PT769491E

PT769491E - Agentes tensioactivos actionicos geminais do tipo dicloridrato alfa,omega-diaminoalquilico de n alfa,n omega-bis(n alfa-acil-arginina) enquanto agentes antimicrobianos

Info

Publication number: PT769491E
Application number: PT96901808T
Authority: PT
Inventors: Infante Martinez-Pard Superior; Lourdes Perez Munoz
Original assignee: Consejo Superior Investigacion
Priority date: 1995-02-09
Filing date: 1996-02-08
Publication date: 2001-04-30
Also published as: ES2092445A1; ES2153089T3; US5994406A; EP0769491A1; ATE197039T1; CA2187508C; EP0769491B1; ES2092445B1; DE69610680D1; GR3035254T3; DE69610680T2; DK0769491T3; WO1996024578A1; CA2187508A1

Description

Descrição “Agentes tensioactivos catiónicos geminais do tipo dicloridrato α,ω -diaminoalquílico de Να,Νω -bis(Na-acil-arginina) enquanto agentes antimicrobianos” [0001] Confoime se sabe, os agentes tensioactivos são moléculas orgânicas que contêm dois grupos funcionais com características opostas. Um agente tensioactivo convencional contém um grupo absorvente (solúvel em água) e um grupo hidrofóbico (insolúvel em água), ambos na mesma molécula. Esta estrutura é conhecida pela designação de estrutura anfifílica.

[0002] Embora presentemente se possa considerar que a indústria tem à sua disposição os agentes tensioactivos de que necessita, razões actuais de natureza ecológica obrigam a pesquisar e a desenvolver novas alternativas que protejam e melhorem o ambiente e a qualidade de vida.

[0003] Foram já realizadas inúmeras modificações estruturais para melhorar a bio-compatíbilidade destes compostos, quer a partir de matérias-primas naturais, tais como os aminoácidos e/ou os açúcares, quer aumentando a interacção hidrofóbica destes compostos, numa tentativa para potenciar a sua actividade superficial e consequentemente a sua eficiência.

[0004] Entre as inúmeras modificações estruturais descritas na literatura, as que a seguir se indica mereceram a nossa atenção, pois são as que originam agentes tensioactivos diméricos ou geminais caracterizados pelo facto de haver na mesma molécula o contacto de duas ou mais cadeias Mdrofóbicas com diversos grupos tónicos. Nas obras publicadas sobre este tema se afirma que tais estruturas reforçam as interacções hidrofóbicas intramoleculares ou intermoleculares, originando consequentemente diferentes agentes tensioactivos altamente eficientes e em alguns casos com excelentes propriedades de solubilidade em meio aquoso.

[0005] Demonstra-se que estes materiais possuem propriedades físico-químicas inesperadas (isto é, um teor em CMC extraordinariamente exíguo e uma grande eficiência absorvente nos agentes tensioactivos) que contribuem consequentemente para optimizar os aspectos ambientais associados aos agentes tensioactivos.

[0006] Entre os agentes tensioactivos geminais iónicos convém realçar os sais de amónio quaternário bicatiónicos, também conhecidos pela designação de bis-SQUAT (o mesmo que bis-QUATS), pelas suas excelentes propriedades antimicrobianas, em especial contra as bactérias Gram-negativas, quando comparados com os mono-SQUAT (o mesmo que mono-QUATS) clássicos. No entanto, uma vez que se traía de sais de amónio quaternários, sabe--se que são resistentes à biodegradação e em consequência é necessário questionar a sua aceitabilidade ecológica.

[0007] A presente invenção tem por objecto resolver este aspecto ao propor a dimerização de agentes tensioactivos catiónicos ecologicamente aceitáveis, tais como os monocatenários e derivados de Να-acil-arginina. A nova estrutura irá apresentar a dupla vantagem de ser eficiente no que diz respeito a superfície (devido à sua estrutura geminai) e à biodegradabilidade (uma vez que é um derivado de um aminoácido).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0008] Embora nas obras já publicadas haja bastantes descrições sobre agentes tensioactivos antimicrobianos com estruturas bicatiónicas geminais, os compostos que constituem o objecto da presente invenção revestem-se de novidade e em nenhuma dessas obras liá

3 referências semelhantes. A novidade da presente invenção é o resultado da combinação de uma mesma molécula com dois resíduos dc Να-acil-arginina numa estrutura geminai mimética dos bis-SQUAT.

[0009] A síntese e o desenvolvimento dos derivado monocatenários de Na-acil--arginina foram levados a cabo pela nossa equipa ao fim de muitos anos de estudo, tendo esta organizado um grande número de resultados e publicações (patente de invenção espanhola n° 512 643, M.R Infante, J. Molinero e P. Erra, JAOCS, Vol.69, n° 7, 1992, J. Molinero, M.R. Φ Julia, P. Erra, M. Robert e M.R. Infante, JAOCS. Vol. 65, n° 6 1988, C. Solans, M.A. Pes, N. Azemar e M.R. Infante, Progr. Colloid Polym. Sei 81, págs. 144-150,1990).

[0010] Por outro lado, desde a década de 50, são conhecidas inúmeras estruturas bifúncionais, do tipo bis-SQUAT ((a) C. A. Bunton, L. Robinson, J. Schaak e M.F. Stam, J.

Grg. Chem., 1971, 36m 2346, (b) R Zana, M. Benrraou e R. Rueff, Langmur, 1991, 7 1072, (c) F. Dvinski, L. Lacko e Timam, J. Colloid Interface Sei., 1991, 143 336, (d) R. Zana e Y.

Talmon, Natuer, 1993, 362 228, (f) H. C. Parreira, E.R. Lukenbach e M.K. Lindemann, J.

Am. Oil. Chem. Soc., 1979, 56, 1015) que podem ser representadas de forma esquemática pela fórmula I estrutural seguinte. CH3 ch3 I | f CH3 - (CH2)x ~ N- CH2 — Y — CH2 - N- (CH2)x - CH3 I i ch3 ch3 X X- em que: o símbolo x representa um número entre 0 e 11, 4

o símbolo Υ representa ((¾)^ NCH3,0 ou S, o símbolo X representa um átomo de Br ou Cl.

[0011] Estes compostos contêm, por molécula, duas cadeias hidrofóbicas, dois grupos de amónio quaternário e uma cadeia separadora Y de natureza alquílica ou heteroatómica.

[0012] O interesse cada vez maior destes agentes tensioactivos bifuncionais é uma consequência das suas invulgares propriedades físico-químicas (elevada eficiência de absorção, um rico polimorfismo básico e uma grande capacidade de auto-adição) que permitem as suas interessantes aplicações em pesquisas biológicas ((a) J. H. Fuhrhop e U. Uman, ‘J. Am. Chem Soe.’, 1984, 106, 4643; (b) C. Tanford, ‘The Hydrophobic Effect’, Wiley, N.I., 1980; (c) M. Lissel, D. Feldman, M. Nir e M. Rabinovitz, ‘Tetrahedron Lett.’, 1989, 30, 1683). Nos documentos ESP-9200443 e WO-A-9316991 estão descritos novos agentes tensioactivos bis--SQUAT caracterizados pelo facto de terem na cadeia separadora uma ponte dissulfureto, ali se afirmando que são aplicáveis principalmente em substratos ceratínicos. No entanto, estes bis-SQUAT contêm realmente grupos amónio quaternário que colocam problemas no que diz respeito à biodegradabilidade.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[0013] A presente invenção diz respeito em particular a uma nova família de agentes tensioactivos diméricos derivados de arginina, de natureza catiónica, satisfazendo à fórmula estrutural representada conforme a seguir se indica: 0 0 ch3 - <CH3)x <CH2)n/2 // //

C - NH - CH - C - NH

I CCH2)j

NH

C / \ nh2 nh2 t

Cl" 2 em que o símbolo x representa um número entre 8 e 14 e o símbolo n representa um número entre 2 e 8.

