PT637334E - Péptidos possuindo uma actividade de factor de permuta de gdp, sequências de ácidos nucleicos codificando esses péptidos, preparação e utilização. - Google Patents

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DESCRIÇÃO "PÉPTIDOS POSSUINDO UMA ACTIVIDADE DE FACTOR DE PERMUTA DE GDP, SEQUÊNCIAS DE ÁCIDOS NUCLEICOS CODIFICANDO ESSES PÉPTIDOS, PREPARAÇÃO E UTILIZAÇÃO" A presente invenção refere-se a novas sequências peptidicas e nucleotidicas, e a sua utilização farmacêutica. Mais particularmente, a invenção refere-se a péptidos capazes de modular os niveis de permuta do GDP nos complexos p21-GDP.

Os produtos dos genes ras, geralmente designados proteínas p21, desempenham um papel chave no controlo da divisão celular em todos os organismos eucarióticos onde foram investigados. Determinadas modificações específicas destas proteínas fazem com que percam o seu controlo normal e conduzam-nas a tornarem-se oncogénicas. Assim, um grande número de tumores humanos foi associado à presença de genes ras modificados. Do mesmo modo, uma sobre-expressão destas proteínas p21 pode conduzir a uma desregulação da proliferação celular. A compreensão do papel exacto destas proteínas p21 nas células, do seu modo de funcionamento e das suas características constituem então um aspecto importante para a compreensão e abordagem terapêutica da carcinogénese.

In vivo, não se conhece ainda a natureza exacta dos eventos responsáveis da activação das proteínas p21. É sabido que exercem as suas funções oscilando entre dois estados conformacionais; uma forma inactiva ligada ao GDP e uma forma activa ligada ao GTP, mas os factores envolvidos na transição entre estas duas formas não estão claramente identificados. 1

Estudos recentes descrevem situações fisiológicas durante as quais a proporção de proteínas ras ligadas a GTP aumenta na célula. Estas situações compreendem a activação de linfócitos T e a estimulação de fibroblastos 3T3 por factores de crescimento, incluindo o EGF e o PDGF (Downward et al., Nature 346 (1990) 719; Gibbs et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 20437). O aumento na proporção de p21-GTP pode ser explicado, pelo menos em parte, pela acção de uma proteína que desempenha um papel análogo àquele de um receptor das proteínas G de transdução. A este respeito foram identificadas determinadas proteínas capazes de promover a permuta do GDP nas proteínas p21, a partir de cérebro de boi [West et al., FEBS Lett. 259 (1990) 245] e cérebro de rato [Wolfman e Maçara, Science 248 (1990) 67] . A localização celular distinta destes factores e as condições experimentais muito diferentes daquelas que foram obtidas, sugerem que se tratam de proteínas diferentes. Elas são também activas nas proteínas ras normais e naquelas que são oncogénicas. Estas actividades são reagrupadas sob o termo GEF: Factor de Permuta de nucleótidos de Guanidina ou GRF.

Na levedura Saccharomyces cerevisiae, a actividade de GRF foi atribuída ao produto do gene CDC25 [Camonis et al., EMBO J. 5_ (1986) 375] , e foram realizados estudos a fim de compreender a via de sinalização em que intervém o produto dos genes CDC25, RAS1 e RAS2 por um lado e a adenilato ciclase por outro, em levedura Saccharomyces cerevisiae. Em particular, numerosos estudos focalizaram-se na caracterização do produto do gene CDC25 que era o elemento menos conhecido desta cadeia. 0 produto do gene CDC25 constitui o elemento mais a montante na cascata de reacções que conduzem à activação de p21 em levedura. Os trabalhos realizados neste domínio contribuíram para demonstrar que o produto deste gene deve agir como factor de permuta de GDP -> GTP para activar as proteínas ras. Um segundo gene da 2 levedura S. cerevisiae, SDC25, estruturalmente muito semelhante a CDC25, foi isolado e caracterizado. 0 domínio activo de SDC25 parece ser um factor de permuta capaz de actuar ín vítro e in vivo nas proteínas ras. Este domínio constitui o primeiro constituinte molecular descrito dotado desta actividade.

Muito recentemente, uma proteína de tipo GRF foi igualmente posta em evidência em murganhos [Vanoni e Martegani, J. Cell. Bioch. Suppl. 16B (1992) 220]. Foi descrita a purificação de uma proteína de origem bovina, denominada rho GDI (Inibidor da Dissociação de GDP) que regula a permuta GDP-GTP da proteína rho (Fukumoto et al.r Oncogene (1990), 5, pp. 1321), assim como a clonagem de uma proteína de origem bovina, denominada smg p25A GDI (Inibidor da Dissociação de GDP) que regula a permuta GDP-GTP da proteína smg p25A (Matsui et al., Molecular and Cellular Biology (Ago. 1990) p. 41116-41122) .

Contudo, até à data, nenhuma actividade de GRF foi isolada e caracterizada no homem. A presente invenção resulta precisamente da demonstração pela requerente da existência de um factor humano de permuta do GDP. A presente invenção resulta, mais particularmente, da identificação, do isolamento e da caracterização de péptidos e de sequências de nucleótidos de origem humana, designadas hGRF e hSOS, capazes de modular o estado de activação das proteínas p21.

Um primeiro aspecto da invenção consiste, portanto, em péptidos que podem ser utilizados farmaceuticamente. Mais especialmente, um objectivo da invenção encontra-se em péptidos capazes de modular os níveis de permuta do GDP nos complexos p21-GDP. É compreendido que p21 designa qualquer produto da expressão de um gene ras normal ou oncogénico. 3

Mais particularmente, os péptidos da invenção são escolhidos a partir de toda ou parte das sequências SEQ ID N° 2, 3, 4, 6 ou 8, ou de um derivado das mesmas.

No âmbito da presente invenção, o termo derivado designa qualquer molécula obtida por modificação de natureza genética e/ou química destas sequências e que conserva a actividade desejada. Por modificação de natureza genética e/ou química, deve ser entendida qualquer mutação, substituição, delecção, adição e/ou modificação de um ou mais resíduos. Esses derivados podem ser produzidos para objectivos diferentes, tais como particularmente para aumentar a afinidade do péptido para o seu sítio de interacção, melhorar os seus níveis de produção, aumentar a sua resistência a proteases, aumentar a sua eficácia terapêutica ou reduzir os seus efeitos secundários, ou conferir novas propriedades farmacocinéticas e/ou biológicas.

Numa forma de realização particular da invenção, os péptidos da invenção são os péptidos capazes de estimular a permuta do GDP no complexo p21-GDP.

Noutra forma de realização particular da invenção, os péptidos da invenção são os péptidos capazes de retardar ou inibir a permuta do GDP no complexo p21-GDP. Esses péptidos são, de um modo preferido, os péptidos capazes de antagonizar a interacção do factor de permuta do GDP no complexo p21-GDP. Podem-se assim tratar de fragmentos das sequências acima mencionadas ou derivados das mesmas. Esses fragmentos podem ser produzidos de formas diferentes. Em particular, podem ser sintetizados por via química, com base nas sequências apresentadas no presente pedido, utilizando sintetizadores de péptidos conhecidos do especialista na técnica. Podem ser igualmente sintetizados por via genética, por expressão num hospedeiro celular de uma sequência nucleotídica codificante do 4 péptido desejado. Neste caso, a sequência nucleotídica pode ser preparada quimicamente utilizando um sintetizador de oligonucleótidos, com base na sequência peptidica apresentada no presente pedido e no código genético. A sequência nucleotídica pode igualmente ser preparada a partir de sequências apresentadas no presente pedido (SEQ ID N° 1, 5 e 7), por clivagens enzimáticas, ligação, clonagem, etc., de acordo com as técnicas conhecidas do especialista na técnica, ou através de rastreio de bibliotecas de ADN com sondas produzidas a partir destas sequências. Além disso, os péptidos da invenção capazes de retardar ou de inibir a permuta de GDP no complexo p21-GDP podem igualmente ser péptidos que têm uma sequência correspondente ao sítio de interacção do factor de permuta no complexo p21-GDP.

Um outro objectivo da invenção encontra-se em anticorpos ou fragmentos de anticorpos policlonais ou monoclonais dirigidos contra um péptido como acima definido. Esses anticorpos podem ser produzidos através de métodos conhecidos do especialista na técnica, tendo em conta os ensinamentos apresentados no presente pedido. Em particular, estes anticorpos podem ser preparados através de imunização de um animal contra um péptido da invenção, recolha de sangue e isolamento dos anticorpos. Estes anticorpos podem igualmente ser produzidos através da preparação de hibridomas de acordo com as técnicas conhecidas do especialista na técnica.

De um modo mais preferido, os anticorpos ou fragmentos de anticorpos da invenção possuem a capacidade de inibir, pelo menos parcialmente, a interacção do factor de permuta com o complexo p21-GDP. Podem ser assim utilizados para regular o estado de activação do produto de genes ras. 5

Além disso, estes anticorpos podem igualmente ser utilizados para detectar e/ou dosear o factor de permuta do GDP humano em amostras biológicas, e consequentemente proporciona informação cerca do estado de activação do produto de genes ras. A presente invenção permite portanto produzir péptidos derivados de sequências SEQ ID N° 2-4, 6 e 8, assim como anticorpos dirigidos contra estes péptidos, possuindo propriedades biológicas interessantes na perspectiva de uma utilização farmacêutica. A actividade biológica dos diferentes péptidos e anticorpos da invenção sobre a permuta do GDP pode ser avaliada de formas diferentes, como ilustrado nos exemplos. A invenção proporciona igualmente compostos não peptidicos ou não exclusivamente peptidicos utilizáveis do ponto de vista farmacêutico. É de facto possível, a partir de motivos proteicos activos descritos no presente pedido, produzir moléculas inibidoras da via de sinalização dependente de proteína rãs, não exclusivamente peptídicas e compatíveis com uma utilização farmacêutica. A este respeito, a invenção refere-se à utilização de um polipéptido da invenção, tal como acima descrito, para a preparação de moléculas não peptídicas ou não exclusivamente peptídicas, farmacologicamente activas sobre os níveis de permuta do GDP, para determinação dos elementos estruturais deste polipéptido que são importantes para a sua actividade e reprodução destes elementos por estruturas não peptídicas ou não exclusivamente peptídicas. A invenção tem também como objecto, composições farmacêuticas compreendendo uma ou mais moléculas assim preparadas. A presente invenção tem igualmente como objecto qualquer sequência de ácidos nucleicos codificante de um polipéptido, tal como acima definido. De um modo mais preferido, trata-se de uma sequência escolhida a partir de: 6 (a) toda ou parte das sequências SEQ ID N° 1, 5 ou 7, ou da sua cadeia complementar, (b) qualquer sequência que híbrida com uma sequência (a) e codificante de um polipéptido de acordo com a invenção, e (c) as sequências derivadas a partir das sequências (a) e (b) como resultado da degenerescência do código genético.

As diferentes sequências nucleotídicas da invenção podem ser de origem artificial ou não. Podem ser sequências genómicas, de ADNc, de ARN, sequências híbridas ou sequências sintéticas ou semi-sintéticas. Estas sequências podem ser obtidas, por exemplo, através de rastreio de bibliotecas de ADN (biblioteca de ADNc, biblioteca de ADN genómico) através de sondas produzidas com base nas sequências SEQ ID N° 1, 5 ou 7. Essas bibliotecas podem ser preparadas a partir de células de diferentes origens através de técnicas convencionais de biologia molecular conhecidas do especialista na técnica. As sequências nucleotídicas da invenção podem ser igualmente preparadas através de síntese química, particularmente de acordo com o método da fosforamidite ou alternativamente através de métodos mistos incluindo a modificação química ou enzimática das sequências obtidas através de rastreio de bibliotecas.

