PT2783694T - Sequências de péptidos e composições de anófeles gambiase - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

SEQUÊNCIAS DE BÉFTXDOS E COMPOSIÇÕES DE mÓFELES OéMBmSE Ά invenção refere-se a sequências peptidicas, composições compreendendo as sequências peptidicas, em particular vacinas contra doenças transmitidas por artrópodes Compreendendo as sequências e as composições, e utilizações das sequências. A presente invenção está particularmenfce relacionada coia vacinas que são protetoras contra qualquer uma ou maia doenças transmitidas por mosquitos, incluindo uma ou ruais estirpes de malária. A defesa contra a doença, é critica para a sobrevivência, de todos os animais, e o mecanismo de defesa empregue para esse fim é o sistema imune animal. Entender o sistema imunolôgico é, portanto, um® chave para entender o desenvolvimento de tratamentos novos e maia sofisticados para humanos e animais. O mecanismo de funcionamento do sistema imunolôgico está sob investigação há muitos anos, O sistema é composto de vários tipos de células e urna variedade de molécul-as/ tornando-as extremamente complexas.. Mesmo depois de muitos anos de estudo, a extensão total dos componentes do sistema imunolôgico e sua interação entre eles é mal compreendida. Há muitos anos, reconhecia-se que uma pessoa que se recupera I dg uma doença em particular pode adquirir alguma proteção no futuro contra essa doença, mas riâo contra uma doença que essa pessoa ainda, nâo tenha contraído., Este uipefo fundamental do sistema imunolôgico foi interpretado na época, considerando que o sistema imunolôgico adquiria uma espécie de "memória" contra certos, patôgenos, uma vez que a exposição a tais patógenos havia ocorrido, sendo a memória especifica de uma determinada doença.

GraduaImente, tornou-se conhecido que a exposição a variantes menos nocivas de um patògenio poderia induzir proteção contre variantes male nocivas {por exemplo., a exposição a variola bovina para proteger contra a variola, cu a exposição a ura antraz inativado para proteger contra o antraz vivo). Assim, surgiu a ideia de vacinação contra uma doença,

Sabe-se agora que o sistema imunológico tem pelo menos duas S: |ii|||í^^i!^|||á^ -é imbiibsbd âlilémã 111111!! inato é totalmente- funcional antes que um patógeno entre no sistema, enquanto o sistema adaptativo é ligado depois que o patógeno entra no sistema. Em seguida, desenvolve um ataque específico ao patógeno. 0 sistema inato compreende um número de componentes, incluindo f-agócitos, como os macrofagoε, que {como o nome sugere) "comem” ou engolem corpos estranhos, como patógenos.

Tipicamente, mas não excluslvamente, a presente invenção refere-se ao sistema imune adaptativo e, a menos que e spec ifí camenfce indicado de outro modo, o 'sistema imune’ no :':':':':':':p-resente contexto refere-se ao sistema imune adaptativo.

Pera entender melhor como funciona o sistema ímunológico, o papel de seus componentes individuais deve ser cuídacosamente considerado. Em relação ao sistema imune adaptativo, é bem conhecido que a imunidade contra patógenos é fornecida pela ação de Ilnfôcitos, que constituem o tipo de célula mais comum no sistema imune. Existem dois tipos de linfócitos: o linfócito 3 e o linfôcitc T. Estes são geralmente denominados células 3 e células Ί, respetivamente.

As células B têm a capacidade de se desenvolver em células plasmáticas, que fabricam anticorpos. Anticorpos são componentes muito importantes do sistema imunológico llâillaliilllil!!! pt#|i|i:d:da |:» flipbiia a| lili^ums ;|?i:içiii!l!péllll assinatura do patógeno invasor (um an tiger,o do patógeno ~ antigenos aqui definidos como qualquer substância estranha .reconhecida pelo sistema rmunclògieo} e são geralmente específicos desse patogeno, No entanto, se dois patógenos são .muito semelhantes, on pelo manos contêm o mesmo sntigene, então os anticorpos produzidos contra um podem, no entanto, ser eficazes contra o outro íeles podem ’reagir de forna lllpfiipiillll.isto :éx||i.içiíÍiÍiÍÍM£qi^ bovina pode proteger contra a varíola. Ê importante perceber que os anticorpos "reconhecem" apenas uma pequena porção da molécula, antiqênica do patóqeno em vez do patôgeno como um todo. Células T não possuem ou produzem anticorpos, Em vez disso, reconhecera fragmentos (ou seja, epi topos} do antígeno estranho eomplexado com o complexo principal de histocompatibílidade (MHC) (ou, no caso dos humanos,

antígeno ieucocítárío humano (HiA}} através de um. recetor especializado conhecido como TÇR (recetor de células T). As células T sao elas mesmas divisíveis em subconjuntos que podem ter uma funçãc reguladora ou uma função efetora. As células efetoras estão envolvidas em ”efetuar” a remoção de substâncias estranhas. Por exemplo, as células T citotóxícas (CTL) são células efectoras que são capazes de matar células lllliihlitãdãa;',. ·Ρ£ΐ|::::::§||^ IdiÉilllllllllllllP células tumoraia, As células T reguladoras, por outro lado, desempenham um .papel em ajudar as células efetoras f 11:::1111:111111::115 se tornarem ma is efetivas, Devido a esta função, estas células T reguladoras são frequentementa denominadas células T 'auxiliares*. Acredita-se que outras células T reguladoras, denominadas células T "supressoras", inibam as respostas imunes, mas estas são menos bem compreendidas. As células T reguladoras também podam interagir com componentes do sistema imune inato para aumentar sua atividade.

Em um indivíduo normal e saudável, os línfôeitos no sistema imune permanecem em estado de ”repouso” inativo até que uma resposta imune soja desencadeada, Quando uma resposta imune é necessária, os linfócitos ativara~se, proliferam e começam a realizar suas funções designadas. Por exemplo, qualquer célula ! em repouso que exiba em sua superfície um TCR que reconheça um epítopo do patóqe.oo invasor còmplexado com uma molécula de MHC seja ativada, prolifera (sendo denominada expansão clonal) e a prole resultante começa a realizar ativamente suas funções ©fetoras predeterminadas necessário para combater os organismos invasores.

Quando a resposta imune é completada {ou seja, os patogenos e/ou células infetadas foram eliminados), os linfócitos voltam novamente ao estado de repouso. Este estado de descanso nao é, no entanto, equivalente ao estado inicial de repouso inativo. Os linfócitos ativados, mas em repouso, podem ser rapidamente recrutados e induzidos a proliferar em resposta a uma infeção pelo mesmo patógeno, ou infimamente relacionado, em um momento posterior,

Esta capacidade dos linfócitos em repouso ativados, de fornecer uma resposta maia rápida e mats potent© àp&ã a segundo encontro com um patõgeno invasor, ef e 11vamente fornece ao sistema imunológico a ’’memória". Ά exploração da memória do sistema imundlõqicd ê a base de todos os medicamentos imunoprofilâticos de longo prazo (por exemplo, vacinas) e continua sendo o objetivo de muitos medicamentos imunoterapêuticos de longo prazo,

Para que as células desempenhem suas funções dentro dos sistemas complexos de um animal, as células precisam ter ’’recetores” em suas superfícies, Esses recetores são capazes de ”reconhecer” substâncias especificas que controla*!ψάβξζβ® processos essenciais, camp: ativação, proliferação e aderência a outras células cu substratos, por exemplo;,, no caso do sistema imunológico, os recetores nas células T © 1 permitem não apenas reconhecer o antigeno, mas fámbêm; interagir uns corn os outros s( assim, regular suas atividades, Sem esses recetores, as células careceriam de um meio essencial de comunicação e seriam incapazes de agir efetivamente da maneira combinada que é essencial para o I úlsiéma prganislfii: | ipiifa ;po-dÉf| ^mimÊM'ÊÊÊÈÊ^W^^^lidar: (i||| à j||p::' gama de patógenos presentes no ambiente,· o sistema imune desenvolveu dois tipos de recetores de antígenos altameníe |: :;§ísí§:§:||)|1^ 1íu§1í|:§:|ÍÍí B e'^reldllilsl! lia· '"ieHIliS:· 1',.: .:GUl:;ÉÍÍÍÍi|Í|;ÍÍÍie^ 'Í|l| Há um grande número de possíveis recetores de antígenos presentes no corpo, para permitir que o sistema imunoiògico reconheça uma ampla variedade de patógenos invasores. Na verdade, existem cerca de 10iS células B diferentes e recetores de células T em um indivíduo* Cada célula B individual tem apenas um tipo de recetor e, portanto, para lidar com um patógeno em particular, uma célula B com o recetor de '"melhor adaptação" para um antigen© desse patógeno deve ser selecionada. Este processo é denominado "seleção clonal". Bm teoria, apenas um único clone pode responder í uma resposta monoclonal) ou vários (uma resposta oligoelonal) ou muitos (uma resposta poli clonal) dependendo do número de antigenos/epítopos exibidos pelo patógeno e da especificidade das várias células B selecionadas para estes antigénios/epítopos.

Existe uma grande diferença entre os tipos de antígeno que podem ser reconhecidos pelas células B e T« Até onde se sabe, apenas os recetores na superfície dos linfócitos B (anticorpos) são capazes de reconhecer diretamente antígenos como proteínas em virus e bactérias, ou moléculas estranhas dissolvidas no fluido corporal. Anticorpos também podem ser produzidos em forma solúvel pelas células B quando são ativados e se desenvolvem em células plasmátieas. Os '.auhipitqpi:;: tembfm liaiiÍMítei ímumoglofeulinas (abreviados para Ig) . Os recetores de células T, por outro laco, reconhecem apenas péptidos curtos, também conhecidos como apítopos de células T, na superfície das células do corpo. Estes epítopos de células T são produzidos pela degradação de proteínas maiores que são auto (isto é, proteínas corporais que ocorrem naturalmente} ou não-próprias (isto é, derivadas de organismos estranhos que infetam o corpo). Somente aqueles derivados de proteínas estranhas, ou seja, antlgenos, são normalmente capazes de induzir uma resposta imune no corpo. Uma vas produzidos,: estes epitopos estão ligados a um tipo especial de molécula, o MHC (complexo principal de histocompatibilidade) e o complexo resultante é então apresentado na superfície celular para ligação ao recetor da célula T,

Deve ficar claro que, devido à natureza destrutiva aa resposta imune, a resposta tem que agir apenas contra patógenos estranhos, não contra as próprias células ou proteínas do corpo* Ãssim, o sistema imunológico precisa distinguir entre "eu” e "não-eu". Foi proposto que, embora bs clones de iinfócitoa que reagem contra o eu sejam produzidos, são deletados antes que qualquer reação possa ocorrer. Esse processo é denominado "exclusão clonal”. Também foi proposto que qualquer linfócito auto-reagente poderxa ser retido, mas apenas em um estado desligado* Este mecanismo ê denominado "anergia clonal"* gpalquer que seja o processo considerado, ainda não esti cla.ro qual é o mecanismo subjacente exato que permit® que os tecidos linfoides, como o timo,

Babe-se há muitos anos que o principal complexo de histocompatibilidade (MHC) desempenha um papel fundamental no sistema imunológico dos animais* As moléculas do MHC permitem; qq® as células T reconheçam antlgenos, como já foi discutido a cirna» Existam três tipos gerais de moléculas de l||S:|:#jllÍ:l:à'S:S;é, I % o.lgss§: X11, Mm. classe I e ciasse II são glicoprotelnas que estão presentes na superfície da célula, enquanto as classes III são geralmente moléculas solúveis presentes ú||lllliieiridú da: célula, Há um grande número de diferentes tipos de moléculas de MHC„ Por exemplo, eia humanos {'onde o MHC é denominado HlA, antigeno leucocitário humano) existem, várias centenas de diferentes alelos dos genes que codificam as moléculas do MHC, o que significa que na população humana existem muitos tipos diferentes de HLA, O MHC de diferentes espécies é tipicamente chamado á® acordo, com diferentes convenções, assim, o MHC para ratinhe é denominado H~2, para o rato RTl e para o coelho RIA„ és diferentes regiões do gene que codificam para diferentes moléculas de MHC num. indivíduo s normalmente nomeadas individuaimente, tais como HLÃtAí* HIA-C;, .©fee. em humanos,. Ά molécula do MHC é uina molécula critica do sistema imunolôgicc, uma vez que é essa molécula que apresenta os epitopes dos antígenos ao sistema imunolôgico, Por exemplo,

Jlliffiilli!® ::álll||llpaf:ig«:|il: em ipltti.dulafi,: p lliiipéld: lllihõsí p:fjg$$|x:p&3. |||:|iilliiíilil||é |:δκρ:χ:$ι05ϊηε?: ú||á pdlpão ;pl|il|,Í|çá llllllllspiillhii: a um :::|ldl.#dil:a.. :iil|il|l|||||á ::::::::::::::;idpé^^ llp|||gè:l:d|:ii:' és asdlPilnf ç fasph o|Éf usr|llil:l|iilli|:, que se liga ao complexo MHC-péptido. Assim, a resposta imunitária é dependente da capacidade do MHC para se ligar & ο& llilhipliiiitef'' 'epi|:||d ao ,qúi:I ilMHllii' fiqhllp ou: se. i:||:||içúill|::|:l|i T qúé||||: liggfffs: |$i ..gliplexo· .iHillllllllllllllll iÍiÍSÍ|pi:p|;.i:di^ ódpr:ii;:r|||||

Mo entanto, em relação, às proteínas "próprias”, um de vários ©pitopos pode ser capaz de se ligar à molécula de MHC e, assim, potencialmente induzir uma resposta imunitária, Nessas ocasióes, um "sinal” especifico deve ser fornecido para que os clones de linfócitos auto-reagentes, sejam, excluídos ou "desligados".

Apesar do crescente conhecimento do funcionamento do sistema imunológico dos vertebrados, as vacinas contra muitas doenças permanecem ilusórias. Certos agentes patogénicos estão sujeitos à rápida mutação (por exemplo, HIV e gripe), de tal forma que os epítopos que podem ser úteis como alvos de vacina para uma estirpe, não são úteis após a mutação ter ocorrido porque o epitopo mudou na nova estirpe. Outros pátófehds* dõmd d plasmódio (o patógeno responsável pela malária), foram exfcensivamente investigados, mas os alvos no patógeno que podem ser úteis no desenvolvimento de vacinas se mostraram difíceis de identificar, ou simplesmente falharam ep entregar uma vacina efetiva in vivo*

Pa to genes para os quais há uma necessidade, particular de progresso são aqueles que são suportados por artrópodes e causam as chamadas "doenças transmitidas por artrópodes". Essas doenças são uma das principais causas de em todo:? o mundd $ ipoluem,: entre outras:, a malária e o dengue, alguns dos maiores assassinos na população atual, psrticularmente nas regiões mais pobres do mundo. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, aqueles listados na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1 Doenças transmitidas por artrópodes, com sons paiógenos a vetorea

Anterior mente, as tentativas de fornecer vacinas contra doenças transmitidas por artrópodes envolveram a identificação de cepas de patógenos existentes e a produção de uma vacina especifica para esse patógerio, Seralmente, as vacinas foram baseadas numa resposta de células E {anticorpo) {ou ocasionalmente uma resposta de células T) sendo o anticorpo reativo com os antigénios de superfície da estirpe patogénica especifica contra a qual foi desenvolvido. Tipicamente, as proteínas de superfície çompreendendo os antigénios são variáveis de «a estirpe dqença para; a seguinte e comp letament ô diferentes para diferentes patogénios. A consequência disso é que as vacinas convencionais geralmente protegem apenas contra um patógeno especifico ou cepa patogénica (se elas são efetivas) e não protegem contra outras estirpes ou uma nova estirpe que resulta de uma mutação. Assim, uma vacina separada é necessária para proteção contra cada doença e, rauitaã vezes, contra diferentes β/ou novas estirpes da mesma doença.

Sabe-se ha· algum tempo ψ. imunização contra saliva de artrópodes ou contra antígenos expressos no intestino de artrópodes pode proteger β individuo da infeção, Artigos #iá:dntinsld; ííbp inqiueim, ;ps: resuitiipd iiei&d* ^ihus et·::®!·.: "The immun©modulatory factors ©flarthrepod, saliva- and t'hes potential for these: factors; to serve as vaccine targets to prevent pathogen transmission.", farafite lp$nnpiqgy:* 200t>, Ifi i ^tigg hhvi imunomcduladores conhecidos em glândulas salivares de artrópodes. Fatores imunomoduladores podem melhorar i transmissão de patógenos por artrópodes. A saliva de vetor contém um grande número de substâncias cujas atividades incluem a capacidade de inibir a hemôstase, a vasoconstriçâo # o desenvoIvimento de inflamação e uma resposta imune. Kps mosquitos existem vá tios inlbidbhed de células T„ Se a saliva dos artrópodes aumentar a infeção com os patógenós transmitidos pelos artrópodes,: deve sei pôSsivél controlar a transmissão:: do patógerio pela vacinação d© hospedeiro contra a is) molécula (s) na saliva que potencializa a infeção, bloqueando os efeitos da saliva e prevenindo o pat#gepo de estabelecer a infeção no hospedeiro. 0 gene maxadilan ou MAX que codifica o vasodilatador potente na saliva de fletootomineos foi clonado e as atividades do produto proteico do; gene foram examinadas. Os efeitos do Sandfly RAX manifestam-se através de efeitos ptimirioa :nSS -cÉlúlãs fagociticas e istd condup; M efiltid imunomoda 1 adores/ inihidores a jusante nas respostas das células T. Os ratinhos foram vacinados contra MAX por injeção de MAX éít adjuvante ddmplet©:: dé Freund seguido pot ;1AX. éSt adjuvante incompleto dá; Ftáund m depois. .reforçadès dom. ;MAX sdlável até ao titulo d©: anticorpo anhl-RAX- circulante; entre l/fQMÚ e l/2ffiO:Q.. Os ratinhos yacipados .foram marcadamente protegidos da infeção, G.A T, "Parffitas*; arthropod vfqiqrs, and immune responses.% Parasite Immunology, 2006, 28, 117-119. Este artigo mostra que a alimentação de sangue pelos mosquitos induz respostas imunes á saliva do inseto. Estes incluem reações de hipersensibilidade e anticorpos anti-mosquito. R medição destas respostas de anticorpos pode ser de valor epidemiológico para monitorizar populações de vetores e a aplicação de cais respostas â avaliação da eficácia de estratégias de intervenção. A produção de vacinas que prejudicariam a alimentação, o didénldlmmènto:: a/du d :Sdlrèyi:yênòis de -vetoteS artrópodes la ddtdpárasltas é. umà idiiã aá:raènte> ainda 'qua ambiciosà. iOíl bhjléteivo: importante M m controla: doa próprios:. ar tripodes ect op a r a s í t ár ios, íçnquantOí um; .segundo :§ -war a vfqinp qnpi, :f rhrppoáe: somo uma forma de prejudicar os parasitas que o artrópode transmite tanto dentro do .próprio aftrõpoda quanto quando ocorre a transmissão para o hospedeiro vertebrado.

Whitten et ai., ’Mosquito midguts and- malaria:: cell biology.,; compa r tmental i z a t i on and immunology.", Parasite Immunology, 20§:i, 28, 121-130. :© intestino médio do rn.osqui.to representa um dps ambientes liais desafiadores1 para: i sobrevivência e d desenvolvimento do Plasmodium. Durante suas tentativas de cruzar o epitélio do intestino médio m direção às glândulas salivares, os oo-cinetes móveis são rapidamente detetados e roPdlidoS: por fatores de reconhecimento de mosquitos è -direcionados para a destruição por uma variedade de respostas imunes que recrutam fatores letais tanto do intestino médio quanto de outros tecidos da davidadê: corporal circundante. A interação exatã ehire esses ífáfcéfé® d õ parasita, é áliaménté especifica e especifica:, :as®im. como: o tempo e: a reta da invasão do parasita:. Q intestino médio forma unia barreira física que separa a protege os tecidos do hemoceie de enzimas digestivas e agentes infeciosos. É composto por uma única camada de células epi.teliais polarizadas, com qualquer polo exibindo diferentes adaptações morfológicas para aumentar a área de superficie envolvida na troca de moléculas. 2\ superfície apical microvilosa distinta é exposta ao lúmen e seu papel principal é a secreção de enzimas digestivas e a absorção de nutrientes. As modificações estruturais desencadeadas pela alimentação sanguínea incluem a formação de uma matriz peritrófica quitinosa (PM) espessa e não celular que é segregada pelo epitélio do intestino médio e que ê poíimerizada pela refeição de sangue ingerida. 0 PM circunda o bolo de sangue e forma uma barreira para os parasitas e bactérias que tentam penetrar no epitélio do intestino médio * P.F. Billingsley et al. "Immune interactions between mosquitoes and their hosts.", Parasite Immunology, 2006, 28, 143-153. Anticorpos dirigidos ao intestino médio do mosquito t também são importantes no desenvolvimento de vacinas contra mosquitos. A. secreção de saliva por um mosquito durante a alimentação é importante para a localização bem-sucedida dos vasos sanguíneos do hospedeiro e a manipulação das respostas hemostátlcas e imunes do hospedeiro» Técnicas de imunotransferêneia têm sido utilizadas para caracterízar o reconhecimento pelos anticorpos anti~ mosquito hospedeiros de antígenos sul:ivsreé|l:ii;®li;ie ée lllbeste,-· oléllllll ingere fatores ímunológicos, tanto solúveis quanto celulares, que permanecem ativos no intestino médio. Em contraste com antígenos salivares, o hospedeiro normalmente não teria sido exposto a antígenos dos órgãos internos do mosquito, o que leva à ideia desses antígenos "ocultos" como alvos de vacina. A melhor fonte de antígenos ocultas é o intestino médio, porque após a alimentação, contém a farinha de sangue com suas moléculas efetoras imunes e células. 0 intestino médio e preparações de corpo inteiro de Ae„ Aegypti induziu altos títulos d© anticorpos em ratinhos e o aumento da mortalidade de mosquitos que se alimentaram deles foi correlacionado com anticorpos que se ligam a mierovilcsidades do intestino médio. As respostas de igG forara induzidas em ratinhos injetados com uma biblioteca de ADNc de intestino médio de An, Gãntbia, e altos títulos de anticorpos alcançados após o estímulo com proteínas do intestino médio. Os mosquitos que se alimentam desses ratinhos mostraram reduções reprodutíveis na sobrevivência e fecundidade, mas, de maneira interessante, as respostas celulares e não humerals pareciam ser responsáveis pelos efeitos mosquítocidas. Esses estudos encontraram problemas. Mesmo dentro das experiências, a variabilidade pode ser alta e a reprodutibilidade do efeito dificii de alcançar. á imuniração com uma mistura complexa de extratos de proteína do intestino médio ou de uma biblioteca de cADN do intestino médio significou que os sntígenos alvo protetores não foram identificados.

Ho entant a, ap e s ar de s se conb eci m envoy ainda""""""""n â o foi" desenvolvida nenhuma vacina eficaz contra doenças transmitidas por artrópodes que faça uso desse mecanismo de ί:ί:ί:ί:ίίί:||§|β ^Í|:||:Íi|Íll .Bdqni^flcatliiill dllj as .......vacinas existentes contra patògenos transmitidos por artrópodes, seja baseado em resposta de células B ou T, é que cada um protege apenas contra um único patógenc, ou. no máximo uma única estirpe de patógenc existente, e não oferece proteção contra possíveis estirpes futuras ou contra múltiplos patôgenos. Há uma necessidade desesperada de uma vacina para proteger contra uma pluralidade de doenças transmitinas por artrópodes, incluindo assassinos em larga escala, como a Ο3 inventores foram agora capazes de identificar sequências peptidicas imunogênicas específicas presentes em proteínas salivares de artrópodes que podem fornecer proteção contra todos os patogênícs transportados por artrópodes, e desenvolveram vacinas para as doenças que causam,, utilizando as sequências Identificadas * Assim, os inventores desenvolveram pêptidos úteis em vacinas que provocam uma resposta imunitária ef em particular, uma resposta imunitária secundária rápida contra doenças transmitidas por artrópodes.

Por conseguinte, é um. objetivo da presente invenção resolver os problemas associados com a técnica anterior conhecida como estabelecido acima. É um outro objetivo da presente invenção proporcionar uma composição polipeptidica que seja capaz de induzir uma resposta imunitária (por exemplo, uma .resposta celular incluindo uma resposta de células T e/ou uma resposta de células B) em. vertebrados contra uma pluralidade de doenças transmitidas por artrópodes, isto è, doenças causadas por uma pluralidade de agentes patogénicos ou estirpes patogénicas. É um outro objetivo da presente invenção fornecer uma vacina contra doenças transportadas por artrópodes utilizando as composições polipept leiloas da invenção.

Consaquentem ente, a. presente invenção proporciona um polipéptido que consiste em entre 20 e 55 aminoácidos, cujo polípéptldc compreende a SEQ ID DO; 35, uma sequência polipeptidica possuindo pelo menos 90% de homolegia com a SEQ ID MO: 35 ou uma subsequentia da SEQ ID. DO: 3S, as s ubsequênci a s com 20 aminoácidos ou mais, em que: o polipéptido não é uma proteína de saliva de artrópode intéiÉd|llaiii· qué· o ^Óllpá^bÉ® vêit;:ébradd.l:ill:. l||C& ^Íé:|!lipertébrá:il!!|3r:. do |i:l:il.ema ii||iii|iá:rillll: capazes de reconhecer, pelo menos, um epitcpo de uma fração proteica de saliva de artrópodes. A presente invenção também proporciona uma composição poiipeptídica compreendendo um ou mais polipéptidos da invenção. A presente invenção também proporciona um polipéptido da .invenção· ou uma composição poiipeptídica: da invenção, para utilização em medicina.

Proporcionado ainda de acordo com a invenção um modo para produzir uma composição poiipeptídica da invenção, cujo modo compreende misturar ou combinar um ou mais polipéptidos da invençipv com; um ou mais componentes adicionais, tais com© um iransportíddtí^ çxçipíent^ adjuvante, ura tampão, ou um estabilizador.

Além disso, proporcionado de acordo com s invenção é uma construção de ácido nueleico compreendendo um ou mais ácidos nucleicos compreendendo a sequência de codificação de um polipéptido da invenção *

Além disso, proporcionado de acordo com a invenção ê um medicamento ou composição de vacina contra uaiá dbéhç.a transmitida por artrópodes, compreendendo um polipéptido: da invenção ou uma composição poiipeptídica da invenção e um excipiente e/ou adjuvante apropriado.

Ainda proporcionado de acordo com a invenção um modo de produção de um medicamento ou composição de vacina da invenção, cujo modo compreende ligar, combinar ou misturar um polipéptido da Ippençãc e/ou uma eoíRpo&içâa poiipeptídica da invenção e/ou unia construção de ácido nueleico de acordo com a invenção.

Além disso, proporcionado de acordo com a invenção é um polipéptido da invenção, uma composição poiipeptídica da invenção, uma construção de ácido nueleico da invenção, Ou um medicamento ou composição de vacina da invenção para utilização no tratamento ou prevenção de uma doença suportada por artrópodes; preferivelmente, em. que a doença transmitida por artrópodes é uma doença nura vertebrado, preferercíaimente, em que o vertebrado é selecionado de um. mamífero, uma ave, um. réptil e um peixe e, de um modo preferido, de um humano, um animal doméstico ou um animai de criação, um bovino animal, ou uma ave. A presente divulgação inclui uma composição pclípeptídíca compreendendo um ou mais polipéptidos, cujos polipéptidos são imunogénrcos num vertebrado, de tal modo que provocam que o vertebrado produza células do sistema imunitário {ou promove a produção de tais células) capazes de .reconhecer pelo menos um epítopo de um fração proteica de saliva de artrópodes, em que a fração de proteína da saliva de artrópodes tem uma massa de 4 0 RDA ou menos e em que. os polipéptidos são selecionados independentemente de; (a) as sequências polipeptídicas de SEQ 10 1-44 ou sufosequénciaa destas sequências, sequências com 7 !idMi.hpá§;i:{|d mstid:::? |||||||||||||||:| SEQ ID 1 HLTLFTVAVLLLÃAAãLLLIjLPPAYSTTLTPP. SBQ 1D 2 PLSYCHLFLTHTLARÃLSFSRSDCL·

SEQ ID 3 KNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEI

SEQ ID 4 KLLVLL1CLFOTHTHCTXAYLHLMGV

SEQ ID 5 FLKGS FPEFQMCYMLIGFFSSAKCL

SEQ ID 6 MDYQALLGLCCPWIDLAAÃDLPMRRHAiÇA

SEQ ID 7 FYSVGKLVKVLTIVI^VCCLLLCTAPTGADPL

SSQ ID 8 MKFAFAFVLIALFAVFA.VSQALPQPEQAAA

SEQ ID 9 DG A S AIT KI v L ELT PEQAA&V

SEQ ID I0TLFIFLvCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILA

SEQ ID 11 GRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGK SEQ ID 12 LYSGYRLL'/LLVifCVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTL·

SSQ ID 13MYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRREDLHFLLKPIINKD SEQ ID 14NAEDPRTELIGCGSVLFHLAftJNRLSLQLEEFAVCKR SEQ ID 15ALIGLLLCSVQSVTANDFVDALGACSGNLFGLLMTRL

SSQ ID 16 SKLFVLAFLCLALWWQSAPQYARGDVPT

SEQ ID 17 SMLVAFATLSVALWWAIPANFNYGGGGGYFINGTGQ

SSQ ID 18IYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPRLQ

SEQ ID ISEMKLAKVALVTISLWEMAWTPYLVINFTGI

SEQ ID 20 LLPAKVIPDKTA&YVAYGGQETLVEHYEV.LV

SSQ ID 21FYTCPLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAG

SSQ ID 22VLEVLGFVEDKGELVFQELLGVLKMVDPDGD

SSQ ID 23KLTPTWWLLCLTFVADALTIQELR&QIAQQHIQQRYGVTVATrP

SSQ ID 24 SLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEV

SEQ; ID 2:5 TYICFILEGPSEIISQSQgKIlgFLLLVASVLCLVLI

SSQ ID 26RYFVV1ALICPLI1VEILAV

SSQ ID 27LLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFV

SSQ ID 2ÔVLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMP

SEQ IB 29VLKGETHKALK1K;DGGEYL¥EFKSIYM

SEQ ID 30¥LHSMLVNASLAEM¥KESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLF

SSQ ID 31 BVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHET SEQ ID 32ELQQALSSLLAGAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYXGVSRK1 SSQ ID 33 KFYRIíISTIíLWWIAPRHQCSPFFFQYPRPYIj

SFQ ID 34HYV?DVSALEQDIIE¥DPETKEMLKHLDFmTIWQL

SSQ ID 35QYSMECLEAAEPKYLDGLKTLAD.ETAQC

SEQ ID 36EYAQYTKMLGNGRLEAMCFDGVKR&CHIRGKL

SEQ: ID

SSQ ID 38ELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAV

SEQ ID 39SYFLTVCLLALVQSETVQD

SSQ ID 40AMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSS

SEQ ID 41 SFAWLLYGIILRSNFLWQNLMALALSAVQLSLFII

SEQ ID 42AFPFISGFLSCIWWLKYGVLTEESTLILVNFIGSAL

SEQ ID 43GLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIR

SEQ ID 44 LLLM4VLLPLLLLESWPYAÃAEKVW b) As sequências definidas -pel?» seguintes ^esibups: be aminoácidos d&:- urna protein® da ealítm de artrópodes, ©u subsequências destas sequências, cujas subsequências possuam 7 ariincaoldos ou maias resíduos 2-33 de> gi | 18389913 ! gfo | AAL687 33,1 j AF4 57 563__1 proteína hipotética 16 [Anopheles gamb.iae] resíduos 2-26 de> gi | 18389903 | gfc I AAL68731,1 j AF457561___1 proteína hipotética 14 [Anopheles gambiae] resíduos 2-25 de> gi j 18309907 | gb | AAL68790.1 j AF457560__I proteína hipotética 13 [Anopheles gambiae] resíduos 10-36 de> gi I 18389903 i gb j ΑΑΧί68:78β, 1 ] AF457558 1 proteína hipotética 11 [.feopheles garobiaey resíduos 2-26 de> gi | 62546227 í gb i AAX86005.1 j precursor de hip3,5 [Anopheles gamb.iae] resíduos 14-42 de gi | Ί8389899 ! gb l AAL68786.1 ! AF457556_1 proteína semelhante a glândula salivar 7 [Anopheles gam.bl.ae]

resíduos 3-33 de> gi [ 18389911 } gb | AAL68792.1 J AF4 57562_1 proteína hipotética 15 [Anopheles gambiae] resíduos 1™30 de> gi | 62546225 j gb ί AAXS6G04.1 I precursor 'lilgli,1 [Shophêlii:; resíduos 34--54 de> gi 1 62546225 í gfo I AAX860O4.1 I precursor de hip6.3 [Anopheles garabiaej resíduos 38-70 de> |;|. j 17026153 j errsb | CAD12038.1 1 Proteína 3ec61 [Anopheles gambiae] residues 2-23 de> gi \ 62546223 j §b j A AX 86003*1 I precursor de hip6,2 [Anopheles gambiae] resíduos 17-54 de> gi 1 18389915 j gb I AAL68794, .1 j AF457S64_1 proteína hipotética 17 [Anopheles gambiae] residues 57-93 de> gi | 87080391 [ gb I ABD18596<1 I defensina [Anopheles gambiae] resíduos 22-57 de> gi ! 18389901 i gb i AAI-68787.1 i AF457557 1 proteína hipotética 10 [Anopheles gambiae]

resíduos 7-43 de> gi j 18389905 1 gb í AAL68789.1 I AF4S7559 1 proteína hipotética '12 [Anopheles gambiae] resíduos 3-32 de> gi [ 4127344 | emb j CAA76832,1 j Prorelna gES [Anopheles gambiae] resíduos 3-40 de> gí | 421Q617 j emb 1 C&amp;A10259*! t Proteína SG2 [Anopheles gambiae] resíduos 91-121 de^ gi | 41273QS | emb j CAA76820-1 I proteína hipotética [.Anopheles gambiae] resíduos 65-94 de> gí ! 4375824 j emb i CAA76825.1 Í opsina [Anopheles gambiae] resíduos 41 a 71 de> gi I 6254 6233 S gb I AAX88008.1 j desconhecido [Anopheles gambiae] resíduos 117-143 de> gi ! 3378531 [ Μι: | CAA03872.Í j Proteína 07r2 [Anopn&amp;les gambiae] resíduos 63-93 de> gi i 3378529 | emb i CAA03871.1 I Proteína 07r3 [Anopheles gambiae] residuos 23-67 de> gi j 18389893 i gb | AAL68783fl i AF457553 1 proteína semelhante â mucina [Anopheles gambiae] resíduos 43-80 de> gí ! 18389881 | gb j ΜΙ/68ΤΠ.1 j AF4 57547__1 selenoproteins [Anopheles gambiae]

resíduos 6-42 de> gí I 1838987 9 j gb j AAL68776.1 I AF457546_J1 Proteína de 30 kDa [Anopheles gambiae] ||:||:||:dub# ||||l|||:||i||||^i f" 18:37:8,803' .......... sigb !111||||||8:8;1|:«1. ||||| AF4 5807 3___1 3 proteínas relacionadas com D7 [Anopheles •gerafeiae] resíduos 20-55 de> gi | 18389897 | gb I AAL68785.1 j AF4 57555_JL glândula salivar tipo 1 proteína 4 [Anopheles gambiae] resíduos 59-95 de> gi S 18389883 | gb j AA168778.1 | AF457548 1 proteína 1 relacionada ao antígeno 5 [Anopheles resíduos 158-184 de> gi | 83016748 i dbj j BAE53441.1 i DsRed [construçãõ sintética] resíduos 37-76 de> gí j 18389895 | gb 1 ÃAL68784.1 i AF457554 1 proteína semelhante a glândula salivar 1 [Anopheles: g:d|ábi:ab|lll:l::

resíduos 191-222 de> gí j 18389895 | gb | AAL68784, 1 I AF457554__1 glândula salivar 1-líke 3 proteína [Anopheles gaiafeiae ] resíduos 1.13-149 de> gí | 18389831 1 gb ] AAL68782.1 ! AF457552 1 forma longa da proteína D7 [Anopheles ga.mbiae] resíduos i-37 de> emb [ CAC35527,1 j Proteína g3G9 [Anopheles gambíae1 ,rÍbPÍÍ:lÍ|Í|i:ÍÉÍ7|:: resíduos 111 a 142 de> errito { CAC35523.1 | Proteína g8G7 [Anopheles gaia&amp;Lae;] residues 32-67 de> gfa i AAD47075»1 í AFl64151 1 fator de iniciação da tradução 4C {11) [Anopheles gambiaej resíduos 1-29 de> emto 1 CAC35519.1 i Proteína semelhante a. gSG2 [Anopheles gambiaej: residues 306--142 de> emfo S CAC35451.1 I proteína hipotética [Anopheles gambiae] resíduos 6-28 de> ersb 1 CAC35524.1 I Proteina D7r4 [Anopheles gambiae j resíduos 70-104 de> ref I XPJ10123Q998«1 ! EN3ANGPO0OQOO14 9G6 [Anopheles gambiae str» PERT] resíduos 174-213 de> ref j XP 316361.2 j ENSANGPOOOOO012984 [Anopheles gambiae sir, PEST] .residues 41-80 de> ref ! XF_31414Q.3 ! EhSAMGP0000001 5780 if ;iAnip|ili;s; sfifiii .BBlilffffflf resíduos 126-153 de> ref j XP__314140.3 j EE SANG F0 0 Q 0 0 0157 8 0 PE;l;|;||||||||||,:;fii resíduos 5-34 de> emh j CAC35522.1 I Proteina gSG6 [Anopheles I Si:|| (o) e de sequências polipeptidicas com uma homologia de 85% ou xnais com uma ou mais das sequências em (a) ou (fo) e contidas numa ou mais das seguintes bases de dadosí GenBank, Protein Data Bank (PDB)f SwissProt, Protein Information Resource (FIFO* Protein Research Foundation (PRF)r ou traduções de CDS destes. CDS é a abreviatura, de wCoDing Sequence”, isto éf uma região de nucleótídos que corresponde à sequência de aminoác.idos numa proteína prevista. O CDS inclui os cédãos de início e fira, portanto as sequências de codificação começam com um "&amp;TG” e terminam com. um códão de parada. Sequências não expressas, incluindo a 5 * -UTR, a 3’ -UTK, íni.rões ou ’oases não expressas devido à mudança de molduras, nâo estão incluidas dentro de um CDS, Observe que o CDS nao corresponde á sequência real de mARN, Como resultado, uma tradução de CDS é a proteína que resultaria se todos os códâos entre os cédãos de inicio e fim fossem traduzidos, PD3 significa Protein Data Bank, Este banco de dados (http; //www, rcsb, org/pdb/home/home . do) é mantido pelo

Coilaboratory Research for Structural Bioinformatics {.RCSB}, um consórcio sem fins lucrativos dedicado a melhorar a compreensão da função dos sistemas biológicos, através do estudo da estrutura 3-D de ma cromo i é c u1a s biológicas, 0 Protein Information Resource íPIR) h11p; //pir. qeorqetown, edu /}, é um. recurso público integrado de b 1. o i n f o má t i ca estabelecido em. 1384 pela Fundação Nacional de Pesquisa Biomédica (SJBRF) como um recurso para auxiliar os pesquisadores na identificação e interpretação de informação da sequência proteica (Wu CH, Yeh L3 f Huang H, L de Armínskií, Ca st r p-~Al ve a r J, Chen Y, Hu Z.f Kourtesis P, Ledley RS, Susek. BE, Garrett L., Vinayaka CR, Shang J, Barker WC (2003), "The Protein Information Resource". Nucleic Acids Res 31(1):345-7.) 0 PEF é urn banco de dados online mantido peia Protein Research Foundation (PRF) (http://www.prf.or.jp/en/index.shtml). 0 banco de dados contém informações relacionadas a aminoãcidos, peptideas e proteínas coletadas de .revistas científicas, dados de peptideos e sequências de proteínas, dados sobre compostos sintéticos e aspetos moleculares de proteínas, 0 GenBank. é o banco de dados de sequências genéticas do NIH (https//www,ncbi.nim.nih.gov/), uma coleção anotada de todas as sequências de ADN publicansnte disponíveis» Uma nova versão é feita a cada dois meses» 0 GenEíank faz parte da Colaboração Internacional de Banco de Dados de Sequência de Nueleotideos, que é composta pelo DNA DataBank do Japão (DDBJ}, pelo Laboratório Europeu de Biologia Molecular (EMBL) e pelo GenBank no Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia»: 0 Swissprot (também conhecido como UníProtKB/Swiss~Prot> é um banco de dados curado de sequências de proteínas (http;//expasy.org/sprot/) mantido peio Instituto Suíço de Bioinformãtica (SIB)* 0 banco de dados esforça-se para fornecer um alto nível de anotação (como à descrição da função de uma proteína, sua estrutura de domínios, modificações póa-tradueionais, variantes, etc»), um nível mínimo de redundância e alto nível de integração com outras bancos de dados»

Bases bancos de dados são atualizados semanalmente ou mensalmente, e as sequências estendem-se: àquelas nos· bancos de dados no momento do preenchimento dosse aplicativo. Ao iençontrar- seqsipçian; dentros das bases de dados que:, têm a >homolcgia desejada, qualquer método pode ser empregado, dependendo dos critérios de correspondência. No entanto, de preferência, o programa BLAST? pode ser empregue [BLAST e seus programas derivados (por exemplo, BLAST?) são software de domínio público]*

Em. vez de (cm para além) a homo.Iogi.a. de 85¾ referida acima na parte (e), estão também incluídas sequências polipeptldicas nas bases de dados acima que têm, pelo menos, 85% dos seus amínoácidos em comum (em termos de identidade de ambos os amínoácidos e posição na sequência) com uma parte de uma sequência em (a) ou (b) que 8 aminoácidos ou mais em comprimento e, de preferência, desde .8 aminoácidos em comprimento até um terço do comprimento da sequência em (a ou b) . Sra outras palavras? para. uma sequência em (a) ou (b) qae tem 30 artdnoácidos, uma sequência no banco de dados também ê incluída se compartilhar 85% ou mais de seus aminoáeidos corn qualquer parte da sequência em, (a) ou (b> isto é, 8 aminoácidos de comprimento ou maior, preferencia Inters te de 8-10 aminoácidos. Da mesma forma, se uma sequência em {a) ou (b) tiver 60 aminaácidos di comprimento, inclui~se também uma sequência na base de dadop se esta paru lhar 85% ou iiais dos seus aminoácidos com: qualquer parte da sequência em {a} ou |i| que tenha 8 aminoácidos de comprimento ou maior, preferencialmente de 8-20 aminoácidos. Os aminoácidos correspondentes não precisam, ser consecutivos» Por exemplo, no caso de uma sequência de 20 aminoácidos em {a) ou (b), em que uma sequência de base de dados correspondente partilha 17 ou maís aminoácidos nas posições corretas, ê incluída, mesmo se estas posições não forem todas consecutivas.

Tipicamente, os poiipéptidos na composição não são proteínas de saliva de artrópodes completas (não completas ou não completas). Por completo (ou completo ou inteiro} entende-se que os poiipéptidos não contêm todos os resíduos de aminoácidos presentes em qualquer uma das proteínas de saliva de artrópodes que ocorrem naturalmente»

Assim, o polipéptido e ura que pode compreender o todo (ou. pode compreender pelo menos um 7 ou mais partes residuais de) qualquer uma das sequências acima* O polipeptídeo também deve ser ímunogénico em um vertebrado. Tipicamente, esta ímuncgenícídade ê tal que os poiipéptidos fazem com que o vertebrado produza células do sistema imunitário capazes de reconhecer, peio menos, um epítopo de uma fração proteica de saliva de artrópodes» Assim, quando um polipeptídeo provoca uma resposta de célula T ou célula B, é ímunogénico β; um vertebrado. O polipéptido pode alternativamente sep » epitope de linfócito T auxiliar (Th), ou pode ser um epitopo de línfocifco B,

Um método para determinar se um polípéptído possui í muno gen í ei da d e é estabelecido na Experiência 2 abaixe, No entanto? a presente invenção não está limitada a esses métodos, e o perito pode selecionar qualquer método conhecido para determinar a imunogenicidade, como desejado. É p a r t i cu1armente preferido que os polipéptides da composição polipeptidica sejam selecionados -independenteraenfce das SEQ ID 20, 28, 3Q-32 e 35, ou subsequências destas .sequências, tendo as subsequências 7 aminoácidos ou mais, cu de sequências polipaptidicas com uma homoiogía da 85% ou mais com uma destas sequências e contidas numa ou mais das seguintes bases de dados: GenBank, Protein Data Bank (PDB), SvissProt, Protein Information Resource (PIR), Protein Research Foundation {PRF} ou traduções de CDS destes.

Tipicamente, mas não exolusi^amente?. a composição polipeptidica da presente invenção compreende 2 ou mais polipéptídos, preferivelmente de 2 a 10 polipéptidos, ou mais preferivelmente de 2-6 polipéptídos, No entanto, a composição pode compreender um único palípéptido e outros componentes não poiipeptldicos, se desejado.

Geralmante, na composição polipeptidica, a fração proteica da saliva de artrópodes tem uma massa de 40 kDa ou menos, 30 kDa ou menos, cu mais preferivelmente 20 k.Da ou. mano»:, A. fração também pode ter uma massa de 2§;: M ;ÍÍ k.Da, de 20 a 30 kDa ou de 10 a 20 kDa.

Como aqui divulgado, a composição polipeptidica compreende a SEQ ID 131, ou compreende uma ou mais subsequências da SEQ ID 131 possuindo 7 aminoácidos ou mais, ou compreende sequências polipept.í dicas com. 85% de homologia ou mais com uma destas sequências está contida em uma ou toais das seguintes bases de dados: GenBank, Protein Data Bank {PDB}, SwisaProt, Protein Information Resource (FIR), Protein Research Foundation (PRF), ou traduções de CDS destes. SEQ ID 131

H.KGSFPRFQMC\T.1UGI3?S$AK€LF¥SV0KLVKVíXVMÀVCCLUXTÁFrGADPL

M KFAK.-tl ;VLIALF.AVl;AVSQAT..PQPt;QAAAGRVM€LLRLMSTI.]..-VVLSIVGKLYSGY RLLVLLVM1VCCLURAPTCtADP1..P0QTQRT1jV11G1L1.CSVQSVTANDPVDALGA CSGNLFGlXMTRLSKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDYmiPAKVIPDKTAAY V AYGGQH' rLVidfVEV tv R YFV YTAUCPUÍVET! .AWT 1 .TPALQA Y1MDEHNLNRSN lALGRiRPYPS AVKMFYLT ÍSML v NASLAEMYKE5YQT] iGADGRMWRMT.KJ'VRLL ?BV&amp;ALRALLETl.LQ.HQG£QNNDVYLIRLAnHTELQQAl..SSLNAGSGSCAEVFHAYL P V HNKY1G VSRKIQYSMEC LEAAEPKYT JXxLTG 1 APET AQCSF A WLLY GIILRSNFL WQNLMALA!AAVQESLFÍIAi^FíSGFT.SCFMWLKYGVLTEESaTLVNKIGSAL

Como também aqui divulgado, a composição polipeptídica compreende uma ou male sequências selecionadas de SEQ ID 1~ 4, 6, 9, 10, 13, 14, 17-19., 21-25, 27, 29, 33, 34, 36-40. , 4 3 e 4 4 ou compreende uma ou ma is subsequências destas sequências com 7 aminoácídos ou roais, ou compreende sequências polipeptidicas cora uma homologia de 85% ou mais com uma destas sequências e contidas numa ou mai s das seguintes bases de dados; GenBank , Protein Data Bank (PDB), SwissProt, Protein Information Resource (PIE), Protein

Research Foundation (PRF) ou traduções de CDS destes.

Como também aqui divulgado, a composição polipeptídica compreende a SEQ ID 132, ou compreende uma ou mais aufosequências da SEQ ID 132 tendo 7 amínoácidos ou mais, ou compreende sequências polipeptidicas tendo 85% de homologia ou mais com. uma destas sequências e contidas em um ou mais dos seguintes bancos de dados: GenBank, Banco de Dados de Proteínas (PDB), SwissProt, Protein Information Resource <PIR)> Protein Research Foundation {FRF} ou traduções de CDS destes. SFQ ID 132 in .τι.v ívavllla aa ai λ á j.lfpaysjtí ,τρρρϊ ,s ychlfl n í π .arai sfsrsdcjxn

VH-AUJ.VVLVC('I.VSVQ<jNBlKlXVLUn FFYHTKCTTAYLWf. AMGYND YQALL

G1 .CCPW1DL AAAI>Ii>MRRHAKADGASAÍ'l’KlVfiiL'rPF.QA A A V Tf iií-LVCCQiPLFGI Μ881>5ΑβΡΙΎΨΙΚνΐ1,ΑΜΥ€νΐΚΟΚΤθ:ίΥ€Ν8Ε(ίαΤ€^ΑΕΠηΗΡυ.Κ^ΙΪΝΚΟΝΑΗ

DPRTEf JGCGSVT.Fi lí AANRLSLQT Jí EFAVCKRSMLVAFAll.S VA LVVW AÍ.PANFM

YGGGGGYFINGTGQiYEKI-PAYIJSHVSAjRVNVLQVSLQHDLPNI-OKMKlAKVALVT

ISLWFYJ AWTP YL VINFT GIFYTCF LGTSSIAGFK N AVDYDE Ϊ. J A~ AG YLEVLGF VF,DN

O HT Λ' FQ! i!. LG VI. KM V DF PQI1KLTPTVV V VjLLC J 21 FV ADA I. ΤΪ QI 1. R AQIAQQRIQQR

YGVlVATms?>YGLÍELm!CXJ?CCQKDTEADSKlXVYPAAVLEVíT{€^ILHGVSE

HFGQQKKTMK>-LLLVASVLCLVLlI..LLYLDAADLRRAUiQYQLLAAgGDRHLPQQI

VK.FVV (.KGETI l ívAL K.LKDGG HYLVEFKSiYMKF YRLIST1. I. V V V V lAPRfíQCSPFFF

QYNíR!>\'LNYVpr>VSALEGDIÍEVDPBTKEML'KHLD'FNNíVVOL1v,Y.AQVllCMLGNGR

LLAMílFlXjVKRjXHIRGKLKLFLmSTLSVAMVFALPAÍÍI-IHSRCiF.UiEARLVAERL

EE,RGQELDYLKilYLYGRL.QAVSYFi,TVCLL.AIYrQSETVQDAMlNANLVG.UnSLAY

,AlEFLLYl'PPTGRSSGIJA:C€LAVI,FFASPL'imAHVÍRLLi.AMVLLPJJJ,T,ESVVPYA

AA.ERVW

Como também aqui divulgado a composição poiipeptídica compreende SEQ ID 1.3 3 r ou compreende uma ou mala subaequências da SEQ ID 133 possuindo 7 aminoéeidos ou mais, ou compreende sequências poiipeptídicas tendo 85% de homologia ou male com uma destas sequências e contidas numa ou mais das seguintes bases de dados; GenBunk, Banco de Dados de Proteínas {PDB;, SwissProt? Protein Informa iron Resource {PIP-5 í Protein Research Foundation (PRF) ou traduções de CDS destes ^ SEQ ID 133

HI XT J-'TV Λ VJULLAA A A Γ T .1,1 JJPPÀYSTiLTjPPPLS VCIíLPLlliTLAR ALSF SRSDCLKN VFFAL.Í J.,V V1. VCCÍ. VS VQGNEÍKLLVUJOL F F YI ΗΉΟΤΤΑ Y1AV f ..A M G V 1 LKGSFPR FQMCVMUOFFSSAKCLN0YQALLGLCCPW(Di.A,\ADU>MIUlHAKA

Cornos também aqui divulgado a composição polipeptídica compreenda a SEQ ID 134, ou compreende uma ou ma is sufosequências da SEQ ID 134 com 7 aminoáeidos o-a mais, ou compreende sequências polípept.ídicas tendo 85% de homologia cu mais com uma destas sequências e contidas numa ou mais das seguintes bases de dados: GenBank, Banco de Dados de Proteínas (PDB)r Swíssprot, Protein Information Resource (PIE), Protein Research Foundation (PRF) ou traduções de CDS destes. ÍSEQ ID 134

LLIViKMPDK ΓΛΑΥ VAYuuQi \ LVLHVXYJ.WU. ni\I.Q.\ YIMUbHNLNRàNÍALGR RPYOSAYKMPVI HSMÍ X bV.bLAFMVKFSYQS'HuADGRMXA RMLKFY&amp;UJPRYRA LRAriirTLLQHQGBQKNDVYD.TRrAHETFXQQALsSSLNAGSCjSCAEVFNAYLPVlíN KYKjVSRKIQYSMECLEAAPPK.YLDGLKTLADFTAQC

Importante, em todas as fornas de realização da invenção, qualquer combinação das sequências listadas pode ser empregada, sozinha ou em combinação. Os poiipêptidos particularmente preferidos são aqueles que possuem sequências da SEQ ID 1-6 e/ou aquelas que possuem sequências da SEQ ID 20, 2$, 30-32 e 35. É especialmente preferido que qualquer uma ou mais deatas esteja presente, é particularmente preferido que todas as SEQ ID 1-6 e/ou todas as SEQ ID 20, 28, 30-32 e 35 estão; presentes.:

Os presentes inventores descobriram que as sequências acima compreendem um epítopo, ou uma pluralidade de epítopos, que podem proporcionar proteção contra doenças transmitidas por artrópodes para uma grande variedade de vertebrados numa população» As picadas de artrópodes induzem no hospedeiro uma resposta imune aos componentes da saliva que H caracterizada por um fenòtipo Tb2 (isto é, regulação negativa da produção de IFH-γ e aumento da produção de IL-4) Ilisdw ιοί; al, 1998). Esta resposta imune, juntamente com o efeito an ti-hemostático de muitas dessas moléculas salivares, foi encontrada para facilitar e aumentar a transmissão do parasita em geral (Dhar e Kumar, 2003) e para promover a infeção por Leishmania em particular (Kamhawi et al., 2000). Em contraste, um. aumento na resposta imune celular caracterizada peio aumento da produção de IFM-y e IL-12, ambas citoquinas do tipo Thl, infeção por ieisiimanis; major pela picada de flebótomos infetados (Kamhawi et al., 2000).

Sem estar limitado pela teoria, acredita-se que a imunização com proteínas salivares levando à ativação de uma resposta do tipo Tnl levará ao rápido reconhecimento de antlgenos salivares no local da mordida por células do sistema imune (tais como céiuias T citotóxicas ativadas), CTLs) e T helper tipo 1} e a produção de IFN-γ. Esta eitoquina (1) estimula as células T e HK a produzir maia IFN-γ, (2) promove a atividade microbícida de macrófagos, (3) Indus a mudança de isotipo para e aumenta a produção de IgG2a peias células B e, (4) a produção de múltiplas citoquinas (por exemplo, T14F-o, interleucina (IL) 12 e TL-18) que combinadas desencadeiam uma cascata de reações imunes que levam à morte de parasitas intracelulares. Referências detalhando isto são apresentadas a na xo.

Mbow ML, Bleyenberg JA, Hall LR &amp; Titus RG. 1998. Fhlebotomus papatasi sandfly salivary gland lysate down--regulates a Thl, but up-reguiates a Th2, response in mice infected with Sêi.ihsihii::· major.... :0),. Tssiindl:|· 1:¾¾ SSYlnSSYf;,:.

Dhar, R., Kumar, N,, 2003 < Role of mosquito salivary glands, Cur, Sol. 85, 1308-1313, Kamhawi, S,, Belkaid, Modi, G,f

Fo’wtcnf E.f Sacks,, D. , 2000, Protection against cutaneous lilifeell ρ|: ubl&amp;Êfetbfed band fli^:>:1||||||.

Science 290, 1351-1354 ΙίΙ^^Ι; Ill-1®:

Aug,2(8):472-8

Come discutido acima, as sequências foram identificadas após a análise das sequências de saliva em Anopheles ç&amp;mbiae*

Será evidente para o perito que a invenção se estende não aporias âs sequências e seus epitopos, mas também a sequências maiores em. proteínas de saliva de artrópodes contendo estas sequências, e a sequências que são homólogas a estas lllidquiiiiiáa eg portanto, têm atividade imunogénica„ Assim, sequências corn alguma homolcgia às sequências de consenso estão também dentro do âmbito da invenção. Tal homologia permite a substituição de, por exemplo, até 3 aminoâeiáos num epitopo 8-mero (homologia de 62,5%3 ou num epítopo 9~ raer, 10-rtier ou 11-mera. Ê preferido que nào mais de 10 dessas substituições sejam identificáveis numa sequência da invenção correspondendo às sequências completas da SEQ ID 1-44 {homologia de 66,6% para um 30-mero), Tais substituições são preferencia latente substituições conservativas em linha com. esquemas de substituição conhecidos.

Também revelado um polipéptido compreendendo uma oa mais sequências definidas pelas seguintes sequências SEQ ID 1-44, ou os seguintes residues de amíneácidos de uma proteína de saliva de artrópodes, ou compreendendo uma ou mais subsequências destas sequências, tendo as subsequências 7 aminoácídos ou mais, o.u compreendendo sequências polipeptídicas com. uma. homologia. de 85% ou mais cora uma das sequências e contidas numa ou mais das seguintes bases de iBBdtmaEIon saaçurçe: fQXRl #< Ftwu&amp;â-ii Redeateh. EQuiidatXsri ÍPRF}? ou traduções de CDS destes* SEQ ID X ίΕΕΕΕΕ«ΕΕΕΙΙ»ΕΕΕΕΕΕ:Β»§ΕΕΕΕβΕ mm id 2 ill:; ID :f Siiísêx mm ID 4 1DE®D:IEEEEEEHE;íGEEMÉMEÃMPE SEI; XB É SEQ m Έ 'iBXpEEiE®^ SEQ: IB t ssi; iq m SEQ ΙΕ: Q ΒΒ^ΕΜΒΕίΒΕί^

SEQ ID 10 TLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILA SSi: IB: 11 ΕΕ«ΕΕΕΕΕΜ8®ΕΕ^ΕΕΐ!<?δΕ SEQ:: IB :M mm. ID SEQ: IE: --¾...¾ SEQ ID IgmliELLES^iSfKMBf :¾ SEQ. m iiEKEEEE^EEeEaEEEffQSEEiEAiQDWE: SEi. Í;D. :11

SEQ ID 181YEKLPAYLSEVSARVPVLQVSLQHDLPHLQ seq:. ib SEQ IB EB LDEMlIlBDiEimíftÃfQQQEEBEEHEMEE'' SEQ ID: 11 ElIBEiaiSBÍÉ® SEQ ID 22VLEVLGFVEDEGELEFQELLGVLKMVDPDGD SEQ; ID #1 ΙΕΤΕΙ^ΕΕΜΕΙΜ^ SEQ: 1B ::i.a SIS Df ÉBl:ElKlH:CBÍC:®

SEQ IO ::ii BiLfLI SEQ ID :»EXETOlLOTEXItE1M# SEQ:; ÈB M SEQ ID %$

SEQ ID 29VLKGETHKAL!U«KDGGHYLVEFKSIYM

SEQ ID 30 VLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGAI5GRMVVRMLKFVRLLP : I WMl 1:1 ip|i: || [:1^¾¾¾¾¾¾ llSPÉIS |l:g|:fil||lbwt|||M^^

SEQ ID 3 4 NYVPDVSALEQDTIEVDPETKEMLKH LDFNNIWQL SEQ ID 3 5 QYSMECLEAAEPKYLDGLKTLABETAQC SEQ ID 36 EYAQVTKMLGNGELEAMCFDGVKRLCHIRGKL

SSQ ID 3? KLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRG SEQ ID 38 EL£EARLVAE£LEERQQEJ.<DYLKRYLVGRLQAV SEQ ID 39SYFLTVCLLALVQSETVQD SSQ ID 40AMTMANLVGLTISLAYA1FELLYTPPTGRSS SEQ ID 41 SFAWLLYGIILRSHELWQNLMALALSAVQLSLFII SEQ ID 42AF?FISGFLSCFMi?LKYOVLTEESTLILVNFIGSAL I :fs|| |i| i|:GEDGill|^ II

Iplll resíduos 2-33 de> gi j 18389813 | gfo | AA168793.1 j AF457563 1 proteína h ípotética 16 [Anopheles 9am.bl.aej resíduos 2-26 de> gi \ 18383909 j gb | AÃL68791.1 j AF4 57561__1. proteína hipotética 14 [Anopheles gambiae] resíduos 2-25 de> gi i 18389907 j gb | AAL68790.1 Í AF4S7560_1 proteína hipotética 13 [Anopheles garobiae]

resíduos 10-36 de> gi ! 18383903 j gb j AAL68788.1 I AF457S58 1 proteína hipotética 11 [Anopheles gamfoiaej resíduos 2-26 de> gi I 62546227 j gb j AA.XS6005.1 ! precursor de hip3.5 [Anopheles gambiae] resíduos 14-42 de gi j 18389899

L *i:p || '1. ^rotelsa· gli^if||llA ιΙ§|:|||||·3ί i. !ifhiji|e^ resíduos 3-33 de> gi | 18389911 | gb I ,&amp;AL68792.1 ] AF457562__1 proteína hipotética 15 [Anopheles garnbiae] resíduos 1-30 de> gi j 62546225 I gb i AAX86004,1 ! precursor de hip6.3 [Anopheles garnbiae] resíduos 34-54 de> gi 1 62546225 ! gbi ] AAX860G4.1 í precursor άβ hip6«3 [Anopheles garnbiae] residues 38-70 de> gi ! 17026153 l ;éi| | CAD12038.1 ! Proteína Sec61 [Anopheles gambiae] resíduos 2-23 de> gi I 62546223 í gb | AAX86003.1 { precursor; do hip€„2 [Anopheles garnbiae] resíduos 17-54 de> gi j 18389915 J gb 1 AALSSIM. 1 ;j AF457564__1 proteína hipotética 17 [Anopheles garnbiae] resíduos 57-93 de> gi j 87080391 j gb J ΆΒΒ18596.1 j defensina [Anopheles ga.ro.biae]

resíduos 22-57 de> gi í 18389901 | gb | AAL68787.1 I AF457557_1 proteína hipotética 10 [Anopheles gambiae.]

resíduos 7-43 de> gi ! 18389905 ! gb i AAL68789.1 I AF457559__1 proteína hipotética 12 [Anopheles; gambiae] resíduos 3-32 de> gi | 4127344 j mm j CAA76832.1 I Proteína pÍÉ||ÍSÍt resíduos 3-40 de> gí | 4210617 | emb | CAA10259.1 [ Proteína SG2 [Anopheles gambiae] resíduos 91-121 í;|:| ] 4127309 ! I ,0|%7:ÍÍ||§[*.1 j proteína hipotética [Anopheles gambiae] resíduos 65-94 de> gi | 4375824 | emb | CAA76825.1 j opsina [Anopheles gambiae] resíduos 41 a. 71 de> gí j 62546233 i gb j AAX860D8.1 1 desconhecido [Anopheles gambiae]

resíduos 117-14:1 de> gi ] 3378531 ! emb i CAAG3872 I

[ Proteína D7r2 [Anopheles gambiae] resíduos 63-93 de> gi ! 3378529 j emb | CAA03871.1 | Proteína D7r3 [Anopheles gambiae] resíduos 23-67 de> gi ! 18389893 j gb ! AAL68783.1 j AF457553_1 proteína semelhante â roucina [Anopheles gambiae] resíduos:; 43-80 de> gi i 18389881 ] gb j AAL68777*1 j AF457547__1 seienoproteina [Anopheles gambiae] residues 6-42 de> gi í 1B389879 ] gb |; ΑΜ,6877δ.1 } AF457546__1 Proteína de 30 kDa [Anopheles gambiae] * resíduos 4-23 de> gi 1 18378603 1 gb j AAL68 639.1 1 AF458 07 3__1 5 proteínas relacionadas dom D7 [Anopheles piÉiaeCl bisiiiid 11-11:: » li. j: 11119897 I gb: j Ml.68785.1 ! AF457555__1 glândula saljvar tipo 1. proteiha 4: [Anopheles gambiae] :;leSÍ:duoa: 59-95 de> gi | 18389883 j gk j AAL68778.1 ij AF4J7548__1 proteína 1 relacionada dó antígeho 5 [Anopheles gambiae] resíduos 158-184 de> gi | 83016748 | dbg | Bi®3441:.:l ; gsRed [construção sintêticâl sduos 17- 76 de > ·:|1 11 1.8389895 jj φ. ! AAL 68784.1 ;j AFÍ5MS4__1 prate ma semelhante &amp; glâhdaiâ. salivar 1 [Anopheles gambls©:] resíduos 193---222 de> gi j 18389895 í gb i AAL68784.1 ] A F457554_l proteína semelhante a glândula salivar 1 resíduos 113-149· de> gi ;| 18389891 I gb \ AAL68782.1 i AF457552 1 forna longa da proteína '07 [Anopheles gambiae] resíduos 3-35 de> gi i 13537676 1 ernb i CAC35527.1 ] Proteína gSG9 [Anopheles gambiae] resíduos 83-118 de sp ! Q9U9L1 ! RS17JWS0GA 40S proteína ribossômica S17 e Proteína ribossomal S17 [Anopheles garnbiae] gb i AAD47G77.1 [ AF164153__1 resíduos 113-140 de> eno | CAC3S523.1 j Proteína gSG7 [Anopheles gantbiae] resíduos 34-65 de> gb | AAD47075.1 | &amp;F164151 1 fator de iniciação da tradução 4C [ 1A) [Anopheles gambiae] resíduos 2-27 de> emb f CAC3551S.1 j Proteína semelhante a gSG2 [Anopheles gambiae] resíduos 108-140 de> etnb ! CAC35451.1 [ proteína hipotética [Anopheles gambiae] s> gb 1 EAU75730.1 ! ENSANGPQ0000031975 [Anopheles gambiae stx. FEST] resíduos 8-26 de> emb j CAC35524.1 I Proteína D7r4 [Anopheles gambiae] e> gb j AAK84945.1 I Proteína 4 relacionada a D7 fAhppbdles: gimbiabl resíduos 72-102 de> ref J XP__001230998.1 | ESSANGP00000014 906 [Anopheles gambiae Stl. PEST] e gb j; EA07 67 98,1 ;| lAnopheles gambiae str. PBST] .resíduos 176-211 de> ref | XF 31S3S1..2 i ENSANGPO0000012984 | [Anoph©l©s gamhiae #llhfbM| i EAÉl|ll|§:|: | ! EM SANG P0 0 00(1012 9 8 4 |j|^í<^|||^|L^«|í .^^3SÍ|Í| !|||||||||

resíduos 43-78 de> re.f j XP3X4110..3 j ENSANGPO 000001578Q '[.Mnp|||||||:||||||gi 4 11 ftíillllll:. 1 ;Elll|tl||llliOd,5:7Í:0': -paBSS'ia'ii; :Sh:Ellli|ÉÍi®|lllllll^ resíduos 128-1 SI de> ref j XP 314140.3 i EMSAMSP000000157SG [Anopheles gambrae str. PEST] e gb j EAAG9338.3 |illl|li|||l||:l|:OSi::Iii [Ahd|il|af .pâMiihl str j|lllll|lllllll: resíduos 7-32 de> emb ! C.AC35522,1 | Proteína gSG6 [Anopheles

De um iro do preferido, o polipéptido nâo é uma proteína de saliva d.e artrópodes completa* A numeração da sequência referida na presente invenção é definida de acordo com princípios bem reconhecidos. Assim, a numeração começa em 1 a partir do codão de iniciação da tradução reconhecido (ATG). Isso corresponde a uma motion!na (D?), para o segmento do genoma que codifica a. proteína de interesse. Por outras palavras, começa em 1 em relação à metionina mostrada como o primeiro aminoáciào na sequência proteica de intere.sse conforme utilizado e definido pelas bases de dados nas quais as sequências foram estabelecidas íisto é, SenBank*: SmssProt, etc, } . A presente invenção será descrita mais diet a lhadaraente a título de exemplo apenas com referência âs Figuras seguintes, nas quaisϊ

As Figuras 1 e 9 mostram géis IEF de glândulas salivares de anôfeies gamfoiae {mancha Comassie Blue), como produzido de acordo com o conjunto de protocolos nos Exemplos; A Figura 2 mostra um SBS-PASE do gel IEF da Figura 1 {coloração de prata) o retângulo vermelho indicé a localização de uma das proteínas alvo {<30 kDa), As Figuras 3A-31 mostram dados sobre o efeito da vacina na fecundidade doa mosquitos, como segue: 3A; Por cento que alimentou33: Não há ovos produzidos 3C: Não hÉ ovos coloçndos 3D; Taxa de eclosão de por cento 3S:Nâo há larvas 3F:Não quer dizer pupas 3G: Por cento de pupação 3H:Por cento de emergência 31: Não significa adultos A Figura 4 mostra ps dados sobre a percentagem de sobrevivência dos mosquitos após a alimentação em ratinhóá imunizados* A Figura -¾ mostra a produção de IFN-gama após estimulação de S6 horas in vitzo com os antígends na Experiência 3, A Figura 6 mostra a resposta total de Ig no soro aos antígenos de acordo com a Experiência 3. A Figura 7 mostra a resposta total de Ig n.o soro no dia 21 de acordo cora a Experiência 4, A Figura 8 mostra o grupo dmunizadb com mistura AGS da Experiência 4 exibindo Uma taxa de sobrevivência a alentada em comparação com. aqueles no grupo imunizado com NRP-ntix de controlo. O poiipéptido descrito acima compreende tipicamente um ou ma is {preferencialmente dois ou mais) epí topos* Estes epítopos são, de um modo preterido,, epitopos de células T, tais como epitopos de linfócitos T citotóxicos (Clip, mas podem também conter epitopos de células B» Geralmente, o poiipéptido é imunogénico para uma proteína de saliva de artrópodes e, de um modo preferidof para uma pluralidade de tais proteínas* No presente contexto, um poiipéptido imunogénico para uma proteína saliva de éftrópodés: é entendido como significando um poiipéptido que i parte de uma. proteína saliva de artrópodes e que provoca uma. resposta do sistema imunitário. Um método para determinar mm: a® polipéptido possui tal imunogenicidade ê apresentado na Experiência 2 abaixo. No entanto, a presente invenção não está limitada a esses métodos, e o perito pode selecionar qualquer método conhecido para determinar a imunogenicidade, como desejado*

Na presente invenção, a composição polipeptídica compreende uma ou ma.is sequências como descritas acima. Tipicamente, duas, três, quatro, cinco ou mais dessas sequências podem estar presentes no polipéptido, se desejado. Quanto mais epitopos estão presentes, maior ê a amplitude de proteção proporcionada dentro de uma população de seres humanos e/ ou. animais com HLAs ou MHCs diferentes. Isto é particularmente verdade se os epitopos incluídos forem da saliva de uma pluralidade de diferentes artrópodes ou compartilhados por proteínas salivares de diferentes espécies de artrópodes, e podem assim oferecer proteção contra doenças transportadas por uma pluralidade de diferentes artrópodes* Tipicamente, a composição polipeptídica compreende 10 polipèptidos ou Menos, preferenciaImente 6 polipèptidos ou menos, e tipicamente de 2--10 polipèptidos, e mais preferivelmente de 2~6 polipèptidos. M composição polipeptídica de acordo com a presente invenção :;pódê uma Ou maia sequências adicionais que nâo são epitopos, se desejado. Tipicamente, as sequências adicionais são de uma ou mais proteínas de saliva de artrópodes, preferivelmente selecionadas a partir das sequências da SEQ ID 45-85 ou sufosequências destas. Estas sequências podem situar-se entre duas ou mais das sequências los epitopos] descritas acima, ou podem situar-se numa ou em atadas as extremidades do polipéptido, A presença dé fcaii aequênqia® adicionais nâo devíe; afetar a função; ;ió pctlipéphidc, desde que o polipéptido como um todo não se torne demasiado grande? interferindo com a apresentação dos epitopes no sistema imunitário do vertebrado.

Sas formas de realização mais preferidas? as ísequéneias adicionais das proteínas acima mencionadas são aquelas que são {ou estão dentro) as seguintes sequências: SEQ ID 45 ~» gi | 18389913 | gb | AAL68793.1 | AF4S7563_1 proteina hipotética 16 [Anopheles gambiae]

MHLTLFTVAVLLLMAALLLLLPPAY STTLTPPAPPRLSHLGITIGRI

li 46 gi ] 18389909 ! gb j AAL68731,1 | AF457561JL proteina hipotética 14 [Anopheles gambiae]

MPLSYCHLFJuTHTIAÍRALSFSRSDCLKFSEKRLLFSGSKTFFrTLL

SEQ ID 47 ~> gi ! 18389907 j gb j AAL68790.1 | AF45756QJL proteina hipotética 13 [Anopheles gambíae]

MKNVFFALLLWLVCCLVSVQGNEIIQNWKRSIPLRQLILQHNALDDSNSDSGSQ SEQ ID 48 ~> gi j 18389903 | gb 1 AAL68788.1 j AF457558__1 proteina hipotética il; [Anopheles gambiae]

MCIFFQAGIKLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWIAMGVEAKSIKARGTAHSKSRTSTN SEQ ID 49 -> gi i 62546227 i gb | AAX86005.1 i precursor de hip3» 5 [Anopheles gaiaoiae]

WUCGSITRFQMCVMLIGFFSSAKCLMCFADWBGMLLMtMBVFDFQUVPTFVIJCR

S SEQ ID 50 -> gi j 18389899 | gb i AAL68786.1 i AF457556JL· proteina semelhante a glândula salivar 7 [Anopheles gambiaej

MAGE>SQK19ARhK'QNDYQALI<GI..CCPWIDLAAÂÍ5LPMRRHAKA'REAIHFLLQJí\liEA

GPNEEPSLPA Éii ID II, φ gi ] 18389911 ί. | :MmâW9A $! proteína hipotética 15 [Anopheles gamfoiae] NÍKFYSVGKLVKVL.LVMAVCCLLLCTAP TGADPLPGRDOTIANKSKDK K AS APKliS LQTGARMAÍ/rGGiTOGGVLimí SEQ ID 52 -> gi j 62546225 I gb | AAX86004.1 f precursor de hip6„3 [Anopheles ganitoiae]

MKFAFAFVUALFAV!'AVSQAI...PQPEQAAASSNDGASAITKIVLELTPEQA,M.VQKM (}(JRGFWP!MMKSVKK]MAIGC:DL1.D€ SEQ ID 53 -> gi i 17026153 | emb | CAD12038.1 í Proteína SeeSl [Anopheles gamtoiae]

MGlKFLEEK'PPCXTiLFElA.iCPERKiQFREiCYLWTAlTLFiFLVCCQIFLFGiMSSDSADPF

YW1RVILASNRGTLW SEQ ID 54 ···> gi j 62546223 | ps ;| AÃX86003.1 I precursor de hip6»2 [Anopheles garefoiae]

ÍvÍCJRV.VíCIXRLMSTLLVVLSIVGKKTNAAPQVIIIAPGNVGSTYSPMADíGRLAIGAT K!..i-(X>rWNIGTRFCTTELSRRTFDFLRVKK: SEQ ID 55 -> gi ! 18389915 i gb i AALS8794.1 \ AF457564J. proteína hipotética 17 [Anopheles gsTOiae]

MAilliQLFSIlimTMKXYSGYRLLVLLVNn'VCCLLLRIAFrGADPU’GQTQRTiXSYR

GNDKRATPPMHSLGSGARMAMTOGGiLGGiPSAL SEQ ID 56 ~> gi | §7080391 [ go \ ABD18596.1 ,|; defensina [Anopheles gambiae]

MOQOSVPÍGAhiiMKSFÍÀAÁYIÂLICALAVSGITVTLQSTCKLFlXDVVSSfTCXiVJYC

VIKGRIXKiYCNSBGLCTCRAEDLHFLLKPirNKD $m ID 57 -> gi ! 18389901 I gfe i ÂAL68787.1 I ΆΕ457557 1 proteína hipotética 10 [Anopheles garabiael

M!ht'LSVLTYGLLVWV€5VFATVN>\EDPmJiOCGSVLiniLAAK7iLSLQLEEFAVCK

R.$NPGYD€vSDSIHRAISDLQQGi..FDLNHCTKDIR SEQ ID 58 -> gi } 1838S905 ! gb I AAL68783.1 I AF45?559_1 protea hipotica 12 [Anopheles gambiae]

MllihhlVAllGL.llA;5VQSVrAKlDih'DALOACSGNIJYHJAi:illLQ{iyVIhiETACIlQE ATXN DPQHDRSDSIQR AK VDLQQQLVN YS Y CTKN IQ SEQ ID 59 ~> gi [ 4127344 | emb \ CAA76B32,! ! Proteína cES fAnopheles gambiae]

MASKLPVIAPLCLàLYVVVQSÁFQYARGDYFTYÍIEBDFDEESLKPHSSSPSDDGEEE

PDPSU,EEHADAPTARBPGRKPEFLRNSNT»COASAPAASSSDS SEQ 1C 60 -> gi i 4210617 | emb \ CÃA102S3.1 I Proteína SG2 [Anopheles garrsbiaej

MK5MLYAPATI..sSVAlAWV'AlPAh?FNYGG(3GGYP!NGTGQSFNFS0EENCf'rSE>GLP

DFGSFLPNLGNLTQQFGGSSGAFPGFSIPSWTNPTDAPlIíII.PFFONGGGGGPPPEG SEQ ID 61 -> gi i 4127309 ! erab [ CAA76820.1 { proteina hipotética [Anopheles gambias]

MTPUATlYVACALTLSIVHSRGLPESSDKl.EACGQHYGXLLKASTrWMHKECMGSTK

iAACWSEHEQAYREI.KQRCQEAHDERTAKV!NAIYEKifíPAYl^EVSAilYNVLQVSL

QP07LPNLQE SEQ ID 62 -> gi | 4375824 ! erab 1 CAA76825.1 I opsina [Anopheles garahi ae] FDVÀEPLVGIHIlhRHLRYLAÂAADHHLLVHEHPEGCAOíSRHEÍiARAGQEGNYASLR.

TQ£AQNTSlWKIAKYAlAni5?.A¥FMAY'TPYtVTNFT(IÍFRAAFISPLAl'fRGSl,PAK

ANAVYNPJVYG SEQ ID 63 -> gi I 62546233 ! gb j AAX86008.1 f desconhecido [Anopheles gaiabiae]

hL\TTWIin'SVIIGPYPIht^VPGGVDSDGAQÍFVQ.RAÍÍHAGDI.I,PAKVIPT.>KTÃAYVA YGGQET1..VE1íVEYLV.HKGUWDTASAOQVP1<OAVVGGHTSDÚEII2/VGRí\YHEGS Q'T IGK V Q€S H NCI YIP YG G A E V S V PT Y E V.ECBR ID SEQ 64 ~> gi I 3378531 [ enb í CAA03872.1 \ Proteína D7r2 [Anopheles gambiae]

MFK1CLLLSVC1LVWCÍJSEGQARKESTVEECE.KNÍGI>8LKI>RYCELJIQ^WS8D1>M DKHJMQCVLEV VGFVIXíNGEV K.ESV LLELLQRVDSOV^HAANMKKCVTEASl^GSD

KKAKITYICFLGTSSLAGFKNAVDYDEELKAGKMQTSDP

SEQ ID 65 ~> gi I 3378529 | etrb ! CAAC3871.1 í Proteína D7r3 [Anopheles gambiaeJ

MF{)K!Ji>€AIi.JAV7:i,FSI,(]QAR.QEE'rV'EHCERNIPA>SLK£llYCELRQY'ITYG(iKDMD SiíMQCYLHVí.GFVEDNClFI.YFQELLGVLKMYDPDGDHAGSMKKCNGEAEKYDTSS K ANTFYTCH.GTSSAQAFKYAY i3YVXAXRAOKLD.YiGTOFi AGQY SEQ ID 66 ~> gi :1 13389893 i g I AALS8783,i [ AF457553__1 Proteína semelhante à mac in a [Anopheles ga.tn.hiae]

AGGFSLFEALKQ-f'n-RGEMFRKKLTPTVWYIXCLTFVADAUnQELRAQlAQQmQQ RYGYYVATTSAATn'A.AiTSAArrSEATITAAAS'iTQASDSDNTnTAEATrn’KAQ ΤΤ88!^Ν5ΤΤ7ΈΛΛΛΊΤΓΛΑ8£Τ FADSSSTGTTSVF ACíLR AQ YRDQVRQQAiER A LA mmm®'· SEQ ID 67 -> gi | 18389881 I gb ! AAL68777.1 | AF457547__1 selenoproteins [Anopheles gambiae]

MRLFAnt'LLFSIVTVKIABPSABIX’RELGUKSQLFOSACSSLSDYGLiELKEI-ICLECC

QKD'i'EAi>5KLKVYPAAVLIiVCr€RFGAYPQ]QAFiKSDRI>AKJ'FNI..TlKYVKOU7PIV

KLMDEQ(irVKHTLS3NKWNTDTYGEFFKTRLAKVEDDDYIKTNRV

SEQ ID f>8 > gi I 18389879 | gb | AAL68776,1 \ AF457546JI

Proteina de 30 kDa [Anopheles gambiae]

MAGAnTTCF.ILI]GVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLV7JVSiWADDTSDQESSTE

r^DDAGAEEGAHDAGSDAEADAGAADGm-GATDItíSGABGDDSEMJ^SAMKHGEKG

AGSDDAVSGADDETEESKDDAEEDSPEGGEEGGDSASGGEGGEK-ESiWrVRQVHK

LLKKiMKVDTKD SEQ ID 65 ~> gl I 18378603 í g I | AALS8639.1 j AF4S8073_1 5 protemas relacionadas com D7 [Anopheles gambiae]

MEWRYFVVIALICPLIlVEnAVSIXiVRHVSESARNTVCDVRQYRVTKGVRABUYVQ

CmMLGl'ADEEGSIQRSNVLTALDAVETHDGVYTDAVDVCLSKAKKLPGniRSGY

FFSCMLRTKSAT,N1HDAVELQELRVASK\WEGÍÍRFDRSEVQQMMREI,NSQLRC SEQ ID 70 -> gi | .18389897 | gb | AAL68785.1 \ AFA 57555_1 glândula salivar tipo 1 proteina 4 [Anopheles gambiae]

GREÀIBIMRTEQRKHRQQLLLLYLDAADLRRAUÍQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFVY

AAPRHIINRR.l,PNLLDLVRQLPARQDQRTT,YQLLQPEIMKRPAQNQSTLAMLTALriM

GQWEGKGELKKQQDAMyOLVLKRWMFIX'hAGQYRErVQFATKHPRlJRS SEQ ID 71 -> gi j 18389883 j gb | AÃI»68?7S,1 I AF457548J. px*oteina 1 relacionada ao antigeno 5 [Anopheles gambiae] maiwivcatlllavlswsvggqycssdlcprggphygcnppsssggptcqgkoka

R.K VLI/IP ALQA'Y íMDEHN 1..NRSN ÍALGRLR.F YPSA ΥΚΆ1P Γ.Ι..' ÍAV.DPELASL ΑΓ>ΛΝ ARS CN YGHDRCR ATKKFP YÀG Qlv IA ITQFFG YRFTEKD I.I; IK Γ V SS W WSE· YLD ARPEH V'R KYPSSYSG SEQ ID 72 ~> gi j 83016748 [ dh^ | BAE53441.1 ] DsRed [construção sintética] MKIASSENVITEFMRFKVRMECITVNGHEFE]E0EGEGRIÍY-CGHN1'VKIXVTK0GI,1,

PFAWDTLSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSl.-.Piii'iFKWBKVM.NFEDGGVATYTQD SSLQDtíCFIY KVKFIOVKFPSnOp·VMQK ΚΊ YiGWE A S'J ERL YPRBGVLKGETHKALK UíDCKIHYLVBFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDAKIlIIT^HFflEXJYTlVEQYERTEGRHH TJ ’LR SRAPPP PPL! SEQ ID 73 ~> gi | 1838S895 J gb { ÃAL68784 . 1 j glândula salivar s&amp;irsel haate a uma proteína 3 [Anopheles :gpl|3âÍÍ::|

MAG QRHLIEQ A WQ YG AQLQH EL MLTSM ESDRVQRAI ,· V UIS M L VM ASE ΛΕΜ YKE S YQTHGADGRMWRMriCFVRT.I.PGADnRVAVYKQÍ.AKlXKSNCKJ|DGRFPAVlFSTD VRQLBDRYKPDHAQYBGKWHRWLAELQAGTFHEVVEFARDYT^YFARVEEPLYE

T1.KQQ WSAEG ! J3RMVSF PNAL P VG V QR VRAL R A Ϊ.. LBTLI .QHQGEQNND V YL1RLA HliTGllVEÁTVGQADÀAVRQAI.. Dl >VKK.l .PI \Q PK YQRGFPDY KALYKLFKGL SEQ ID 74 > -gi j 18389891 | gb j AAL68782,! j AF457552Jl Forma longa da proteína D7 [Anopheles gambiae]

MÍVPftVÍXFnJUELFVQATQAFKALDPEEAWYVYERCHEDHLPSGPNRETYLía^WKF

WKLEPNDAVTHCY'YKCTLAGLQMYDEKTNTFKPETVPVOHEAYKSFTEVESSKYK

ELGQAÍSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNEYIGVSlGaYHGTVDSVAKIYEAhPEíKK

GFXBFIlAYCAKIALGANGEEeYEKTRDYELADSAEFRNAMDeVFRGFRYMDDSGL

KVDEVVRDFNnNKSDLEFEVRSVEASOTGTHÁYDYYSCLLNSSVODFRNAFYPHE

UÍSANYGYT^AMGKYYEGPEKVKEBLKKLNY SEQ ID 75 -> emb i CAC35527»! | Proteína gSG3 [Anopheles gambíae]

MCKFYRLISTLLVVWÍAPRHQCSPFFFQYNRPYLSQPSSQLASTAANVVQRSNYlYA

LGNRINTDTALDDYGTRY SEQ ID 76 ~> sp ! QSU9L1 f Proteína ribossómíca S17

RS17JMJOGA 4OS

MGRVRTK1IKK,^SKVIÍEKYYTPXTMDFDTNrKRÍVEEVAnFrK.W,RNK.!AGFVTIiLM

KRURJiSQYRGlSlKLQKEESERRDNYVPDVSAfjEQDlIEVDPETKEMLíCHLDFNNIVY

QLTNPTAPGYSNRRK SEQ ID 77 ~> emb i CAC35523.1 ! Proteína gSG7 [Anopheles

MHAKPÂÈ·'V UA LG VICLLQ'JTFrSASTNHVQQLMKVFRSMT QN PDYTKKPSYhQRA KYGVQNQURNPLVQKAGNl.PKSAKLSDGCLKQMVARVTDLEASFYASFS^CHDH dqysmecleaaepkyldglktladetaqcmrdqq SEQ ID 78 -> gb 1 AAD47Q7S.1 i ΑΕΊ64151 1 fator de Iniciação da tradução 4C UA) [Anopheles gamhiae]

^rPIG\’KGKGGXNRRRGKNENESEKRraJFr<r;i>EQEYAQVTKMLG'NCiRl,EAMCFDGV

KPJ.('!!IRí.)KL..RKKYWÍNQGDdI.KíLRDYQDSRADVlLKY'rPDEÀRNLKTY'GEFPESV RXNBrVTFVENDMDDDÍHFGDDYSSSEEGDAÍDAÍ SEQ ID 7$ ~> emh i CAC35519.1 | Proteína semelhante a gSG2 [Anopheles gambiae]

MKLFLTLLSTLSVAY^FALRAH.l-mSRCKjDOSSANSl'GMhDNMSAGVTDFGFNSQSN

VPGFGNCtQQPGQQQQGQQGQGFPFFGQGQSGFPSFGNR.Í..QPFFGQKQG<ÍQDGDAQ QORGVPFFGOGGGQGGIPSFGSGQQNGGVPFLGNGOaQSCiFPSFGNGGQGGNFPn·

G SEQ ID SO ~> emb I ::GAQÍ::5AA1.,| | proteína hipotética [Anopheles gambiae]

MKLYAFALVEC:VGLAVGAEVDSYPEVPSDLQQQmEl..QLADj<PEAPVDDAEQPLPP NGDEU^APEPVPEDOSPDEEHLEEEQlSEEAEADEJgEADESESEESEESDÊLEBARL V AHELEERQQELD YLKR YLVGRIX^AV ÀÍLDRRVRPÁYIRRPWIRRP WÍRRPG SEQ ID Sl> emb i CAC35524.1 i Proteína D7r4 [Anopheles qambíae]

MlRQVÍlSVFLTVCÍJALV^FnVQTiCENKÍ^PSlXSRLCmRRYEIIEO^EMimHIHt^

MRAi^lWEDORGDViim'DFmJELDKKJiDVHlXKCIOEC^VFrSBKAHVFYK

CU.-K,STrGR'i'i'KKVFDLMfiI,KK:AGK.VFQHQRVTAFJ;VQiMKDYBK'A].NC SEQ ID 82 -> ref i XPJJ01230998.1 j ENSANGPOQ000014906 [{Yiepheles; fei;lpíílllll|:,

MEÂlSEAÍ.X^PYKSQYGMAAGÍLlYGQMFSGCFYCF^DTItKKGTTDGFSAfvíPFVOGCG ITVLFLQRGKGAíNDSAMTNANíAYIFHSLâYAÍFHAYTP^ITGRSSYWEQVGGTALF TI Ti,! .0 Y VKV ΕΝ PS WEOKFGMÍÍTVLML ALIGQP LFGLFD1 IB.RK STHG S ,PF AM í t SGT IVGISWLLYGVÍfi^VFVVCQNLAAmSOIQULFAnTSKAAPPSKKRE SEQ ID 83 ™> ref i XP316361,2 1 ÊHSAHGP00Q00012984 [Anopheles qasbiae str, PEST j

MESIAVaLQPYKDTVGLTAATVTVVQFFSGVÍjALNAIRRQGNTRGí^ALPFLGGTVF

CLLNlQPGQMl.KDÍXiMíKVNii-IGlAÍ^LLVVCGFYLYTEGI^AKTAVWGQiGLAGÀL

l>\GVIYYVQYEDrA}ÍATFRlOLlLIGliXWTlAY3MPLLGLGI>IT.KKK.STEGOíFI>]ilFí,G

AVVSFAWL13fGÍ£r,RSNÍ'?LVVQMI.MALAL6AYQLSLPll.FFSGAÂKF.P.PTPÂKKRN SEQ ID 04 -> ref j XP_314X40,3 i Eli SANG F 0 0 0 0 0 0157 8 0 {Anopheles garsMae str, PEST]

MI>GIMSK.GSLASLÀTYÀTV.T.,QFLTG>rVÍCNRYIRKKSTGDTSAFPFIS(5FLS€FMWLK

YGYLTEES1'LÍLVNF!GSALFFSYTVVFFII?CVNKREVIRQMMVISCIILSATLYTLFETD

DEKSSRYi^LCCCLAYLFFASPLTMLAHYni.TQNTDSLPI’^UMASiFI’VCLEW'rAYGV ?JCH)FJ3QIPNIJ,G(ÍILAGIQLTI,YVIYPKKKASFSGC5PRYSPLVSEHPII, SEQ ID 85 ”> ersb j CAC35522,1 1 Proteína g3GS [Anopheles geaihlae ]·

MAlWHIX-AMYlIiltUliÍSVYPYAAAEKYWYDKDKYYCOIILDCrB.VATFKGHH. F€1‘l/IÍ)TRHFCEC.KFTR!AhlAA^ YA€KTrihX.:QS3DRtGSC8KS.M.EDVI,CDF.I'DQAF LEQ

Os péptídos d® presente invenção, tais como os da SEQ ID 1-44 e os da SSQ ID 131-134 descritos acima, compreendem, de um modo preferido, um ou toais amínoáeidas adicionais num ou em ambos os seus terminais, para ajudar no seu processamento em vacinas. Tipicamente, estes amínoácidos adicionais s os adjacentes a cada um dos terminais da SEQ ID 1-44, como mostrado nas proteínas maiores da SEQ ID 45-¾5 acima (estas proteínas 'maiores contêm as sequências da SEQ ID 1-44} * De um modo preferido, o número de amínoácidos adicionais em iPpda terminal é de 1-5, de um modo main preferido, de 1-3 e, de um modo muito preferido, 2 em cada terminal, Em. cada um destes casos, se. houver menos do que dois amínoácidos adicionais nesse terminai das sequências da SEQ ID 1-44, então os amínoácidos adicionais incluem todos os aminoácidos restantes nesse terminal.

SEQ ID 86 MHLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPPAP SSQ ID 81 MPLSYCHLFLTHTLilP.ALSFSRSDCLKF SEQ ID 88 MKNVFFALLLWLVCCLVSVQGNEIIQ li: :ii: SEQ ID 90 mflkgsfprfqmcvmligffssaxclmc

SEQ ID 91 KQKDYQALLGLCCPWXDLA&amp;ADLPMRRKAKARE

SEQ ID 92 MKFySVGKLVKvLLVÍ-lAVCCLLLCTRPTGADPLPG

SEQ ID 93 Μ K FA FA FVLIAL F2W F A v S QAL P Q PE QAAA8 S

SSQ ID 94 SHDGASA1TKIVLELTPSQAAAVQK

SEQ ID 95 aiTLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFyWIRVILASN

SEQ ID 9€ MGRVMCLLRLMSTLLWLSIVGXKT

SEQ ID 97 Mi'CLI'SGiRijLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTLGY SSQ ID 98 CKMYOTKGKTGGYCHSEGLCTCRAEDLHFLLKPIlfêKD SEQ ID 99 TV^AEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKRSN SEQ ID 100C¥ALIGLLLCSVQS\rrANDPVDALfiACSGNLFGLLMTRLQQ SSQ ID 10.1 MASKJ,FVLAF1CI:ALVVWQSAPC)YARGD¥PTYD

SEQ ID 1 0 2 MKSMLVAFATLSVALVVVVAIPANFN'YGGGGGYFIHGTQQS F

SEQ ID 10 3 NAIYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQE

SEQ ID 104 STEMKLAVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGIFK

SEQ ID 10 5 GDLLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLVHK

SEQ ID 106NTFYTCFLGTSSL.ftGFKNAVDYDELLKAGKM

SEQ ID 107 QCVLEVLGSD/EDNGE'L7FQEIJ.iGVLKMVDPDGDKA

SEQ ID 108RRKLTmwVLLCLTFVADALTIQELRAQXAQQRIQQRYGVTVATTSA SEQ ID 109CSSLSDYGLlELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEVCf

SEQ ID 110AITYICFILRGVSSIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLIVS

SSQ ID 111EWRYFWIALICPLIIVETLAVSD

SEQ ID 112QLILIiYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFVYA SEQ ID 113 RKVLLTFALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMPTL SEQ ID 114DGVLKGETHKALKLKDGGHYLVEEKSJYMAK

SEQ ID 115ALVLHSMLVMASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKSRÍRJID-PGA

SEQ ID 116 YQRVRALRALTLLQHQGEQMNDVYLIRLAHBTGR

SEQ ID 117VNELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRJÍXIH

SEQ ID 118MCKFYRLISTILVWVIAPRHQCSPFFFQYWRPYLSQ SEQ ID 119RDNYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHI,DFNNIW^Ei!ESr

SEQ ID 120 HDQYSMECLSAAE PKYLDGLKTLADETAQCMR

SEQ ID 121EQEYAQVTKM1GNGRLEAMCFDGVKRLCHXRGKLRK

SEQ ID 122MKLFlTLLSTLSVAMvFALPAHHHSRSGD

SFQ ID 123SDELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAVAI

SEQ ID 124XISYFDTVCL1ALVQSETVQDCE

SFQ ID 12 5 DS AMTNAN L VGLTI S.LAYAI FELL YT P PTGRSSYW

SEQ ID 126WSEAWLLYGIILRSNFLVVQMLMALALSAVQLSLFIIFF

SEQ ID 127TSAFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSALFE

SEQ ID 128VIGLLCXCLAVLFFASPLTMIAHVIRTQ

SEQ ID 12 9 VELLI.AMVLLPLLLLESWPYAAAEKVWVD

Partícularraente preferidos, tais péptidos também incluem o seguinte;

residues 1-3S de> gi | 183Β9913 1 gb I AAL68793.1 I AF457563___1 proteína hipotética 16 [Anopheles gambiae] resíduos 1-28 de> gi | 18389909 j gb j AAL687 91.1 1 AF457561__1 proteína hipotética 14 [Anopheles garahiae] residues 1-27 de> gi j 18389907 ( gb j AAL68790,1 ] AF457560_1 proteína hipotética 13 [Anopheles gambiae] residues 8-38 de> gi J 18389903 i gb I AAL68788,1 1 AF4575S8 1 proteína hipotética 11 [Anopheles; gambiae] residues 1-28 de> gi i 62546227 i go i AAX86005,1 | precursor de hip3.5 [Anopheles gambiae] residues 12-44 de gi j 18389899 j gb [ AAL6878 6,1 j AF4 57556 _1 proteína semelhante a glândula salivar 7; lAhdpheliiS, pasfeiâli resíduos 1-33 de> gi S 18389911 | gb j AALÔ8792,1 | AF457562 1 proteína hipotética 15 [Anopheles gambiae] residues 1-32 de> gi I 62546225 i gb j ΆΆΧ86ϋ04,1 | precursor de hip6.3 [Anopheles gambiae] resíduos 32-56 de> gi I 62546225 | gb | AAX86004,1 ! precursor de hip6.3 [Anopheles gambiae] residues 36-72 de> gi i 17026153 I eirb ] CAD12038.1 i Proteína SecSl [Anopheles gambiae] resíduos 1-25 de> gi I 62546223 I gb ! AAX86003,! ! precursor do hip6.2 [Anopheles gambiae] resíduos 15-56 de> gi j 18389915 ! go j AAL68794.1 ! AF457564_X proteína hipotética 17 [Anopheles gambiae] resíduos 55-93 de> gi | 87080391 I gb j ABD18596.1 j defensina [Anopheles gamteiae] if^eli^íos !i ^^^!!!;^·ίίίΐ j |:||lf:i|ll::: i !ii ] AF457557_JL proteína hipotética 10 [Anopheles gamhiaej Ít:.rlí:Éf;dMb:S' Í:b4:| Ipéilllsiill; I: i:Í:iÍ9#ÍÉll i \ liliÍj:&amp;f§ÍtfflÍÍ#líiÍ|^.............. resíduos 1-34 de> gí j 4127344 | ©mb I C&amp;&amp;76832.1 1 Proteína cSS [Anopheles gambiae] residues 1-42 de> gi ! 4210617 i emb i CAA10259<.1 | Proteína 8G2 [Anopheles gambíae] resíduos 89-122 de> gi | 4127309 j emb I CAA76820.1 F:' j.::i^#'C5;fc:p-_íLrre.:j 1 ®1 liiiliri.p;gi(íieí giililib:|llllllll residues 63-96 de> gi j 4375824 j emb j CAA76825,1 j opsina [Anopheles gambíaej resíduos 39-73 de> gi 1 62546233 | gb | AAX86008-1 | desconhecido [Anopheles gambíae] resíduos 115-145 ú&amp;>- gi I 3378531 \ extib | CAA03872rl I Proteína B3r2 [Anopheles: gamtoiae] resíduos 61-95 de> gí | 3378529 \ emb i CAA03871.1 | Proteína D7r3 [Anopheles gambíae] resíduos 21-69 de> gi | 18389893 | gb j AAL68783.1 | AF4S75S3__1 prote.ína semelhante à mucína [Anopheles gambíae] resíduos 41-82 de> gí I 18389881 i gb { AAL6S777,! | AF457S47 1 selencproteína [Anopheles gambíae] .............residues 4:ÍÉll :deí§ :§:ί I ί®3:ΐ|Ι1|?| .....:;! | i.· i" !!lÉMÍ31i:l:i_l. 'liiteihl: 'dei 3d :|||bp|l|;#s: ||ai!d>iail.............

resíduos 2-25 de> gi I 18378603 | gb j AAL68639.. 1 I AF4 5807 3__1 5 proteínas relacionadas com D7 [Anopheles |ϊ :di;h· Igill F|:: Jll|ÍÉ:Í;|'S:7 } gb ][|l:àÉbii7:;||;iÍ |||| AF457555__1 glândula salivar tipo 1 proteína 4 [.Anopheles If iglbhídii |F:FFFiiiFFFFFFFFFF' iFF^tÉiidbii' .....ΐ^^§:ί:'§βΐ F|FFFFí 1ί||ΐ:Μ:β 1 ·;|ΐ?' I ®Μ1:§|:7|:|| 1 11111 .......piblpihlF......Í; 1 .'fiildil:||§sd&amp; ad enhigihid 5 |:||ftb||lplell||. garabiae] |F:b||j|l@:||tl:i^i|l| dip.....§;||j jJiif|f4:Í. i dirt j '1&amp;f§Í4í1,::|!!:; ilipi:| [constr«ção. sintêtica] resíduos 35-78 de> gi I 18389815 | gb } AAL68784.1 i AF4 57 55 4 __1 proteína semelhante a glândula salivar 1 ,l|Ébbpnò:|:Íb^ gsitbiab:||IFFIl: 189-224 de> gi i 18389895 | gb | AM.68784,1 | AF457554__1 proteína 3 semelhante a glândula salivar 1 [Anopheles [""'ghpjíablllF' resíduos 1.11-151 de> g,i........ .1....,18.3.8.98.9.1 | gh-^JUU^fiSTfla*! | AF4ò7552_l forma longa da proteína D? [.Anopheles gambiae] resíduos 1-37 de> emb | CAC35527.1 ! Proteína gSGS [Anopheles gambiaej resíduos 81-120 de> sp j Q9U9L1 ! RS 17 AFOGA 40S proteína ribcssonrlea SI7 residues 111 a 142 de> ersb j CAC3552.3.1 i Proteína gSG7 [Anopheles gambiae] resíduos 32-67 de> gb | AAD47075.1 i AF164151 .1 fator de lunciaçao da tradução 4C {1.A) [Anopheles gambiae] resíduos 1~29 de> emb 1 CAC35519.1 j Proteína semelhante a gSG2 [Anopheles gambíaej ;/| Cmb :j |3ã3::3í5-4:¾'31 ii:tMi:11 ; 1 íí||5p|:i;|:í'^|||||| I í|$§í^^^ I ^: -:dè|§| êftb [ &amp;&amp;pSSM:,:l. ί|1::||||||:||ί| Β1χ;|1 |^|ΡρΑ|:1^11111^ I |ga|íiptAÍ:||l ϊ |t :dhp:s||! ? o -1Θ4: ide d xdllllllllllí|lllll:l d® il:l|||ll | ] Çí;|ã-Cí:|i|iiiâ';p^ [AhòphetÉs ||l|||il|;|l|i:|l 1:ÊÍ:|3 ||||

i I d§didÚÓ:â [il:4:«2Í;|| bdA I’ :l®mS|ɧÉͧlÊ!Íl!Í!ÊÍP I |§btb|ltdie stx::||||pS;l'j

resíduos 41-80 de> ref j XPJ314140 .3 j ENSANGP00G0001S78Q | dtr:|||ÍI:ST:] resíduos 126-153 de> ref | X?_314140,3 ! ENSANGP00000015780 resíduos 5~34 de> emb I C.AC35522 dl | Proteína qSG€ [Anopheles gamhíaej

Em formas de realização alternativas da presente invenção, s a invenção dirigida a composições compreendendo polipéptídos s que são homólogos aos descritos acima, em particular péptidos dique são homólogos a qualquer das SBQ ID 1-134. A homoioçía referida acima em relação a estas sequências é de preferência I 11ÉÍ|Í: :BPÍ|ÍÍil::!l| #S%: ou substãnciãlpe^^ M. percentagem de homología de uma primeira sequência poiipeplidice com uma segunda sequência polipeptídica, como referido no contexto da presente invenção, definida como o número de resíduos de aminoãcidos na segunda sequência que ,|||§É||fê&amp;dê^ bom©: ha ihehlibadilld primeira sequência. .¾ sequência, dividida peio número total de resíduos de aminoáeidos no segundo polipéptido (tanto o primeiro como o segundo polipéptidos, devem ter o mesmo número de resíduos de aminoácidos5 e multiplicada por 100. Na presente descrição é preferido que a homologia do polipéptido com. os definidos as sequências são 75% ou maia* 80% ou mais, 85% ou mais# 90% ou mais, 95% ou xrtais ou 100% (ou substancialmente 100%)*

Na presente invenção, a doença transmitida por artrópodes não ê especiaimente limitada, e os polipêptidos podem ser xmunogénicos contra, e/ou derivados de qualquer doença conhecida transmitida por artrópodes. Exemplos de doenças, agentes patogénicos e vetores abrangidos pela presente invenção, são apresentados na Tabela 1 acima. De preferência, no entanto, a. doença relevante é a .malária (incluindo qualquer estirpe da malária), tal como causada por qualquer uma das estirpes de Plasmodium. Ã9 sequências especificas homólogas a qualquer ama das BEQ 1D 1-134 descritas acima a, de um modo preferido, aquelas nas posições apropriadas dentro de proteínas artrópodes conhecidos, que podem ser encontradas na base de dados de protein*» NCdT públicas, que podem ser acedidas online no seguinte endereço Ui URL http: //www.nebi.nlm.nih. gov/entre r/query/atatic/help/helpdoe.htm l#Protein. A lista está normalmente no formato I número da versão inúmero gi) j identificação da base de dados (por exemplo, gfo para GenBank) j número de acesso NCB1 i informações adicionais opcionais (por exemplo, o número de acesso da sequência nualeotidica da qual a sequência proteica é derivada.) , O banco de dados de proteínas contêm dados de sequência das regiões de codificação traduzidas de sequências de ÂDN em GenBank, EMSL e DDBJ, bem como sequências de proteínas submetidas ao Protein Information Resource (FIE), SNISS-PROT, Protein Research Foundation {PRF; e Protein Data yank (PDB) {sequências de estruturaa "riapiYiÉiil ;:*v íC3sí epítopos dentro das sequências definidas acima não são especialmente limitados, deM» eonbenha® 7 resíduos de aminoácidos ou mais* De preferência, os epítopos têm pelo menos um comprimento que é apropriado para os epítopos imuncgénicos maia pequenos, tais como epítopos de células CTL, T auxiliares a células B numa espécie particular de vertebrado, tal como num humano. Tipicamente, os epítopos contêm 8, 9, 10 ou 11 resíduos de aminoácidos, mas podem conter mais, se desejado.

Embora possa compreender tipicamente maís aminoácidos, o polipéptidc compreende 100 aminoácidos ou menos, de preferência entre ? e 100 arai no ácidos, e ma is preferivelmente entre 8 e 75 aminoácidos. O tamanho não deve ser tão grande que os epitopos úteis sofram de competição com epítopos não protetores no sistema Imunológico (por essa ratão, proteínas completas não são incluídas) , nem o tamanho deve ser tão pequeno que apenas uma faixa muito estreita de proteção seja oferecida. As gamas maís preferidas:; sid ide 15 a 75 aminoácidos, 20 a 55 aminoácidos e 23 a 50 aminoácidos. É particularmente preferido que o polipéptidc consista (ou consiste substancialmente em) numa sequência selecionada das sequências definidas acima„

Além dos polipéptidos descritos acima, a presente descrição também inclui polipéptidos imunogénicos multi-epítopo çompreenddndp dois ou maís polipéptidos da presente invenção, quer como polipéptidos de múltiplos ramos ou sequências concatenadas. Estes polipéptidos multi-epítopo não; estão limitados em tamanho e podem compreender, por exemplo, atl400, ou at.90Ô, ou até 55Õ aminoácidos. Assim, estendem-se não apenas aos polipéptidos delineados acima, más também aos polipéptidos maiores, desde que estes polipéptidos maiores compreendam duas ou ma is unidades, consistindo em cada unxdade num poiipéptido oa invenção, Assim, um poiipéptido possuindo 1Q0 unidades de repetição de um 7-mero de acordo com a presente invenção está abrangido pela presente invenção, tal como um poiipéptido possuindo, digamos, 52 unidades de um epitopo 8-meid ip. 23 unidades de um segundo 10-mero epitopo. Os polipéptidos deste tipo não sofrerão dbs problemas de competição associados a polipéptidos dé comprimento semelhantes que compreendem apenas um ou dois epitopos. Para evitar dúvidas, o poiipéptido pode compreender múltiplas cópias do mesmo epitopo, ou cópias únicas de uma pluralidade de epitopos diferentes, ou. múltiplas cópias de 2 ou mais epitopos. Particularmente preferido que um poiipéptido mulfci-epitopo compreenda duas ou mais das sequências descritas acima na SEQ ID 1-44 [e especialmente aquelas nas SEQ ID 1-6, 7, 8, 11, 12, 1δ, 16, 20, 26, 28, 30--32, 35, 41 e 42) ou na SEQ ID 86-134.

Como foi mencionado, a invenção proporciona uma composição polipeptídica compreendendo um ou mais, de preferência dois ou mais polipéptidos diferentes como definido acima. Assim, a composição polipeptidíca pode compreender qualquer número de polipéptidos da presente invenção em conjunto na mesma sequência, mistura ou formulação. A presença de Uj|1 pluralidade de polipéptidos em conjunto é útil uma vez que cada um pode desencadear a sua própria resposta imunitária, alargando o efeito protetor da composição* S particularmente preferido que a composição contenha duas ou mais (ou todas) as sequências da SEQ ID 1-44 (e especialmente aquelas na SEQ ID 1-6, 7, 8, 11, 12, 15, 16, 20, 26, 28, 30-32, 35, 41 e 42), e/ou dois ou mais dos epitopos dentro da SEQ ID 86~ 134« Na composição, cada sequência e/ou epitopo pode estar presente como um péptido separado, ou como um numero de péptídos maiores compreendendo vários epitopos e/ou sequências concatenadas (por exemplo, três sequências pufetO | ......:;;;;;;' -¾¾¾ A invenção também proporciona uma construção polipepttdica, cuja construção compreende um. polipéptido como definido acima e um transportador. A construção pode ser formada combinando um ou ma is epítopos e/ou poiipéptidos cora o definidos acima com o transportador. O transportador pode ser uma molécula, tal como um adjuvante e/ou um. excipients. h combinação neste contexto significa misturar ou unir (por exemplo, através de uma ligação covalente). Ά presente invenção proporciona ainda um polipéptido como definido acima para utilização em medicina. Também é fornecido um medicamento ou composição de vacina contra doenças transmitidas por artrópodes, compreendendo um po.lipeptid.eo como definido acima, e ura ou m.aís excipient.es e/ou adjuvantes apropriados, ou uma construção polipeptídica lllidmo:. .dèfdiiiié:. .acima· odlllill:llllillliÍP:ié ......;...... e / ou adjuvantes apropriados (se a parte transportadora da construção for ela própria um excipient© ou adjuvante, então um outro excipients ou adjuvante pode não ser necessário), 0 exoipiente ou adjuvante não é especialmente limitado, e quaisquer exc.ip.lentes ou adjuvantes utilizados em medicamentos s vacinas podem ser utilizados. 0 medicamento cu composição de vacina pode ser produzido de acordo com qualquer método conhecido apropriadamente adaptado à presente invenção, tal como misturando uni polipéptido da invenção com um e?ecipiente apropriado.

Um método de produção de um polipéptido como definido acima é também proporcionado pela invenção, 0 método não é especialmente limitado e compreende tipicamente a junção de dois ou mais epítopos para formar o polipéptido, 0 polipéptido pode, no entanto, ser sintetizado por sintese química direta {por exemplo, incorporando um aminoãcido de cada vez até se formar o polipéptido completo) ou por métodos recombínantes. Tais métodos gerais sâo bem conhecidos do especialista e podem ser adaptados à presente invenção como desejado- Em alguns casos, o polipéptido da presente invenção pode compreender sequências de iminoácidos adicionais num ou em ambos os terminais para ajudar na síntese do polipéptido. Estas sequências adicionaié são preferencialmente di 1-5 aminoácidos dè comprimento. Norma lmente, aois amlnofeidos esfcSd envolvidos. Exemplos de tais sequências sâo fornecidos como SEQ ID 86-129, como descrito acima. &amp; Invenção refere-se ainda â utilização de um. polipéptido ou composição como definido acima, no fabrico de um medicamento ou vacina, eficaz no tratamento ou prevenção de uma doença supor t. a da por artrópodes. É também divulgado um método para tratar ou prevenir uma doença transmitida por artrópodes, método esse que compreende a administração de um polipéptido, uma composição, um medicamento ou uma vacina como definido acima a um vertebrado. 0 método de administração não ê especialmente limitado e: pode incluir administração subcutânea, intramuscular, intravenosa, íntradérmíca ou intranasal, ou pode ser administrado oralmente {por exemplo, na forma de uma pílula ou uma preparação liquida), ou pode estar na forma de um supositório, se desejado. A forma de tais preparações de administração não é especialmente limitada, e formas conhecidas podem ser empregue® com,: modificações apropriadas que serãO: evidentes para o perito. A dosagem não ê espeeiaimente limitada e pode variar de 1 pg a 100 g, preferencíalmente 1 ng a 100 g do polipéptido por indivíduo, dependendo do tamanho, peso e espécie do ind i v) duo envo.lv 1 do. A invenção pode ser aplicada a qualquer vertebrado# uma vez que os sistemas imunalógicos dos vertebrados operam de maneira relacionada. Tipicamente, o vertebrada referido no presente contexto é um mamífero, ave, um réptil ou um peixe, È especialmente preferível que o vertebrado seja um humano, um animal doméstico {'como um cão ou um gato), um animal de criação (como um porco ou um cavalo) , um animal bovino, (como gado) ou aves (como como ave doméstica, ave de fazenda ou ave de caça). Quando o vertebrado é mn pássaro, é p r e £ e r e ne iaIraente uma galinha, um peru, um pato ou um ganso.

Exemplos de MRCs humanas (KLAs} que podem estar associadas a um epitepo de célula T particular na presente invenção incluem o seguinte; HLA-h. m « J1 | iitlfl* .» || lp||l!:&amp;. * oasii .:i||j |

01041$, A * 0106, A * 0107, A * 0108, A * 0109, A * 0110, A * 02010101, A * 02010102L, A * 020102, A * 020103, A * 020104, A * 020105, A * 020106, A * 020107, A * 020108, A * 020109, A * 020110, A * 020111, A * 0202, A * 020301, A * 020302, A * 0204, A * 0205, A * 020601, A * 020602, A *

020603, A * 0207, A * 0208, A * 0209, A * 0210, A * 02.11, A * 0212, A * 0213, A * 0214, A * 02Ί5Ν, A * 0216, A * 021701, A * 021702, A * 0218, A * 0219, A * 022001, A * 022002, A * 0221, A * 0222, A * 0224, A * 0225, A * 0226, A * 0227, A *

0228, A * 0229, A * 0230, A * 0231, A * 023214, A * 0233, A * 0234, A * 023501, A * 023502, A * 0236, A * 0237, A * 0238, A * 0239, A * 0240, A * 024.1, A * 0242, A * 0243N, A * 0244., A * 0245, A * 0246, A * 0247, A * 0248, A * 0249, A * 0.250, A * 0251, A * 0252, A * 0253N, A * 0254, A * 0255, A * 0256, A * 0257, A * 0258, A * 0259, A * 0260, A * 0261, A * 0262, A * 0263, A * 0264, A * 0265, A * 0266, A * 0267, A * 0268, A * 0269, Ά * 0270, A * 0271, A * 0272,A * 0273, A * 03010101,

A * Q301Q102N, A * 03010103, A * 030102, A * 030103, A * 0302, A ·* 0303N, A * 0304, A * 0305, A * 0306, A * 0307, A * 0308, A * 0309, A * 0310, A * 0311N, A * 0312, A * 0313, A * 0314, A * 110101, A * 110102, A * 1102, A * 1103, A * 1104, A * 1105, A * 1106, A * 1107, A * 1108, A * 1109, A * 1110, A * 1111, A * 1112, A * 1113, A * 1114, A * 1115, A * 1116, A * 1117, A * 1118, A * 1119, A * 2301, A * 2302, A *

2303, A * 2304, A * 2305, A * 2306, A * 23Q7N, A * 2308N, A

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* 2426, A * 2427, A * 2423, A * 2429, A * 2430, A * 2431, A * 2432, A * 2433, A * 2434, A * 2433, A * 2436N, A * 2437, A * 24 38, A * 24 39, A * 244GN, A * 24.41, A * 2442, A * 2443, A * 2444, A * 2445N,A * 2446, A * 250101, A * 250102, A * 2502, A * 2503, A * 2504, A * 2601, A * 2602, A * 2603, A * 2604, A * 2605, A * 2606, A * 2.60701, A * 260702, A * 2608, A + 2609, A * 2610, A * 2611N, A * 2612, A * 2613, A * 2614, A *' 2615, A * 2616, A * 2617, A * 2618, A * 2619, A * 2620,

A * 2621, A * 2622, A * 2623, A * 29010101, A * 29010102N, A * 290201, A * 290202, A * 290203, A * 2903, A * 2904, A * 2905, A * 2906, A * 2907, A * 2908N, A * 2909, A * 2910, A * 2911, A * 300101, A * 300102, A * 300201, A * 300202, A * 3003, A * 3004, A * 3006, A * 3007, A * 3008, A * 3009, A *

3010, A * 3011, A * 3012, A * 310102, A * 3102, A * 3103, A

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4 3110, A 4 3201, A * 3202, A * 3203, A * 3204, A * 3205, A * 3206, A * 3207, A * 3208, A 4 3301, A * 330301, A * 330302, A * 3304, A * 3305, A * 3306, A * 3307, A * 3401, A * 3402, A 4 3403, A * 34(34, A 4 3405, A * 3406, A 4 3601, A 4 3602, A * 3603, Δ 4 3604, A * 4301, A 4 6601, A * 6602, A 4 6603, A * 6604, A * 680101 , A. * 680102, A * 680103, A * 6802, A. * 680301, A * 680302, A * 6804, A * 6806, A * 6806, A * 6807, A * 6808, A * 6809, A * 6810, A * 6811N, A * 6812, A * 6813, A - 6814, A * 6815, A * 6816, A * 6817, A * 6318N, A * 6819, .ft. * 6820, A * 6821, A * 6822, A * 6823, A * 6824, A * 6825, A * 6826., A * 6827, A * 6901, A * 7401, A * 7402, A * 7403, A * 1:4:04,· ft. A: * 1¾.¾ A, * 34:0:7,· ft. * 14:0®, 'Ά, * 7409, a. om, a * mot,,: Ί * tiili!, S * O'tOi'O:!:;,: B * 07020¾. B * 070204, B * 0¥i%- B '* 07¾. B * 07¾ "1 * 0:70% :B &amp; 0701,:: S * 0:10:®.;,:· B * Oil®,: ft·

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Hm~S8B2~9 DRB2 * 0101, DB.B3 * 010101, DRB3 * 01010201, DRB3 * 01010202, DRB3 + 010103, DBB3 * 010104, DRB3 * 0102, BRB3 * 0103, DRB3 * 0104, DRB3 * 0105, DRB3 * 0106, DRB3 * 0107, DRB3 * 0108, ORB3 * 0.109, DRB3 * 0110, DRS3 * 0111, DRB3 * 0201, DRB3 * 020201, DRB3 * 020202, DRB3 * 020203, DRB3 * 020204, DRB3 * pill*. ll||||l|||!|||||||||l|......ilii;,: DRB3 "*'|f||||jJJ§|ll e.

Iiii * :ii|!|!|:liii| i||l|ill|li::,:l;8e *. iiii ©ill:* Diil.....M §216*, 111113: DRB3 * 0217, DR.B3 * 0.21.8, DRB3 * 0219, DKB3 * 030101, DS.B3 J3IIIÍ102:,.' DERR * :0:i©2:33|||||||| » »| ^Ίί:|||||1:01,,: DRSi * illlllllpM' -* iiiiotoi* ©l||||loiiti|iii,: BRlIlllliiiii.:, drb4 11111111111¾ Dili 0:1.0:104:,. :ll|| * iiii, :Dia4ll:|l|;l©:i:, DRBl * 0106, DRB4 * 0107, DEB4 * 020IN, DRB4 * 0301N, DRB5 * 010101, DRB5 * 010102, DRB5 * 0102, DRB5 * 0103, DRB5 * 0104, DRS5 ||||||® DRii· ;Η!:^* QXO©,. llllRgi:: ll|||||i|lllll||:*· 01 -11:., 8||5 t||fl|lj||||iÉÍ Dili * 0202, DR35 * 0203, DRB5 * 0204, DRB5 * 0205, DR36 * 0101, lllpisf ^ll|:||||||||l|||||||l :drí|P: |||l|||||||ii|||j[ moist, deb8 Ilf * Old, DRB9 * 0101. axA-EKiâi DQAl * 010101, DQAl * 010102, DQAl * 010201, DQAl * G102C2, DQAl * 0103, DQAl * 010401, DQAl * 010402, DQAl - 0105, DQAl * 0106, DQAl * 0107, DQAl * 0201, DQAl * 030101, DQAl * 0302, DQAl * 0303, DQAl * 040101, DQAl * 040102, DQAl * 0402, DQAl * 0403N, DQAl * 0404, .DQAl * 05Q101, DQAl * 050102, DQAl * 0502, DQAl * 0503, DQAl * 0504, DQAl * 0505, DQAl * 060101, DQAl * 060102, DQAl * 0602, HL&amp;-DQB1 DQB1 * 020101, DQBl * 020102, DQBl * 0202, DQB1 * 0203, DQBl * 030101, DQBl * 030102, DQBl * 030:201, DQBl * 030202, DQBl * 030302, DQBl * 030303, DQBl * 0304, DQBl * 030501, DQBl * 030502, DQBl * 030503, DQBl * 0306, DQBl * 030.7, DQBl * 0308, DQBl * 0309, DQBl * 0310, DQBl * 0311, DQBl * 0312, DQBl * 0313, DQBl * 0401, DQBl * 0402, DQBl * 050101, DQBl * 050102, DQBl * 050201, DQBl + 050202, DQBl * 050301, DQBl * 050302, DQBl * 0504, DQBl * 060101, DQBl * 060102, DQBl * 060103, DQBl * 0602, DQBl * 0603, DQBl * 060401, DQBl * 060402, DQBl * 060501, DQBl * 060502, DQBl * 0606, DQBl * 0607, DQBl * 0.608, DQBl * 0609, DQBl * 0610, DQBl * 061101, DQBl * 061102, DQBl * 0612, DQBl * 0613, DQBl * 0614, DQBl * 0615, DQBl * 0616, DQBl * 0617, DQBl * 06.18, DQBl * 0619, DQBl * 0620, DQBl * 0621, DQBl * 0622, DQBl * 0623, ΗΙιΆ-DPAl DPA1 * 010301, DPAl * 010302, DPAl * 010303, DPAl * 0104, DPAl * 0105, DPAl * 0106, DPAl * 0107, DPAl * 0108, DPAl * 020101, DPAl * 020102, DPAl * 020.103, DPAl * 020104, DPAl * 0.20105, DPAl * 020106, DPAl * 020201, DPAl * 020202, DPAl * 020203, DPAl * 0203, DPAl * 0301, DPAl * 0302, DPAl * 0303, DPAl * 0401.

BL&amp;-DPBX DPB1 * 010101, DPB1 * 010102, DPB1 * 010103, DPB1 * 0102, DPB1 * 020102, DPB1 * 020103, DPB1 * 020104, DPB1 * 020105, DFBI * 020105, DPB1 * 0202, DPB1 * 0203, DPB1 * 030101, DPBl lllilllllllll·. Bill ΙΙοιοι*. ie®i * wíxii*, .ιββιι|§:||11|||ι, illlillll llllllllllllii 411111¾ Bill. 4 iifi, Dial Ι|||||||||| 4 ||(1||| ΙΙΙΙΙΙ, ilPíliX.^ Iliil * littil*.. slBl * ||||| τι$$.* DFBi H 111¾ s«l * Dili * 111¾

D FBI * 1901, DPBl * 200101, DPBl # ::2ÉÍXlÉ:,l|ÍB * 2201, DPBl * 2301, DPBl * 2401, DPBl * 25.01, DPBl * 260101, ||;dpbi. -;2«i.©2|l i||i * ,2?0i::#; Mi. lem,|||!|!|!||||||||||!!!||| * 3001,, 'DPBl * 3101, DPBl *' -320:1:,, B.PS1 * §||11||ί|§^^ DPBl * 3501, DPBl * 3601, DPBl '* 370:1:,. ^llllllllllllii 3901, DPBl * 4001, DPBl * 416¾ BBSX- * |l|l(ll||l|ll| DPBl. 4i|||| ilililr 6:711::,. DPBl pfl::, i||||||||||||||||||||§

Jin.:,, liiiii iiiiii iPii. % i®!:*. Diii: * DPBl * 3501, DPBl * 5601, DPBl * 57 01, DPBl * 5801, DPBl * 5901, DPBl * 6001, DP31 * 61Q1N, DPBl * €201, DPBl * 6301, DPBl * 64Q1N, DPBl * 6501, DPBl + 660.1, DPBl * 6701, DPBl * 6801, DPBl * 6901, DPBl * 7001, DPBl * 7101, DPBl * 7201, DP31 * 7301, DPBl * 7401, DPBl * 7501, DPBl * 7601, DPBl * 7701, DPBl * 7801, DPBl * 7901, DPBl * 8001, DPBl * 8101, DPBl * 6201, DP.31 * 8301, DPBl * 8401, DPBl * 0501, DPBl * 8601, DPBl * 8701, DPBl * 8801, DPBl * 8901, DPBl * 9001, DPBl - 9101, DPBl * 9201, DPBl * 9301, DPBl * 3401, DPBl * 9501, DPBl * 3601, DPBl * 9701, DPBl * 9801, DPBl * 9901.

BXA-DMA DMA * 0101, DMA * 0102, DMA * 0103, DMA * 0104:.

HL&amp;-DMB DMB * 0101, DMB * 0102, DMB * 0103, DMB * 0104, DMB * 0105, DMB * 010: 6: .

HLA-D0A DOA * 010101, DOA * 0101020.1, DOA * 01010202, DOA * 01010203, DOA * 010103, DOA * 01010401, DOA * 010.10402, DOA * 010105.

HIA-DOB DOB * 01010101, DOB * 01010102, DOB * 010102, DOB * 010201, DOB * 010202, DOB * 0103, DOB * 01040101, DOB * 01040102.

MHG Classa I H-2Db, H-2Dd, R-2Dk, H-2Dq, H-2Kb, H-2Kd, H-2Kk, R-2'Ld, H-2M3f H-2Ad, H-2Ag7, H-2Ak, K2- Ab, H-2Ed, H-2Ek, H-2Bxk, H-2F, H~2l, H-2P, H~2R, H-2S, H-2Sxd, H-2T4., H-21J,

MHC ClmsíS® II I-Ad, I-Ad, I-Ag7, I-Ak, I-Ap, I-Aq, T-Ar, I-As, I-Au, I-Av, I-Ea, I-Eb, I” Ed, I-Ek, I“29, I-Eu, H-2Q, H-2Qa-2, H-2Qa- 2a, Qa~la, Qa-Ifc, A invenção não está limitada a essas moléculas de MHC e HLA, e pode ser adaptada a tais moléculas recen t emen t e descobertas, se desejado, simplesmente estabelecendo a reafcividade de substâncias tais como péptídos com as moléculas. Isso pode ser prontamente obtido usando técnicas conhecidas que são padrão no campo. Os aleios de HLA partleuIarmeute preferidos para utilização com a presente invenção incluem os seguintes*

HXA Classe I HLA A HLA B HLA Cw A * €802 B * 58ClCw * 1701 A * 6801 B * 570.1 Cw * 160:1 A * 6601 B * 5501Cw * 1502 A * 3303 B * 5201CW * 1402 111:::111111111: »> sisillllllllllllllll A * 3201 B * SOOlCw * 0802 A * 310102 B * 4901Cw * 0801 A * 3002 B * 45G1CV * 0704 A * 3001 B * 44Q3CW * 0703 A * 2902 B * 4402Cw >0702 A * 2608 B * 4101CW * 0701 A * 2601 B * 4002 Cw * 0602 A * 2501 B * 4001Cw * 0501 &amp; * 2 111 te * 'Moihm a 'itil i\ * mm ®: -* :35:01¾ * mm A, * 1101 B: * -3:1:01.¾ "0391:

A * 1:312: b * 11031«: *: Di.GI ::A: * Si®! S '* :»í^ ^ 0152 Λ * 0205 B * 2705 l.. * 'Ml 'te * IBti A * 110::1 B .:1:5:01 B *: 1402 b * ::1,1:91 B 1552 :B: * 0:1:01. b * mm B ·* 01:0:2 wm cl asa» n ΜΜΠΡΒ' ΙΒ10% 11 Bi®:' ::®®&amp;BE®:

B0B1 *- 11:01 DQAl * :0315¾¾ * 5504 001:1 WA DPBl *mmi DQAl * 0501DQB1 * 0603 DRBl * 1501 DPB1 :1001 Si&amp;i -* DAOl.Si® 1 .* R'KlDSBl, 1:¾¾ BEB3, * 0:0-01 BQA% '* :030:5 ©pi 500:1 DRBl * 2351 DPB1 * 030:1 OQRl * 0302 DQB1 * 0502 DRBl * 1103,

Dfll 0402 DQ&amp;X -* 0:312 M|B1: * 0512: 0001 * 1:201 DPBl 0:4:01 0®! * .5201.¾¾. <«í :5:402 .0RS1 * :11.0:4 DP BI * 0301 DQAl * 0104 DQB1 * 0303 DRBl * 1191 DPBl * 0201 DQAl * 01Q3DQB1 * 0302 DRBl * 0801 DPBl * 0101 DQAl * 01G2DQB1 * 0301 DRBl * 0701 DQAl :0:1:51.¾¾ # 02:5:2 "DRBl, * 000.4 ©|01 "*· 52:0:1 Dill *" 0:4:01

Mel: * :o:ioi :DRB1; Oll,|: DPJBl * Dies 33RB1 # 0101

Os aielos mais preferidos de acordo com a invenção são os seguintes: HLA-A * 0£01, HLA--A * 0206, HLA-A * 03Õ1, HLA.-A * 1101, HLA-A * 2402, HI, A-A * 3401, HLA-B * 0702, HLA-B * 0801, HLA- B * 1301, HLA-B * 27, BLA-B * 4002, HLA-B * 5101, HLA-Cw * 03, 11111111 :::1111 :ila-:dr|1:: :;:f: aiISiii ^::11;|||:|........:ηώα1:||βι1ι:: !!β!Ιΐ!^!ΐ!^ Ittllp®......... HIA-DQAl * 01, HIA-DQAl * 02, HIA-DQAl * 05 HLA-DQBl * 03, HLA-DQBl * 04, HLA-DQBl * 05, HLA-DQBl * 06 BLA-DPAl * 01, HIA-OPA1 * 02 HLA-DP5.1 * 02, HIA-DPB1 *04

As forma.® de reali zação da invenção inc.laaa: 1. Uma composição polipeptidica compreendendo am on male polipéptidos, pGlipéptidos esses que sâo imunogénicos num vertebrado de tal modo que provocam que o vertebrado produce células do sistema imunitário capazes de reconhecer pelo menos um epitopo de uma fração de proteína da saliva de artrópode, em que a fração de proteína saliva de artrópodes tem uma massa de <20kDa, e em que o polipéptido é selecionado independentemente de: [a) a.s sequências poiipeptídicas de SSQ ID 1-28, 33-39, 44 ou subsequêncías destas sequências, as sufosequências tendo !!!ÍlllÍiÍli|Mos^ bujlliáilpr

SSQ ID 1 HLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPP SSQ ID 2 PLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCL ID SEQ 3 KNVFFALLLWLVCCLVSVQGNEI SEQ ID 4 KLLVLLICLFFYTHTHCTTAYLWLÃMGV SEQ ID 5 FLKG3FPRFQMCVMLIGFFSSAKCL SEQ ID 6 NDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKA SEQ ID 7

SSQ ID 8 MKFAFAFVLIAJLFAVFAVSQALFQPEQAAA

SEQ ID 9 DGASAITKIVLELTPEQAAAV

SEQ ID 10TLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILA

SSQ ID 11GRVMCLLRLMSTLLVVLSTVGK SSQ ID 12LYSGYRIjLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTL·

SSQ ID 13MYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKD

SEQ ID 14AEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKR

SEQ ID lSALIGLLLCSVQSVTANDPVnALGACSGNLFGLLMTRL

SSQ ID 16SKIiFVLAFLCLALWWQSAPQYARGDVPT

SSQ ID 17SMLVAFATLSVALWWAIPANFNYGGGGGYFINGTGQ

SSQ IB 18IYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQ

SEQ ID 19EMKLAKV ALVTISLWFMA WTP YLVINFTGI

SSQ ID 20LLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLV

SEQ ID 21FYTCFLGTSSLAGFKKAVDYDELLKAG

SSQ ID 22 VLEVIjGFVEDNGELVFQELLGVLKKVDPDGD

SEQ ID 2 3 KLT PTV¥WLLCLTFVADALTIQEDRAQIAQQRIQQRYGVTVATT

SSQ ID 24SLSDYGLIE1KEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEV

SSQ ID 23 TYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLI SEQ: ID: 2€RlfWI»i:GPEll¥lII»

SEQ ID 27LLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRH1PQQIVKFV

SEQ ID 28VLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGPJRPYPSAVKMP

SSQ ID 29VLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYM

SSQ ID 30 VLHSMLWASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMIiKFVRLLP

SEQ ID 31RVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHET

SEQ ID 32ELQQALSSLLAGAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKI

SEQ ID 33KFYRLISTLLWWIAPRHQCSPFFFQYNRPYL SEQ ID 34 N¥VPDVSALEQDI1'EVDPETKEMLKHLDFNNIWQL SEQ ID 35QYSMECLEAAEPKYLDGLKTIADETAQC SEQ ID 36EyAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKL

SEQ

SEQ ID 38 ELEEARLVAEELEIERQQELDYI'JKRYLVGRLQAV SEQ ID 39 SYFLTVCLIALVQSETVQD

SEQ ID 40AMTNMLVGLTISIAYMFFLLYTPPTGRSS

SEQ ID 41 SFAWLLYGI ILRSEFLVVQNLMMjALSAVQIiSLPI I SEQ ID 42AFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSAL SEQ ID 43GLLCCCLAVLFFASPLTMDAHVIR SEQ ID 44LLIAMVLLPLLLLESWPYAAAEKVW b) As sequências definidas pelos seguintes resíduos de amínoácidos de unta proteína da saliva de artrópodes, ou suh-sequências destas sequências, cujas subsequênclas possuam 7 aminoácÍdos ou mais: residues 2-33 de> gi j 18389913 j gb j AAL68793-. 1 ] AF457563_1 proteína .hipotética 16 [Anopheles gambiae] resíduos 2-26 de> gi i 18389909 I gb { AAL6873’ 1 | AF4 5?561__1 proteína hipotética 14 [Anopheles gambiae]

Residues 2-23 de> gi | 18389907 | gb J: AAL68790.I ] AF45756Q__I proteína hipotética 13 [Anopheles gambiae] resíduos 10-36 de> gi j 18389903 j |h j AAL68788.1 ] AF457558_1 proteína hipotética 11 [Anopheles gambiae] resíduos 2-26 de> gi { 62546227 i gb j AAX8600Í 1 1 precursor de nip3„5 [Anopheles gambiae] resíduos 14-42 ¢1¾ gi j 18339899 | g.h i AAL68786.1 j AF45755€__1 proteína semelhante a glândula salivar f [Anopheles gatnbiae] resíduos 3-33 d@> çi I 18389911 ! gb i | AF4575621 proteína hipotética 15 [Anopheles gambiaej resíduos 1-30 de> gi | 62546225 I gb i AAX36004.1 J precursor de híp6.3 [Anopheles gambiae] resíduos ;3;4~5| » gi J €2546225 j qb | AAX86004.1 j precursor de hip6.3 [Anopheles gambiaej resíduos 38-70 de> gi j 17026153 | eaíb j CAD12038.1 | Proteína SecSl [Anopheles gambiae] resíduos 2-23 de> gi ! 6254 6223 | gb | precursor |||§ AAX86003.il hyp6.2 [Anopheles gambiae] resíduos 17-54 de> gi I 1838 9915 S gb i AAL68794.1 | AF457564 1 proteína hipotética 17 [.Anopheles gambíae] resíduos 57-93 de> gi 1 87080391 j gb | ABD18596.1 defensina [Anopheles gambiae] resíduos 22-51? de> gíl 18389901 j gb j AAL68787.1 j AF457557 1 proteína hipotética 10 [Anopheles gaitbiaej residues 7-43 de> gi í 183:89905 | gb i AAL68789.1 | AF457559__1 proteína hipotética 12 [Anopheles gambiae] resíduos 3-32 de> gi ! 4127344 | emb i CAA76832.1 i Proteína cE5 [Anopheles ganhiae] resíduos 3-40 de> gi. | 4210617 j emb ! CAA102 59.1 j Proteína SG2 [Anopheles gambiae] residues 9.1-12.1 dô> gi i 4 127309 i e.mfc ; CA&amp;7€82Q.l | proteins hipotética [Anopheles gambíae] resíduos €5-94 de> gi I 4379324 j emb i CAA?8825,1 | opsina [Anopheles gsrsbiae] resíduos 41 a 71 de> gi j 62546233 i gh ! AAX8S0G8.1 .........../[.IdsibblhA^ :gâ;tif§ifi:j resíduos 117-143 de> gí i 3378531 [ emb ! CAA03872.1 j Proteína D7r2 [Anopheles gambíae] resíduos 63-93 de> gij3378529 j emb | CAA03871,í i Proteína D?x3 [Anopheles gambíae] resíduos 23-67 ds> gi í 13389893 | gb j AAL68783.1 i AF457553__1 proteína semelhante à mucína [Anopheles gambíae] resíduos 43-80 de> gi. j 18389881 1 gb j AAL68777.1 i AF4 57Õ4 7_1 selenoproteína [Anopheles gambíae] resíduos 6-42 de> gi | 18389879 | gb { AAL68776.1 i AF4S'h4 6__l. Proteína, de 30 kDa [Anopheles gambles] resíduos 4-23 de> gí | 18378603 | gb I AAL68639.1 ; AF458G73__1 5 proteínas relacionadas com D7 [Anopheles §||3b;l:|:p|s:g resíduos 20-55 de> gí J 18389897 | gb | AAL6878S.1 j AF45?55S_JL glândula salivar tipo 1 proteína 4 [Anopheles gambíae] resíduos 59-95 de> gí ] 18389883 i gb j AAL68778.1 i AF457548 í prorema 1. relacionada ao antige.no 5 [Anopheles gambíae] resíduos 1-37 de> emb I CAC35S27.1 j Proteína gSGS [Anopheles resíduos 81-120 de> sp I Q9U9L1 j R81 7_&amp;N0SA 40S proteína ribossdmica SI7 resíduos 111 a 142 de> emb | proteína CAC35523»11 gSG7 [Anopheles gambiae] [tésMaof §é~W ;$|#*·· φ I .J»t4:llfidl I :AElPl|.0 difob: if iniciação da tradução 4C (IA) [Anopheles gambiae] resíduos I---2 3 de> emb i CAC35519.1 [ Proteína semelhante a gSG2 [Anopheles gambiae] resíduos 106-142 de> emb 1 GAC35451.1 1 proteína hipotética [Anopheles gambiae] resíduos 6-23 de> emb | CAC35524.1 ] Proteína D7r4 [Anopheles gambiae] resíduos 5-34 de> emb j proteína CAC35522«11 gSG6 [Anopheles gambíãe] {c) ou de sequências polípeptídicas com una homoiogia de Θ5% ou mais com uma ou mais das sequências em (a) ou (b) é contidas numa ou mais das seguintes bases de dados; GenBank, Protein Data Bank {PDB], SwissPro.t, Protein Information Besource (PIR), Protein Research Foundation (PRF), ou traduções de CDS destes.

[Il lima composição polipeptidica de acordo com a forma de realização lr cuja composição compreenda ainda uma ©u mais sequências selecionadas independentemente de; {a5 sequências polipeptídicas de SEQ ID 29-32 ou 40-43 ou sufosequências destas sequências, as subsequências tendo 7 aminoá © ido s o u. mal s;

SEQ ID 29VLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYM

SEQ ID 30 V LK SML VN AS LAEMVKE 3 YQT H GA DG PMWHMLK F V RL L P

SSQ ID 31RVRALRALLEILL0HQGEQNNDVYLIRLAHET SEQ ID 32fiLQQALS&amp;LLAGAGSGSCAEVFNAYLI?VHRKYlGVSRKl 111¾ f i: i||||f

SEQ ID 41SFAWLLYGlILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFII

SEQ ID 42 AFPFISGFLSCFMWLKYGVIiTEESTLILVNFIGSÃL SEQ ID 43GLLCCCLAVLFFASMMLAHVIR b) As sequências definidas pelas seguintes residues de aminoàeidos de uma proteína da saliva de artrópodes, ou subsequências destas sequências, cujas subsequências possuam 1 iiiiiiicibiddis ídli: iiiisd: resíduos 158-134 de> gií83016748jdbjjBAE53441.1! Qflei, [const ruçao sinté11oa | resíduos 37-76 d.e> gx ! 18383895 ; gb i AAL68784.1 í AF457554JL proteína semelhante a glândula salivar 1 [Anopheles gambiaej resíduos 191-222 de> g1j1S389895!gb!ARL68784.1!AF457554JL proteína semelhante a glândula salivar 1 [Anopheles gambiae] resíduos 113-149 de> gij 18389891 ígb|AAL68782.1iAF457552_Jl forma longa da proteína D7 [Anopheles gambiae] resíduos 70-104 de> ref{XP_001230998.1i ENSANGP00000014906 [Anopheles gambiae str. PES-P] resíduos 174-213 de> ref.1XP_316361.2| EMSâhGP00000Q129S4 [Anopheles gambiae str, ΡΕ8Ί] resíduos 41-80 de> ref.1XPJ314140.3! ENSA8GP00000015780 [Anopheles gambiae str, PEST j resíduos 126-153 de> ref!XP 314140,3! ENSANGP0QQ000157B3 [Anopheles gambiae str, pest]

{c) e de sequências polipeptidicas com uma homciogia de 85% cm mars com uma ou mais das sequências em la) bu :fb) d; contidas numa ou maia das seguintes bases de dados; GenBank, Protein Data Bank (PDB), SwissProt, Protein Information Resource (PIR), Protein Research Foundation dU traduções de CDS destes. 3. Uma composição polipeptidica de acordo com a forma de realização 1 ou forma de realização 2, cuja composição

a 12 polipêptidos, ou mais pr efer í veImen te de 2-6 polipêptidos, e/ou em que o um ou mais polipêptidos são epitopos de l.inf.óeitos T citotòxieos (CTL) e/ou um. ou mais polipêptidos são epitopos de lín.fóeifos T auxiliares (Th) e/ou um ou mais polipêptidos são epitopos de linfócitos B e/ou em que o um ou mais polipêptidos são imunogénicos contra uma pluralidade de proteínas salivares de artrópodes, e/ou em que a composição compreende 2, 3, 4, 5, 6 ou mais epitopos e/ou em que a fração proteica de saliva de artrópodes é uma fração proteica de saliva de mosquito de qualquer espécie de mosquito, de preferência de anófeles gambiae, e/ou. composição compreende ainda uma ou mais sequências adicionais de uma proteína salivar de artrópodes e/ou em que a subsequência compreende 8, 9, 10 ou 11 aminoácidos ou mais e/ou em que cada pclipéptido compreende nào mais de 100 aminoácidos.,- preferencialmente de 15 a 75- resíduos de aminoácidos, e mais preferencialmente de 17 a 55 resíduos da aminoácidos, e/ou em que a composição consiste subsfcancia.lm.ente em dois ou mais polipêptidos possuindo uma sequência a partir das sequências SEQ ID 1-44, e/ou em que estão presentes todos os polipéptidos possuindo sequências cie SSQ ID 1-6 e/ou em que estão presentes todos os polipéptidos possuindo sequências de SEQ ID 20, 28, 30-32 e 35. 4» Uma composição polípeptídica, como definido em. qualquer das formas de realização 1-3 para utilização era medicina e/ ou para uso veterinário. 5. Um método para produzir uma composição polípeptídica como definido em qualquer das formas de realização 1-4, cujo métodp compreende misturar ©u combinar um ou maia polipéptidos como definido em qualquer das formas de realização 1-4 com um ou ma is polipéptidos adicionais como definido em qualquer uma das formas de realização '1-4 e/ou com um ou mais componentes adicionais, tais como um vficuldií;:· um excipient©, um adjuvante, um tampão ou um estabilizador. 6. Uma construção polípeptídica, cuja construção compreende uma composição polípeptídica como definida em qualquer das formas de realização 1-4 e um transportador. 7. um método para produzir uma construção polípeptídica como definido na forma de realização 6, cujo método compreende ligar, combinar ou misturar uma composição poiipeptidica scomo definida em qualquer das formas de realização 1-4 com o transporta dor. 9. Uma construção polípeptídica ou um método de acordo com a forma de realização 6 ou a forma de realização 1, em que o transportador compreende um adjuvante e/ou um excípiente. 9. Uma construção de ácido nuçleico compreendendo um ou mais ácidos nscieicos compreendendo a sequência de codificação de um ou mais polipéptidos na composição de polipéptido como definido em qualquer das formas de realização i-% preferencíalmente em que a construção de ácido nucleíco ê uma construção de ADN ou ARN. 10. Uma construção de ácido nucleico de acordo com a forma de realização 9, que compreende um plasmídeo ou um vírus recombi nante. 11, Ora medicamento ou composição de vacina contra uma doença suportada por artrópodes, compreendendo uma composição polipeptidica, construção polipeptidica, ou construção de ácido nudeico como definido em qualquer das formas de realização 1-4, 6 e 8-10 e, opcionalmente, um excipiente e/ ou adjuvante apropriado. 12, Um método para produzir uru medicamento ou composição de vacina como definido na forma de realização 11, cujo método compreende ligar, pombfnar ou misturar uma composição polipeptidica, uma construção polipeptidica e/ou uma construção de ácido nuclei cg, como -definido em qualquer uma das formas de realização .1--4, 6 © 8-10 com um. excipiente e/ ou adjuvante apropriado, 13, Utilização de uma composição polipeptidica, uma construção polipeptidica, uma construção de ácido nuç.Ieiço ou um medicamento ou composição de vacina como definido em. qualquer das formas de realização 1-4, 6 e 8---10 no fabrico de um medicamento ou vacina, eficaz na tratamento ou prevenção de uma doença transmitida por artrópodes,; preferivelmente, em que a doença transmitida por artrópodes é uma doença num vertebrado, preferencialmesfee* era que o vertebrado é selecionado de um mamífero, uma ave, um réptil e um peixe e, de um modo preferido, de um humano, um animal doméstico ou um animai de criação, um bovino

Ipu; Ultã:: É1PÍP· 14, Uma composição polipeptidica, construção polipeptídica, construção de ácido nucleico, método, medicamento, vacina ou uso de. acordo com crualquar modalidade anterior, em que o artrópode é ura artrópode heraatófaqo, preferenciaImente, em. que o artrópode hematóf&amp;go ê selecionado de mosquitos, carrapatos, flefootomíneos, ácaros e pulgas, mais preferencialmente em que o artrópode é selecionado de Anopheles sp., Aedes sp., Culex sp.r Mansonia sp., Chrysops sp,, Simula uai sp.# Triatom.a sp,, Khodnius so., ? a n s t r ongy I us sp., Gloss in a sp. , Tafoanus sp,,· Phlebctomus sp,, Lutzomyia so, f Pedicuius sp., Oraithodoros sp., Ixodes sp., Pediculus sp. , Pulex sp., Hemagogous spegazzani., Ochlerotatus sp. £ Coqui1leti idla sp, 15, Urn medicamento, composição de váciná, método ou uso de acordo com qualquer das formas de realização 12-14, em que a doença transmitida por artrópodes é uma doença selecionada de malária, filar lose, tripanossomíase, .leishmaniose, cncccerccse, dengue, doença de Lyme, tularemia, febre reincidente. , tifo, peste, febre amarela, febre do vale do ri.ft e encefalifce, como a encef.a.1 íte de St. Louis, febre do Nilo Ocidental, eneefaiite equina do leste, eneefsLite de La Crosse e encefalite equina do leste. Ά invenção será agora descrita apenas a titulo de exemplo, com. referência às seguintes fornas de realização específicas „

S3EgȮI<0S

Wxmpmxmç&amp;&amp; d® gxuçôma protmicns salivar·» d® arfcrdpod·»

De modo a determinar o efeito de sequências especificas da invenção, a sua. imunogenícidade pode ser testada contra várias frações proteicas de saliva de artrópodes. As sequências que causam um vertebrado a produzir células do sistema imunitário que reconhecem, pelo menos um. epitopo sm frações específicas de proteína de saliva são úteis nas vacinas da presente invenção.

As frações de proteína de saliva podem ser facilmente isoladas utilizando técnicas laboratoriais padrão, que são bem. conhecidas do perito. Podèm ser utilizadas quaisquer frações proteicas de saliva de artrópodes, uma vez que os inventores determinaram que é a massa da fração proteica que é importante. As frações de massa 40kBa ou menos, 30kDa ou menos, preferivelmente de 20-40.kDa, e maia prefe.rencialm.ente 20 kDa ou menos, são particularmente úteis. O seguinte protocolo é fornecido para exemplificar a fração proteica contra a qual as sequências candidatas podem ser testadas. Utiliza saliva de mosquitos snôfeles gambiae, embora qualquer saliva de artrópodes possa ser empregue.

Pares de glândulas salivares {PKC) de Anopheles gambiae foram dissecados de colónias de mosquitos fêmeas, Quinze SGPs foram recolhidos em 20 de PBS e Usados por adição de 5 de tampão de amostra SDS-PAGE 5.x contendo 0,25% de 2-E-ME, Após agitação e fervura durante 5 mín, a mistura de proteína foi carregada num gel Tris-Glicina com gradiente da 4-20% tíovex (INV-ITROGEN) « O gal foi então corado com prata e fotografado (ver Figura 9),

As se.tas tracejadas indicam a posição dos pontos de corte para seleção das frações de SGP que podem ser usadas para imunização e estudo (ie <20 kDa, 20-40 kDa, 40-80 kDa e> 80 kDa}, A seta sólida indiaa a posição do ponto de corte para a seleção de frações SGP <30 kDa e> 30 kDa.

Idrnnt±£±cmndm anoafcras dm proteíxsa candidatas da saliva do momqal to

Tomando uma abordagem semelhante ao protocolo exemplificative descrito acima, várias amostras de proteína saliva foram preparadas, para estudo.

As glândulas salivares (GE) foram dissecadas de fêmeas de mosquitos Anopheles gambiae e armazenadas em PBS a ~70°C até o uso.

Para a análise do gel, as SG foram Usadas por congelação-descongelação, foi adicionado tampão de amostra. Novex® IEF pH 3-10 (Xnvitrogen) e o material resultante foi analisado num Gel IEF Novex® (Invitrogen). O gel foi então fixado com 12% de TCA, lavado três vezes em égua e pgradq corn Coraassie Blue. O gel resultante é mostrado na Figura 1.:·#

Após coloração e descoloração, o gel 1E? fpi incubado eia etanol a 20% durante 10 minutos e a tira de fiei contendo a faixa com as proteínas SG foi cortada. Esta tira de gel foi equilibrada durante 5 min era 2x tampão de amostra SDS-P&amp;GE contendo 20% de etanol, enxaguada, duas 'Vesas £íé.: iimpld iíi amostra SDS-PAGE e carregada no poço individual de um Gel Tris-Glicina 4-20% Novex (Invitrogen). O gel resultante | mostrado na Figura 2. O gel contende as proteínas SG separadas foi finalmente corado utilizando o estojo de coloração Froteosilver (Sigmaj íd.ei acordo com as instruções do fabricante. :;ip gel·* quatros grupos :#a proteínas (compostos despgnsdbP 1, 2, 3 e 4) foram identificados para análise:

Composto 1 Fraçêo de Proteína da Glândula Salivar <20 kDa

Composto 2 Fração Sd Ρηφψτηφ da Glândula Salivar 20 kDa <M <40 kDa

Composto 3 Fração φ proteína da Glândula Salivar 40 kEa <X < 80 kDa

Composto 4 Fração de Proteína das Glândulas Salivares> 80 m&amp;

Objetivos: 1, (A) Estabelecer; a eficácia dos candidatos na proteção de animaia contra o desafio pela picada: de mosquitos infetados (por exemplo, Anopheles gambiae infetado por Plasmodium yoelii nigeriensis) (3) Estabelecer o nível de reatividade cruzada da resposta ant imicrotiana induzida por candidatos em diferentes espécies de mosquitos (por exemplo, Anopheles gambiae e Anopheles Stephens!). (C) Estabelecer a eficácia dos candidatos na prevenção da infeção de mosquitos (Anopheles gambiae e Anopheles Stephens!) por Plàsiaodiu rder camundongos imunizados e infetados.

Compostos Candidatos

Os compostos selecionados foram os identificados acima: Composto 1 Fração de Proteína da Glândula Salivar <20 kDa Composto 2 Fração de Proteína da Glândula Salivar 20 kDa < X &amp;'&amp;&amp; irj'm N. Jx&amp;iCl

Composto. 3 Fração cie Proteína da Glândula Salivar 40 kDa <X <80 kDa

Composto 4 Fração da Proteína das Glândulas Salivares > 80 Mstirpm &amp; número do animais envolvidos:

Ratinhos CD1 são usados. Havia cinco grupos experimentais Cl, 2, 3, 4 e 5) sendo o grupo 1 o grupo controlo negativo e os grupos 2-5 os grupos teste, cada grupo com nove (9) ianimai'S:.. .........

Protocolo osspexímsnbal

Dia 1: 4 grupos foram imunizados (grupos 2, 3, 4 e 5) de 3 murganhos CD1 cada (N - 4 x 9 36) com doses subcutâneas de compostos de vacina candidatos (Grupo 2 com composto 1, Grupo 3 com composto 2, e assim por diante),

Dia. 14: Todos os animais foram, potênciados com as mesmas doses de candidatos a candidatos a vacina vacinai {Grupo 2 com composto 1, Grupo 3 com composto 2 e assim por diante) <,

Dia 21: Todos os animais foram testados. As amostras foram armazenadas congeladas (-20 0 C) até a coleta. Cada grupo foi dividido em subgrupos adicionais: A 5 animais, B - 4 animais.

Grupe IA “ 5 animaiaGrupo 1B - 4 animais Grupo 2A ~ i$: animaisGrupa 2B; 4 animais

Grupo 3A - 5 animaisGrupo 3B - 4 animais

Grup.o:: 4A ·- S animai&amp;Grupo 4B- - 4 animais

Grupo 5A - S animais Grupo 5B - 4 animais

Dia 20; Todos os animais dos subgrupos A foram desafiados por picada de 5-9 mosquitos infetadas por exemplo. Anopheles gambiae infetado por Plasmodium yoelíi nigeri.ensis) n.a área da barriga. Todos os animais foram mantidos até a parasitemia ser estabelecida pela. primeira vez ou por um per iodo máximo d© 6 semanas apôs o desafio com mosquitos infetados. Todos os animais foram mortos por exsanguinaçã© e as amostras de soro foram armazenadas congeladas (--2ÔeC) até â recolha,

Bmbgxwpos B

Dia 28: Todos os animais dos subgrupos B foram usados para alimentar (na área da barriga) o seguinte número de mosquitos frescos {não: infetados.) i 5-10 Anopheles gambiae E 5-10 Anopheles Stephensi Todos estes mosquitos foram testados para: 1. Sobrevivência ao iongo de um período de 8 dias, 2» Samero de ovos postos. 3» Número de ovos produzidos. 4. Número de adultos (Fl) produzidos a partir dos ovos postos.

Lia 32: Todos os animais dos subgrupos B foram infetados com Plasmodium yoelií nigeriensis por inoculação direta de parasitas IV.

Dia 32: Uma vez que a infeção ativa com aialária ipi identificada em todos (ou pelo menos 75%} animais do Grupo B, todos os an ima .i.s infetados foram usados para alimentar (na área da barriga) grandes números (> 10 por ratinhos) de ambos Anopheles gamblee frescos C fresco Anopheles

Stephensi,

Todos estes mosquitos foram testados para: 1« Sobrevivência ao longo de ura período de 8 dias. 2. Número de mosquitos com parasitas da malársLa em suas glândulas salivares entre aqueles que sobreviveram: ao period© de incubação necessário (17 dias). 3. Número de ovos postos. 4, Número de ovos produzidos, 5, Número de adultos (Fl) produzido» a partir dos ©vos postos.

Apôs a alimentação do mosquito, todos os animais foram mortos por exsanguinação e as amostras de soro foram armazenadas congeladas (-2€°C} até à recolha.

Qualquer volume do composto experimental remanescente no final do estudo foi armazenado congelado ("20 * C) até à li;!:,:.

M&amp;mslt&amp;doB

Representações gráficas dos resultados dos experimentos são mostradas nas Figuras 3A-3I e 4., Q priraei.ro conjunto de Figuras (Figuras 3x) mostra dados sobre o efeito da vacina na fecundidade dos mosquitos, para cada um dos Grupos 1-5^ do seguinte modo: 3A; Por cento que alimentou 33: Não hâ ovos produzidos 3C:N'ão há ovos colocados 3D: Taxa dé eclosão de por cento 3.EtNão há larvas 3F; Não quer dizer pupas 3G:Por cento de pupação 3H:Por cento de emergência. 31; N â o s .i. gn i f i c a a d u 11 o s

Os dados numéricos que sustentam. cada uma dessas representações gráficas AI são estabelecidos respetivamente (coluna A para a Figura 3A e assim por diante) na Tabela 2 abaixo:

Tabela 2: Dados par® as Figuras 3A-3

Os dados apresentados nas Tabelas 3A-3I abaixo mostram os valores p obtidos utilizando ama análise estatistipa não paramétrica de Mann-Whitney dos dados acima» Τ'13¾ 3^b: 300 ^

Wf· flft XWt«Ol» il '.jâtj$. 'f\ Q V 8 . -Jpfa ΠΙΛ j«ÍO> g» ΊΕ3' ' JBKr <Mft.lPÒi »ix Α*Α**#Ιΰ jj»^t . j^B·' ^ Ψ"

Φ«Ϊ«ι ιμ Ϊ <« _1 -wryfiJTi.'^'·' »,« «»« « Mttt.M, iStib.wi· viS -fW.- \A»n«B. « wv «n W. <«l> χ« Αλ <»ίχιΙΙ m> wi>S«ai «· l^lluD^X^. â ffiSÇ&amp;Xâ ρφ OI^OS I^-sâ© §

T&amp;b&amp;X&amp; 3C ™ do M p^;ssi m,édxa. owob colocados

Tabela 3D - valores de P para a bassa do % da oves «sfeooados

Tabela 3E ™ Valores do P para seádia asas. larvas

Tabela 3F ™ Valores de P para saédiaa son popas

Tabela 3G ~ Valores de P para percaatagass de popação

Tabela 3H *» *1® T para &amp; percentual de es&amp;ergêneia

Tabela 31 - Valoras da V para médáa ss® adultos

M. Figura 4 mostra a percentagem de sobrevivência dos mosquitos em cada um dos cinco grupos, durante um período de "M cilas» 0 número de mosquitos em cada grupo no dia zero foi o ,se§aínfe:p

Os dados relevantes para a representação gráfica da Figura 4 são apresentados na Tabela 4 abaixoϊ

Tabela 4l: ©«dpa para a; Figera 4

Os dados apresentados na Tabela 5 (1)-5 (viii) abaixo mostram os valores de p obtidos utilizando uma análise estatística não paramétrica de Marm-Whitney dos dados acima.

Tabela. 5 (ί·ί ~ valoras p para p ¢11¾ 1

Tabela 5 (x) - valoras ds P para o dia 1

Tabada S (ii) - valcsraa da F p&amp;ra o dia 2

Cabala 5 £i.ii) — valoeaa d» P para m. dia 3

Rabeia 5 {ivj ~ valoras da p para o dia 4

íabbii I (v) ” smidrb®. de j* para o dia S

Tabela S (vi) ™ valorea de P para o dia 6

Tabela 5 (vil) - ¥alorea da £? para o dia 1

Tabela 5 (viài) ~ Vaiares de P para © dia 8

ZXP^RJJWCXJ. 2; Indução da prodtaçâ© d® cd toqulnus pala Imunização da eastigenos polippptidicoa P®pt£d®ou &amp; pzOtoxzms toco,mbln&amp;ntos A paptixi dít i;ipdrÍ||HpÍã, 1*. a, :i'ra;|Sd :sa:ia ρϊιορρ ,:£ρί pspudãdã «inda*: 'pátaí iddntlfic® "pddipfôpl-idêpi para que pospam ser empregados em vacinas. Ά utilidade aos péptídos da presente invenção foi determinada utiiirando o seguinte protocolo.

Immi±%a.çÕms

Tddss -&amp;é pdiipiptiiÉd»: #s patuÉp1' ippépâ^sgÉdã·: de· ddti;iÉdi;d|: a sintetirados por química Fmoc.

Ratinhes C57BL/6 com seis a dez semanas de idade são imunizados suhcu t ane&amp;me n t e com uma dose de 200 de uma preparação de antigênio por ratinho. No grupo de teste, cada dose da preparação de antígeno contém uma mistura equimolar dos peptideos (10 nmol cada) preparados em adjuvante (Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. No grupo de controlo * cada dose da preparação de antigênio contém uma dose equivalente de um polipéptido não relevante preparado &amp;ί|ί!ϊ|β bom. as i,nÍÍ;ÍhÇÍ:dÍllÍÍiP^ i^abridànteillll (preparação de NRP). ;Nd:i|lÍÍÉ|ll|;li: pditilllititãçãd * todos :ρ||ϊ:ίί||^ ' umãiiiii imunização de reforço utilizando as mesmas doses e via de entrega que originalmente.

Finalmente, no dia 20 todos ob animais são abatidos e os seus baços e soros são recolhidos. ΜΙΙίΣΒΆ de ci, toguiua

Baços de ratinho pertencentes ao mearoo grupo experimental foram reunidas* suavemente pressionado através de coadores de células e células vermelhas do sangue removido por tratamento com tampo de lisa de células vermelhas (nove partes da 0, 16 M NH4CI a uma parta de Q, 17 M Tris, pH 7*2} . As suspensões de asplenócítos de cada grupo experimental são plaqueadas em places de 96 poços em quadruplicado a uma densidade de 4 x 1G5 células/poço em meio IMDM (Invitrogen) suplementado com 0.,02 tbM de β-mercaptoetanol (Sigma)* 50 ID/ 50 mg/mL de penicilina/estreptomicina (Sigma) e 10% de FCS CSigma) e contendo cada um dos antigénios polipeptídicos em estudo (2 pH).. Apôs 3 dias de incubação a 37*€* o sobrenadante ê recolhido e analisado quanto a IFN- e IL-4 por ELISA de citoquina em sanduíche de acordo com o protocolo do fabricante (Pharmingen), Os limites de deteção mats baixos para o ensaio são 9*77 pg/ml para 11-4 e 39., 06 pg/inl para IFN-yu ELTSA *ap*cí£±co àm XgQ2&amp;

As mícroplacas ELISA tíe 96 poções (Becton-Dickinson) são revestidas com 2 μΜ de cada poiipéptido experimental em PBS. Após uma noite a incubação a 4 “C, as placas são lavadas duas veze's em PBST (PBS contendo 0,05% de Tween 20} e os poços são bloqueados com BSA á 1% da Fração V em PBST, Após 1 h de incubação, as placas sào lavadas três vezes em PBST e uma gama de diluições de soros de teste e controlo em PBST adicionados aos poços. Apôs 2 h de incubação, as placas são lavadas seis vezes em PBST e os soros primários anti~lg2a de ratinhe são adicionados a todos os poços. Apôs 1 h de incubação# as placas são lavadas seis vezes em PBST e os soros anti-primário anti-Ig2 de ratinho adicionados a todos os poços, Após 1 h de incubação# as placas são lavadas sete vezes com substrato PBST e TMB em todos os poços. Apôs SOSO minutos de incubação, a reação, é parada com HCI e a absorvência a 45 ô nm é lidai

Jamlise astatáatica

Diferenças estatisticamente significativas na resposta do IFK-y a diferentes sntigenoa entre os grupos teste e controle são estabelecidas através da análise não-paramétrica de

If ;|láni^iif|:|||:: dii|||H||iÍI:d As l|Íli|ii:ihçi|(|féio: cpnéldéildsã' estatisticamente significativas se o valor de p for inferior ff ;áfS':é:#;iÉ|í|f|S:::. EXPERIÊNCIA .3 - Avmll&amp;çâo da reáfposta .iaaita a vários pollptstp tEámos;

Os seguintes polípêptidos foram investigados; SEQ ID 20# SEQ ID 28, SEQ ID 30, SEQ ID 31, SEQ ID 32 e SEQ ID 35, Estes péptidos foram misturados era conjunto para formar uma vacina, candidata para teste (chamada mistura de péptidos ASS). Q tipo e o nivél da resposta imunológica induzida pela vacinação com esses péptideos foram avaliados de acordo com o protocolo mostrado abaixo:

Dia 1: imunizar 2 grupos de 4 murganhos GDI, cada uni com as seguintes doses subcutâneas de produtos vacinais candidatos:

Mistura de péptidos não relevantes ÍMRP) viu nmol cada) + ISA-ol m Mistura de péptidos AGS (10 nmol cada) + ISA-51 * Dia, i|i Aumente todos os animais com as mesmas doses de produtos candidatos para vacinas, # Dia 21: Dangrar todos os animais. Colnex ds inoiMddãlmente e testar a reatividade Má- TFN-gama para: és? :;liptido M&amp;B individuais (2 cada) o Mistura AGi (0,5 pM e 2 pM cada) o Con A (7,5 ug/ral) o Em branco Pós-Dia 21: Testar todos os soros quanto a reatividade contra péptidos AGS. M&amp;snlt&amp;éos A prcaução de TFN-gama apôs estimulação de i|;Í horas in vitro com os antlgen.es é indicada no gráfico da Figura 5.

As respostas de IFN-gama às SEQ ID 28, SEQ ID 30 e SEQ ID 35, hera como à prepax'ação d© mistura d© AGS:, são estatisticamente significatívas (p <0,05). 3F.Q IS JO, SEQ TD 3'i :e ':§Εξ§ ID 22 énduJíem: uma. resposta·: mais ^elevada: nos animais :imunizados com: mistura AGS, mas: eles também parecem ser estimuladores, de um modo não especifico,:: aos esplenccitcs de ratinhos imunizados com mistura NRP. A resposta total de Igi he Sofb aos istigénios indicados itd grifico: da (Figura.. 6. :,&amp;s respostas de: .¾ total às 55EQ TD: 2Φ e SEQ ID 30 si© estaMstioamenfeeí sigsifícativas: |;p. EXPERIÊNCIA 4 ~ Estudo tâe d&amp;s&amp;fio arsds újzmnist&amp;aão mMmm d© péptidos AGS;

Pc ra. fepillf a caparχα-id·» da preparação de mistura de AGS para conferir proteção contra: m ,|n:lgg;|d :;patsiarai did malirlar camundongos GDI foram imunizados e desafiados dô acordo com o protocolo abaixo;

Bia i* T»ste .iaíiirar todos m eiaaláv Guatdd at amostras para análise peaterior.

Dia ít Imunizar 2 (dois) grupos de 8 murganhos CDl, cada tm com as seguintes doses subcutâneas de produtos vacinais candidates! é Mistura de péptidos não relevantes {NRP} |i# nitiol cada) í ISA-5.1 :s Mistura de péptidos AGS (10 nmol cada) +

Dia 1$ liltl sangrar todos os animais. Guarde m amostras psiâ análisp; posterior., Bíd 14:í Aumente; da animais com as mesmas doses de produtos candidatos para vacinas*

Dia 21; Teste sangrar todos os ihiiiâis. Guarde as amostrai para análise posterior.

Dia 2iií Todos os animais slo desafiados pela· picada de 8 mosquitos inf etados (Aaopfieies gamMae infetados por PiasPôdEísai yoelii. nigeriensis) na área dá barriga.. Todos os animais são mantidos até que a parasitemia seja estabelecida, pela, primeira vez ou por » period® máximo de 6 semanas após o desafio com mosquitos infetados.

Dia 70 (max) : Sangrar todos os animais.

Me&amp;ult&amp;doa ft resposta total da ig no soro ao AG$----mix no dia 21 é indicada no gráfico da Figura 7,

Um animal no grupo imunizado com AGS~mix apresentou uma resposta Total Ig s ig n í f i cati vament e menor do que os restantes animais do grupo {<50% da resposta total média de Ig n© grupo de- mistura de ASS).

So dia do desafio, um animal no grupo imunizado com HSF-mix e dois animais no grupo imunizado com AGS-mix. não puderam ser desafiados devido a uma escassez de mosquitos infeciosos.

Dos animais que foram desafiados, aqueles no grupo imunizado com AGS-~mix mostraram uma taxa de sobrevivência aumentada do que aqueles no grupo imunizado comi NRP-mix de controlo {ver Figura 8} . O único animal que morreu no grupo imunizado cora AGS-mlx foi o mesmo que não conseguiu desenvolver uma forte resposta de anticorpos à preparação de AGS,

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

PXifíp Pé^Ksf UOi&amp;sO -e^0«iiiíct#5 •sno/ P40013P.PD0 :p1#p «0r/ÉP:âSiSg#S24:: <-i4'l* 2002-02 05 < ·50'> G8 5?'! 7854.3 *35Ío:2SO7aQ043 '*iss>i:3* ΐΜχορ Psien-in rotoroo S.' <g:ií*í32 <012> pr; 22Í35 Μί?®ί0Γ?53όόβε« <220> «30ÕP;:1;

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...... í «212> PRT ........ Α213τ Artificia! sequence *220*

Ag23* immunogenic pclypepticSe Í í *40G> 12S

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«21Õ> 128 *2 1 i» 28 <212> PRT <213> Artificia! sequence égfâi* Immuaogenic pgi^pepUcte :<4S0> 123

Val lie Gly Levs Leu Cvs Cys Cys Ley Ala Val Lee Phe She Ala Set i.................;§. " ..... ia # f Pro Leu Thr Met, Leu Ala Hi8 Val lie Arg Thr Glr« 20 25 «210» :2'T> «244* 30 > .«242». fftt: «34S* :MSCiSf: SSSi««fSCe <220» <223» lmmonogefito pciypepticie :» «40Q> 123

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115 120 125 I

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Thr Leu Ala Leu He Gly Lee Leu Leu Cys Ser Val Glu: Ser Val Thr· 145 158 155 IW\.

Ala Asn Asp Pro Val Asp Ala Leu Gly Al a Cys Ser Gly Asn Leu Phe I 158 170 175 |

Gly Leu Leu Met Hr Arg Leu Ser Lys Leu Phe Val Leu Ala Phe LeuI 188 185 130 |

Cys Leu Ala Leu Val Val Val Val Gin Ser Ala Pro Gin Tyr Ala Args 135 208 205 j:

Gly Asp Val Pro Thr Leu Leu Pro Ala Lys Val He Pro Asp Lys Thr 218 215 220

Ala Ala Tyr Val Ala Tyr Gly Gly Gin Glu Thr Lau Val Glu His Val 225 230 23S 240;

Glu Val Lau Val Arg Syr Phe Val Val Ha Ala Leu He Cys Pro Leu; 2:45: 250 255 XXe lie Val Glu Thr Leu Ala Val Val Leu Law 'Shr Pro Ala Lay Gin 2SO 205 270

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Gly Arg tie Arg pro Tyr Pro Ser Ala Val Ly® Met Pro Val Leu His 250 295 300

Ser Met Ley Val Asn Ala Ser Lea Ala Glu Met Val Lys Glu Ser Tyr 305 310 315 320

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Val Arg Leu Leu Pro Arg Val Arg Ala Ley Arg Ala Lou Leu Glu Thr 340 345 350

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Leu Ala His Stu Thr Glu Leu Sin Gin Ala Leu Ser Ser Leu Asn Ala 370 375: 330

Gly Sex' Gly Ser Cys Ala Glu Val Phe Asa Ale Tyr Leu Pro Val Hi® 385 300 335 400

Asn Lys Tyr lie Gly vai Ser Arg Lys lie Sin Tyr Ser Men Glu Cys 405 410 415

Leu Glu Ala Ala Glu Pro Lys Tyr Leu Asp Gly Leu Lys Thr Leu Ala 420 425 430

Asp Glu Thr Ala Gin Cys Ser Phe Ala Trp Leu Leu Tyr Gly tie lie 435 440 445

Leu Arg Ser Asn Phe Leu Val Val Gin Asn Leu Met. Aia Leu Ala Leu 450 455 460

Ser Ala Val Sin Leu Ser Leu Phe tie tie Ala Phe Pro Phe tie Ser 465 470 475 480 :v:v:v:v:Gly.:...Phe: Lee Ser Cya Phe Met. Trp Leu Lys Tyr Sly Val Lea Thr Glu ................................................485.................................................430.................................................AM............

Slv, Ser Thr Seu lie I<eu Vai Asn VOe Tie sly Ser Ala Leu 500 SOS 510 <2’>0> 132 mtmèm <M05 P®j <2:íl» segtiienitíS: <22i}> &amp;â» ímawsi®ffef^ <400:·' i;>:? KA.ís Leu Thr Leu Phe Thr Vai Ala Vai Leu Leu Leu Ala Ala Ala Ale 1 5 XO 15

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Leu Ser Phe Ser Arg Ser Asp Cys Léu Lys Aan Vai phe Phe Ala Leu 50 55 60

Leu Leu Vai Vai Leu Vai Cys Cys Lsu Vai Ser Vai Glu Gly Asa Glu

05 70 75 “ SQ

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Ala Leu X-e» Gly Leu Cys Cys Pro Trp lie Agp leu Ala A.la Ala Asp 115 120 1.25

Leu Pro Met. Arg Arg His Ala Lys Ala Aso Gly Ala Ser Ala lie Thr 130 135 140

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Phe Xie Phe Le» Vai Cys Cya Glu Tie Pro Leu Phe Gly .11® Met Ser 165 ' 170 175

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Us« AJ» Ays V*A Als Asa Vsl 08» Us mg &amp;S« Xsp P8s 4$»» AlS 8sp 34A 345 555

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Asp Pro Asp <S!y Asp Ays A»« iAr Pro 28r Vsl V»X v*2 Vsl Asa is» 420 425 430

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595 €00 ’ 60S

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Cys Ser Pro Phe Phe Phe Gin Tyr Asn Arg Pro Tyr Leu Asn Tyr Val 625 630 63S 640

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Leu Glu Tyr Ala Gin Val Thr Lys .Met Leu Gly &amp;sn Gly Arg Leu Glu 675 6:8:0 685

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Pha Ala Law Pro Ala Sis Has Hi s. Ser Arg Gly Glu leu Glu Glu Ala 725 730 735

Arg Lee Vai Ala Glu Glu leu Glu Glu Arg· Glu Gin Glu lew Asp Tyr 740 745 750

Leu Lys Arg lyr Lau Vai Gly Asg Leu Gin Ala Vai Ser lyr She leu "55 7SÒ 765

Th.r Vai Cya leu Leu Ala leu Vai Gin Ser Glu 'Lhr Vai Gin Asp Ala l||||||||||p#Sp|||í ' 775 :| !|||||||||||ί^δδ·

Mat ihr Asn Aia Asa Leu Vai Gly leu 7hr lie Ser Leu Ala Tyr Ala 785 730 783 800 11« Aba Phe lew Leu Syr Thr Aro Pro Vbr Gly Arg Êer Ser Gly Leu

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Leu Ala His Vai lie Arg Leu Leu Leu Ala Met Vai Leu Lew Are Leu 835 ' 840 843

Leu .Leu Leu Glu Sea Vsl Vai Pro Tyr Ala Ala Ala Glw Ays V&amp;l Vrp 8S0 853 8SÕ !!!!!!!!!iã^:iill:: lllllllllill^llglll; !!!!!!!!!i||psiif........ <2.13> Artificiai sequence <220 «223* immunogefite polypeptide *400* 133

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Leu Lew Leu Lew Leu Pro Pro Aia f£yr Her Kir SAr Lav Vhr Pro Pro 20 25 30

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He Ays Ae« hen Val hen Aau lie Cys hen Phe She Tyr His Hie 85 m 95 %» -«hr Vhr Ala Tyr hey Txp hen Ala Met Sly Val Phe hen Ays: Sly 100 105 110

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Sex Ala Ays Cys 3áey Asn Asp Tyr sin Ala leu hey. Sly hey Cys Cys 130 135 140

Pao Txrp He Asp leu Ala Ala Ala Asp hey Pro Met Arg &amp;rg His Ala

145 150 155 ISO hya Ala <21Ô» 134 :1111 11 ;:o:lllll..............1. ΙΙΙΙΐΐΙ:^ <220* <223> immunogenic polypeptide <400» 134:

Leu teu Pro Ala Ly:s Vai lie Pro Asp Lys Thr Ala Ala Tyr Vai Ala 4 5 10 15 •SJyr Si*· ®ly Gin Glw «hs lew: Vai si» Hie Vai Slu v*l ia» Vai vai 20 25 30 X*a íhb« tfec Bro Ma A®»: Slat: Ma *3pt XI® Vtat Asp Gl» Ui» As» Lau 35 :"""""" 40 45

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Asp Giy leu Lys Thr Leu Ala Asp Glu Thu Ala Gin Cys 105 206 265

Claims (8)

1. REI¥IM3ICAÇÕES l:i, Polipéptido que consiste em entre 20 e 55 aminoácidos, cujo polipéptido compreende a SEQ ID NO: 35, uma sequência polipeptídica possuindo* pelo menos, 90% de homologia com a SEQ ID NO: 35, ou uma subsequência da SEQ ID NO: 35, as subsequências com 20 aminoácidos ou maia* em quis b polipéptido nâo é uma proteína de saliva dê artrópodes completa* em que o polipéptido ê imunogénico ^um vertebrado e em que o vertebrado produz diluías do: sistema imunitário capazes de reconhecer, pêlO; mêrbS* Umí npitopo a partir da uma fração de proteína di:: sálivÉ: déí artrópodes, :2:, Polipéptido de acordo com a r©ivindicpf#©: 1* em que m polipéptido compreende a SEQ ID NG: 120 ou uma sequência polipeptídica com, pelo menos, 90% de homologia com; a SEQ ID NO: 120, li. Composição polipeptídica compreendendo um ou wmlã polipéptidos como definido na reivindicação 1 ou reivindicação 2, :4:,. Composição polipeptidica de acordo com á reivindicação 3, composição essa que compreende ainda um óu mais polipéptidos adicionais selecionados independentemente de um polipéptido possuindo entre 20 a 55 aminoácidos e compreendendo a SEQ ID NO: 1-34 ou 36-44, uma sequência polipeptídica com 9Q% de homologia com a SEQ ID NO;: 1~ 34 ou 36-44, ou uma subsequência da SEQ ID NO: 1-34 ou :36- 44* as subsequências com 20 aminoácidos ou maia* em: quê o um ou mais polipéptidos adicionais são capazes dê: Induzir uma resposta imunitária em vertebrados contra B ou mais: patógenos ou estirpes patogénicas rêspdnsávêis por uma doença suportada por artrópodes.
2. 5. Composição po.Ii.peptid.ica, como definido na reivindicação 1 -o;i: 4, composição essa que compreende um polipeptidôo ip: tii: im NQi M* EiQ ID NQi 28, EiQ ID .NO: 30, SEQ;: 11 NO; 31, ou SEQ ID NO: 32, um polipéptido possuindo urna sequência polipeptidxca possuindo 90% de homologia com m SEf: ID 8Q* 20, SEQ ID SQi 2i:.:í SSQ ID NO; 30, SEQ ID 10: 31, ou SEQ ID NO: 32, ou um. polipéptxdo com um íSequiêèÉcla de SEQ: ID NO: 20, SEQ ID M3: 28, SEQ; ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, ou SEQ: ID NO: 32, tendo as sup^equlncxas 20 amlnoácidos ou mais
3. 6, Composição polipeptídica, como definido na reivindicação 3. ou 4* composição essa que compreende: um. polipeptídeo da SEQ ID N°: 91, SEQ ID N°: 105, SEQ ID NQ: 113, SEQ ID N°: 115, ou SEQ ID N°: 116, SEQ ID N°: 117 m I1Í ID f® 120 ou um polipéptido possuindo uma sequlucii polipeptídica tendo 90% de homologia com a SEQ ID N° 91, SEQ ID N° 105, SEQ ID 113, 1E|: 11 Io 115, OU SEQ: ID NQ: 11:% SEQ: ID W* 11:1 du SEQ lH W® :1201 :1,: Composição:· polipeptidlea:*, como; definido na reivindicação 3: ou :4:, çompQsiçi© essa que compreende um p©lípÉp%.d© de SEQ ID N° 91, SEQ ID N° 115, SEQ ID N°í 116, Ou SEQ ID NO: 120 ou um polipéptido possuindo uma sequência polipeptídica possuindo 90% de homologia com a SEQ ID N° 91, SEQ 1#N®: 1:11¾ SÊQ IQ I® 111·:, m |EQ:i ID N° 120< ;$L Composição polipeptídica de acordo com qualquer uma dia reivindicações 3-7, cuja composição compreende de 2 a 10 pol ipépt idos, Ou mais preferivelmente de 2-6 polipéptidos, ou em que o um. Ou mais polipipildo® sã© ep it op os de llftlóclfcos 1: Mlà&amp;iéáa Pu· o ura ou mais poIípêpMdcs são epitcpos: de linideitoa Τ' auxiliares: (Th), ou o um ou xnais polipéptidos sâo epitopes de llnfÓbitOS B, ou em que um ou maís polipéptidos são imunogénicos contra taaa pluralidade de proteínas salivares cie artrópodes, ou em que a composição compreende 2, 3, 4, 5, 6 ou mais epifdpiis,. ou era que a fração de proteína de saliva de artrópodes é uma proteica de saliva de mosquito de qualquer espécie de mosde pré;fê:rêndia dè pambtas.,. ou em qu© a qpmpqsiçião ; compreende aluda :pna pp meia sequências adicionais de uma proteína salivar: de artrópodes., ou em que m pdtefâquiPPii, dólPIdopdó li' t# lp PU- 11 aminoácidcs ç&amp;. mail* pu em que i, composição compreende polipéptidos com sequências dè l&amp;EQ ID NQ; 1-6 todas presentes:, e/ou em que a composição compreende polipéptidos com sequências SiEg: 1© NO: 20, 20, 30-32 e 35, todas presentes. a* iFdilpêptidO: de acordo .edit d .reivindicação 1 ou 2 m uma composlçãoi pol ipept idica como definida em qualquer uma :das reivindicações 3-3, para utilização em medicina.
4. 10. Método de produção de uma composição polipeptídica como definido em qualquer uma das Reivindicações 3-S, cujo método^ compreende misturar ou combinar um ou mmis polipéptidos como definido na Re iviridi ca ção 1 ou Reivindicação 2 com um pu roais componentes adicionais, tais çpma: um transportador, um excipient©, um adjuvante, um tampão: oii um estabilizador.
5. 11. CónstfuÇãd dê adido nucleico compreendendo um ou mata ácidos nucleicos c omp re e nde ntío a sequência de codificação de um. polipéptido como definido na ileivindi cação 1 ou Reivindicação 2. 1? Medicamen.ro ou composição de vacina contra uma doença transmitida por artrópodes, compreendendo um polipéptido como definido na Reivindicação 1 ou Reivindicação 2 ou lima composição po 1 ipeptídica como definida em qualquer uma das Reivindicações 3-3 e um éSfâSipient© e/ou adjuvante aprispriadd»
6. 13. Método para produzir um medicamento ou composição de vacina tal como definido na reivindicação 12, cujo método compreende ligar, combinar m misturar um polipéptido como definido na Reivindicação 1 ou Reivindicação 2 e/ ou uma composição polipeptídica como definido em qualquer uma das Reivindicações 3-9 e/ou uma construção de ácido nucleico como definido na Reivindicação 11 com um excipiente e/ou adjuvante apropriado:,
7. 14. Polipéptido de acordo com a reivindicação ;1 ód -li. Usam: COi^óaiiÇád; ddl.ipépt:idicá como. definida és qualquer uma. das: reivindicações 3--9, uma construção de dei do nucleico cpmç definida na reivindicação ll-,· ©s ;:um medicamente:· os composição de vacina tal como definido na reivindicação 12 para utilização, no tratamento ou prevenção de uma doença transmitida por artrópodes; preferivelmente, em que a doença transmitida por artrópodes é uma doença num vertebrado, preferenciaimente, em que p vertebrado é selecionado de um mamífero, uma ave, um réptil e um peixe ÉÉ Há- modo preferido, de im, humano,· um animal doméàfiidó ;iú ura animal, de um unimâl: bovino, ou :Uma:
8. 15. PPiipêptidò de acordo com -ã féivindieãçâo: 1 Pu- :2., uma composição po-l ipepfeídi ca como definida em qualquer uma das reivindicações 3-9, uma construção de ácido nucleico como definido na reivindicação 11, um medicamento ou composição de vacina como definido na reivindicação 12, ou um polipéptido, composição, construção de ácido nucleico, medicamento ou composição de vacina para utilização: no tratamento ou prevenção: de uma doença suportada oor artrópodes como definiao sá Reivindicação 14, em- que o artropode ;ê ;u®: artrópode- hemató:fág©:r ©u em; que o artrópode é um artrópode nematófaqo; selecionado de mosquitos;,: carrapatos, StePltpmoS;,. ácaros e; pulgas;,' ou em gue o artrópode é Anopheles sp., Aedcs sp. ? Culex Man son ia sp ., GMpy-sgpm Éiffipiiiíp SP~ , ma sp., Rhodnius sp., sp. , Glossina sp., Taba nus sp., Phlebotomus sp.? Lutzomyia sp. % Pedicvlus sp., Ornithodorcs sp., Ixodes sp.f Pediculus sp., Pulex -Sp.. , Hemagogous spegazzaní., Ochlerotatus sp.t ou Coquillettidia sp. I;®:... RillpáptidO de acordo dim a reivindicação 1 ou reivindicação 2, uma composição poi ipeptidica como def inida em qualquer uma das reivindicações 3-1:,: uma construção de ácido nucleico como definido na reivindicação 11, um medicamento ou composição de vacina como definido na Reivindicação 12, ou um polípéptido, composição, çpiitruçio de ácido nucleico;,: medicamento ou d:imposiçâp: dis váCirM para utilização no tratamento ou prevenção de uma doença transmitida por artrópodes como definido na Reivindicação 14, em que a doença transmitida por artrópodes é uma doença selecionada de malária, filaríase,. trlpanossomi ase, leishmaniose, oncocercose, dihfue, ;dó:ih|i: ;dá; ':tUláfeitia,: tilsre recorrente, tifo, peste,. ífeisfe; âmátéiá,:. fédfe. dó Valé dó iift e encefalite, como encefalite de St. Louis,, febre do Nilo Ocidental, encefalite de La Crosse e encefalite equina do- leste..