PT673374E

PT673374E - Composicao farmaceutica contendo compostos do tipo biciclico

Info

Publication number: PT673374E
Application number: PT94902045T
Authority: PT
Inventors: John Morris Evans; Geoffrey Stemp; Neil Upton; Wai Ngor Chan; Robert Nicholas Willette
Original assignee: Smithkline Beecham Plc; Smithkline Beecham Corp
Priority date: 1992-12-11
Filing date: 1993-12-08
Publication date: 2000-07-31
Also published as: EP0673374B1; US5948811A; DE69327965T2; CN1094722A; NZ258611A; JPH11500405A; ATE190055T1; AU679955B2; KR100305149B1; ES2143541T3; CN1059441C; MX9307791A; AU5655894A; WO1994013657A1; SG49907A1; DE69327965D1; HK1012377A1; EP0673374A1; DK0673374T3; JP2003137779A

Description

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DESCRICÃO "Composição farmacêutica contendo compostos do tipo bicíclico" O presente invento refere-se a novos compostos, a processos para a sua preparação e sua utilização como agentes terapêuticos. O pedido de patente Europeia publicado No. 0126311 descreve compostos de benzopirano substituídos com actividade de diminuição da pressão sanguínea, incluindo o 6-acetil-íra/7s-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3-ol.

Em EP-A-0 376 524, EP-A-0 205 292, EP-A-0 250 077, EP-A-0 093 535, EP-A-0 150 202, EP-A-0 076 075 e a WO/89/05808 (Beecham Group pic) descrevem-se alguns derivados de benzopirano que possuem actividade anti-hipertensiva.

Em EP-A-0 350 805 (Biersdorf), EP-A-0 277 611, EP-A-0 277612, EP-A-0 337 179 e EP-A-0 355 565 (Hoechst Aktiengesellschaft); EP-A-0 466 131 (Nissan Chemical Industries Ltd), EP-A-0339562 (Yoshitomi

Pharmaceuticals) EP-A-415 065 (E. Merck) EP-A-450415 (Squibb), EP-A-0482934, EP-A-0296975, JO-2004-791 e WO/89/07103 descrevem-se também alguns derivados de benzopirano que se pensa terem actividade anti-hipertensiva.

Em EP-A-0 430 621 e a EP-A-0 385 584 (Beecham Group pic) descreve-se a resolução de alguns intermediários úteis para a preparação dos compostos descritos nos pedidos de patente acima mencionados.

Em EP-A-0 139 992 (Beecham Group pic) descrevem-se alguns derivados de benzopirano que têm isomerismo cis nas posições 3 e 4, cujos compostos são descritos como tendo actividade anti-hipertensiva.

Em PCT/GB92/01045 (SmithKline Beecham pic; não publicado na data de prioridade) descrevem-se alguns fluorobenzoilamino-benzopiranos, piranopiridinas e tetra-hidronaftalenos em que os substituintes nas posições 3 e

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 2 4 são trans em relação um ao outro. Estes compostos são descritos como tendo, inter alia, uma actividade ansiolítica e anticonvulsiva.

Verificou-se agora, surpreendentemente, que alguns compostos de fórmula (I) (a seguir) possuem actividade anticonvulsiva e pensa-se também que têm utilidade no tratamento, ou prevenção, da ansiedade, mania, depressão, desordens associadas com uma hemorragia subaracnóide ou choque neural, efeitos associados com a privação de substâncias de abuso, doença de Parkinson, psicose, enxaqueca e/ou isquemia cerebral.

Deste modo, o presente invento proporciona um composto de fórmula (I), ou um sal seu derivado farmaceuticamente aceitável:

em que: ou Y é N e R2 é hidrogénio, ou Y é C-F^ em que um de R1 e R2 é hidrogénio e o outro é seleccionado de entre a classe de hidrogénio, cicloalquiloC3_8, alquiloC^ opcionalmente interrompido por oxigénio, ou substituído com hidroxi, alcoxiC^e ou aminocarbonilo substituído, alquilC^gcarbonilo, alcoxiC^gcarbonilo, alquilC^gcarboniloxi, alcoxiCve/ nitro, ciano, halogéneo, trifluorometilo, CF3S ou um grupo CF3-A-, em que A é -CF2-, -CO-, -CH2-, CH(OH), S02, SO, CH2-0 ou CONH ou um grupo CF2H-A'-, em que A' é oxigénio, enxofre, SO, S02, CF2 ou CFH; trifluorometoxi, alquilC^gSulfinilo, perfluoroalquilC2.6sulfonilo, alquilC^ _6sulfonilo, alcoxiC^gSulfinilo, alcoxiC^gSulfonilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, fosfono, arilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo em que qualquer porção aromática é opcionalmente substituída, alquilC^gCarbonilamino, alcoxiC^gcarbonilamino; alquilC^gtiocarbonilo, alcoxiC^gtiocarbonilo, alquilC^gtiocarboniloxi, 1-mercaptoalquiloC2.7, formilo ou aminossulfinilo, aminossulfonilo ou aminocarbonilo, sendo qualquer porção amino opcionalmente substituída com

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 3 um ou dois grupos alquiloC^g, ou alquilC^gSulfinilamino, alquilC^eSulfonílamino, alcoxiCT.gSulfinilamino ou alcoxiCYgSulfonilamino, ou etilenilo substituído na extremidade com alquilC^gcarbonilo, nitro ou ciano ou -CíalquilC^gjNOH ou -CíalquilCT.gJNNHj ou um de R·, e R2 é nitro, ciano, ou alquilC^carbonilo e o outro é metoxi ou amino opcionalmente substituído com um ou dois alquiloC^g ou por alcanoiloC2.7 ; ou Rt e R2 são, em conjunto, (CH2)4- ou -CH = CH-CH = CH-, ou formam um anel triazolo ou oxadiazolo opcionalmente substituídos; um de R3 e R4 é hidrogénio ou alquiloC^ e o outro é alquiloC^, CF3 ou CH2Xa, em que Xa é flúor, cloro, bromo, iodo, alcoxiC^, hidroxi, alquilC^carboniloxi, -S-alquiloC^, nitro, amino opcionalmente substituído com um ou dois grupos alquiloC^; ciano ou alcoxiC-i^carbonilo, ou R3 e R4 em conjunto são polimetilenoC2_5, opcionalmente substituído com alquiloC^; R5 é alquilC-i^carboniloxi, benzoiloxi, 0N02, benziloxi, feniloxi ou alcoxiC^g e R6 e R9 são hidrogénio, ou R5 é hidroxi e R6é hidrogénio ou alquiloC1.2 e R9 é hidrogénio; R7 é heteroarilo ou fenilo; sendo ambos opcionalmente substituídos uma ou mais vezes, independentemente, com um grupo ou átomo seleccionados de entre cloro, flúor, bromo, iodo, nitro, amino opcionalmente substituído uma ou duas vezes com alquiloC^, ciano, azido, alquiloC^, alcoxiC^, trifluorometoxi e trifluorometilo; R8 é hidrogénio, alquiloC^g, OR9 ou NHCOR10, em que R9 é hidrogénio, alquiloCq_6, formilo, alcanoiloC^g, aroilo, ou arilalquiloCT.g e R10 é hidrogénio, alquiloC^g, alcoxiC^g, mono ou dialquilC^gamino, amino, aminoalquiloC1.6, hidroxialquiloC^g, haloalquiloCvg, aciloxiCT.galquiloCT.g alcoxiC^gCarbo-nilalquiloCT.g, arilo ou heteroarilo; sendo o grupo R8-N-CO-R7 cis, em relação ao grupo R5 e X é oxigénio ou NR10, em que R10 é hidrogénio ou alquiloC^g, com a condição de o composto não ser c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 4

Todos os grupos que contêm alquiloC^g, ou alquiloC-1.4, ou alquilo, na fórmula (I) são de preferência seleccionados de entre metilo, etilo, n- e /so-propilo, n-, iso, sec- e ferc-butilo.

Os grupos cicloalquiloC3.8 adequados incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo e ciclo-octilo.

Os substituintes halogéneo incluem flúor, cloro e bromo.

Sempre que aqui for mencionado arilo, este inclui, mas não se limita a, fenilo e naftilo.

Sempre que for aqui mencionado o termo heteroarilo, este inclui um heteroarilo monocíclico de 5 ou 6 membros, ou bicíclico de 9 ou 10 membros, de entre os quais se prefere o heteroarilo monocíclico de 5 ou 6 membros. Para além disso, o heteroarilo monocíclico de 5 ou 6 membros ou bicíclico de 9 ou 10 membros contém de preferência um, dois ou três heteroátomos que são seleccionados a partir da classe de oxigénio, azoto, e enxofre e que, no caso de serem mais que um heteroátomo, são o mesmo ou diferente. Exemplos do heteroarilo monocíclico de 5 ou 6 membros que contém um, dois, ou três heteroátomos que são seleccionados a partir da classe de oxigénio, azoto e enxofre, incluem furilo, tienilo, pirrilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo e tiadiazolilo e piridilo, piridazilo, pirimidilo, pirazolilo e triazolilo. Exemplos preferidos destes grupos incluem furanilo, tienilo, pirrilo e piridilo, em particular 2- e 3-furilo, 2- e 3-pirrilo, 2- e 3-tienilo e 2-, 3- e 4-piridilo. Exemplos de heteroarilos bicíclicos de 9 ou 10 membros que contêm um, dois ou três heteroátomos, que são seleccionados de entre a classe de oxigénio, azoto e enxofre, incluem benzofuranilo, benzotienilo indolilo e indazolilo, quinolilo e isoquinolilo e quinazolilo. Exemplos preferidos destes grupos incluem 2- e 3-benzofurilo, 2- e 3-benzotienilo, e 2- e 3-indolilo e 2- e 3-quínolilo.

Exemplos adequados de grupos de átomos para substituição opcional especialmente de arilo e heteroarilo, incluem um, dois ou três substituintes independentemente seleccionados de entre alquiloC^, alcoxiC^, halogéneo (como flúor, cloro, bromo), hidroxi, nitro, amino, opcionalmente substituído uma 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 5

ou duas vezes com alquiloC^» ciano e SOnH, em que n = 0 a 2.

De preferência, é ciano, acetilo, nitro e etilo. Mais preferencialmente, R·, é acetilo ou etilo.

De preferência R2é hidrogénio.

De preferência R3 e R4 são ambos metilo.

De preferência R5 é hidroxi e R6e Rg são hidrogénio.

Deverá entender-se que quando R7 é fenilo, opcionalmente, independentemente substituído, isso inclui a substituição com 1, 2, 3, 4 ou 5 grupos ou átomos, ligados ao anel fenilo. De preferência, estão ligados 1 ou 2 grupos, ou átomos, ao anel fenilo. Os grupos ou átomos podem estar em qualquer posição em torno do anel fenilo. De igual modo, deve ter-se em conta que quando R7 é heteroarilo opcionalmente, independentemente substituído, isto inclui substituintes em qualquer posição livre em torno da porção heteroarilo. De preferência há 1 ou 2 grupos ou átomos em torno da porção heteroarilo, mais preferencialmente há um grupo, ou átomo, em torno da porção heteroarilo.

De preferência, R7 é 2-, 3-, ou 4-fluorofenilo, fenilo, 2- ou 3-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2-trifluotometilfenilo, 2-nitrofenilo, 2-aminofenilo, 2-clorotiofen-3-ilo, 3-clorotiofen-2-ilo ou 3-cloro-4-fluorofenilo.

De preferência, R7 é fluorofenilo. Mais preferencialmente, R7 é mono-fluorofenilo e ainda mais preferencialmente, R7 é 2-, 3- ou 4-fluorofenilo. Mais preferencialmente R7 é 4-fluorofenilo.

De preferência R8 é hidrogénio

De preferência X é oxigénio

Deverá ter-se em conta que os compostos de fórmula (I) poderão ter átomos de carbono quirais nas posições 2, 3 e 4 e podem, portanto, existir como enantiómeros. 0 presente invento estende-se a cada enantiómero e

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 6 misturas suas derivadas, incluindo racematos. Deve ainda ter-se em conta que as formas enantioméricas particulares são preferidas para diferentes utilidades, e portanto para outras utilidades que não a hemorragia subaracnóide ou choque neural preferem-se os enantiómeros 3S,4S, preferindo-se, no entanto, para hemorragia sub-aracnóide ou choque neural os enantiómeros 3R,4R.

Deverá ter-se em conta que alguns substituintes R, também têm centros quirais e podem, portanto, existir como enantiómeros. O presente invento inclui cada enantiómero e misturas suas derivadas, incluindo racematos.

Deverá ter-se em conta que o composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável inclui também solvatos desses compostos, como por exemplo o hidrato. O presente invento proporciona ainda um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como aqui definido, que existe predominantemente na forma enantiomérica 3S,4S.

Deverá ter-se em conta que o termo "existe predominantemente na forma enantiomérica 3S,4S" significa que há mais de 50% do enantiómero 3S,4S, comparativamente com o enantiómero 3R,4R.

Mais preferencialmente, existe mais de 60% do enantiómero 3S,4S, ainda mais preferencialmente mais de 70% do enantiómero 3S,4S e mais preferencialmente, mais de 80% do enantiómero 3S,4S e ainda mais preferencialmente mais de 90% do enantiómero 3S,4S. Mais preferencialmente há mais que 95% do composto enantiómero 3S,4S, em relação ao enantiómero 3R,4R.

Exemplos de compostos de fórmula (I) são: c/s-( + )-6-acetil-4-(4-fluorobenzoilamino)-3.4-di-hidro-2.2-dimetil-2H-1 -benzopi-ran-3-ol, C7s-6-acetil-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3R-ol,

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 7 c/s-6-acetil-4S-{4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-ciano-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3R-ol, c/s-6-ciano-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-etil-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3R-ol, c/s-6-etil-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3f4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3S- ol, c/s-6-acetil-4S-(2-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(benzoilannino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(2-metilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-acetil-4-(2,3-diclorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3-ol, c/s-6-acetil-4S-(2-trifluorometilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-ben- zopiran-3S-ol, c/s-6-ciano-4R-(3-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3R-ol, c/s-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-6-nitro-2H-1 -benzopiran-3-ol,

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 8 c/s-6-acetil-4S-(2-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(3-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(2-nitrobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(2-aminobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(3-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol, c/s-6-acetil-4S-(2-clorotiofen-3-carbonilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-ben- zopiran-3S-ol, c/s-6-ciano-4-(benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3-ol, c/s-6-acetil-4S-(3-clorotiofen-2-carbonil)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopi-ran-3-ol e c/s-6-acetil-4S-(2-cloro-4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -ben-zopiran-3-ol

Pensa-se que estes compostos, excepto o c/s-6-ciano-4-(4-benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3-ol e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são novos e constituem um aspecto preferido do presente invento. A administração a um mamífero pode ser por administração oral ou parentérica.

