo 2 acima. Após arrefecimento da solução num banho de gelo, adicionaram-se 0,090 mL de cloreto de oxalilo e algumas gotas de dimetilformamida. Após 30 minutos o banho de gelo foi removido e deixou-se a reacção atingir a temperatura ambiente ao longo de 30 minutos. O solvente da mistura reaccional foi removido sob vácuo e o produto foi redissolvido em 50 mL de cloreto de metileno, seguido por evaporação sob vácuo, dando o cloreto de naftilacetilo como um óleo. Este produto foi redissolvido em 40 mL de cloreto de metileno e fez-se borbulhar um excesso de amónia durante 15 minutos, à temperatura ambiente. Após agitação de um dia para o outro, o solvente da mistura reaccional foi evaporado sob vácuo. O produto da reacção foi redissolvido em acetato de etilo e lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e carbonato de potássio diluído. A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e filtrada. O solvente foi removido sob vácuo e o produto redissolvido num mínimo de cloreto de metileno. Na diluição até à turvação com hexano e após arrefecimento, obtiveram-se 130 mg (55%) de 4-fenoxinaft-1 -il-acetamida.

P.f.= 119-22°C

Análise elementar para C18H15NO2:

Calculada: C, 77,96; H, 5,45; N, 5,05;

Encontrada: C, 76,99; H, 5,38; N, 4,66. -20-

Utilização Terapêutica de Compostos de Naftilacetamida

Acredita-se que os compostos de naftilacetamida aqui descritos conseguem a sua acção terapêutica benéfica principalmente por inibição directa da sPLA2 humana, e não por actuação como um antagonista na cascata do ácido araquidónico nem de outros agentes abaixo do ácido araquidónico na cascata do ácido araquidónico, tais como 5-lipoxigenases, ciclooxigenases e etc. O método da invenção para inibição da libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 compreende o contacto da sPLA2 com uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto naftilacetamida, seus sais ou um pró fármaco dele derivado. A dose específica de um composto administrado de acordo com esta invenção para obter efeitos terapêuticos ou profiláticos deverá, claro, ser determinada pelas circunstâncias particulares que rodeiam o caso, incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração e o estado a ser tratado. Doses diárias típicas conterão um nível de dosagem não tóxico desde 0,01 mg/kg até 50 mg/kg de peso corporal de um composto activo desta invenção.

Os compostos desta invenção podem ser utilizados num método para tratamento de um mamífero (e.g. um ser humano) para aliviar os efeitos patológicos de choque séptico, síndroma da angústia respiratória do adulto, pancreatite, trauma, asma brônquica, rinite alérgica e artrite reumatóide; compreendendo o referido método a administração ao mamífero do composto naftilacetamida representado pela fórmula (I) numa quantidade terapeuticamente eficaz. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para inibir a libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 e assim inibir ou evitar a .21- U**j cascata do ácido araquidónico e os seus produtos perniciosos. A quantidade terapêutica de composto desta invenção necessária para inibir a sPLA2 pode ser facilmente determinada por toma de uma amostra de fluído corporal e ensaiando-o quanto ao conteúdo de sPLA2 por métodos convencionais.

Formulações Farmacêuticas da Invenção

Como anteriormente notado, os compostos desta invenção são úteis para inibirem a libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2, como o ácido araquidónico. O termo "inibir" pretende significar a prevenção ou redução terapeuticamente eficaz da libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2, pelos compostos da invenção. Com "farmaceuticamente aceitável" pretende significar que o veículo, diluente ou excipiente deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não ser prejudicial ao seu receptor. A formulação farmacêutica é preferencialmente na forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária pode ser uma cápsula ou comprimido por si só, ou um número apropriado de qualquer um deles. A quantidade de ingrediente activo numa forma de dosagem unitária da composição pode variar ou ser ajustada desde 0,1 a 1000 mg ou mais de acordo com o tratamento particular envolvido. Deve ser notado que pode ser necessário fazer variar rotineiramente a dosagem dependendo da idade e do estado do paciente. A dosagem também dependerá da via de administração. O composto pode ser administrado por uma variedade de vias incluindo as oral, aerossol, rectal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular e intranasal. -22- (/Αη

As formulações farmacêuticas da invenção são preparadas por combinação (e.g. mistura) de uma quantidade terapeuticamente eficaz de compostos de naftilacetamida da invenção com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. As presentes formulações farmacêuticas são preparadas por processos conhecidos, utilizando ingredientes bem conhecidos e facilmente disponíveis.

No fabrico das composições da presente invenção, o ingrediente activo será geralmente misturado com um veículo ou diluído por um veículo, ou encerrado num veículo que pode ser sob a forma de cápsula, saqueta, papel ou outro recipiente. Quando o veículo serve como diluente, ele pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido que actua como um veículo, ou pode ser sob a forma de comprimidos, pílulas, pós, lozengos, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou num meio líquido), ou pomada contendo, por exemplo, até 10% em peso do composto activo. Os compostos da presente invenção são preferencialmente formulados antes da administração.

Para as formulações farmacêuticas podem ser utilizados quaisquer veículos conhecidos na arte. Em tais formulações, o veículo pode ser um sólido, líquido ou mistura de um sólido e de um líquido. As formas de formulação sólidas incluem pós, comprimidos e cápsulas. Um veículo sólido pode ser uma ou mais substâncias que também podem actuar como agentes aromatizantes, lubrificantes, solubilizantes, agentes de suspensão, ligantes, agentes de desintegração de comprimidos e material de encapsulação.

Os comprimidos para administração oral podem conter excipientes adequados tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio, conjuntamente com agentes desintegrantes tais como milho, amido, ou -23-

ácido algínico, e/ou agentes ligantes, por exemplo gelatina ou acácia, e agentes lubrificantes tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco.

Nos pós o veículo é um sólido finamente dividido que está misturado com o principio activo finamente dividido. Em comprimidos o ingrediente activo é misturado com um veículo possuindo as propriedades ligantes necessárias, em proporções adequadas e prensado na forma e tamanho desejados. Os pós e comprimidos contêm preferencialmente desde 1 a 99 por cento em peso de ingrediente activo que é o composto inovador desta invenção. Veículos sólidos adequados são carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, tragacanto, metil celulose, carboxime-tilcelulose sódica, ceras com baixo ponto de fusão, e manteiga de cacau.

Formulações na forma de líquidos estéreis incluí suspensões, emulsões, xaropes e elixires. O ingrediente activo pode ser dissolvido ou suspenso num veículo farmaceuticamente aceitável, tal como água estéril, solvente orgânico estéril ou uma mistura de ambos. O ingrediente activo pode com frequência ser dissolvido num solvente orgânico adequado, por exemplo propileno glicol aquoso. Podem ser feitas outras composições por dispersão do ingrediente activo finamente dividido em amido aquoso ou numa solução de carboximetil celulose sódica ou num óleo adequado.

As formulações farmacêuticas de 1 a 8 que se seguem são somente ilustrativas e não se destinam a limitar de qualquer modo o campo da invenção. "Ingrediente activo" refere-se a um composto de acordo com a Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou pró fármaco. 24- i/ΐΑη

Formulação 1 São preparadas cápsulas de gelatina dura utilizando os seguintes ingredientes:

Quantidade (mg/cáDsulai Ingrediente activo 250 Amido, seco 200 Estearato de magnésio 10 Total 460 mg

Formulação 2 É preparado um comprimido utilizando os ingredientes abaixo:

Quantidade ímg/comprimido)

Ingrediente activo 250

Celulose, microcristalina 400

Dióxido de silício, micronizado 10 r

Acido esteárico 5

Total 665 mg

Os componentes são misturados e prensados para formar comprimidos pesando cada um 665 mg. -25-

Formulação 3 É preparada uma solução para aerossol contendo os componentes seguintes:

Peso

Ingrediente activo 0,25

Etanol 25,75

Propulsor 22 (Clorodifluorometano) 74.00

Total 100,00 O composto activo é misturado com etanol e a mistura adicionada a uma porção do propulsor 22, arrefecida a -30°C e transferida para um dispositivo de enchimento. Enchem-se recipientes de aço inoxidável com a quantidade requerida e dilui-se com o propulsor restante. As unidades de válvula são depois colocadas no recipiente.

Formulação 4

Comprimidos, contendo cada um 60 mg de ingrediente activo, são fabricados como se segue:

Ingrediente activo 60 mg

Amido 45 mg

Celulose microcristalina 35 mg

Polivinilpirrolidona (solução a 10% em água) 4 mg

Carboximetilamido sódico 4,5 mg

Estearato de magnésio 0,5 mg

Talco 1 mg

Total 150 mg -26- fs 1

Ο ingrediente activo, ο amido e a celulose são passados através de um crivo de malha N°. 45 U.S. e misturados cuidadosamente. A solução aquosa contendo a polivinilpirrolidona é misturada com o pó resultante, e a mistura é passada através de um crivo de malha N°. 14 U.S. Os grânulos assim produzidos são secos a 50°C e passados através de um crivo de malha N°. 18 U.S. O carboximetil amido de sódio, o estearato de magnésio e o talco, previamente passados através de um crivo de malha N°. 60 U.S., são depois adicionados aos grânulos que, após mistura, são prensados numa prensa para comprimidos para dar comprimidos pesando cada um 150 mg.

Formulação 5 Cápsulas, contendo cada uma 80 mg de ingrediente activo, são fabricadas como se segue: Ingrediente activo 80 mg Amido 59 mg Celulose microcristalina 59 mg Estearato de magnésio 2 mg Total 200 mg O ingrediente activo, a celulose, o amido e o estearato de magnésio são misturados, passados através de um crivo de malha N°. 45 U.S., e enchem-se as cápsulas de gelatina dura com quantidades de 200 mg.

Formulação 6

Supositórios, contendo cada um 225 mg de ingrediente activo, são fabricados como se segue: -27-

Ingrediente activo Gliceridos de ácidos gordos saturados Total 225 mg 2000 mg 2225 mg O ingrediente activo é passado através de um crivo de malha N°. 60 U.S. e é suspenso nos glicéridos de ácido gordo saturado, previamente fundido utilizando o mínimo de calor necessário. A mistura é vertida em moldes de supositórios de capacidade nominal de 2 g e deixada arrefecer.

Formulação 7

Suspensões, contendo cada uma 50 mg de ingrediente activo por dose de 5 mL, são fabricadas como se segue:

Ingrediente activo 50 mg

Carboximetilcelulose sódica 50 mg

Xarope 1,25 mL

Solução de ácido benzóico 0,10 mL

Aroma q.v.

Corante q.v.

Água purificada até totalizar 5 mL O ingrediente activo é passado através de um crivo N°. 45 mesh U.S. e é misturado com a carboximetilcelulose sódica e o xarope para formar uma pasta macia. A solução de ácido benzóico, o aroma e o corante são diluídos com uma parte da água e adicionados com agitação. É depois adicionada água suficiente para produzir o volume requerido. -28-

1

Formulação 8

Pode ser preparada uma formulação intravenosa como se segue:

100 mg 1000 mL

Ingrediente activo Solução salina isotónica A solução dos ingredientes acima é geralmente administrada intravenosamente ao sujeito a um ritmo de 1 mL por minuto.

Ensaios Experimentais

Ensaio Cromogénico

Foi utilizado o seguinte procedimento de ensaio cromogénico para identificar e avaliar os inibidores da fosfolipase A2 humana secretada recombinante. O ensaio aqui descrito foi adaptado para monitorização de alto volume utilizando placas de microtitulação de 96 poços. Uma descrição geral deste método de ensaio é encontrada no artigo "Analysis of Human Synovial Fluid Phospholipase A2 on Short Chain Phosphatidylcholine-Mixed Micelles: Development of a Spectrophotometric Assay Suitable for a Microtiterplate Reader", por Laure J. Reynolds, Lori L. Hughes e Edward A. Dennis, Analytical Biochemistry, 204, pp. 190-197, 1992 (cuja revelação esta aqui incorporada por referência):

Reagentes:

TAMPÃO DA REACÇÃO

CaCl2.2H20 KC1 (1,47 g/L) (7,455 g/L) t -29- LVj

Albumina de Soro Bovino (sem ácidos gordos) (1 g/L) (Sigma A-7030, produto da Sigma Chemical Co., St. Louis

Mo, USA) TRIS HC1 (3,94 g/L) pH 7,5 (ajustado com NaOH)

TAMPÃO DA ENZIMA 0,05 Na0Ac.3H20, pH 4,5 0,2 NaCl

Ajustar o pH para 4,5 com ácido acético DTNB - ácido 5,5’-ditiobis-2-nitrobenzóico DIHEPTANOÍL TIO - PC 1,2-bis(heptanoiltio)-1,2-dideoxi-j«-glicero-3-fosforilcolina TRITON X-100™ preparar a 6,249 mg/mL em tampão da reacção para ficar 10 um MISTURA REACCIONAL-

Um volume medido do diheptanoil tio PC racémico fornecido em clorofórmio a uma concentração de 100 mg/mL é levado à secura e redissolvido na solução aquosa de detergente não iónico TRITON X-100™ 10 milimolar. Adiciona-se à solução o tampão da reacção e depois o DTNB para dar a Mistura Reaccional. A Mistura reaccional assim obtida contém substracto difeptanoil tio PC 1 mM, detergente Triton X-100™ 0,29 mm e DTMB 0,12 mm numa solução aquosa tamponada a pH 7,5. -30- u

J

Procedimento de Ensaio: 1. Adicionar 0,2 mL de mistura reaccional a todos os poços; 2. Adicionar 10 uL de composto teste (ou solvente branco) aos poços apropriados, misturar 20 segundos; 3. Adicionar 50 nanogramas de sPLA2 (10 microlitros) aos poços apropriados; 4. Incubar as placas a 40°C durante 30 minutos; 5. Ler a absorvância dos poços a 405 nanometros com um leitor automático de placas.

Todos os compostos foram testados em triplicado. Os compostos foram tipicamente testados a uma concentração final de 5 ug/mL. Os compostos foram considerados activos quando exibiam 40% de inibição ou mais quando comparados com reacções de controlo não inibidas, quando medido a 405 nanometros. A falta de desenvolvimento de cor a 405 nanometros evidenciava inibição. Os compostos que se verificou serem activos no início foram novamente ensaiados para confirmar a sua actividade e, se suficientemente activos, determinaram-se os valores de IC50. Os valores de IC50 (ver Tabela I, abaixo) foram tipicamente determinados por diluição seriada dos compostos teste em duas séries de modo que a concentração final na reacção variava desde 45 ug/mL até 0,35 ug/mL. Inibidores mais potentes necessitaram diluições significativamente maiores. Em todos os casos, foi determinada a % de inibição, medida a 405 nanometros, gerada pela reacção enzimática contendo inibidores em relação a reacções de controlo sem inibição. Cada amostra foi titulada em triplicado e a média dos valores do resultado foram anotados e calculados os valores da IC50. Os IC50 foram determinados por marcação do log da concentração versus valores da inibição no intervalo de 10-90% de inibição. -31 -

Tabelai

Resultados dos Testes de Inibição da Fosfolipase A2 Humana Segregada

Inibição da PLA2 segregada humana Composto do Exemplo número IC50 μΜ ± desvio médio (3-4 testes) 1. Composto A 0,87 2. Composto B 51 3. Composto C 4,4

Apesar de a presente invenção ter sido acima ilustrada por algumas realizações específicas, não se deve entender que essas realizações devam limitar o alcance da invenção como descrita nas reivindicações anexas.

Lisboa, 2 de Agosto de 2001

Agente Oficial da Propriedade industrial RUA VtCTOR CORDON, 14 1200 USBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto naftilacetamida ou um sal farmaceuticamente aceitável, ou um seu solvato; em que o referido composto é representado pela formula I

que n é um número de 2 a 4 e Y é -CO2H, -P03H2 ou -SO3H; e X é -O- ou -CH2-, em que o referido substituinte não interferente é seleccionado de: em R1 2 3 é hidrogénio, -0(CH2)nY, CH3 t -0(A)nY- -O t/\ ) nY 1 em que: 2 1 2 3 R e R são cada um independentemente hidrogénio ou um substituinte não interferente, com a salvaguarda que pelo menos um de R ou R deve ser hidrogénio; -2-

''ISJ J Ci-C6 alquilo, Ci-C6 alcenilo, CrC6 alcinilo, C7-C12 aralquilo, C7-C12 alcarilo, C3-C8 cicloalquilo, C3-C8 cicloalcenilo, fenilo, toluilo, xilenilo, bifenilo, CrC6 alcoxi, Ci-Ce alceniloxi, Ci-C6 alciniloxi, C2-Ci2 alcoxialquilo, C2-Ci2 alcoxialquiloxi, C2-C12 alquilcarbonilo, C2-C12 alquilcarbonilamino, C2-C12 alcoxiamino, C2-Ci2 alcoxiaminocarbonilo, CrCi2 alquilamino, Cj-C6 alquiltio, C2-C12 alquiltiocarbonilo, Ci-C6 alquilsulfinilo, CrC6 haloalcoxi, Ci-C6 haloalquilsulfonilo, CrC6 haloalquilo, Q-Cô bidroxialquilo, -C(0)0Ci-C6 alquilo, -(CH2)n-0-(Ci-C6 alquilo), benziloxi, fenoxi, feniltio, -(C0NHS02R), -CHO, amino, amidino, bromo, carbamilo, carboxilo, etoxicarbonilo, -(CH2)n-CO2H, cloro, ciano, cianoguanidinilo, flúor, guanidino, hidrazida, hidrazino, hidrazido, hidroxilo, hidroxiamino, iodo, nitro, fosfono, -S03H, tioacetal, tiocarbonilo e Ci-C6 carbonilo; em que n é de 1 a 8; e excluindo o composto 4-benzil-1 -naftilacetamida.
2. Composto de fórmula I como reivindicado na Reivindicação 1 em que R1 e R2 são cada um independentemente hidrogénio ou fenilo e R3 é hidrogénio, -0(CH2)nY, onde néde2a4eYé -C02H, -P03H2 ou S03H.
3. Composição farmacêutica compreendendo um composto naftilacetamida de fórmula I como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2 conjuntamente com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
4. Utilização de um composto naftilacetamida de fórmula I como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2, incluindo o composto acetamida de 4-benzil-1-naftilo, para a manufactura de um medicamento para tratamento de um mamífero para alívio dos efeitos patológicos -3- de choque séptico, síndroma da angustia respiratória no adulto, pancreatite, trauma, asma brônquica, rinite alérgica e artrite reumatóide; em que o referido composto como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2 é em quantidade suficiente para inibir a libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 de modo a inibir ou evitar a cascata de ácido araquidónico e os seus produtos prejudiciais.
5. Utilização de um composto naftilacetamida de fórmula I como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2, incluindo o composto acetamida de 4-benzil-l-nafitilo, para a manufactura de um medicamento para inibição selectiva da libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 em seres humanos.
6. Utilização de um composto naftilacetamida de fórmula I como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2, incluindo o composto acetamida de 4-benzil-l-nafitilo, para a manufactura de um medicamento para tratamento de um mamífero para alívio dos efeitos patológicos de choque séptico, síndroma da angustia respiratória no adulto, pancreatite, trauma, asma brônquica, rinite alérgica e artrite reumatóide.
7. Utilização de um composto naftilacetamida de fórmula I como reivindicado em qualquer uma das Reivindicações 1 e 2, incluindo o composto acetamida de 4-benzil-l-naftilo, para a manufactura de um medicamento para inibição da libertação de ácidos gordos mediada pela sPLA2 em seres humanos. Lisboa, 2 de Agosto de 2001

RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA