PT672412E

PT672412E - Utilizacao de 3,4-difenil cromanos para o fabrico de um medicamento para reducao dos niveis de colesterol

Info

Publication number: PT672412E
Application number: PT95300902T
Authority: PT
Inventors: Henry Uhlman Bryant; Jeffrey Alan Dodge
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-02-18
Filing date: 1995-02-14
Publication date: 2000-05-31
Also published as: JPH07258080A; EP0672412A3; EP0976398A3; US6025381A; US5977157A; DE69513708D1; ES2140618T3; EP0672412B1; EP0672412A2; CA2142513A1; US5952364A; GR3032813T3; DK0672412T3; US5453442A; US5472977A; US5482958A; US6011057A; DE69513708T2; US5843976A; ATE187330T1

Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE 3,4-DIFENIL CROMANOS PARA O FABRICO DE UM MEDICAMENTO PARA REDUÇÃO DOS NÍVEIS DE COLESTEROL” A presente invenção relaciona-se com a descoberta de que um grupo de 3,4-(difenil)cromanos são úteis para baixar o colesterol sérico.

Todas as células dos mamíferos necessitam de colesterol como um componente estrutural das suas membranas celulares e para produtos finais não-esteroidais. Contudo, a mesma propriedade que toma o colesterol útil nas membranas celulares, a sua insolubilidade em água, também o toma potencialmente letal. Quando o colesterol se acumula no local errado, por exemplo na parede de uma artéria, não pode ser prontamente mobilizado e a sua presença leva ao desenvolvimento de uma placa aterosclerótica. Demonstrou-se que as concentrações elevadas de colesterol sérico associadas com lipoproteínas de baixa densidade (LDL's) são um dos principais factores no desenvolvimento e progressão da aterosclerose.

Os estrogénios, particularmente quando tomados por via oral, baixam os níveis de LDL no plasma e aumentam os das lipoproteínas de alta densidade (HDL's) benéficas. A terapêutica de longo prazo com estrogénios, contudo, tem sido implicada numa diversidade de patologias, incluindo um aumento no risco de cancro uterino e possivelmente de cancro da mama, fazendo com que muitas mulheres evitem este tratamento.

Regimes terapêuticos sugeridos recentemente que procuram minimizar o risco de cancro, tais como a administração de combinações de progestina e estrogénios, fazem com que o doente sofra derrames. Além disso, a combinação de progestina com estrogénios parece enfraquecer os efeitos de redução de colesterol sérico dos estrogénios. Os efeitos indesejados significativos associados à terapêutica com estrogénios justificam a necessidade de desenvolver terapêuticas alternativas para a hiperlipidemia/ hipercolesterolemia que tenham o efeito desejado na LDL sérica mas não provoquem efeitos indesejados. }

As tentativas para preencher esta necessidade pela utilização de compostos vulgarmente conhecidos como anti-estrogénios que interactuam com um receptor de estrogénios e/ou ligar-se ao que foi designado como o sítio de ligação de anti-estrogénios (AEBS) têm tido êxito limitado, talvez devido ao facto de estes compostos geralmente exibirem um efeito agonista/antagonista misto e estarem sujeitos aos mesmos efeitos adversos associados à terapêutica com estrogénios. A presente invenção é dirigida para a utilização de um composto de fórmula I para o fabrico de um medicamento para a redução dos níveis de colesterol sérico sem os efeitos adversos associados à terapêutica com estrogénios, e assim, proporcionar um tratamento eficaz e aceitável para a hiperlipidemia/hipercolesterolemia.

Em Ind. J. Physiol. Pharmac. vol. 24 n° 1 páginas 43-48 está descrita a utilização de centcromano em ratos imaturos.

A presente invenção relaciona-se com a utilização de um composto de fórmula I -3- / R3

R4 em que R é CrC6 alquilo, Ci-C6 alcoxi, halogéneo, ou trifluorometilo; 1 0 R e R são cada um o mesmo ou diferente grupo CpCé alquilo; n é um número inteiro desde 2 até 6; e R3 e R4 são cada um independentemente Ci-C4 alquilo, ou combinam-se para formar um substituinte seleccionado do que grupo que consiste em pirrolidino, morfolino, piperidino, piperazino, 4-(C|-C6 alquil)piperazino, e 4-fenil-piperazino; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para redução dos níveis de colesterol sérico num ser humano. O presente método inclui ambos o tratamento médico terapêutico e/ou profiláctico, consoante for apropriado.

Os termos químicos gerais utilizados na descrição de um composto de fórmula I têm os seus significados habituais. Por exemplo, o termo "alquilo" por si só ou como parte de outro substituinte significa uma cadeia alifática linear ou ramificada possuindo o número de átomos de carbono referido tal como, por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, pentilo, hexilo, isohexilo, e outros semelhantes. Analogamente, o termo "alcoxi" significa um grupo alquilo -4- com. o número de átomos de carbono referido ligado através de uma ponte de oxigénio incluindo, por exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, n-propoxi, isopropoxi, e outros semelhantes. O termo "halogéneo" inclui bromo, cloro, flúor, e iodo.

Os compostos de fórmula I são conhecidos na arte e essencialmente são preparados através de métodos descritos nas Patentes dos Estados Unidos N°s 3,340,276 e 3,822,287, que são aqui dadas como incorporadas por citação. A Patente U.S. N° descreve, inter alia, os 3,4-difenil-cromanos utilizados nos métodos da presente invenção. Contudo, o processo aí descrito prepara ambos os isómeros cis menos activo ou com actividade negligenciável e os isómeros trans substancialmente mais biologicamente activos desses compostos. No entanto, é preferido utilizar os processos descritos na Patente U.S. N° 3,822,287 para a preparação dos isómeros trans que são utilizados nos métodos da presente invenção.

Os compostos de fórmula I preferidos incluem aqueles em que R é alcoxi, especialmente metoxi, R1 e R2 são cada um Q-Cé alquilo, especialmente metilo, n é 2 ou 3, especialmente 2, e R3 e R4 combinam-se para formar pirrolidino, morfolino, e piperidino, especialmente pirrolidino. Um composto de fórmula I em que é usado cada um dos substituintes especialmente preferidos é conhecido na arte como centcromano.

Embora possa ser utilizada a forma de base livre dos compostos de fórmula I nos métodos da presente invenção, é preferido preparar e usar uma forma de sal farmaceuticamente aceitável. Assim, os compostos utilizados nos métodos desta invenção formam sais de adição de ácidos e de bases -5- farmaceuticamente aceitáveis com uma variedade de ácidos e bases orgânicos e inorgânicos, e incluem os sais fisiologicamente aceitáveis que são frequentemente usados em química farmacêutica. Esses sais também fazem parte desta invenção. Ácidos inorgânicos típicos usados para formar esses sais incluem clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofosfórico, e outros semelhantes. Também podem ser utilizados os sais derivados de ácidos orgânicos, tais como ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil substituídos, ácidos hidroxialcanóicos e hidroxialcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos. Esses sais farmaceuticamente aceitáveis incluem assim acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorba-to, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, isobutirato, fenilbutirato, b-hidroxibutirato, butino-l,4-dioato, hexino-l,4-dioato, caprato, caprilato, cloreto, cinamato, citrato, formato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesila-to, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, pro-pionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bissulfato, pirossulfato, sulfito, bissulfito, sulfonato, benzenossulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobenzenossulfonato, etanossulfonato, 2-hidroxietanos-sulfonato, metanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenossulfonato, xilenossulfonato, tartarato, e outros semelhantes. Um sal preferido é o sal cloridrato.

Os sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados por reacção de um composto de fórmula I com uma quantidade equimolar ou em excesso de ácido. Os reagentes são geralmente combinados num solvente mútuo tal como éter dietílico ou benzeno. O sal normalmente precipita da solução em cerca de uma hora até 10 dias e pode ser -6- isolado por filtração ou o solvente pode ser removido por meios convencionais.

As bases vulgarmente utilizadas para formação de sais incluem hidróxido de amónio e hidróxidos de metais alcalinos e alcalino-terrosos, carbonatos, bem como aminas primárias, secundárias e terciárias alifáticas, diaminas alifáticas. Bases especialmente úteis na preparação de sais de adição incluem hidróxido de amónio, carbonato de potássio, metilamina, dietilamina, etileno diamina e ciclohexilamina.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmula I geralmente têm características de solubilidade acrescida em relação ao composto do qual derivam, e assim são frequentemente mais adequados para formulação como líquidos ou emulsões.

Uma vez preparadas, a forma de base livre ou de sal dos compostos de fórmula I pode ser administrada a um indivíduo necessitado desse tratamento pelos métodos aqui descritos. Os seguintes exemplos de teste não limitativos ilustram os métodos da invenção.

Nos exemplos que ilustram os métodos, foi utilizado um modelo pós-menopáusico em que foram determinados os efeitos de diferentes tratamentos sobre a circulação de lípidos.