Uma quantidade eficaz para tratar as desordens aqui descritas, depende dos factores usuais, como a natureza e gravidade da desordem a ser tratada e o peso do mamífero. No entanto, uma dose unitária terá, usualmente, de 1 a

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 9 1000 mg, adequadamente de 1 a 500 mg, por exemplo uma quantidade na gama de 2 a 400 mg, como por exemplo, 2, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300 e 400 mg de composto activo. As doses unitárias serão normalmente administradas uma ou mais vezes por dia, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 vezes por dia, mais usualmente 1 a 4 vezes por dia, de modo que a dose diária total está normalmente na gama de 1 a 1000 mg, por exemplo de 1 a 500 mg, para um adulto de 70 kg, ou seja na gama de aproximadamente 0,01 a 15mg/kg/dia, mais usualmente de 0,1 a 6 mg/kg/dia, por exemplo 1 a 6 mg/kg/dia.

Do modo mais preferido, o composto de fórmula (I) é administrado na forma de uma composição em dose unitária, tal como uma composição em dose unitária oral, rectal, tópica ou parentérica (especialmente intravenosa).

Estas composições são preparadas por mistura e são adaptadas de forma adequada para administração oral ou parentérica e, como tal, podem ser na forma de comprimidos, cápsulas, preparações líquidas orais, pós, grânulos, losangos, pós reconstituíveis, soluções ou suspensões injectáveis e para infusão, ou supositórios. As composições administráveis oralmente são preferidas, em particular as composições orais moldadas, uma vez que são mais convenientes para utilização geral.

Os comprimidos e cápsulas para administração oral são normalmente apresentados numa dose unitária e contêm excipientes convencionais, como agentes ligantes, agentes de enchimento, diluentes, agentes de compressão, lubrificantes, desintegrantes, corantes, aromatizantes e molhantes. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na arte.

Os agentes de enchimento adequados incluem celulose, manitol, lactose e outros agentes semelhantes. Os desintegrantes adequados incluem amido, polivinilpirrolidona e derivados de amido, como amidoglicolato de sódio. Os lubrificantes adequados incluem, por exemplo, estearato de magnésio. Os agentes molhantes adequados farmaceuticamente aceitáveis, incluem laurilsulfato de sódio. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 10

Estas composições orais sólidas podem ser preparadas por métodos convencionais de mistura, enchimento, compressão ou semelhantes. Podem-se utilizar operações de mistura repetidas para distribuir o agente activo por toda a composição, utilizando grandes quantidades de agentes de enchimento. Estas operações são, obviamente, convencionais na arte.

As preparações líquidas orais podem ser na forma de, por exemplo, suspensões, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, aquosos ou oleosos, ou podem apresentar-se como um produto seco para a reconstituição com água ou outro veículo adequado, antes de utilização. Estas preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes de suspensão, por exemplo, sorbitol, xarope, metilcelulose, gelatina, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras comestíveis hidrogenadas, agentes emulsionantes, por exemplo lecitina, mono-oleato de sorbitano ou goma arábica, veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos como os ésteres de glicerina, propilenoglicol ou álcool etílico; conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de metilo ou propilo, ou ácido sórbico e, se desejado, agentes aromatizantes ou corantes convencionais.

As formulações orais incluem também formulações de libertação sustentada convencionais, como comprimidos ou grânulos com um revestimento entérico.

Para a administração parentérica, as formas de dose unitária fluidas são preparadas contendo o composto e um veículo estéril. O composto, dependendo do veículo e da concentração, pode ser suspenso ou dissolvido. As soluções parentéricas são normalmente preparadas por dissolução do composto num veículo e esterilização por filtração, antes do enchimento num frasco ou ampola adequados e selagem. Com vantagem, os adjuvantes, tais como anestésicos locais, conservantes e agentes tamponantes também são dissolvidos no veículo. A fim de aumentar a estabilidade, a composição pode ser congelada após enchimento no frasco e a água pode ser removida sob vácuo.

As suspensões parentéricas são preparadas substancialmente do mesmo modo, excepto que o composto é suspenso no veículo, em vez de ser dissolvido

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 11 e é esterilizado por exposição a óxido de etileno, antes de ser suspenso no veículo estéril. Com vantagem, inclui-se um agente tensioactivo ou molhante na composição, para facilitar uma distribuição uniforme do composto de acordo com o invento.

Tal como é de prática comum, as composições serão normalmente acompanhadas por orientações escritas ou impressas para utilização no tratamento médico. O presente invento proporciona ainda uma composição farmacêutica para utilização no tratamento e/ou profilaxia da ansiedade, mania, depressão, desordens associadas com uma hemorragia subaracnóide ou choque neural, os efeitos associados com a privação de substâncias de abuso, como cocaína, nicotina, álcool e benzodiazepinas, desordens tratáveis ou evitáveis com agentes anticonvulsivos, como a epilepsia, doença de Parkinson, psicose, enxaqueca e/ou isquemia cerebral, que compreende um composto de fórmula (I) (incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Num outro aspecto, o invento proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) (incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia da ansiedade, mania, depressão, desordens associadas com uma hemorragia subaracnóide ou choque neural, efeitos associados com a privação de substâncias de abuso, como cocaína, nicotina, álcool e benzodiazepinas, desordens tratáveis ou evitáveis com agentes anticonvulsivos, como a epilepsia; doença de Parkinson, psicose, enxaqueca e/ou isquemia cerebral.

Num outro aspecto, o presente invento proporciona uma composição farmacêutica que contém um composto de fórmula (I) (não incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo farmaceuticamente aceitável. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 12

Estas composições podem ser preparadas do modo aqui descrito.

De um modo geral, os compostos de fórmula (I) podem ser preparados a partir dos compostos trans correspondentes, estando os processo para a preparação dos mesmos descritos, de um modo geral, em EP-0126311, EP-0376524, EP-205292, EP-0250077, EP-0093535, EP-0150202, EP-0076075, WO/89/05808, EP-0350805, EP-0277611, EP-0277612, EP-0337179, EP-0339562, EP-0355565, EP-A-415 065 (E. Merck), EP-A-450 415 (Squibb), EP-0466131, EP-A-0482934, EP-A-0296975, JO-2004-791 e WO/89/07103.

Os compostos cis podem ser preparados por processos geralmente descritos, ou análogos aos descritos na EP-A-0139992.

Os compostos de fórmula (I) podem ser também preparados de acordo com os processos descritos por G. Burrell et al, Tet. Letters, 31, 3649-3652 (1990) ou por processos descritos por U. Quast e E. Villhauer, Eur. J. Pharmacol, Molecular Pharmacology Section 245, 165-171 (1993).

Num outro aspecto, o presente invento proporciona um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) (não incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que compreende o tratamento do composto trans correspondente, em que R5 é hidroxi e R8 é hidrogénio, com anidrido sulfónico de trifluorometano num solvente adequado, como a piridina, para se obter o composto c/s-oxazolina de fórmula (II);

(Π) em que todas as variáveis são como definido em relação à fórmula (I), seguido de (i) tratamento ácido utilizando, por exemplo, ácido sulfúrico diluído e (ii) tratamento com base, por exemplo, utilizando solução de bicarbonato de sódio para originar o composto cfs de fórmula (I) e em seguida, se desejado, e na

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 13 ordem adequada, separar quaisquer enantiómeros, convertendo R5 hidroxi noutros grupos de R5 e/ou R8 hidrogénio noutros grupos de R8 e/ou formando um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Deverá entender-se que os compostos c/s-oxazolina de fórmula (II) que não a oxazolina de c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico são novos e constituem, portanto, outro aspecto do presente invento.

As conversões de R5 hidroxi e R8 respectivamente, podem ser realizadas utilizando processos convencionais da arte, em particular utilizando os processos descritos nas patentes acima mencionadas.

Deverá entender-se que os racematos de fórmula (I) podem ser resolvidos, ou que se podem preparar compostos de fórmula (I) purificados do ponto de vista enantiomérico, utilizando processos convencionais da arte e em particular utilizando processos descritos em EP-0430631 e EP-0355584.

Deve ter-se em conta que é preferido que os compostos de fórmula (I) possam ser preparados na forma enantiomérica necessária, por formação de um epóxido puro do ponto de vista quiral, utilizando catalisadores e condições geralmente descritas em WO 91/14694 ou WO 93/17026 e convertendo em seguida os epóxidos no composto desejado de fórmula (I), utilizando os processos aqui descritos.

Os compostos trans de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com os processos descritos em PCT/GB92/01045 ou os compostos trans de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com métodos análogos aos descritos nas patentes acima mencionadas.

Os compostos trans de fórmula (I) em que R5 é hidroxi, R6 é alquiloC^ e Rg é hidrogénio podem ser preparados de acordo com os processos descritos em R. Gericke et aL J. Med. Chem vol. 34, p3074 (1991).

Prepararam-se os compostos seguintes por métodos análogos aos descritos nas publicações de patente acima mencionadas.

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As descrições, exemplos e resultados de testes farmacológicos seguintes ilustram o presente invento:

Descrição 1 c/s-(+J-8-acetil-2-(4-fluorofenil)-3a,9b-di-hidro-4,4-dimetil-4H-1-benzopirano- [4,3-d]oxazolo

Dissolveu-se í/'ar7S-(±.)-6-acetil-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3-ol (exemplo 13 de EP0 126 311B1, 2,0 g) em piridina (30 ml) e agitou-se a solução de -5 a 0°C, sob atmosfera de azoto. Adicionou-se, gota a gota, anidrido sulfónico de trifluorometano (1,74 g) à solução, com agitação, durante 10 minutos. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A piridina foi evaporada sob vácuo e adicionou-se água (50 ml) ao resíduo. A solução foi extractada com diclorometano (50 ml) e a fase orgânica foi lavada com salmoura (50 ml) e seca sobre MgS04 anidro. Por filtração e evaporação obteve-se um produto bruto que foi recristalizado em acetato de etilo-hexano, para originar a oxazolina em título na forma de um sólido branco (1,222 g) de p.f. 185-186°C. RMN (DMSO-d6) δ: 1,30 (s, 3H), 1,56 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 5,05 (d, J = 10Hz, 1H), 5,48 (d, J = 10Hz, 1 h), 6,93 (d, J = 8Hz, 1H), 7,22 (m, 2H), 7,82 (dd, J = 10,2Hz, 1H), 7,93 (m, 2H), 8,05 (d, J = 2Hz, 1H).

Espectro de massa: m/z 339, 324, 268, 123 IR (nujol):1640, 1670 cm'1

Descrição 2

Sulfato de c/s-(_±>6-acetil-4-amino-3-(4-fluorobenzoiloxi)-3,4-di-hidro-2,2-dimetii-2H-1 -benzopirano

Dissolveu-se c/s(jJoxazolina (500 mg) em 1,4-dioxano (40 ml), água (15 ml) e H2S04 5N (12 gotas). A mistura resultante foi deixada a agitar à

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 15 temperatura ambiente durante 2 dias. Ο 1,4-dioxano foi evaporado sob vácuo a 30°C e o produto foi extraído com acetato de etilo (2 x 50 ml). A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 ml), seca (MgS04), filtrada e evaporada. O material residual (500 mg) foi recristalizado duas vezes em acetona/hexano para originar (260 mg) do sal de aminoéster na forma de um sal cristalino branco, p.f. 187°C. RMN (DMSO-d6) Ô: 1.30 (s, 3H), 1,40 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 5,10 (d, J = 4Hz, 1H), 5,60 (d, J = 4Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7Hz, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,90 (m, 3H), 8,48 (s, 1H), 8,98 (s Ig, 2H)

Espectro de massa: m/z 339, 324, 268, 163, 148, 123 IV: 1681, 1732 cm'1

Exemplo 1 c/s-(Ji)-6-acetil-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dímetil-2H-1-benzo- piran-3-ol O composto aminoéster (260 mg) foi dissolvido em 1,4-dioxano (30 ml) e água (20 ml) e adicionou-se NaHC03 (sólido) até se obter um pH 8. Evaporou-se o 1,4-dioxano sob vácuo, a 40°C. O produto foi extraído com acetato de etilo (2 x 50 ml), seco (MgS04), filtrado e evaporado. 0 material residual (250 mg) obtido foi recristalizado em acetona/hexano para originar (150 mg) de c/s(_+Jbenzamida, na forma de um sólido cristalino branco, p.f. 190 °C. RMN (DMSO-d6) Ô: 1.30 (s, 3H), 1,42 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 3,72 (m, 1H), 5,5 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 5,64 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,77 (m, 2H), 8,10 (m, 2H), 8,53 (d, J = 10 Hz, 1H)

Espectro de massa: m/z 358, 339, 324, 203, 123 IV (Nujol): 1620, 1667, 3360, 3400 cm'1

Os exemplos seguintes foram preparados de modo análogo ao do 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 16

composto do exemplo 1, a partir de compostos trans adequados.

Exemplo 2 c/s-6-acetil-4R-{4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3R-ol

p.f. 161 °C

[a]D25 +107,3°, MeOH (c=1,0)

Exemplo 3 c/s-6-acetil-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

p.f. 1 61 °C

[a]D25 -106,1°, MeOH (c=1,0)

Exemplo 4 c/s-6-ciano-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3R-ol

p.f. 105-106°C

[a]D25 +86,9°, MeOH (c=1,0)

Exemplo 5 c/s-6-ciano-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol

p.f. 102-105°C

[a]D25 -79,9°, MeOH (c=1,0)

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Exemplo 6 c/s-6-etil-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3R- ol

p.f. 1 30°C

[a]D25 +51,4°, MeOH (c=1,0)

Exemplo 7 c/s-6-etil-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3S- ol

p.f. 1 30°C

[a]D20 -40,1°(MeOH, c = 1,0)

Exemplo 8 c/s-6-acetil-4S-{2-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

p.f. 176°C

[a]D25 -22,T, MeOH (c=1,0)

Exemplo 9 c/s-6-acetil-4S-(benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzoplran-3S-ol Exemplo 10 c/s-6-acetil-4S-(2-metilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

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Exemplo 11 c/s-6-acetil-4-(2,3-diclorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3-ol

Exemplo 12 c/s-6-acetil-4S-(2-trifluorometilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetll-2H-1-ben- zopiran-3S-ol

Exemplo 13 c/s-6-ciano-4R-(3-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1'benzopiran- 3R-ol

Exemplo 14 c/s-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dlmetll-6-nitro-2H-1-benzopiran-3-ol Exemplo 15 c/s-6-acetil-4S-(2-fluorobenzoilamlno)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

Exemplo 16 c/s-6-acetΐl-4S-(3-fluorobenzoίlamino)-3,4'dl·hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

Exemplo 17 c/s-6-acetil-4S-(2-nitrobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 19

Exemplo 18 c/s-6-acetil-4S-(2-aminobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

Exemplo 19 c/s-6-acetil-4S-(3-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran- 3S-ol

p.f. 110°C

[a]D25 -105,7o, (MeOH c= 1,01)

Exemplo 20 c/s-6-acetil-4S-(2-clorotiofeno-3-carbonilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1- benzopiran-3S-ol

Exemplo 21 cÁs-6-ciano-4-(benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3-ol

Este composto foi preparado como descrito no exemplo 3 de patente US 4,687,779 (1987)

Exemplo 22 c/s-6-acetil-4S-(3-clorotiofen-2-carbonil)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzo- piran-3-ol

Exemplo 23 c/.s-6-acetil-4S-{2-cloro-4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-ben-

zopiran-3-ol p.f. 189°C

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 20 DADOS FARMACOLÓGICOS 1. Teste da interacção social de ratos

Os compostos de fórmula (I), incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser testados quanto à utilidade terapêutica utilizando o processo a seguir descrito:

As propriedades ansiolíticas potenciais são avaliadas utilizando o procedimento de interacção social de ratos, baseado no originalmente descrito por File (1980, J. Neurosci. Methods, 2, 219-238). Neste modelo, os agentes ansiolíticos aumentam selectivamente a interacção social, independentemente de qualquer efeito na actividade locomotora. Método

Colocam-se ratos macho Sprague-Dawley (Charles River, U.K. 250-300 g) em gaiolas individuais durante 3 dias antes do teste. No dia do teste, os animais são agrupados ao acaso em grupos de 8-16 e é-lhes fornecido oralmente um volume de dose oral de 1mg/kg, com várias doses de composto (1-300 mg/kg), ou veículo. Aos 60 min após a dose, os ratos são colocados com um par macho, emparelhado em relação ao peso - e tratamento -(encontram-se pela primeira vez) na caixa de interacção social sob condições de luz forte, não familiares. A caixa é fabricada em perspex branco, de 54 x 37 x 26 cm com um lado frontal em perspex transparente. 0 chão é dividido em 24 quadrados iguais e é iluminado com claridade (115 lux). O tempo despendido (s) em interacção social activa (cheirar, grunhir, seguir, montar, trepar por cima ou passar por baixo, lutar, morder) é pontuado "às cegas" por monitorização remota, como o número de quadrados atravessados (como um índice de locomoção). O erro médio e erro padrão para o tempo despendido em interacção social e o número de quadrados atravessados são então calculados para cada grupo particular de tratamento e as alterações induzidas pelo medicamento são expressas como uma percentagem, ou decréscimo em relação aos valores de 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 21

controlo. Estabelecem-se comparações estatísticas entre os grupos tratados com veículo - e medicamento - utilizando o processo de comparações múltiplas de Dunnett, utilizando uma análise da variância de uma via, significativa.

Os medicamentos são suspensos em metilcelulose a 1 %.

2. TESTE MES O teste do limite máximo de ataque por choque eléctrico (MES) em roedores, é particularmente sensível para a detecção de propriedades anticonvulsivas potenciais1. Neste modelo, os agentes anticonvulsivos elevam o limite dos ataques induzidos electricamente, enquanto que os pró-convulsivos diminuem o limite dos ataques. Método

Agrupam-se ao acaso ratinhos (macho, Charles River, U.K. CD - 1 estirpe, 25-30 g) em grupos de 10 - 20 e é-lhes fornecida oral ou intraperitonealmente um volume de dose de 10 ml/kg com várias doses de composto (0,3 -300 mg/kg), ou veículo. Os ratinhos são em seguida submetidos, 30 ou 60 min após a dose, a um único choque eléctrico (0,1 seg, 50 Hz na forma sinusoidal) administrado através de eléctrodos da córnea. A corrente média e o erro padrão necessários para induzir um ataque tónico em 50% (CC50) nos ratinhos de um grupo particular de tratamento é determinado pelo método "up and down" de Dixon e Mood (1948)2. As comparações estatísticas entre os grupos tratados com veículo - e medicamento - são feitas utilizando o método de Litchfield e Wilcoxon (1949)3.

Nos animais de controlo, a CC50 é normalmente de 14-18 mA. Assim, o primeiro animal no grupo de controlo é submetido a uma corrente de 16 mA. Se não se segue um ataque tónico, a corrente é aumentada para um ratinho subsequente. Se ocorre uma convulsão tónica, a corrente é diminuída, e assim sucessivamente até todos os animais do grupo terem sido testados.

Calcula-se a percentagem de aumento ou decréscimo na CC50 para cada grupo, em comparação com o controlo. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 22

Os estudos são realizados utilizando um gerador de choque de corrente constante Hugo Sachs Electronik, com o controlo do nível de choque totalmente variável entre 0 e 300 mA e utilizam-se normalmente passos de 2 mA.

Os medicamentos são suspensos em metilcelulose a 1 %.

Referências 1. Loscher, W. e Schmidt, D. (1988), Epilepsy Res, 2, 145-181 2. Dixon, W.J. e Mood, A.M. (1948) J. Amer. Stat. Assn., 43, 109-126 3. Litchfield, J.T. e Wilcoxon, F. (1949), J. Pharmacol. Exp. Ther., 96, 99-113

Resultados

Os compostos do exemplo 7 aumentam o limite dos ataques em 105% a 10 mg/kg p.o. e o composto do exemplo 3 aumenta o limite dos ataques em 84%, a 10 mg/kg p.o.

3. Labirinto-X

Os compostos de fórmula (I) incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser testados quanto à sua utilidade terapêutica utilizando o processo a seguir descrito:

Introdução O teste do labirinto-X de ansiedade (Handley e Mithani, 1 984) avalia a resposta exploratória de ratos nativos num meio ambiente que oferece tanto áreas ansiogénicas (braços abertos), como relativamente não ansiogénicas (braços fechados). É portanto postulado que um aumento selectivo na exploração dos braços abertos após o pré-tratamento com o medicamento é indicativo de efeitos ansiolíticos. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 23

Método Ο labirinto-X foi elevado a 70 cm acima do solo e consistia de dois braços encaixados com 45 cm(comprimento) x 15 cm(largura) x 10 cm (altura) e dois braços abertos de 45 x 10 x 1 cm, orientados de forma a que os dois braços de cada tipo ficam opostos um ao outro. Ambos os tipos de braços foram marcados èm duas secções iguais. Colocaram-se os ratinhos no centro do labirinto-X e observaram-se durante um período de 10 minutos, durante os quais se registaram os parâmetros seguintes: 1) número de entradas e tempo de permanência (a) nos braços abertos, (b) nos braços fechados, (c) nas extremidades dos braços abertos e (d) nas extremidades dos braços fechados. 2) o número de secções atravessadas. O impulso evocado pelo medo nos braços abertos excede o que ocorre nos braços fechados e os ratos apresentam tipicamente uma preferência clara pelos braços fechados. Os medicamentos ansiolíticos aumentam o número de entradas e o tempo de permanência na metade exterior dos braços abertos e também a percentagem de entradas e o tempo de permanência na totalidade dos braços abertos. Calcularam-se estas quatro medidas de ansiedade e também o número total de secções atravessadas, para cada animal. Os medicamentos foram administrados intraperitoneal ou oralmente, a grupos de 6 a 12 ratos durante 30 a 60 minutos antes do teste. As comparações estatísticas entre os grupos tratados com veículo e com medicamento foram feitas utilizando um teste "U" de Mann-Whitney (de dois extremos). S.L. Handley e S. Mithani, Arch. Pharmacol., 1984 327 1-5 4. Vasoespasmo cerebral atrasado de cães Mongrel

Os compostos de fórmula (I) incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser testados quanto à sua utilidade terapêutica utilizando os processos a seguir descritos:

Utilizam-se vinte e cinco cães Mongrel macho, com pesos de 9-12 kg nestes estudos. Os animais são acomodados e tratados de acordo com o Guia para o tratamento e utilização de animais de laboratório [Guide for Care and Use 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 24

of Laboratory Animais, publicação DHEW (DHHS) No. (NIH) 85-23, revista em 1985]. Todos os procedimentos utilizando animais de laboratório são aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee of SmithKline Beecham Pharmaceuticals. Cada animal é anestesiado com pentobarbital (35 mg/kg, iv) e colocado numa mesa de operação aquecida, deitado de costas. Todos os animais são em seguida traqueotomizados, paralisados (tubocurarina; 0,1 mg/kg i.v.) e ventilados artificialmente com ar ambiente. O C02 final periódico (etC02) é monitorizado continuamente e realizou-se uma análise periódica aos gases do sangue arterial, a fim de assegurar uma ventilação estável e adequada ao longo de cada experiência. Colocam-se cânulas de polietileno na veia jugular esquerda externa e a artéria e veia femurais direitas para administração do medicamento, monitorização da pressão sanguínea arterial e amostragem de sangue, respectivamente. Faz-se em seguida a ceteterização transfemural da artéria vertebral esquerda através da artéria femural esquerda, utilizando um cateter dacron 5 francês de Lehman (Bard, Tewksbury MA). A anestesia é suplementada conforme necessário com pentobarbital (5 mg/kg, i.v.), antes do período experimental.

Os efeitos dos compostos de acordo com o invento nos vasoespasmos cerebrais agudos são avaliados em 15 cães. Em todos os animais, obtém-se um angiograma de controlo de subtracção digital da artéria espinal anterior e da artéria basilar, após injecção intravertebral de material de radiocontraste (Omnipaque 300). Em cada cão, removem-se 4 ml de fluido cerebrospinal da cisterna dorsal, através de punctura com agulha da membrana atlanto-occipital e injectam-se 4 ml de sangue venoso autólogo. Repete-se um angiograma para cada cão 30 minutos após a administração intracisterna de sangue e identifica-se e quantifica-se um vasoespasmo agudo nas artérias espinais, basilar e anterior. A infusão de veículo (10% de polietilenoglicol 200) durante 30 minutos não tem efeito no vasoespasmo agudo. Obsèrva-se o efeito de uma infusão de 30 minutos dos compostos de teste na reversão do vasoespasmo agudo, nas artérias espinais, basilar e anterior.

Os efeitos dos compostos de acordo com o presente invento são também avaliados no modelo canino crónico de vasoespasmo cerebral atrasado (modelo de duas hemorragias de vasoespasmo cerebral). Neste modelo, obtém-se um angiograma vertebral de controlo e administra-se sangue autólogo intracisterna 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 25

no dia 1 (como acima). No dia 3, a administração intracisterna de sangue é repetida e o vasoespasmo atrasado grave é quantificado angiograficamente no dia 7 em todos os animais. A infusão do veículo (10% de polietilenoglicol 200) durante 60 minutos não tem efeito no vasoespasmo atrasado observado nas artérias espinais basilar e anterior (n = 5). O efeito de uma infusão de compostos de teste na reversão de vasoespasmos cerebrais significativamente atrasados indica que o composto é activo. 5. Os compostos de fórmula (I), incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser testados quanto à sua utilidade terapêutica, utilizando os processos a seguir descritos: 1) Actividade anti-Parkinson

Modelo de rato lesionado com 6-hidroxidopamina

Pode-se utilizar o teste acima, como descrito por Ungerstedt, U, 1971, Acta Physiol. Scand 367, 49-68 e/ou por Ungerstedt, U, 1971, Acta Physiol Scand 367. 69-93, para determinar a actividade anti-Parkinson de compostos de fórmula (I), incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 2) Actividade antipsicótica

Modelo de hiperlocomoção de ratos induzida por anfetaminas

Pode-se utilizar o teste acima, como descrito por Kokkindis L., e Anisman, M, 1980, Psychological Bulletin, 88, 551-579, para determinar a actividade antipsicótica de compostos de fórmula (I), incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 3) Actividade anti-enxaqueca

Depressão de expansão cortical e enxaqueca

Pode-se utilizar o teste acima, como descrito por Wahl et al., 1987, Brain Research, 411, 72-80, para determinar a actividade anti-enxaqueca de

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 26 compostos de fórmula (I), incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 4) Isquemia cerebral a) Teste no gerbo Mongol

As experiências in vivo são realizadas em gerbos Mongóis adultos (Tumblebrook Farm (MA) com pesos de 60-80 g. A isquemia transiente do prosencéfalo é produzida por ligação bilateral da artéria carótida, sob 2,5% de isofluorano com anestesia de 100% de 02, sendo os animais colocados numa almofada de aquecimento, para manter a temperatura a 37°C. As artérias carótidas comuns são expostas e colocam-se molas de aneurisma em ambas as artérias, durante um certo período de tempo, indicado na legenda das figuras. Administrou-se intraperitonealmente PBN dissolvido em solução salina na forma de bolo, 30 min antes da oclusão (pré-tratamento), ou imediatamente após, e mais uma vez a 6 h de reperfusão, seguido da mesma dose b.i.d., durante 2 / dias (pós-tratamento). Para a quantificação dos neurónios CA1, os animais são sacrificados aos 7 dias pós-isquemia e perfusados com formalina tamponada. Os cérebros são removidos, armazenados em formalina durante 3 dias, embebidos em parafina, cortados em secções de 7 μηη de espessura (1,5 - 1 1,9 mm posterior em relação à bregma ) e corados com tionina. Conta-se, para cada animal, o número de neurónios intactos ao longo de um comprimento de 750 μιτι da camada CA1, em ambos os lados do hipocampo de 3 secções.

b) Método MCAO

Obtêm-se três estirpes de ratos macho maduros (SHR) de vendedores comerciais (Taconic Farms, Germantown, NY; Charles River, Danvers, MA e Charles River, respectivamente) de 18 semanas de idade (250-300 g de peso) e estes são acomodados durante 2 a 4 semanas antes de utilização nestes estudos. De modo a verificar que as estirpes de animais estudados são de facto hipertensas e normotensivas, anestesiam-se grupos de animais de cada estirpe com isofluorano a 2% (Anaquest, Madison, W1) e preparam-se cronicamente sob condições assépticas para registo da pressão sanguínea. Introduz-se uma cânula de polietileno na artéria femural (PE60; Clay Adams, Parsippany, NJ) que se estende mesmo até à aorta descendente. A tubagem é conduzida « 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 27

sub-dermicamente desde a artéria e é posta no exterior entre a escápula mesmo por baixo da parte de trás do pescoço e limpa/cheia com solução salina isotónica. As incisões são fechadas utilizando sutura com seda 2-0 e tratadas com unguento de lidocaína a 5% (Astra Pharmaceuticals, Westborough, M.A.). Os animais recuperam da cirurgia/anestesia em 5 minutos. As pressões médias de sangue arterial são registadas 4 a 5 horas após cirurgia, durante 5 min/rato, fazendo a ligação do tubo exteriorizado em cada rato a um transdutor de pressão Statham (P2,3Db; Statham Medicai Instruments. Los Angels, CA) com saída para um polígrafo (Modelo R711:Beckman Instruments, Inc., Fullerton.CA)

Processo de ataque focal

Realiza-se cirurgia MCAO ou cirurgia simulada em ratos SHR, SD sob anestesia com pentobarbital de sódio (65 mg/kg, i.p. e suplementado quando necessário). Todos os animais tinham acesso livre a alimento e água, antes e depois da cirurgia. A temperatura corporal foi mantida em 37°C, utilizando uma almofada de aquecimento ao longo do processo cirúrgico. A cirurgia foi realizada de modo semelhante ao anteriormente descrito (2.4). A superfície dorsal direita da cabeça é rapada e preparada com iodo-povidona e o rato é colocado num dispositivo estereotáxico (David Kopf Instruments, Tujunga, CA) estando o lado da cabeça para cirurgia (direito) voltado para cima. Fez-se uma incisão de 1-2 cm entre a órbita e o canal auditório externo. O músculo temporal é dissecado do crânio e recolhido sem danificar a ligação zigomática ou o nervo mandibular. Sob um microscópio de operação e com irrigação salina faz-se uma craniotomia de 2-3 mm imediatamente rostral, em relação à sutura zigomática-escamosa do crânio. A dura é aberta na artéria, utilizando a ponta modificada de uma agulha de 30-gauge. Para um MCAO direito permanente, utilizando electrocoagulação (Gerador electrocirúrgico Force 2 , Valley Lab. Inc., Boulder, CO), a artéria foi simultaneamente ocludida e cortada dorsalmente em relação ao tracto olfactivo lateral, ao nível da veia cerebral inferior. Coloca-se então um pequeno pedaço de Gelfoam (Upjohn, Kalamazoo, M1) ensopado em solução salina, sobre a craniotomia e o músculo temporal e a pele são fechados em duas camadas. Deixam-se os animais recuperar da anestesia sob uma lâmpada de aquecimento e em seguida são colocados de novo nas suas gaiolas. Os animais são sacrificados 24 horas após o MCAO e os seus cérebros são preparados para avaliação histológica reactiva.

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Medição dos danos da isquemia

Após a avaliação neurologia (24 horas após a cirurgia) os ratos são eutanizados com uma sobredosagem de pentobarbital de sódio. Em 2-3 min os cérebros são removidos e fazem-se seis cortes coronais do prosencéfalo (2 mm de espessura) desde o nível dos bolbos olfactivos até à junção cortico-cerebelar, utilizando um cortador de cérebros de rato [(59); Zivic-Miller Laboratories Inc., Allison Park, PA]. Estes cortes do prosencéfalo são imediatamente imersos numa solução de cloreto de trifeniltetrazólio a 1% (TTC) em tampão fosfato a 37°C, durante 20-30 min (6,78). Os tecidos soltos são então fixados por filtração em formalina tamponada com fosfato a 10%. Os dois lados de cada secção TTC-solta são fotografados a cores, utilizando uma câmara Polaroid. Estas fotografias são analisadas para quantificação dos danos isquémicos utilizando um sistema de análise por imageologia (Amersham RAS 3000; Loats Associates, Inc.). Avaliam-se as alterações morfológicas após a cirurgia em todo o prosencéfalo (um total de 11 superfícies planares) para cada animal. As 11 imagens planares são superfícies planares para cada animal. As 11 imagens planares foram obtidas de cada lado das seis secções de 2 mm de espessura e correspondem aproximadamente a superfícies de 1 mm de secção, de + 5 mm a - 5 mm a partir da bregma (97) e incluem todo o prosencéfalo. Estas imagens de superfície planar (a partir das fotografias) são digitalizadas e utilizadas no Sistema de Análise de Imagens, para determinação planar do tamanho do enfarte e inchaço. Determinam-se dois parâmetros de danos isquémicos devidos a MCAO para cada corte, como descrito anteriormente (2,4,98,122). O "inchaço hemisférico" é expresso como a percentagem de aumento de tamanho do hemisfério ipsilateral (i.e. o lado da cirurgia) em relação ao hemisfério contralateral (normal) e é calculado como:

Percentagem do inchaço = hemisférico Área do Área do hemisfério - hemisfério ipsilateral contralateral x 100 Área do hemisfério contralateral O "tamanho do enfarte" foi expresso como a percentagem de tecido que sofreu enfarte, em relação ao hemisfério contralateral (normal) e é calculado como: 29 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ

Percentagem do tamanho do =_área de enfarte x 100 enfarte hemisférico Área do hemisfério contralateral O inchaço e o tamanho do enfarte são expressos em relação ao hemisfério contralateral (i.e. os danos isquémicos ipsilaterais são normalizados em relação ao hemisfério contralateral normal). Estes parâmetros são determinados para cada corte, a fim de avaliar o perfil dos danos ao longo do prosencéfalo (i.e. o "perfil do prosencéfalo") e para as alterações "totais" no prosencéfalo, utilizando a soma de todos os dados de cortes individuais nestas fórmulas. A ocorrência de edema cerebral associado com o inchaço hemisférico após MCAO foi determinada por comparação do peso húmido/seco, como descrito anteriormente (45,118). Os ratos foram sacrificados com uma sobredosagem de pentobarbítal de sódio 24 horas após cirurgia simulada ou a cirurgia MCAO. Os cérebros são rapidamente removidos, o prosencéfalo é isolado na junção cortical do cerebelo e cortado em dois hemisférios, e cada hemisfério do prosencéfalo é quantificado numa balança química Mettler Types H5 (Mettler Instruments Corp, Hightstown, NJ) em 2 min após a decapitação. Mediu-se o peso seco na mesma escala após secagem do hemisfério num forno a 80°C durante 48-72 horas. Calculou-se o teor de água de cada hemisfério como a diferença entre o peso húmido e seco, como uma fracção percentual relativamente ao peso húmido:

Percentagem do teor = _Peso húmido - Peso seco x 100 em água Peso húmido

Lisboa, 27 ÂBR. 2000

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Claims

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 1/6 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável

em que: ou Y é N e R2 é hidrogénio, ou Y é C-R, em que: ou um de R, e R2 é hidrogénio e o outro é seleccionado de entre a classe de hidrogénio, cicloalquiloC3.8, alquiloC^ opcionalmente interrompido por oxigénio ou substituído com hidroxi, alcoxiC,^ ou aminocarbonilo substituído, alquilC16carbonilo, alcoxiC^carbonilo, alquilC^carboniloxi, alcoxiC^, nitro, ciano, halogéneo, trifluorometilo, CF3S ou um grupo CF3-A-, em que A é -CF2-, -CO-, -CH2-, CH(OH), S02, SO, CH2-0 ou CONH ou um grupo CF2H-A'-, em que A' é oxigénio, enxofre, SO, S02, CF2 ou CFH; trifluorometoxi, alquilC^gSulfinilo, perfluoroalquilC2.6-sulfonilo, alquilCV6sulfonilo, alcoxiC^sulfinilo, alcoxi-C,.6sulfonilo, arilo, heteroarilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, fosfono, arilcarboniloxi, heteroarilcarboniloxi, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo em que qualquer porção aromática é opcionalmente substituída, alquilC^g-carbonilamino, alcoxiC16carbonilamino, alquilC^tiocar-bonilo, alcoxiC^tiocarbonilo, alquilC^gtiocarboniloxi, 1-mercaptoalquiloC2.7, formilo ou aminossulfinilo, aminossulfonilo ou aminocarbonilo, estando qualquer porção amino opcionalmente substituída com um ou dois grupos alquiloC^, ou alquilC^e-sulfinilamino, alquilC^sulfonilamino, alcoxiC^-sulfinilamino ou alcoxiC^eSulfonilamino ou etilenilo substituído na extremidade comalquilC^gCarbonilo, nitro ou ciano ou -CíalquilC^jNOH ou -C(alquilC1.6)NNH2, ou um de R, e R2 é nitro, ciano, ou alquilC^-carbonilo e o outro é metoxi, ou amino opcionalmente substituído com um ou dois alquiloC^ ou com alcanoiloC2. 7; ou Rt e R2 são, em conjunto, (CH2)4- ou -CH = CH-CH = CH-, ou formam um anel triazolo ou oxadiazolo opcionalmente substituído; um de R3 e R4 é hidrogénio ou alquiloC,^ e o outro é alquiloC^, CF3 ou CH2Xa,

84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 2/6 em que Xa é flúor, cloro, bromo, iodo, alcoxiC^, hidroxi, alquilC^carboniloxi, -S-alquiloC^, nitro, amino opcionalmente substituído com um ou dois grupos alquiloC^; cíano ou alcoxiC^carbonilo ou R3 e R4 em conjunto são polimetilenoC2_5, opcionalmente substituído por alquiloC^; R5 é alquiloC^ecarboniloxi, benzoiloxi, 0N02, benziloxi, feniloxi ou alcoxiC^g e R6 e Rg são hidrogénio ou R5 é hidroxi e R6é hidrogénio ou alquiloC^ e R9é hidrogénio; R7 é heteroarilo ou fenilo; estando ambos opcionalmente substituídos uma ou mais vezes, independentemente, com um grupo ou átomo seleccionado de entre cloro, flúor, bromo, iodo, nitro, amino opcionalmente substituído uma ou duas vezes com alquiloC^, ciano, azido, alquiloC^, alcoxiC^, trifluorometoxi e trifluorometilo; R8 é hidrogénio, alquiloC^g, OR9 ou NHCOR10 , em que R9 é hidrogénio, alquiloC^g, formilo, alcanoiloC^e, aroilo, ou arilalquiloC^g e R10 é hidrogénio, alquiloC-,.6, alcoxiC^g, mono ou dialquilC^gamino, amino, aminoalquiloC1.6, hidroxialquiloC^g, haloalquiloC^g, aciloxiC1.6alquiloC1.6( alcoxiC^gcarbonilalquiloC^g, arilo ou heteroarilo; sendo o grupo R8-N-CO-R7 cis em relação ao grupo R5 e X é oxigénio ou NR10, em que R10 é hidrogénio ou alquiloC^g com a condição de o composto não ser c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R, é ciano, acetilo, nitro ou etilo e R2 é hidrogénio.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R3 e R4 são ambos metilo.
4. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, em que R5 é hidroxi e R6 e R7 são hidrogénio. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 3/6
5. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, em que R7 é 2-, 3- ou 4-fluorofenilo, fenilo, 2 ou 3-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo, 2- trifluorometilfenilo, 2-nitrofenilo, 2-aminofenilo, 2-cloro-tiofen-3-ilo, 3- clorotiofen-2-ilo ou 2-cloro-4-fluoro.
6. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 5, em que R8 é hidrogénio.
7. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 6, em que X é oxigénio.
8. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol, em que o composto existe predominantemente na forma enantiomérica 3S, 4S. 9. cis-( + )-6-acetil-4-(4-fluorobenzoilamino)-3.4-di-hidro-2.2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3-ol. 10. c/s-6-acetil-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3R-ol. 11. c/s-6-acetil-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1-benzopiran-3S-ol. 12. c/s-6-ciano-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3R-ol. 1 3. c/s-6-ciano-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol. 14. c/s-6-etil-4R-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3R-ol. 15. c/s-6-etil-4S-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol. 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 4/6 16. c/s-6-acetil-4S-(2-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 1 7. c/s-6-acetil-4S-(benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzo piran-3S-ol. 18. c/s-6-acetil-4S-(2-metilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 19. c/s-6-acetil-4-(2/3-diclorobenzoilamino)'3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3-ol. 20. c/s-6-acetil-4S-(2-trifluorometilbenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil 2H-1 -benzopiran-3S-ol. 21. c/s-6-ciano-4R-{3-fluorobenzoilamino)-3/4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3R-ol. 22. c/s-4-(4-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-6-nitro-2H-1 benzopiran-3-ol. 23. c/s-6-acetil-4S-(2-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 24. c/s-6-acetil-4S-(3-fluorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 25. c/s-6-acetil-4S-(2-nitrobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 26. c/s-6-acetil-4S-(2-aminobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol. 27. c/s-6-acetil-4S-(3-clorobenzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 benzopiran-3S-ol.

28. c/s-6-acetil-4S-(2-clorotiofen-3-carbonilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3S-ol ou c/s-6-acetil-4S-(3-clorotiofen-2-carbonil)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3-ol ou c/s-6-acetil-4S-(2-cloro-4-fluoro-benzoilamino)-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-1 -benzopiran-3-ol.
29. Processo para a preparação de um composto de fórmula (I) como definido na reivindicação 1 (não incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, que compreende o tratamento do composto trans correspondente em que R5 é hidroxi e R8é hidrogénio, com anidrido sulfónico de trifluorometano, para se obter o composto c/s-oxazolina de fórmula (II)

em que todas as variáveis são como definido em relação à fórmula (I), seguido de (i) tratamento ácido, (ii) tratamento com base, para originar o composto cis de fórmula (I) e em seguida, se desejado, e na ordem adequada, separar quaisquer enantiómeros, convertendo R5 hidroxi noutros grupos de R5 e/ou R8 hidrogénio noutros grupos de R8 e/ou formando um seu sal farmaceuticamente aceitável.
30. Compostos c/s-oxazolina de fórmula (II), em que as variáveis são como definido na reivindicação 30, diferentes da oxazolina de c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico.
31. Composição farmacêutica que contém um composto de fórmula (I) (não incluindo o c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzolb]piran-3-ol racémico), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo farmaceuticamente aceitável.
32. Composição farmacêutica para utilização no tratamento e/ou profilaxia de ansiedade, mania, depressão, desordens associadas com uma hemorragia subaracnóide ou choque neural, os efeitos associados com a 84 834 ΕΡ Ο 673 374/ΡΤ 6/6 privação de substâncias de abuso, como cocaína, nicotina, álcool e benzodiazepinas; desordens tratáveis ou evitáveis com agentes anticonvulsivos, como a epilepsia; doença de Parkinson, psicose, enxaqueca e/ou isquemia cerebral, que compreende um composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1 (incluindo c/s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um transportador farmaceuticamente aceitável.
33. Utilização de um composto de fórmula (I), como definido na reivindicação 1, incluindo c/'s-4-benzoilamino-6-ciano-3,4-di-hidro-2,2-dimetil-2H-benzo[b]piran-3-ol racémico, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de ansiedade, mania, depressão, desordens associadas com uma hemorragia subaracnóide, choque neural, efeitos associados com a privação de substâncias de abuso, como cocaína, nicotina, álcool e benzodiazepinas; desordens tratáveis ou evitáveis com agentes anticonvulsivos, como a epilepsia; doença de Parkinson, psicose, enxaqueca e/ou isquemia cerebral. Lisboa, 27. A8R. 2000 Por SMITHKLINE BEECHAM PLC e SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION - O AGENTE OFICIAL -