Estas sequências nucleotídicas de acordo com a invenção podem ser utilizadas no domínio farmacêutico, seja para a produção in vitro de péptidos da invenção, seja para a realização de sequências anti-sentido ou para a produção de péptidos da invenção no contexto de uma terapia génica, seja alternativamente para a detecção e diagnóstico, para experiências de hibridação, de expressão ou de uma sobre-expressão de um factor de permuta do GDP amplificado, mutado ou reorganizado em amostras biológicas, ou para 7 isolamento de sequências homólogas a partir de outras fontes celulares.

Para a produção de péptidos da invenção, as sequências de ácidos nucleicos definidas acima são geralmente colocadas sob o controlo de sinais que permitem a sua expressão num hospedeiro celular. A escolha destes sinais (promotores, terminadores, sequência lider de secreção, etc.) pode variar em função do hospedeiro celular utilizado. De um modo preferido, estas sequências nucleotidicas da invenção fazem parte de um vector que pode ter replicação autónoma ou integrativa. Mais particularmente, os vectores de replicação autónoma podem ser preparados utilizando sequências de replicação autónoma no hospedeiro escolhido. Tratando-se de vectores integrativos, estes podem ser preparados, por exemplo, utilizando sequências homólogas a determinadas regiões do genoma do hospedeiro, permitindo a integração do vector através de recombinação homóloga.

Os hospedeiros celulares utilizáveis para a produção de péptidos da invenção são igualmente bons hospedeiros eucarióticos ou procarióticos. Entre os hospedeiros eucarióticos que são adequados, podem ser mencionadas as células animais, as leveduras ou os fungos. Em particular, tratando-se de leveduras, podem ser mencionadas as leveduras do género Saccharomyces, Kluyveromyces, Píchía, Schwanniomyces ou Hansenula. Tratando-se de células animais, podem ser mencionadas as células COS, CHO, C127, etc. Tratando-se de fungos, podem ser mencionados mais particularmente Aspergillus ssp. ou Tríchoderma ssp. Como hospedeiros procarióticos é preferido utilizar-se as seguintes bactérias E. coli, Bacillus ou Streptomyces.

As sequências de ácidos nucleicos de acordo com a invenção podem ser igualmente utilizadas para a produção de 8 oligonucleótidos anti-sentido ou de sequências anti-sentido genéticas utilizáveis como agentes farmacêuticos. A inibição da expressão de determinados oncogenes através de sequências anti-sentido provou ser uma estratégia útil na compreensão do papel destes oncogenes e uma via particularmente promissora na realização de um tratamento anticancerigeno. As sequências anti-sentido são oligonucleótidos de tamanho pequeno, complementares à cadeia codificante de um determinado gene, e como resultado, são capazes de hibridar especificamente com o transcrito de ARNm, inibindo a sua tradução em proteina. A invenção tem assim como objectivo sequências anti-sentido capazes de inibir, pelo menos parcialmente, a produção de péptidos que estimulam a permuta do GDP nos complexos p21-GDP. Essas sequências podem ser constituídas por toda ou parte das sequências de ácidos nucleicos definidas acima. Tratam-se geralmente de sequências ou fragmentos de sequências complementares de sequências codificantes de péptidos que estimulam a permuta do GDP. Esses oligonucleótidos podem ser obtidos a partir das sequências SEQ ID N° 1, 5 ou 7, por fragmentação, etc., ou por síntese química. Essas sequências podem ser utilizadas no contexto de terapias génicas para a transferência e a expressão in vivo de sequências anti-sentido ou de péptidos capazes de modular os níveis de permutas do GDP nas proteínas ras. A este respeito, as sequências podem ser incorporadas nos vectores, em particular de origem virai. A invenção refere-se igualmente, como sequências nucleotídicas, a sondas nucleotídicas, sintéticas ou não, capazes de hibridar com as sequências nucleotídicas definidas acima que codificam um péptido da invenção ou com o ARNm correspondente. Essas sondas podem ser utilizadas in vitro como ferramenta de diagnóstico para a detecção da expressão do factor de permuta do GDP, ou alternativamente para pôr em evidência anomalias genéticas (splicing incorrecto, polimorfismo, mutações 9 pontuais, etc.). Essas sondas devem ser previamente marcadas, e para tal são conhecidas do especialista na técnica diferentes métodos. As condições de hibridação sob as quais estas sondas podem ser utilizadas são as condições normais de restringência (ver particularmente as técnicas gerais de clonagem abaixo, assim como os exemplos). Estas sondas podem ser igualmente utilizadas para pôr em evidência e para o isolamento de sequências de ácido nucleicos homólogas codificantes de um péptido da invenção, a partir de outras fontes celulares, como ilustrado nos exemplos. A invenção tem também como objecto qualquer composição farmacêutica compreendendo como principio activo, pelo menos, um péptido como acima definido.

Tem também como objecto qualquer composição farmacêutica compreendendo como principio activo, pelo menos, um anticorpo e/ou fragmento de anticorpo como acima definido, assim como qualquer composição farmacêutica compreendendo como principio activo, pelo menos, uma sequência nucleotídica como acima definido.

Além disso, tem também como objecto composições farmacêuticas em que os péptidos, anticorpos e sequências nucleotidicas acima definidos são associados entre si ou com outros princípios activos.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser utilizadas para modular a activação das proteínas p21 e, como resultado, modular a proliferação de determinados tipos celulares. Mais particularmente, estas composições farmacêuticas são destinadas ao tratamento de cancros. De facto, numerosos cancros foram associados à presença de proteínas ras oncogénicas. Entre os cancros contendo mais frequentemente genes 10 ras mutados, podem ser mencionados particularmente os adenocarcinomas do pâncreas, 90% dos quais têm um oncogene Ki-ras mutado no décimo segundo codão [Almoguera et al., Cell 53 (1988) 549], os adenocarcinomas do cólon e os cancros da tiróide (50%), ou os carcinomas do pulmão e as leucemias mielóides [30%, Bos, J. L. Câncer Res. £9 (1989) 4682]. A invenção tem também como objecto a utilização de moléculas acima descritas para modular a actividade das proteínas p21. Em particular, a invenção refere-se à utilização destas moléculas para inibir, pelo menos parcialmente, a activação das proteínas p21. A invenção proporciona igualmente um processo de detecção da expressão e/ou de uma sobre-expressão de um gene ras numa amostra biológica. Esse processo compreende, por exemplo, a colocação em contacto dessa amostra com um anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com a invenção, a revelação dos complexos antigénio-anticorpo e a comparação dos resultados obtidos com uma amostra padrão. Num tal processo, o anticorpo pode estar em suspensão ou previamente imobilizado num suporte. Este processo pode compreender igualmente a colocação em contacto da amostra com uma sonda nucleotídica de acordo com a invenção, pôr em evidência os híbridos obtidos e a comparação com aqueles obtidos no caso de uma amostra padrão. A presente invenção pode ser utilizada no domínio terapêutico: os péptidos, anticorpos e sequências nucleotídicas da invenção são capazes de modular a actividade de genes ras permitindo, de facto, intervir no processo de desenvolvimento dos cancros. Como ilustrado nos exemplos, as sequências nucleotídicas da invenção permitem particularmente a expressão de péptidos capazes de complementar a sensibilidade à temperatura de leveduras que contêm uma mutação cdc25. Estes 11 permitem igualmente expressar os péptidos capazes de suprimir uma mutação dominante RAS2ts, demonstrando uma competição com o produto normal da expressão do gene CDC25 para a interacção com as proteínas p21. A invenção pode ser igualmente utilizada no domínio do diagnóstico e da tipagem de cancros: os anticorpos e sondas nucleotídicas da invenção permitem, de facto, a identificação de cancros nos quais está implicado um gene ras, assim como o diagnóstico de cancros associados à sobre-expressão de um gene ras normal ou oncogénico.

Outras vantagens da presente invenção tornar-se-ão evidentes com a leitura dos exemplos seguintes que devem ser considerados como ilustrativos e não limitativos.

Legenda das figuras

Figura 1: Teste de transactivação: Esta figura mostra em ordenada os níveis de actividade CAT (%relativa ao ruído de fundo) de estirpes CHO recombinantes, em função da sequência de ADNc utilizada para a transformação.

Figura 2: Teste de actividade de permuta de GTP: Esta figura mostra em ordenada a proporção das formas p21-GDP/p21-GTP de estirpes CHO recombinantes, em função da sequência de ADNc utilizada para a transformação.

Figura 3: Teste de actividade de permuta de GDP in vitro: Esta figura mostra, em função do tempo e para 2 concentrações de um péptido da invenção, a diminuição da proporção de GDP que permaneceu ligada à proteína p21. 12 Técnicas gerais de clonagem

Os métodos classicamente utilizados na biologia molecular, tais como as extracções preparativas de ADN plasmidico, a centrifugação de ADN plasmidico em gradiente de cloreto de césio, electroforese em gel de acrilamida ou agarose, a purificação de fragmentos de ADN por eletroeluição, as extracções de proteina em fenol ou fenol-clorofórmio, a precipitação de ADN em meio salino pelo etanol ou isopropanol, a transformação em Escherichia coli, etc., são bem conhecidos do especialista na técnica e estão amplamente descritas na literatura [Maniatis, T. et al., "Molecular Cloning, a

Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F. M. et al. (eds), "Current

Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Nova Iorque, 1987].

As enzimas de restrição foram fornecidas pela New England Biolabs (Biolabs), Bethesda Research Laboratories (BRL) ou Amersham e são utilizadas de acordo com as recomendações dos fornecedores.

Os plasmideos de tipo pBR322, pUC, Agtll e pGEX 2T e os fagos da série M13 são de origem comercial.

Para as ligações, os fragmentos de ADN são separados de acordo com o seu tamanho por electroforese em gel de agarose ou de acrilamida, extraídos em fenol ou por uma mistura de fenol/clorofórmio, precipitados em etanol e depois incubados na presença de ADN ligase do fago T4 (Biolabs) de acordo com as recomendações do fornecedor. 0 preenchimento das extremidades 5' proeminentes é realizado pelo fragmento Klenow da ADN polimerase I de E. coli 13 (Biolabs) de acordo com as especificações do fornecedor. A destruição das extremidades 3' proeminentes é realizada na presença de ADN polimerase do fago T4 (Biolabs) utilizada de acordo com as recomendações do fabricante. A destruição das extremidades 5' proeminentes é realizada por um tratamento conduzido pela nuclease Sl. A mutagénese dirigida in vitro por oligodesoxinucleótidos sintéticos é efectuada de acordo com o método desenvolvido por Taylor et al. [Nucleic Acids Res. 13_ (1985) 8749-8764] utilizando o kit distribuído pela Amersham. A amplificação enzimática de fragmentos de ADN pela técnica denominada de PCR [Reacção em Cadeia da Polimerase, Saiki R. K. et al., Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K. B. e Faloona F. A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] é efectuada utilizando um "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) de acordo com as especificações do fabricante. A verificação das seguências nucleotídicas é realizada pelo método desenvolvido por Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 74 (1977) 5463-5467] utilizando o kit distribuído pela Amersham.

Para as experiências de hibridação, as condições de restringência normais são geralmente as seguintes: hibridação: 3 x SCC na presença de 5 x Denhart a 65 °C; lavagem: 0,5 x SSC a 65 °C. 14 1. Isolamento do gene do factor humano de permuta do GDP (hGRF)

Foram rastreados 5 x 105 fagos de uma biblioteca de cérebro humano construída no vector Àgtll [Skolnik et al., Cell 65 (1991) 83] de acordo com as técnicas descritas por Sambrook, Fritsch e Maniatis (Molecular cloning; Cold Spring Harbor Laboratory Press; 1989). A sonda utilizada para o rastreio desta biblioteca é um fragmento de ADNc humano de 137 pares de bases marcado com 32P. Esta sonda foi preparada por PCR com ADN total da referida biblioteca, utilizando como iniciadores os oligonucleótidos degenerados seguintes: - ATC CGT CA G GTA CAT CCC CA G GTA TGG CAC T T T T T T A A A A G A G G G para o oligonucleótido da extremidade 3' do (SEQ ID N° 11), e - GCA ATT TTT CGG CTT AAG AAG ACT TGG T C C A c A A C C A T G A G C A G fragmento

ACA para o oligonucleótido da extremidade 5' do fragmento (SEQ ID N° 12). A sonda foi marcada com 32P por "iniciação aleatória" de acordo com a técnica de Feinberg e Vogelstein [Anal. Biochem. 15 137 (1984) 266], e a reacção de PCR foi realizada a cerca de 40 °C sob as condições descritas nas técnicas gerais de clonagem.

De entre os diferentes clones positivos obtidos por hibridação com esta sonda, um compreende a totalidade de uma grelha de leitura aberta que contém a actividade de permuta relativamente a Ha-Ras.

Este clone de Agtll contém um ADNc de 3 kb que foi introduzido na forma de um fragmento EcoRI no sítio correspondente de um vector M13mpl8. Este ADNc foi depois sequenciado com auxílio de iniciadores comerciais "reverso" e "-20" assim como com o auxílio de oligonucleótidos específicos de acordo com a técnica de Sanger (ver técnicas gerais de clonagem). A sequência nucleotídica do gene do factor humano de permuta do GDP contida no fragmento assim obtido é apresentada na sequência SEQ ID N° 1, assim como nas sequências peptídicas deduzidas (SEQ ID N° 2, 3 e 4). 2. Preparação de subfragmentos

Diferentes derivados ou fragmentos do gene assim obtido podem ser preparados e utilizados, particularmente para a expressão de péptidos da invenção. Em particular, os fragmentos seguintes foram preparados através de clivagem enzimática e separados através de eletroeluição: um fragmento PstI-EcoRI compreendendo uma parte da região codificante do factor de permuta (do nucleótido 936 até ao 16 codão de terminação) assim como a região 3' não codificante do fragmento, um fragmento EcoNI-EcoRI compreendendo uma parte da região codificante do factor de permuta (do nucleótido 910 até ao codão de terminação) assim como a região 3' não codificante do fragmento, um fragmento Eagl-EcoRI compreendendo uma parte da região codificante do factor de permuta (do nucleótido 638 até ao codão de terminação) assim como a região 3' não codificante do fragmento, um fragmento BalI-EcoRI compreendendo uma parte da região codificante do factor de permuta (do nucleótido 88 até ao codão de terminação) assim como a região 3' não codificante do fragmento, e um fragmento Nael-EcoRI compreendendo uma parte da região codificante do factor de permuta (do nucleótido 196 até ao codão de terminação) assim como a região 3' não codificante do fragmento, É compreendido que a região 3' não codificante contida nestes fragmentos é acessória e que pode ser eliminada, quer por digestão através de uma nuclease, quer através de clivagem com uma enzima que tem um sítio perto do codão de terminação, tal como particularmente Smal, cujo o sítio está localizado a cerca de 30 pb após o codão de terminação. É igualmente compreendido que outros fragmentos podem ser preparados, tal como particularmente os fragmentos que não contêm a região codificante para a parte C-terminal inteira, assim como derivados destes fragmentos, obtidos através de 17 mutação, substituição, adição ou modificação de natureza quimica e/ou genética. 3. Caracterização biológica

As funcionalidades dos péptidos de acordo com a invenção foram testadas: em células de mamíferos, na levedura Saccharomyces cerevisiae ou então in vitro na proteína Ha-Ras recombinante. 3.1. Para avaliação funcional em células de mamíferos, as sequências de ADN codificantes de péptidos da invenção, tais como por exemplo, aquelas descritas no Exemplo 2, podem ser colocadas sob controlo do promotor precoce de SV40 no vector pCyml descrito por Camonis et al. [Gene _86_ (1990) 263].

Neste exemplo, os fragmentos PstI-EcoRI e EcoNI-EcoRI descritos no Exemplo 2 foram introduzidos neste vector.

Os vectores assim obtidos foram testados para transfecção transitória em células CHO de acordo com o protocolo descrito por Rey et al. [Oncogene 6_ (1991) 347].

Dois critérios de funcionalidade foram assim estudados: a capacidade dos vectores de transactivar um promotor que governa a expressão de um gene repórter, que é aqui o gene bacteriano codificante da cloranfenicol acetiltransferase (gene CAT), 18 a sua capacidade para promover a carga em GTP das proteínas Ras de células CHO transfectadas. a) Para os testes de transactivação, as células CHO a 50% de confluência foram transfectadas (ver, por exemplo, o protocolo descrito por Schweighoffer et ai., Science, no prelo), uma parte com 0,5 pg de um vector contendo o gene CAT sob controlo de um promotor sintético composto dum promotor murino do gene da timidina cinase e de 4 elementos PEAI repetidos derivados do intensificador de polioma [Wasylyk et al., EMBO J. 2 (1988) 2475), e outra parte com 4,5 pg de um vector de expressão contendo sob controlo do promotor precoce SV40, nenhum ADNc codificante (pista 1), o ADNc do Ha-Ras normal (pista 2) , o ADNc do Ha-Ras activado em 12 (Vai 12) (pista 3), a extremidade 3' do ADNc de SDC25, descrito por Rey et ai. citado acima (pista 4), e o ADNc codificante de um péptido de acordo com a invenção, acima descrito (pista 5).

Os resultados são apresentados na figura 1. A pista 1 corresponde à activação basal, a pista 3 (obtida para o fragmento PstI-EcoRI: CDC hum.) mostra que a expressão de um péptido da invenção permite a transactivação do promotor sintético utilizado. O mesmo resultado qualitativo foi obtido para os outros fragmentos estudados. b) De modo a verificar que esta transactivação envolve de facto uma carga nucleotídica de proteínas ras de células CHO, as mesmas transfecções transitórias foram realizadas, o meio de cultura foi adicionado com ortofosfato marcado com 32P. 19

Este protocolo de marcação, assim como aquele de imunoprecipitação de proteínas ras celulares é descrito por Rey et al. citado acima. Os resultados obtidos são apresentados na figura 2. Estes mostram que os péptidos da invenção são capazes de modular os níveis de permuta do GDP nas proteínas ras, desde que algumas delas (péptido CDC Hum. expresso pelo fragmento Pstl-EcoRI acima descrito) sejam capazes de promover a carga em GTP das proteínas ras de células CHO imunoprecipitadas por anticorpos de Y 13-259. 3.2. Os péptidos da invenção foram igualmente testados funcionalmente na levedura S. cerevisiae cdc25. Na verdade, os vectores acima descritos (3.1.) que são vectores vaivém foram introduzidos na estirpe OL97-l-llb de levedura [Camonis e Jacquet, Mol. Cell. Biol. _8 (1988) 2980]. Os resultados obtidos mostram que os fragmentos de ADNc de acordo a invenção codificam os péptidos que são capazes de complementar a falta de crescimento desta estirpe a 36 °C. Estes resultados mostram assim que estes fragmentos codificam péptidos funcionais in vivo em S. cerevisiae. 3.3. A capacidade das sequências de ADN da invenção para codificarem péptidos capazes de promover a permuta do GDP nas proteínas Ha-Ras purificadas foi igualmente demonstrada in vitro de acordo com o protocolo descrito por Rey et al. Mol. Cell. Biol. 9 (1989) 3904].

Para tal, as sequências da invenção são expressas na estirpe TG1 de E. coli na forma de proteínas da fusão com a glutationo S-transferase (GST) de acordo com a técnica descrita por Smith e Johnson [Gene 6T_ (1988) 31] . Para isso, os diferentes fragmentos de ADN descritos em 3.1. acima foram 20 clonados, na forma de fragmentos Smal-EcoRI, no vector pGEX 2T (Pharmacia), em 3' e em fase com um ADNc codificante da GST. Os fragmentos Smal-EcoRI são obtidos por adição de um adaptador ao meio de uma ligase. Os vectores assim obtidos são depois utilizados para transformar a estirpe TG1 de E. coli. As células assim transformadas são pré-cultivadas de um dia para o outro a 37 °C, diluídas a 1/10 em meio LB, adiciona-se IPTG para induzir a expressão (2 horas, 25 °C) e cultivadas depois durante aproximadamente 21 horas a 25 °C. As células são depois lisadas e as proteínas de fusão produzidas são purificadas por afinidade em coluna de agarose-GSH. Para tal, o lisado bacteriano é incubado na presença do gel (preparado e equilibrado com o tampão de lise) durante 15 minutos a 4 °C. Após 3 lavagens com um tampão Tris-HCl, pH 7,4, as proteínas são eluídas na presença de um tampão Tris-HCl, pH 7,7, contendo um excesso de GSH. O sobrenadante é recolhido e centrifugado. A actividade da permuta do GDP dos péptidos da invenção nas proteínas Ha-Ras purificadas foi depois demonstrada in vitro de acordo com protocolo descrito por Rey et al. (Mol. Cell. Biol. citado acima). Os resultados obtidos são apresentados na figura 3. Estes mostram particularmente que o péptido da invenção corresponde à sequência CDC hum expressa pelo fragmento PstI-EcoRI descrito acima estimula a permuta do GDP. 4. Demonstração de sequências homólogos

As sequências de ácidos nucleicos homólogas àquelas apresentadas na figura 1 foram demonstradas por duas estratégias diferentes: por PCR, nas condições descritas nas técnicas gerais de clonagem, nos ADN neo-sintetizados a partir de ARNm de 21 placenta, e utilizando como iniciadores oligonucleótidos degenerados escolhidos para cobrir as sequências conservadas entre a sequência SEQ ID N° 1 e a sequência da proteína SOS [Bonfini et al., Science 255 (1992) 603]. por rastreio de uma biblioteca de ADNc de placenta utilizando uma sonda constituída pela totalidade da sequência SEQ ID N° 1 marcada com 32P. O rastreio foi realizado em condições de baixa restringência: hibridação a 50 °C em meio 5 x SSC, 5 x Denhart; mais lavagem a 50 °C em meio 2 x SSC.

Estas duas estratégias permitem revelar as sequências homólogas à sequência SEQ ID N° 1. Estas sequências podem ser prontamente isoladas e caracterizadas. Estas constituem sequências de ácidos nucleicos no sentido da presente invenção quando codificam (ou seus fragmentos ou derivados) péptidos capazes de modular os níveis de permuta do GDP nos complexos p21-GDP.

Em particular, esta estratégia permitiu a identificação a partir de ARNm de placenta e utilizando os oligonucleótidos oligo 2449 (SEQ ID N° 9) e oligo 2451 (SEQ ID N° 10), os 2 ADNC codificantes dos factores designados hSOSl e hSOS2, cujas sequências parciais estão representadas nas SEQ ID N° 5 e SEQ ID N° 7, respectivamente. Os ARNm que correspondem a estes factores estão presentes em todos os tecidos em que foram procurados, contrariamente ao factor descrito no Exemplo 1 que parece localizado apenas no cérebro. A localização cromossómica destes genes foi realizada e produziu os seguintes resultados: h-GRF: 15q2.4. h-SOSl: 4q2.1. h-SOS2 : 14q2.2. 22 5. Pesquisa de factores de permuta de tipo h-GRF noutros tecidos

Foi preparado um anticorpo anti-h-GRF em coelho, através de imunização com um antigénio correspondente ao fragmento de 280 aminoácidos localizados entre os resíduos 211 e 489 do factor h-GRF apresentado em SEQ ID N° 4 .

Estes anticorpos permitiram a detecção, por ELISA, no córtex humano e em células percursoras do cérebro, de proteínas de pesos moleculares aparentes de 30, 55, 75, 95 e 140 kDa. A diversidade de pesos moleculares sugere a presença de múltiplos ADN. A pré-incubação de anticorpos anti-h-GRF com o h-GRF suprime a detecção de proteínas identificadas, demonstrando desse modo a especificidade do sinal. 23

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÃO GERAL: (i) REQUERENTE: (A) NOME: RHONE-POULENC RORER S.A (B) RUA: 20, avenue Raymond ARON (C) CIDADE: ANTONY (E) PAIS: FRANÇA (F) CÓDIGO POSTAL: 92165

(ii) TÍTULO DA INVENÇÃO: PÉPTIDOS QUE INIBEM A ACTIVIDADE DE PROTEÍNAS RAS, PREPARAÇÃO E UTILIZAÇÃO (iii) NÚMERO DE SEQUÊNCIAS: 12 (iv) FORMA DE LEITURA POR COMPUTADOR: (A) TIPO DE MEIO: disquete (B) COMPUTADOR: IBM PC compatível

(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) PROGRAMA INFORMÁTICO: Patentin Release #1.0, Versão #1.25 (OEB) (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°:l: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 2652 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear 24 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO

(iii) ΑΝΤΙ-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA ADICIONAL:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..2445 (ix) CARACTERÍSTICA ADICIONAL:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 445..2445 (SEQ ID N° 3) (ix) CARACTERÍSTICA ADICIONAL:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 976..2445 (SEQ ID N° 4) (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 1: GGC GAT GGC TGT AAG ATC CTC CTG GAC ACC AGC CAG ACC TTT GTG AGA 48 Gly Asp Gly Cys Lys ile Leu Leu Asp Thr Ser Gin Thr Phe Val Arg 1 5 10 15 CAA GGT TCC CTC ATT CAG GTG CCC ATG TCT GAA AAG GGC AAG ATC ACC 96 Gin Gly Ser Leu Ile Gin Vai Pro Met Ser Glu Lys Gly Lys Ile Thr 20 25 30 AGG GGG CGC CTG GGG TCT CTC TCC CTA AAG AAA GAG GGC GAG CGA CAG 144 Arg Gly Arg Leu Gly Ser Leu Ser Leu Lys Lys Glu Gly Glu Arg Gin 35 40 45 TGC TTC CTG TTT TCT AAG CAT CTG ATT ATC TGT ACC AGA GGC TCT GGA 192 Cys Phe Leu Phe Ser Lys HlS Leu Ile Ile Cys Thr Arg Gly Ser Gly 50 55 60 GGG AAG CTT CAC TTG ACC AAG AAT GGA GTC ATA TCC CTC ATT GAC TGC 240 Gly Lys Leu Hls Leu Thr Lys Asn Gly val Ile Ser Leu Ile Asp Cys 65 70 75 80 25 ACT TTA TTG GAG GAG CCA GM AGC ACG GAG GAG GM GCC AM GGA TCC 288 Thr Leu Leu Glu Glu Pro Glu Ser Thr Glu Glu Glu Ala Lys Gly Ser 85 90 95 GGC CAA GAC ATA GAT CAC TTG GAT TTT AM ATC GGG GTG GAG CCA MG 336 Giy Gin Asp 2le Asp His Leu Asp Phe Lys Ile Gly Vai Glu Pro Lys 100 105 110 GAT TCC CCG CCC TTT ACA GTC ATC CTA GTG GCC TCG TCC AGA CAG GAG 384 Asp Ser Pro Pro Phe Thr Vai Ile Leu Vai Ala Ser Ser Arg Gin Glu 115 120 125 AAG GCA GCG TGG ACC AGT GAC ATC AGC CAG TGT GTT GGT MC ATC CGA 432 Lys Ala Ala Trp Thr Ser Asp Ile Ser Gin Cys Vai Gly Asn Ile Arg 130 135 140 TGC MT GGG CTC ATG ATG AAG CCA TTT GM GM MT TCC MG GTC ACT 480 Cys Asn Gly Leu Met Met Lys Pro Phe Glu Glu Asn Ser Lys Vai Thi 1« 150 155 160 CTG CCG CAG ATG ATC MG TCC GAC GCC TCC TTA TAT TGT GAT GAT GTT 528 Vai Pro Gin Het Ile Lys Ser Asp Ala Ser Leu Tyr Cys Asp Asp Vai 165 170 175 GAC ATT CGC TTC AGC AM ACC ATG MC TCC TGC AM GTG CTG CAG ATC 576 Asp lie Arg Phe Ser Lys Thr Met Asn Ser Cys Lys Vai Leu Gin Ile 180 185 190 GCC TAC GCC AGT GTG GAG CGG CTG CTG GAG AGG CTG ACG GAC CTG CGC 624 Ala Tyr Ala Ser Vai Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu Thr Asp Leu Arg 195 200 205 TTC CTG AGC ATC GAC TTC CTC MC ACC TTC CTG CAC TCC TAC CGC GTC 672 Phe Leu Ser Ile Asp Phe Leu Asn Thr Phe Leu His Ser Tyr Arg Vai 210 215 220 TTC ACC ACC GCC ATC GTG GTC CTG GAC MG CTC ATT ACC ATC TAC MG 720 Phe Thr Thr Ala Ile Vai Vai Leu Asp Lys Leu Ile Thr Ile Tyr Lys 22S 230 235 240 MG CCT ATC AGT GCC ATT CCT GCC AGG TCG CTG GAG CTC CTG TTT GCC 768 Lys Pro Ile Ser Ala Ile Pro Ala Arg Ser Leu Glu Leu Leu Phe Ala 245 250 255 AGT GGC CAG MC MT MG CTC CTG TAC GGT GM CCC CCC AAG TCC CCG 816 Ser Gly Gin Asn Asn Lys Leu Leu Tyr Gly Glu Pro Pro Lys Ser Pro 260 265 270 CGC GCC ACC CGC MG TTC TCC TCG CCG CCA CCT CTG TCC ATC ACC MG 864 Arg Ala Thr Arg Lys Phe Ser Ser Pro Pro Pro Leu Ser Ile Thr Lys 275 280 285 ACA TCG TCA CCG AGC CGC CGG CGG MG CTC TCC CTG MC ATC CCC ATC 912 Thr Ser Ser Pro Ser Arg Arg Arg Lys Leu Ser Leu Asn Ile Pro Ile 290 295 300 ATC ACT GGC GGC MG GCC CTG GAC CTG GCC GCC CTC AGC TGC MC TCC 960 Ile Thr Gly Gly Lys Ala Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ser Cys Asn Ser 305 310 315 320 MT GGC TAC ACC AGC ATG TAC TCG GCC ATG TCA CCC TTC AGC MG GCC 1008 Asn Gly Tyr Thr Ser Met Tyr Ser Ala Met Ser Pro Phe Ser Lys Ala 325 330 335 26 ACG CTG GAC ACC AGC AAG CTC TAT GTG TCC AGC AGC TTC ACC AAC AAG 1056

Thr Leu Asp Thr Ser Lys Leu Tyr Vai Ser Ser Ser Phe Thr Asn Lys 340 345 350 ATT CCA GAT GAG GGC GAT ACG ACC CCT GAG AAG CCC GAA GAC CCT TCA 1104

Ile Pro Asp Glu Gly Asp Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Asp Pro Ser 355 360 365 GCG CTC AGC AAG CAG AGC TCA GAA GTC TCC ATG AGA GAG GAG TCA GAT 1152

Ala Leu Ser Lys Gin Ser Ser Glu Vai Ser Met Arg Glu Glu Ser Asp 370 375 380 ATT GAT CAA AAC CAG AGT GAT GAT GGT GAT ACT GAA ACA TCA CCA ACT 1200

Ile Asp Gin Asn Gin Ser Asp Asp Gly Asp Thr Glu Thr Ser Pro Thr 385 390 395 400 AAA TCT CCA ACA ACA CCC AAA TCA GTC AAA AAC AAA AAT TCT TCA GAG 1248

Lys Ser Pro Tnr Thr Pro Lys Ser Vai Lys Asn Lys Asn Ser Ser Glu 405 410 415 TTC CCA CTC TTT TCC TAT AAC AAT GGA GTC GTC ATG ACC TCC TGT CGT 1296

Phe Pro Leu Phe Ser Tyr Asn Asn Gly Vai Vai Met Thr Ser Cys Arg 420 425 430 GAA CTG GAC AAT AAC CGC AGT GCC TTG TCG GCC GCC TCT GCC TTT GCC 1344

Glu Leu Asp Asn Asn Arg Ser Ala Leu Ser Ala Ala Ser Ala Phe Ala 435 440 445 ATA GCA ACC GCC GGG GCC AAC GAG GGC ACC CCA AAC AAG GAG AAG TAC 1392

Ile Ala Thr Ala Gly Ala Asn Glu Gly Thr Pro Asn Lys Glu Lys Tyr 450 455 460 CGG AGG ATG TCC TTA GCC AGT GCA GGG TTT CCC CCA GAC CAG AGG AAT 1440

Arg Arg Met Ser Leu Ala Ser Ala Gly Phe Pro Pro Asp Gin Arg Asn 465 470 475 480 GGA GAC AAG GAG TTT GTG ATC CGC AGA GCA GCC ACC AAT CGT GTC TTG 1488

Gly Asp Lys Glu Phe Vai Ile Arg Arg Ala Ala Thr Asn Arg Vai Leu 485 490 495 AAC GTG CTC CGC CAC TGG GTG TCC AAG CAC TCT CAG GAC TTT GAG ACC 1536

Asn Vai Leu Arg His Trp Vai Ser Lys His Ser Gin Asp Phe Glu Thr 500 505 510 AAC GAT GAG CTC AAA TGC AAG GTG ATC GGC TTC CTG GAA GAA GTC ATG 1584

Asn Asp Glu Leu Lys Cys Lys Vai Ile Gly Phe Leu Glu Glu vai Met 515 520 525 CAC GAC CCG GAG CTC CTG ACC CAG GAG CGG AAG GCT GCA GCC AAC ATC 1632

His Asp Pro Glu Leu Leu Thr Gin Glu Arg Lys Ala Ala Ala Asn Ile 530 535 540 ATC AGG ACT CTG ACC CAG GAG GAC CCA GGT GAC AAC CAG ATC ACG CTG 1680

Ile Arg Thr Leu Thr Gin Glu Asp Pro Gly Asp Asn Gin Ile Thr Leu 545 550 555 560 GAG GAG ATC ACG CAG ATG GCT GAA GGC GTG AAG GCT GAG CCC TTT GAA 1728

Glu Glu Ile Thr Gin Met Ala Glu Gly Vai Lys Ala Glu Pro Phe Glu 565 570 575 27 AAC CAC XCA GCC CFG GAG ATC GCG GAG CAG CTG ACC CTG CTA GAT CAC 1776

Asn His Ser Ala Leu Glu Xle Ala Glu Gin Leu Thr Leu Leu Asp His 580 585 590 CTC GTC TTC AAG AAG ATT CCT TAT GAG GAG TTC TTC GGA CAA GGA TGG 1824

Leu Vai Phe Lys Lys Ile Pro Tyr Glu Glu Phe Phe Gly Gin Gly Trp 595 600 605 ATG AAA CTG GAA AAG ΑΑΓ GAA AGG ACC CCT TAT ATC ATG AAA ACC ACT 1872

Met Lys Leu Glu Lys Asn Glu Arg Thr Pro Tyr Ile Met Lys Thr Thr 610 615 620 AAG CAC TTC AAT GAC ATC AGT AAC TTG ATT GCT TCA GAA ATC ATC CGC 1920

Lys His Phe Asn Asp Ile Ser Asn Leu Xle Ala Ser Glu Ile Ile Arg 625 630 635 640 AAT GAG GAC ATC AAC GCC AGG GTG AGC GCC ATC GAG AAG TGG GTC GCC 1968

Asn Glu Asp lie Asn Ala Arg Vai Ser Ala Xle Glu Lys Trp Vai Ala 645 650 655 GTA GCT GAC ATA TGC CGC TGC CTC CAC AAC TAC AAT GCC GTA CTG GAG 2016

Vai Ala Asp Ile Cys Arg Cys Leu His Asn Tyr Asn Ala Vai Leu Glu 660 665 670 ATC ACC TCG TCC ATG AAC CGC AGT GCA ATC TTC CGG CTC AAA AAG ACG 2064

Xle Thr Ser Ser Ket Asn Arg Ser Ala Xle Phe Arg Leu Lys Lys Thr 675 680 685 TGG CTC AAA GTC TCT AAG CAG ACT AAA GCT TTG ATT GAT AAG CTC CAA 2112

Trp Leu Lys vai Ser Lys Gin Thr Lys Ala Leu Xle Asp Lys Leu Gin 690 695 700 AAG CTT GTG TCA TCT GAG GGC AGA TTT AAG AAT CTC AGA GAA GCT TTG 2160

Lys Leu Vai Ser Ser Glu Gly Arg Phe Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu 705 710 715 720 AAA AAT TGT GAC CCA CCC TGT GTC CCT TAC CTG GGG ATG TAC CTC ACC 2208

Lys Asn Cys Asp Pro Fro Cys Vai Pro Tyr Leu Gly Met Tyr Leu Thr 725 730 735 GAC CTG GCC TTC ATC GAG GAG GGG ACG CCC AAT TAC ACG GAA GAC GGC 2256

Asp Leu Ala Phe lie Glu Glu Gly Thr Pro Asn Tyr Thr Glu Asp Gly 740 745 750 CTG GTC AAC TTC TCC AAG ATG AGG ATG ATA TCC CAT ATT ATC CGA GAG 2304

Leu Vai Asn Phe Ser Lys Met Arg Met Ile Ser His lie Ile Arg Glu 755 760 765 ATT CGC CAG TTT CAA CAA ACT GCC TAC AAA ATA GAG CAC CAA GCA AAG 2352

Ile Arg Gin Phe Gin Gin Thr Ala Tyr Lys Ile Glu His Gin Ala Lys 770 775 780 GTA ACG CAA TAT TTA CTG GAC CAA TCT TTT GTA ATG GAT GAA GAA AGC 2400

Vai Thr Gin Tyr Leu Leu Asp Gin Ser Phe Vai Met Asp Glu Glu Ser 785 790 795 800 CTC TAC GAG TCT TCT CTC CGA ATA GAA CCA AAA CTC CCC ACC TGAAGCTGTG 2452 Leu Tyr Glu Ser Ser Leu Arg Ile Glu Pro Lys Leu Pro Thr 805 810 815 CCCAGCCCAG ACCCAGCTGC TCCCGGGGAC ATGTGCTAGA TGATACTGTA CATATTCGTT 2512 TGGTTTCACT GGATTTTCTT CTTCAGTATG TGCTTCTCCA AGAATACAAA TCGTCCTTGT 2572 TCTTAGATTC CTGTAGAACC GGAATATGAA TTTCTGCACC GTTTCA6ACT TCGCCCACCC 2632 ATCCCTCCCC TCGCCCGAAT 2652 28 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 2: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 814 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 2:

Gly Asp Gly Cys Lys Ile Leu Leu Asp Thr Ser Gin Thr Phe Vai Arg 1 5 10 15 Gin Gly Ser Leu Ile Gin Vai Pro Met Ser Glu Lys Gly Lys Ile Thr 20 25 30 Arg Gly Arg Leu Gly Ser Leu Ser Leu Lys Lys Glu Gly Glu Arg Gin 35 40 45 Cys Phe Leu Phe Ser Lys His Leu Ile Ile Cys Thr Arg Gly Ser Gly 50 55 60 Gly Lys Leu His Leu Thr Lys Asn Gly Vai Ile Ser Leu lie Asp Cys 65 70 75 80 Thr Leu Leu Glu GlU Pro Glu Ser Thr Glu Glu Glu Ala Lys Gly Ser 85 90 95 Gly Gin Asp Ile Asp His Leu Asp Phe Lys Ile Gly Vai Glu Pro Lys 100 105 110 Asp Ser Pro Pro Phe Thr Vai Ile Leu Vai Ala Ser Ser Arg Gin Glu 115 120 125 Lys Ala Ala Trp Thr Ser Asp Ile Ser Gin Cys Vai Gly Asn Ile Arg 130 135 140 Cys Asn Gly Leu Met Met Lys Pro Phe Glu Glu Asn Ser Lys Val Thr 145 150 155 160 Vai Pro Gin Met Ile Lys Ser Asp Ala Ser Leu Tyr Cys Asp Asp Val Í65 170 175 Asp Ile Arg Phe Ser Lys Thr Met Asn Ser Cys Lys Vai Leu Gin Ile 180 185 190 Ala Tyr Ala Ser Vai Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu Thr Asp Leu Arg 195 200 205 29

Phe Leu Ser Ile Asp Phe Leu Asn Thr Phe Leu His Ser Tyr Arg Vai 210 215 220

Phe Thr Thr Ala Ile Vai Vai Leu Asp Lys Leu Ile Thr Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Lys Pro Ile Ser Ala Ile Pro Ala Arg Ser Leu Glu Leu Leu Phe Ala 245 250 255

Ser Gly Gin Asn Asn Lys Leu Leu Tyr Gly Glu Pro Pro Lys Ser Pro 260 265 270

Arg Ala Thr Arg Lys Phe ser Ser Pro Pro Pro Leu Ser Ile Thr Lys 275 280 285

Thr Ser Ser Pro Ser Arg Arg Arg Lys Leu Ser Leu Asn Ile Pro Ile 290 295 300

Ile Thr Gly Gly Lys Ala Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ser Cys Asn Ser 305 310 315 320

Asn Gly Tyr Thr Ser Met Tyr Ser Ala Met Ser Pro Phe Ser Lys Ala 325 330 335

Thr Leu Asp Thr Ser Lys Leu Tyr Vai Ser Ser Ser Phe Thr Asn Lys 340 345 350

Ile Pro Asp Glu Gly Asp Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Asp Pro Ser 355 360 365

Ala Leu Ser Lys Gin Ser Ser Glu Vai Ser Met Arg Glu Glu Ser Asp 370 375 380

Ile Asp Gin Asn Gin Ser Asp Asp Gly Asp Thr Glu Thr Ser Pro Thr 385 390 395 400

Lys Ser Pro Thr Thr Pro Lys Ser Vai Lys Asn Lys Asn Ser Ser Glu 405 410 415

Phe Pro Leu Phe Ser Tyr Asn Asn Gly Vai Vai Met Thr Ser Cys Arg 420 425 430

Glu Leu Asp Asn Asn Arg Ser Ala Leu Ser Ala Ala Ser Ala Phe Ala 435 440 445

Ile Ala Thr Ala Gly Ala Asn Glu Gly Thr Pro Asn Lys Glu Lys Tyr 450 455 460

Arg Arg Met Ser Leu Ala ser Ala Gly Phe Pro Pro Asp Gin Arg Asn 465 470 475 480

Gly Asp Lys Glu Phe Vai Ile Arg Arg Ala Ala Thr Asn Arg Vai Leu 485 490 495

Asn Vai Leu Arg His Trp Vai Ser Lys His Ser Gin Asp Phe Glu Thr 500 505 510

Asn Asp Glu Leu Lys Cys Lys Vai Ile Gly Phe Leu Glu Glu Vai Met 515 520 525

His Asp Pro Glu Leu Leu Thr Gin Glu Arg Lys Ala Ala Ala Asn Ile 530 535 540 30

Ile Arg Thr Leu Thr Gin Glu Asp Pro Gly Asp Asn Gin Ile Thr Leu 545 550 555 560 Glu Glu Ile Thr Gin Met Ala Glu Gly Vai Lys Ala Glu Pro Phe Glu 565 570 575 Asn His Ser Ala Leu Glu Ile Ala Glu Gin Leu Thr Leu Leu Asp His 580 585 590 Leu Vai Phe Lys Lys Ile Pro Tyr Glu Glu Phe Phe Gly Gin Gly Trp 595 600 605 Met Lys Leu Glu Lys Asn Glu Arg Thr Pro Tyr Ile Met Lys Thr Thr 610 615 620 Lys His Phe Asn Asp Ile Ser Asn Leu Ile Ala Ser Glu Ile Ile Arg 625 630 635 640 Asn Glu Asp Ile Asn Ala Arg Vai Ser Ala Ile Glu Lys Trp Val Ala 645 650 655 Vai Ala Asp Ile Cys Arg Cys Leu His Asn Tyr Asn Ala Vai Leu Glu 660 665 670 Ile Thr Ser Ser Met Asn Arg Ser Ala Ile Phe Arg Leu Lys Lys Thr 675 680 685 Tiμ Leu Lys Vai Ser Lys Gin Thr Lys Ala Leu ile Asp Lys Leu Gin 690 695 700 Lys Leu Vai Ser Ser Glu Gly Arg Phe Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu 705 710 715 720 Lys Asn Cys Asp Pro Pro Cys Vai Pro Tyr Leu Gly Met Tyr Leu Thr 725 730 735 Asp Leu Ala Phe Ile Glu Glu Gly Thr Pro Asn Tyr Thr Glu Asp Gly 740 745 750 Leu Vai Asn Phe Ser Lys Met Arg Met Ile Ser His Ile Ile Arg Glu 755 760 765 Ile Arg Gin Phe Gin Gin Thr Ala Tyr Lys Ile Glu His Gin Ala Lys 770 775 780 Vai Thr Gin Tyr Leu Leu Asp Gin Ser Phe Vai Met Asp Glu Glu Ser 785 790 795 800 Leu Tyr Glu Ser Ser Leu Arg Ile Glu Pro Lys Leu Pro Thr 805 810 31 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 666 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 3:

Met Met Lys Pro Phe Glu Glu Asn Ser Lys Vai Thr Vai Pro Gin Met 1 5 10 15 Ile Lys Ser Asp Ala Ser Leu Tyr Cys Asp Asp Vai Asp Ile Arg Phe 20 25 30 Ser Lys Thr Met Asn Ser Cys Lys Vai Leu Gin Ile Ala Tyr Ala Ser 35 40 45 Vai Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu Thr Asp Leu Arg Phe Leu Ser Ile 50 55 60 Asp Phe Leu Asn Thr Phe Leu His Ser Tyr Arg Vai Phe Thr Thr Ala 65 70 75 80 Ile Vai Vai Leu Asp Lys Leu Ile Thr Ile Tyr Lys Lys Pro Ile Ser 85 90 95 Ala Ile Pro Ala Arg Ser Leu Glu Leu Leu Phe Ala Ser Gly Gin Asn 100 105 110 Asn Lys Leu Leu Tyr Gly Glu Pro Pro Lys Ser Pro Arg Ala Thr Arg 115 120 125 Lys Phe Ser Ser Pro Pro Pro Leu Ser Ile Thr Lys Thr Ser Ser Pro 130 135 140 Ser Arg Arg Arg Lys Leu Ser Leu Asn Ile Pro Ile Ile Thr Gly Gly 145 150 155 160 Lys Ala Leu Asp Leu Ala Ala Leu Ser Cys Asn Ser Asn Gly Tyr Thr 165 170 175 Ser Met Tyr Ser Ala Met Ser Pro Phe Ser Lys Ala Thr Leu Asp Thr 180 185 190 32

Ser Lys Leu Tyr Vai Ser Ser Ser Phe Thr Asn Lys Ile Pro Asp Glu 195 200 205

Gly Asp Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Asp Pro Ser Ala Leu Ser Lys 210 215 220

Gin Ser Ser Glu Vai Ser Met Arg Glu Glu Ser Asp Ile Asp Gin Asn 225 230 235 240

Gin Ser Asp Asp Gly Asp Thr Glu Thr Ser Pro Thr Lys Ser Pro Thr 245 250 255

Thr Pro Lys Ser Vai Lys Asn Lys Asn Ser Ser Glu Phe Pro Leu Phe 260 265 270

Ser Tyr Asn Asn Gly Vai Vai Met Thr Ser Cys Arg Glu Leu Asp Asn 275 280 285

Asn Arg Ser Ala Leu Ser Ala Ala Ser Ala Phe Ala Ile Ala Thr Ala 290 295 300

Gly Ala Asn Glu Gly Thr Pro Asn Lys Glu Lys Tyr Arg Arg Met Ser 305 310 315 320

Leu Ala Ser Ala Gly Phe Pro Pro Asp Gin Arg Asn Gly Asp Lys Glu 325 330 335

Phe Vai Ile Arg Arg Ala Ala Thr Asn Arg Vai Leu Asn Vai Leu Arg 340 345 350

His Trp Vai Ser Lys His Ser Gin Asp Phe Glu Thr Asn Asp Glu Leu 355 360 365

Lys Cys Lys Vai Ile Gly Phe Leu Glu Glu Vai Met His Asp Pro Glu 370 375 380

Leu Leu Thr Gin Glu Arg Lys Ala Ala Ala Asn Ile Ile Arg Thr Leu 385 390 395 400

Thr Gin Glu Asp Pro Gly Asp Asn Gin Ile Thr Leu Glu Glu Ile Thr 405 410 415

Gin Met Ala Glu Gly Vai Lys Ala Glu Pro Phe Glu Asn His Ser Ala 420 425 430

Leu Glu Ile Ala Glu Gin Leu Thr Leu Leu Asp His Leu Vai Phe Lys 435 440 445

Lys Ile Pro Tyr Glu Glu Phe Phe Gly Gin Gly Trp Met Lys Leu Glu 450 455 460

Lys Asn Glu Arg Thr Pro Tyr Ile Met Lys Thr Thr Lys His Phe Asn 465 470 475 480 Asp Ile Ser Asn Leu Ile Ala ser Glu ile ile Arg Asn Glu Asp Ile 485 490 495 33

Asn Ala Arg Vai Ser Ala Ile Glu Lys Trp Vai Ala Vai Ala Asp Ile 500 505 510 Cys Arg Cys Leu His Asn Tyr Asn Ala Vai Leu Glu Ile Thr Ser Ser 515 520 525 Met Asn Arg Ser Ala Ile Phe Arg Leu Lys Lys Thr Trp Leu Lys Vai 530 535 540 Ser Lys Gin Thr Lys Ala Leu Ile Asp Lys Leu Gin Lys Leu Vai Ser 545 550 555 560 Ser Glu Gly Arg Phe Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu Lys Asn Cys Asp 565 570 575 Pro Pro Cys Vai Pro Tyr Leu Gly Met Tyr Leu Thr Asp Leu Ala Phe 580 585 590 Ile Glu Glu Gly Thr Pro Asn Tyr Thr Glu Asp Gly Leu Vai Asn Phe 595 600 605 Ser Lys Met Arg Met ile Ser His Ile Ile Arg Glu Ile Arg Gin Phe 610 615 620 Gin Gin Thr Ala Tyr Lys Ile Glu His Gin Ala Lys Vai Thr Gin Tvr 625 630 635 640 Leu Leu Asp Gin Ser Phe Vai Met Asp Glu Glu Ser Leu Tyr Glu Ser 645 650 655 Ser Leu Arg Ile Glu Pro Lys Leu Pro Thr 660 665 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 489 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 4: 34

Met Tyr Ser Ala Met Ser Pro Phe Ser Lys Ala Thr Leu Asp Thr Ser 15 10 15

Lys Leu Tyr Vai Ser Ser Ser Phe Thr Asn Lys Ile Pro Asp Glu Gly 20 25 30

Asp Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Asp Pro ser Ala Leu Ser Lys Gin 35 40 45

Ser Ser Glu Vai Ser Met Arg Glu Glu Ser Asp Ile Asp Gin Asn Gin 50 55 60

Ser Asp Asp Gly Asp Thr Glu Thr Ser Pro Thr .Lys Ser Pro Thr Thr 65 70 75 80

Pro Lys Ser Vai Lys Asn Lys Asn Ser Ser Glu Phe Pro Leu Phe Ser 85 90 95

Tyr Asn Asn Gly Vai Vai Met Thr Ser Cys Arg Glu Leu Asp Asn Asn 100 105 110

Arg Ser Ala Leu Ser Ala Ala Ser Ala Phe Ala lie Ala Thr Alá Gly 115 120 125

Ala Asn Glu Gly Thr Pro Asn Lys Glu Lys Tyr Arg Arg Met Ser Leu 130 135 140

Ala Ser Ala Gly Phe Pro Pro Asp Gin Arg Asn Gly Asp Lys Glu Phe 145 150 155 160

Vai Ile Arg Arg Ala Ala Thr Asn Arg Vai Leu Asn Vai Leu Arg His 165 170 175

Trp Vai Ser Lys His Ser Gin Asp Phe Glu Thr Asn Asp Glu Leu Lys 180 185 190

Cys Lys Vai Ile Gly Phe Leu Glu Glu Vai Met His Asp Pro Glu Leu 195 200 205

Leu Thr Gin Glu Arg Lys Ala Ala Ala Asn lie Ile Arg Thr Leu Thr 210 215 220

Gin Glu Asp Pro Gly Asp Asn Gin Ile Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gin 225 230 235 240

Met Ala Glu Gly Vai Lys Ala Glu Pro Phe Glu Asn His Ser Ala Leu 245 250 255

Glu lie Ala Glu Gin Leu Thr Leu Leu Asp His Leu Vai Phe Lys Lys 260 265 270 35

Ile Pro Tyr Glu Glu Phe Phe Gly Gin Gly Trp Met Lys Leu Glu Lys 275 280 285 Asn Glu Arg Thr Pro Tyr Ile Met Lys Thr Thr Lys His Phe Asn Asp 290 295 300 Ile Ser Asn Leu Ile Ala Ser Glu Ile Ile Arg Asn Glu Asp Ile Asn 305 310 315 320 Ala Arg Vai Ser Ala Ile Glu Lys Trp Vai Ala Vai Ala Asp Ile Cys 325 330 335 Arg Cys Leu His Asn Tyr Asn Ala Vai Leu Glu Ile Thr Ser Ser Met 340 345 350 Asn Arg Ser Ala Ile Phe Arg Leu Lys Lys Thr Trp Leu Lys Vai Ser 355 360 365 Lys Gin Thr Lys Ala Leu Ile Asp Lys Leu Gin Lys Leu Vai Ser Ser 370 375 380 Glu Gly Arg Phe Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu Lys Asn Cys Asp Pro 385 390 395 400 Pro Cys Vai Pro Tyr Leu Gly Met Tyr Leu Thr Asp Leu Ala Phe Ile 405 410 415 Glu Glu Gly Thr Pro Asn Tyr Thr Glu Asp Gly Leu Vai Asn Phe Ser 420 425 430 Lys Met Arg Met Ile Ser His Ile Ile Arg Glu Ile Arg Gin Phe Gin 435 440 445 Gin Thr Ala Tyr Lys Ile Glu His Gin Ala Lys Vai Thr Gin Tyr Leu 450 455 460 Leu Asp Gin Ser Phe Vai Met Asp Glu Glu Ser Leu Tyr Glu Ser Ser 465 470 475 480

Leu Arg Ile Glu Pro Lys Leu Pro Thr 485 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1092 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 36 (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO

(iii) ΑΝΤΙ-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA ADICIONAL:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..1092 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 5: ATT ACT AAA ATA ATC CAA AGG AAA AAA ATT GCA AGA GAC AAT GGA CCA 48 Ile Thr Lys Ile Ile Gin Arg Lys Lys Ile Ala Arg Asp Asn Gly Pro 1 5 10 15 GGT CAT AAT ATT ACA TTT CAG AGT TCA CCT CCC ACA GTT GAG TGG CAT 96 Gly Hás Asn Ile Thr Phe Gin Ser ser Pro Pro Thr Vai Glu Trp His 20 25 30 ATA AGC AGA CCT GGG CAC ATA GAG ACT TTT GAC CTG CTC ACC TTA CAC 144 Ile Ser Arg Pro Gly His Ile Glu Thr Phe Asp Leu Leu Thr Leu His 35 40 45 CCA ATA GAA ATT GCT CGA CAA CTC ACT TTA CTT GAT TCA GAT CTA TAC 192 Pro Ile Glu Ile Ala Arg Gin Leu Thr Leu Leu Asp Ser Asp Leu Tyr 50 55 60 CGA GCT GTA CAG CCA TCA GAT TTA GTT GGA AGT GTG TGG ACA AAA GAA 240 Arg Ala Vai Gin Pro Ser Asp Leu Vai Gly Ser Vai Trp Thr Lys Glu 65 70 75 80 GAC AAA GAA ATT AAC TCT CCT AAT CTT CTG AAA ATG ATT CGA CAT ACC 288 Asp Lys GlU Ile Asn ser Pro Asn Leu Leu Lys Met Ile Arg His Thr 85 90 95 ACC AAC CTC ACT CTG TGG TTT GAG AAA TGT ATT GTA GAA ACT GAA AAT 336 Thr Asn Leu Thr Leu Trp Phe Glu Lys Cys Ile Vai Glu Thr Glu Asn 100 105 110 ΓΤΑ GAA GAA AGA GTA GCT GTG GTG AGT CGA ATT ATT GAG ATT CTA CAA 384 Leu Glu Glu Arg Vai Ala Vai Vai Ser Arg Ile Ile Glu Ile Leu Gin 115 120 125 37 GTC TTT CAA GAG TTG AAC Vai Phe 130 Gin Glu Leu Asn GCT ATG AAT TCC TCA CCT Ala 145 Met Asn Ser Ser Pro 150 ATA CCA AGT CGC CAG AAG Ile Pro Ser Arg Gin 165 Lys GAA GAT CAC TAT AAG AAA Glu Asp His Tyr 180 Lys Lys CCA TGT GTG CCT TTC TTT Pro Cys Vai 195 Pro Phe Phe GAA GAA GGC AAC CCT GAG Glu Glu Gly Asn 210 Pro Glu AAC TTT AGC AAA AGG AGG Asn 225 Phe Ser Lys Arg Arg 230 CAG TAC CAA AAT CAG CCT Gin Tyr Gin Asn Gin 245 Pro AGG TTC TTT GAA AAC TTG Arg Phe Phe Glu 260 Asn Leu TTT ACA GAT TAT CTT TTC Phe Thr Asp 275 Tyr Leu Phe CCT AAG CCT CTC CCA AGA Pro Lys 290 Pro Leu Pro Arg TCT CCT GGT GTC CGG CCA Ser 305 Pro Gly Vai Arg Pro 310 CCC ACC CCT CTA CAG CAG Pro Thr Pro Leu Gin 325 Gin CCA GAG TCA GAG ACA GAG Pro Glu Ser Glu 340 Thr Glu ACA CCT CÍA ACA CCT CCA Thr Pro Leu 355 Thr Pro Pro AAC TTT AAT GGG GTC CTT Asn 135 Phe Asn Gly Vai Leu 140 GTT TAC AGA CTA GAC CAC Vai Tyr Arg Leu Asp 155 His AAA ATT TTA GAA GAA GCT Lys Ile Leu Glu 170 Glu Ala TAT TTG GCA AAA CTC AGG Tyr Leu Ala 185 Lys Leu Arg GGA ATT TAT CTA CAT AAT Gly ile 200 Tyr Leu HiS Asn GTC CTA AAA AGA CAT GGA Vai 215 Leu Lys Arg His Gly 220 AAA GTA GCA GAA ATA ACA Lys Vai Ala Glu Ile 235 Thr TAC TGT TTA CGA GTA GAA Tyr Cys Leu Arg 250 Vai Glu AAT CCG ATG GGA AAT AGC Asn Pro Met 265 Gly Asn Ser AAC AAA TCC CTA GAA ATA Asn Lys 280 Ser Leu Glu Ile TTT CCA AAA AAA TAT ACG Phe 295 Pro Lys Lys Tyr Thr 300 TCA AAC CCA AGA CCG GGT Ser Asn Pro Arg Pro 315 Gly GAA CCA CGA AAA ATA AGT Glu Pro Arg Lys 330 Ile Ser AGT ACT GCT AGT GCA CCT Ser Thr Ala 345 Ser Ala Pro CCT GCA TCA GGA ACA TCA Pro Ala 360 Ser Gly Thr Ser GAG GTT GTC AGT 432

Glu Vai Vai Ser ACA TTT GAG CAA 480

Thr Phe Glu Gin 160 CAT GAA TTG AGT 528

His Glu Leu Ser 175 TCT ATT AAT CCA 576

Ser Ile Asn Pro 190 ATC TTG AÀA ACA 624

Ile Leu Lys Thr 205 AAA GAG CTT ATA 672

Lys Glu Leu Ile GGA GAG ATC CAG 720

Gly Glu Ile Gin 240 TCA GAT ATC AAA 768

Ser Asp Ile Lys 255 ATG GAG AGG GAA 816

Met Glu Arg Glu 270 GAA CCA CGA AAC 864

Glu Pro Arg Asn 285 TAT CCC CTA AAA 912

Tyr Pro Leu Lys ACC ATG AGG ATC 960

Thr Met Arg Ile 320 TAT AGT AGA ATA 1008

Tyr Ser Arg Ile 335 AAT TCA CCA AGG 1056

Asn Ser Pro Arg 350 38 1092 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 6: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 364 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 6:

Ile Thr Lys Ile Ile Gin Arg Lys Lys Ile Ala Arg Asp Asn Gly Pro 1 5 10 15 Gly His Asn Ile Thr Phe Gin Ser Ser Pro Pro Thr Vai Glu Trp His 20 25 30 Ile Ser Arg Pro Gly His Ile Glu Thr Phe Asp Leu Leu Thr Leu His 35 40 45 Pro Ile Glu Ile Ala Arg Gin Leu Thr Leu Leu Asp Ser Asp Leu Tyr 50 55 60 Arg Ala Vai Gin Pro Ser Asp Leu Vai Gly Ser Vai Trp Thr Lys Glu 65 70 75 80 ASp Lys Glu Ile Asn Ser Pro Asn Leu Leu Lys Met Ile Arg His Thr 85 90 95 Thr Asn Leu Thr Leu Trp Phe Glu Lys Cys Ile Vai Glu Thr Glu Asn 100 105 110 Leu Glu Glu Arg Vai Ala Vai Vai Ser Arg Ile Ile Glu Ile Leu Gin 115 120 125 Vai Phe Gin Glu Leu Asn Asn Phe Asn Gly Vai Leu Glu Vai Vai Ser 130 135 140 Ala Met Asn Ser Ser Pro Vai Tyr Arg Leu Asp His Thr Phe Glu Gin 145 150 155 160 Ile Pro Ser Arg Gin Lys Lys Ile Leu Glu Glu Ala His Glu Leu Ser 165 170 175 Glu Asp His Tyr Lys Lys Tyr Leu Ala Lys Leu Arg Ser Ile Asn Pro 180 185 190 39

Pro Cys Vai Pro Phe Phe Gly Ile Tyr Leu Hls Asn lie Leu Lys Thr 195 200 205 Glu Glu Gly Asn Pro Glu Vai Leu Lys Arg His Gly Lys Glu Leu Ile 210 215 220 Asn Phe Ser Lys Arg Arg Lys Vai Ala Glu Ile Thr Gly Glu Ile Gin 225 230 235 240 Gin Tyr Gin Asn Gin Pro Tyr Cys Leu Arg Vai GlU Ser Asp Ile Lys 245 250 255 Arg Phe Phe Glu Asn Leu Asn Pro Met Gly Asn Ser Met Glu Arg Glu 260 265 270 Phe Thr Asp Tyr Leu Phe Asn Lys Ser Leu Glu Ile Glu Pro Arg Asn 275 280 285 Pro Lys Pro Leu Pro Arg Phe Pro Lys Lys Tyr Thr Tyr Pro Leu Lys 290 295 300 Ser Pro Gly Vai Arg Pro Ser Asn Pro Arg Pro Gly Thr Met Arg Ile 305 310 315 320 Pro Thr Pro Leu Gin Gin Glu Pro Arg Lys Ile Ser Tyr Ser Arg Ile 325 330 335 Pro Glu Ser Glu Thr Glu Ser Thr Ala Ser Ala Pro Asn Ser Pro Arg 340 345 350 Thr Pro Leu Thr Pro Pro Pro Ala Ser Gly Thr Ser 355 360 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 7: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 1956 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO

(iii) ΑΝΤΙ-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA ADICIONAL: 40

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1.1956 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 7: AGG TTT GAA ATC CCA GAG CCA GAA CCT ACA GAA GCA GAT AAA CTA GCA 48 Arg Phe Glu Ile Pro Glu Pro Glu Pro Thr Glu Ala Asp Lys Leu Ala 1 5 10 15 CTT GAG AAA GGA GAA CAA CCA ATC TCT GCA GAT CTA AAG AGG TTC AGA 96 Leu Glu Lys Gly Glu Gin Pro Ile Ser Ala Asp Leu Lys Arg Phe Arg 20 25 30 AAG GAA TAT ATC CAA CCA GTA CAG CTA CGG GTG TTG AAC GTG CAG CGG 144 Lys Glu Tyr lie Gin Pro Vai Gin Leu Arg Vai Leu Asn Vai Gin Arg 35 40 45 CAC TGG GTT GAA CAT CAC CCC CAT GAC TTT GAA AGA GAC TTG GAA CTG 192 His Trp val Glu HiS His Pro HiS Asp Phe Glu Arg Asp Leu Glu Leu 50 55 60 CTC GAA AGA CTA GAA TCC TTC ACC TCA AGC GCT CAC AGA CCG AAA GCA 240 Leu Glu Arg Leu Glu Ser Phe Thr Ser Ser Ala His Arg Ala Lys Ala 65 70 75 80 ATG AAG AAG TGG GTA GAG AGC ATC GCT AAG ACC ATC AGG AGG AAG AAG 286 Met Lys Lys Trp Vai Glu Ser Ile Ala Lys Thr Ile Arg Arg Lys Lys 85 90 95 CAA GCT CAG GCA AAT GGA GTA AGC CAT AAT ATT ACC TTT GAA AGT CCA 336 Gin Alâ Gin Alâ Asn Gly vai Ser His Asn ile Thr Phe Glu Ser Pro 100 105 110 CCT CCA CCA ATT GAA TGG CAT ATC AGC AAA CCA GGA CAG TTT GAA ACA 384 Pro Pro Pro Ile GlU Trp His Ile Ser Lys Pro Gly Gin Phe Glu Thr 115 120 125 TTT GAT CTC ATG ACA CTT CAT CCA ATA GAA ATT GCA CGT CAG CTG ACA 432 Phe Asp Leu Met Thr Leu His Pro Ile GlU Ile Ala Arg Gin Leu Thr 130 135 140 CTT TTG GAG TCT GAT CTT TAC AGG AAA GTT CAA CCG TCT GAA CTT GTA 480 Leu Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Arg Lys Vai Gin Pro Ser Glu Leu Vai 145 150 155 160 GGG AGT GTG TGG ACC AAA GAA GAT AAA GAA ATA AAT TCT CCA AAT TTA 528 Gly Ser Vai Trp Thr Lys Glu Asp Lys Glu Ile Asn Ser Pro Asn Leu 165 170 175 TTA AAA ATG ATT CGC CAT ACC ACA AAT CTC ACC CTC TGG TTT GAA AAA 576 Leu Lys Met Ile Arg His Thr Thr Asn Leu Thr Leu Trp Phe Glu Lys 180 185 190 TGC ATT GTG GAA GCA GAA AAT TTT GAA GAA CGG GTG GCA GTA CTA AGT 624 Cys lie Vai Glu Ala Glu Asn Phe Glu Glu Arg Vai Ala Vai Leu Ser 195 200 205 AGA ATT ATA GAA ATT CTC CAA GTT TTT CGA GAT TTG AAT AAT TTC AAT 672 41

Arg lie Ile Glu Ile Leu Gin Vai Phe Arg Asp Leu Asn Asn Phe Asn 210 215 220 GGC GTA TTG GAG ATA GTC AGT GCA GTA AAT TCA GTG TCA GTA TAC AGA 720

Gly Vai Leu Glu Ile Vai Ser Ala Vai Asn Ser Vai Ser Vai Tyr Arg 225 230 235 240 CTA GAC CAT ACC TTT GAG GCA CTG CAG GAA AGG AAA AGG AAA ATT TTG 768

Leu Asp Hls Thr Phe Glu Ala Leu Gin Glu Arg Lys Arg Lys Ile Leu 245 250 255 GAC GAA GCT GTG GAA TTA AGT CAA 6AT CAC TTT AAA AAA TAC CTA GTA 816

Asp Glu Ala Vai Glu Leu Ser Gin Asp His Phe Lys Lys Tyr Leu Vai 260 265 270 AAA CTT AAG TCA ATC AAT CCA CCT TGT GTG CCT TTT TTT GGA ATA TAT 864

Lys Leu Lys ser Ile Asn Pro Pro Cys Vai Pro Phe Phe Gly Ile Tyr 275 280 285 TTA ACA AAT ATT CTG AAG ACC GAA GAA GGG AAT AAT GAT TTT TTA AAA 912

Leu Thr Asn Ile Leu Lys Thr Glu Glu Gly Asn Asn Asp Phe Leu Lys 290 295 300 AAG AAA GGG AAA GAT TTA ATC AAT TTC AGT AAG AGG AGG AAA GTA GCT 960

Lys Lys Gly Lys Asp Leu Ile Asn Phe Ser Lys Arg Arg Lys Vai Ala 305 310 315 320 GAA ATT ACT GGA GAA ATT CAG CAG TAT CAG AAT CAG CCG TAC TGC CTA 1008

Glu Ile Thr Gly Glu Ile Gin Gin Tyr Gin Asn Gin Pro Tyr Cys Leu 325 330 335 CGG ATA GAA CCA GAT ATG AGG AGA TTC TTT GAA AAC CTT AAC CCC ATG 1056

Arg Ile Glu Pro Asp Met Arg Arg Phe Phe Glu Asn Leu Asn Pro Met 340 345 350 GGA AGT GCA TGT G.4A AAA GAG TTT ACA GAT TAT TTG TTC AAC AAA AGT 1104

Gly Ser Ala Cys Glu Lys Glu Phe Thr Asp Tyr Leu Phe Asn Lys Ser 355 360 365 TTA GAA ATA GAA CCA CGA AAT TGT AAA CAG CCA CCA CGA TTT CCA CGA 1152

Leu Glu Ile Glu Pro Arg Asn Cys Lys Gin Pro Pro Arg Phe Pro Arg 370 375 380 AAA AGT ACA TTT GAA CTA AAA GAA CCA GGA ATA CGA CCA AAT GCA GGA 1200

Lys Ser Thr Phe Glu Leu Lys Glu Pro Gly Ile Arg Pro Asn Ala Gly 385 390 395 400 CGA CAT GGA GAA ACA AGT GGA ACA AGA GGA CAT CCA ACA CCT CTA GAA 1248

Arg His Gly Glu Thr Ser Gly Thr Arg Gly His Pro Thr Pro Leu Glu 405 410 415 AGA GAA CCA TAT AAA ATA GAA TTT GAA AGA ATA GCT GAA ACA GAA CTA 1296

Arg Glu Pro Tyr Lys Ile Glu Phe Glu Arg Ile Ala Glu Thr Glu Leu 420 425 430 GAA AGT ACA GTA AGT GCA CCA ACA AGT CCA AAT ACT CCC TCA ACA CCA 1344

Glu Ser Thr Vai Ser Ala Pro Thr Ser Pro Asn Thr Pro Ser Thr Pro 435 440 445 CCA GTT TCA GCA TCA TCA GAT CAC TCA GTA TTT TTA GAT GTA GAT CTA 1392

Pro Vai Ser Ala Ser Ser Asp His Ser Vai Phe Leu Asp Vai Asp Leu 450 455 460 42 AAC AGT AGT CAC GGA TCA AAC ACA ATC TTT GCA CCT GTG CTA CTA CCA 1440 Asn Ser Ser His Gly Ser Asn Thr lie Phe Ala Pro Vai Leu Leu Pro 465 470 475 480 AAG TCC AAG TCT TTC TTT AGT TCA TGT GGA AGT TTA CAT AAA CTA AGT 1488 Lys Ser Lys Ser Phe Phe Ser Ser Cys Gly Ser Leu His Lys Leu Ser 485 490 495 GAA GAG CCC CTG ATT CCT CCT CCT CTT CCT CCT CGA AAA AAG TTT GAT 1536 Glu Glu Pro Leu Ile Pro Pro Pro Leu Pro Pro Arg Lys Lys Phe Asp 500 505 510 CAT GAT GGC TCA AAT TCC AAG GGA AAT ATG AAA TCT GAT GAT GAT CCT 1584 His Asp Gly Ser Asn Ser Lys Gly Asn Met Lys Ser Asp Asp Asp Pro 515 520 525 CCT GCT ATT CCA CCG AGA CAG CCT CCT CCT CCA AAG GTA AAA CCC AGA 1632 Pro Ala lie Pro Pro Arg Gin Pro Pro Pro Pro Lys Vai Lys Pro Arg 530 535 540 GTT CCT GTT CCT ACT GGT GCA TTT GAT GGG CCT CTG CAT AGT CCA CCT 1680 Vai Pro Vai Pro Thr Gly Ala Phe Asp Gly Pro Leu His Ser Pro Pro 545 550 555 560 CCG CCA CCA CCA AGA GAT CCT CTT CCT GAT ACC CCT CCA CCA GTT CCC 1728 Pro Pro Pro Pro Arg Asp Pro Leu Pro Asp Thr Pro Pro Pro Vai Pro 565 570 575 CTT CGG CCT CCA GAA CAC TTT ATA AAC TGT CCA TTT AAT CTT CAG CCA 1776 Leu Arg Pro Pro úlu HIS pne ile Asn Cys Pro Phe Asn Leu Gin Pro 580 585 590 CCT CCA CTG GGG CAT CTT CAC AGA GAT TCA GAC TGG CTC AGA GAC ATT 1824 Pro Pro Leu Gly His Leu His Arg Asp Ser Asp Trp Leu Arg Asp Ile 595 600 605 AGT ACG TGT CCA AAT TCG CCA AGC ACT CCT CCT AGC ACA CCC TCT CCA 1872 Ser Thr cys Pro Asn Ser Pro Ser Thr Pro Pro Ser Thr Pro Ser Pro 610 615 620 AGG GTA CCG CGT CGA TGC TAT GTG CTC AGT TCT AGT CAG AAT AAT 1920 Arg Vai Pro Arg Arg Cys Tyr Vai Leu Ser Ser Ser Gin Asn Asn Leu 625 630 635 640 GCT CAT CCT CCA GCT CCC CCT GTT CCA CCA AGG GAG 1956 Ala His Pro Pro Ala Pro Pro Vai Pro Pro Arg Glu 645 650 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N° : : 8: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 652 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear 43 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 8:

Arg Phe Glu Ile Pro Glu Pro Glu Pro Thr Glu Ala Asp Lys Leu Ala 1 5 10 15 Leu Glu Lys Gly Glu Gin Pro Ile Ser Ala Asp Leu Lys Arg Phe Arg 20 25 30 Lys Glu Tyr Ile Gin Pro Vai Gin Leu Arg Vai Leu Asn Vai Gin Arg 35 40 45 His Trp Vai Glu His His Pro His Asp Phe Glu Arg Asp Leu Glu Leu 50 55 60 Leu Glu Arg Leu Glu Ser Phe Thr Ser Ser Ala His Arg Ala Lys Ala 65 70 75 80 Met Lys Lys Trp Vai Glu Ser Ile Ala Lys Thr Ile Arg Arg Lys Lys 85 90 95 Gin Ala Gin Ala Asn Gly Vai Ser His Asn Ile Thr Phe Glu Ser Pro 100 105 110 Pro Pro Pro Ile Glu Trp His Ile Ser Lys Pro Gly Gin Phe Glu Thr 115 120 125 Phe Asp Leu Met Thr Leu His Pro Ile Glu Ile Ala Arg Gin Leu Thr 130 135 140 Leu Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Arg Lys Vai Gin Pro Ser Glu Leu Vai 145 150 155 160 Gly Ser Vai Trp Thr Lys Glu Asp Lys Glu Ile Asn Ser Pro Asn Leu 165 170 175 Leu Lys Met Ile Arg His Thr Thr Asn Leu Thr Leu Trp Phe Glu Lys 180 185 190 Cys Ile Vai Glu Ala Glu Asn Phe Glu Glu Arg Vai Ala Vai Leu Ser 195 200 205 Arg Ile lie Glu Ile Leu Gin Vai Phe Arg Asp Leu Asn Asn Phe Asn 210 215 220 Gly Vai Leu Glu Ile Vai Ser Ala Vai Asn Ser Vai Ser Vai Tyr Arg 225 230 235 240 Leu Asp His Thr Phe Glu Ala Leu Gin Glu Arg Lys Arg Lys Ile Leu 245 250 255 Asp Glu Ala Vai Glu Leu Ser Gin Asp His Phe Lys Lys Tyr Leu vai 260 265 270 44

Lys Leu Lys Ser Ile Asn Pro Pro Cys Vai Pro Phe Phe Gly Ile Tyr 275 280 285 Leu Thr Asn Ile Leu Lys Thr Glu Glu Gly Asn Asn Asp Phe Leu Lys 290 295 300 Lys Lys Gly Lys Asp Leu Ile Asn Phe Ser Lys Arg Arg Lys Vai Ala 305 310 315 320 Glu Ile Thr Gly Glu Ile Gin Gin Tyr Gin Asn Gin Pro Tyr Cys Leu 325 330 335 Arg Ile Glu Pro Asp Met Arg Arg Phe Phe Glu Asn Leu Asn Pro Met 340 345 350 Gly Ser Ala Cys Glu Lys Glu Phe Thr Asp Tyr Leu Phe Asn Lys Ser 355 360 365 Leu Glu Ile Glu Pro Arg Asn Cys Lys Gin Pro Pro Arg Phe Pro Arg 370 375 380 Lys Ser Thr Phe Glu Leu Lys Glu Pro Gly Ile Arg Pro Asn Ala Gly 385 390 395 400

Arg His Gly Glu Thr Ser Gly Thr Arg Gly His Pro Thr Pro Leu Glu 405 410 415

Arg Glu Pro Tyr Lys Ile Glu Phe Glu Arg Ile Ala Glu Thr Glu Leu 420 425 430

Glu Ser Thr Vai Ser Ala Pro Thr Ser Pro Asn Thr Pro Ser Thr Pro 435 440 445

Pro Vai Ser Ala Ser Ser Asp His Ser Vai Phe Leu Asp Vai Asp Leu 450 455 460

Asn Ser Ser His Gly Ser Asn Thr Ile Phe Ala Pro Vai Leu Leu Pro 465 470 475 480

Lys Ser Lys Ser Phe Phe Ser Ser Cys Gly Ser Leu His Lys Leu Ser 485 490 495

Glu Glu Pro Leu Ile Pro Pro Pro Leu Pro Pro Arg Lys Lys Phe Asp 500 505 510

His Asp Gly Ser Asn Ser Lys Gly Asn Met Lys Ser Asp Asp Asp Pro 515 520 525

Pro Ala Ile Pro Pro Arg Gin Pro Pro Pro Pro Lys Vai Lys Pro Arg 530 535 540

Vai Pro Vai Pro Thr Gly Ala Phe Asp Gly Pro Leu His Ser Pro Pro 545 550 555 560

Pro Pro Pro Pro Arg Asp Pro Leu Pro Asp Thr Pro Pro Pro Vai Pro 565 570 575 45

Leu Arg Pro Pro Glu 580 His Phe Ile Asn 585 Cys Pro Phe Asn Leu 590 Gin Pro Pro Pro Leu 595 Gly His Leu His Arg 600 Asp Ser Asp Trp Leu Arg Asp Ile 605 Ser Thr 610 Cys Pro Asn Ser Pro 615 Ser Thr Pro Pro Ser 620 Thr Pro Ser Pro Arg 625 Vai Pro Arg Arg Cys 630 Tyr Vai Leu Ser Ser 635 Ser Gin Asn Asn Leu 640 Ala His Pro Pro Ala 645 Pro Pro Vai Pro Pro Arg 650 Glu (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°:9: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:9: GATATCGAAT TCCGIGTIYT IAAYGTIYTI MGICAYTGGG T 41 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°:10: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 34 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico 46 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°:10: AAGCTTGAAT TCCKIMKYTT ISWRAARTTI AKIA 34 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 11: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 33 bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 11: ATCHGTNAGG TACATNCCHA GGTAKGGNAC ACA 33 (2) INFORMAÇÃO PARA A SEQ ID N°: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 27 bases (B) TIPO: ácido nucleico 47 (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNC (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N°: 12: GCNATHTTYC GNCTNAARAA RACNTGG 27

Lisboa, 27 de Agosto de 2007 48

Claims (17)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Péptido capaz de modular os níveis de permuta do GDP nos complexos p21-GDP, compreendendo as sequências SEQ ID N° 2, 3, 4, 6 ou 8.
2. 2. Péptido de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por retardar ou inibir a permuta do GDP no complexo p21-GDP.
3. 3. Péptido de sequência SEQ ID N° 2, 3, 4, 6 ou 8.
4. 4. Anticorpos ou fragmento de anticorpos dirigidos contra um péptido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
5. 5. Anticorpos ou fragmento de anticorpos de acordo com a reivindicação 4, caracterizados por serem dirigidos contra a sequência peptídica SEQ ID N° 1.
6. 6. Anticorpos ou fragmento de anticorpos de acordo com a reivindicação 5, caracterizados por possuírem capacidade para inibir, pelo menos parcialmente, a permuta do GDP no complexo p21-GDP.
7. 7. Sequência nucleotídica codificante de um péptido como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
8. 8. Sequência nucleotídica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por ser escolhida a partir de: (a) sequências SEQ ID N° 1, 5 ou 7 e codificam um péptido capaz de modular os níveis de permuta do GDP nos complexos p21-GDP, 1 (b) cadeia complementar das sequências (a), (c) sequências derivados a partir das sequências (a) e (b) como resultado da degenerescência do código genético.
9. 9. Sequência anti-sentido capaz de inibir a produção de péptidos de acordo com a reivindicação 3 e derivados das sequências SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 5 ou SEQ ID N° 7 ou a sua cadeia complementar.
10. 10. Utilização de uma sequência de acordo com a reivindicação 8 (b) para a detecção in vitro da expressão do factor de permuta do GDP ou para a demonstração de anomalias genéticas (splicing incorrecto, polimorfismo, mutações pontuais).
11. 11. Composição farmacêutica compreendendo como principio activo pelo menos um péptido de acordo com uma das reivindicações 1 a 3 ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com uma das reivindicações 4 a 6 ou uma sequência nucleotidica de acordo com a reivindicação 8.
12. 12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, destinada a modular a activação das proteínas p21.
13. 13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 12, destinada a inibir, pelo menos, parcialmente a activação das proteínas p21.
14. 14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, destinada ao tratamento de cancros. 2
15. 15. Utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com uma das reivindicações 4 a 6 e/ou de uma sequência nucleotidica de acordo com a reivindicação 8 (b) para a detecção da expressão e/ou de uma sobre-expressão de um factor de permuta do GDP amplificado, mutado ou reorganizado numa amostra biológica.
16. 16. Utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com uma das reivindicações 4 a 6 e/ou de uma sequência nucleotidica de acordo com a reivindicação 8 (b) para a tipagem de cancros in vitro.
17. 17. Processo de preparação de um péptido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por se cultivar uma célula contendo uma sequência nucleotidica de acordo com a reivindicação 7 nas condições de expressão da referida sequência e recuperar o péptido produzido. Lisboa, 27 de Agosto de 2007 3