Ratos Sprague Dawley fêmeas com setenta e cinco dias de idade (peso na gama de 200 a 225 g) foram obtidos de Charles River Laboratories (Portage, MI). Os animais foram ou ovariectomizados bilateralmente (OVX) ou expostos a um procedimento cirúrgico Sham nos Charles River Laboratories, e então expedidos após uma semana. A chegada, foram mantidos em gaiolas metálicas suspensas em grupos de 3 ou 4 por gaiola e tinham acesso ad libitum a alimento (teor de cálcio de aproximadamente 0,5%) e água durante uma semana. A temperatura ambiente foi mantida a 22,2° ± 1,7°C com uma humidade relativa mínima de 40%. O fotoperíodo na sala foi de 12 horas de luz e 12 horas de escuridão.

Regime de Dosagem e Colheita de Tecidos. Após um período de aclimatação de uma semana (portanto, duas semanas pós-OVX) iniciou-se a dosagem diária com composto de teste. 17a-Etinil estradiol e o composto de teste foram administrados oralmente, a não ser que seja indicado o contrário, como uma suspensão em 20% de ciclodextrina. Os animais foram doseados diariamente durante 4 dias. Após o regime de dosagem, os animais foram pesados e anestesiados com uma mistura de cetamina:Xilazina (2:1, v:v) e foi colhida uma amostra de sangue por punção cardíaca. Os animais foram então sacrificados por asfixia com C02, o útero foi removido através de uma incisão na linha mediana, e foi determinado um peso uterino húmido.

Análise de Colesterol. As amostras de sangue foram deixadas coagular à temperatura ambiente durante 2 horas, e o soro foi obtido após centrifugação durante 10 minutos a 3000 rpm. O colesterol sérico foi determinado usando um ensaio de colesterol de elevado desempenho da Boehringer Mannheim Diagnostics. Sumariamente o colesterol foi oxidado a colest-4-en-3-ona e peróxido de hidrogénio. Fez-se então reagir o peróxido de hidrogénio com fenol e 4-aminofenazona na presença de peroxidase para produzir um corante p-quinono imina, que foi lido espectrofotometricamente a 500 nm. A concentração de colesterol foi então calculada contra uma curva padrão. Todo o ensaio foi automatizado usando uma Biomek Automated Workstation.

Ensaio de Peroxidase em Eosinófílos Uterinos (ΈΡΟ). Os úteros foram mantidos a 4°C até à altura da análise enzimática. Os úteros foram então -8- homogeneizados em 50 volumes de tampão Tris 50 mM (pH - 8,0) contendo 0,005% de Triton X-100. Por adição de 0,01% de peróxido de hidrogénio e 10 mM de o-fenilenodiamina (concentrações finais) no tampão Tris, o acréscimo em absorvância foi monitorizado durante um minuto a 450 nm. A presença de eosinófílos no útero é uma indicação da actividade estrogénica de um composto. A velocidade máxima de um intervalo de 15 segundos foi determinada sobre a porção inicial, linear da curva de reacção.

Origem do Composto: 17a-etinil estradiol foi obtido de Sigma Chemical Co.;, St. Louis, MO.

Influência de Compostos de Fórmula I no Colesterol Sérico e Determinação de

Actividade Agonista/Não-Agonista

Os dados apresentados na Tabela 1 a seguir mostram resultados comparativos entre ratos ovarectomizados, ratos tratados com 17a-etinil estradiol (EE2; uma forma oral disponível de estrogénio), e ratos tratados com um composto da presente invenção (centcromano). Embora o EE2 provocasse um decréscimo no colesterol sérico quando administrado oralmente a 0,1 mg/kg/dia, também exercia uma acção estimuladora no útero de modo que o peso uterino EE2 era substancialmente maior do que o peso uterino de animais de teste ovarectomizados. Esta resposta uterina a estrogénios é bem reconhecida na arte. Não só o composto da presente invenção reduziu substancialmente o colesterol sérico em comparação com os animais de controlo ovarectomizados, como foi inferior a elevação de peso uterino em relação à observada com EE2. Comparado com os compostos estrogénicos conhecidos na arte, o benefício da redução de colesterol sérico sem efeitos estrogénicos acentuados sobre o peso uterino é muito raro e desejável. -9-

Tal como expresso nos dados a seguir, a estrogenicidade também foi avaliada por avaliação da resposta adversa da infiltração de eosinófilos no útero. Os compostos da presente invenção provocaram um acréscimo moderado no número de eosinófilos observados na camada de estroma de ratos ovarectomizados, enquanto que ο EE2 provocou um aumento substancial, esperado na infiltração de eosinófilos.

Os dados apresentados na Tabela seguinte reflectem a resposta de 5 ratos por tratamento.