[0014] Estes compostos reúnem simultaneamente na mesma molécula dois resíduos N^-acil-arginina ligados por meio de uma cadeia separadora alquílica. Foram concebidos de tal modo que o comprimento da cadeia separadora contribui para reforçar as interacções hidrofóbicas intramoleculares ou intermoleculares, conferindo-lhes consequentemente um comportamento diferente no que diz respeito às suas propriedades de absorção e de agregação molecular e proporcionando-lhes também, dado que é catiónica, um comportamento antimicrobiano diferente.

[0015] Sob o ponto de vista estrutural são compostos simétricos e contêm na mesma molécula duas cadeias hidrocafbonadas saturadas ou insaturadas que possuem entre 6 e 20 átomos de carbono, enquanto parte hidrofóbica, ligadas a diversos resíduos do aminoácido arginina, os quais estão interligados por meio de uma cadeia separadora de tipo alquil--diamino. O resíduo de Να-acil-arginina serve de fonte tanto à parte hidrofóbica como ao grupo catiónico. Cada um dos grupos funcionais que faz parte da molécula (ácido gordo, aminoácido, alquil-diamina) está interligado por meio de ligações amida que garantem a estabilidade da molécula no intervalo de valores de pH entre 3 e 9, ao mesmo tempo que a molécula é mais biodegradável em comparação com os já conhecidos bis-SQUAT. Os produtos de hidrólise previsíveis são ácidos gordos, aiginina e uma diamina, não sendo nenhum deles perigoso tanto sob o ponto de vista biológico como sob o ponto de vista ecológico.

[0016] A síntese destes compostos foi realizada em quatro passos: a) formação de uma nitroarginina utilizando como aminoácido de partida L-arg, D-arg ou DL-arg e utilizando o grupo nitro como protector do grupo guanidina da arginina; b) formação de Na-acil-nitroarginina a partir de nitroarginina e do ácido gordo, utilizando cloretos ácidos de óleos lineares que possuam entre 8 a 16 átomos como acilantes da nitroarginina num meio hidroalcoólico; c) formação de Na^ro-bis-lNa-acil-nitroarginina^-diaminoalquilamida a partir de Na-acil-nitroarginina e de um diaminoalquilo, utilizando agentes de condensação tais como o BOP (hexafluorofosfato de benzoIriazo-N-oxi-tris-dimetíl-aminofosfónio) ou DCCD (dicicloxil-carbodiimida); d) formação de dicloridrato de Na,N®-(Na-acil-argtnina)a,m-diaminoalquilainida por meio de uma reacção de hidrogenação catalítica de Na^ro-bis-fNa-acil-nitroarginina)^--diaminoalquilo em Pd/C (paládio sobre carvão) e com uma mistura de metanol/ácido fórmico numa proporção compreendida entre 30% e 50% de ácido fórmico.

[0017] A presente invenção diz respeito a novos compostos tensioactivos bicatiónicos geminais obtidos a partir do aminoácido aigjnina, concebidos especificamente para funcionarem como agentes tensioactivos eficientes e consequentemente para funcionarem como poderosos agentes antimicrobianos. As variações da sua actividade irão ser uma função do comprimento da cadeia gorda c também da cadeia separadora.

[0018] A presente invenção diz respeito a moléculas com as características estruturais a seguir indicadas.

[0019] Os compostos da invenção possuem na mesma molécula duas cadeias hidro-carbonadas gordas, dois grupos catiónicos do tipo guanidina, fornecidos pelos dois resíduos laterais do aminoácido arginina, e uma cadeia separadora de tipo alquílico de comprimento diferente. Estas moléculas, uma vez que são geminais, irão manifestar uma grande sinergia na sua interaeção hidrofóbica, e tendo em conta que são catiónicas irão ter uma actividade específica sobres os microrganismos, actuando como agentes antimicrobianos eficazes, e dado que são derivados de Να-acil-arginina são pois compostos biodegradáveis e compatíveis com o meio ambiente.

[0020] Os compostos da invenção foram preparados com uma pureza de 99%, tendo sido utilizado para o efeito uma via de síntese sistematicamente controlada, partindo de matérias-primas e intermediários a custos sem concorrência.

[0021] A preparação dos produtos finais foi realizada em quatro passos, tal como indicado no diagrama 1 geral.

CH3 - (CH2)η ο //

ΝΗ2 - CH - C I \ (CH2)3 ΟΗ

I ΝΗ Ο // \ C1

Cloreto ácido de alquilo Ο / \\ νη2 ν-νο2 Nitroarginina Μ/

0 0 // // (CH2)3 C - NH 0 1 X <J 1 1 \ t CH3)2 OH I NH C/ \\ nh2 n - no2 Na-alquil-mtroargjnina BOP nh2 - (CH2)„ - nh3 ch3 o 0// // {CH2)2 - C - NH ~ CH - C - NH - tCH3)n/2 I <CH2>3I NH Ic/ \\ nh2 N - N02

Cn(XNA) 2 9 K2<Pci/C)

HCOOH 0 0 // // CH3 - (CK2)x - C - NH - CH - C - NH - (CH2)n/2 (CH2)3 i

NH

C / \ NH2f NH2 HCOO"

Cn(XA)2

Metanol HC1 0 0 // // CK3 - (CH2)x - c - NH - CH - C - NH - (CH2)n/2 t çh2 ) 3 /C\ NH2 + nh2 2 em que: o símbolo x representa um número entre 8 e 14 c o símbolo n representa um número entre 2 e 8.

[0022] A preparação de Να-acil-nitroarginina foi realizada durante os dois primeiros passos, em conformidade com procedimentos já conhecidos. O composto formado por meio da condensação simultânea da diamina alquílica com duas moléculas de Na-acil-nitroarginina é novo, embora tivesse sido obtido utilizando o agente clássico dc condensação BOP.

[0023] A obtenção dos produtos finais foi realizada durante o último passo por hidrogenação catalítica em Pd/C e ácido fórmico.

[0024] Todas estas reacções tiveram lugar a temperaturas baixas e utilizando solventes tais como H20, EtOH, C12CH e ácido fórmico/MeOH.

[0025] Nestas condições é possível isolar os produtos sem dificuldade, mantendo-os estáveis durante todo o processo.

[0026] A purificação do intermediário e dos produtos finais é efectuada por processos de extraeção líquido/líquido, líquido/sólido, cristalização e CLER preparatória [0027] Os compostos sintetizados são agentes tensioactivos catiónicos antimicrobianos de elevada pureza, solúveis em água e estáveis num meio aquoso para valores de pH compreendidos entre 3 e 9 e a temperaturas até 70°C. Têm o aspecto de sólidos brancos muito higroscópicos.

[0028] No que diz respeito aos seus correspondentes monómeros (patente de invenção n° 512 643), os compostos da presente invenção são altamente eficientes em termos de absorção em superfícies aquosas, formam micelas muito facilmente e constituem um avanço importante em termos de actividade antimicrobiana, em especial contra bactérias gram-positivas.

[0029] Os compostos são preparados conforme se disse antes, em quatro passos: a) por meio da reacção seguinte: dissolve-se cloridrato de L-arginina em ácido sulíurico concentrado, numa proporção de 50% em volume, eliminando para a atmosfera ó ácido clorídrico formado; a esta solução junta-se uma quantidade de nitrato de amónio pulverizado e deixa-se reagir durante pelo menos 15 minutos à temperatura ambiente e a seguir elimina-sc o gás entretanto formado, verte-se a mistura sobre gelo moído e arrefece-se para 0°C; ajusta-se o pH da solução para um valor entre 6 e 8 por adição de amónio concentrado e deixa-se ficar à temperatura de 0°C até ter ocorrido a precipitação total do produto, durante aproximadamente 48 horas; filtra-se o precipitado assim formado e deixa-se cristalizar a partir de água quente; b) prepara-se uma solução entre 0,10 e 0,30 molar de mtroarginina e de NaOH numa solução aquosa contendo 20% a 30% de acetona; a seguir acrescenta-se lentamente uma quantidade equimolar de um cloreto de um ácido gordo, mantendo-se o valor do pH compreendido entre 11 e 13 por adição de NaOH; mantém-se a mistura sob agitação durante várias horas e acrescenta-se HC1 até se obter um valor de pH ácido, aparecendo então um precipitado branco que é depois filtrado, lavado com água e com éter e que finalmente se deixa cristalizar a partir de etanol/éter; c) prepara-se uma solução entre 0,30 e 0,50 molar de Na-acil-nitroarginina conjuntamente com um excesso de uma base orgânica de uma amina terciária (trietilamina e ou N-metilmorfolina) em clorofórmio ou então em dimetilformarnida; a esta mistura junta-se o agente BOP de condensação numa concentração compreendida entre 0,30 e 0,50 molar e junta-se também a alquildiamina numa concentração compreendida entre 0,15 e 0,25 molar; mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 15 a 30 horas a uma temperatura compreendida entre 10°C e 25°C e a seguir acrescenta-se éter, aparecendo então o precipitado que depois é lavado várias vezes com éter; d) efectua-se a desprotecção do grupo nitro para se obter os dímeros de Na-acil--aiginina por meio de uma rcacção c hidrogenação catalítica num meio que contém Pd/C e 12 uma mistura de metanol/ácido fónnico numa proporção em que há entre 30% e 50% de ácido fórmico, a uma pressão não inferior a 50,6 bar (50 atm), à temperatura ambiente e durante um período máximo de 24 horas.

Exemplo SÍNTESE DE Nα,Νω-BIS(Na-DECANOÍL-ARGININAja^-DIAMINOBUTILAMID A [C4(KA)2] [0030] Efectua-se a dissolução de quantidades equimolares de nitroarginina (0,0685 M) e de NaOH em 290 mL de uma solução aquosa de acetona a 34% (v/v). A seguir acrescenta-se o mesmo número de moles (0,0685) de cloreto de decanoflo, gota a gota e muito lentamente, efectuando um controlo para que o valor do pH fique sempre compreendido entre 11 e 13, por adição de NaOH. Mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 2 horas e depois de decorrido este período junta-se HC1 até se obter um valor de pH igual a 1, altura em que aparece um precipitado branco. Filtra-se este sólido e lava-se com água até se obter um valor de pH neutro e depois lava-se com éter e deixa-se cristalizar a partir de etanol/éter para proporcionar a Να-decanofi-nitroargmina pura.

[0031] A seguir dissolve-se 0,021 mol de Να-decanoíl-nitroarginina em 50 mL de clorofórmio conjuntamente com 0,050 mol de trietilamina. A esta solução acrescenta-se 0,010 mol de butildiamina e 0,021 mol de BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-N-oxo--tris(diuietnamina)-fosfónio). A mistura de reacção assim obtida é mantida sob agitação durante 24 horas à temperatura ambiente. No dia seguinte junta-se éter a esta mistura, surgindo então um precipitado amarelo e viscoso. Filtra-se e dissolve-se o resíduo em metanol e a seguir deixa-se ficar em repouso durante 24 horas à temperatura de 4°C. Depois de decorrido 13 13.....,? / \sf '' f "jy este período em metanol, obtém-se um resíduo sólido que se filtra ao ar e se lava depois várias vezes num recipiente com éter.

[0032] Consoante a pureza desejada, assim se dissolve a mistura obtida deste modo em ácido fórmico e purifica-se por meio de cristalizações sucessivas a partir de MeOH ou recorrendo então à técnica de CLER preparatória.

[0033] Uma vez purificado o produto C4(KA)2, submete-se a uma hidrogenação catalítica com Pd/C num meio que contém ácido fóimico a uma pressão de 41,3 bar (600 psi) durante 24 horas. Filtra-se a mistura resultante, elimina-se o solvente, dissolve-se o produto em água e liofiliza-se. Deixa-se o sólido obtido cristalizar a partir de MeOH(HCl) éter para se obter consequentemente C4(KA)2 dicloridratado.

Características do produto C4(KA)2: peso molecular: 746; CCF (Si02, butanol/ácido acético/água 42:6:25) Fr 0,64; IV (KBr) 3300 cm1 (NH), 2923 cm'1 (CHf). 1638,1621 cm1 (CO-N amida I), 1546 cm'1 (N-OO amidall) RMN-!H (200 MHz, δ) 0,84 ppm (t, 6H, 2 CH3), 1,2-1,7 ppm (m, 40H, CH2), 2,1 ppm (t, 4H, 2CHA 1,3 ppm (τη, 6H, 4CH?-NH), 4,2 ppm (m, 2H, 2CH1. 7,5-8,5 ppm (14H, 6NR 4NHA RMN-13C (50 MHz, 5) 13,93 ppm (CH3), 22-40 ppm (CH2), 51-90 ppm (CH), 157,42 (C, grupo guanidino), 171,523 (1 HN-C=Q amida), 172,28 (1 HN-C=Q amida).

[0034] As propriedades principais da actividade superficial em solução aquosa a 25°C, que definem o interesse prático da tensão superficial (γ) de um agente tensioactivo para a concentração micelar crítica e a concentração micelar critica (CMC) foram determinadas em conformidade com métodos convencionais. De igual forma efectuou-se a avaliação da 14 actividade antimicrobiana com base nos valores da concentração mínima inibitória (CMI) expressos em pg/mL, em conformidade com as metodologias mais usuais. O quadro 1 indica os valores de γ, CMC e CMI para dois dímeros da mesma série homóloga: C4(KA)2 (x = 8, n = 4) e C4(LA)2 (x = 10, n = 4). Para efeitos de comparação, na mesma tabela são indicados os mesmo valores para os compostos monocatenários KAM e LAM respectivamente. QUADRO 1

Propriedades físico-químicas e antimicrobianas de C4(KA)2, C4(LA)2, KAM e LAM Composto T mN/cm (25°C) CMC (mM) (25°C) 1 2 3 4 5 6 7 c4(KA)2 25 7,8 x 10^ 64 32 16 8 8 8 8 C4(LA)2 25 4,0 x IO-6 >128 32 32 16 16 KAM 30 2 14,1 x 10'5 >128 >128 LAM 30 0 3,7 x 10'5 OO r—< A $ 32 >128 64 64 >128 1. Alcaligenes faecalis ATCC 8750 2. Bordetella bronchiseptica ATCC 3. Streptococcus faecalis ATCC 10541 4. Bacillus subitilis ATCC 6633 5. Staphylococcus auerus ATCC 25178 6. Asíaphylococcus epidermidis ATCC 155-1 7. Micrococcus luteus ATCC 9341

A ϊΜ ® Agente Ofictol da Propriedado tndusfrfaí

Claims

1 Reivindicações 1. Agentes tensioactivos geminais catiónicos do tipo dicloridratos de Na,Nm-bis(Na-acil--arginina) enquanto agentes antimicrobianos com elevada actividade superficial, caracte-rizados pelo facto de possuírem a fórmula estrutural seguinte: o O - (cH2>n/2 CH3 - (CH2)x - // // C-NH-CH-C-NH I (CH2)j I NH I C / \ nh2 nh2 -t cr em que o símbolo x representa um número entre 8 e 14 e o símbolo n representa um número entre 2 e 8.

2. Processo para a obtenção de agentes tensioactivos catiónicos que satisfazem à fórmula estrutural de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelos passos seguintes: a) formação de uma nitroargmina utilizando como aminoácido de partida L-arg, D-arg ou DL-arg e utilizando o grupo nitro como protector do grupo guanidina da arginina; b) formação de Να-acil-nitroaigmina a partir de nitroargmina e do ácido gordo, utilizando cloretos ácidos de óleos lineares que possuam entre 8 a 16 átomos como acilantes da nitroargmina num meio hidroalcoólico; c) formação de No^Nm-bis-lNa-acil-nitroargininajoc^diaminoalquilamida a partir de Na-acil-nitroarginina c de um diaminoalquilo, utilizando agentes de condensação tais como o BOP (hexafluorofosfato de benzotriazo-N-oxi-tris-dimetil-aminofosfónio) ou DCCD (dicicloxilcarbodiimida); d) formação de dicloridrato de Na,Nm-(Na-acil-argmina)^ordiaminoalquilarnida por meio de uma reacção de hidrogenação catalítica de NojNm-bis^a-acil-mfroarginma)^--diaminoalquilo em Pd/C (paládio sobre carvão) e com uma mistura de metanol/ácido fórmico numa proporção compreendida entre 30% e 50% de ácido fórmico. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de se efectuar no passo (a) a reacção seguinte em que se dissolve um cloridrato de L-arginina em ácido sulíurico concentrado, numa proporção de 50% em volume, eliminando para a atmosfera o ácido clorídrico formado; a esta solução junta-se uma quantidade de nitrato de amónio pulverizado e deixa-se reagir pelo menos durante 15 minutos à temperatura ambiente e a seguir elimina-se o gás entretanto formado, verte-se a mistura sobre gelo moído e arrefece-se para 0°C; ajusta-se o pH da solução para um valor entre 6 e 8 por adição de amónio concentrado e deixa-se ficar à temperatura de 0°C até ter ocorrido a precipitação total do produto, durante aproximadamente 48 horas; filtra-se o precipitado assim formado e deixa-se cristalizar a partir de água quente. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de se preparar no passo (b) uma solução entre 0,10 e 0,30 molar de nitroarginina e de NaOH numa 3 solução aquosa contendo 20% a 30% de acetona; a seguir acrescenta-se lentamente uma quantidade equimolar de um cloreto de um ácido gordo, mantendo-se o valor do pH compreendido entre 11 e 13 por adição de NaOH; mantém-se a mistura sob agitação durante várias horas e acrescenta-se HC1 até se obter um valor de pH ácido, aparecendo então um precipitado branco que é depois fillrado, lavado com água e com éter e que finalmente se deixa cristalizar a partir de etanol/éter.

5. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de se preparar no passo (c) uma solução entre 0,30 e 0,50 molar de Να-acil-nitroarginina conjuntamente com um excesso de uma base orgânica de uma amina terciária (trietilamina e ou N--metilmorfolina) em clorofórmio ou então em dimetilformamida; a esta mistura junta-se o agente BOP de condensação numa concentração compreendida entre 0,30 e 0,50 molar e junta-se também a alquildiaminanuma concentração compreendida entre 0,15 e 0,25 molar; mantém-se a mistura de reacção sob agitação durante 15 a 30 horas a uma temperatura compreendida entre 10°C e 25°C e a seguir acrescenta-se éter, aparecendo então um precipitado que depois é lavado várias vezes com éter.

6. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de o passo (d) ser efectuado por meio da desprotecção do grupo nitro para se obter os dímeros de Na-acil--arginina por meio de uma reacção e hidrogenação catalítica num meio que contém Pd/C e uma mistura de metanol/ácido fóimico numa proporção em que há entre 30% e 50% de ácido fórmico, a uma pressão não inferior a 50,6 bar (50 atm), à temperatura ambiente e durante um período máximo de 24 horas. 4

7. Agentes tensioactivos de acotdo com a reivindicação 1, caracterizados pelo facto de possuírem actividade antimicrobiana contra organismos tais como Alcaligenes faecalis, Bordetella bronchiseptica, Streptococcus faecalis, Bacillus subitilis, Staphylococcus auerus, Astaphylococcus epidermidis e Micrococcus luteus. O Agente Oficia) da Propriedade industrial

Rua do A.O.PJ. SaÍ!tre, 195, r/c Qrt. 1250 U5BOA