Tabela 1

Composto Dose mg/kg Peso Uterino (% de aumento vs. OXV) EPO Uterino (V. max) Colesterol Sérico (% de redução vs. OVX) ee2 0,1 244,1 108,2 99,0 Centcromano 0,1 54,1 14,4 43,7 1,0 100,4 52,4 70,3 10,0 79,6 60,8 54,4

Para além dos benefícios demonstrados dos compostos utilizados nos métodos da presente invenção, não foram observados efeitos toxicológicos nocivos (sobrevivência) com qualquer tratamento. A actividade dos ensaios acima indica que os compostos da presente invenção têm potencial no tratamento da proliferação celular dos músculos lisos, particularmente restenose. - 10-

Para a maioria dos métodos da presente invenção, os compostos de Fórmula I são administrados continuamente, desde 1 até 3 vezes por dia.

Tal como utilizado neste contexto, o termo "quantidade eficaz" significa uma quantidade de composto dos métodos da presente invenção que é capaz de baixar o colesterol sérico e inibir os sintomas de vários estados patológicos aqui descritos. A dose específica de um composto administrado de acordo com esta invenção será, é claro, determinado pelas circunstâncias particulares envolvendo o caso incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração, o estado geral do doente, e o estado patológico a ser tratado. Uma dose diária típica conterá um nível de dosagem não-tóxico de desde cerca de 0,5 mg até cerca de 600 mg/dia de um composto da presente invenção. As doses diárias preferidas geralmente serão desde cerca de 15 mg até cerca de 600 mg /dia.

Os compostos desta invenção podem ser administrados por uma diversidade de vias incluindo oral, rectal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Estes compostos preferencialmente são formulados antes da administração, cuja seleccção será decidida pelo médico assistente. Tipicamente, um composto de fórmula I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, é combinado com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável para formar uma formulação farmacêutica.

Os princípios activos totais nessas formulações compreendem desde 0,1% até 99,9% em peso da formulação. Por "farmaceuticamente aceitável" significa-se que o veículo, diluente, excipientes, e/ou sal têm de ser compatíveis com os outros componentes da formulação, e não serem nocivos para quem os recebe. -11 -

As formulações farmacêuticas contendo um composto de fórmula I podem ser preparadas por procedimentos conhecidos na arte usando ingredientes bem conhecidos e prontamente disponíveis. Por exemplo, os compostos de fórmula I podem ser formulados com excipientes, diluentes, ou veículos comuns, e formados em comprimidos, cápsulas, suspensões, pós, e outros semelhantes. Exemplos de excipientes, diluentes, e veículos que são adequados para essas formulações incluem os seguintes: enchimentos e diluentes tais como amido, açúcares, manitol, e derivados silícicos; agentes ligantes tais como carboximetil celulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina, e polivinil-pirrolidona; agentes hidratantes tais como glicerol; agentes desintegrantes tais como carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; agentes para retardar a dissolução tais como parafina; aceleradores de reabsorção tais como compostos de amónio quaternário; agentes tensoactivos tais como álcool cetílico, monoestearato de glicerol; veículos adsorventes tais como caulino e bentonite; e lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio e de magnésio, e polietileno glicóis sólidos.

Os compostos também podem ser formulados como elixires ou soluções para administração oral conveniente ou como soluções adequadas para administração parentérica, por exemplo, pelas vias intramuscular, subscutânea ou intravenosa.

Adicionalmente, os compostos são bem adequados para formulação como formas de dosagem de libertação controlada e outras semelhantes. As formulações podem assim ser constituídas de forma a que libertam o princípio activo só ou preferencialmente num local fisiológico particular, possivelmente ao longo de um período de tempo. Os revestimentos, envelopes, e matrizes - 12- protectoras podem ser feitos, por exemplo, de substâncias poliméricas ou de ceras.

Os compostos de fórmula I geralmente serão administrados numa formulação conveniente. Os seguintes exemplos de formulações são apenas ilustrativos e não têm a intenção de limitar o âmbito da presente invenção.

Formulações

Nas formulações que se seguem, "princípio activo" significa um composto de fórmula I, ou um seu sal.

Formulação 1: Cápsulas de Gelatina

Prepara-se cápsulas de gelatina dura utilizando o seguinte:

Componente Quantidade (mg/cápsula) Princípio activo 0,1 - 1000 Amido, NF 0 - 650 Amido em pó fluível 0 - 650 Fluido de silicone 350 centistokes 0 - 15 A formulação acima pode ser alterada em conformidade com as variações razoáveis apresentadas.

Prepara-se uma formulação para comprimidos usando os componentes a seguir:

Formulação 2: Comprimidos

Componente Quantidade (mg/comprimido) Princípio activo 2,5 - 1000 Celulose, microcristalina 200 - 650 Dióxido de silício, fumado 10 - 650 t Acido estearato 5 - 15

Os componentes são misturados e sujeitos a compressão para formar comprimidos.

Altemativamente, podem ser feitos comprimidos contendo cada um 2,5 - 1000 mg de princípio activo do modo seguinte:

Formulação 3: Comprimidos

Componente Quantidade (mg/comprimido) Princípio activo 25 - 1000 Amido 45 Celulose, microcristalina 35 Polivinilpirrolidona (como 10% em água) solução 4 Carboximetil celulose sódica 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1 O princípio activo, amido, e celulose são passados através de um peneiro N° 45 mesh U.S. e bem misturados. A solução de polivinilpirrolidona é -14- misturada com os pós resultantes que são então passados através de um peneiro N° 14 mesh U.S.. Os grânulos assim produzidos são secos a 50-60°C e passados através de um peneiro N° 18 mesh U.S.. A carboximetil celulose sódica, o estearato de magnésio, e o talco, previamente passados através de um peneiro N° 60 U.S., são então adicionados aos grânulos que, após mistura, sofrem compressão numa máquina para se obter comprimidos.

Suspensões contendo cada 0,1 - 1000 mg de medicamento por dose de 5 mL são feitas como se segue:

Formulação 4: Suspensões

Componente Quantidade (mg/5 mL) Princípio activo 0,1 - 1000 mg Carboximetil celulose sódica 50 mg Xarope 1,25 mg Solução de ácido benzóico 0,10 mL Aroma q.v. Corante q.v. Agua purificada até 5 mL O medicamento é passado através de um peneiro N° 45 mesh U.S. e misturado com a carboximetilcelulose sódica e o xarope para formar uma pasta macia. A solução de ácido benzóico, o aroma, e o corante são diluídos numa parte da água e adicionados, com agitação. É então adicionada água suficiente para produzir o volume necessário.

Prepara-se uma solução de aerossol contendo os seguintes componentes: - 15-

Formulação 5: Aerossol

Componente Quantidade (% em peso) Princípio activo 0,25 Etanol 25,75 Propulsor 22 (Clorodifluorometano) 70,00 O princípio activo é misturado com etanol e a mistura adicionada a uma porção do propulsor 22, arrefecida a 30°C, e transferida para um dispositivo de enchimento. A quantidade necessária é então alimentada a um recipiente de aço inoxidável e diluído com o restante propulsor. As unidades de válvula são então adaptadas ao recipiente.

Prepara-se supositórios como se segue:

Formulação 6: Supositórios

Componente_Quantidade (mg/supositório)

Princípio activo ' 250

Glicéridos de ácidos gordos saturados 2.000 O princípio activo é passado por um peneiro N° 60 mesh U.S. e suspenso nos glicéridos de ácidos gordos saturados previamente fundidos usando o calor necessário mínimo. A mistura é então vertida num molde para supositórios com capacidade nominal de 2 g e deixada arrefecer.

Prepara-se uma solução intravenosa como se segue: - 16-

Fonnulacão 7: Solução intravenosa

Componente Quantidade Princípio activo 50 mg Soro fisiológico isotónico 1.000 mL A solução dos componentes acima é administrada intravenosamente a um doente a um caudal de cerca de 1 mL por minuto.

Lisboa, 11 de Fevereiro de 2000

Agente Oficial da Propriedade Industriai RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto de fórmula I

em que R é CrC6 alquilo, CrC6 alcoxi, halogéneo, ou trifluorometilo; R1 eR1 são cada um o mesmo ou diferente grupo C]-C6 alquilo; n é um número inteiro desde 2 até 6; e R2 e R3 são cada um independentemente C1-C4 alquilo, ou combinam-se para formar um substituinte seleccionado do que grupo que consiste em pirrolidino, morfolino, piperidino, piperazino, 4-(Ci-C6alquil)piperazino, e 4-fenil-piperazino; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para redução dos níveis de colesterol sérico num ser humano. 1 Utilização de acordo com a reivindicação 1 em que o composto de fórmula I é um composto em que
2 R é metoxi; 3 R1 e R1 são cada um metilo; e -2- ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
3. Utilização de acordo com a reivindicação 2 em que R3 e R4 do referido composto de fórmula I são cada um etilo, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Utilização de acordo com a reivindicação 2 em que R3 e R4 do referido composto de fórmula I se combinam para formar um grupo pirroli-dino, piperidino, ou morfolino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
5. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 2 a 4 em que o referido sal é o sal cloridrato. Lisboa, 11 de Fevereiro de 2000

JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA